JPH06502157A - 線維芽細胞増殖因子の治療的使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 繊維芽細胞増殖因子の治療的使用 本発明は繊維芽細胞増殖因子の降圧剤としての使用に関する。

繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ　ｓ）は塩基性繊維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）及 び酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）を含めた関連タンパクの一群である。ａ ＦＧＦ及びｂＦＧＦはウシ脳から（Ｔｈｏｍａｓ　ＫＡ、Ｒｊｏｓ−Ｃａｎｄｅ ｌｏｒｅＭ、、Ｆｊｔｚｐａｔｒｉｃｋ　Ｓ、”ウシ脳からの酸性線維芽細胞増 殖因子の精製及び同定”Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　１９８４；　８１：３５７−６１）及びウシ下垂 体組織から（Ｇｏｓｐｏｄａ　ｒｏｗｉ　ｃｚＤ、“ウシ下垂体組織からの繊維 芽細胞増殖因子の精製−Ｊ。

Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、１９７５；２５０；２５１５〜２０）均質に精製されたの が最初であった。

ＦＧＦｓはｉｎ　ｖｉｔｒｏ及びｉｎ　ｖｉｖｏの両方で生物学的活性を広域に わたって有することが示されていた（Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ 　Ｃ１ｉｎｉｃＣ１１ｎｉｃａｌＩｎｖｅｓｔｉ　１９８８；１８．３２１−３ ３６）。

これらは内皮細胞のマイトジェンであると認識されているが、はとんど全ての中 胚葉及び神経外胚葉由来の細胞を刺激する。

最近の研究では、ＦＧＦ　ｓがメラニン生成細胞をも刺激すること（Ｈａｌａｂ ａｎ　Ｒ，、Ｇｈｏｓｈ　５．、Ｂａ１ｒｄＡ、”ｂＦＧＦはヒトメラニン生成 細胞の生来の増殖因子と推定される”Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　１９８７；２３：４７ 〜５２）、及び樹立線維芽細胞株の浮遊性増殖を誘発すること［（Ｈｕａｎｇ　 ＳＳ、Ｋｕｏ　Ｍ−Ｄ、Ｈｕａｎｇ　ＪＳ゛ウシ脳由来の増殖因子の形質転換増 殖因子活性“Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ、１９８６； １３９：６１９〜２５）、（Ｒｉｚｚｉｎｏ　Ａ、、Ｒｕｆｆ　Ｅ。

“繊維芽細胞増殖因子による非形質転換細胞株の軟寒天上の増殖促進”Ｉｎ　Ｖ Ｉｔｒｏ　１９８６：２２：１４９〜５６）〕が確認されている。

ＦＧＦｓはまた多くのマイトジェン以外の機能をｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいて有す る、その中には 走化性ｆ（Ｃｏｎｎｏｌｌｙ　ＤＴ、５ｔｏｄｄａｒｄＢＬ、Ｈａｒａｋａｓ　 ＮＫ、Ｆｅｄｅｒ、Ｊ、−ヒト線維芽由来増殖因子は内皮細胞のマイトジェン及 び化学誘引物質である＋　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ １９８７　；　１４４　：　７０５−１２）、（Ｓｅｎｉｏｒ　ＲＭ。

Ｈｕａｎｇ　ＳＳ、Ｇｒｉｆｆｉｎ　ＧＬ、Ｈｕａｎｇ　ＪＳ″脳由来増殖因子 は線維芽細胞及び星状細胞の化学誘引物質である＋　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｒｏｐ ｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ。

１９８６；１４１：６７〜７２））、 タンパク分解酵素誘導（（Ｍｏｓｃａｔｅｌｌｉ　Ｄ、Ｐｒｅｓｔａ　Ｍ、Ｒｊ ｆｋｉｎ　ＤＢ“ヒト胎盤からの毛細内皮細胞のタンパク分解酵素生成、ＤＮＡ 合成及び細胞移動を促進する因子の精製”　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、５ ｃｉＵＳＡ　１９８６；８３：２０９１〜５）、（ＰｈａｄｋｅＫ、“繊維芽細 胞増殖因子はインターロイキン−１を仲介して軟骨細胞のタンパク分解酵素放出 を増強する”Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ、１９８７；１４２；４４８〜５３））、 神経突起の自然成長及び神経細胞の生存（（ＴｏｇａｒｉＡ、Ｂａｋｅｒ　Ｄ、 Ｄｉｃｋｅｎｓ　Ｇ、Ｇｕｒｏｆｆ　Ｇ“繊維芽細胞増殖因子のＰＣ１２細胞へ の神経突起促進効果”Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ、１ ９８３；１１４：１ｉ８９〜９３）、Ｗａｇｎｅｒ　ＪＡ、Ｄ’Ａｍｏｒｅ　Ｐ 　“網膜から単離した一つの内皮細胞マイトジェンによって誘発された神経突起 の自然成長”Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ　：１９８６：１０３：１３６３〜７）、 ＷａｌｉｃｋｅＰ、Ｃｏｗａｎ　ＷＭ、Ｕｅｎｏ　Ｎ、Ｂａ１ｒｄ　Ａ、Ｇｕｉ ｌｌｅｍｉｎ　Ｒ”繊維芽細胞増殖因子は解離された海鳥ニューロンの生存を促 進し、神経突起の伸展を増強する”Ｐｒ。

ｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　１９８６；８３：３０１２〜６）、 Ｍｏｒｒｉｓｏｎ　ＲＳ、Ｓｈａｒｍａ　Ａ。

Ｄｅ　Ｖｅｌｌｉｓ　Ｊ、Ｂｒａｄｓｈａｗ　ＲＡ“塩基性線維芽細胞増殖因子 は初代培養において大脳皮質ニューロンの生存を支持する”　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ ｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　１９８６；８３ニア５３７〜４１）、（Ｓｃ、 ｈｕｂｅｒｔＤ、Ｌｉｎｇ　Ｎ、Ｂａ１ｒｄ　Ａ”＜バリン結合増殖因子がニュ ーロン発達に与える多くの影響”Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉ。

１．１９８７；１０４：６３５〜４３））、筋細胞の分化（Ｌａｔｈｒｏｐ　Ｂ 、０ｓｌｏｎ　Ｅ、ＧＩＢｓｅｒ　Ｌ″ＢＣ３Ｈ１筋細胞株の分化の繊維芽細胞 増殖因子による制御”Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、１９８５；１００：１５４０〜 ９）、並びに 種々の内分泌機能（Ｇｏｓｐｏｄａｒｏｗｉｃｚ　Ｄ、Ｆｅｒｒａｒａ　Ｎ、Ｓ ｃｈｗｅｉｇｅｒｅｒ　Ｌ、Ｎｅｕｆｅｌｄ　Ｇ’線維芽細胞増殖因子の構造解 析及び生物学的機能”Ｅｎｄｏｃｒ、Ｒｅｖ、１９８７；８：９５−１１４）　 、　（Ｂａｉｒｄ　Ａ、Ｍｏｒｍｅｄｅ　Ｐ、Ｙｉｎｇ　Ｓ−Ｙ　ｅｔａｌ、“ 繊維芽細胞増殖因子の非マイトジェン的下垂体機能。

甲状腺ホルモン及びプロラクチン分泌作用の調節”ＰｒｏｃＮａｔｌ、Ａｃａｄ 、Ｓｃｉ　ＵＳＡ　１９８５；８２：５５４５〜９）、（Ｂａｉｒｄ　Ａ、Ｈｓ ｕｅｈ　ＡＪＷ“卵巣ホルモンとしての線維芽細胞増殖因子：血管形成因子によ るステロイド発生細胞の分化調節″Ｒｅｇ、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　１９８６；１６ ：２４３〜５０） などが含まれる。

Ｉｎ　ｖｉｖ。

ＦＧＦ　ｓが新生血管を刺激（ＧｏｓｐｏｄａｒｏｗｉｃｚＤ、Ｆｅｒｒａｒａ 　Ｎ、Ｓｃｈｗｅｉｇｅｒｅｒ　Ｌ、Ｎｅｕｆｅｌｄ　Ｇ“繊維芽細胞増殖因子 の構造解析及び生物学的機能”　Ｅｎｄｏｃｒ、Ｒｅｖ、１９８７；８：９５〜 １１４）する能力を有することは公知である。これらはまた、下等を椎動物の手 足の再生を誘発（Ｇｏｓｐｏｄａｒｏｗｉｃｚ　Ｄ。

Ｆｅｒｒａｒａ　Ｎ、Ｓｃｈｗｅｉｇｅｒｅｒ　Ｌ、Ｎｅｕｆｅｌｄ　Ｇ“繊維 芽細胞増殖因子の構造解析及び生物学的機能゛Ｅｎｄｏｃｔ、Ｒｅｖ、１９８７ ；８：９５〜１１４）Ｌ、創傷の治癒を促進する（Ｂｕｎｔｒｏｃｋ　Ｐ、Ｊｅ ｎｔｚｓｃｈ　ＫＤ、Ｈｅｄｅｒ　Ｇ　“繊維芽細胞増殖因子（Ｆ　Ｇ　Ｆ）の 活性を有する大脳抽出物を用いた創傷治癒の促進“Ｅｘｐ。

Ｐａｔｈｏｌ　１９８２；２１：６２〜７）、（ＴｈｏｍａｓＫＡ、Ｇｉｍｅｎ ｅｚ−Ｇａｌｌｅｇｏ　Ｇ、Ｄｉ　５ａｌｖｏ　Ｊ　ｅｔ　ａｌ、’酸性線維芽 細胞増殖因子の構造及び活性”Ｒｉｆｋｉｎ　ＤＢ、Ｋｌａｇｓｂｕｒｎ　Ｍ共 著“Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ”Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　 Ｈａｒｂｏｒ、１９８７；９〜１２）。

最近の研究では、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、ＦＧＦｓの新規な役割が指摘されて いる。即ち、５ｌａｃｋと共同研究者ら（Ｓｌａｃｋ　ＪＭＷ、Ｄａｒｌｉｎｇ ｔｏｎ　ＢＧ、Ｈｅａｔｈ　ＪＫ、Ｇｏｄｓａｖｅ　ＳＦ　“ヘパリン結合増殖 因子によるアフリカッメガエル早期胚の中肝葉誘導”Ｎａｔｕｒｅ１９８７　； 　３２６　：１９７〜２００）はｂＦＧＦ及びａＦＧＦの両方が、アフリカッメ ガエルの胞胚中で腹部型中肝葉化を導く腹部植物極信号を模倣することを示した 。

ｉｎ　ＶｉｔｒＯ及びｉｎ　ｖｉｖｏにおいてＦＧＦ　ｓが多種の機能を示すこ とは、これらが組織広域にわたり分布する事実と同様に、これらマイトジェンの 生理学的意義の広さ及び潜在的臨床価値を示唆している。

多くの可能性のある実用的臨床使用としては、ＦＧＦ　ｓは創傷、潰瘍及び火傷 の治療、阻血組織の血管再生、損傷神経組織の再生、又は他の治療（例えば移植 の際）への付随療法しての適用が見出だされている。

ｉｎ　ｖｉｔｒｏ及びｉｎ　ｖｉｖｏにおいてＦＧＦ　ｓに帰する活性が多様に 有るにもかかわらず、従来技術には血圧降下活性としての記載はない。

今回、我々は驚くべきことに、ＦＧＦ　（特にｂＦＧＦ）群に属するポリペプチ ドの低濃度の全身投与がｉｎ　ｖｉｖｏにおいて顕著な血管拡張効果を誘発する ことを見出だした。

これら発見の主たる重要性は、ＦＧＦｓ　（特にｂＦＧＦ）を治療的用途（抗高 血圧剤、例えば急性心筋梗塞症及び脳出血症の予防用薬剤として）に用いること にある。

本発明は降圧剤として使用できる繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）に関する。

本発明はこの様に、ヒトを含めた哺乳類の治療用又は予防用の降圧剤の製造への 繊維芽細胞増殖因子の使用を提哄する。

本発明はまた、繊維芽細胞増殖因子から成る降圧剤化合物として使用する薬剤に 関する。

さらに本発明は、有効量の線維芽細胞増殖因子をその様な治療が必要な被投与者 に投与することで、ヒトを含む哺乳類の血圧を下げる方法を提供するという点に 有用性を有する。

この出願において、ＦＧＦとは天然ヒトＦＧＦポリペプチドと類似の生物学的活 性を持つポリペプチドのクラスを含むものである。この様に、ＦＧＦには酸性及 び塩基性ＦＧＦ　（例えば、ＤＮＡ組み換え技術により生成された又は天然物か ら誘導されたヒトＦＧＦ）だけでなく、近縁の哺乳類（例えばウシ、ネズミ又は 躍歯類）のＦＧＦも含まれる。刊行物（例えば国際公開第８６１０７５９５号明 細書、国際公開第８７１０１７２８号明細書、欧州特許出願公開第０２２６１８ １号明細書、Ａｂｒａｈａｍ　ｅｔ　ａｌ、ＥＭＢＯＪ、５．２５２３〜２５２ ８．１９８６、又はＬｏｂｂ、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、１８，３ ２Ｌ〜３３６．１９８８）中に記載されるｂＦＧＦ分子も適宜、本発明に含まれ るものとする。特に、本発明のヒト及びウシｂＦＧＦは好ましい化合物を構成す る。

これら因子、即ちヒト及びウシｂＦＧＦ並びにヒト及びウシａＦＧＦは公知のも のであり、例えば国際特許出願公開　ＰＣＴ８６１０７５９５号明細書及びＰＣ Ｔ８７１０１７２８号明細書、並びに欧州特許出願公開第２２６１８１号明細書 及び第２３７９６６号明細書だけでなく、多くの科学刊行物（例えば５ｃｉｅｎ ｃｅ　ｖｏｌ、２３３．　ｌ）り、５４５〜５４８．　Ａｕｇｕｓｔ　１．１９ ８６、Ｅｍｂｏ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｖ。

１、　５．　ｎｏ、１０．　ｐｐ、２５２３〜２５２８．　１９８６）中に記載 されている。

ヒトｂＦＧＦは次のアミノ酸配列を有する１４６個のアミノ酸から成るポリペプ チドである。

ｂ人ｌａ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ 　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　ＨｉｓＰｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　 Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　 Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　ＬｅｕＡｒｇ　ｌｉｅ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ＾ｓｐ　Ｇｌ ｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｓｅ ｒ　ＡｓｐＰｒｏ　Ｈｉｓ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ 　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　ＶａＪ　ＶａＪＳｅｒｒｌｅ’　 Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　ＶａＪ　Ｃｙｓ　Ａ１２Ａｓｎ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ａ ｌａ　ＭＣＩ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　八ｓｐ　Ｃｉｔ■ Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　 Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ！００　１ｌ１ ０Ａｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　ＡｓｎＡｓｎ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔ ｙｒ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ＋２０ Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　 Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　Ａｌａｌ４６ ウシｂＦＧＦはヒトのそれと１１２位においてトレオニンがセリンと置き換わり 、１２８位においてセリンがプロリンと置き換わっている点で相違がある。ヒト 及びウシｂＦＧＦは両方とも、Ｎ末端に次の１１個のアミノ酸配列の全て、ｉ　 ）　Ｇ１１−Ｔｈｒ−Ｍｅｔ−＾１ト＾１Ｊ−Ｇ１７−５ｅ＋−１１ｓ−Ｔｈ＋ −丁ｈｒ−Ｌ！ｎ又はその配列の断片、例えば、特に、次の９個のアミノ酸ｉｉ ）　Ｍｅｔ−＾ｈ−＾ｌ５−Ｇｌｌ−Ｓｔ＋−１１ｅ−Ｔｈ＋−Ｔｂｒ−Ｌｅｅ 　。

もしくは、次の８１１のアミノ酸 口１）　＾ｌ＋−Ａｌｔ−ＧＩＹ−Ｓｔ＋−１１ｅ−Ｔｔｕ−Ｔｌｕ−Ｌ！ｗも しくは、次の７個のアミノ酸 ｉｔ）　Ａｌ＋−ＧＩ７−Ｓｅｔ−１１ｔ−Ｔｂｒ−Ｔｂ＋−Ｌｔｕ。

のアミノ酸配列を含ませて延長しても良い。

１４６個のアミノ酸から成る分子のより短い構造を単離した所、ｂ　ＦＧＦ　ｓ のＮ末端から−っ又はそれ以上のアミノ酸残基が欠失したものであった。本発明 の全てのＦＧＦ　ｓはＣ末端がアミド化されていてもよい。生物学的活性が同等 のＦＧＦ　ｓ類似物、特に同等の血圧降下活性をもつものも本発明の範囲内に含 まれる。

類似物とは先に示したＦＧＦｓから誘導された変異体（ｍｕｔ　ｅ　ｉ　ｎ）に より示され、アミド化され又はアミド化されず、そのアミノ酸配列が天然のＦＧ Ｆの配列とアミノ酸の置換、欠失、転位及び／又は付加された点で異なるもので ある。塩基性性ＦＧＦ類似物の例としては、欧州特許出願公開第３６３６７５号 明細書中のものが例示できる。

二つ又はそれ以上の異なるＦＧＦｓの混合物であっても本発明の範囲内とみなす 。

特に、例えば、構造の異なる二つのヒトｂＦＧＦの混合物（天然の１４６個のア ミノ酸分子に関して、Ｎ末端がそれぞれ７個及び８個づつ延長されたもの）は本 発明の好ましい具体例の一つである。

これら二分子の詳細なアミノ酸配列は、前に記載したヒトｂＦＧＦであって、そ のＮ末端が　１１１）項及び１マ）項にそれぞれ示した様に延長されているもの である。

本明細書中では、この混合物はＦＣＥ２６１８４と命名する。

ＦＣＥ２６１８４はＦａｒｍｉｔａｌｉａ　Ｃａｒｌｏ　Ｅｒｂａ　Ｂｉｏｔｅ ｃｈｎｏｌｏｇｙ　ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＤｅｐａ　ｒ　ｔｍｅｎ　ｔから調 達した。

この様に、本明細書中で用いたｒ線維芽細胞増殖因子」なる単冶には天然のタン パクだけでなく先に示した類似物及び混合物も含まれる。

本発明のＦＧＦ　ｓは、一般に、例えば先に述べた国際特許出願ＰＣＴ／国際公 開第８６１０７５９５号明細書及びＰＣＴ／国際公開第８７１０１７２８号明細 書、又は欧州特許出願第２２６１８１号明細書、２３７９６６号明細沓、帯間３ Ｓ３６７５号明細書中に記載の周知の手法によるＤＮＡ組み換え技術によって得 られる。

本発明のＦＧＦｓの降圧活性については、ケタミン、ジアゼパム、及びアトロピ ンの混合物により麻酔した動物に、後の実験例の章に記載の条件で一連の実験を 実施することで示した。

麻酔を施さなかった動物についてもまた同様な降圧効果が記録された。

ラット類及びウサギ類を含めた数種の動物、特にラット類、が実験モデルとして 使用できた。

実験は、ＦＧＦのバッファー溶液をラット頚静脈中にその全量を一度に注入し、 左大腿動脈にカニユーレを挿入し、そこから、血圧を連続記録するためにカテー テルを腹部大動脈まで誘導した。注射はまた大腿静脈中に行うことも及び／又は 対銅の同じ大腿動脈中に同様の実験条件下で行うこともでき、同様′Ｊ結果が得 られる。

この様にしてＦＣＥ２６１８４のラットにおける降圧効果は注射から１又は２分 後に現れ、開始時の約７０ｍｍＨｇの基底状態から約２５ｍｍＨｇまでの血圧の 降下を記録した。

動物へのＦＧＦ　（ＦＣＥ２６１８４）投与量を増量して行くことで、約１．２ ５μｇ／Ｋｇ体重〜約２．７５μｇ／Ｋｇ体重の投与量範囲内においては降圧効 果に投与量依存性があるという知見を得た。この範囲を超える投与量では降圧効 果は一定に達し、この範囲以下（１，２５μｇ／Ｋｇ体重以下）では実買的に検 出不可能である。

本発明の他のＦＧＦ関連分子についてもまた、はぼ同様の結果が得られた。また 、タンパク安定剤である硫酸化ポリサツカロイド（即ち、ヘパリン）の添加の有 無には全く影響されなかった。

これらの降圧活性から考えて本発明の線維芽細胞増殖因子は、例えば抗−高血圧 剤として、高血圧症に関わる疾病、例えば急性心筋梗塞症及び脳出血症の予防及 び治療に応用すれば有効であると分かる。

本発明のＦＧＦ　ｓは、一つもしくはそれ以上の該ＦＧＦｓを、それ自体もしく は薬理的に受容される塩として含み、一つもしくはそれ以上の薬理的に許容され る賦形剤（例えばキャリアー投与される。

薬理的に受容される塩とは薬理的に受容される鉱酸、例えば塩酸、臭化水素酸、 硫酸、及びリン酸の塩、又は薬理的に受容される有機酸、例えば酢酸、クエン酸 、マレイン酸、リンゴ酸、コハク酸、及び酒石酸の塩である。

好ましい投与方法はリン酸バッファー溶液とし、全量を一度に注射するものであ る。

本発明の医薬組成物は、本草医学的手順で公知の技術により調製される。

投与量は、特定の治療すべき病理的状況及び血圧降下そのものの必要性によって 決定する。

一般に、本発明のＦＧＦ　ｓは０．２〜２０μｇ／Ｋｇ体重の範囲で投与可能で ある。添付の図１にヒトｂＦＧＦの１５５個のアミノ酸の配列を図示した。

本発明を次の実施例によって詳しく説明する。

製造例 ＦＣＥ２６１８４の製造。

ｂＦＧＦに対する合成りＮＡの構築、及びそれらの配列を組込んだプラスミド発 現の構築をＥＰ第第３６３６７丹（ａ）発酵の手順 ｒ　ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎより入手）をヒトｂＦＧＦ：＋−ドする遺伝子及びテ トラサイクリン耐性の遺伝子を組込んだプラスミドにより、形質転換した。この 形質転換株を用し）で、グ１ノコシル化されていない組換えｈ−ｂＦＧＦ　（ヒ トｂＦＧＦ）を製造した。コノ菌株のＭａｓｔｅｒ　Ｃｅ１ｌ　Ｂａｎｋ（凍結 乾燥１５バイアル）及びＷｏｒｋｉｎｇ　Ｃｅ１ｌ　Ｂａｎｋ（Ｗ．Ｃ．Ｂ．　 ）（液体窒素中で一１９０℃で保存した７０個のバイアル）を調製した。一つの ｗ，Ｃ．Ｂ．ｔ＜イアルの内容物は発酵期の接種物として使用した。

発酵手順は１０１の発酵槽中に４１の培養用培地を入れて行った。菌株を選択で きる環境条件を維持するため、塩酸テトラサイクリンを培地に添加した。

３７℃で２０時間増殖させた後でバイオマスは最終的に乾燥重量で４２±２　ｇ ／ｌに達し、ｂ　ＦＧＦ生成量は比較ゲル電気泳動測定で２５００±５　０　０ 　ｍ　ｇ　／　ｌであった。

菌の生育促進のため発酵期の間には酸素を豊富な状態としておく必要力ぐあった 。

全ての発酵汁を集め、遠心することで細胞（微生物）を分離した。得られたペレ ットを、塩化ナトリウムを含有するリン酸ナトリウムバッファー中に再懸濁した 。十分に細胞を破壊するため、高圧ホモジナイザーに最低３回通した。得られた 細胞溶解物を遠心して清澄化し、上清を収集した（これを次の工程１こ該上清液 を５ｅｐｈａｒｏｓｅ　（商標）カラムＳ　ＦａｓｔＦｌｏｗ（陽イオン交換型 ）にかけた。生成物はカラムよりリン酸バッファー（商標）中の塩化ナトリウム の濃度を徐々に上げて行くことで溶出させた。生成物はさらに、へｌシリン５ｅ ｐｈａｒｏｓｅ　６Ｂカラムにかけ、リン酸Ｉくソファ−中の塩化ナトリウムの 濃度を徐々に上げて行くことで溶出させ、更に精製した。最後に、５ｅｐｈａｄ ｅｘ　（商標）Ｇ２５樹脂カラムでバッファーを変え、大量の生成物ノ（ツファ ー（リン酸ナトリウム−ＥＤＴＡ）溶液中の生成物を得た。

（ｄ）カラムの殺菌 ５ｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｓ　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ及び５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ２５カ ラムを水酸化ナトリウム溶液で洗浄し殺菌した。ヘパリン３ｅｐｈａｒｏｓｅに つ１，１ては、これの代わりに３Ｍ塩化ナトリウムを含有するｐＨ＝８．５及び ｐ　Ｈ＝　５　。

５の溶液で洗浄した。

こうして、１５４／１５３型のｂＦＧＦを得た。これは、以下のほぼ５０　：　 ５０の混合物である。

１５４のアミノ酸、ヒトｂＦＧＦ　［（２−４５５）ｂＦＧＦ］、Ａｂｒａｈａ ｍらによって報告された１５５アミノ酸配列からＮ末端Ｍｅｔ残基が欠失したア ミノ酸配列を有するもの（この１５４のアミノ酸配列も添付の図１に示した）、 及び１５３のアミノ酸、ヒトｂＦＧＦ　［（３−１５５）ｂＦＧＦコ、前記１５ ４のアミノ酸から成り、その１位においてＡｌａ残基が欠失したもの。

実施例１ 組換えヒト塩基性線維芽細胞増殖因子（ＦＣＥ２６１８４）に対するラット血管 の反応。

１、動物 実験は、体重１５０〜２００ｇのＷ　ｉｓ　ｔ　ａ　ｒラット（♀）１１個体に 対して行った。動物は種牛で、１２時間周期で被灯し飼料及び水を随時与え飼育 した。

２、浸襲 ラットの麻酔は、ケタミン塩酸塩２５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌのジアゼパム、 及び０．１ｍｇ／ｍＡ’のアトロピンの混合物Ｑ、８ｍｌの腹部投与で行った。

左大腿動脈にカニユーレ（ポリテンのチューブ）を挿入し、中心血圧ｔｍ定する ため、そこからカテーテルを復部大動脈まで逆行させた。血栓閉塞を防ぐため、 動脈カニユーレにはヘパリン溶液を満たし、圧力変換機（Ｓｐｅｃｔｒａｍｅｄ 　Ｉｎｃ、０ｘｎａｒｄ　ＣＡ。

Ｐ２３ＸＬモデル）とつなぎ、さらに校正ポリグラフ（Ｐｅｌｋｅｒ−Ｅｌｍｅ ｒ　５６）と連結した。実験中は継続して平均動脈血圧（ＭＡＰ）を記録した。

３、ＦＣＥ２６１８４注入 前述の様に、ＦＣＥ２６８１４とはＮ末端が７〜８個のアミノ酸で延長した組換 えヒトｂＦＧＦのことを表す。この化合物は従って、１５３〜１５４個のアミノ 酸を有する二つの型のｂＦＧＦの混合物である。

０．１％ヘパリンナトリウムを含有するリン酸塩緩衝化塩水にＦＣＥ２６８１４ 　（バッチ０Ｐ４８）を溶解し、ラット頚静脈中にその５０μｌを一回で全量を 注射投与した。その５分後をベースラインとした。

各動物へ以下の投与量の化合物を与えた。

１９０　ｎ　ｇ、　２４７　ｎ　ｇ、　３２３　ｎ　ｇ、　４２１　ｎ　ｇ、　 ５５０ｎ　ｇ、　２６０　Ｏｎ　ｇｏ　１９０　ｎ　ｇ投与を一個体に行い、残 りの投与量については、ラットを二個体づつ充当した。

４、す 表１から塩基性ＦＧＦ　（ＦＣＥ２６１８４）の全身療法で動脈血圧の降下が誘 発されることが分かる。効果は注射後１〜２分から記録されていた。効果は投与 量２４７　ｎ　ｇ／ラット（１，２５μｇ／Ｋｇ）から現れ、５５０　ｎ　ｇ／ ラット（２，７５μｇ／Ｋｇ）で最大限に達した。ここからは、ｂＦＧＦ投与量 を２６００　ｎ　ｇ／ラット（１３μｇ／Ｋｇ）まで上げてもこれ以上の血圧降 下は観察されなかった。

表　１ ｂＦＧＦ総投与量　動脈血圧 ３２３ｎｇ　４４ ２６００ｎｇ　２５ 結　論 ラットにｂＦＧＦ　（ＦＣＥ２６１８４）を１．２５μｇ／ｋｇ以上静注投与す ることで動脈血圧を下げることができた。この効果は２，７５μｇ／Ｋｇで最大 となり、これ以上の濃度で一定となった。

Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ａｈａ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　 Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ二〇３０ Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　 Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　ＬｅｕＴｙｒ　Ｃｙｓ　Ｌ ｙｓ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｈ ｉｓ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　ＡｒｇＶａｌ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ａｒ ｇ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｈｉｓ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｌｅ ｕ　Ｇｉｎ　ＬｅｕＧｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　ＶａＪ 　Ｖａｔ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ａｓｎ Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　 Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ａｉａ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｃｙｓｌｏｏ　１１０ Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　 Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　ＴｙｒＡｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔ ｙｒ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｒｐ　Ｔ ｙｒ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　ＬｙｓＡｒｇ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ｔｙ ｒ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌ ｙ　Ｇｉｎ　ＬｙｓＡｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｍｅｔ 　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．ヒトを含む哺乳類の治療又は予防用の降圧剤の製造への線維芽細胞増殖因子 （ＦＧＦ）の使用。
2. ２．前記因子が塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）である請求項１に記載の 線維芽細胞増殖因子の使用。
3. ３．前記因子がヒトｂＦＧＦ又はそれの類似物である請求項２に記載の線維芽細 胞増殖因子の使用。
4. ４．前記因子がウシｂＦＧＦ又はそれの類似物である請求項２に記載の線維芽細 胞増殖因子の使用。
5. ５．前記因子が二つ又はそれ以上の異なる型のｂＦＧＦの混合物である請求項２ から４のいずれかに記載の線維芽細胞増殖因子の使用。
6. ６．前記類似物が完全分子の欠失変異体である請求項３〜５のいずれかに記載の 線維芽細胞増殖因子の使用。