JPH064036B2 - 病原性エルシニア・エンテロコリチカ選択培地 - Google Patents

病原性エルシニア・エンテロコリチカ選択培地

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JPH064036B2
JPH064036B2 JP28998486A JP28998486A JPH064036B2 JP H064036 B2 JPH064036 B2 JP H064036B2 JP 28998486 A JP28998486 A JP 28998486A JP 28998486 A JP28998486 A JP 28998486A JP H064036 B2 JPH064036 B2 JP H064036B2
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yersinia
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enterocolitica
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【発明の詳細な説明】 <産業上の利用分野> この発明は、医学、獣医学、公衆衛生分野における患
者、家畜、食品、水等からの病原性エルシニア・エンテ
ロコリチカの検出を行う選択培地に関する。
<従来の技術> エルシニア・エンテロコリチカは腸内細菌科のエルシニ
ア属に属し、種々の炎症の起因菌としても知られてい
る。本菌に感染した場合、吐き気、発熱などの症状の他
1〜2日以上の腹痛を伴い又、急性胃腸炎、腸管膜リン
パ節炎、敗血症、結節性紅斑症をきたすこともある。ま
た、本菌は食中毒の起因菌としても知られている。
従来上記エルシニア・エンテロコリチカを検出するため
のエルシニア選択寒天培地は、通称CIN培地として19
79年に開発されたものが知られており、その組成は下記
の通りである。
(1)エルシニア セレクテイブ アガー ベース (1当たり) 酵母エキス 2g ペプトン,バクト 17g プロテオース・ペプトン・ディフコ 3g マンニトール 20g デオキシコール酸ナトリウム 0.5g コール酸ナトリウム 0.5g 塩化ナトリウム 1g ピルビン酸ナトリウム 2g 硫化マグネシウム・7水 10mg アガー,バクト 13.5g ニュートラル・レッドバクト 30mg クリスタルバイオレット 1mg イルガサン 4mg (2)エルシニア抗生物質サプリメント 〔CN,バクト(10ml,バイアル当たり)〕 セフスロジン 4mg ノボビオシン 2.5mg 上記CIN培地は胆汁酸とマンニトール(糖の一種)を
主成分とし、イルガサン、セフスロジン及びノボビオシ
ンの抗生物質を添加したエルシニア属菌を選択的に検出
するための培地である。エルシニア属菌はマンニトール
を利用することができ、CIN培地に含まれるマンニト
ールを発酵することにより集落の周囲のPHを局所的に低
下させる。その結果、全てのエルシニア属菌はニュート
ラル・レッドを吸着し集落を赤変させる。
<発明が解決しようとする問題点> 従来のCIN培地の問題の第1点は病原性菌株と非病原
性菌株の鑑別の難易性、第2点は病原性エルシニア・エ
ンテロコリチカの発育阻止、第3点は病原性菌株に対す
るよりも非病原性菌株に対し良好な発育支持能があるこ
とで、詳細は下記の通りである。
即ち、第1にヒトの感染に関与するエルシニア・エンテ
ロコリチカの生物型/血清型はこれまで4/03;2/05,2
7;2/09;1/08とされていたが、その後の研究により他
の生物型/血清型(3B/03;1/04,32;1/013a,13b;1/01
8;1/020;1/021)も含まれると報告されており、これ
らの病原性エルシニア・エンテロコリチカのうち生物型
/血清型が2/05,27;2/09;1/08;1/04,32;1/013a,13
b;1/018;1/020;1/021などの菌株のCIN培地上にお
ける集落性状は環境由来の非病原性エルシニア属菌(エ
ルシニア・エンテロコリチカ生物型1、エルシニア・フ
レデリクセニイ・エルシニア・インターメディア、エル
シニア・クリステンセニイ)の集落性状と類似し、病原
性エルシニア・エンテロコリチカと非病原性エルシニア
属菌をCIN培地上で鑑別することは困難である。
第2に、新たに追加された病原性エルシニア・エンテロ
コリチカのうち生物型3B/血清型03の大部分の菌株の発
育はCIN培地上では抑制されるために、発育を利用し
て鑑別するCIN培地上での鑑別が困難である。
第3に、環境由来の非病原性エルシニア属菌は病原性エ
ルシニア・エンテロコリチカに比較しCIN培地上で良
好に発育し、病原性エルシニア・エンテロコリチカの発
育を妨げる、という欠点がある。
<問題点を解決するための手段> 上記問題点を解決するための本発明の選択培地は、非病
原性の菌のみを黒変させるエスクリン及びクエン酸第二
鉄と、病原性エルシニア・エンテロコリチカの発育を促
進して赤化せしめる適量のマンニトールと、非病原性エ
ルシニア属菌の発育を抑制するセフスロジン、イルガサ
ン、ジョサマイシン、オレアンドマイシンを含む抗生物
質サプリメントとを有することを特徴としている。
<作用> (1)エスクリン及びクエン酸第二鉄の添加 (病原性菌株と非病原性菌株の鑑別) エスクリンを含有する培地上においてはエスクリンを分
解する菌はエスクリンからエスクレチンを生じ鉄塩と反
応することにより集落及び集落の周囲が黒変する。エス
クリンをエスクレチンに代謝しない細菌の集落は黒変し
ない。病原性エルシニア・エンテロコリチカ及び及びエ
ルシニア・クリステンセニイはエスクリンを分解せず集
落は黒変しない。エルシニア・エンテロコリチカ生物型
1、エルシニア・フレデリクセニイ、エルシニア・イン
ターメディアなどの非病原性エルシニア属菌はエスクリ
ンをエスクレチンに代謝し集落及び集落の周囲が黒変す
る。
(2)マンニトールの適量の添加(病原性エルシニア・エ
ンテロコリチカの発育促進及び鑑別) マンニトールを発酵できる菌は集落の周囲のPHを局所的
に低下し、その結果、ニュートラルレッドを吸着し集落
を赤変する。マンニトールを酸に代謝しない細菌の集落
は無色透明のままである。エルシニア属菌はマンニトー
ルを酸に代謝し集落を赤変する。しかし、培地中のマン
ニトールの添加量が多すぎると非病原性エルシニア属菌
の発育は良好となり集落の赤色化が進むことにより、病
原性エルシニア・エンテロコリチカの発育が抑制され、
非病原性エルシニア属菌との鑑別が困難となる。マンニ
トールの添加量をCIN培地の例えば約半量にすること
により非病原性エルシニア属菌の発育速度を抑えること
ができる。更に、CIN培地中に添加されている酵母エ
キス、コール酸ナトリウム、ピルビン酸ナトリウム、硫
酸マグネシウム・7水はエルシニア・エンテロコリチカ
生物型3B/血清型03の発育に抑制的に作用するので病原
性エルシニア・エンテロコリチカの発育を促進するため
にはこれらは添加しない方が望ましい。
(3)セフスロジン、イルガサン、ジョサマイシン、オレ
アンドマイシンを含む抗生物質サプリメント(非病原性
菌株の発育抑制) 培地にジョサマイシンとオレアンドマイシンを添加する
ことによりセフスロジンとの相乗作用によりエルシニア
・インターメディアをはじめとする非病原性エルシニア
属菌の発育は抑制される。
<実施例> (1)組 成 病原性エルシニア・エンテロコリチカ選択寒天基礎培
地(1当たり) ペプトン,バクト 17g プロテオース・ペプトン・ディフコ 3g マンニトール 10g エスクリン 1g クエン酸第二鉄 0.5g デキオシコール酸ナトリウム 1g 塩化ナトリウム 1g アガー、バクト 14g ニュートラル・レッド、バクト 30mg クリスタルバイオレット、バクト 1mg PH7.4±0.2 (注:CIN培地から酵母エキス、コール酸ナトリウ
ム、ピルビン酸ナトリウム、硫酸マグネシウム・7H2Oを
削除、マンニトールを20gから10gへ減量、デオキシコー
ル酸ナトリウムを0.5gから1gへ増量した。) 病原性エルシニア・エンテロコリチカ抗生物質サプリ
メント〔略記号:CIJO〕 (10ml,バイアル当たり) セフスロジン 4mg イルガサンDP300 4mg ジョサマイシン 20mg オレアンドマイシン 10mg (注:CIN培地用のエルシニア抗生物質サプリメント
CN、バクトからノボビオシンを削除しジョサマイシン、
オレアンドマイシンを加えた。) (2)調 製 法 蒸留水1リットルに病原性エルシニア・エンテロコリ
チカ選択寒天基礎培地の全成分を加え、加熱して完全溶
解する。
121℃で15分間オートクレーブ滅菌する。
45〜50℃に冷却する。
溶解した病原性エルシニア・エンテロコリチカ抗生物
質サプリメント〔CIJO〕10mlを無菌的に加える。
発泡しないように注意しながら撹拌し、90〜100mmの
ペトリ皿に約20mlずつ分注し、培地表面は乾燥させる。
(3)培 養 便、食品等の検体懸濁液をプレートに接種する。
32℃で培養し、18〜24時間目を観察する。
(4)判 定 第1表は病原性エルシニア・エンテロコリチカ選択寒天
培地(VYE培地)でのエルシニア属菌及びグラム陰性
菌の発育を示したものである。32℃、24時間の培養後の
観察では病原性エルシニア・エンテロコリチカの集落は
濃いピンク色又は中央が赤色で、その周囲に透明の境界
線が見られる。病原性を持たない環境由来のエルシニア
属菌のうちエルシニア・クリステンセニイを除くエルシ
ニア・エンテロコリチカ生物型1、エルシニア・フレデ
リクセニイ、エルシニア・インターメディアの集落は赤
褐色で、集落の周囲は黒変し病原性エルシニア・エンテ
ロコリチカは他の環境由来の非病原性エルシニア属菌と
容易に鑑別できる。
本培地におけるピンク色に発育したエルシニア・クリス
テンセニイと病原性エルシニア・エンテロコリチカとの
鑑別は、自己凝集試験及び白糖分解能を試験することに
より簡単に鑑別できる。即ち、病原性エルシニア・エン
テロコリチカは自己凝集試験及び白糖分解能陽性である
のに対し、エルシニア・クリステンセニイは両試験とも
陰性である。また、濃いピンク色に発育するシトロバク
ター・フロインディイ、シトロバクター・ダイバーサ
ス、エンテロバクター・アグロメランスの集落は病原性
エルシニア・エンテロコリチカの集落に比較し大きく培
地上でも容易に鑑別できる。尚、患者及び肉からのエル
シニア属菌の検出頻度を第2表に示した。
(5)データの分析 上記判定に関し、本実施例におけるデータの内容につき
以下分析する。
第1表はVYE培地及びCIN培地上でのエルシニア属
菌及びグラム陰性菌の成育状況を示す。病原性エルシニ
ア・エンテロコリチカはVYE培地上では直径1.35〜1.
92mm、CIN培地上では直径<0.4〜2.30mmの集落を形
成する。病原性エルシニア・エンテロコリチカのうち生
物型3B/血清型03の増殖数はトリプトケースソイ寒天培
地に比較しVYE培地上では0.33Log10、CIN培地で
は1.87Log10阻止される。集落の直径はVYE培地上で
は1.35mm、CIN培地上では<0.4または1.15mmであ
り、VYE培地の生物型3B/血清型03に対する発育支持
能はCIN培地に比較し優れている。非病原性エルシニ
ア及びその他のグラム陰性菌の発育はVYE及びCIN
培地間に顕著な差は認められないが、非病原性エルシニ
アのうちエルシニア・フレデニクセニイ・エルシニア・
インターメディア、エルシニア・クリステンセニイの発
育はVYE培地上でCIN培地に比較しいくらか阻止さ
れる。
VYE培地上では病原性エルシニア・エンテロコリチカ
及びエルシニア・クリステンセニイ(非病原性エルシニ
ア)は中央が濃いピンク色又は赤色で、その周囲に透明
の境界線が見られる集落を形成する。シトロバクター・
フロインディイ、シトロバクター・ダイバーサス及びエ
ンテロバクター・アグロメランスは前者に比較しやや大
きめ(直径2.18mm〜3.00mm)で全体が濃いピンク色の集
落を形成する。エルシニア・エンテロコリチカ生物型
1、エリシニア・フレデニクセニイ、エルシニア・イン
ターメディア(非病原性エルシニア)、クレブセイラ・
ニューモニエ及びセラチア属は赤褐色で集落の周囲が黒
変する集落を形成する。これらの性状により、VYE培
地上で中央が濃いピンク色又は赤色で、その周囲に透明
の境界線がある集落を形成する病原性エルシニア・エン
テロコリチカは他の環境由来の非病原性エルシニア属菌
及びその他のグラム陰性菌とVYE培地上で肉眼的に容
易に鑑別できる。
CIN培地上ではエルシニア属菌、シトロバクター属
菌、エンテロバクター属菌及びセラチア属菌はピンク色
の集落を形成し、CIN培地上において病原性エルシニ
ア・エンテロコリチカと他の環境由来の非病原性エルシ
ニア属菌及びその他のグラム陰性菌との肉眼的な鑑別は
困難である。
病原性エルシニア・エンテロコリチカと非病原性エルシ
ニア属菌の混合液をVYE又はCIN培地に塗布したと
き、即ち5種類の病原性エルシニア・エンテロコリチカ
(生物型/血清型4/03、3B/03、2/05;27、1/08及び1/1
3a;13b)とエルシニア・エンテロコリチカ生物型1及
びエルシニア・インターメディアの混合液をVYE、ま
たはCIN培地に塗布して32℃、24時間培養した後の発
育性状におけるVYE培地上では、病原性エルシニア・
エンテロコリチカ(中央が濃いピンク色又は赤色で、そ
の周囲に透明な境界線がある集落)はエルシニア・エン
テロコリチカ生物型1(赤褐色で集落の周囲が黒変する
集落)と容易に鑑別できる。また、エルシニア・インタ
ーメディアは病原性エルシニア・エンテロコリチカと混
合培養することによりその発育数は抑制され、病原性エ
ルシニア・エンテロコリチカは純培養的に発育する。
もう一方のCIN培地上では病原性エルシニア・エンテ
ロコリチカ、エルシニア・エンテロコリチカ生物型1及
びエルシニア・インターメディアは濃いピンク色又は赤
色の集落を形成する。病原性エルシニア・エンテロコリ
チカは他の二菌種に比較し集落がやや小さい以外特徴的
性状を示さず、CIN培地上で肉眼的に鑑別するのは困
難である。
第3表は病原性エルシニア・エンテロコリチカに感染し
た患者及びブタの糞便からのVYE及びCIN培地を用
いたエルシニア・エンテロコリチカの分離状況を示して
いる。病原性エルシニア・エンテロコリチカのうち生物
型3B/血清型03の検出率は患者糞便においてVYE培地
がCIN培地に比較し二倍優れていた。
第4表はVYE及びCIN培地を用い、5種類の病原性
エルシニア・エンテロコリチカ(生物型/血清型4/03、
3B/03、2/05;27、1/08、及び1/13a;13b)を実験的に
投与した糞便及び肉からの、投与した病原性エルシニア
・エンテロコリチカの回収試験を示している。非病原性
エルシニア属菌による汚染が少ない糞便からの検出には
VYE培地とCIN培地との間に差は認められないが、
非病原性エルシニア属菌による汚染が多い肉からの検出
にはVYE培地がCIN培地に比較し優れていた。特
に、生物型3B/血清型03はVYE培地で100%検出さ
れたのに対しCIN培地では11%から検出されるにと
どまった。
<発明の効果> 本発明の病原性エルシニア・エンテロコリチカ選択寒天
培地(VYE培地)は検査材料を培地に塗布した後所定
の温度及び時間を与えて培養することにより、病原性エ
ルシニア・エンテロコリチカの最適な発育と高い回収率
を得ることができ、病原性エルシニア・エンテロコリチ
カと非病原性エルシニア属菌の容易な鑑別及び病原性エ
ルシニア・エンテロコリチカ、特に生物型3B/血清型0
3、の旺盛な増殖支持を大きな特徴とする培地で、臨
床、食品及び水などの検体中の病原性エルシニア・エン
テロコリチカの選択的検出及び増殖に最適である。又、
日常的にエルシニア属菌を扱っている専門家のみなら
ず、エルシニア属菌を扱う頻度の少ない技術者にも容易
に病原性菌株を鑑別、検出することが可能である。
特に病原性エルシニア・エンテロコリチカ検出に非常に
選択性及び鑑別能の高い本培地が普及すれば、エルシニ
ア属菌の検査は更に普及し、従来のCIN培地上では鑑
別困難であった生物型/血清型培地3B/03;2/05,27;2/
09;1/08;1/4,32;1/13a,13b;1/018;1/020;1/021な
どの病原株の検出が容易になると共に、これまでより一
層一般的で広範囲の病原性エルシニア・エンテロコリチ
カの分布の確認ができ、医学や公衆衛生分野における治
療や防疫に資するところが大きい等の効果を有する。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】非病原性の菌のみを黒変させるエスクリン
    及びクエン酸第二鉄と、病原性エルシニア・エンテロコ
    リチカの発育を促進して赤化せしめる適量のマンニトー
    ルと、非病原性エルシニア属菌の発育を抑制するセフス
    ロジン、イルガサン、ジョサマイシン、オレアンドマイ
    シンを含む抗生物質サプリメントとを有する病原性エル
    シニア・エンテロコリチカ選択培地。
JP28998486A 1986-12-04 1986-12-04 病原性エルシニア・エンテロコリチカ選択培地 Expired - Lifetime JPH064036B2 (ja)

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FR2983214B1 (fr) * 2011-11-28 2015-01-16 Alain Rambach Milieu et procede de detection de bacteries yersinia enterocolitica pathogenes
CN112899341A (zh) * 2021-03-16 2021-06-04 上海申启生物科技有限公司 小肠结肠炎耶尔森氏菌选择性增菌培养基及其制备方法

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