JPH06253856A - ムタロターゼ遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】ムタロターゼの遺伝情報を担うＤＮＡを提供す
る。 【構成】豚腎臓由来の配列番号：１に示すアミノ酸をコ
ードするＤＮＡを提供する。これによりムタロターゼを
安価に大量に生産する事ができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ムタロターゼ（以下、
ＭＵＴという）の遺伝情報を担うＤＮＡに関する。

【０００２】更に詳細には、豚腎臓由来のＭＵＴの遺伝
情報を担うＤＮＡを提供するものでり、本発明により、
各種の発現系によるムタロターゼの生産が可能である。

【０００３】このようにして生産されたＭＵＴは、血液
中のグルコース定量への応用に用いられている。最近に
なってグルコースの製造に際しても応用について可能で
あることが見いだされた（特開平3-139289）。

【０００４】

【従来の技術】ＭＵＴはアルドース類のα型とβ型との
間の相互変換反応を触媒する酵素として古くから知られ
ている［バイオケミカル ジャーナル（Biochem. J.）4
5巻，584頁（1948）］。その後、微生物、植物、鳥類、
哺乳類等に広く分布していることが知られ、特に哺乳類
である牛、豚、羊、兎、ラット等の腎臓や肝臓、腸に含
まれているＭＵＴについてはその性質についての研究が
なされている。

【０００５】とりわけ、豚腎臓由来のＭＵＴについては
その精製法及び諸性質については明らかにされている
［ジャーナル オブ バイオケミストリ（J. Bioche
m.）91巻、1889-1906（1982）］。即ち、分子量約39,00
0の単量体で至適pHは6.5〜7.5、至適温度は30〜37℃、
α−Ｄ−グルコースに対するKm値は19mMであり、糖鎖な
どの修飾アミノ酸はなく、針状ではあるが結晶化されて
いる。

【０００６】しかしながら、ＭＵＴは従来より豚腎臓か
ら抽出し精製して製造されていたために、その供給面や
価格面から大きな問題点を抱えていた。

【０００７】アシネトバクター・カルコアセティカス
（Acinetobacter calcoaceticus）由来のＭＵＴ遺伝子
についてはクローニングされ、その一次構造が報告され
ている［ヌクレイック アシッズ リサーチ（Nucleic
Acids Res.）14巻，4309-4323頁（1986）］。

【０００８】しかし、豚腎臓由来のＭＵＴ遺伝子につい
ての一次構造の解析については報告されていない。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明者等は、上記課
題を解決すべく鋭意研究の結果、豚腎臓由来のＭＵＴを
コードするＤＮＡを精製・単離し、その塩基配列を決定
することに成功した。更に該遺伝子は各種発現系に組み
込んでＭＵＴを生産することが可能であることを確認
し、本発明を完成した。

【００１０】かかる成果に基づいてＭＵＴの効率的な大
量生産への途を開き、さらには、蛋白質工学によるＭＵ
Ｔの特異性の改変への途をも開いた。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明は、ＭＵＴ遺伝子
をコードするＤＮＡに関するものであり、該遺伝子を組
み込んだ各種形質転換体を培養することによるＭＵＴの
製造が可能である。

【００１２】即ち、配列番号：１に示すアミノ酸配列を
コードする塩基配列を含むＤＮＡを提供するものであ
る。かかるＤＮＡは、各アミノ酸に対応する遺伝子コド
ン使用により、種々の塩基配列を包含し得る。

【００１３】これらの塩基配列は、遺伝子発現系の諸要
素、例えば宿主細胞の種類等に応じた優先コドン等によ
って当業者が容易に選択し得るものである。

【００１４】これらの遺伝子はＭＵＴを含有する哺乳類
の各組織より以下の実施例に述べる方法により単離でき
る。哺乳類の各組織としては、ＭＵＴを含有するもので
あればいずれでも良いが、例えば豚腎臓等が使用でき
る。

【００１５】以下、本発明を豚腎臓由来のＭＵＴの場合
を例にとり、実施例を参照しながら詳細に説明する。

【００１６】尚、その他の組織由来のＭＵＴの場合につ
いても、本発明と同様の過程を踏み、容易に実施でき
る。よって、本発明は以下に記載する実施例に限定され
るものではない。

【００１７】なお、以下の実施例においては、以下の方
法によりＭＵＴ活性を測定した。ＭＵＴ活性測定法 酵素活性は、147mM EDTA・2Na-NaOH緩衝液（pH7.4）1.6m
l、発色剤（25mg 4-アミノアンチピリン，150mg フェ
ノールを水に溶かして100mlに定容したもの）0.5ml、グ
ルコースオキシダーゼ溶液［2000単位/ml(100mM EDTA・2
Na-NaOH緩衝液（pH7.4）］0.5ml、パーオキシダーゼ溶
液［1000単位/ml(100mM EDTA・2Na-NaOH緩衝液（pH7.
4）］0.5ml、酵素溶液 0.05mlからなる混合液3.15mlを1
0℃で５分間保持した後、0.5% α−Ｄ−グルコース溶液
（反応直前にα−Ｄ−グルコース 20mgに水４mlを加え
て調製したもの）を0.2ml加え、反応を開始させた。

【００１８】生成するβ−Ｄ−グルコースを反応混合液
中のグルコースオキシダーゼで酸化し、その際に生じる
過酸化水素をパーオキシダーゼと発色剤を用いて発色さ
せ、505nmの吸光度の増加を経時的に測定する。この経
時的変化から単位時間当たりの吸光度の増加を求めた。
盲検として、酵素溶液の代わりにみずを用いて測定す
る。上記反応条件において１分間に１μmolのα−グル
コースをβ−グルコースに変換するのに要する酵素量を
１単位とする。

【００１９】

【実施例】

実施例１ ＭＵＴ蛋白のアミノ末端部分の配列 ムタロターゼ（豚腎臓由来：天野製薬製）を逆相HPLCで
精製後、直接気相シークエンサーに供したが（２nmol使
用）、蛋白由来の配列を見いだすことはできなかった。
また、ピリジルエチル化のもの（約２nmol）も同様な結
果が得られため、本酵素のＮ末端アミノ酸は閉塞されて
いるものと推定した。

【００２０】 ＭＵＴ蛋白をプロテア−ゼで切断した
ペプチドのアミノ酸配列の決定 ピリジルエチル化したムタロターゼを４Ｍ尿素を含む0.
01Ｍトリス緩衝液（pH9.0）に溶解し、約1/100（mol/mo
l）のリジル エンドペプチダーゼを加え、30℃21時間
消化した後、生じたペプチドをAsahipak C8P-50カラム
（旭化成工業製）を用いて0.1％ TFA-CH₃CNの溶媒系で
分離した。ペプチドはHPLCの溶出順にLY-１〜LY-15と番
号をつけた。

【００２１】各ペプチドについて配列解析を行った。そ
の結果、LY-８がエドマン反応による解析が不可能なこ
とからＮ末端配列を含むペプチドであると推測された。

【００２２】アミノ酸分析の結果、LY-８はアルギニン
残基を１つ含んだ約20個のアミノ酸からなることが確認
された。よって、トリプシンによる二次分解によってア
ルギニンを含まないペプチド、即ちLY-８のＣ末端側の
ペプチドはエドマン法に従って決定し、Ｎ末端側につい
ては質量分析法によって解析してアミノ酸配列を決定し
た。（配列番号：２）

【００２３】尚、LY-９、LY-10、LY-15については以下
に従って全一次構造を決定した。 (1) LY-９のトリプシンによる二次分解並びにペプチド
の調製と配列決定 LY-９ペプチド画分を濃縮乾固後、２Ｍ尿素を含む0.1Ｍ
リン酸緩衝液（pH8.0）に溶解し、約1/40（mol/mol）の
トリプシンを加え、30℃、１時間消化した後、生じたペ
プチドをFinepak SIL3000 C₁₃-t7カラム（日本分光製）
を用いて0.1 TFA-CH₃CNの溶媒系で分離し、プロテイン
シークエンサーによってそのアミノ酸配列を決定した。
（配列番号：３）

【００２４】(2) LY-10ペプチドのV8プロテアーゼによ
る二次分解並びにペプチドの調製と配列決定 LY-10ペプチド画分を濃縮乾固後、２Ｍ尿素を含む0.1Ｍ
炭酸水素アンモニウム溶液（pH7.8）に溶解し、約1/40
（mol/mol）のV8プロテア−ゼ（Staphylococcus aureus
由来：ベ−リンガ−・マンハイム製）を加え、30℃、２
時間消化した後、生じたペプチドを(1)と同様にして分
離し、プロテインシークエンサーによってそのアミノ酸
配列を決定した。（配列番号：４）

【００２５】(3) LY-15ペプチドの配列決定 アミノ酸分析の結果から約80個のアミノ酸からなること
が考えられたため、種々のプロテアーゼ（キモトリプシ
ン、エンドペプチダーゼ、V8プロテア−ゼ）による分解
によって(1)、(2)と同様にしてアミノ酸配列を決定し
た。（配列番号：５）

【００２６】実施例２ 全ＲＮＡの調製 豚腎臓（死後直ちに摘出し迅速に約２cm角に切断後、液
体窒素中において凍結し、-80℃において保存しておい
たもの）からグアニジュウム／塩化セシュウム法〔［バ
イオケミストリ（Biochemistry），13，2633（197
4）］、［サイエンス（Science），196，1313（197
7）］、［モレキュラー クローニング（Molecular Clo
ning）（1982）］〕従って全ＲＮＡを抽出した。

【００２７】即ち、-80℃において保存しておいた約２c
m角の豚腎臓を凍結させたままハンマーで粉砕し、さら
に乳鉢と乳棒を用いて粉状にしたものを10mlのＤ溶液
（４Ｍグアニジンチオシアネ−ト、25mM クエン酸ナト
リウム、0.1％ メルカプトエタノール）の入ったファ
ルコンチューブに加えすばやく混合させた。これをポリ
トロンでホモジナイズした後、１mlの２Ｍ 酢酸ナトリ
ウム（pH4.0）、10mlのフェノール（TE飽和）、２mlの
クロロホルム：イソアミルアルコール混液（49：１）を
順次加え混合し、10秒間激しく振りその後15分間氷冷し
たものを遠心分離（2500×ｇ、40分、４℃）した。水層
を別のファルコンチューブに移し、等量のフェノール／
クロロホルム（TE飽和）を加え混合したものを遠心分離
（2500×ｇ、40分、４℃）した（この操作を４回行っ
た）。

【００２８】水層を別のファルコンチューブに移し、等
量のイソプロパノールを加え混合し、−20℃で60分間静
置後遠心分離（2500×ｇ、40℃、４℃）した。上清を除
去し、沈殿を500μｌのＴＥに溶解し200μｌの塩化リチ
ウムを加え攪拌後、−20℃で２時間静置し遠心分離（10
000×ｇ、15分、４℃）した。上清を除去した後、沈殿
を400μｌのＴＥに溶解しエタノール沈殿を行い70％エ
タノールで洗浄後51μｌの滅菌水に溶解したものを全Ｒ
ＮＡとした。尚、最終的に得られた全ＲＮＡ量は約1.03
mgであった。

【００２９】 poly(A)⁺ＲＮＡの単離 上記で得られた全ＲＮＡからOligotex-dt30（日本合成
ゴム）を用いてpoly(A)⁺ＲＮＡを単離した。即ち上記で
得られた400μｇの全ＲＮＡに対して100μｌのOligotex
-dt30を用いた。手順は添付のプロトコールに従っ
た。。この結果7.42μgのpoly(A)⁺ＲＮＡを回収した。

【００３０】 cDNAの合成およびライブラリーの作成 で得られたpoly(A)⁺ＲＮＡからcDNA合成システム・プ
ラス（Amersham）を使用してcDNAの合成を行った。即
ち、一本鎖目の合成にはOligo dTをプライマーとして用
い、RNaseH処理により生じたRNAフラグメントを二本鎖
目の合成のプライマーとした。次に、cDNAライブラリー
の作成にはアダプターライゲーションを用いるλgt10
（EcoRIでフォスファターゼ処理したもの）を用いた。
但し、パッケージングにはGigapack Gold（stratagem
e）を、アダプターにはEcoRI-NotI-BamHIアダプター
（宝酒造）を使用した。

【００３１】指示菌にNM514を用いたプレーティングに
より３×10⁵pfuのライブラリーが作成されたことが確認
された。

【００３２】 オリゴヌクレオチドプローブによるス
クリーニング 実施例１において部分的に決定されたアミノ酸配列から
以下に示す38merのミックスプローブ（MUT-2）を作成
し、スクリーニングを行った。

【００３３】 A A C C C C C C C CA -GA -TT -CA -ATI-AA -GGI-TT -GAT-CA -AA -TT -TG (I:イノシン) G G T T T T T T T

【００３４】宿主にNM514を用いてλgt10組換え体ファ
ージをプレーティングした。次にプラークの生じたプレ
ートにナイロンフィルターをのせ、しばらく放置した
後、アルカリ変性液（0.5Ｍ NaOH、1.5Ｍ NaCl）を浸
したろ紙および中和液（0.5ＭTris-HCl pH8.0、1.5Ｍ
NaCl）を浸したろ紙の上に順次フィルターを移し、そ
れぞれ約５分間放置する。

【００３５】そのフィルターを２×SSC（0.3Ｍ NaCl、
30mM クエン酸）に浸して洗浄し、過剰の水分をペーパ
ータオルの上に移して除きトランスイルミネーターで約
３分間紫外線を照射しフィルターにDNAを固定する。DNA
を固定したフィルターをハイブリダイゼーションパック
（コスモバイオ）に入れ三方をシールし、ナイロンフィ
ルター100cm²につき５mlのRapid Hybridization溶液
（５×Denhard's、５×SSPE、0.1％ SDS、100μg/ml 変
性DNA）を入れ入口をシールする。

【００３６】シールしたものを65℃で15分以上インキュ
ベートする。これにγ³²Pで末端をラベルした合成オリ
ゴヌクレオチド液（50μCi、10μｌ）を加え空気、気泡
を追い出し内部の液が均一に行き渡るように混合する。
これを52℃で一晩振盪しながらインキュベートした。次
にこのインキュベートしたフィルターを２×SSC-0.1%SD
Sで52℃、30分間振盪し洗浄を行った（３回）。

【００３７】フィルターを乾燥後、Ｘ線フィルムに−80
℃で一晩感光し現像を行いシグナルの検出を行った。こ
れを７枚の角型プレート（一枚につき約１×10⁴個のプ
ラークを作らせた）で行ったところ５個の陽性プラーク
（M1、M2、M3、M4、M5）を得た。

【００３８】そこで陽性のプラーク部分を、周辺を含め
寒天片ごと切り抜き一滴のクロロホルムを含むSM（１m
l）に懸濁し、４℃で保存した。これをSMで1000倍に希
釈したものを１μｌプレーディングし二次スクリーニン
グ（プレート一枚につき約1000個のプラークを作らせ
た。）を行ったところ、５種類のプレートいずれからも
陽性を示す結果が得られた。尚、プラークリフトおよび
合成オリゴヌクレオチドプローブによる検出は一次スク
リーニングに準じて行った。

【００３９】陽性のシングルプラークをM3のプレートか
らは１個、M1、M2、M4及びM5のプレートからはそれぞれ
２個ずつ（M1-A、M1-B、M2-A、M2-B、M4-A、M4-B、M5-
A、M5-B）の計９個を竹串で拾い、20μlのクロロホルム
を含むSM（0.5ml）に懸濁し、４℃で保存した。これと
は別にそれぞれのシングルプラークを竹串で拾い、0.5m
lの滅菌水に懸濁し、−20℃で保存しPCRのテンプレート
とした。

【００４０】 挿入断片長の確認 ９個の陽性クローンについて、λgt10ベクターアームに
両端に特異的なプライマー（λgt10 Praimer(forward,
reverse)：宝酒造）を用いたPCRにより挿入断片長の確
認を試みたところM1-A、M1-B、M4-A及びM4-Bの挿入断片
は600 bpと決定されたが他についてはDNAの増幅はみら
れず確認できなかった。PCRには、１ngの鋳型DNAを供
し、下記の反応サイクルを25回繰り返した。

【００４１】94℃ １分 55℃ ２分 72℃ ３分

【００４２】確認できなかったプラークについては、プ
レートアッセイ法を用いてDNAの調製を行った。得られ
たDNAについて、EcoRI及びNotIによる挿入DNAの切り出
しを行ったがどちらも切断されなかった。ついで、λgt
10 primer（forward、reverse）によるPCRを行い、アガ
ロース電気泳動に供した。

【００４３】その結果、M2-A、M2-Bでは1.5kb、M3及びM
5-Aについては2.5kb付近にバンドが得られた。以上によ
り、M1-A及びM1-B、M2-A及びM2-B、M4-A及びM4-Bはそれ
ぞれ同一のDNAと考えられたためこれらは区別しないこ
ととする。

【００４４】 M2のBluescript II(SK+,KS+)へのサブ
クローニングHae IIIを用いて得られた切断フラグメントを低融点アガ
ロースを用いた電気泳動後、切り抜き、抽出を行ったも
のをSmaI処理を行ったBluescript II SK+に連結した。
E. coli JM109コンピテントセルに形質転換、IPTGおよ
びX-galを含むLB寒天培地にプレーティングし、37℃で
一晩培養した。生じた白色の半透明コロニーを回収し、
２mlの２×YTに接種した。

【００４５】５時間培養後、アルカリ溶菌法により複製
型（RF）DNAを調製し、適当な制限酵素を用いて切断
し、挿入DNAの断片長を確認した。いくつかのクローン
に関しては、ヘルパーファージM13KO7の感染で産生する
ファージ粒子よりssDNAの調製を行った。これを蛍光標
識されたユニバーザルプライマー（-21M13,ABI社製）を
用いたサンガー法［Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74,
5483-5467(1977)］およびDNAシークエンサー370A（ABI
社製）を用いて塩基配列の解析を行った。

【００４６】その結果、M2のHaeIII断片のうちの１つか
らプローブ配列を含むムタロターゼ部分配列と相同性の
ある配列が見いだされた。よって、M2をムタロターゼ遺
伝子をコードするクローンであると判断した。

【００４７】M2のPCRにより増幅させたDNAをEcoRI、Not
IおよびBamHIによる切断を行い生じるフラグメントの確
認を行い、全長を含むと思われるフラグメントを生じる
EcoRIを用いて切断を行い、EcoRI処理したBluescript I
I SK+に連結し前述の場合と同様にJM109に形質転換し複
製型（RF）DNAの調製を行った。

【００４８】これをマルチクローニングサイトに切断サ
イトがあるいくつかの制限酵素によって切断して制限酵
素地図を作成した。（図１に示す）

【００４９】それぞれの制限酵素で切断した種々のデリ
ーションクローンを作成し、それを適当な処理をしたBl
uescript IIに連結し、JM109に形質転換後、塩基配列を
解析した。解析には前述と同様に蛍光標識されたサンガ
ー法及びDNAシークエンサー370Aを用いた。

【００５０】これらの作業により、M2の全塩基配列（配
列番号：６）が決定され、その結果1434bpからなること
が確認された。求められた塩基配列は、ムタロターゼの
オープンリーディングフレーム全域を含んでいると考え
られ、これからアミノ酸配列を推定したところ実施例１
で求めた部分的なアミノ酸配列と完全な一致を示した。

【００５１】

【発明の効果】本発明によりムタロターゼは安価に且つ
大量に生産する方法が確立された。

【００５２】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：３４１ 配列の型：アミノ酸 配列 Val Ser Val Thr Arg Ser Val Phe Gly Asp Leu Pro Ser Gly Ala 15 Gly Thr Val Glu Lys Phe Gln Leu Gln Ser Asp Gln Leu Arg Val 30 Asp Ile Ile Ser Trp Gly Cys Thr Ile Thr Ala Leu Glu Val Lys 45 Asp Arg Gln Gly Arg Ala Ser Asp Val Val Leu Gly Phe Ala Glu 60 Leu Lys Glu Tyr Leu Gln Lys His Pro Tyr Phe Gly Ala Val Val 75 Gly Arg Val Ala Asn Arg Ile Ala Lys Gly Thr Phe Thr Leu Asp 90 Gly Lys Glu Tyr Lys Leu Ala Ile Asn Asn Gly Pro Asn Ser Leu 105 His Gly Gly Val Arg Gly Phe Asp Lys Val Leu Trp Thr Pro Arg 120 Val Leu Ser Asn Gly Ile Glu Phe Ser Arg Val Ser Pro Asp Gly 135 Glu Glu Gly Tyr Pro Gly Glu Leu Lys Val Trp Val Thr Tyr Thr 150 Leu Asp Gly Gly Glu Leu Val Val Asn Tyr Arg Ala Gln Ala Ser 165 Gln Thr Thr Pro Val Asn Leu Thr Asn His Ser Tyr Phe Asn Leu 180 Ala Gly Gln Gly Ser Pro Asn Ile Tyr Asp His Glu Val Thr Ile 195 Glu Ala Asp Ala Phe Leu Pro Val Asp Glu Thr Leu Ile Pro Thr 210 Gly Glu Ile Ala Pro Val Gln Gly Thr Ala Phe Asp Leu Arg Lys 225 Pro Val Glu Leu Gly Lys His Leu Gln Glu Phe His Ile Asn Gly 240 Phe Asp His Asn Phe Cys Leu Lys Arg Ser Lys Glu Lys Gln Phe 255 Cys Ala Arg Val His His Ala Gly Ser Gly Arg Val Leu Glu Val 270 Tyr Thr Thr Gln Pro Gly Ile Gln Phe Tyr Thr Gly Asn Phe Leu 285 Asp Gly Thr Leu Lys Gly Lys Thr Gly Ala Val Tyr Pro Lys His 300 Ser Gly Phe Cys Leu Glu Thr Gln Asn Trp Pro Asn Ala Val Asn 315 Gln Pro His Phe Pro Pro Val Leu Leu Lys Pro Gly Glu Glu Tyr 330 Asn His Thr Thr Trp Phe Val Phe Ser Val Ala 341

【００５３】配列番号：２ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 配列 Val Ser Val Thr Arg Ser Val Phe Gly Asp Leu Pro Ser Gly Ala 15 Gly Thr Val Glu Lys 20

【００５４】配列番号：３ 配列の長さ：３０ 配列の型：アミノ酸 配列 Val Leu Trp Thr Pro Arg Val Leu Ser Asn Gly Ile Glu Phe Ser 15 Arg Val Ser Pro Asp Gly Glu Glu Gly Tyr Pro Gly Glu Leu Lys 30

【００５５】配列番号：４ 配列の長さ：３７ 配列の型：アミノ酸 配列 Gln Phe Cys Ala Arg Val His His Ala Gly Ser Gly Arg Val Leu 15 Glu Val Tyr Thr Thr Gln Pro Gly Ile Gln Phe Tyr Thr Gly Asn 30 Phe Leu Asp Gly Thr Leu Lys 37

【００５６】配列番号：５ 配列の長さ：８６ 配列の型：アミノ酸 配列 Val Trp Val Thr Tyr Thr Leu Asp Gly Gly Glu Leu Val Val Asn 15 Tyr Arg Ala Gln Ala Ser Gln Thr Thr Pro Val Asn Leu Thr Asn 30 His Ser Tyr Phe Asn Leu Ala Gly Gln Gly Ser Pro Asn Ile Tyr 45 Asp His Glu Val Thr Ile Glu Ala Asp Ala Phe Leu Pro Val Asp 60 Glu Thr Leu Ile Pro Thr Gly Glu Ile Ala Pro Val Gln Gly Thr 75 Ala Phe Asp Leu Arg Lys Val Glu Leu Gly Lys 86

【００５７】配列番号：６ 配列の長さ：１４３４ 配列の型：核酸 配列 GGCGGGAGTT CGAGGGACCT GGAGCAACTA CACACCCCAA GCTTTCCTAA TG 52 GTT TCA GTT ACA AGA TCC GTG TTT GGA GAC CTC CCC TCG GGG GCA 97 Val Ser Val Thr Arg Ser Val Phe Gly Asp Leu Pro Ser Gly Ala 15 GGG ACG GTG GAA AAG TTC CAG CTG CAA TCA GAC CAG CTG AGA GTG 142 Gly Thr Val Glu Lys Phe Gln Leu Gln Ser Asp Gln Leu Arg Val 30 GAC ATC ATC TCC TGG GGC TGC ACC ATC ACG GCC CTG GAG GTC AAA 187 Asp Ile Ile Ser Trp Gly Cys Thr Ile Thr Ala Leu Glu Val Lys 45 GAC AGG CAG GGC AGA GCC TCA GAC GTG GTG CTT GGC TTT GCT GAA 232 Asp Arg Gln Gly Arg Ala Ser Asp Val Val Leu Gly Phe Ala Glu 60 TTG AAA GAG TAC CTC CAA AAA CAT CCC TAC TTT GGA GCA GTG GTT 277 Leu Lys Glu Tyr Leu Gln Lys His Pro Tyr Phe Gly Ala Val Val 75 GGC AGA GTG GCA AAC CGA ATT GCC AAA GGA ACA TTC ACA TTG GAT 322 Gly Arg Val Ala Asn Arg Ile Ala Lys Gly Thr Phe Thr Leu Asp 90 GGG AAG GAG TAT AAG CTG GCC ATC AAC AAC GGG CCC AAC AGC CTT 367 Gly Lys Glu Tyr Lys Leu Ala Ile Asn Asn Gly Pro Asn Ser Leu 105 CAT GGA GGA GTC AGA GGA TTT GAT AAG GTG CTC TGG ACC CCT CGG 412 His Gly Gly Val Arg Gly Phe Asp Lys Val Leu Trp Thr Pro Arg 120 GTC CTG TCA AAT GGC ATC GAG TTC TCG AGG GTC AGT CCA GAT GGT 457 Val Leu Ser Asn Gly Ile Glu Phe Ser Arg Val Ser Pro Asp Gly 135 GAG GAA GGC TAC CCT GGA GAG TTA AAA GTC TGG GTG ACA TAC ACG 502 Glu Glu Gly Tyr Pro Gly Glu Leu Lys Val Trp Val Thr Tyr Thr 150 CTG GAT GGT GGG GAG CTC GTG GTC AAC TAT CGA GCA CAG GCC AGT 547 Leu Asp Gly Gly Glu Leu Val Val Asn Tyr Arg Ala Gln Ala Ser 165 CAG ACC ACC CCA GTC AAT CTG ACC AAC CAC TCT TAT TTC AAC CTG 592 Gln Thr Thr Pro Val Asn Leu Thr Asn His Ser Tyr Phe Asn Leu 180 GCG GGC CAG GGT TCC CCA AAT ATA TAT GAC CAT GAA GTC ACT ATA 637 Ala Gly Gln Gly Ser Pro Asn Ile Tyr Asp His Glu Val Thr Ile 195 GAA GCT GAT GCT TTT TTG CCT GTG GAT GAA ACC CTA ATC CCT ACA 682 Glu Ala Asp Ala Phe Leu Pro Val Asp Glu Thr Leu Ile Pro Thr 210 GGA GAA ATT GCT CCA GTG CAA GGA ACT GCA TTT GAT CTG AGG AAG 727 Gly Glu Ile Ala Pro Val Gln Gly Thr Ala Phe Asp Leu Arg Lys 225 CCA GTG GAG CTT GGA AAA CAC CTG CAG GAG TTC CAC ATC AAT GGC 772 Pro Val Glu Leu Gly Lys His Leu Gln Glu Phe His Ile Asn Gly 240 TTT GAC CAC AAT TTC TGT CTG AAG AGA TCT AAA GAA AAG CAA TTT 817 Phe Asp His Asn Phe Cys Leu Lys Arg Ser Lys Glu Lys Gln Phe 255 TGT GCA CGG GTC CAT CAT GCT GGA AGC GGG AGG GTC CTG GAA GTG 862 Cys Ala Arg Val His His Ala Gly Ser Gly Arg Val Leu Glu Val 270 TAC ACT ACC CAG CCT GGG ATC CAG TTT TAC ACG GGC AAC TTC CTG 907 Tyr Thr Thr Gln Pro Gly Ile Gln Phe Tyr Thr Gly Asn Phe Leu 285 GAT GGC ACG CTG AAG GGC AAA ACT GGA GCA GTC TAT CCC AAG CAC 952 Asp Gly Thr Leu Lys Gly Lys Thr Gly Ala Val Tyr Pro Lys His 300 TCT GGT TTC TGC CTT GAG ACC CAG AAC TGG CCT AAT GCA GTC AAT 997 Ser Gly Phe Cys Leu Glu Thr Gln Asn Trp Pro Asn Ala Val Asn 315 CAG CCC CAC TTC CCT CCT GTG CTG CTG AAG CCT GGT GAG GAG TAC 1042 Gln Pro His Phe Pro Pro Val Leu Leu Lys Pro Gly Glu Glu Tyr 330 AAC CAC ACC ACT TGG TTT GTG TTT TCT GTG GCT TAAGG AAGTGTTAAG 1090 Asn His Thr Thr Trp Phe Val Phe Ser Val Ala 341 TTATGACCTG TTTCAGGGCC AGCTGGGAGC CCCTTCAGGA ACCTGTCTCC TGTGCAGAGA 1150 TAAGATGAAG ATTTAGAAGC TTTAAAAGTG ATCCTGTGAA TTAAAATCAC ACATATGGTA 1210 GTTGTCATGA TAATCTGAAT TTCAATTTCT TTCCCAATGA CTGACTCCAG GCCAGGTCTA 1270 ATGGTCAGCT CTATTCTCTG TGTGGTGAAG ACCCAACCAG GAATATCATC ATCTAAGCCC 1330 TGACCCTAAT CCAGAAGTGG TATCCAGATC CTTGTGTTGG CTCTATCTCT CCACTCTGCT 1390 TCTTTTCACC CCTTTTTTCT TTGATTCTAC TCATTCCTTC TTTT 1434

【図面の簡単な説明】

【図１】M2のcDNAの制限酵素地図を示す。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】ムタロターゼの遺伝情報を担うＤＮＡ。
2. 【請求項２】図１に示される制限酵素地図を有し、ムタ
   ロターゼの遺伝情報を担うＤＮＡ。
3. 【請求項３】配列番号：１に示すアミノ酸配列をコード
   する塩基配列を含むＤＮＡ。
4. 【請求項４】ムタロターゼが豚腎臓由来である請求項１
   乃至請求項３記載のＤＮＡ。