JPH06308129A - フルクトサミン用試薬及び較正システム - Google Patents

フルクトサミン用試薬及び較正システム

Info

Publication number
JPH06308129A
JPH06308129A JP5159981A JP15998193A JPH06308129A JP H06308129 A JPH06308129 A JP H06308129A JP 5159981 A JP5159981 A JP 5159981A JP 15998193 A JP15998193 A JP 15998193A JP H06308129 A JPH06308129 A JP H06308129A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
reagent
fructosamine
serum
concentration
minutes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
JP5159981A
Other languages
English (en)
Inventor
Shing F Kwan
シン・フェイ・クワン
Marjorie Bravo-Leerabhandh
マージョリー・ブラーボ−レーラブハンド
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Publication of JPH06308129A publication Critical patent/JPH06308129A/ja
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/66—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood sugars, e.g. galactose
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/825—Pretreatment for removal of interfering factors from sample
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/904—Oxidation - reduction indicators
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
    • Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
    • Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
    • Y10T436/144444—Glucose
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
    • Y10T436/25125—Digestion or removing interfering materials

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 血清中のフルクトサミンの測定のための試薬
系を提供する。 【構成】 フルクトサミンを含む血清中のすべての反応
性物質と反応して、約１０分より短い予め定めた時間内
に、テトラゾリウム塩とフルクトサミン及び緩衝物質と
の反応の結果、測定可能な第一の色変化を示すテトラゾ
リウム塩を含む第一のアルカリ性水性試薬、及び第一の
アルカリ性水性試薬と同一であるが、フルクトサミンの
テトラゾリウム塩との反応を阻止してフルクトサミン以
外の反応性物質によるテトラゾリウム塩の還元を生じ、
第一の試薬と同じ前もって選択した時間で色変化を示し
て、フルクトサミンと反応する第一のアルカリ性水性試
薬を用いて生じる色変化及び第二のアルカリ性水性試薬
を用いて生じる色変化の差によって血清中のフルクトサ
ミン濃度の測定を可能にする物質を含む第二の試薬。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、血清中のフルクトサミ
ン濃度の迅速測定のための安定な単一試薬システムに関
する。
【０００２】
【発明の背景】フルクトサミンは、ヒトにおける真性糖
尿病の存在の指標である。その測定は、患者の治療への
追従、介護の質及びインシュリン治療の効力を反映する
ために有効に用い得る。
【０００３】フルクトサミンは、血清グルコースと血清
蛋白質との相互作用の生成物であり、該相互作用におい
て、グルコースは蛋白質のアミノ基に結合してアルジミ
ン（シッフ塩基）を形成し、それが分子再配置を受けて
フルクトサミンとしても知られる安定なケトアミンを形
成する。フルクトサミンの構造、分析及び臨床的有用性
は、Armbruster Clinical Chemistry, 33 巻、12号、21
53-63 頁(1987)に記載されており、本明細書中に参考と
して援用する。血液試料中のフルクトサミンの直接測定
のための方法及び組成物は、Baker の米国特許第４，６
４２，２９５号及び４，６４５，７４２号に記載されて
おり、本明細書中に参考として援用する。血液試料又は
血液に由来する試料中のフルクトサミンレベルを測定す
る方法は、一般に、試料を５０℃より低い温度及び１０
〜１１のｐＨに保つこと及び着色剤（ニトロブルーテト
ラゾリウム即ちＮＢＴ）を試料に加えることを含む。第
一の１０分の遅延の後に第一の色測定を予め定めた波長
５５０ｎｍにて行ない、第二の更なる２分の遅延の後に
第二の色測定を予め定めた波長で行なう。試料中のフル
クトサミンレベルを、第一と第二の色測定の間の変化を
比較することにより測定する。この系は、Roche により
採用され、RoTAG プラスフルクトサミンアッセイ（商
標）として市販されている。それは、緩衝液（ｐＨ１
０．３）、ＮＢＴ錠剤及び固体の較正物質からなる。そ
の色素は、溶解したとき、２〜８℃で２週間まで安定で
あり、較正物質は、戻したとき、２〜８℃で４週間まで
安定であると述べられている。
【０００４】その系の第一の欠点は、長い応答時間であ
る。従来から、当分野では１０分未満で達成されるアッ
セイが所望され且つそのサイクルを操作するための自動
化分析装置が設計されている。長い時間は分析系に望ま
しくない改変を要求し、通常のアッセイ温度３７℃で１
０分以内で達成し得る正確なアッセイの要求が存在す
る。
【０００５】別の要求は、アッセイの正確さである。各
ユニットが製造業者により調剤され且つ製造地での製
造、貯蔵、世界中の任意の目的地までの船積み及び目的
地での使用までの貯蔵において十分な貯蔵寿命を有す
る、時間安定な、単一液体試薬アッセイ用組成物を開発
することは、この発明の譲受人の現在進行中の探求であ
る。商業的許容を得る製品は、２〜１０℃で１２か月以
上、一層模範的には２〜１０℃で１８か月間の貯蔵寿命
を有しなければならない（これは、少なくとも、４１℃
で約３日間の貯蔵寿命に相当する）。示したように、商
業的にすべての分光測光装置に適用可能であるために
は、これらの組成物は、３７℃で１０分以内の応答時間
を有していなければならない。
【０００６】それ故、この発明の目的は、血清中のフル
クトサミンの測定のための、商業的に許容し得る応答時
間及び安定性（少なくとも、２〜１０℃で１２か月間）
を有する時間安定な液体の単一試薬系を提供することで
ある。
【０００７】
【発明の要約】本発明は、血清中のフルクトサミンの迅
速測定のための新規な単一試薬系及び方法に向けられて
いる。
【０００８】この新規な単一試薬系は、２つの別々に工
場生産された試薬からなり、好ましくは、ヒト血清中の
フルクトサミンの３７℃１０分以内での正確な測定に用
いるための標準を伴って供給され、一層好ましくは、対
照を伴って供給される。
【０００９】第一の試薬（ここでは「試薬Ａ」という）
は、血清中のすべての反応性物質に応答性である。第二
の試薬（ここでは「試薬Ｂ」という）は、フルクトサミ
ンに結合してフルクトサミンのテトラゾリウム塩を還元
する能力を阻止するホウ酸化合物を含む。試薬Ｂは、そ
れ故、テトラゾリウム塩を還元し得るフルクトサミンを
除くすべての反応性物質を測定する。試薬Ｂを用いて測
定した吸光度変化を減じた試薬Ａを用いて得た吸光度変
化は、血清中のフルクトサミン含量の測定である正味の
吸光度（正味デルタＡＢＳ）を与える。試料中のフルク
トサミン濃度を、正味デルタＡＢＳに因子（Ｆ）（標準
のフルクトサミンレベルのその標準の試薬Ａ及びＢを用
いて測定した正味の吸光度に対する比）を掛けることに
より測定する。
【００１０】現在、好ましい試薬Ａの組成は、脱イオン
水中に含まれる約０．５ｍＭ即ち２５２．８５ｍｇ／ｌ
ｐ−ヨードニトロテトラゾリウムバイオレット（ＩＮ
Ｔ）、０．１Ｍ即ち１２．４ｇ／ｌ 炭酸ナトリウム一
水和物（Ｎａ2 ＣＯ3 ）、０．１Ｍ即ち８．４ｇ／ｌ
重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ3 ）、０．１Ｍ即ち６．
０ｇ／ｌ 尿素及び１．０％（ｖ／ｖ）即ち１０ｍｌ／
ｌ トリトンＸ−１００及び１．０％即ち１０ｇ／ｌ
タージトールＮＰ４０である。溶液のｐＨは約１１．０
である。
【００１１】試薬Ｂは、試薬Ａと同一であるが、０．１
２Ｍ即ち７．４１６ｇ／ｌ ホウ酸（Ｈ3 ＰＯ3 ）を含
み且つやはり約１１．０のｐＨを有する。
【００１２】アッセイのプロトコールは、２及び４分間
又は３及び５分間の反応の後の試薬Ａの色の変化（吸光
度）並びに同じ２及び４分間又は３及び５分間の間隔で
の試薬Ｂの色の変化を標準温度３７℃で約５００ｎｍの
波長で測定することである。試薬Ａ及び試薬Ｂについて
の吸光度（ＡＢＳ）の差を測定し、次いで、２つの差の
間の差を測定する。この差に因子（Ｆ）を掛けてフルク
トサミン濃度をマイクロモル（μｍｏｌ）で測定する。
【００１３】この系で、試薬Ａ中でのＩＮＴの利用は、
フルクトサミン及びすべての他の干渉物質によるＩＮＴ
の還元を可能にするが、試薬Ｂはフルクトサミン以外の
干渉物質によるＩＮＴの還元を引き起こす。その結果、
差により、フルクトサミンの量が測定される。
【００１４】この間接的フルクトサミン測定系は、すべ
ての反応性物質を捕まえ且つ、そうして、フルクトサミ
ン測定手順における反応性物質の影響を効果的に除去す
る。
【００１５】最も重要なことに、この系は、分析を商業
的に所望される１０分以内の時間枠内で達成し得るので
血清中のフルクトサミン測定のために任意の吸光度分光
計の利用を可能にする。
【００１６】
【詳細な説明】本発明は、血清中のフルクトサミン濃度
の測定に向けられている。それは、血清中の殆どの一般
的な反応性物質に加えてフルクトサミンと反応する（還
元される）一の試薬及び、フルクトサミン以外の同じ反
応性物質と反応する第二の試薬の利用に基づいている。
その結果、差によって、血清中のフルクトサミン濃度
を、これらの反応性物質によって有意の程度に影響を受
ける分析を用いずに測定することが出来る。各試薬は、
同様の色生成物質、好ましくはｐ−ヨードニトロテトラ
ゾリウムバイオレット（ＩＮＴ）、を含む。第二の試薬
は、第一の試薬と同一であるが、フルクトサミンがテト
ラゾリウム塩を還元するのを妨げるホウ酸を含む。ここ
で用いた１０種の反応性物質は、テトラゾリウム塩を還
元し得る試料中に存在し得る任意の物質を意味する。か
かる物質は、グルコース、ヘモグロビン、ビリルビン、
アスコルビン酸、尿酸、トリグリセリド等を含む。
【００１７】標準的な市販の分光測光計を用いて、第二
の試薬についての吸光度変化を引いた第一の試薬につい
ての吸光度変化が、フルクトサミンによる正味の吸光度
変化（正味デルタＡＢＳ）を与える。次いで、フルクト
サミン濃度を、正味吸光度変化に因子（Ｆ）（既知の標
準のフルクトサミン濃度を、下記の数式１に従って、試
薬Ａ及び試薬Ｂを用いて測定した標準の正味吸光度変化
で割ることにより導く）を掛けることによって測定する
【数１】 （ここに、フルクトサミン濃度は、下記の数式２によっ
て測定したものである）。
【数２】
【００１８】この系で用いる各組成物は単一液体試薬で
ある。これらの試薬（試薬Ａ及びＢ）は希釈の必要はな
い。品質管理は製造時点で行なう。それらは、ｐＨを
８．５〜１１．５の範囲（好ましくは、約１１）に維持
するための炭酸塩緩衝系の水溶液である。ＡＭＰ又はＣ
ＡＰＳ等の他の緩衝系の利用は、感度の喪失及び干渉の
平均の増加を生じる。
【００１９】この発明で用いるテトラゾリウム塩は、ホ
ウ酸の不在時にフルクトサミン及び干渉物質によって有
色ホルマザン生成物に還元されるが、ホウ酸の存在下で
はフルクトサミン以外の干渉物質によってのみ還元され
る化合物である。好ましいテトラゾリウム塩は、ｐ−ヨ
ードニトロテトラゾリウムバイオレット（ＩＮＴ）であ
る。尿素を、アスコルビン酸による干渉を最小化するの
に十分な量で供給する。トリトンＸ−１００（オクチル
フェノキシポリエトキシエタノール、１３．５のＨＬＢ
値を有する非イオン性界面活性剤）は、還元の生成物を
可溶化し且つ試薬の感度をトリトンＸ−１００を含まな
い溶液と比較して少なくとも約３０％増大させる。試料
を清澄させ及び上昇した血清トリグリセリドレベルによ
る干渉を最小化するために、適宜、他の非イオン性界面
活性剤タージトールＮＰ−４０（１７．８のＨＬＢ値を
有するエトキシル化ノニルフェノール）を存在させて良
い（感度を増大させもする）。ホウ酸を供給してフルク
トサミンと複合体形成させ且つフルクトサミンによるＩ
ＮＴの還元を阻止する。フルクトサミンによるＩＮＴの
還元を阻止するが他の反応性化合物による還元は阻止し
ない任意の他の化合物をホウ酸の代りに用いて良い。
【００２０】炭酸塩緩衝剤を、溶液の約０．０１〜０．
４Ｍの濃度で、テトラゾリウム塩（ＩＮＴ）を約０．１
〜５ｍＭの濃度で、尿素を０．１〜約１Ｍの濃度で、ト
リトンＸ−１００を０．１〜約４％（ｖ／ｖ）の濃度
で、タージトールＮＰ−４０を約０〜３％（ｖ／ｖ）の
濃度で用いることが出来る。
【００２１】非フルクトサミン応答試薬（試薬Ｂ）につ
いては、ホウ酸を約０．０５〜１Ｍの濃度で用いる。機
能的ｐＨ範囲は、約８．５〜１１．５（好ましくは、１
１）である。約８．５より低いｐＨにおいては、感度が
低下し且つアスコルビン酸干渉が増加する。１１．５よ
り高いｐＨにおいては、実質的にグルコースが干渉す
る。この発明のフルクトサミン分析系は、別売り可能な
標準を有する又は有しない及び、系を較正するための上
下レベルの対照（キットと一緒に又は別々に販売し得
る）を有する又は有しない２部材のキットとして販売し
得る。本発明で用いるこれらの試薬、標準及び対照は、
４７℃で３日間のストレスに耐えるように確立され、こ
れは、少なくとも２〜１０℃（通常の保存温度）で１５
〜１８か月の寿命に相関する。液体形態であるので、凍
結乾燥品を戻す際の間違いが除かれ且つすべての品質管
理が製造者側で均一の性能のために行なわれる。一層重
要なことに、アッセイを３７℃で５分以内に達成するこ
とが出来、これは、この系を連続分析に適応させる（Ro
che から商標RoTAG で市販されている系ではあり得な
い）。これらの２つの系の比較を下記の表１に示す。
【表１】 表１ 基準 本発明 ＲｏＴＡＧ 試薬形態 単一液体 ２部分液体及び固体 ブランク あり なし ─────────────────────────────────── 較正物質 一点 液体 一点 凍結乾燥品 ─────────────────────────────────── 対照 二レベル 液体 二レベル 凍結乾燥品 ─────────────────────────────────── 安定性 ４℃で１５か月 試薬：戻した後２週間 較正物質／対照： 戻した後４週間 ─────────────────────────────────── 動力学 スプラインフィット スプラインフィット ─────────────────────────────────── 直線性 １０〜１６００μモル １０００μモルまで ─────────────────────────────────── 反応温度 ３７℃ ３７℃ ─────────────────────────────────── 応答時間 ＜５分間 １０〜１２分間 ─────────────────────────────────── 特異性 優秀 優良 ─────────────────────────────────── 精度：２８０μモル ＣＶ％実施−実施間 ２．８ ２．４ 実施内 ２．９ １．９ ５００μモル 実施−実施間 ２．８ １．７ 実施内 ２．４ ２．３ ─────────────────────────────────── フルクトサミン １９６〜２７９μモル ２００〜２７２μモル 正常範囲 ───────────────────────────────────
【００２２】試薬Ａの好ましい組成（表１は、これに基
づいている）は、０．５ｍＭ ｐ−ヨードニトロテトラ
ゾリウムバイオレット（ＩＮＴ）、０．１Ｍ 炭酸ナト
リウム一水和物（Ｎａ2 ＣＯ3 ）、０．１Ｍ 重炭酸ナ
トリウム（ＮａＨＣＯ3 ）、０．１Ｍ 尿素、１．０％
ｖ／ｖ トリトンＸ−１００及び１％ タージトールＮ
Ｐ４０を脱イオン水中に溶解して含み且つｐＨ１１．０
に調整したものである。試薬Ｂの好ましい組成は、約
０．１２Ｍのホウ酸（Ｈ3 ＢＯ3 ）を含むことを除いて
は、試薬Ａと同一であり、ｐＨも１１．０である。試薬
Ａは、フルクトサミンにより還元されることに加えて、
グルコース、ヘモグロビン、ビリルビン、アスコルビン
酸、尿酸及びトリグリセリドによっても５分間の時間枠
内で還元され、２及び４分、好ましくは３及び５分の時
間で行なわれる吸光度色変化測定は、還元生成物の吸光
度差（正味デルタＡＢＳ）を得ることを可能にする。
【００２３】試薬Ｂを用いた場合、同じ物質が反応し且
つテトラゾリウム塩の吸光度色変化を生じるが、その反
応は、ホウ酸によってテトラゾリウム塩との反応を阻止
されたフルクトサミンを含まない。
【００２４】本発明の好ましいアッセイ手順は、血清試
料に試薬Ａを加えること（その中でＩＮＴがフルクトサ
ミン及び干渉物質により還元されて時間の関数としての
吸光度の変化を与える）、所定時間２及び４分又は３及
び５分の経過後に吸光度の変化を測定すること、同時に
又は続いて、同じ血清の別の試料（試薬Ａと同じ組成を
含むが更にフルクトサミンによるテトラゾリウム塩の還
元を阻止するホウ酸を含む）を反応させること、及び第
一の試料と同じ時間間隔にて吸光度を測定することを含
む。フルクトサミンに応答性の第一の試料についての吸
光度の差（第一のデルタＡＢＳ）からフルクトサミンの
存在に非応答性の第二の試料についての吸光度の差（第
二のデルタＡＢＳ）を引いたものは、正味のデルタＡＢ
Ｓを与え、それは因子（Ｆ）を乗じることによりフルク
トサミン濃度をマイクロモル（μモル）で与える。一つ
置きに、このマイクロモル濃度を各試料について差を用
いて測定することが出来るが、これが試料のフルクトサ
ミン濃度である。
【００２５】この発明のフルクトサミンアッセイ系は、
好ましくは、２種の試薬Ａ及びＢからなり、それらは、
通常、標準較正物質、正常レベルの対照及び高レベルの
対照を有する。それらの調製及び利用を以下に記す。
【００２６】試薬Ａの調製 定速で攪拌しながら、室温で、下記を順次混合した。 ８００ｍｌ 脱イオンＨ2 Ｏ ２５２．８５ｍｇ ｐ−ヨードニトロテトラゾ
リウムバイオレット １２．５ｇ Ｎａ2 ＣＯ3 一水和物 ８．４ｇ ＮａＨＣＯ3 ６．ｇ 尿素 １０．ｍｌ トリトンＸ−１００ １０ｇ タージトールＮＰ４０ 溶液のｐＨを、定速で攪拌しながら、ＮａＯＨで１１．
０に調整した。
【００２７】試薬Ｂの調製 定速で攪拌しながら、室温で、下記を混合した。 ８００ｍｌ 脱イオンＨ2 Ｏ ２５２．８５ｍｇ ｐ−ヨードニトロテトラゾ
リウムバイオレット １２．５ｇ Ｎａ2 ＣＯ3 一水和物 ８．４ｇ ＮａＨＣＯ3 ６．ｇ 尿素 １０．ｍｌ トリトンＸ−１００ ７．４１６ｇ Ｈ3 ＢＯ3 （ホウ酸） １０ｇ タージトールＮＰ４０ 試薬Ａと同様に、ｐＨを、定速で攪拌しながら、ＮａＯ
Ｈで１１．０に調整した。
【００２８】較正物質／対照の調製 高グリコフルクトサミン中間体 定速で攪拌しながら、室温で、下記を混合した。 １． ０．２ミクロン硝酸セルロースフィルターを通し
て濾過した５０ミリリットルのヒト血清 ２． ０．５０グラムのヒトアルブミン粉末画分Ｖ （Armour Pharmaceutical Co. ） ３． ７．２０グラムのＤ−グルコース ４． ０．０１ｇ ＮａＮ3 （アジ化ナトリウム）。
【００２９】各成分を別々に、溶液中に含有されるまで
攪拌しながら加えた。その溶液をその容器内にパラフィ
ルムで封をして３７℃で４日間（９６時間）インキュベ
ートした。この溶液を１リットルの脱イオン水に対して
室温で４時間透析したが、水を１時間ごとに取り替え、
Spectrapor Semi-Permeable Membranes （Ｍ．Ｗ．カッ
トオフ １２〜１４，０００）を用いた（ここに、Ｍ．
Ｗ．＝分子量）。
【００３０】４時間後、水をもう一度取り替え、透析を
４℃で更に２０時間続けた。
【００３１】２０時間の終わりに、溶液を室温に加熱
し、０．２ミクロンの硝酸セルロースフィルター（What
man ）を通して濾過した。
【００３２】ヒト血清希釈液中間体 対照及び較正物質の調剤に用いるための高グリコフルク
トサミン中間体を、高グリコフルクトサミンについて記
した手順を用いて調製した（但し、１００ｍｌのヒト血
清を用い、透析を２リットルの脱イオン水を用いて行な
った）。
【００３３】常用フルクトサミン標準の調剤 高グリコフルクトサミン中間体を、ヒト血清希釈液中間
体で１：４０ｖ／ｖの割合で希釈し、０．５ｇのヒトア
ルブミン粉末画分Ｖ、２５ｍｇのＤ−グルコース及び
０．５ｍｌの添加剤ＡＢを各５０ｍｌの溶液に加えるこ
とにより安定化した。その結果の安定化した標準を０．
２ミクロンの硝酸セルロースフィルター（Whatman ）を
通して濾過した。フルクトサミン値は、アッセイ時に、
３７８〜４６２μモルの範囲にあった。
【００３４】正常レベル対照の調剤 高グリコフルクトサミン中間体を、２．５ｍｌのグリコ
フルクトサミンを４７．５ｍｌの希釈液に加えることに
よってヒト血清希釈液中間体で希釈した。その混合物
を、０．５ｇのヒトアルブミン粉末画分Ｖ、２５ｍｇの
Ｄ−グルコース及び０．５ｍｌの添加剤ＡＢを加えるこ
とにより安定化し、０．２ミクロンの硝酸セルロースフ
ィルター（Whatman ）を通して濾過した。フルクトサミ
ン値は、アッセイ時に、２２９〜２８１μモルの範囲に
あった。
【００３５】異常高レベル対照 正常レベル対照を調剤する手順に従う（但し、１４ｍｌ
のグリコフルクトサミン及び３６ｍｌの希釈液を用い
た）。フルクトサミンレベルは、４５７〜５５９μモル
であった。
【００３６】ポリリジンのグリコ化 定速で攪拌しながら、室温で、下記を混合した。 １． ３３ミリリットルの０．１Ｍリン酸緩衝塩溶液
（ｐＨ７．４） ２． １．０グラムのポリ−ｌ−リジン ３． ４．７５グラムのＤ−グルコース ４． ０．００７グラムのＮａＮ3 （アジ化ナトリウ
ム）
【００３７】それぞれを別々に溶解してその容器をパラ
フィルムで封じて３７℃で４日間（９６時間）インキュ
ベートした。４日後、その溶液を１リットルの脱イオン
水に対して室温で４時間透析したが、水は１時間毎に取
り替え、Spectrapor Semi-Permeable Membranes （Ｍ．
Ｗ．カットオフ １２〜１４，０００）を用いた。
【００３８】２０時間の終わりに、この溶液を室温に加
熱して０．２ミクロンの硝酸セルロースフィルター（Wh
atman ）を通して濾過した。
【００３９】この手順は、高度にグリコ化したポリリジ
ン化合物を生成し、それを０．９％ＮａＣｌで希釈して
直線性セット（Linearity Set ）を得ることが出来る。
【００４０】値割り当てプロトコール 値割当のための基準試薬として Roche RoTAG plus を用
いて、フルクトサミン標準、正常及び異常対照並びに直
線性セットを、５００ｎｍにてRoche により詳述されて
いる指示に従って評価した。
【００４１】用いた測定器は、Gilford Stasar III（波
長５００ｎｍ及び温度３７℃で、ＡＢＳモード使用）で
あった。試薬容積は１．０ｍｌで、試料容積は１００μ
ｌであった。第一のＡＢＳ読みを３分にて及び、最終の
ＡＢＳ読みを５分にて行なった。
【００４２】この手順では、すべての試薬及び標準を室
温にし、分光測光計を３７℃に平衡化させ、脱イオン水
を用いて５００ｎｍにてゼロ点調節する。各試料につ
き、１．０ｍｌの試薬Ａ（又は試薬Ｂ）を試験管に分配
した。次いで、１００μｌの試料、標準又は対照を各試
験管に加えた。この反応混合物を混合して直ちにフロー
セル中に吸引した。吸引後に、３分及び５分にて吸光度
値を記録した。
【００４３】すべての試験について、３分及び５分にて
吸光度（ＡＢＳ）を下記式によって測定した。
【数３】
【数４】
【００４４】計算因子（Ｆ）を、標準の濃度を標準の正
味のデルタＡＢＳで割ることによって測定した。 例： Ｆ ＝ ３５０／正味のデルタＡＢＳ
【００４５】各試料及び対照の正味のデルタＡＢＳにＦ
を乗じることにより、各試料及び対照のフルクトサミン
濃度を下記式によって測定する。
【数５】
【００４６】このアッセイ系の直線性を、３００μモル
の較正物質及び種々の量のフルクトサミンを加えた５つ
のレベルのヒト血清のプールを用いて直線性についてア
ッセイした。表２及び図１に結果をまとめてある。
【表２】表２試薬の直線性 Cobas Mira上でアッセイ プロトコール：５００ｎｍ、３７℃、ＲＶ＝２００μ
ｌ、ＳＶ＝２０μｌ ３分及び５分にて吸光度を測定 実測の 正味の 実測値 理論値試料 デルタＡＢＳ ［μモル］ ［μモル］ ３００標準 ．０４１０ ３００ −−− １と５の混合 １ ．０３４８ ２５５ ２５５ １ ２ ．０６１４ ４４９ ４３９ [(3 ×1)+5] /4 ３ ．０８６３ ６３２ ６２３ （１＋５）／２ ４ ．１１１５ ８１６ ８０６ [1+(3 ×5)] /5 ５ ．１３５３ ９９０ ９９０ ５
【００４７】直線性／ダイナミックレンジ 蛋白質のグリコ化は、リジンのイプシロンアミノ基に生
じる。チャレンジに対するフルクトサミンレベルの直線
性を達成するために、グルコースをポリリジンと共にイ
ンキュベートした。各リジン残基は、グリコ化の潜在的
部位である。この濃縮したグリコ化ポリリジンを０．９
％ＮａＣｌで希釈して、表３に示すような６レベルのグ
リコ化ポリリジンを得た。
【表３】 表３ グリコ化ポリリジン希釈プロトコール 希釈 ＮａＣｌでの レベル＝ 希釈因子 １ １×グリコ化ポリリジン＋１９×ＮａＣｌ ．０５ ２ １×グリコ化ポリリジン＋ ９×ＮａＣｌ ．１０ ３ １×グリコ化ポリリジン＋ ３×ＮａＣｌ ．２５ ４ １×グリコ化ポリリジン＋ １×ＮａＣｌ ．５０ ５ １×グリコ化ポリリジン＋ １×ＮａＣｌ ．７５ ６ 希釈してないグリコ化ポリリジン（正味） １．００ レベル４（希釈因子．５０）＝７７８μモル（ Roche R
oTAGによる）
【００４８】表４及び図２に、この系が希釈した血清に
ついて機能性であることを確立する直線性の結果をまと
めてある。
【表４】表４ 直線性／ダイナミックレンジ Cobas Mira上でアッセイ ＭＡＳプロトコール：５００ｎｍ、３７℃、ＲＶ＝２０
０μｌ、ＳＶ＝２０μｌ ３分及び５分にて吸光度を測定 正味の フルクトサミン試料 希釈因子 デルタＡＢＳ ［μモル］ ３００標準 ／ ．０３９９ ３００ １ ．０５ ．００９３ ７０ ２ ．１０ ．０２１７ １６３ ３ ．２５ ．０５９０ ４４４ ４ ．５０ ．１１６３ ８７４ ５ ．７５ ．１７８４ １３４１ ６ １．００ ．２３１０ １７３７
【００４９】精度 （実施−実施間での）正確な使用及び実施内研究のため
に、Biocell Blood Bank Segments Poolに、２８０μモ
ル及び５００μモルのフルクトサミンのレベルまでグリ
コ化ヒト血清を加えた。表４に、実施−実施間の性能の
結果を列挙する。 表４ 実施−実施間性能 Cobas Mira上でアッセイ プロトコール：５００ｎｍ、３７℃、ＲＶ＝２００μ
ｌ、ＳＶ＝２０μｌ ３分及び５分にて吸光度を測定 標準：In-House ３００μモル １日目の単一較正に基づく 日々の値は、三重分析の平均である 日 ２８０μモル ５００μモル １ ２７２ ４９２ ２ ２７７ ５１３ ３ ２８８ ５０５ ４ ２８４ ４７８ ５ ２７０ ４８８ ─────────────────────────────────── Ｎ ５ ５ 最小値 ２７０ ４７８ 最大値 ２８８ ５１３ 平均値 ２７８ ４９５ 標準偏差 ７．７ １３．９ ＣＶ％ ２．８ ２．３ ───────────────────────────────────
【００５０】これらの結果は、２試薬系について優れて
いる。この系が少なくとも５日間較正を保持することも
又明白である。
【００５１】実施内性能も又、同じ２試料を用いて評価
した。表５にその結果をまとめてある。
【表５】表５ 実施内性能 Cobas Mira上にてアッセイ プロトコール：５００ｎｍ、３７℃、ＲＶ＝２００μ
ｌ、ＳＶ＝２０μｌ ３分及び５分から反応を測定 標準：３００μモル試料 反復 ２８０μモル ２９４ ２９３ ２８９ ２９７ ２８５ ２８２ ２７７ ２７２ ２９１ ２７２ ２９２ ２７６ ２８５ ３０４ ２８９ ２９４ ２９０ ２９０ ２８８ ２８１ ５００μモル ５０１ ４９１ ４９４ ５０４ ５１４ ５１１ ４９７ ５０４ ５１５ ５２３ ４９５ ４９４ ５０３ ５０７ ５１０ ５１１ ４７５ ５１５ ５２５ ４９８ ─────────────────────────────────── ２８０μモル ５００μモル Ｎ ２０ ２０ 最小値 ２７２ ４７５ 最大値 ３０４ ５２５ 平均値 ２８７ ５０４ 標準偏差 ８．４ １１．９ ＣＶ％ ２．９ ２．４ ─────────────────────────────────── 実施内精度は優秀である。
【００５２】相関 相関研究のために、１２２試料をアッセイした。 ８５ Biocell Blood Bank Segmentからの正常な患者 １８ 糖尿病患者 １０ ＬＲＲＭＣからの不規則的グリコ化試料 ９ グリコ化Biocell Poolの関連レベル
【００５３】各試料を三重にアッセイした。各試料を、
４℃に保持したフルクトサミンアッセイ及びRoche RoTA
G Plusを用いてアッセイした。その結果を表にして表６
に示す。
【表６】表６ 患者試料相関 フルクトサミン系（ＦＳ）対Ｒｏｃｈｅ Cobas Mira上で３７℃でアッセイ ＦＳ：ＲＶ＝２００μｌ、ＳＶ＝２０μｌ 波長 ５００ｎｍ 標準：３００μモル ３分及び５分にて吸光度を測定 ＲＯＣＨＥ：ＲＶ＝２００μｌ、標準偏差＝３０μｌ、
ＳＶ＝１０μｌ 波長 ５５０ｎｍ 標準：Roche ４４２μモル １０分及び１２分にて吸光度を測定 Ｒｏｃｈｅ ＦＳ正常試料 μモル μモル １ １９５ １７６ ２ １８８ １８４ ３ ２１６ ２４５ ４ １６５ １４９ ５ ２２０ １７８ ６ ２１６ ２３９ ７ ２１９ ２０９ ８ ２３４ ２６５ ９ ２１５ ２４５ １０ ２３２ ２４１ １１ ２２４ ２３４ １２ ２３１ ２３２ １３ ２４０ ２５０ １４ １７４ １６５ １５ ２４０ ２４７ １６ ２４０ １９７ １７ ２２９ ２０６ １８ ２０２ １９３ １９ ２０６ ２０２ ２０ ２２２ １９０ ２１ ２８２ ２６３ ２２ ２６２ ２４６ ２３ ２５１ ２１５ ２４ ２５２ ２１４ ２５ ２４５ １９４ ２６ ２７６ ２２０ ２７ １９６ １９８ ２８ ２３８ ２１８ ２９ ２５３ ２５９ ３０ ２１２ ２３１ ３１ ２１９ ２１１ ３２ ２１９ ２２６ ３３ ２３５ ２３７ ３４ １９２ ２０１ ３５ ２１０ ２３０ ３６ ２１２ ２２１ ３７ ２４０ ２２９ ３８ ２５３ ２５３ ３９ ２４４ ２６６ ４０ ２４２ ２４４ ４１ １７１ １８０ ４２ ２３３ ２５０ ４３ ２２８ ２３９ ４４ １９６ ２５０ ４５ ２０８ ２４２ ４６ ２０２ ２２０ ４７ ２０９ ２０９ ４８ ２５２ ２５８ ４９ ２４５ ２２７ ５０ １９１ ２０３ ５１ ２２２ ２４１ ５２ ２４６ ２４０ ５３ ４７３ ４９５ ５４ ２１４ ２１７ ５５ ２２５ ２３３ ５６ ２２６ ２１１ ５７ ２４４ ２２６ ５８ ２４３ ２６３ ５９ ２２６ ２６０ ６０ ２０８ ２２９ ６１ ２４３ ２３６ ６２ ２００ １９７ ６３ １７１ １６８ ６４ ２１５ ２１４ ６５ ２８４ ２１５ ６６ ２４８ ２７５ ６７ ２６９ ２８９ ６８ ２０３ ２０４ ６９ ２３４ ２３４ ７０ ２２２ ２２３ ７１ ２０９ ２４２ ７２ ２２７ ２１９ ７３ ２０３ ２１５ ７４ ２２７ ２４５ ７５ ２２５ ２３８ ７６ ２０９ ２０２ ７７ ２２９ ２０６ ７８ ２２４ ２１６ ７９ ２３０ ２５５ ８０ ２４７ ２０３ ８１ １８９ １５２ ８２ ２５１ １９８ ８３ ３４４ ３５７ ８４ １７１ １７４ ８５ ６１６ ６７１糖尿病試料 ８６ ３７５ ３６５ ８７ ２９５ ２７８ ８８ ３７４ ３７９ ８９ ２５４ ２５０ ９０ ３９７ ４５０ ９１ ２９１ ２７７ ９２ ３７７ ３８３ ９３ ３７７ ３８３ ９４ ３６７ ３５９ ９５ ２５０ ２４３ ９６ ３９５ ４３２ ９７ ２８３ ２７８ ９８ ３７８ ４００ ９９ ２８２ ２８３ １００ ３７６ ３９０ １０１ ２４４ ２３８ １０２ ３８６ ４４７ １０３ ２７８ ２６６グリコ化ＬＲＲＭＣ １０４ ２９１ ２５６ １０５ ４７３ ４７７ １０６ ３１０ ３４３ １０７ ３２７ ３６０ １０８ ４５１ ４７６ １０９ ５１３ ５４１ １１０ ３７１ ３３５ １１１ ４８９ ４８５ １１２ ２８６ ２６６ １１３ ３４５ ３４２グリコ化Biocell １１４ ２８６ ２６２ １１５ ４０３ ３８９ １１６ ５３４ ５１７ １１７ ６６８ ６７３ １１８ ７９９ ８３５ １１９ ９１７ ９３８ １２０ １１０２ １１００ １２１ １１８０ １１９６ １２２ １３０４ １３５７ ─────────────────────────────────── Ｎ １２２ １２２ 最小値 １６５ １４９ 最大値 １３０４ １３５７ 平均値 ３０１ ３０２ 標準偏差 １８５ １９２ ─────────────────────────────────── 直線的回帰 勾配 ＝ １．０３２８８３ 標準誤差 ＝ ０．０１１６１０ Ｙ切片 ＝ −８．６７４４５ 標準誤差 ＝ ２３．５７６２８ 相関係数 ＝ ０．９９２５０３
【００５４】図３及び４は、この発明の４℃のフルクト
サミン系とRoche RoTAG plusとの相関結果を示してお
り、これらの２つの系の優れた相関を確立するが、この
発明の系の方が、実質的に、一層早い回復である。
【００５５】ストレス試験 試薬Ａ及びＢ及び標準に４℃及び４７℃で３日間のスト
レスをかけた。次いで、各試薬を、Ａｉ、内性率（endo
genous rate ）について評価し及び、試薬キットを２０
患者試料の回復について評価した。表７にＡｉ分析及び
内性率の結果を列挙する。
【表７】表７ フルクトサミンストレス研究 − Ａｉ及び内性率 ４℃及び４７℃で３日間のストレスをかけた試薬Ａ及び
ＢをGilford Stasar III上で、５００ｎｍ、３７℃の反
応にてアッセイ ０分及び５分にて測定 試薬／温度 ＡＢＳ（０分） ＡＢＳ（５分） 試薬Ａ ４℃ ．０６０ ．０６２ 試薬Ａ ４７℃ ．３７３ ．３７５ 試薬Ｂ ４℃ ．０６８ ．０６９ 試薬Ｂ ４７℃ ．３８３ ．３８４
【００５６】Ａｉは、ストレスに応じて増加するが、許
容し得るままである。０〜５分の内性率は、．００２よ
り小さく、無視し得る。
【００５７】表８は、ストレス試薬をストレスをかけた
標準及び２０患者試料と共にアッセイした結果を示す。
【表８】表８ フルクトサミンストレスの研究 ４℃及び４７℃で３日間のストレスをかけた試薬Ａ及び
Ｂ 標準；３２０μモル（４℃及び４７℃で３日間のストレ
スをかけたもの） Cobas Mira上で、５００ｎｍ、３７℃、試薬容積２００
μｌ、試料容積２０μｌでアッセイ ３分及び５分にて吸光度を測定 患者の ４℃ ４７℃ ４７℃試料 μモル μモル 回復％ １ ２０２ ２３９ １１８ ２ ２３８ ２４７ １０４ ３ ２２２ ２２５ １０１ ４ ２４０ ２４２ １０１ ５ ２２３ ２２９ １０３ ６ １８５ １９４ １０５ ７ １８０ ２０４ １１３ ８ ２９２ ２５４ ８７ ９ １７０ １９２ １１３ １０ ６５０ ６１６ ９５ １１ ２８２ ２８０ ９９ １２ ５０１ ４６２ ９２ １３ ３３１ ３２５ ９３ １４ ３６６ ３７１ １０１ １５ ４８７ ４７１ ９７ １６ ５５５ ５３７ ９７ １７ ３６５ ３６８ １０１ １８ ４８６ ４８３ ９９ １９ ２７４ ２９１ １０６ ２０ ３５９ ３６６ １０２
【００５８】幾つかの場合において、４７℃でストレス
をかけたものが過剰回復しているが、殆どの場合におい
て、これらの回復は非常に良い。回復パーセントは、８
７〜１１８パーセントに及ぶ。安定性は、４７℃で３日
後において許容し得る。
【図面の簡単な説明】
【図１】この発明の２単一試薬フルクトサミンアッセイ
系の直線性を示す図である。
【図２】希釈血清についての直線性の保持を示す図であ
る。
【図３】この発明のフルクトサミンアッセイ系の性能と
ＲｏＴＡＧプラス（Roche 製造販売）との相関を示す図
である。
【図４】この発明のフルクトサミンアッセイ系の性能と
ＲｏＴＡＧプラス（Roche 製造販売）との相関を示す図
である。

Claims (13)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 (a) フルクトサミンを含む血清中のすべ
    ての反応性物質と反応して、約１０分より短い予め定め
    た時間内に、テトラゾリウム塩とフルクトサミン及び干
    渉物質との反応の結果、測定可能な第一の色変化を示す
    テトラゾリウム塩を含む第一のアルカリ性水性試薬、及
    び(b) 第一のアルカリ性水性試薬と同一であるが、フル
    クトサミンのテトラゾリウム塩との反応を阻止してフル
    クトサミン以外の反応性物質によるテトラゾリウム塩の
    還元を生じ、第一の試薬と同じ前もって選択した時間で
    測定可能な第二の色変化を示して、フルクトサミンと反
    応する第一のアルカリ性水性試薬を用いて生じる色変化
    及び第二のアルカリ性水性試薬を用いて生じる色変化の
    差によって血清中のフルクトサミン濃度の測定を可能に
    する物質を含む第二の試薬（各々は、同量の血清につい
    て且つ同一の前もって選択した時間後における色変化で
    ある）を含む、血清中のフルクトサミンの測定のための
    試薬系。
  2. 【請求項２】 前記の第一及び第二のアルカリ性水性試
    薬と共に用いたときに、色変化の差から血清試料中のフ
    ルクトサミン濃度を計算するために用いる乗数として用
    いる因子の測定を可能にする予め定めた量のフルクトサ
    ミンを含む液体標準と組合せた、請求項１に記載の試薬
    系。
  3. 【請求項３】 (a) 約０．１〜０．４モルの濃度で存在
    する炭酸塩緩衝剤、約０．１〜５ミリモルの濃度で存在
    する血清中のフルクトサミン及び干渉物質により還元さ
    れるテトラゾリウム塩、約０．１〜１モルの濃度の尿
    素、約０．１〜４％（ｖ／ｖ）の濃度のオクチルフェノ
    キシポリエトキシルエタノール、並びに０〜３％ｖ／ｖ
    エトキシル化ノニルフェノールの水溶液である第一の液
    体試薬（該溶液は、約８．５〜１１．５のｐＨを有す
    る）、及び(b) 第一の試薬と同一で、更にホウ酸を約
    ０．０５〜１モルの濃度で含む第二の液体試薬を含む、
    請求項１又は２に記載の血清中のフルクトサミンの測定
    のための試薬系。
  4. 【請求項４】 テトラゾリウム塩がｐ−ヨードニトロテ
    トラゾリウムバイオレットである、請求項１〜３の何れ
    か１つに記載の試薬系。
  5. 【請求項５】 (a) ０．５ミリモル ｐ−ヨードニトロ
    テトラゾリウムバイオレット、約０．１モル 炭酸ナト
    リウム一水和物、約０．１モル 重炭酸ナトリウム、約
    ０．１モル 尿素、約１％（ｖ／ｖ）オクチルフェノキ
    シポリエトキシエタノール及び１％ エトキシル化ノニ
    ルフェノールを脱イオン水中に溶解して含み且つｐＨ約
    １１を有する第一の液体試薬、及び(b) 第一の試薬と同
    一であるが、更に約０．１２モル ホウ酸を含み、やは
    り約１１のｐＨを有する第二の液体試薬（該試薬系は、
    ２〜１０℃で少なくとも１年間安定であり、協同して３
    ７℃で１０分以内のフルクトサミンアッセイの達成を可
    能にする）を含む、前記の請求項の何れか１つに記載の
    血清中のフルクトサミンの測定のための試薬系。
  6. 【請求項６】 前記の第一及び第二のアルカリ性水性試
    薬と共に用いた場合に、色変化の差から血清試料中のフ
    ルクトサミン濃度を計算するために用いる乗数として用
    いられる因子の測定を可能にする予め定めた量のフルク
    トサミンを含む液体標準と組合せた、前記の請求項の何
    れか１つに記載の試薬系。
  7. 【請求項７】 標準が約３００〜５００μモルの範囲の
    フルクトサミン値を与える、前記の請求項の何れか１つ
    に記載の試薬系。
  8. 【請求項８】 更に、液体の正常レベルのフルクトサミ
    ン対照及び液体の高レベルのフルクトサミン対照を含
    む、請求項１〜７の何れか１つに記載のアッセイ系。
  9. 【請求項９】 更に、アッセイ時に２２９〜２８１μモ
    ルのフルクトサミン範囲を有する液体の正常レベルの対
    照及び４５７〜５５９μモルの液体の高レベル対照を含
    む、請求項８に記載のアッセイ系。
  10. 【請求項１０】 (a) 血清中のフルクトサミン及び他の
    干渉物質によるテトラゾリウム塩の還元の結果色変化を
    示す液体試薬の吸光度を予め定めた２時点にて測定し
    （同量で加えた試薬の吸光度をそれぞれ１０分以内に３
    ７℃で測定する）、(b) フルクトサミンと色生成テトラ
    ゾリウム塩との反応を阻止する物質を含むためにフルク
    トサミン以外の血清中の干渉物質による同じテトラゾリ
    ウム塩の還元により色変化を生じる第二の液体試薬を含
    む同量の前記の血清において、吸光度の変化を予め定め
    た同一の時間間隔にて測定し、及び(c) 血清中のフルク
    トサミン濃度を、フルクトサミンと反応する第一の試薬
    及びフルクトサミンとの反応を阻止された第二の試薬を
    用いて生じた色変化の差の関数として測定することを含
    む、血清中のフルクトサミンを測定するための方法。
  11. 【請求項１１】 (a) 第一の血清試料に、約０．１〜
    ０．４モルの濃度で存在する炭酸塩緩衝剤、約０．１〜
    ４％ｖ／ｖの濃度のオクチルフェノキシポリエトキシエ
    タノール１００％（容積）の約０．１〜１モルの濃度で
    存在する血清中のフルクトサミン及び干渉物質により還
    元されるテトラゾリウム塩、並びに０〜３％ｖ／ｖ エ
    トキシル化ノニルフェノールの水溶液である第一の試薬
    を加え（該溶液は、約８．５〜１１．５のｐＨを有し、
    血清を加えた試薬の吸光度の変化を５００ｎｍで試薬の
    添加から２〜３分及び吸光度の第一の測定の２分後にて
    測定する）、(b) 第二の血清の試料及び第一の試薬と同
    体積且つ同じ内容で更にホウ酸を約０．０５〜１モルの
    濃度で含むの第二の液体試薬を用いて、工程(a) の手順
    を繰り返し、及び(c) 工程(a) における吸光度の変化と
    工程(b) における吸光度の変化との差から血清中のフル
    クトサミン濃度を測定することを含む、請求項１０に記
    載の方法。
  12. 【請求項１２】 テトラゾリウム塩が、ｐ−ヨードニト
    ロテトラゾリウムバイオレットである、請求項１０又は
    １１に記載の方法。
  13. 【請求項１３】 (a) 予め定めた量の血清に、０．５ミ
    リモルのｐ−ヨードニトロテトラゾリウムバイオレッ
    ト、約０．１モルの炭酸ナトリウム一水和物、約０．１
    モルの重炭酸ナトリウム、約０．１モルの尿素、約１％
    ｖ／ｖのオクチルフェノキシポリエチレンエタノール１
    ００％溶液及び１％ｗ／ｖエトキシル化ノニルフェノー
    ルを脱イオン水中に溶解してを含み約１１のｐＨを有す
    る第一の液体試薬を加え及び、第一の液体試薬を血清に
    加えた２分及び４分後又は３分及び５分後に３７℃で５
    ００ｎｍにて吸光度を測定し、(b) 第一の試料と同量の
    他の血清試料に、第一の試薬と体積及び内容が同一で更
    に約０．１２モルのホウ酸を含み且つ約１１のｐＨを有
    する第二の液体試薬を加えることにより工程(a) を繰り
    返し、及び(c) 工程(a) における吸光度測定の差及び工
    程(b) における吸光度の差を用いて血清のフルクトサミ
    ン含量を測定することを含む、請求項１０、１１又は１
    ２の何れか１つに記載の方法。
JP5159981A 1992-06-08 1993-06-07 フルクトサミン用試薬及び較正システム Withdrawn JPH06308129A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/895,606 US5312760A (en) 1992-06-08 1992-06-08 Fructosamine reagent and calibrator system
US895606 1992-06-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH06308129A true JPH06308129A (ja) 1994-11-04

Family

ID=25404756

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP5159981A Withdrawn JPH06308129A (ja) 1992-06-08 1993-06-07 フルクトサミン用試薬及び較正システム

Country Status (7)

Country Link
US (2) US5312760A (ja)
EP (1) EP0573942B1 (ja)
JP (1) JPH06308129A (ja)
AT (1) ATE172303T1 (ja)
CA (1) CA2097471A1 (ja)
DE (1) DE69321520T2 (ja)
ES (1) ES2123590T3 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3239709A1 (en) 2016-04-25 2017-11-01 ARKRAY, Inc. Method of analyzing glycated protein, analysis reagent, analysis kit, and test piece for analysis

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2127679A1 (en) * 1993-07-27 1995-01-28 Ewald Vorberg Set of reagents for determining the fructosamine content
US5639672A (en) * 1995-10-16 1997-06-17 Lxn Corporation Electrochemical determination of fructosamine
WO1998016255A2 (en) * 1996-10-15 1998-04-23 Navix, Inc. Stabilized conjugates of uncomplexed subunits of multimeric proteins
JP4879441B2 (ja) * 2000-05-23 2012-02-22 広司 早出 糖化蛋白質の測定キット
US6538104B2 (en) * 2001-04-27 2003-03-25 Medical Analysis Systems, Inc. Stabilization of cardiac troponin I subunits and complexes
DE60314990T2 (de) * 2002-01-31 2008-04-30 Arkray, Inc. Verfahren zur quantifizierung von glykosyliertem protein unter verwendung einer redoxreaktion sowie eines quantifizierungskits
CN110398586B (zh) * 2019-04-02 2022-07-22 湖北科技学院 果糖胺测定试剂盒

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4371374A (en) * 1980-11-17 1983-02-01 The Rockefeller University Monitoring metabolic control in diabetic patients by measuring glycosylated amino acids and peptides in urine
NZ199380A (en) * 1981-12-23 1986-08-08 J R Baker Determination of serum glucose levels in blood samples
DE3620817A1 (de) * 1986-06-21 1987-12-23 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur spezifischen bestimmung des serumfructosamingehalts sowie hierfuer geeignetes reagenzgemisch
US5110745A (en) * 1989-06-01 1992-05-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of detecting glycated proteins
GB8913586D0 (en) * 1989-06-13 1989-08-02 Technicol Limited A method of determining the glycosylated protein level of a sample and an apparatus for use in the method
US4956301A (en) * 1989-11-02 1990-09-11 Miles Inc. Test device and method of assaying for fructosamines
GB9024771D0 (en) * 1990-11-14 1991-01-02 Axis Research Assay

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3239709A1 (en) 2016-04-25 2017-11-01 ARKRAY, Inc. Method of analyzing glycated protein, analysis reagent, analysis kit, and test piece for analysis

Also Published As

Publication number Publication date
DE69321520D1 (de) 1998-11-19
US5556788A (en) 1996-09-17
DE69321520T2 (de) 1999-03-04
US5312760A (en) 1994-05-17
ES2123590T3 (es) 1999-01-16
EP0573942A1 (en) 1993-12-15
CA2097471A1 (en) 1993-12-09
EP0573942B1 (en) 1998-10-14
ATE172303T1 (de) 1998-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US3964865A (en) Lyophilized human hemoglobin standard for colorimetric determination of total hemoglobin
US3979262A (en) Compositions and methods for the determination of oxidizing agents
EP0517914B1 (en) Reagent and methods for calcium determination
EP0575515B1 (en) Stabilization of enzyme containing reagent composition for determination of an analyte
EP0054096B1 (en) Method of forming stabilized urease solutions
WO1993008684A1 (en) Process and device for measuring magnesium in biological fluids and method of preparing the device
JPH06308129A (ja) フルクトサミン用試薬及び較正システム
JPS6342228B2 (ja)
US5866352A (en) Kit for fructosamine determination
EP0586397B1 (en) Improved method and reagent for determination of an analyte
Eckfeldt et al. Kinetic ethylene glycol assay with use of yeast alcohol dehydrogenase.
US4330296A (en) Albumin reagent and assay
Zijlstra Standardisation of haemoglobinometry: history and new challenges
US4030885A (en) Bilirubin determination
Kamoun et al. Ultramicromethod for determination of plasma uric acid.
EP0335136B1 (en) Calcium assay reagent
Mazzachi et al. A manual spectrophotometric method for the measurement of serum sodium and potassium by enzyme activation
JPH02122267A (ja) ヘモグロビン定量試薬キット及びそれを用いるヘモグロビン定量方法
JP4129704B2 (ja) ロイシンアミノペプチダーゼ活性測定用試薬
Passey et al. Evaluation of three methods for the measurement of urea nitrogen in serum as used on six instruments
Chung et al. Comparison of two methods for determining amylase activity in serum and urine
US20020146630A1 (en) Non-oxidizable bilirubin substitutes and uses therefor
JPH0772157A (ja) 糖化蛋白の定量方法およびその定量用キット
CA1167747A (en) Stabilized enzymic solutions for determining urea
EP0886139A1 (en) A reagent for measurement and a measurement method

Legal Events

Date Code Title Description
A300 Application deemed to be withdrawn because no request for examination was validly filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300

Effective date: 20000905