JPH0646864A - イコサペンタエン酸合成酵素群をコードする遺伝子及びイコサペンタエン酸の製造方法 - Google Patents

イコサペンタエン酸合成酵素群をコードする遺伝子及びイコサペンタエン酸の製造方法

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JPH0646864A
JPH0646864A JP5135133A JP13513393A JPH0646864A JP H0646864 A JPH0646864 A JP H0646864A JP 5135133 A JP5135133 A JP 5135133A JP 13513393 A JP13513393 A JP 13513393A JP H0646864 A JPH0646864 A JP H0646864A
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Kazuyoshi Yazawa
一良 矢澤
Akiko Yamada
章子 山田
Sei Kondo
聖 近藤
Masashi Kato
誠志 加藤
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Sagami Chemical Research Institute
Original Assignee
Sagami Chemical Research Institute
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 医薬・農薬・食品・飼料等として有用なイコ
サペンタエン酸(EPA)の生合成酵素群をコードする
遺伝子を微生物から取得し、遺伝子組み換え法により、
EPAの有利な製造法を提供する。 【構成】 イコサペンタエン酸(EPA)生合成酵素群
をコードする遺伝子を取得し、これをベクターと連結し
てプラスミドを作成して該プラスミドにて大腸菌を形質
転換し、この形質転換した大腸菌を培養してEPAを産
生する。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】この発明は、イコサペンタエン酸
(以下EPAと称する)生合成酵素群遺伝子、酵素遺伝
子を含有するプラスミド、該プラスミドにて形質転換さ
れた生物、及び該生物を用いるEPAの製造法に関す
る。EPAは、医薬、食品、飼料などの原料として有用
である。
【0002】
【従来の技術】イコサペンタエン酸(EPA)に代表さ
れる多価不飽和脂肪酸は、生体膜の構成成分として重要
な役割を担っている。またこれまでに知られているEP
Aの薬理作用として、以下のものがあげられる。血小
板凝集抑制作用(血栓溶解作用) 血液中の中性脂肪
低下作用 血液中のVLDL−コレステロール、LD
L−コレステロール低下作用、HDL−コレステロール
増加作用(抗動脈硬化作用) 血液粘度低下作用 血
圧降下作用抗炎症作用 抗腫瘍作用。
【0003】さらに、プロスタグランジン類の生合成に
際し基質となり、ヒトを含む高等哺乳動物の体内で必須
の機能を発揮する。特にEPAはタイプ3のプロスタグ
ランジン類の生成の際の基質として重要であって、血小
板の凝集抑制作用があり、血栓症の治療及び予防剤とし
ての応用が検討されている。さらにEPAは、血漿コレ
ステロールレベルの低下に寄与する多価不飽和脂肪酸の
中でも特にその活性が高く、通常の植物油に含まれるリ
ノール酸などよりもはるかに有効である。また魚類等の
必須栄養素としても知られている。
【0004】このように、EPAの血栓防止作用あるい
は脂質低下作用に基づいて、健康食品あるいは医薬品と
しての可能性がデンマークのダイヤーベルグ(Am.J.Cli
n.Nutr.,28,958,1975)の疫学調査により明らかにされて
いるが、その化学構造から明らかなように、化学合成す
ることは極めて困難である。このようなことからわが国
においてもEPAを多く含有するイワシ、サバ、サンマ
等の青背魚の摂食が推奨されるようになってきた。
【0005】今日、健康食品として市販されているEP
Aは、そのほとんどが煮取法によって得られた魚油の分
別物であって、そのEPA含量は10〜30%程度であ
る。煮取法によって抽出される魚油は構成脂肪酸として
多種類の脂肪酸を含む混合グリセリドであって、各成分
を単離精製することが困難であるばかりでなく、EPA
はすべてシス型の二重結合を5個有する炭素数20の直
鎖の多価不飽和脂肪酸である為に、極めて酸化され易い
不安定な脂肪酸であり、魚油からEPAを濃縮する場合
には酸素・光・熱等を避けて行う必要がある。さらに、
これら魚油には、EPA以外の多種類の脂肪酸が混入し
ているため、その分別が困難であり、またEPAの分別
に使用される各種の有機溶剤は通常減圧下に除去される
が、その完全除去は技術的及びコスト的に問題点が多
い。
【0006】医薬品としてのEPAは、様々な方法によ
って抽出された魚油を酵素的にもしくはアルカリ条件下
で処理して遊離脂肪酸まで加水分解するかまたは該遊離
酸をメチルもしくはエチルエステルに変換した後、これ
らを低温分別結晶法、尿素付加法、減圧蒸留法または、
逆相クロマト法等により更に精製してEPA濃度を90
%以上としたものが多い。しかし、これらの方法を用い
て得られたEPA濃縮物は、工程中に多種類の有機溶剤
が使用されており、また200℃近くに加熱されたりす
るため、有機溶剤の残留やEPAの重合、異性化あるい
は酸化等による変質の懸念をはらんでいる。更に、魚油
等をEPAの原料として用いた場合、心臓疾患の原因の
一つとして疑われているドコセン酸等の除去が困難であ
るため、健康食品、医薬品等に利用する上で問題点を残
している。
【0007】一方、最近、不完全な精製・濃縮では、魚
臭が残るなどの欠点を有した魚油からの抽出法を改善す
ることを目的として、クロレラ、単細胞藻類モノダス、
ユーグレナあるいはけい藻等の微生物を用いたEPAの
生産方法が検討されるようになり、微生物を利用したE
PA生産が注目されてきている。最近では、ゲラーマン
とシュレンク(J.L.Gellerman and H.Schlenk,BBA,573,2
3,1979)及び、山田等(昭和61年度日本発酵工学大
会、1986)の発表で、EPAを産生するかび(糸状
菌)についての報告がなされた。
【0008】本発明者らは、培養時間が短く培養制御が
容易であり、遺伝子の取得も容易なバクテリアを利用し
たEPA含有脂質の発酵生産法を見出す目的で、EPA
産生能を有するバクテリアを、広く海洋に求めて鋭意研
究した結果、シュードモナス(Pseudomonas)、アルテロ
モナス(Alteromonas)、シーワネラ(Shewanella)属に属
する新規のバクテリアがEPAを生産することを見出し
た〔K.Yazawa et al.,J.Biochem.,103,5(1988); K.Yaza
wa et al.,Nippon Suisan Gakkaishi,54,1835(198
8)〕。
【0009】EPAを含む多価不飽和脂肪酸の生合成系
は相当する飽和脂肪酸又はその前駆体となる飽和脂肪酸
の位置特異的な好気的不飽和化によることが示唆されて
いる〔例えば、R.Jeffcoat and A.T.James (1984) in :
S.Numa(Ed.):Fatty acid metabolism and its regulat
ion, Elsevier, Amsterdam, pp 85-112〕。しかしなが
ら、EPAの合成に関与している生合成酵素群及びそれ
をコ−ドする遺伝子に関する報告は全くない。
【0010】
【発明が解決しようとする課題】有用な物質を生産する
野生株の該有用物質の生産性は一般に低く、それらの微
生物の能力を工業的に利用しようとする場合、種々の方
法により微生物の改良、すなわち生産性の向上が行われ
る。本発明は、遺伝子組み換え法を用いて、文献未知の
EPA生合成酵素群遺伝子を見出し、他の生物体に導入
することにより、EPA生産性の向上を目指す研究や、
EPA生合成能を持たない生物へのEPA生合成能の賦
与を目的としており、ひいてはEPAの有利な製造法を
確立しようとするものである。
【0011】
【課題を解決するための手段】従って本発明は、EPA
生合成酵素群遺伝子、それを含有する発現型プラスミ
ド、該プラスミドにより形質転換された生物、及びこの
生物を用いるEPAの製造法を提供する。
【0012】本発明においては、EPAを生産する能力
を有する微生物(遺伝子源微生物)からDNAを抽出
し、このDNAを制限酵素で切断することによってEP
A生合成酵素群をコードする遺伝子を切り出し、これを
適当なベクターに導入することによって発現型プラスミ
ドを作成し、このプラスミドを用いて宿主生物体を形質
転換することによりEPA生産株を作成する。この生物
体によりEPAを製造することができる。
【0013】遺伝子源 本発明において遺伝子源として使用できる生物は、特に
属、種あるいは株などを限定するものではないが、通常
は、シュードモナス(Pseudomonas)属、アルテロモナス
(Alteromonas)属、シーワネラ(Shewanella)属などに分
類される微生物等を用いることができる。これらの微生
物については公的微生物寄託機関て容易に入手できる。
【0014】シュ−ドモナスに属する微生物の例とし
て、シュ−ドモナス・ピュ−トリファシエンス(Pseudom
onas putrefaciens)SCRC−2181(FERM B
P−2917)、SCRC−2201(FERM BP
−2916)、SCRC−2271(FERM BP−
2915)、SCRC−2341(FERM BP−2
918)、SCRC−2451(FERM BP−29
19)、SCRC−2642(FERM BP−292
0)、SCRC−2792(FERM BP−292
1)、SCRC−2878(FERM BP−162
3)、SCRC−3011(FERM BP−291
3)、SCRC−3022(FERM BP−291
4)を挙げることができる。
【0015】アルテロモナスに属する微生物の例とし
て、アルテロモナス・ピュ−トリファシエンス(Alterom
onas putrefaciens)SCRC−2871(FERM B
P−1624)及びアルテロモナス・ピュ−トリファシ
エンス・サブスピ−シズ・サガミファシエンス(Alterom
onas putrefaciens subspecies sagamifaciens)SCR
C−1162(FERM BP−1626)等を挙げる
ことができる。
【0016】シ−ワネラに属する微生物の例として、シ
−ワネラ・ピュ−トリファシエンス(Shewanella putref
aciens)SCRC−2874(FERM BP−162
5)等を挙げることができる。
【0017】・EPA生合成酵素群をコ−ドする遺伝子
のクロ−ニング及び発現型プラスミドの作成 本発明においては、EPA生合成酵素群の遺伝子源の例
として、シ−ワネラ・ピュ−トリファシエンス(Shewane
lla putrefaciens)SCRC−2874(FERM B
P−1625)を用いる場合について具体的に説明す
る。しかしながら、前記したように、種々のEPA生産
菌を同様にして遺伝子源として使用することができるこ
とは言うまでもない。遺伝子のクロ−ニングの方法は実
施例により詳細に説明する。
【0018】本発明では、例えばエシェリヒャ・コリ(E
scherichia coli)や枯草菌(Bacillus subtilis)のごと
き異種宿主もしくはシ−ワネラ属細菌のごとき同種宿
主、あるいはさらに酵母、糸状菌等を形質転換すること
により、EPA生産株を人為的に創製することができ
る。さらに、大豆、ひまわり、アブラナ、ごま等の高等
植物に本遺伝子を導入することにより、EPA産生植物
を作り出すことも可能である。EPA生合成酵素群遺伝
子の発現のための領域としては、これらの酵素の遺伝子
に本来付随している制御領域を使用することも可能であ
るが、発現量を向上させ、あるいは発現の誘導を可能に
するためには別途プロモ−タ−/オペレ−タ−系を用意
するのが好ましい。宿主として大腸菌を用いる場合に
は、このようなプロモ−タ−/オペレ−タ−系として、
trp、tac、lavUV5、PL、PR、lPP等のプ
ロモ−タ−/オペレ−タ−系を用いることができ、SD
配列として、trpリ−ダ−ペプチド、lacZ、メタ
ピロカテカ−ゼまたはcII遺伝子等のSD配列を用い
ることができる。さらにコ−ド領域の下流に転写タ−ミ
ネ−タ−、例えば、大腸菌のリボゾ−ム遺伝子のrrn
BT12タ−ミネ−タ−等を設けることができる。さら
に、前記遺伝子の発現においては、サッカロミセス・セ
レビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の宿主/ベクタ−
系を用いることができ、この場合のプロモ−タ−として
は酵母のアルコ−ル脱水素酵素遺伝子のプロモ−タ−、
酸性ホスファタ−ゼ遺伝子のプロモ−タ−、グリセルア
ルデヒド−3−リン酸脱水素酵素のプロモ−タ−、エノ
ラ−ゼ遺伝子のプロモ−タ−等を使用することができ、
この場合のプラスミドは酵母中で複製するための配列、
及び該プラスミドを含有する酵母を選択するための選択
マ−カ−としての栄養要求性マ−カ−、例えばLeu、
Trp、His等の要求性の配列を含有することが好ま
しい。
【0019】高等植物への遺伝子導入においては、ベク
ターを用いる方法や直接導入法などがある。ベクターと
してはTiプラスミドや、カリフラワーモザイクウイル
ス(CaMV)、ジェミニウイルス、カサバラテントウ
イルス、トマトゴールデンモザイクウイルスなどのDN
Aウイルス、ブロムモザイクウイルス(BMV)、タバ
コモザイクウイルス(TMV)などのRNAウイルスを
用いることができ、この場合のプロモーターとしてCa
MVの35Sプロモーターなどを挙げることができる。
また、プロトプラストへの直接導入法としてリン酸カル
シウム法、ポリエチレングリコール法、マイクロインジ
ェクション、エレクトロポレーション、リポソーム法な
どが挙げられる。また、植物細胞への直接導入法として
パーティクルガン法も挙げられる。
【0020】さらには、本遺伝子群の一部を用いて宿主
生物体の脂肪酸組成を変革することも可能である。な
お、一般に大腸菌における特定の蛋白質の発現量は遺伝
子のコピ−数、転写効率、mRNAの安定性、翻訳効
率、蛋白質の安定性等に影響される。遺伝子工学的技術
を用いてこれらの制御領域であるプロモ−タ−、SD領
域、タ−ミネ−タ−等を改変するためにはプラスミドは
小型である方が取り扱いが容易である。また、遺伝子の
コピ−数は、その遺伝子をコ−ドしているプラスミドの
大きさに関連し、小型である方がコピ−数は増加する傾
向がある。このため、本発明の実施例で述べるEPA生
合成酵素群遺伝子を含有するDNA断片をプラスミドに
挿入し、このプラスミドのサブクロ−ニングを反復する
ことによって該遺伝子DNA断片中の不要部分を切除す
ることにより、一層小型のプラスミドを得ることも可能
である。この方法によって得られる、より小型化したE
PA生合成酵素群遺伝子も本発明に含まれる。また、酵
素の安定性や活性を高めるために、公知の手法を用い
て、遺伝子の一部塩基配列(アミノ酸配列)を変換する
ことも可能であり、これらの変異遺伝子も本発明に含ま
れる。
【0021】本発明の宿主大腸菌としては、エシェリヒ
ャ・コリK12株に由来する任意の菌株を使用すること
ができる。例えば、JM83、JM101、JM10
3、JM105、JM109、RR1、RB791、W
3110、C600、HB101、DH1、AG1、N
M554等を使用することができる。また宿主酵母とし
ては、AH22、DC5、D−13−1A、YNN14
0等が挙げられる。なお、本発明の遺伝子がコードする
酵素群は、宿主生物体が本来有する生合成系により合成
される高級脂肪酸をイコサペンタエン酸に誘導できる。
【0022】本発明の実施に当たっては、本発明の遺伝
子を有する形質転換された生物体を常法により、例えば
微生物を用いる場合、培地で培養して微生物菌体を得
る。この際の培地としては例えば次の表1に示す組成の
培地を調製することができる。
【0023】
【表1】
【0024】このようにして得た菌体から、通常の方法
により、例えば有機溶媒を用いて抽出することによりE
PAを得ることができる。以下、詳細は実施例にて例示
する。
【0025】
【実施例】次に本発明を実施例によりさらに具体的に説
明する。
【0026】実施例1−1. EPA生合成酵素群をコ−
ドする遺伝子を含むゲノムDNAの調製 シ−ワネラ・ピュ−トリファシエンス(Shewanella putr
efaciens)SCRC−2874(FERM BP−16
25)を125mlの培地(1%ペプトン、0.5%酵
母エキス/1/2濃度人工海水)に植菌し、15℃で1
8時間振盪培養した(OD610=8.6)。得られた菌体
を1M NaClで1回洗浄後、20mlの1M NaC
lに懸濁した。これを55℃で30分静置後、0.1M
EDTA 20mlを加え、さらに55℃で15分静置
後、10,000r.p.m.で10分間遠心分離した。沈澱
に100mgのリゾチ−ムを含むTES緩衝液(1mM
EDTA, 0.1mM NaCl, 10mM Tris−
HCl, pH 8.0)10mlを加えて懸濁し、37℃
で1時間静置後、10%SDS 1mlを加えて60℃
で1時間静置した。ここに中和フェノ−ル 11mlを
加えて5分間ゆっくり振盪したのち、6,500r.p.m.
で5分間遠心分離して、上層を採取し、エタノ−ル 2
0mlを加えて軽く振り混ぜた。析出したDNAをガラ
ス棒で巻取り、エタノ−ル中で洗った後、10mlのT
ES緩衝液に溶解して、4℃で一晩放置した。これにR
N ase A 0.5mgを加えて37℃で3時間ゆっく
り振盪したのち、プロテイナ−ゼK 1mgを加えてさ
らに4.5時間振盪した。ここに中和フェノ−ルとクロロ
ホルム各5mlを加えて5分間ゆっくり振盪し、遠心分
離して上層を採り、クロロホルム 10mlを加えて5
分間ゆっくり振盪し、遠心分離して上層を得た。ここに
エタノ−ル 20mlを加えて軽く振り混ぜ、析出した
DNAをガラス棒で巻取った。これをエタノ−ル中で洗
って、3mlのTES緩衝液に溶解した。得られたDN
A量は約2.8mgであった。このDNA200μgを
制限酵素Sau3AIを用いて部分分解した後、0.3
%アガロ−スゲル上で電気泳動し、約20kb以上のD
NA断片を、電気溶出により単離した。これをフェノ−
ル/クロロホルム抽出したのちエタノ−ル沈澱し、50
0μlのTE緩衝液(1mM EDTA, 10mM Tr
is−HCl, pH 7.4)に溶解した。
【0027】実施例1−2. 染色体DNA断片のベクタ
−への挿入 ベクタ−としてコスミドpWE15(STRATAGENE社製)
を用いた。10μgのpWE15を制限酵素BamHI
により完全分解し、仔牛小腸アルカリフォスファタ−ゼ
で37℃で1時間処理し、フェノ−ル/クロロホルムで
抽出した。これをエタノ−ル沈澱し、10μlのTE緩
衝液に溶解した。上記の方法により得られたベクタ−D
NA 1.5μgと、実施例1で調製した染色体DNAの
制限酵素Sau3AI部分分解物1μgを混合し、T4
DNAリガ−ゼにより、26℃で10分間反応させてD
NA鎖を連結した。この反応物の1/4量を常法により
パッケ−ジングしてファ−ジとし、大腸菌K12/AG
−1株に感染させた。
【0028】実施例1−3. 組み換え体のEPA生産株
の検索 実施例1−2のファ−ジ感染させた大腸菌液を、50μ
g/mlのアンピシリンを含むLB寒天培地(トリプト
ン1%、酵母エキス0.5%、NaCl 1%、寒天 2
%)に塗布し、37℃で一晩培養した。出現したコロニ
−を、50μg/mlのアンピシリンを含む1.5ml
のLB培地に接種し、25℃で1〜7日間振盪培養し
た。これを遠心分離して菌体を集め、培地を除いた後、
塩化水素飽和のメタノ−ル0.5mlに懸濁し、密栓し
て80℃で1時間保温して脂肪酸をメチルエステル化し
た。放冷後、0.3mlのヘキサンで3回抽出し、ヘキ
サン層を乾固して20μlのメタノ−ルに溶解した。そ
の2μlをシリカゲルプレ−トにスポットし、ヘキサン
とエ−テルの19:1の展開溶媒で3回展開したのち風
乾し、ヨ−ド発色を行った。このようにして、組み換え
体390個について検索を行った結果、スタンダ−ドの
EPAのメチルエステルと同位置に薄層クロマトグラフ
ィ−スポットを示す株を1株得た。この株よりコスミド
をアルカリ/SDS法を用いて抽出した。このコスミド
をpEPAと名付けた。pEPAは、pWE15のBa
mHI部位に約37KbpのSau3AI切断断片が挿
入されたコスミドであった。
【0029】実施例1−4. pEPAの制限酵素地図の
作成 コスミドpEPAを、形質転換菌AG−1/pEPAよ
り調製した。pEPAを種々の制限酵素で切断し、制限
酵素切断地図を作成した(図1)。
【0030】実施例1−5. 配列の解析 コスミドpEPA中のゲノムDNA挿入部を含むSau
3AI−Sau3AI断片の全塩基配列を配列番号:1
に示す。この塩基配列中には8個のオ−プンリ−ディン
グフレ−ム(ORF):2〜9を特定することができ、
これらのそれぞれの塩基配列及び対応するアミノ酸配列
を配列番号:2〜9に示す。全塩基配列(配列番号:
1)とORF2〜9(それぞれ配列番号:2〜9)との
関係は表2の通りである。
【0031】
【表2】
【0032】前記ゲノムDNA挿入部の制限酵素地図及
びそれに対応するORF2〜9の位置を図2に示す。図
2において△印はmRNAがヘアピン構造(Stem and ro
op構造)を形成する部位を示す。pEPAか種々の制限
酵素を用いて配列番号:1の一部分を切り出したのちp
EPAを再結合させ、それを用いて大腸菌を形質転換し
た後、イコサペンタエン酸の生産性を調べたところ、図
2中の斜線で示した部分が欠落した場合にはイコサペン
タエン酸の生産が観察されず、大腸菌におけるイコサペ
ンタエン酸の生産のためには、少なくともORF2又は
3のいずれか、及びORF8又は9のいずれかが必要と
考えられる。
【0033】前記種々のORFのアミノ酸配列と既知ア
ミノ酸配列とを比較したところ、ORF4中の2領域、
ORF5中の1領域及びORF7中の2領域が脂肪酸合
成に関与する酵素のアミノ酸配列とある程度相同性を有
することが見出された。その結果を次の表3に示す。
【0034】
【表3】 表3 配列番号 アミノ酸 類似酵素及び位置 文献 (ORF番号) 配列の位置 ────────────────────────────── 4 668(Leu)-930(Leu) マロニルCoA-ACP トランス (1) フェラーゼ56(Leu)-309(Leu) 4 189(Phe)-424(His) 脂肪酸合成酵素 (2) 120(Phe)-350(His) 4 200(Ser)-483(Leu) 脂肪酸合成酵素(3-ケトア (3) シル-ACPシンセターゼドメイン) 137(Ala)-406(Asp) 4 454(Ser)-585(Gln) 3-ケトアシル-ACPシンセ (4) ターゼ137(Ala)-406(Asp) 5 563(Phe)-694(Gly) 2-オキソアシルレダク (5) ターゼ1470(Leu)-1604(Gly) 7 205(Ala)-442(Lys) 3-ケトアシル-ACPシンセ (6) ターゼ187(Ala)-416(Asn) 7 1373(Thr)-1547(Val) 3-ヒドロキシデカノイル (7) -ACPデヒドラタ−ゼ 29(Leu)-163(Val) ──────────────────────────────
【0035】文献 (1) Magnuson K. et al., FEBS Lett. (1992) 299:262-
266 (2) Kameda K. et al., J. Biol. Chem. (1991) 266:41
9-426 (3) Huang W. Y. et al., Arch. Biochem. Biophys. (1
989) 270:92-98 (4) Kauppinen S. et al., Carlsberg Res. Commun. (1
988) 53:357-370 (5) Beck J. et al., Eue. J. Biochem. (1990) 192:48
7-498 (6) Siggaard-Andersen M. et al., Proc. Natl. Acad.
Sci. U.S.A. (1991) 88:4114-4118 (7) Cronan Jr. J. E. et al., J. Biol. Chem. (1988)
263:4641-4646
【0036】従って、本発明は、配列番号:2〜9に示
すアミノ酸配列をコードする遺伝子を提供する共に、前
記の既知酵素のアミノ酸配列と相同性を有するアミノ酸
配列領域又はこれを含むアミノ酸配列をコードするDN
Aをも提供する。
【0037】実施例2. 形質転換菌AG−1/pEP
AによるEPAの生産 形質転換菌AG−1/pEPAを、50μl/mlのア
ンピシリンを含むLB培地100mlに接種し、25℃
で48時間培養した。遠心分離により菌体を得、1回洗
浄したのち純水2mlに懸濁して、クロロホルムとメタ
ノ−ルの2対1の溶媒12mlで3回抽出した。溶媒層
を乾固し、塩化水素飽和のメタノ−ル1.5mlに溶解
して密閉容器に入れ、80℃で1時間保温して脂肪酸を
メチルエステル化した。放冷後、ヘキサン2mlで3回
抽出し、ヘキサン層を乾固して20μlのメタノ−ルに
溶解した。この溶解物の一部をガスクロマトグラフィ−
により分析したところ、EPAのピ−クが観察され、そ
の全脂肪酸エステル中における割合は、ピ−クの面積比
から約1.36%と算出された。培養当りのEPA生成
量は、約0.5mg/lであった。得られたエステル混
合物を硝酸銀シリカゲルプレ−トにスポットし、ヘキサ
ンとエ−テルの3対1の溶媒で展開した。これをフルオ
ロセイン及び紫外線で発色させ、高度不飽和脂肪酸エス
テル画分のスポットをかき取って、メタノ−ル1.8m
l, 10%NaCl 0.2mlを加えて室温で30分間
振盪した。これをヘキサン2mlで3回抽出し、ヘキサ
ン層を乾固して40μlのヘキサンに溶解して、GC−
MS分析を行ったところ、ガスクロマトグラフィ−上の
目的ピ−クの物質の分子量は316であり、各フラグメ
ントのピ−クは標品のそれと全く一致し、本物質はEP
Aと同定された。なお、MSフラグメントピ−クは以下
の通りであった。
【0038】Mass : 316(M+),287,273,262,247,234,22
0,201,180,161,148,133,119,108,93,79,67,55,41,28.
【0039】実施例3 形質転換菌JM109/pEP
AによるEPAの生産 コスミドpEPAを用いて、常法により、大腸菌K12
/JM109株を形質転換した。50μl/mlのアン
ピシリンを含むLB寒天培地を用いた選別によりJM1
09/pEPA(FREM BP−4257)を得た。
これから実施例2と同様にして菌体脂質の抽出、メチル
エステル化を行い、ガスクロマトグラフィ−により分析
したところ、EPAのピ−クが検出された。その全脂肪
酸エステル中における割合は、ピ−クの面積比から約
1.43%と算出された。培養当りのEPA生成量は、
約0.6mg/lであった。
【0040】
【配列表】
配列番号: 1 配列の長さ:37913 配列の型: 核酸 鎖の数: 二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源: シーワネラ・ピュートリファシエンス S
CRC−2874 (FERM BP−1625) 配列 GATCTCTTAC AAAGAAACTA TCTCAATGTG AATTTAACCT TAATTCCGTT TAATTACGGC 60 CTGATAGAGC ATCACCCAAT CAGCCATAAA ACTGTAAAGT GGGTACTCAA AGGTGGCTGG 120 GCGATTCTTC TCAAATACAA AGTGCCCAAC CCAAGCAAAT CCATATCCGA TAACAGGTAA 180 AAGTAGCAAT AAACCCCAGC GCTGAGTTAG TAATACATAA GCGAATAATA GGATCACTAA 240 ACTACTGCCG AAATAGTGTA ATATTCGACA GTTTCTATGC TGATGTTGAG ATAAATAAAA 300 AGGGTAAAAT TCAGCAAAAG AACGATAGCG CTTACTCATT ACTCACACCT CGGTAAAAAA 360 GCAACTCGCC ATTAACTTGG CCAATCGTCA GTTGTTCTAT CGTCTCAAAG TTATGCCGAC 420 TAAATAACTC TATATGTGCA TTATGATTAG CAAAAACTCC GATACCATCA AGATGAAGTT 480 GTTCATCACA CCAACTCAAA ACTGCGTCGA TAAGCTTACT GCCATAGCCC TTGCCTTGCT 540 CCACATTTGC GATAGCAATA AACTGTAAAA TGCCACATTG GCCACTTGGT AAGCTCTCTA 600 TAATCTGATT TTCTTTGTTA ATAAGTGCCT GAGTTGAATA CCAACCAGTA CTTAACAACA 660 TCTTTAAACG CCAATGCCAA AAACGCGCTT CACCTAAGGG AACCTGCTGA GTCACTATGC 720 AGGCTACGCC TATCAATCTA TCCCCAACGA ACATACCAAT AAGTGCTTGC TCCTGTTGCC 780 AGAGCTCATT GAGTTCTTCT CGAATAGCCC CGCGAAGCTT TTGCTCATAC TGCGCTTGAT 840 CACCACTAAA AAGTGTTTCG ATAAAAAAGG GATCATCATG ATAGGCGTTA TAGAGAATAG 900 AGGCTGCTAT GCGTAAATCT TCTGCCGTGA GATAAACTGC ACGACACTCT TCCATGGCTT 960 GATCTTCCAT TGTTATTGTC CTTGACCTTG ATCACACAAC ACCAATGTAA CAAGACTGTA 1020 TAGAAGTGCA ATTAATAATC AATTCGTGCA TTAAGCAGGT CAGCATTTCT TTGCTAAACA 1080 AGCTTTATTG GCTTTGACAA AACTTTGCCT AGACTTTAAC GATAGAAATC ATAATGAAAG 1140 AGAAAAGCTA CAACCTAGAG GGGAATAATC AAACAACTGC TAAGATCTAG ATAATGTAAT 1200 AAACACCGAG TTTATCGACC ATACTTAGAT AGAGTCATAG CAACGAGAAT AGTTATGGAT 1260 ACAACGCCGC AAGATCTATC ACACCTGTTT TTACAGCTAG GATTAGCAAA TGATCAACCC 1320 GCAATTGAAC AGTTTATCAA TGACCATCAA TTAGCGGACA ATATATTGCT ACATCAAGCA 1380 AGCTTTTGGA GCCCATCGCA AAAGCACTTC TTAATTGAGT CATTTAATGA AGATGCCCAG 1440 TGGACCGAAG TCATCGACCA CTTAGACACC TTATTAAGAA AAAACTAACC ATTACAACAG 1500 CAACTTTAAA TTTTGCCGTA AGCCATCTCC CCCCACCCCA CAACAGCGTT GTTGCTTATG 1560 ACCACTGGAG TACATTCGTC TTTAGTCGTT TTACCATCAC CATGGGTACG TTGAGTGCGA 1620 TAAAAAAGCA CATAAACTTC TTTATCGGCC TGAATATAGG CTTCGTTAAA ATCAGCTGTT 1680 CCCATTAAAG TAACCACTTG CTCTTTACTC ATGCCTAGAG ATATCTTTGT CAAATTGTCA 1740 CGGTTTTTAT CTTGAGTTTT CTCCCAAGCA CCGTGATTAT CCCAGTCAGA TTCCCCATCA 1800 CCAACATTGA CCACACAGCC CGTTAGCCCT AAGCTTGCAA TCCCAAAACA TGCTAAACCT 1860 AATAATTTAT TTTTCATTTT AACTTCCTGT TATGACATTA TTTTTGCTTA GAAGAAAAGC 1920 AACTTACATG CCAAAACACA AGCTGTTGTT TTAAATGACT TTATTTATTA TTAGCCTTTT 1980 AGGATATGCC TAGAGCAATA ATAATTACCA ATGTTTAAGG AATTTGACTA ACTATGAGTC 2040 CGATTGAGCA AGTGCTAACA GCTGCTAAAA AAATCAATGA ACAAGGTAGA GAACCAACAT 2100 TAGCATTGAT TAAAACCAAA CTTGGTAATA GCATCCCAAT GCGCGAGTTA ATCCAAGGTT 2160 TGCAACAGTT TAAGTCTATG AGTGCAGAAG AAAGACAAGC AATACCTAGC AGCTTAGCAA 2220 CAGCAAAAGA AACTCAATAT GGTCAATCAA GCTTATCTCA ATCTGAACAA GCTGATAGGA 2280 TCCTCCAGCT AGAAAACGCC CTCAATGAAT TAAGAAACGA ATTTAATGGG CTAAAAAGTC 2340 AATTTGATAA CTTACAACAA AACCTGATGA ATAAAGAGCC TGACACCAAA TGCATGTAAT 2400 TGAACTACGA TTTGAATGTT TTGATAACAC CACGATTACT GCAGCAGAAA AAGCCATTAA 2460 TGGTTTGCTT GAAGCTTATC GAGCCAATGG CCAGGTTCTA GGTCGTGAAT TTGCCGTTGC 2520 ATTTAACGAT GGTGAGTTTA AAGCACGCAT GTTAACCCCA GAAAAAAGCA GCTTATCTAA 2580 ACGCTTTAAT AGTCCTTGGG TAAATAGTGC ACTCGAAGAG CTAACCGAAG CCAAATTGCT 2640 TGCGCCACGT GAAAAGTATA TTGGCCAAGA TATTAATTCT GAAGCATCTA GCCAAGACAC 2700 ACCAAGTTGG CAGCTACTTT ACACAAGTTA TGTGCACATG TGCTCACCAC TAAGAAATGG 2760 CGACACCTTG CAGCCTATTC CACTGTATCA AATTCCAGCA ACTGCCAACG GCGATCATAA 2820 ACGAATGATC CGTTGGCAAA CAGAATGGCA AGCTTGTGAT GAATTGCAAA TGGCCGCAGC 2880 TACTAAAGCT GAATTTGCCG CACTTGAAGA GCTAACCAGT CATCAGAGTG ATCTATTTAG 2940 GCGTGGTTGG GACTTACGTG GCAGAGTCGA ATACTTGACG AAAATTCCGA CCTATTACTA 3000 TTTATACCGT GTTGGCGGTG AAAGCTTAGC AGTAGAAAAG CAGCGCTCTT GTCCTAAGTG 3060 TGGCAGTCAA GAATGGCTGC TCGATAAACC ATTATTGGAT ATGTTCCATT TTCGCTGTGA 3120 CACCTGCCGC ATCGTATCTA ATATCTCTTG GGACCATTTA TAACTCTTCC GAGTCTTATC 3180 ACACTAGAGT TTAGTCAGCA TAAAAATGGC GCTTATATTT CAATTAAAAG AAATATAAGC 3240 GCCATTTTCA TCGATACTAT ATATCAGCAG ACTATTTTCC GCGTAAATTA GCCCACATTA 3300 ATTTCATTCT TTGCCAGATC CCTGGATGAT CTAGTTGTGG CATCGACTCT TCAATAGGTT 3360 TAACCGCAGG TGTAACCCTT GGAGTCAATT CGTTTATAAA CTCGTTTAAA CTGTCACTTA 3420 ATTTAACGCT TTGTACTTCA CCTGGAATTT CAATCCATAC GCTGCCATCA CTATTATTAA 3480 CCGTCAACAT TTTATCTTCA TCATCAAGAA TACCAATAAA CCAAGTCGGC TCTTGCTTAA 3540 GCTTTCTCTT CATCATTAAA TGACCAATGA TGTTTTGTTG TAAGTATTCA AAATCAGTTT 3600 GATCCCACAC TTGGATTAGC TCACCTTGGC CCCATTGTGA GTCAAAAAAT AGCGGTGCAG 3660 AAAAATGACT GCCAAAAAAT GGATTAATTT CTGCAGATAA TGTCATTTCA AGTGCTGTTT 3720 CAACATTAGC AAATTCACCA GGTTGTTGAC GTACAACCGA TTGCCAAAAC ACTGCGCCAT 3780 CGGAGCCCGC TTCGGCGACA ACACACTCAG ACTTTTGTCC TTGCGCATAA TATCTTGGCT 3840 GTTCACCAAG CTTATCCATG TAGGCTTGTT GATATTTAGA TAAAAAAAGA TCTAAAGCAG 3900 GTAAAGAAGA CACTTAAGCC AGTTCCAAAA TCAGTTATAA TAGGGGTCTA TTTTGACATG 3960 GAAACCGTAT TGATGACACA ACATCATGAT CCCTACAGTA ACGCCCCCGA ACTTTCTGAA 4020 TTAACTTTAG GAAAGTCGAC CGGTTATCAA GAGCAGTATG ATGCATCTTT ACTACAAGCG 4080 TGCCGCGTAA ATTAAACCGT GATGCTATCG GTCTAACCAA TGAGCTACCT TTTCATGGCT 4140 GTGATATTTG GACTGGCTAC GAACTGTCTT GGCTAAATGC TAAAGGCAAG CCAATGATTG 4200 CTATTGCAGA CTTTAACCTA AGTTTTGATA GTAAAAATCT GATCGAGTCT AAGTCGTTTA 4260 AGCTGTATTT AAACAGCTAT AACCAAACAC GATTTGATAG CGTTCAAGCG GTTCAAGAAC 4320 GTTTAACTGA AGACTTAAGC GCCTGTGCCC AAGGCACAGT TACGGTAAAA GTGATTGAAC 4380 CTAAGCAATT TAACCACCTG AGAGTGGTTG ATATGCCAGG TACCTGCATT GACGATTTAG 4440 ATATTGAAGT TGATGACTAT AGCTTTAACT CTGACTATCT CACCGACAGT GTTGATGACA 4500 AAGTCATGGT TGCTGAAACG CTAACGTCAA ACTTATTGAA ATCAAACTGC CTAATCACTT 4560 CTCAGCCTGA CTGGGGTACA GTGATGATCC GTTATCAAGG GCCTAAGATA GACCGTGAAA 4620 AGCTACTTAG ATATCTGATT TCATTTAGAC AGCACAATGA ATTTCATGAG CAGTGTGTTG 4680 AGCGTATATT TGTTGATTTA AAGCACTATT GCCAATGTGC CAAACTTACT GTCTATGCAC 4740 GTTATACCCG CCGTGGTGGT TTAGATATCA ACCCATATCG TAGCGACTTT GAAAACCCTG 4800 CAGAAAATCA GCGCCTAGCG AGACAGTAAT TGATTGCAGT ACCTACAAAA AACAATGCCT 4860 ATAAGCCAAG CTTATGGGCA TTTTTATATT ATCAACTTGT CATCAAACCT CAGCCGCCAA 4920 GCCTTTTAGT TTTATCGCTA AATTAAGCCG CTCTCTCAGC CAAATATTTG CAGGATTTTG 4980 CTGTAATTTA TGGCTCCACA CCATGAAATA CTCTATCGGC TCTACCGCAA AAGGTAAGTC 5040 AAATACCTGT AAGCCAAACA GCTTGGCATA TTCGTCAGTG TGGGCTTTTG ACGCGATAGC 5100 TAACGCATCA CTTTTTGAGG CAACCGACAT CATACTTAAT ATTGATGATT GCTCGCTGTG 5160 CATTTGCCTT GCCGGTAACA CCTGTTTAGT CAGCAAGTCG GCAACACTTA AATTGTAGCG 5220 GCGCATCTTA AAAATAATAT GCTTTTCATT AAAGTATTGC TCTTGCGTCA ACCCACCTTG 5280 GATCCTTGGG TGAGCATTTC GTGCCACACA AACTAATTTA TCCTGCATTA CTTTTTGACT 5340 CTTAAATGCC GCAGATTCTG GCAGCCAAAT ATCTAAGGCT AAATCCACCT TTTCTAGTTG 5400 TAGGTCCATC TGCAACTCTT CTTCAATGAG CGGCGGCTCA CGAAATACAA TATTAATTGC 5460 AGTGCCCTGT AACACTTGCT CAATTTGATC TTGCAAGAGT TGTATTGCCG ACTCGCTGGC 5520 ATACACATAA AAAGTTCGCT CACTTGAAGT GGGGTCAAAT GCTTCAAAGC TAGTCGCAAC 5580 TTGCTCAATT GTTGACATAG CGCCCGCGAG CTGTTGATAA AGCGTCATCG CACTTGCGGT 5640 AGGTTTAACT CCCCTACCCA CTCGAGTAAA CAACTCTTCT CCAACAATAC TTTTTAGCCT 5700 CGAAATCGCA TTACTAACCG ACGACTGAGT CAAATCCAGC TCTTCTGCCG CCCGGCTAAA 5760 AGATGAGGTG CGATACACCG CAGTAAAAAC GCGAAATAAA TTAAGATCAA AAGCTTTTTG 5820 CTGCGACATA AATCAGCTAT CTCCTTATCC TTATCCTTAT CCTTATAAAA AGTTAGCTCC 5880 AGAGCACTCT AGCTCAAAAA CAACTCAGCG TATTAAGCCA ATATTTTGGG AACTCAATTA 5940 ATATTCATAA TAAAAGTATT CATAATATAA ATACCAAGTC ATAATTTAGC CCTAATTATT 6000 AATCAATTCA AGTTACCTAT ACTGGCCTCA ATTAAGCAAA TGTCTCATCA GTCTCCCTGC 6060 AACTAAATGC AATATTGAGA CATAAAGCTT TGAACTGATT CAATCTTACG AGGGTAACTT 6120 ATGAAACAGA CTCTAATGGC TATCTCAATC ATGTCGCTTT TTTCATTCAA TGCGCTAGCA 6180 GCGCAACATG AACATGACCA CATCACTGTT GATTACGAAG GGAAAGCCGC AACAGAACAC 6240 ACCATAGCTC ACAACCAAGC TGTAGCTAAA ACACTTAACT TTGCCGACAC GCGTGCATTT 6300 GAGCAATCGT CTAAAAATCT AGTCGCCAAG TTTGATAAAG CAACTGCCGA TATATTACGT 6360 GCCGAATTTG CTTTTATTAG CGATGAAATC CCTGACTCGG TTAACCCGTC TCTCTACCGT 6420 CAGGCTCAGC TTAATATGGT GCCTAATGGT CTGTATAAAG TGAGCGATGG CATTTACCAG 6480 GTCCGCGGTA CCGACTTATC TAACCTTACA CTTATCCGCA GTGATAACGG TTGGATAGCA 6540 TACGATGTTT TGTTAACCAA AGAAGCAGCA AAAGCCTCAC TACAATTTGC GTTAAAGAAT 6600 CTACCTAAAG ATGGCGATTT ACCCGTTGTT GCGATGATTT ACTCCCATAG CCATGCGGAC 6660 CACTTTGGCG GAGCTCGCGG TGTTCAAGAG ATGTTCCCTG ATGTCAAAGT CTACGGCTCA 6720 GATAACATCA CTAAAGAAAT TGTCGATGAG AACGTACTTG CCGGTAACGC CATGAGCCGC 6780 CGCGCAGCTT ATCAATACGG CGCAACACTG GGCAAACATG ACCACGGTAT TGTTGATGCT 6840 GCGCTAGGTA AAGGTCTATC AAAAGGTGAA ATCACTTACG TCGCCCCAGA CTACACCTTA 6900 AACAGTGAAG GCAAATGGGA AACGCTGACG ATTGATGGTC TAGAGATGGT GTTTATGGAT 6960 GCCTCGGGCA CCGAAGCTGA GTCAGAAATG ATCACTTATA TTCCCTCTAA AAAAGCGCTC 7020 TGGACGGCGG AGCTTACCTA TCAAGGTATG CACAACATTT ATACGCTGCG CGGCGCTAAA 7080 GTACGTGATG CGCTCAAGTG GTCAAAAGAT ATCAACGAAA TGATCAATGC CTTTGGTCAA 7140 GATGTCGAAG TGCTGTTTGC CTCGCACTCT GCGCCAGTGT GGGGTAACCA AGCGATCAAC 7200 GATTTCTTAC GCCTACAGCG TGATAACTAC GGCCTAGTGC ACAATCAAAC CTTGAGACTT 7260 GCCAACGATG GTGTCGGTAT ACAAGATATT GGCGATGCGA TTCAAGACAC GATTCCAGAG 7320 TCTATCTACA AGACGTGGCA TACCAATGGT TACCACGGCA CTTATAGCCA TAACGCTAAA 7380 GCGGTTTATA ACAAGTATCT AGGCTACTTC GATATGAACC CAGCCAACCT TAATCCGCTG 7440 CCAACCAAGC AAGAATCTGC CAAGTTTGTC GAATACATGG GCGGCGCAGA TGCCGCAATT 7500 AAGCGCGCTA AAGATGATTA CGCTCAAGGT GAATACCGCT TTGTTGCAAC GGCATTAAAT 7560 AAGGTGGTGA TGGCCGAGCC AGAAAATGAC TCCGCTCGTC AATTGCTAGC CGATACCTAT 7620 GAGCAACTTG GTTATCAAGC AGAAGGGGCT GGCTGGAGAA ACATTTACTT AACTGGCGCA 7680 CAAGAGCTAC GAGTAGGTAT TCAAGCTGGC GCGCCTAAAA CCGCATCGGC AGATGTCATC 7740 AGTGAAATGG ACATGCCGAC TCTATTTGAC TTCCTCGCGG TGAAGATTGA TAGTCAACAG 7800 GCGGCTAAGC ACGGCTTAGT TAAGATGAAT GTTATCACCC CTGATACTAA AGATATTCTC 7860 TATATTGAGC TAAGCAACGG TAACTTAAGC AACGCAGTGG TCGACAAAGA GCAAGCAGCT 7920 GACGCAAACC TTATGGTTAA TAAAGCTGAC GTTAACCGCA TCTTACTTGG CCAAGTAACC 7980 CTAAAAGCGT TATTAGCCAG CGGCGATGCC AAGCTCACTG GTGATAAAAC GGCATTTAGT 8040 AAAATAGCCG ATAGCATGGT CGAGTTTACA CCTGACTTCG AAATCGTACC AACGCCTGTT 8100 AAATGAGGCA TTAATCTCAA CAAGTGCAAG CTAGACATAA AAATGGGGCG ATTAGACGCC 8160 CCATTTTTTA TGCAATTTTG AACTAGCTAG TCTTAGCTGA AGCTCGAACA ACAGCTTTAA 8220 AATTCACTTC TTCTGCTGCA ATACTTATTT GCTGACACTG ACCAATACTC AGTGCAAAAC 8280 GATAACTATC ATCAAGATGG CCCAGTAAAC AATGCCAATT ATCAGCAGCG TTCATTTGCT 8340 GTTCTTTAGC CTCAATCAAA CCTAAACCAG ACTTTTGTGG CTCAGCGTTA GGCTTATTAG 8400 AACTCGACTC TAGTAAAGCA AGACCAATAT CTTGTTTTAA CAAAACCTGT CGCTGATTAA 8460 GTTGATGCTC AACCTTGTGA TCCGCAATAG CATCGGAAAT ATCAACACAA TGGCTCAAGC 8520 TTTTAGGTGC ATTAACTCCA AGAAAAGTTT CGCTCAGTGC AGAGAAGTCA AACGCAAAAG 8580 ATTTTAGCGA TAATGCCAGC CCAAGTCCTT TCGCTTTAAT GTAAGACTCC TTGAGCGCCC 8640 ACAAATCAAA AAAGCGGTCT CGCTGCAAGG CCTCTGGTAA CGCTAACAAG GCTCGCTTTT 8700 CTGATTCAGA GAAATAATGA CTAAGAATAG AGTGGATATT GGTGCTGTTA CGGCAACGCT 8760 CAATGTCGAC GCCAAACTCA ATACTAGCAG AGTCAGTTTC CTCCTTGCTT GCCTGACTGG 8820 CGCCTTTATT ATCAGCAGTG CAAATGCCTA CTAATAGCCA ATCTCCACTA TGACTCACAT 8880 TAAAGTGGAC CCCGGTTTGA GCAAATTGCG CATCACTCAA TCTAGGCTTA CCTTTGTCGC 8940 CATATTCAAA GCGCCATTCA TTGGGGCGTA TTTCACTATG TTGTGACAAT AAAGCGCGCA 9000 AATAGCCTCT TACCATTAAA CCTTGAGTTT TAGCTTCTTG TTTAATGTAG CGATTAACCT 9060 TAATTAACTC ATCTTCAGGC AGCCATGACT TAACCAACTC TGTAGTCTGG TTATCGCACT 9120 CTTGTATTGT TAACGGACAG AAGTATAAGG AAATCAATCG AGAAGTTAGC AATTTTTCAG 9180 GACACTCTTT AAAGCAACAA ACATAACCCC TATTTTTACC AATTTAAGAT CAAAACTAAA 9240 GCCAAAACTA ATTGAGAATA GTGTCAAACT AGCTTTAAAG GAAAAAAATA TAAAAAGAAC 9300 ATTATACTTG TATAAATTAT TTTACACACC AAAGCCATGA TCTTCACAAA ATTAGCTCCC 9360 TCTCCCTAAA ACAAGATTGA ATAAAAAAAT AAACCTTAAC TTTCATATAG ATAAAACAAA 9420 CCAATGGGAT AAAGTATATT GAATTCATTT TTAAGGAAAA ATTCAAATTG AATTCAAGCT 9480 CTTCAGTAAA AGCATATTTT GCCGTTAGTG TGAAAAAAAA CAAATTTAAA AACCAACATA 9540 GAACAAATAA GCAGACAATA AAACCAAGGC GCAACACAAA CAACGCGCTT ACAATTTTCA 9600 CAAAAAAGCA ACAAGAGTAA CGTTTAGTAT TTGGATATGG TTATTGTAAT TGAGAATTTT 9660 ATAACAATTA TATTAAGGGA ATGAGTATGT TTTTAAATTC AAAACTTTCG CGCTCAGTCA 9720 AACTTGCCAT ATCCGCAGGC TTAACAGCCT CGCTAGCTAT GCCTGTTTTT GCAGAAGAAA 9780 CTGCTGCTGA AGAACAAATA GAAAGAGTCG CAGTGACCGG ATCGCGAATC GCTAAAGCAG 9840 AGCTAACTCA ACCAGCTCCA GTCGTCAGCC TTTCAGCCGA AGAACTGACA AAATTTGGTA 9900 ATCAAGATTT AGGTAGCGTA CTAGCAGAAT TACCTGCTAT TGGTGCAACC AACACTATTA 9960 TTGGTAATAA CAATAGCAAC TCAAGCGCAG GTGTTAGCTC AGCAGACTTG CGTCGTCTAG 10020 GTGCTAACAG AACCTTAGTA TTAGTCAACG GTAAGCGCTA CGTTGCCGGC CAACCGGGCT 10080 CAGCTGAGGT AGATTTGTCA ACTATACCAA CTAGCATGAT CTCGCGAGTT GAGATTGTAA 10140 CCGGCGGTGC TTCAGCAATT TATGGTTCGG ACGCTGTATC AGGTGTTATC AACGTTATCC 10200 TTAAAGAAGA CTTTGAAGGC TTTGAGTTTA ACGCACGTAC TAGCGGTTCT ACTGAAAGTG 10260 TAGGCACTCA AGAGCACTCT TTTGACATTT TGGGTGGTGC AAACGTTGCA GATGGACGTG 10320 GTAATGTAAC CTTCTACGCA GGTTATGAAC GTACAAAAGA AGTCATGGCT ACCGACATTC 10380 GCCAATTCGA TGCTTGGGGA ACAATTAAAA ACGAAGCCGA TGGTGGTGAA GATGATGGTA 10440 TTCCAGACAG ACTACGTGTA CCACGAGTTT ATTCTGAAAT GATTAATGCT ACCGGTGTTA 10500 TCAATGCATT TGGTGGTGGA ATTGGTCGCT CAACCTTTGA CAGTAACGGC AATCCTATTG 10560 CACAACAAGA ACGTGATGGG ACTAACAGCT TTGCATTTGG TTCATTCCCT AATGGCTGTG 10620 ACACATGTTT CAACACTGAA GCATACGAAA ACTATATTCC AGGGGTAGAA AGAATAAACG 10680 TTGGCTCATC ATTCAACTTT GATTTTACCG ATAACATTCA ATTTTACACT GACTTCAGAT 10740 ATGTAAAGTC AGATATTCAG CAACAATTTC AGCCTTCATT CCGTTTTGGT AACATTAATA 10800 TCAATGTTGA AGATAACGCC TTTTTGAATG ACGACTTGCG TCAGCAAATG CTCGATGCGG 10860 GTCAAACCAA TGCTAGTTTT GCCAAGTTTT TTGATGAATT AGGAAATCGC TCAGCAGAAA 10920 ATAAACGCGA ACTTTTCCGT TACGTAGGTG GCTTTAAAGG TGGCTTTGAT ATTAGCGAAA 10980 CCATATTTGA TTACGACCTT TACTATGTTT ATGGCGAGAC TAATAACCGT CGTAAAACCC 11040 TTAATGACCT AATTCCTGAT AACTTTGTCG CAGCTGTCGA CTCTGTTATT GATCCTGATA 11100 CTGGCTTAGC AGCGTGTCGC TCACAAGTAG CAAGCGCTCA AGGCGATGAC TATACAGATC 11160 CCGCGTCTGT AAATGGTAGC GACTGTGTTG CTTATAACCC ATTTGGCATG GGTCAAGCTT 11220 CAGCAGAAGC CCGCGACTGG GTTTCTGCTG ATGTGACTCG TGAAGACAAA ATAACTCAAC 11280 AAGTGATTGG TGGTACTCTC GGTACCGATT CTGAAGAACT ATTTGAGCTT CAAGGTGGTG 11340 CAATCGCTAT GGTTGTTGGT TTTGAATACC GTGAAGAAAC GTCTGGTTCA ACAACCGATG 11400 AATTTACTAA AGCAGGTTTC TTGACAAGCG CTGCAACGCC AGATTCTTAT GGCGAATACG 11460 ACGTGACTGA GTATTTTGTT GAGGTGAACA TCCCAGTACT AAAAGAATTA CCTTTTGCAC 11520 ATGAGTTGAG CTTTGACGGT GCATACCGTA ATGCTGATTA CTCACATGCC GGTAAGACTG 11580 AAGCATGGAA AGCTGGTATG TTCTACTCAC CATTAGAGCA ACTTGCATTA CGTGGTACGG 11640 TAGGTGAAGC AGTACGAGCA CCAAACATTG CAGAAGCCTT TAGTCCACGC TCTCCTGGTT 11700 TTGGCCGCGT TTCAGATCCA TGTGATGCAG ATAACATTAA TGACGATCCG GATCGCGTGT 11760 CAAACTGTGC AGCATTGGGG ATCCCTCCAG GATTCCAAGC TAATGATAAC GTCAGTGTAG 11820 ATACCTTATC TGGTGGTAAC CCAGATCTAA AACCTGAAAC ATCAACATCC TTTACAGGTG 11880 GTCTTGTTTG GACACCAACG TTTGCTGACA ATCTATCATT CACTGTCGAT TATTATGATA 11940 TTCAAATTGA GGATGCTATT TTGTCAGTAG CCACCCAGAC TGTGGCTGAT AACTGTGTTG 12000 ACTCAACTGG CGGACCTGAC ACCGACTTCT GTAGTCAAGT TGATCGTAAT CCAACGACCT 12060 ATGATATTGA ACTTGTTCGC TCTGGTTATC TAAATGCCGC GGCATTGAAT ACCAAAGGTA 12120 TTGAATTTCA AGCTGCATAC TCATTAGATC TAGAGTCTTT CAACGCGCCT GGTGAACTAC 12180 GCTTCAACCT ATTGGGGAAC CAATTACTTG AACTAGAACG TCTTGAATTC CAAAATCGTC 12240 CTGATGAGAT TAATGATGAA AAAGGCGAAG TAGGTGATCC AGAGCTGCAG TTCCGCCTAG 12300 GCATCGATTA CCGTCTAGAT GATCTAAGTG TTAGCTGGAA CACGCGTTAT ATTGATAGCG 12360 TAGTAACTTA TGATGTCTCT GAAAATGGTG GCTCTCCTGA AGATTTATAT CCAGGCCACA 12420 TAGGCTCAAT GACAACTCAT GACTTGAGCG CTACATACTA CATCAATGAG AACTTCATGA 12480 TTAACGGTGG TGTACGTAAC CTATTTGACG CACTTCCACC TGGATACACT AACGATGCGC 12540 TATATGATCT AGTTGGTCGC CGTGCATTCC TAGGTATTAA GGTAATGATG TAATTAATTA 12600 TTACGCCTCT AACTAATAAA AATGCAATCT CTTCGTAGAG ATTGCATTTT TTTATGAAAT 12660 CCAATCTTAA ACTGGTTCTC CGAGCATCTT ACGCCTTAAA AACCCCGCCC CTCAATGTAA 12720 CGCCAAAGTT AATTGCTTAC ACGCACTTAC ACAAACGAAC AATTTCATTA ACACGAGACA 12780 CAGCTCACGC TTTTTATTTT ACCCTTGATT TTACTACATA AAATTGCGTT TTAGCGCACA 12840 AGTGTTCTCC CAAGCTGGTC GTATCTGTAA TTATTCAGTC CCAGGTGATT GTATTGACCC 12900 ATAAGCTCAG GTAGTCTGCT CTGCCATTAG CTAAACAATA TTGACAAAAT GGCGATAAAA 12960 TGTGGCTTAG CGCTAAGTTC ACCGTAAGTT TTATCGGCAT TAAGTCCCAA CAGATTATTA 13020 ACGGAAACCC GCTAAACTGA TGGCAAAAAT AAATAGTGAA CACTTGGATG AAGCTACTAT 13080 TACTTCGAAT AAGTGTACGC AAACAGAGAC TGAGGCTCGG CATAGAAATG CCACTACAAC 13140 ACCTGAGATG CGCCGATTCA TACAAGAGTC GGATCTCAGT GTTAGCCAAC TGTCTAAAAT 13200 ATTAAATATC AGTGAAGCTA CCGTACGTAA GTGGCGCAAG CGTGACTCTG TCGAAAACTG 13260 TCCTAATACC CCGCACCATC TCAATACCAC GCTAACCCCT TTGCAAGAAT ATGTGGTTGT 13320 GGGCCTGCGT TATCAATTGA AAATGCCATT AGACAGATTG CTCAAAGCAA CCCAAGAGTT 13380 TATCAATCCA 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【0041】配列番号: 2 配列の長さ:1983 配列の型: 核酸 鎖の数: 二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源: シーワネラ・ピュートリファシエンス S
CRC−2874 (FERM BP−1625) 配列 ATG AAA CAG ACT CTA ATG GCT ATC TCA ATC ATG TCG CTT TTT TCA TTC 48 Met Lys Gln Thr Leu Met Ala Ile Ser Ile Met Ser Leu Phe Ser Phe 1 5 10 15 AAT GCG CTA GCA GCG CAA CAT GAA CAT GAC CAC ATC ACT GTT GAT TAC 96 Asn Ala Leu Ala Ala Gln His Glu His Asp His Ile Thr Val Asp Tyr 20 25 30 GAA GGG AAA GCC GCA ACA GAA CAC ACC ATA GCT CAC AAC CAA GCT GTA 144 Glu Gly Lys Ala Ala Thr Glu His Thr Ile Ala His Asn Gln Ala Val 35 40 45 GCT AAA ACA CTT AAC TTT GCC GAC ACG CGT GCA TTT GAG CAA TCG TCT 192 Ala Lys Thr Leu Asn Phe Ala Asp Thr Arg Ala Phe Glu Gln Ser Ser 50 55 60 AAA AAT CTA GTC GCC AAG TTT GAT AAA GCA ACT GCC GAT ATA TTA CGT 240 Lys Asn Leu Val Ala Lys Phe Asp Lys Ala Thr Ala Asp Ile Leu Arg 65 70 75 80 GCC GAA TTT GCT TTT ATT AGC GAT GAA ATC CCT GAC TCG GTT AAC CCG 288 Ala Glu Phe Ala Phe Ile Ser Asp Glu Ile Pro Asp Ser Val Asn Pro 85 90 95 TCT CTC TAC CGT CAG GCT CAG CTT AAT ATG GTG CCT AAT GGT CTG TAT 336 Ser Leu Tyr Arg Gln Ala Gln Leu Asn Met Val Pro Asn Gly Leu Tyr 100 105 110 AAA GTG AGC GAT GGC ATT TAC CAG GTC CGC GGT ACC GAC TTA TCT AAC 384 Lys Val Ser Asp Gly Ile Tyr Gln Val Arg Gly Thr Asp Leu Ser Asn 115 120 125 CTT ACA CTT ATC CGC AGT GAT AAC GGT TGG ATA GCA TAC GAT GTT TTG 432 Leu Thr Leu Ile Arg Ser Asp Asn Gly Trp Ile Ala Tyr Asp Val Leu 130 135 140 TTA ACC AAA GAA GCA GCA AAA GCC TCA CTA CAA TTT GCG TTA AAG AAT 480 Leu Thr Lys Glu Ala Ala Lys Ala Ser Leu Gln Phe Ala Leu Lys Asn 145 150 155 160 CTA CCT AAA GAT GGC GAT TTA CCC GTT GTT GCG ATG ATT TAC TCC CAT 528 Leu Pro Lys Asp Gly Asp Leu Pro Val Val Ala Met Ile Tyr Ser His 165 170 175 AGC CAT GCG GAC CAC TTT GGC GGA GCT CGC GGT GTT CAA GAG ATG TTC 576 Ser His Ala Asp His Phe Gly Gly Ala Arg Gly Val Gln Glu Met Phe 180 185 190 CCT GAT GTC AAA GTC TAC GGC TCA GAT AAC ATC ACT AAA GAA ATT GTC 624 Pro Asp Val Lys Val Tyr Gly Ser Asp Asn Ile Thr Lys Glu Ile Val 195 200 205 GAT GAG AAC GTA CTT GCC GGT AAC GCC ATG AGC CGC CGC GCA GCT TAT 672 Asp Glu Asn Val Leu Ala Gly Asn Ala Met Ser 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【0042】配列番号: 3 配列の長さ:2910 配列の型: 核酸 鎖の数: 二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源: シーワネラ・ピュートリファシエンス S
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Ile Phe Asp Tyr Asp Leu Tyr Tyr Val Tyr Gly Glu Thr Asn 435 440 445 AAC CGT CGT AAA ACC CTT AAT GAC CTA ATT CCT GAT AAC TTT GTC GCA 1392 Asn Arg Arg Lys Thr Leu Asn Asp Leu Ile Pro Asp Asn Phe Val Ala 450 455 460 GCT GTC GAC TCT GTT ATT GAT CCT GAT ACT GGC TTA GCA GCG TGT CGC 1440 Ala Val Asp Ser Val Ile Asp Pro Asp Thr Gly Leu Ala Ala Cys Arg 465 470 475 480 TCA CAA GTA GCA AGC GCT CAA GGC GAT GAC TAT ACA GAT CCC GCG TCT 1488 Ser Gln Val Ala Ser Ala Gln Gly Asp Asp Tyr Thr Asp Pro Ala Ser 485 490 495 GTA AAT GGT AGC GAC TGT GTT GCT TAT AAC CCA TTT GGC ATG GGT CAA 1536 Val Asn Gly Ser Asp Cys Val Ala Tyr Asn Pro Phe Gly Met Gly Gln 500 505 510 GCT TCA GCA GAA GCC CGC GAC TGG GTT TCT GCT GAT GTG ACT CGT GAA 1584 Ala Ser Ala Glu Ala Arg Asp Trp Val Ser Ala Asp Val Thr Arg Glu 515 520 525 GAC AAA ATA ACT CAA CAA GTG ATT GGT GGT ACT CTC GGT ACC GAT TCT 1632 Asp Lys Ile Thr Gln Gln Val Ile Gly Gly Thr Leu Gly Thr Asp Ser 530 535 540 GAA GAA CTA TTT GAG CTT CAA GGT GGT GCA ATC GCT ATG GTT 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【0043】配列番号: 4 配列の長さ:4902 配列の型: 核酸 鎖の数: 二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源: シーワネラ・ピュートリファシエンス S
CRC−2874 (FERM BP−1625) 配列 ATG AGC CAG ACC TCT AAA CCT ACA AAC TCA GCA ACT GAG CAA GCA CAA 48 Met Ser Gln Thr Ser Lys Pro Thr Asn Ser Ala Thr Glu Gln Ala Gln 1 5 10 15 GAC TCA CAA GCT GAC TCT CGT TTA AAT AAA CGA CTA AAA GAT ATG CCA 96 Asp Ser Gln Ala Asp Ser Arg Leu Asn Lys Arg Leu Lys Asp Met Pro 20 25 30 ATT GCT ATT GTT GGC ATG GCG AGT ATT TTT GCA AAC TCT CGC TAT TTG 144 Ile Ala Ile Val Gly Met Ala Ser Ile Phe Ala Asn Ser Arg Tyr Leu 35 40 45 AAT AAG TTT TGG GAC TTA ATC AGC GAA AAA ATT GAT GCG ATT ACT GAA 192 Asn Lys Phe Trp Asp Leu Ile Ser Glu Lys Ile Asp Ala Ile Thr Glu 50 55 60 TTA CCA TCA ACT CAC TGG CAG CCT GAA GAA TAT TAC GAC GCA GAT AAA 240 Leu Pro Ser Thr His Trp Gln Pro Glu Glu Tyr Tyr Asp Ala Asp Lys 65 70 75 80 ACC GCA GCA GAC AAA AGC TAC TGT AAA CGT GGT GGC TTT TTG CCA GAT 288 Thr Ala Ala Asp Lys Ser Tyr Cys Lys Arg Gly Gly Phe Leu Pro Asp 85 90 95 GTA GAC TTC AAC CCA ATG GAG TTT GGC CTG CCG CCA AAC ATT TTG GAA 336 Val Asp Phe Asn Pro Met Glu Phe Gly Leu Pro Pro Asn Ile 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GAA GCC ATT TTG ACC AAT ACC GCC 2016 Asn Lys Asp Glu Leu Lys Ala Gln Glu Ala Ile Leu Thr Asn Thr Ala 660 665 670 AAT GCC CAA AGC GCA ATT GGT GCG ATT TCA ATG GGT CAA TAC GAT TTG 2064 Asn Ala Gln Ser Ala Ile Gly Ala Ile Ser Met Gly Gln Tyr Asp Leu 675 680 685 TTT ACT GCG GCT GGC TTT AAT GCC GAC ATG GTT GCA GGC CAT AGC TTT 2112 Phe Thr Ala Ala Gly Phe Asn Ala Asp Met Val Ala Gly His Ser Phe 690 695 700 GGT GAG CTA AGT GCA CTG TGT GCT GCA GGT GTT ATT TCA GCT GAT GAC 2160 Gly Glu Leu Ser Ala Leu Cys Ala Ala Gly Val Ile Ser Ala Asp Asp 705 710 715 720 TAC TAC AAG CTG GCT TTT GCT CGT GGT GAG GCT ATG GCA ACA AAA GCA 2208 Tyr Tyr Lys Leu Ala Phe Ala Arg Gly Glu Ala Met Ala Thr Lys Ala 725 730 735 CCG GCT AAA GAC GGC GTT GAA GCA GAT GCA GGA GCA ATG TTT GCA ATC 2256 Pro Ala Lys Asp Gly Val Glu Ala Asp Ala Gly Ala Met Phe Ala Ile 740 745 750 ATA ACC AAG AGT GCT GCA GAC CTT GAA ACC GTT GAA GCC ACC ATC GCT 2304 Ile Thr Lys Ser Ala Ala Asp Leu Glu Thr Val Glu Ala Thr Ile Ala 755 760 765 AAA TTT GAT GGG GTG AAA GTC GCT AAC TAT AAC GCG CCA ACG CAA TCA 2352 Lys Phe Asp Gly Val Lys Val Ala Asn Tyr Asn Ala Pro Thr Gln Ser 770 775 780 GTA ATT GCA GGC CCA ACA GCA ACT ACC GCT GAT GCG GCT AAA GCG CTA 2400 Val Ile Ala Gly Pro Thr Ala Thr Thr Ala Asp Ala Ala Lys Ala Leu 785 790 795 800 ACT GAG CTT GGT TAC AAA GCG ATT AAC CTG CCA GTA TCA GGT GCA TTC 2448 Thr Glu Leu Gly Tyr Lys Ala Ile Asn Leu Pro Val Ser Gly Ala Phe 805 810 815 CAC ACT GAA CTT GTT GGT CAC GCT CAA GCG CCA TTT GCT AAA GCG ATT 2496 His Thr Glu Leu Val Gly His Ala Gln Ala Pro Phe Ala Lys Ala Ile 820 825 830 GAC GCA GCC AAA TTT ACT AAA ACA AGC CGA GCA CTT TAC TCA AAT GCA 2544 Asp Ala Ala Lys Phe Thr Lys Thr Ser Arg Ala Leu Tyr Ser Asn Ala 835 840 845 ACT GGC GGA CTT TAT GAA AGC ACT GCT GCA AAG ATT AAA GCC TCG TTT 2592 Thr Gly Gly Leu Tyr Glu Ser Thr Ala Ala Lys Ile Lys Ala Ser Phe 850 855 860 AAG AAA CAT ATG CTT CAA TCA GTG CGC TTT ACT AGC CAG CTA GAA GCC 2640 Lys Lys His Met Leu Gln Ser Val Arg Phe Thr Ser Gln Leu Glu Ala 865 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Ser Pro Glu Asp Leu Ala Glu Cys Arg 1410 1415 1420 ACT CTA GGC GAA ATC GTT GAC TAT ATG AAC TCT AAA CTC GCT GAC GGC 4320 Thr Leu Gly Glu Ile Val Asp Tyr Met Asn Ser Lys Leu Ala Asp Gly 1425 1430 1435 1440 TCT AAG CTG CCG GCT GAA GGC TCT ATG AAT TCT CAG CTG TCT ACA AGT 4368 Ser Lys Leu Pro Ala Glu Gly Ser Met Asn Ser Gln Leu Ser Thr Ser 1445 1450 1455 GCC GCA GCT GCG ACT CCT GCA GCG AAT GGT CTC TCT GCG GAG AAA GTT 4416 Ala Ala Ala Ala Thr Pro Ala Ala Asn Gly Leu Ser Ala Glu Lys Val 1460 1465 1470 CAA GCG ACT ATG ATG TCT GTG GTT GCC GAA AAG ACT GGC TAC CCA ACT 4464 Gln Ala Thr Met Met Ser Val Val Ala Glu Lys Thr Gly Tyr Pro Thr 1475 1480 1485 GAA ATG CTA GAA CTT GAA ATG GAT ATG GAA GCT GAC CTT GGC ATC GAT 4512 Glu Met Leu Glu Leu Glu Met Asp Met Glu Ala Asp Leu Gly Ile Asp 1490 1495 1500 TCA ATC AAG CGC GTT GAA ATT CTT GGC ACA GTA CAA GAT GAG CTA CCG 4560 Ser Ile Lys Arg Val Glu Ile Leu Gly Thr Val Gln Asp Glu Leu Pro 1505 1510 1515 1520 GGT TTA CCT GAG CTA AAT CCA GAA GAT TTG GCA GAG TGT 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4902 Pro Asp
【0044】配列番号: 5 配列の長さ:3174 配列の型: 核酸 鎖の数: 二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源: シーワネラ・ピュートリファシエンス S
CRC−2874 (FERM BP−1625) 配列 ATG ATG TCA GTA GTT GCA GAA AAG ACC GGC TAC CCA ACT GAA ATG CTA 48 Met Met Ser Val Val Ala Glu Lys Thr Gly Tyr Pro Thr Glu Met Leu 1 5 10 15 GAA CTT GGC ATG GAT ATG GAA GCC GAT TTA GGT ATC GAC TCA ATT AAA 96 Glu Leu Gly Met Asp Met Glu Ala Asp Leu Gly Ile Asp Ser Ile Lys 20 25 30 CGC GTT GAG ATT CTT GGC ACA GTA CAA GAT GAG CTA CCG GGT CTA CCA 144 Arg Val Glu Ile Leu Gly Thr Val Gln Asp Glu Leu Pro Gly Leu Pro 35 40 45 GAG CTT AAT CCT GAA GAT TTA GCT GAG TGC CGT ACG CTG GGC GAA ATC 192 Glu Leu Asn Pro Glu Asp Leu Ala Glu Cys Arg Thr Leu Gly Glu Ile 50 55 60 GTT GAC TAT ATG AAC TCT AAG CTG GCT GAC GGC TCT AAG CTT CCA GCT 240 Val Asp Tyr Met Asn Ser Lys Leu Ala Asp Gly Ser Lys Leu Pro Ala 65 70 75 80 GAA GGC TCT GCT AAT ACA AGT GCC ACT GCT GCG ACT CCT GCA GTG AAT 288 Glu Gly Ser Ala Asn Thr Ser Ala Thr Ala Ala Thr Pro Ala Val Asn 85 90 95 GGT CTT TCT GCT GAC AAG GTA CAG GCG ACT ATG ATG TCT GTA GTT GCT 336 Gly Leu Ser Ala Asp Lys Val Gln Ala Thr Met Met Ser Val 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Glu Ser Ser Ala Glu 980 985 990 CCA CAA ATA ACA ATT GCA GCA CAA CAG ACT GCA AAC ATT GGC GTC ACC 3024 Pro Gln Ile Thr Ile Ala Ala Gln Gln Thr Ala Asn Ile Gly Val Thr 995 1000 1005 GCT CAG GCA ACC AAA CGT GAA TTA GGT ACC CCA CCA ATG ACA ACA AAT 3072 Ala Gln Ala Thr Lys Arg Glu Leu Gly Thr Pro Pro Met Thr Thr Asn 1010 1015 1020 ACC ATT GCT AAT ACA GCA AAT AAT TTA GAC AAG ACT CTT GAG ACT GTT 3120 Thr Ile Ala Asn Thr Ala Asn Asn Leu Asp Lys Thr Leu Glu Thr Val 1025 1030 1035 1040 GCT GGC AAT ACT GTT GCT AGC AAG GTT GGC TCT GGC GAC ATA GTC AAT 3168 Ala Gly Asn Thr Val Ala Ser Lys Val Gly Ser Gly Asp Ile Val Asn 1045 1050 1055 TTT CAA CAG AAC CAA CAA TTG GCT CAA CAA GCT CAC CTC GCC TTT CTT 3216 Phe Gln Gln Asn Gln Gln Leu Ala Gln Gln Ala His Leu Ala Phe Leu 1060 1065 1070 GAA AGC CGC AGT GCG GGT ATG AAG GTG GCT GAT GCT TTA TTG AAG CAA 3264 Glu Ser Arg Ser Ala Gly Met Lys Val Ala Asp Ala Leu Leu Lys Gln 1075 1080 1085 CAG CTA GCT CAA GTA ACA GGC CAA ACT ATC GAT AAT CAG GCC CTC GAT 3312 Gln Leu Ala Gln Val Thr Gly Gln Thr Ile Asp Asn Gln Ala Leu Asp 1090 1095 1100 ACT CAA GCC GTC GAT ACT CAA ACA AGC GAG AAT GTA GCG ATT GCC GCA 3360 Thr Gln Ala Val Asp Thr Gln Thr Ser Glu Asn Val Ala Ile Ala Ala 1105 1110 1115 1120 GAA TCA CCA GTT CAA GTT ACA ACA CCT GTT CAA GTT ACA ACA CCT GTT 3408 Glu Ser Pro Val Gln Val Thr Thr Pro Val Gln Val Thr Thr Pro Val 1125 1130 1135 CAA ATC AGT GTT GTG GAG TTA AAA CCA GAT CAC GCT AAT GTG CCA CCA 3456 Gln Ile Ser Val Val Glu Leu Lys Pro Asp His Ala Asn Val Pro Pro 1140 1145 1150 TAC ACG CCG CCA GTG CCT GCA TTA AAG CCG TGT ATC TGG AAC TAT GCC 3504 Tyr Thr Pro Pro Val Pro Ala Leu Lys Pro Cys Ile Trp Asn Tyr Ala 1155 1160 1165 GAT TTA GTT GAG TAC GCA GAA GGC GAT ATC GCC AAG GTA TTT GGC AGT 3552 Asp Leu Val Glu Tyr Ala Glu Gly Asp Ile Ala Lys Val Phe Gly Ser 1170 1175 1180 GAT TAT GCC ATT ATC GAC AGC TAC TCG CGC CGC GTA CGT CTA CCG ACC 3600 Asp Tyr Ala Ile Ile Asp Ser Tyr Ser Arg Arg Val Arg Leu Pro Thr 1185 1190 1195 1200 ACT GAC TAC CTG TTG GTA TCG CGC GTG ACC AAA CTT GAT GCG ACC ATC 3648 Thr Asp Tyr Leu Leu Val Ser Arg Val Thr Lys Leu Asp Ala Thr Ile 1205 1210 1215 AAT CAA TTT AAG CCA TGC TCA ATG ACC ACT GAG TAC GAC ATC CCT GTT 3696 Asn Gln Phe Lys Pro Cys Ser Met Thr Thr Glu Tyr Asp Ile Pro Val 1220 1225 1230 GAT GCG CCG TAC TTA GTA GAC GGA CAA ATC CCT TGG GCG GTA GCA GTA 3744 Asp Ala Pro Tyr Leu Val Asp Gly Gln Ile Pro Trp Ala Val Ala Val 1235 1240 1245 GAA TCA GGC CAA TGT GAC TTG ATG CTT ATT AGC TAT CTC GGT ATC GAC 3792 Glu Ser Gly Gln Cys Asp Leu Met Leu Ile Ser Tyr Leu Gly Ile Asp 1250 1255 1260 TTT GAG AAC AAA GGC GAG CGG GTT TAT CGA CTA CTC GAT TGT ACC CTC 3840 Phe Glu Asn Lys Gly Glu Arg Val Tyr Arg Leu Leu Asp Cys Thr Leu 1265 1270 1275 1280 ACC TTC CTA GGC GAC TTG CCA CGT GGC GGA GAT ACC CTA CGT TAC GAC 3888 Thr Phe Leu Gly Asp Leu Pro Arg Gly Gly Asp Thr Leu Arg Tyr Asp 1285 1290 1295 ATT AAG ATC AAT AAC TAT GCT CGC AAC GGC GAC ACC CTG CTG TTC TTC 3936 Ile Lys Ile Asn Asn Tyr Ala Arg Asn Gly Asp Thr Leu Leu Phe Phe 1300 1305 1310 TTC TCG TAT GAG TGT TTT GTT GGC GAC AAG ATG ATC CTC AAG ATG GAT 3984 Phe Ser Tyr Glu Cys Phe Val Gly Asp Lys Met Ile Leu Lys Met Asp 1315 1320 1325 GGC GGC TGC GCT GGC TTC TTC ACT GAT GAA GAG CTT GCC GAC GGT AAA 4032 Gly Gly Cys Ala Gly Phe Phe Thr Asp Glu Glu Leu Ala Asp Gly Lys 1330 1335 1340 GGC GTG ATT CGC ACA GAA GAA GAG ATT AAA GCT CGC AGC CTA GTG CAA 4080 Gly Val Ile Arg Thr Glu Glu Glu Ile Lys Ala Arg Ser Leu Val Gln 1345 1350 1355 1360 AAG CAA CGC TTT AAT CCG TTA CTA GAT TGT CCT AAA ACC CAA TTT AGT 4128 Lys Gln Arg Phe Asn Pro Leu Leu Asp Cys Pro Lys Thr Gln Phe Ser 1365 1370 1375 TAT GGT GAT ATT CAT AAG CTA TTA ACT GCT GAT ATT GAG GGT TGT TTT 4176 Tyr Gly Asp Ile His Lys Leu Leu Thr Ala Asp Ile Glu Gly Cys Phe 1380 1385 1390 GGC CCA AGC CAC AGT GGC GTC CAC CAG CCG TCA CTT TGT TTC GCA TCT 4224 Gly Pro Ser His Ser Gly Val His Gln Pro Ser Leu Cys Phe Ala Ser 1395 1400 1405 GAA AAA TTC TTG ATG ATT GAA CAA GTC AGC AAG GTT GAT CGC ACT GGC 4272 Glu Lys Phe Leu Met Ile Glu Gln Val Ser Lys Val Asp Arg Thr Gly 1410 1415 1420 GGT ACT TGG GGA CTT GGC TTA ATT GAG GGT CAT AAG CAG CTT GAA GCA 4320 Gly Thr Trp Gly Leu Gly Leu Ile Glu Gly His Lys Gln Leu Glu Ala 1425 1430 1435 1440 GAC CAC TGG TAC TTC CCA TGT CAT TTC AAG GGC GAC CAA GTG ATG GCT 4368 Asp His Trp Tyr Phe Pro Cys His Phe Lys Gly Asp Gln Val Met Ala 1445 1450 1455 GGC TCG CTA ATG GCT GAA GGT TGT GGC CAG TTA TTG CAG TTC TAT ATG 4416 Gly Ser Leu Met Ala Glu Gly Cys Gly Gln Leu Leu Gln Phe Tyr Met 1460 1465 1470 CTG CAC CTT GGT ATG CAT ACC CAA ACT AAA AAT GGT CGT TTC CAA CCT 4464 Leu His Leu Gly Met His Thr Gln Thr Lys Asn Gly Arg Phe Gln Pro 1475 1480 1485 CTT GAA AAC GCC TCA CAG CAA GTA CGC TGT CGC GGT CAA GTG CTG CCA 4512 Leu Glu Asn Ala Ser Gln Gln Val Arg Cys Arg Gly Gln Val Leu Pro 1490 1495 1500 CAA TCA GGC GTG CTA ACT TAC CGT ATG GAA GTG ACT GAA ATC GGT TTC 4560 Gln Ser Gly Val Leu Thr Tyr Arg Met Glu Val Thr Glu Ile Gly Phe 1505 1510 1515 1520 AGT CCA CGC CCA TAT GCT AAA GCT AAC ATC GAT ATC TTG CTT AAT GGC 4608 Ser Pro Arg Pro Tyr Ala Lys Ala Asn Ile Asp Ile Leu Leu Asn Gly 1525 1530 1535 AAA GCG GTA GTG GAT TTC CAA AAC CTA GGG GTG ATG ATA AAA GAG GAA 4656 Lys Ala Val Val Asp Phe Gln Asn Leu Gly Val Met Ile Lys Glu Glu 1540 1545 1550 GAT GAG TGT ACT CGT TAT CCA CTT TTG ACT GAA TCA ACA ACG GCT AGC 4704 Asp Glu Cys Thr Arg Tyr Pro Leu Leu Thr Glu Ser Thr Thr Ala Ser 1555 1560 1565 ACT GCA CAA GTA AAC GCT CAA ACA AGT GCG AAA AAG GTA TAC AAG CCA 4752 Thr Ala Gln Val Asn Ala Gln Thr Ser Ala Lys Lys Val Tyr Lys Pro 1570 1575 1580 GCA TCA GTC AAT GCG CCA TTA ATG GCA CAA ATT CCT GAT CTG ACT AAA 4800 Ala Ser Val Asn Ala Pro Leu Met Ala Gln Ile Pro Asp Leu Thr Lys 1585 1590 1595 1600 GAG CCA AAC AAG GGC GTT ATT CCG ATT TCC CAT GTT GAA GCA CCA ATT 4848 Glu Pro Asn Lys Gly Val Ile Pro Ile Ser His Val Glu Ala Pro Ile 1605 1610 1615 ACG CCA GAC TAC CCG AAC CGT GTA CCT GAT ACA GTG CCA TTC ACG CCG 4896 Thr Pro Asp Tyr Pro Asn Arg Val Pro Asp Thr Val Pro Phe Thr Pro 1620 1625 1630 TAT CAC ATG TTT GAG TTT GCT ACA GGC AAT ATC GAA AAC TGT TTC GGG 4944 Tyr His Met Phe Glu Phe Ala Thr Gly Asn Ile Glu Asn Cys Phe Gly 1635 1640 1645 CCA GAG TTC TCA ATC TAT CGC GGC ATG ATC CCA CCA CGT ACA CCA TGC 4992 Pro Glu Phe Ser Ile Tyr Arg Gly Met Ile Pro Pro Arg Thr Pro Cys 1650 1655 1660 GGT GAC TTA CAA GTG ACC ACA CGT GTG ATT GAA GTT AAC GGT AAG CGT 5040 Gly Asp Leu Gln Val Thr Thr Arg Val Ile Glu Val Asn Gly Lys Arg 1665 1670 1675 1680 GGC GAC TTT AAA AAG CCA TCA TCG TGT ATC GCT GAA TAT GAA GTG CCT 5088 Gly Asp Phe Lys Lys Pro Ser Ser Cys Ile Ala Glu Tyr Glu Val Pro 1685 1690 1695 GCA GAT GCG TGG TAT TTC GAT AAA AAC AGC CAC GGC GCA GTG ATG CCA 5136 Ala Asp Ala Trp Tyr Phe Asp Lys Asn Ser His Gly Ala Val Met Pro 1700 1705 1710 TAT TCA ATT TTA ATG GAG ATC TCA CTG CAA CCT AAC GGC TTT ATC TCA 5184 Tyr Ser Ile Leu Met Glu Ile Ser Leu Gln Pro Asn Gly Phe Ile Ser 1715 1720 1725 GGT TAC ATG GGC ACA ACC CTA GGC TTC CCT GGC CTT GAG CTG TTC TTC 5232 Gly Tyr Met Gly Thr Thr Leu Gly Phe Pro Gly Leu Glu Leu Phe Phe 1730 1735 1740 CGT AAC TTA GAC GGT AGC GGT GAG TTA CTA CGT GAA GTA GAT TTA CGT 5280 Arg Asn Leu Asp Gly Ser Gly Glu Leu Leu Arg Glu Val Asp Leu Arg 1745 1750 1755 1760 GGT AAA ACC ATC CGT AAC GAC TCA CGT TTA TTA TCA ACA GTG ATG GCC 5328 Gly Lys Thr Ile Arg Asn Asp Ser Arg Leu Leu Ser Thr Val Met Ala 1765 1770 1775 GGC ACT AAC ATC ATC CAA AGC TTT AGC TTC GAG CTA AGC ACT GAC GGT 5376 Gly Thr Asn Ile Ile Gln Ser Phe Ser Phe Glu Leu Ser Thr Asp Gly 1780 1785 1790 GAG CCT TTC TAT CGC GGC ACT GCG GTA TTT GGC TAT TTT AAA GGT GAC 5424 Glu Pro Phe Tyr Arg Gly Thr Ala Val Phe Gly Tyr Phe Lys Gly Asp 1795 1800 1805 GCA CTT AAA GAT CAG CTA GGC CTA GAT AAC GGT AAA GTC ACT CAG CCA 5472 Ala Leu Lys Asp Gln Leu Gly Leu Asp Asn Gly Lys Val Thr Gln Pro 1810 1815 1820 TGG CAT GTA GCT AAC GGC GTT GCT GCA AGC ACT AAG GTG AAC CTG CTT 5520 Trp His Val Ala Asn Gly Val Ala Ala Ser Thr Lys Val Asn Leu Leu 1825 1830 1835 1840 GAT AAG AGC TGC CGT CAC TTT AAT GCG CCA GCT AAC CAG CCA CAC TAT 5568 Asp Lys Ser Cys Arg His Phe Asn Ala Pro Ala Asn Gln Pro His Tyr 1845 1850 1855 CGT CTA GCC GGT GGT CAG CTG AAC TTT ATC GAC AGT GTT GAA ATT GTT 5616 Arg Leu Ala Gly Gly Gln Leu Asn Phe Ile Asp Ser Val Glu Ile Val 1860 1865 1870 GAT AAT GGC GGC ACC GAA GTT 5637 Asp Asn Gly Gly Thr Glu Val 1875
【0047】配列番号: 8 配列の長さ:1629 配列の型: 核酸 鎖の数: 二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源: シーワネラ・ピュートリファシエンス S
CRC−2874 (FERM BP−1625) 配列 ATG AAT CCT ACA GCA ACT AAC GAA ATG CTT TCT CCG TGG CCA TGG GCT 48 Met Asn Pro Thr Ala Thr Asn Glu Met Leu Ser Pro Trp Pro Trp Ala 1 5 10 15 GTG ACA GAG TCA AAT ATC AGT TTT GAC GTG CAA GTG ATG GAA CAA CAA 96 Val Thr Glu Ser Asn Ile Ser Phe Asp Val Gln Val Met Glu Gln Gln 20 25 30 CTT AAA GAT TTT AGC CGG GCA TGT TAC GTG GTC AAT CAT GCC GAC CAC 144 Leu Lys Asp Phe Ser Arg Ala Cys Tyr Val Val Asn His Ala Asp His 35 40 45 GGC TTT GGT ATT GCG CAA ACT GCC GAT ATC GTG ACT GAA CAA GCG GCA 192 Gly Phe Gly Ile Ala Gln Thr Ala Asp Ile Val Thr Glu Gln Ala Ala 50 55 60 AAC AGC ACA GAT TTA CCT GTT AGT GCT TTT ACT CCT GCA TTA GGT ACC 240 Asn Ser Thr Asp Leu Pro Val Ser Ala Phe Thr Pro Ala Leu Gly Thr 65 70 75 80 GAA AGC CTA GGC GAC AAT AAT TTC CGC CGC GTT CAC GGC GTT AAA TAC 288 Glu Ser Leu Gly Asp Asn Asn Phe Arg Arg Val His Gly Val Lys Tyr 85 90 95 GCT TAT TAC GCA GGC GCT ATG GCA AAC GGT ATT TCA TCT GAA GAG CTA 336 Ala Tyr Tyr Ala Gly Ala Met Ala Asn Gly Ile Ser Ser Glu Glu Leu 100 105 110 GTG ATT GCC CTA GGT CAA GCT GGC ATT TTG TGT GGT TCG TTT GGA GCA 384 Val Ile Ala Leu Gly Gln Ala Gly Ile Leu Cys Gly Ser Phe Gly Ala 115 120 125 GCC GGT CTT ATT CCA AGT CGC GTT GAA GCG GCA ATT AAC CGT ATT CAA 432 Ala Gly Leu Ile Pro Ser Arg Val Glu Ala Ala Ile Asn Arg Ile Gln 130 135 140 GCA GCG CTG CCA AAT GGC CCT TAT ATG TTT AAC CTT ATC CAT AGT CCT 480 Ala Ala Leu Pro Asn Gly Pro Tyr Met Phe Asn Leu Ile His Ser Pro 145 150 155 160 AGC GAG CCA GCA TTA GAG CGT GGC AGC GTA GAG CTA TTT TTA AAG CAT 528 Ser Glu Pro Ala Leu Glu Arg Gly Ser Val Glu Leu Phe Leu Lys His 165 170 175 AAG GTA CGC ACC GTT GAA GCA TCA GCT TTC TTA GGT CTA ACA CCA CAA 576 Lys Val Arg Thr Val Glu Ala Ser Ala Phe Leu Gly Leu Thr Pro Gln 180 185 190 ATC GTC TAT TAC CGT GCA GCA GGA TTG AGC CGA GAC GCA CAA GGT AAA 624 Ile Val Tyr Tyr Arg Ala Ala Gly Leu Ser Arg Asp Ala Gln Gly Lys 195 200 205 GTT GTG GTT GGT AAC AAG GTT ATC GCT AAA GTA AGT CGC ACC GAA GTG 672 Val Val Val Gly Asn Lys Val Ile Ala Lys Val Ser Arg Thr Glu Val 210 215 220 GCT GAA AAG TTT ATG ATG CCA GCG CCC GCA AAA ATG CTA CAA AAA CTA 720 Ala Glu Lys Phe Met Met Pro Ala Pro Ala Lys Met Leu Gln Lys Leu 225 230 235 240 GTT GAT GAC GGT TCA ATT ACC GCT GAG CAA ATG GAG CTG GCG CAA CTT 768 Val Asp Asp Gly Ser Ile Thr Ala Glu Gln Met Glu Leu Ala Gln Leu 245 250 255 GTA CCT ATG GCT GAC GAC ATC ACT GCA GAG GCC GAT TCA GGT GGC CAT 816 Val Pro Met Ala Asp Asp Ile Thr Ala Glu Ala Asp Ser Gly Gly His 260 265 270 ACT GAT AAC CGT CCA TTA GTA ACA TTG CTG CCA ACC ATT TTA GCG CTG 864 Thr Asp Asn Arg Pro Leu Val Thr Leu Leu Pro Thr Ile Leu Ala Leu 275 280 285 AAA GAA GAA ATT CAA GCT AAA TAC CAA TAC GAC ACT CCT ATT CGT GTC 912 Lys Glu Glu Ile Gln Ala Lys Tyr Gln Tyr Asp Thr Pro Ile Arg Val 290 295 300 GGT TGT GGT GGC GGT GTG GGT ACG CCT GAT GCA GCG CTG GCA ACG TTT 960 Gly Cys Gly Gly Gly Val Gly Thr Pro Asp Ala Ala Leu Ala Thr Phe 305 310 315 320 AAC ATG GGC GCG GCG TAT ATT GTT ACC GGC TCT ATC AAC CAA GCT TGT 1008 Asn Met Gly Ala Ala Tyr Ile Val Thr Gly Ser Ile Asn Gln Ala Cys 325 330 335 GTT GAA GCG GGC GCA AGT GAT CAC ACT CGT AAA TTA CTT GCC ACC ACT 1056 Val Glu Ala Gly Ala Ser Asp His Thr Arg Lys Leu Leu Ala Thr Thr 340 345 350 GAA ATG GCC GAT GTG ACT ATG GCA CCA GCT GCA GAT ATG TTC GAG ATG 1104 Glu Met Ala Asp Val Thr Met Ala Pro Ala Ala Asp Met Phe Glu Met 355 360 365 GGC GTA AAA CTG CAG GTG GTT AAG CGC GGC ACG CTA TTC CCA ATG CGC 1152 Gly Val Lys Leu Gln Val Val Lys Arg Gly Thr Leu Phe Pro Met Arg 370 375 380 GCT AAC AAG CTA TAT GAG ATC TAC ACC CGT TAC GAT TCA ATC GAA GCG 1200 Ala Asn Lys Leu Tyr Glu Ile Tyr Thr Arg Tyr Asp Ser Ile Glu Ala 385 390 395 400 ATC CCA TTA GAC GAG CGT GAA AAG CTT GAG AAA CAA GTA TTC CGC TCA 1248 Ile Pro Leu Asp Glu Arg Glu Lys Leu Glu Lys Gln Val Phe Arg Ser 405 410 415 AGC CTA GAT GAA ATA TGG GCA GGT ACA GTG GCG CAC TTT AAC GAG CGC 1296 Ser Leu Asp Glu Ile Trp Ala Gly Thr Val Ala His Phe Asn Glu Arg 420 425 430 GAC CCT AAG CAA ATC GAA CGC GCA GAG GGT AAC CCT AAG CGT AAA ATG 1344 Asp Pro Lys Gln Ile Glu Arg Ala Glu Gly Asn Pro Lys Arg Lys Met 435 440 445 GCA TTG ATT TTC CGT TGG TAC TTA GGT CTT TCT AGT CGC TGG TCA AAC 1392 Ala Leu Ile Phe Arg Trp Tyr Leu Gly Leu Ser Ser Arg Trp Ser Asn 450 455 460 TCA GGC GAA GTG GGT CGT GAA ATG GAT TAT CAA ATT TGG GCT GGC CCT 1440 Ser Gly Glu Val Gly Arg Glu Met Asp Tyr Gln Ile Trp Ala Gly Pro 465 470 475 480 GCT CTC GGT GCA TTT AAC CAA TGG GCA AAA GGC AGT TAC TTA GAT AAC 1488 Ala Leu Gly Ala Phe Asn Gln Trp Ala Lys Gly Ser Tyr Leu Asp Asn 485 490 495 TAT CAA GAC CGA AAT GCC GTC GAT TTG GCA AAG CAC TTA ATG TAC GGC 1536 Tyr Gln Asp Arg Asn Ala Val Asp Leu Ala Lys His Leu Met Tyr Gly 500 505 510 GCG GCT TAC TTA AAT CGT ATT AAC TCG CTA ACG GCT CAA GGC GTT AAA 1584 Ala Ala Tyr Leu Asn Arg Ile Asn Ser Leu Thr Ala Gln Gly Val Lys 515 520 525 GTG CCA GCA CAG TTA CTT CGC TGG AAG CCA AAC CAA AGA ATG GCC 162 9Val Pro Ala Gln Leu Leu Arg Trp Lys Pro Asn Gln Arg Met Ala 530 535 540
【0048】配列番号: 9 配列の長さ:1596 配列の型: 核酸 鎖の数: 二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源: シーワネラ・ピュートリファシエンス S
CRC−2874 (FERM BP−1625) 配列 GTG CAA CTA CCA TTA ATT GAG GCC TCA TTA GTT AAA TTA TCT GAG CAA 48 Val Gln Leu Pro Leu Ile Glu Ala Ser Leu Val Lys Leu Ser Glu Gln 1 5 10 15 GAG CTC ACC TCT TTA AAT TAC GCT TTT CAG CAA ATG AGA AAG CCA CTA 96 Glu Leu Thr Ser Leu Asn Tyr Ala Phe Gln Gln Met Arg Lys Pro Leu 20 25 30 CAA ACC ATT AAT TAC GAC TAT GCG GTG TGG GAC AGA ACC TAC AGC TAT 144 Gln Thr Ile Asn Tyr Asp Tyr Ala Val Trp Asp Arg Thr Tyr Ser Tyr 35 40 45 ATG AAA TCA AAC TCA GCG AGC GCT AAA AGG TAC TAT GAA AAA CAT GAG 192 Met Lys Ser Asn Ser Ala Ser Ala Lys Arg Tyr Tyr Glu Lys His Glu 50 55 60 TAC CCA GAT GAT ACG TTC AAG AGT TTA AAA GTC GAC GGA GTA TTT ATA 240 Tyr Pro Asp Asp Thr Phe Lys Ser Leu Lys Val Asp Gly Val Phe Ile 65 70 75 80 TTC AAC CGT ACA AAT CAG CCA GTT TTT AGT AAA GGT TTT AAT CAT AGA 288 Phe Asn Arg Thr Asn Gln Pro Val Phe Ser Lys Gly Phe Asn His Arg 85 90 95 AAT GAT ATA CCG CTG GTC TTT GAA TTA ACT GAC TTT AAA CAA CAT CCA 336 Asn Asp Ile Pro Leu Val Phe Glu Leu Thr Asp Phe Lys Gln His Pro 100 105 110 CAA AAC ATC GCA TTA TCT CCA CAA ACC AAA CAG GCA CAC CCA CCG GCA 384 Gln Asn Ile Ala Leu Ser Pro Gln Thr Lys Gln Ala His Pro Pro Ala 115 120 125 AGT AAG CCG TTA GAC TCC CCT GAT GAT GTG CCT TCT ACC CAT GGG GTT 432 Ser Lys Pro Leu Asp Ser Pro Asp Asp Val Pro Ser Thr His Gly Val 130 135 140 ATC GCC ACA CGA TAC GGT CCA GCA ATT TAT AGC TCT ACC AGC ATT TTA 480 Ile Ala Thr Arg Tyr Gly Pro Ala Ile Tyr Ser Ser Thr Ser Ile Leu 145 150 155 160 AAA TCT GAT CGT AGC GGC TCC CAA CTT GGT TAT TTA GTC TTC ATT AGG 528 Lys Ser Asp Arg Ser Gly Ser Gln Leu Gly Tyr Leu Val Phe Ile Arg 165 170 175 TTA ATT GAT GAA TGG TTC ATC GCT GAG CTA TCG CAA TAC ACT GCC GCA 576 Leu Ile Asp Glu Trp Phe Ile Ala Glu Leu Ser Gln Tyr Thr Ala Ala 180 185 190 GGT GTT GAA ATC GCT ATG GCT GAT GCC GCA GAC GCA CAA TTA GCG AGA 624 Gly Val Glu Ile Ala Met Ala Asp Ala Ala Asp Ala Gln Leu Ala Arg 195 200 205 TTA GGC GCA AAC ACT AAG CTT AAT AAA GTA ACC GCT ACA TCC GAA CGG 672 Leu Gly Ala Asn Thr Lys Leu Asn Lys Val Thr Ala Thr Ser Glu Arg 210 215 220 TTA ATA ACT AAT GTC GAT GGT AAG CCT CTG TTG AAG TTA GTG CTT TAC 720 Leu Ile Thr Asn Val Asp Gly Lys Pro Leu Leu Lys Leu Val Leu Tyr 225 230 235 240 CAT ACC AAT AAC CAA CCG CCG CCG ATG CTA GAT TAC AGT ATA ATA ATT 768 His Thr Asn Asn Gln Pro Pro Pro Met Leu Asp Tyr Ser Ile Ile Ile 245 250 255 CTA TTA GTT GAG ATG TCA TTT TTA CTG ATC CTC GCT TAT TTC CTT TAC 816 Leu Leu Val Glu Met Ser Phe Leu Leu Ile Leu Ala Tyr Phe Leu Tyr 260 265 270 TCC TAC TTC TTA GTC AGG CCA GTT AGA AAG CTG GCT TCA GAT ATT AAA 864 Ser Tyr Phe Leu Val Arg Pro Val Arg Lys Leu Ala Ser Asp Ile Lys 275 280 285 AAA ATG GAT AAA AGT CGT GAA ATT AAA AAG CTA AGG TAT CAC TAC CCT 912 Lys Met Asp Lys Ser Arg Glu Ile Lys Lys Leu Arg Tyr His Tyr Pro 290 295 300 ATT ACT GAG CTA TTC TTA GTC AGG CCA GTT AGA AAG CTG GCT TCA GAT 960 Ile Thr Glu Leu Phe Leu Val Arg Pro Val Arg Lys Leu Ala Ser Asp 305 310 315 320 ATT AAA AAA ATG GAT AAA AGT CGT GAA ATT AAA AAG CTA AGG TAT CAC 1008 Ile Lys Lys Met Asp Lys Ser Arg Glu Ile Lys Lys Leu Arg Tyr His 325 330 335 TAC CCT ATT ACT GAG CTA GAT AAA TTA ACC AAT ATT CCC AAT CGT CGC 1056 Tyr Pro Ile Thr Glu Leu Asp Lys Leu Thr Asn Ile Pro Asn Arg Arg 340 345 350 GCT TTT GAG CAG CGA CTT GAA ACC TAT TGC CAA CTG CTA GCC CGG CAA 1104 Ala Phe Glu Gln Arg Leu Glu Thr Tyr Cys Gln Leu Leu Ala Arg Gln 355 360 365 CAA ATT GGC TTT ACT CTC ATC ATT GCC GAT GTG GAT CAT TTT AAA GAG 1152 Gln Ile Gly Phe Thr Leu Ile Ile Ala Asp Val Asp His Phe Lys Glu 370 375 380 TAC AAC GAT ACT CTT GGG CAC CTT GCT GGG GAT GAA GCA TTA ATA AAA 1200 Tyr Asn Asp Thr Leu Gly His Leu Ala Gly Asp Glu Ala Leu Ile Lys 385 390 395 400 GTG GCA CAA ACA CTA TCG CAA CAG TTT TAC CGT GCA GAA GAT ATT TGT 1248 Val Ala Gln Thr Leu Ser Gln Gln Phe Tyr Arg Ala Glu Asp Ile Cys 405 410 415 GCC CGT TTT GGT GGT GAA GAA TTT ATT ATG TTA TTT CGA GAC ATA CCT 1296 Ala Arg Phe Gly Gly Glu Glu Phe Ile Met Leu Phe Arg Asp Ile Pro 420 425 430 GAT GAG CCC TTG CAG AGA AAG CTC GAT GCG ATG CTG CAC TCT TTT GCA 1344 Asp Glu Pro Leu Gln Arg Lys Leu Asp Ala Met Leu His Ser Phe Ala 435 440 445 GAG CTC AAC CTA CCT CAT CCA AAC TCA TCA ACC GCT AAT TAC GTT ACT 1392 Glu Leu Asn Leu Pro His Pro Asn Ser Ser Thr Ala Asn Tyr Val Thr 450 455 460 GTG AGC CTT GGG GTT TGC ACA GTT GTT GCT GTT GAT GAT TTT GAA TTT 1440 Val Ser Leu Gly Val Cys Thr Val Val Ala Val Asp Asp Phe Glu Phe 465 470 475 480 AAA AGT GAG TCG CAT ATT ATT GGC AGT CAG GCT GCA TTA ATC GCA GAT 1488 Lys Ser Glu Ser His Ile Ile Gly Ser Gln Ala Ala Leu Ile Ala Asp 485 490 495 AAG GCG CTT TAT CAT GCT AAA GCC TGT GGT CGT AAC CAG TTG TCA AAA 1536 Lys Ala Leu Tyr His Ala Lys Ala Cys Gly Arg Asn Gln Leu Ser Lys 500 505 510 ACT ACT ATT ACT GTT GAT GAG ATT GAG CAA TTA GAA GCA AAT AAA ATC 1584 Thr Thr Ile Thr Val Asp Glu Ile Glu Gln Leu Glu Ala Asn Lys Ile 515 520 525 GGT CAT CAA GCC 1596 Gly His Gln Ala 530
【0049】
【図面の簡単な説明】
【図1】図1は本発明の遺伝子群を含むプラスミドpE
PAの構造を示す。
【図2】図2は本発明の遺伝子群を含むDNA断片の制
限酵素地図を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 //(C12N 15/55 C12R 1:38) (C12N 15/55 C12R 1:01) (C12N 1/21 C12R 1:19) (C12N 9/00 C12R 1:19) (C12P 7/64 C12R 1:19)

Claims (17)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 イコサペンタエン酸生合成酵素群をコー
    ドする遺伝子。
  2. 【請求項2】 シュードモナス(Pseudomonas)、アルテ
    ロモナス(Alteromonas)、シーワネラ(Shewanella)属微
    生物由来である請求項1記載の遺伝子。
  3. 【請求項3】 配列番号:1に示す塩基配列を有する請
    求項1記載の遺伝子。
  4. 【請求項4】 配列番号:2に示すアミノ酸配列の全部
    又は一部分をコードする遺伝子。
  5. 【請求項5】 配列番号:3に示すアミノ酸配列の全部
    又は一部分をコードする遺伝子。
  6. 【請求項6】 配列番号:4に示すアミノ酸配列の全部
    又は一部分をコードする遺伝子。
  7. 【請求項7】 配列番号:5に示すアミノ酸配列の全部
    又は一部分をコードする遺伝子。
  8. 【請求項8】 配列番号:6に示すアミノ酸配列の全部
    又は一部分をコードする遺伝子。
  9. 【請求項9】 配列番号:7に示すアミノ酸配列の全部
    又は一部分をコードする遺伝子。
  10. 【請求項10】 配列番号:8に示すアミノ酸配列の全
    部又は一部分をコードする遺伝子。
  11. 【請求項11】 配列番号:9に示すアミノ酸配列の全
    部又は一部分をコードする遺伝子。
  12. 【請求項12】 イコサペンタエン酸生合成酵素群をコ
    ードする遺伝子を含有するプラスミド。
  13. 【請求項13】 イコサペンタエン酸生合成酵素群をコ
    ードする遺伝子が、シュードモナス(Pseudomonas)、ア
    ルテロモナス(Alteromonas)、シーワネラ(Shewanella)
    属微生物由来である請求項3記載のプラスミド。
  14. 【請求項14】 請求項4〜11のいずれか1項に記載
    の遺伝子の少なくとも1つを含んで成るプラスミド。
  15. 【請求項15】 イコサペンタエン酸生合成酵素群をコ
    ードする遺伝子を含有するプラスミドにより形質転換さ
    れた生物。
  16. 【請求項16】 形質転換された生物がエシェリヒャ・
    コリ(Escherichiacoli)である請求項15に記載の生
    物。
  17. 【請求項17】 イコサペンタエン酸生合成酵素群をコ
    ードする遺伝子を有するプラスミドにより形質転換され
    た生物を培養し、該培養物からイコサペンタエン酸を採
    取することを特徴とするイコサペンタエン酸の製造法。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO1998001565A1 (fr) * 1996-07-10 1998-01-15 Sagami Chemical Research Center Procede de production d'acide icosapentaenoique par recombinaison genetique
WO2022019272A1 (ja) * 2020-07-20 2022-01-27 国立大学法人京都大学 エイコサペンタエン酸を生産する微生物

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