JPH06234806A - ラジカル重合用の生物学的に活性な開始剤 - Google Patents
ラジカル重合用の生物学的に活性な開始剤Info
- Publication number
- JPH06234806A JPH06234806A JP27293993A JP27293993A JPH06234806A JP H06234806 A JPH06234806 A JP H06234806A JP 27293993 A JP27293993 A JP 27293993A JP 27293993 A JP27293993 A JP 27293993A JP H06234806 A JPH06234806 A JP H06234806A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- formula
- biologically active
- initiator
- polymer
- hybridization
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
- C07J41/0094—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 containing nitrile radicals, including thiocyanide radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F4/00—Polymerisation catalysts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F4/00—Polymerisation catalysts
- C08F4/04—Azo-compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F4/00—Polymerisation catalysts
- C08F4/28—Oxygen or compounds releasing free oxygen
- C08F4/32—Organic compounds
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 生物学的に活性な開始剤（ラジカル連鎖開始
剤）の提供。 【構成】 式（１） Ａ−Ｌ−Ｂ−［−Ｌ−Ａ］y （Ｉ） ［式中、Ａは生物学的に活性な部分を意味し、Ｂはラジ
カルを生成する部分を意味し、Ｌは結合員の基を意味
し、そしてｙは数０又は１を意味する］の一般的構造を
有する。生物学的に活性な部分Ａとしては、例えばビオ
チン、ジギトキシン、ジゴキシン、ジギトキシゲニン、
ジゴキシゲニン及びヌクレオチド構造単位１〜８０、好
ましくは１５〜５０及び特に２.０〜３５のオリゴヌク
レオチドが可能である。
剤）の提供。 【構成】 式（１） Ａ−Ｌ−Ｂ−［−Ｌ−Ａ］y （Ｉ） ［式中、Ａは生物学的に活性な部分を意味し、Ｂはラジ
カルを生成する部分を意味し、Ｌは結合員の基を意味
し、そしてｙは数０又は１を意味する］の一般的構造を
有する。生物学的に活性な部分Ａとしては、例えばビオ
チン、ジギトキシン、ジゴキシン、ジギトキシゲニン、
ジゴキシゲニン及びヌクレオチド構造単位１〜８０、好
ましくは１５〜５０及び特に２.０〜３５のオリゴヌク
レオチドが可能である。
Description
【０００１】本発明は、生物学的に活性なラジカル重合
開始剤に関する。
開始剤に関する。
【０００２】今回一般式
【０００３】
【化２】Ａ−Ｌ−Ｂ−［−Ｌ−Ａ]y （Ｉ） ［式中、Ａは生物学的に活性な部分を意味し、Ｂはラジ
カルを生成する部分を意味し、Ｌは結合員の基を意味
し、そしてｙは数０又は１を意味する］の生物学的に活
性な開始剤（ラジカル連鎖開始剤）が発見された。生物
学的に活性な部分Ａとしては、例えばビオチン、ジギト
キシン、ジゴキシン、ジギトキシゲニン、ジゴキシゲニ
ン及びヌクレオチド構造単位１〜８０、好ましくは１５
〜５０及び特に２.０〜３５のオリゴヌクレオチドが使
用可能である。
カルを生成する部分を意味し、Ｌは結合員の基を意味
し、そしてｙは数０又は１を意味する］の生物学的に活
性な開始剤（ラジカル連鎖開始剤）が発見された。生物
学的に活性な部分Ａとしては、例えばビオチン、ジギト
キシン、ジゴキシン、ジギトキシゲニン、ジゴキシゲニ
ン及びヌクレオチド構造単位１〜８０、好ましくは１５
〜５０及び特に２.０〜３５のオリゴヌクレオチドが使
用可能である。
【０００４】ビオチン、ジゴキシゲニン及びヌクレオチ
ド構造単位１５〜５０、特に２０〜３５のオリゴヌクレ
オチドが好適である。
ド構造単位１５〜５０、特に２０〜３５のオリゴヌクレ
オチドが好適である。
【０００５】次の基は例えば結合員基Ｌとして使用する
ことができる：−ＳＯ2−，−ＣＯＯ−，−ＳＯ2ＮＨ
−，−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−，−ＮＨ−Ｃ
Ｓ−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ
−，−Ｏ−，−ＮＨ−，−Ｓ−。
ことができる：−ＳＯ2−，−ＣＯＯ−，−ＳＯ2ＮＨ
−，−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−，−ＮＨ−Ｃ
Ｓ−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ
−，−Ｏ−，−ＮＨ−，−Ｓ−。
【０００６】好適な結合員基は−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ
−ＣＯ−ＮＨ−，−ＣＯＯ−，及び−ＮＨ−ＣＯＯ−で
ある。−ＣＯ−ＮＨ−及び−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−が特に
好適である。
−ＣＯ−ＮＨ−，−ＣＯＯ−，及び−ＮＨ−ＣＯＯ−で
ある。−ＣＯ−ＮＨ−及び−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−が特に
好適である。
【０００７】結合員基Ｌは生物学的に活性な部分とラジ
カル生成部分Ｂとを共有結合的に一緒に連結する。
カル生成部分Ｂとを共有結合的に一緒に連結する。
【０００８】構造単位Ａ及び／又はＢの増大した易動性
が所望ならば、Ｌによってスペーサーの機能をもたせる
こともできる。この場合Ｌは次の式（IV）
が所望ならば、Ｌによってスペーサーの機能をもたせる
こともできる。この場合Ｌは次の式（IV）
【０００９】
【化３】Ｌ1−Ｒ−Ｌ1 （IV） ［式中、Ｌ1はＬについて示した意味を有し、そしてＲ
はＣ1〜Ｃ20アルキレン、好ましくはＣ3〜Ｃ15アルキレ
ン、特にＣ5〜Ｃ10アルキレン、Ｃ6〜Ｃ10アリーレン-
Ｃ2〜Ｃ10アルキレン、好ましくはフエニレン-又はナフ
チレン-Ｃ2〜Ｃ8アルキレン、及び（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）ｎ
を表わし、但しｎは１〜２０、好ましくは３〜１５、特
に３〜１０を意味する］の準単位からなることができ
る。
はＣ1〜Ｃ20アルキレン、好ましくはＣ3〜Ｃ15アルキレ
ン、特にＣ5〜Ｃ10アルキレン、Ｃ6〜Ｃ10アリーレン-
Ｃ2〜Ｃ10アルキレン、好ましくはフエニレン-又はナフ
チレン-Ｃ2〜Ｃ8アルキレン、及び（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）ｎ
を表わし、但しｎは１〜２０、好ましくは３〜１５、特
に３〜１０を意味する］の準単位からなることができ
る。
【００１０】次の化合物はラジカル生成部分Ｂとして使
用しうる： １）一般式（Ｖ）
用しうる： １）一般式（Ｖ）
【００１１】
【化４】Ｒ11−Ｎ＝Ｎ−Ｒ12 （Ｖ） ［式中、Ｒ11及びＲ12はＣ1〜Ｃ20アルキル、Ｃ3〜Ｃ10
シクロアルキル、Ｃ7〜Ｃ20アラルキル又は基
シクロアルキル、Ｃ7〜Ｃ20アラルキル又は基
【００１２】
【化５】
【００１３】を意味し、但しＹはＣＮ、Ｎ3或いは
【００１４】
【化６】
【００１５】を意味し、なおＲ13、Ｒ14及びＲ15は相互
に独立してＣ1〜Ｃ20アルキル又はＣ3〜Ｃ6シクロアル
キルを意味し、或いはＲ13及びＲ14が連結している場合
にはＣ2〜Ｃ30アルキレンを意味し、或いは更に基Ｒ13
又はＲ14の、両方が同時にではなくて、１つはフエニ
ル、トリル、キシリル、ベンジル又はフエネチルを意味
し、Ｒ16は独立してＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロ
アルキル又はＣ6〜Ｃ12アリールを意味する］のアゾ構
造、 ２）一般式（VI）
に独立してＣ1〜Ｃ20アルキル又はＣ3〜Ｃ6シクロアル
キルを意味し、或いはＲ13及びＲ14が連結している場合
にはＣ2〜Ｃ30アルキレンを意味し、或いは更に基Ｒ13
又はＲ14の、両方が同時にではなくて、１つはフエニ
ル、トリル、キシリル、ベンジル又はフエネチルを意味
し、Ｒ16は独立してＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロ
アルキル又はＣ6〜Ｃ12アリールを意味する］のアゾ構
造、 ２）一般式（VI）
【００１６】
【化７】
【００１７】［式中、Ｚはヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルキ
ル又はＣ6〜Ｃ20アリール、特にヒドロキシ、メチル、
エチル、ｎ-又はｉｓｏ-プロピル、フエニル又はナフチ
ルを表わし、Ｒ17及びＲ18は相互に独立してＣ1〜Ｃ6ア
ルキル又はＣ6〜Ｃ20ナフチル、特にメチル、エチル、
ｎ-又はｉｓｏ-プロピル、フエニル又はナフチルを表わ
し、そしてｎは数１〜６、好ましくは１、２、３、４又
は５を表わす］のテトラアリール／アルキルエタン、 ３）式（VII）
ル又はＣ6〜Ｃ20アリール、特にヒドロキシ、メチル、
エチル、ｎ-又はｉｓｏ-プロピル、フエニル又はナフチ
ルを表わし、Ｒ17及びＲ18は相互に独立してＣ1〜Ｃ6ア
ルキル又はＣ6〜Ｃ20ナフチル、特にメチル、エチル、
ｎ-又はｉｓｏ-プロピル、フエニル又はナフチルを表わ
し、そしてｎは数１〜６、好ましくは１、２、３、４又
は５を表わす］のテトラアリール／アルキルエタン、 ３）式（VII）
【００１８】
【化８】
【００１９】［式中、Ｒ20、Ｒ21及びＲ23は相互に独立
して-(-ＣＨ2-)-mＨを表わし、但しｍは数１〜６好まし
くは１、２、３、４又は５を表わす］のジニトリル、 ４）一般式（VIII）
して-(-ＣＨ2-)-mＨを表わし、但しｍは数１〜６好まし
くは１、２、３、４又は５を表わす］のジニトリル、 ４）一般式（VIII）
【００２０】
【化９】
【００２１】［式中、ｌは数０〜６、好ましくは０、
１、２、３又は４特に０、１又は２を表わし、そしてＲ
24はフエニレン、ナフチレン、Ｃ3〜Ｃ6アルキレン又は
Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキレンを意味する］のパーオキサイ
ド。
１、２、３又は４特に０、１又は２を表わし、そしてＲ
24はフエニレン、ナフチレン、Ｃ3〜Ｃ6アルキレン又は
Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキレンを意味する］のパーオキサイ
ド。
【００２２】１）及び４）で言及した構造単位Ｂの構造
が好適である。
が好適である。
【００２３】式（Ｖ）〜（VIII）の化合物は一般に公知
である［例えば、米国特許第３,９５６,２６９号明細
書；フーベン（Ｈｏｕｂｅｎ）-ワイル（Ｗｅｙｌ）、
Ｍａｋｒｏｍｏｌｅｋｕｌｏｒｅ ｓｔｏｆｆｅ、第１
部、１６〜１９頁参照］。
である［例えば、米国特許第３,９５６,２６９号明細
書；フーベン（Ｈｏｕｂｅｎ）-ワイル（Ｗｅｙｌ）、
Ｍａｋｒｏｍｏｌｅｋｕｌｏｒｅ ｓｔｏｆｆｅ、第１
部、１６〜１９頁参照］。
【００２４】式（Ｖ）の好適なアゾ構造は式（Ｖａ）
【００２５】
【化１０】
【００２６】［式中、ｐは数１〜２０、好ましくは１〜
１５、特に２〜１０を意味し、Ｙ1はＣＮ、Ｎ3、ＣＯＯ
Ｒ26を意味し、そしてＲ25及びＲ26は相互に独立してＣ
1〜Ｃ6アルキル又はＣ3〜Ｃ6シクロアルキル、特にメチ
ル、エチル、ｎ-又はｉｓｏ-プロピル、或いはＣ3〜Ｃ6
シクロアルキル、特にシクロプロピル、シクロペンチル
又はシクロヘキシルを意味する］の化合物である。
１５、特に２〜１０を意味し、Ｙ1はＣＮ、Ｎ3、ＣＯＯ
Ｒ26を意味し、そしてＲ25及びＲ26は相互に独立してＣ
1〜Ｃ6アルキル又はＣ3〜Ｃ6シクロアルキル、特にメチ
ル、エチル、ｎ-又はｉｓｏ-プロピル、或いはＣ3〜Ｃ6
シクロアルキル、特にシクロプロピル、シクロペンチル
又はシクロヘキシルを意味する］の化合物である。
【００２７】１）で言及した構造単位Ｂの特に好適な構
造は式（Ｖｂ）
造は式（Ｖｂ）
【００２８】
【化１１】
【００２９】を有し、即ちｐが２を意味し、Ｒ25がＣＨ
3及びＹ1がＣＮのものである。
3及びＹ1がＣＮのものである。
【００３０】４）で言及した構造単位Ｂの特に好適な構
造は、ｌ＝０及びＲ24＝フエニレンの式（VIII）に一致
する。
造は、ｌ＝０及びＲ24＝フエニレンの式（VIII）に一致
する。
【００３１】ラジカル生成部分を構成する式（Ｖ）〜
（VIII）の構造は、１（式（Ｉ）におけるｙ＝０）又は
式２（式（Ｉ）におけるｙ＝２）の反応性基Ｘ1を有す
る（式（IX）の記述を参照）。
（VIII）の構造は、１（式（Ｉ）におけるｙ＝０）又は
式２（式（Ｉ）におけるｙ＝２）の反応性基Ｘ1を有す
る（式（IX）の記述を参照）。
【００３２】式（Ｖ）のアゾ構造において、残基Ｒ11及
びＲ12はこの（これらの）基を担持する。式（Ｖａ）、
（Ｖｂ）、（VI）及び（VIII）の構造において、末端の
水素原子はこの（これらの）基で置換されていてもよ
い。式（VII）のジニトリルはＲ20、Ｒ21及び／又はＲ
23における中央の結合付近において対称的にこの基を有
する。
びＲ12はこの（これらの）基を担持する。式（Ｖａ）、
（Ｖｂ）、（VI）及び（VIII）の構造において、末端の
水素原子はこの（これらの）基で置換されていてもよ
い。式（VII）のジニトリルはＲ20、Ｒ21及び／又はＲ
23における中央の結合付近において対称的にこの基を有
する。
【００３３】詳細には、次の式（Ｉ）の生物学的に活性
な開始剤が例示しうる： 開始剤１：
な開始剤が例示しうる： 開始剤１：
【００３４】
【化１２】
【００３５】開始剤２：
【００３６】
【化１３】
【００３７】開始剤３：
【００３８】
【化１４】
【００３９】開始剤４：
【００４０】
【化１５】
【００４１】開始剤５：
【００４２】
【化１６】
【００４３】開始剤６：
【００４４】
【化１７】
【００４５】更に一般式（IX）
【００４６】
【化１８】Ｘ1−Ｒ−（−Ｘ1）y （IX） ［式中、Ｂは上に定義した通りであり、そしてＸ1はＮ
ＣＯ、ＮＣＳ、ＣＯＣｌ、ＣＯＯＨ、ＣＯ−Ｏ−ヒドロ
キシコハク酸イミド、ＯＨ、ＮＨ2、ＳＨ、Ｃｌ、Ｂｒ
又はＩであり、そしてｙは０又は１、好ましくは１であ
る］のラジカル生成化合物を、Ｘ1で示した基に対して
化学的不活性な溶媒、例えばクロル脂肪族化合物、ケト
ン、ニトリル、スルホキシド、スルホンなど中において
１又は２当量の生物学的に活性な基質Ａと０〜４０℃の
温度で反応させる上記１の一般式（Ｉ）
ＣＯ、ＮＣＳ、ＣＯＣｌ、ＣＯＯＨ、ＣＯ−Ｏ−ヒドロ
キシコハク酸イミド、ＯＨ、ＮＨ2、ＳＨ、Ｃｌ、Ｂｒ
又はＩであり、そしてｙは０又は１、好ましくは１であ
る］のラジカル生成化合物を、Ｘ1で示した基に対して
化学的不活性な溶媒、例えばクロル脂肪族化合物、ケト
ン、ニトリル、スルホキシド、スルホンなど中において
１又は２当量の生物学的に活性な基質Ａと０〜４０℃の
温度で反応させる上記１の一般式（Ｉ）
【００４７】
【化１９】Ａ−Ｌ−Ｂ−［−Ｌ−Ａ]y （Ｉ） の生物学的に活性な開始剤の製造法が発見された。
【００４８】一般式（IX）
【００４９】
【化２０】Ｘ1−Ｒ−（−Ｘ1）y （IX） ［式中、Ｘ1はＣＯＣｌ又はＣＯＮＨＳＯ2Ｃｌを意味す
る］の化合物の場合にはプロトン捕捉剤例えばピリジン
又はトリエチルアミンが有利に反応混合物に添加され、
一方Ｘ＝ＣＯＯＨならば反応はカルボジイミド例えばジ
シクロヘキシルカルボジイミドの存在下に行われる。
る］の化合物の場合にはプロトン捕捉剤例えばピリジン
又はトリエチルアミンが有利に反応混合物に添加され、
一方Ｘ＝ＣＯＯＨならば反応はカルボジイミド例えばジ
シクロヘキシルカルボジイミドの存在下に行われる。
【００５０】Ｘ1がＮＣＯ及びＣＯＯ−Ｎ−ヒドロキシ
コハク酸イミドを意味する化合物は好ましくは本発明の
方法において式Ｘ1−Ｂ-(-Ｘ1)yの化合物として使用さ
れる。
コハク酸イミドを意味する化合物は好ましくは本発明の
方法において式Ｘ1−Ｂ-(-Ｘ1)yの化合物として使用さ
れる。
【００５１】反応は０〜３０℃、特に１５〜２５℃、更
に特に２０℃で好適に起こる。好ましくは塩化メチレ
ン、アセトン又はアセトニトリルが溶媒として使用され
る。
に特に２０℃で好適に起こる。好ましくは塩化メチレ
ン、アセトン又はアセトニトリルが溶媒として使用され
る。
【００５２】式（IX）の化合物は一般に公知であり、或
いは一般に公知の方法に従って製造することができる
（例えば米国特許第４１５５９３７号明細書参照）。
いは一般に公知の方法に従って製造することができる
（例えば米国特許第４１５５９３７号明細書参照）。
【００５３】結合員基Ｌは、式Ｘ1−Ｂ-(-Ｘ1)yからの
Ｘ1を、生物学的に活性な構造単位Ａにおける反応性
基、例えばビオチンのカルボキシル基又はオリゴヌクレ
オチドのアミノ基と反応させることによって生成され
る。
Ｘ1を、生物学的に活性な構造単位Ａにおける反応性
基、例えばビオチンのカルボキシル基又はオリゴヌクレ
オチドのアミノ基と反応させることによって生成され
る。
【００５４】生物学的に活性な連鎖開始剤は、公知の方
法で、例えば多分生成している（イオン性）副生物の濾
別後に、溶媒が低沸点ならば溶媒を蒸発させることによ
り、或いは適当な沈殿剤を添加して沈殿させることによ
り単離され、この間に本発明による生成物は普通純粋な
形で得られる。副生物が再結晶又は濾過によって本発明
の化合物から蒸発又は分離できない場合、本発明の化合
物は公知の液体クロマトグラフイー、例えばカラムクロ
マトグラフイー又は分取用高速液体クロマトグラフイー
（ＨＰＬＣ）法で単離される。
法で、例えば多分生成している（イオン性）副生物の濾
別後に、溶媒が低沸点ならば溶媒を蒸発させることによ
り、或いは適当な沈殿剤を添加して沈殿させることによ
り単離され、この間に本発明による生成物は普通純粋な
形で得られる。副生物が再結晶又は濾過によって本発明
の化合物から蒸発又は分離できない場合、本発明の化合
物は公知の液体クロマトグラフイー、例えばカラムクロ
マトグラフイー又は分取用高速液体クロマトグラフイー
（ＨＰＬＣ）法で単離される。
【００５５】本発明による化合物は、例えばラジカル重
合の開始剤として適当である。これをラジカル開始剤と
して使用する場合には、その分解生成物が生成する重合
体中へ末端基として導入することができる。このように
末端基を修飾した重合体（マーカー重合体）は、例えば
生化学的検出反応に利用される基質と選択的に反応させ
ることができる。
合の開始剤として適当である。これをラジカル開始剤と
して使用する場合には、その分解生成物が生成する重合
体中へ末端基として導入することができる。このように
末端基を修飾した重合体（マーカー重合体）は、例えば
生化学的検出反応に利用される基質と選択的に反応させ
ることができる。
【００５６】生物学的に活性な重合体との結合反応は、
結果として結合反応物間での架橋又は複数の結合が起こ
り得ないで可能となる。概して唯１つの又は高々２つの
結合員基が重合体鎖に存在する。従ってそのような有用
な単官能性（反応性）重合体は本発明の化合物を用いて
容易に得ることができる。
結果として結合反応物間での架橋又は複数の結合が起こ
り得ないで可能となる。概して唯１つの又は高々２つの
結合員基が重合体鎖に存在する。従ってそのような有用
な単官能性（反応性）重合体は本発明の化合物を用いて
容易に得ることができる。
【００５７】ラジカル重合に適当な単量体構造単位は例
えばアクリル酸誘導体、ビニル又はスチリル化合物、或
いはこれらの混合物である。それらの酸、エステル、ア
ミド又はケトン誘導体も例えば使用することができる。
単量体構造単位は、例えばキレート剤（例えば１,３-ジ
アミノ-２-ヒドロキシプロパン-Ｎ,Ｎ,Ｎ′，Ｎ′-四酢
酸）及び／又は色素（例えばクマリン、フルオレセン及
びローダミン）に共有結合しうる反応性又は活性基を含
有しうる。そのような基は例えば酸ハライド、イミドエ
ステル、ベンゾトリアゾリル、イソシアナト、イソチオ
シアナト、オキシラン又はジイミド基であってよい。好
適な単量体構造単位は、（メト）アクリロイルクロライ
ド、（メト）アクリル酸、Ｎ-ヒドロキシコハク酸イミ
ドエステル、（メト）アクリル酸、Ｎ-ヒドロキシフタ
ル酸イミドエステル、Ｎ-（メト）アクリロイルベンゾ
トリアゾール、３-又は４-イソチオシアナトフエニル
（メト）アクリレート、２-イソシアナトエチル（メ
ト）アクリレート、イソシアナトイソプロペニルベンゼ
ン、イソプロペニル-α,α-ジメチルベンジルイソシア
ネート、ビニルオキシラン、又は（メト）アクリル酸と
カルボジイミドの組合せ物である。
えばアクリル酸誘導体、ビニル又はスチリル化合物、或
いはこれらの混合物である。それらの酸、エステル、ア
ミド又はケトン誘導体も例えば使用することができる。
単量体構造単位は、例えばキレート剤（例えば１,３-ジ
アミノ-２-ヒドロキシプロパン-Ｎ,Ｎ,Ｎ′，Ｎ′-四酢
酸）及び／又は色素（例えばクマリン、フルオレセン及
びローダミン）に共有結合しうる反応性又は活性基を含
有しうる。そのような基は例えば酸ハライド、イミドエ
ステル、ベンゾトリアゾリル、イソシアナト、イソチオ
シアナト、オキシラン又はジイミド基であってよい。好
適な単量体構造単位は、（メト）アクリロイルクロライ
ド、（メト）アクリル酸、Ｎ-ヒドロキシコハク酸イミ
ドエステル、（メト）アクリル酸、Ｎ-ヒドロキシフタ
ル酸イミドエステル、Ｎ-（メト）アクリロイルベンゾ
トリアゾール、３-又は４-イソチオシアナトフエニル
（メト）アクリレート、２-イソシアナトエチル（メ
ト）アクリレート、イソシアナトイソプロペニルベンゼ
ン、イソプロペニル-α,α-ジメチルベンジルイソシア
ネート、ビニルオキシラン、又は（メト）アクリル酸と
カルボジイミドの組合せ物である。
【００５８】
【実施例】本発明の方法は次の実施例により更に詳細に
説明される。
説明される。
【００５９】式（Ｉ）の生物学的に活性な開始剤の製造 実施例１（開始剤１に相当） ビオチン３ミリモルを、純窒素下、室温で１８時間、
２,２′-アゾビス［２-メチル-Ｎ-（２-ヒドロキシエチ
ル）プロピオンアミド］１ミリモル及びジシクロヘキシ
ルカルボジイミド３ミリモルと共に無水ジメチルホルム
アミド２０ｍｌ中で撹拌した。次いで生成した沈殿を濾
別した。この濾液に濃アンモニア水溶液を１ｍｌ添加し
た。更に１時間室温で撹拌を続け、再び生成物を濾過し
た。濾液を砕いた氷上に注ぎ、本発明による生成物（開
始剤１）を沈殿させた。メタノール：クロロホルム
（２：１）中ＤＣ分析（Ｉ2検知）及び1Ｈ-ＮＭＲによ
ると、乾燥した及び洗浄した沈殿は本発明による純粋な
生成物を与えた。
２,２′-アゾビス［２-メチル-Ｎ-（２-ヒドロキシエチ
ル）プロピオンアミド］１ミリモル及びジシクロヘキシ
ルカルボジイミド３ミリモルと共に無水ジメチルホルム
アミド２０ｍｌ中で撹拌した。次いで生成した沈殿を濾
別した。この濾液に濃アンモニア水溶液を１ｍｌ添加し
た。更に１時間室温で撹拌を続け、再び生成物を濾過し
た。濾液を砕いた氷上に注ぎ、本発明による生成物（開
始剤１）を沈殿させた。メタノール：クロロホルム
（２：１）中ＤＣ分析（Ｉ2検知）及び1Ｈ-ＮＭＲによ
ると、乾燥した及び洗浄した沈殿は本発明による純粋な
生成物を与えた。
【００６０】実施例２（開始剤６に相当） ｐ，ｐ′-ビイソシアナトベンゾイルパーオキサイド１
ミリモルを塩化メチレン中１-アミノエタノール２ミリ
モルと反応させた。この塩化メチレンを蒸発させ、残渣
を実施例１に記述したようにビオチン及びジシクロヘキ
シルカルボジイミドと反応させた。
ミリモルを塩化メチレン中１-アミノエタノール２ミリ
モルと反応させた。この塩化メチレンを蒸発させ、残渣
を実施例１に記述したようにビオチン及びジシクロヘキ
シルカルボジイミドと反応させた。
【００６１】実施例３ アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）１０ｇ並びに
フエニレンオキサイド（分子量４００）１００ｇ及びポ
リオールＥ４００を塩化メチレン２００ｍｌに添加し
た。この溶液を０℃まで冷却し、ＨＣｌガスを飽和にな
るまで導入した（ＨＣｌ約４６ｇ、３時間）。得られた
透明な溶液を０℃で終夜撹拌し、次いで氷２００ｇ／水
１００ｇ中へ撹拌しながらゆっくりと撹拌した。２時間
撹拌後、分液濾斗で２相に分離させ、続いて水性相を塩
化メチレンで３回抽出し、一緒にした相を水相ＮａＨＣ
Ｏ3溶液及び水と振とうすることにより抽出した。有機
相をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、室温で高真空下にロータリー
エバポレーターで蒸発させた。収量は４１.６ｇであ
り、理論量の７０.７％に相当した。14Ｎ元素分析は窒
素３.４％（理量値３.１％）の分量を示した。
フエニレンオキサイド（分子量４００）１００ｇ及びポ
リオールＥ４００を塩化メチレン２００ｍｌに添加し
た。この溶液を０℃まで冷却し、ＨＣｌガスを飽和にな
るまで導入した（ＨＣｌ約４６ｇ、３時間）。得られた
透明な溶液を０℃で終夜撹拌し、次いで氷２００ｇ／水
１００ｇ中へ撹拌しながらゆっくりと撹拌した。２時間
撹拌後、分液濾斗で２相に分離させ、続いて水性相を塩
化メチレンで３回抽出し、一緒にした相を水相ＮａＨＣ
Ｏ3溶液及び水と振とうすることにより抽出した。有機
相をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、室温で高真空下にロータリー
エバポレーターで蒸発させた。収量は４１.６ｇであ
り、理論量の７０.７％に相当した。14Ｎ元素分析は窒
素３.４％（理量値３.１％）の分量を示した。
【００６２】実施例４ 実施例１からの生成物５ｇ及びテトラヒドロフラン５０
ｍｌからなる溶液中にＣＯＣｌ2を導入した。溶液を蒸
発乾固した後、粘稠な油５.５ｇが残った。
ｍｌからなる溶液中にＣＯＣｌ2を導入した。溶液を蒸
発乾固した後、粘稠な油５.５ｇが残った。
【００６３】実施例５：ビオチン化開始剤＝開始剤２ Ｎａ2ＣＯ3 １ｇ及びビオチンヒドラジド１ｇをジメチ
ルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１５ｍｌ中において７５℃
まで加熱して溶液とした。この溶液を０℃まで冷却した
後、実施例２からの物質２.０２ｇを添加し、混合物を
室温で終夜撹拌した。沈殿を濾別し、濾液をロータリー
エバポレーターで蒸発させ、残渣をクロロホルム中に入
れ、ＮａＨＣＯ3溶液及び水と振とうすることによって
抽出し、有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥した。溶媒の蒸発
後、粘稠な油１.２６ｇが残った。
ルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１５ｍｌ中において７５℃
まで加熱して溶液とした。この溶液を０℃まで冷却した
後、実施例２からの物質２.０２ｇを添加し、混合物を
室温で終夜撹拌した。沈殿を濾別し、濾液をロータリー
エバポレーターで蒸発させ、残渣をクロロホルム中に入
れ、ＮａＨＣＯ3溶液及び水と振とうすることによって
抽出し、有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥した。溶媒の蒸発
後、粘稠な油１.２６ｇが残った。
【００６４】実施例６ オリゴヌクレオチド開始剤の製造 配列ＡＴＣＣＡＧＴＴＧＴＧＴＣＴＴＣＡＡＣの５′-
アミノ結合-オリゴヌクレオチド１.５ｍｇ（０.２６μ
モル）のリン酸ナトリウム緩衝液（pＨ＝７.５）に、
４,４′-アゾビス（４-シアノペンタン酸Ｎ-ヒドロキシ
コハク酸イミジルエステル）６ｍｇ（１２.６μモル）
のジメチルホルムアミド中溶液を添加した。反応混合物
を室温で７２時間撹拌した。反応生成物を、０.１Ｍ酢
酸トリエチルアンモニウム中アセトニトリルのグラジエ
ントを３０分間にわたり直線的に増大させるＲＰ１８カ
ラムでの分取ＨＰＬＣを用いて単離した。収率は理論量
の３５％。
アミノ結合-オリゴヌクレオチド１.５ｍｇ（０.２６μ
モル）のリン酸ナトリウム緩衝液（pＨ＝７.５）に、
４,４′-アゾビス（４-シアノペンタン酸Ｎ-ヒドロキシ
コハク酸イミジルエステル）６ｍｇ（１２.６μモル）
のジメチルホルムアミド中溶液を添加した。反応混合物
を室温で７２時間撹拌した。反応生成物を、０.１Ｍ酢
酸トリエチルアンモニウム中アセトニトリルのグラジエ
ントを３０分間にわたり直線的に増大させるＲＰ１８カ
ラムでの分取ＨＰＬＣを用いて単離した。収率は理論量
の３５％。
【００６５】使用例 実施例７ ビオチンを生物学的に活性な末端基として有する開始剤
からのマーカー重合体の製造 次のものをジメチルスルホキシド１０ｍｌに溶解した。
からのマーカー重合体の製造 次のものをジメチルスルホキシド１０ｍｌに溶解した。
【００６６】ａ）ｐ-スチレンスルホン酸ナトリウム１.
５ｇ ｂ）クマリン染料１の０.５ｇ及び ｃ）実施例５からの開始剤１００ｍｇ 下記のクマリン染料
５ｇ ｂ）クマリン染料１の０.５ｇ及び ｃ）実施例５からの開始剤１００ｍｇ 下記のクマリン染料
【００６７】
【化２１】
【００６８】上記溶液を純粋な窒素で完全にパージし、
７０℃まで加熱し、この温度に１６時間保った。この未
処理の負荷物をメタノール２００ｍｌ中で沈殿させ、吸
引濾過し、乾燥し、限外濾過（排除限界１０,０００ダ
ルトン）に供した。水溶性の蛍光重合体は、平均分子量
１１０,０００（Ｍｎ）を有し、アビジン又はストレプ
トアビジンとの反応に直接使用できた。
７０℃まで加熱し、この温度に１６時間保った。この未
処理の負荷物をメタノール２００ｍｌ中で沈殿させ、吸
引濾過し、乾燥し、限外濾過（排除限界１０,０００ダ
ルトン）に供した。水溶性の蛍光重合体は、平均分子量
１１０,０００（Ｍｎ）を有し、アビジン又はストレプ
トアビジンとの反応に直接使用できた。
【００６９】実施例８ オリゴペプチドを生物学的に活性な末端基として有する
開始剤からのマーカー重合体の製造 実施例７の方法に従った。但し実施例６からの開始剤を
実施例１からの開始剤の代りに使用し、またジメチルス
ルホキシドを１０ｍｌの代りに１.２ｍｌ使用した。
開始剤からのマーカー重合体の製造 実施例７の方法に従った。但し実施例６からの開始剤を
実施例１からの開始剤の代りに使用し、またジメチルス
ルホキシドを１０ｍｌの代りに１.２ｍｌ使用した。
【００７０】ａ）ｐ-スチレンスルホン酸ナトリウム０.
３ｇ ｂ）クマリン染料１（式は実施例７参照）０.１ｇ ｃ）実施例６からの開始剤０.５ｍｇ 重合体は平均分子量５００,０００（Ｍｎ）有し、オリ
ゴヌクレオチドの相補的配列のＤＮＡ又はＲＮＡの同定
に対する遺伝子プローブに直接使用できた。
３ｇ ｂ）クマリン染料１（式は実施例７参照）０.１ｇ ｃ）実施例６からの開始剤０.５ｍｇ 重合体は平均分子量５００,０００（Ｍｎ）有し、オリ
ゴヌクレオチドの相補的配列のＤＮＡ又はＲＮＡの同定
に対する遺伝子プローブに直接使用できた。
【００７１】マーカー重合体で標識した生物学的に活性
な物質 実施例９ 重合体オリゴペプチドプローブの二重標識化 オリゴペプチドプローブの重合体への結合を検出するた
めに、また重合体中に結合した蛍光色素の検出感度を通
常の燐32（Ｐ32）又はジゴキシゲニンのそれと比較する
ために、重合体オリゴヌクレオチドプローブの二重標識
化を行った。実施例６からの１９員ヌクレオチド配列
５′ｄＡＴＣＣＡＧＴＴＧＴＧＴＣＴＴＣＡＡＣを有す
る反応性５′アミノオリゴヌクレオチドプローブを、ベ
ーリンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａ
ｎｎｈｅｉｍ）社の末端基標識化キットを用いて３′末
端に対しα-Ｐ32-ｄＣＴＰで標識した。また別にジゴキ
シゲニン-ｄＵＴＰを用いて非放射線性的に末端基の標
識化を行った。１０μｌの反応緩衝液を含むバッチ（カ
リウムカコジレート１モル／ｌ、トリス／ＨＣｌ １２
５ミリモル／ｌ、牛の血清アルブミン１.２５ｍｇ／ｍ
ｌ、pＨ６.６、２５℃）５０μｌ、オリゴヌクレオチド
１〜２μｇ、末端トランスフエラーゼ５単位、塩化コバ
ルト（ＣｏＣｌ2）２.５ミリモル／ｌ及びα-Ｐ32-ｄＣ
ＴＰ２５μＣｉ中において、３７℃で６０分後に約５０
％の末端標識化が達成された。
な物質 実施例９ 重合体オリゴペプチドプローブの二重標識化 オリゴペプチドプローブの重合体への結合を検出するた
めに、また重合体中に結合した蛍光色素の検出感度を通
常の燐32（Ｐ32）又はジゴキシゲニンのそれと比較する
ために、重合体オリゴヌクレオチドプローブの二重標識
化を行った。実施例６からの１９員ヌクレオチド配列
５′ｄＡＴＣＣＡＧＴＴＧＴＧＴＣＴＴＣＡＡＣを有す
る反応性５′アミノオリゴヌクレオチドプローブを、ベ
ーリンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａ
ｎｎｈｅｉｍ）社の末端基標識化キットを用いて３′末
端に対しα-Ｐ32-ｄＣＴＰで標識した。また別にジゴキ
シゲニン-ｄＵＴＰを用いて非放射線性的に末端基の標
識化を行った。１０μｌの反応緩衝液を含むバッチ（カ
リウムカコジレート１モル／ｌ、トリス／ＨＣｌ １２
５ミリモル／ｌ、牛の血清アルブミン１.２５ｍｇ／ｍ
ｌ、pＨ６.６、２５℃）５０μｌ、オリゴヌクレオチド
１〜２μｇ、末端トランスフエラーゼ５単位、塩化コバ
ルト（ＣｏＣｌ2）２.５ミリモル／ｌ及びα-Ｐ32-ｄＣ
ＴＰ２５μＣｉ中において、３７℃で６０分後に約５０
％の末端標識化が達成された。
【００７２】重合体への連結は実施例８に記述したよう
に行った。
に行った。
【００７３】重合体をエタノール中に沈殿させ、次いで
２回蒸留した水１ｍｌに溶解した。１７％ポリアクリル
アミドゲル中でのゲル電気泳動法により、オリゴペプチ
ドが重合体に結合していることが決定できた。
２回蒸留した水１ｍｌに溶解した。１７％ポリアクリル
アミドゲル中でのゲル電気泳動法により、オリゴペプチ
ドが重合体に結合していることが決定できた。
【００７４】重合体中に結合したクマリン蛍光色素の蛍
光に関して又はオリゴヌクレオチド中に結合したＰ32又
はジオキシゲンに関して証明を可能にする二重標識化重
合体-オリゴヌクレオチドプローブを用いることによ
り、下記の実施例１０に記述する如きスロット・ブロッ
ト（ｓｌｏｔ ｂｌｏｔ）ハイブリダイゼーシヨン及び
実施例１１に記述する如き液体ハイブリダイゼーシヨン
を行った。
光に関して又はオリゴヌクレオチド中に結合したＰ32又
はジオキシゲンに関して証明を可能にする二重標識化重
合体-オリゴヌクレオチドプローブを用いることによ
り、下記の実施例１０に記述する如きスロット・ブロッ
ト（ｓｌｏｔ ｂｌｏｔ）ハイブリダイゼーシヨン及び
実施例１１に記述する如き液体ハイブリダイゼーシヨン
を行った。
【００７５】実施例１０ 重合体-オリゴヌクレオチドプローブを用いるスロット
・ブロットハイブリダイゼーシヨン 常法に従い、４０〜６８℃の保温々度でハイブリッド形
成を行った。ハイブリッド形成温度に応じて、種々の物
質を添加した。
・ブロットハイブリダイゼーシヨン 常法に従い、４０〜６８℃の保温々度でハイブリッド形
成を行った。ハイブリッド形成温度に応じて、種々の物
質を添加した。
【００７６】ハイブリッド形成の速度及び程度を向上さ
せるために、デキストランサルフエート又は他の重合体
を使用した。そしてＤＮＡの膜への非特異的結合を抑制
するために、合成洗剤及び遮閉剤例えば乾燥ミルク、デ
ンハーツ（Ｄｅｎｈａｒｄｔ′ｓ）溶液、ヘパリン又は
ドデシル硫酸ナトリウム（以下ＳＤＳ）を添加した。ま
たハイブリッドの融点を低下させるために変性剤例えば
尿素又はホルムアミドを使用して、低いハイブリッド形
成温度を使用した。更にブロット上における遺伝子プロ
ーブの非同族体のＤＮＡへの非特異的結合は異種ＤＮＡ
の添加によって減ずることができた。
せるために、デキストランサルフエート又は他の重合体
を使用した。そしてＤＮＡの膜への非特異的結合を抑制
するために、合成洗剤及び遮閉剤例えば乾燥ミルク、デ
ンハーツ（Ｄｅｎｈａｒｄｔ′ｓ）溶液、ヘパリン又は
ドデシル硫酸ナトリウム（以下ＳＤＳ）を添加した。ま
たハイブリッドの融点を低下させるために変性剤例えば
尿素又はホルムアミドを使用して、低いハイブリッド形
成温度を使用した。更にブロット上における遺伝子プロ
ーブの非同族体のＤＮＡへの非特異的結合は異種ＤＮＡ
の添加によって減ずることができた。
【００７７】ハイブリッド形成の準備をするために、ニ
トロソモナス・ユーロペエ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ
ｅｕｒｏｐｅａｅ）の標識化してないゲノムＤＮＡ５
０〜５００ｎｇを最初に１００℃で５分間変性し、０℃
まで冷却し、次いでシユライヒヤー・アンド・シユール
（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ）社
のミニホールド（Ｍｉｎｉｆｏｌｄ）II型濾過具を用い
て予備処理したニトロセルロース又はナイロン膜に適用
し、８０℃で２時間定着させた。このフイルターを、密
閉したプラスチック製フイルム・バッグ又はプラスチッ
ク製箱中において、６８℃で少くとも１時間フイルター
１００ｃｍ2当り少くとも２０ｍｌのハイブリッド形成
溶液でハイブリッドを形成させた。
トロソモナス・ユーロペエ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ
ｅｕｒｏｐｅａｅ）の標識化してないゲノムＤＮＡ５
０〜５００ｎｇを最初に１００℃で５分間変性し、０℃
まで冷却し、次いでシユライヒヤー・アンド・シユール
（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ）社
のミニホールド（Ｍｉｎｉｆｏｌｄ）II型濾過具を用い
て予備処理したニトロセルロース又はナイロン膜に適用
し、８０℃で２時間定着させた。このフイルターを、密
閉したプラスチック製フイルム・バッグ又はプラスチッ
ク製箱中において、６８℃で少くとも１時間フイルター
１００ｃｍ2当り少くとも２０ｍｌのハイブリッド形成
溶液でハイブリッドを形成させた。
【００７８】次いで溶液を、実施例からの重合体-オリ
ゴヌクレオチドプローブ１００ｎｇを添加したハイブリ
ッド形成溶液２.５ｍｌ／フイルター１００ｃｍ2で置き
かえた。
ゴヌクレオチドプローブ１００ｎｇを添加したハイブリ
ッド形成溶液２.５ｍｌ／フイルター１００ｃｍ2で置き
かえた。
【００７９】次いでフイルターを、フイルター１００ｃ
ｍ2当り５０ｍｌの２×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで２×５
分間室温下に及び０.１×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで２×
１５分間６８℃下に洗浄した。続いてこのフイルターを
ハイブリッド形成したＤＮＡの検出に直接使用した。
ｍ2当り５０ｍｌの２×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで２×５
分間室温下に及び０.１×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで２×
１５分間６８℃下に洗浄した。続いてこのフイルターを
ハイブリッド形成したＤＮＡの検出に直接使用した。
【００８０】溶液：２０×ＳＳＣ ３Ｍ ＮａＣｌ、
０.３Ｍクエン酸Ｎａ、pＨ７.０ ハイブリッド形成溶液Ｉ：５×ＳＳＣ；０.１％Ｎ-ラウ
ロイルサルコシン、Ｎａ塩；０.０２％ＳＤＳ；０.５％
遮閉剤（ベエーリンガーマンハイム）；５０〜７０℃で
溶液を溶解 スロット・ブロットハイブリダイゼーシヨンに同様に使
用した他のハイブリッド形成溶液は、例えば次の通りで
あった。
０.３Ｍクエン酸Ｎａ、pＨ７.０ ハイブリッド形成溶液Ｉ：５×ＳＳＣ；０.１％Ｎ-ラウ
ロイルサルコシン、Ｎａ塩；０.０２％ＳＤＳ；０.５％
遮閉剤（ベエーリンガーマンハイム）；５０〜７０℃で
溶液を溶解 スロット・ブロットハイブリダイゼーシヨンに同様に使
用した他のハイブリッド形成溶液は、例えば次の通りで
あった。
【００８１】ハイブリッド形成混合物２：５０％ホルム
アミド７×ＳＳＣ ２×デンハーツ溶液（１００×デンハーツ；２％フイコ
ール（Ｆｉｃｏｌｌ）、２％ポリビニルピロリドン、２
％牛の血清アルブミン） 子牛の胸腺ＤＮＡ３００μｇ／ｍｌ ハイブリッド形成混合物３：６×ＳＳＣ；１０×デンハ
ーツ溶液ニシンの精子ＤＮＡ５０μｇ 牛の血清アルブミン０.１％ ハイブリッド形成混合物４：５×ＳＳＣ；ＰＥＧ；５％
乾燥ミルク粉；０.０１Ｍピロリン酸ナトリウム オリゴヌクレオチドプローブの重合体中に結合させたク
マリン蛍光色素を用いて検出を行った。フイルターの蛍
光を発するスロット・ブロットを、島津ＣＳ９３０型ス
キャナーで定量的に評価した。Ｐ32を有するオリゴヌク
レオチドの、末端トランスフエラーゼでの３′末端基標
識化による二重標識化を通して、オートラジオグラフイ
ーによるハイブリッド形成実験の解釈も可能であった。
この目的に対しては、フイルターをガラス板上に固定
し、次いでＸ線フイルムを重ね、２〜５時間露呈させ
た。次いでフイルムの現像後、スロット・ブロットの黒
色化を島津スキャナーで定量的に評価した。他の検出法
も使用した。ジゴキシゲン化重合体-オリゴヌクレオチ
ドプローブの場合、染料の検出はアルカリホスフアター
ゼコンジュゲート抗体及びブロモクロロインドリルホス
フエート及びニトロブルーテトラゾリウムを用いて或い
はアルカリホスフアターゼ及びＡＭＰＰＤ３-（２′-ス
ピロアダマンタン）-４-メトキシ-４-（３″-ホスフオ
リロキシ）-フエニル-１,２-ジオキセタンを基質とする
化学発光の読み取りによって行った。
アミド７×ＳＳＣ ２×デンハーツ溶液（１００×デンハーツ；２％フイコ
ール（Ｆｉｃｏｌｌ）、２％ポリビニルピロリドン、２
％牛の血清アルブミン） 子牛の胸腺ＤＮＡ３００μｇ／ｍｌ ハイブリッド形成混合物３：６×ＳＳＣ；１０×デンハ
ーツ溶液ニシンの精子ＤＮＡ５０μｇ 牛の血清アルブミン０.１％ ハイブリッド形成混合物４：５×ＳＳＣ；ＰＥＧ；５％
乾燥ミルク粉；０.０１Ｍピロリン酸ナトリウム オリゴヌクレオチドプローブの重合体中に結合させたク
マリン蛍光色素を用いて検出を行った。フイルターの蛍
光を発するスロット・ブロットを、島津ＣＳ９３０型ス
キャナーで定量的に評価した。Ｐ32を有するオリゴヌク
レオチドの、末端トランスフエラーゼでの３′末端基標
識化による二重標識化を通して、オートラジオグラフイ
ーによるハイブリッド形成実験の解釈も可能であった。
この目的に対しては、フイルターをガラス板上に固定
し、次いでＸ線フイルムを重ね、２〜５時間露呈させ
た。次いでフイルムの現像後、スロット・ブロットの黒
色化を島津スキャナーで定量的に評価した。他の検出法
も使用した。ジゴキシゲン化重合体-オリゴヌクレオチ
ドプローブの場合、染料の検出はアルカリホスフアター
ゼコンジュゲート抗体及びブロモクロロインドリルホス
フエート及びニトロブルーテトラゾリウムを用いて或い
はアルカリホスフアターゼ及びＡＭＰＰＤ３-（２′-ス
ピロアダマンタン）-４-メトキシ-４-（３″-ホスフオ
リロキシ）-フエニル-１,２-ジオキセタンを基質とする
化学発光の読み取りによって行った。
【００８２】この二重標識化により、種々の検出系の感
度の直接的な比較が可能となった。 結果 オリゴヌクレオチドプローブの重合体（染料分子約２０
０／重合体）におけるクマリン色素分子シグナルの増巾
の結果として、１〜０.１ｐｇのＤＮＡの検出感度を有
して酵素検出法と殆んど同一の感度が達成された。クマ
リン色素分子に対して重合体担体を用いることにより、
蛍光ヌクレオチド構造単位に関して蛍光色素での通常の
標識化よりも１００〜１０００倍の感度の向上が達成で
きた。
度の直接的な比較が可能となった。 結果 オリゴヌクレオチドプローブの重合体（染料分子約２０
０／重合体）におけるクマリン色素分子シグナルの増巾
の結果として、１〜０.１ｐｇのＤＮＡの検出感度を有
して酵素検出法と殆んど同一の感度が達成された。クマ
リン色素分子に対して重合体担体を用いることにより、
蛍光ヌクレオチド構造単位に関して蛍光色素での通常の
標識化よりも１００〜１０００倍の感度の向上が達成で
きた。
【００８３】実施例１１ 重合体-オリゴヌクレオチドプローブを用いる液体ハイ
ブリダイゼーシヨン 液体ハイブリダイゼーシヨンは、ハイブリッド形成複合
体の分離のためにダイナル社（Ｄｙｎａｌ Ｃｏ.，Ｈ
ａｍｂｕｒｇ）のストレプトアビジン被覆の磁性粒子を
用いるサンドウイツチハイブリダイゼーシヨンを行っ
た。
ブリダイゼーシヨン 液体ハイブリダイゼーシヨンは、ハイブリッド形成複合
体の分離のためにダイナル社（Ｄｙｎａｌ Ｃｏ.，Ｈ
ａｍｂｕｒｇ）のストレプトアビジン被覆の磁性粒子を
用いるサンドウイツチハイブリダイゼーシヨンを行っ
た。
【００８４】液体ハイブリダイゼーシヨン試験は、ヌク
レオチド配列５′ｄＣＴＧＣＴＣＧＴＡＧＡＣＡＡＴＧ
ＣＧＴを有する５′-ビオチニル化捕捉（ｃａｐｔｕｒ
ｅ）オリゴヌクレオチドプローブ１００ｎｇ、実施例８
における如き重合体オリゴヌクレオチドプローブ（検出
遺伝子プローブ）１００ｎｇ及び５０μｌの容量中種々
の濃度のニトロソモナス標的ＤＮＡを用いるサンドウイ
ツチ試験として行った。
レオチド配列５′ｄＣＴＧＣＴＣＧＴＡＧＡＣＡＡＴＧ
ＣＧＴを有する５′-ビオチニル化捕捉（ｃａｐｔｕｒ
ｅ）オリゴヌクレオチドプローブ１００ｎｇ、実施例８
における如き重合体オリゴヌクレオチドプローブ（検出
遺伝子プローブ）１００ｎｇ及び５０μｌの容量中種々
の濃度のニトロソモナス標的ＤＮＡを用いるサンドウイ
ツチ試験として行った。
【００８５】１００℃で５０分間加熱し、続いて０℃に
冷却した後、ベーリンガー・マンハイムの２×ハイブリ
ッド形成混合物１の５０μｌを添加し、ハイブリッド形
成を６８℃で１時間行った。磁性ビーズを予じめ１×ハ
イブリッド形成混合物１で処理し、磁石による分離後、
液体をピペットで除去してハイブリッド形成負荷物に添
加し、室温で１／２時間穏やかに動かしながら保温し
た。結合したハイブリッド形成複合体をビーズと共に分
離し、残りの液体をピペットで除去し、そして洗浄を、
緩衝液Ａ（２×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ）で１回及び次
いで緩衝液Ｂ（０.１ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ）で２回行
った。続いて２回蒸留した水５００μｌを添加し、ハイ
ブリッド形成複合体中の重合体-オリゴヌクレオチドプ
ローブの蛍光を蛍光分光光度計により３７５ｎｍでの励
起及び４９５ｎｍでの放射で測定した。
冷却した後、ベーリンガー・マンハイムの２×ハイブリ
ッド形成混合物１の５０μｌを添加し、ハイブリッド形
成を６８℃で１時間行った。磁性ビーズを予じめ１×ハ
イブリッド形成混合物１で処理し、磁石による分離後、
液体をピペットで除去してハイブリッド形成負荷物に添
加し、室温で１／２時間穏やかに動かしながら保温し
た。結合したハイブリッド形成複合体をビーズと共に分
離し、残りの液体をピペットで除去し、そして洗浄を、
緩衝液Ａ（２×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ）で１回及び次
いで緩衝液Ｂ（０.１ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ）で２回行
った。続いて２回蒸留した水５００μｌを添加し、ハイ
ブリッド形成複合体中の重合体-オリゴヌクレオチドプ
ローブの蛍光を蛍光分光光度計により３７５ｎｍでの励
起及び４９５ｎｍでの放射で測定した。
【００８６】これと平行に、化学発光を介するハイブリ
ッド形成の検出のために遮閉反応及び抗体反応を行っ
た。ＤＮＡを負荷したビーズを洗浄緩衝液（０.１Ｍマ
レイン酸、０.１Ｍ ＮａＣｌ、pＨ７.５、０.３％ツウ
イーン（Ｔｗｅｅｎ）２０）１５０μｌで１回処理し、
そして分離及び洗浄緩衝液のピペットでの除去後、緩衝
液２（０.１Ｍマレイン酸、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、pＨ
７.５、１％遮閉剤（ベーリンガー））４００μｌを添
加した。１／２時間の室温でのインキユベート後に、混
合物を分離し、液体をピペットで除去し、抗体コンジュ
ゲート溶液（ＡＫ１：１０,０００、緩衝液２中）１０
０μｌを添加し、混合物を１／２時間室温でインキユベ
ートした。次いで混合物を分離し、液体をピペットで除
去し、そして穏やかに動かしながら２×１５分間４００
μｌの洗浄緩衝液で処理した。次いで混合物を分離し、
緩衝液３（０.１Ｍトリス／ＨＣｌ緩衝液、０.１Ｍ Ｎ
ａＣｌ及び５０ｍＭ ＭｇＣｌ2、pＨ９.５）１５０μ
ｌで処理した。再び混合物を分離し、そして緩衝液３中
ＡＭＰＰＤ１：１００を含む検出溶液と共に水浴上３７
℃で１５分間インキユベートし、次いで化学発光を発光
光度計により４７７ｎｍで測定した［ルマック（Ｌｕｍ
ａｃ）のルマカウンター（Ｌｕｍａｃｏｕｎｔｅ
ｒ）］。
ッド形成の検出のために遮閉反応及び抗体反応を行っ
た。ＤＮＡを負荷したビーズを洗浄緩衝液（０.１Ｍマ
レイン酸、０.１Ｍ ＮａＣｌ、pＨ７.５、０.３％ツウ
イーン（Ｔｗｅｅｎ）２０）１５０μｌで１回処理し、
そして分離及び洗浄緩衝液のピペットでの除去後、緩衝
液２（０.１Ｍマレイン酸、０.１５Ｍ ＮａＣｌ、pＨ
７.５、１％遮閉剤（ベーリンガー））４００μｌを添
加した。１／２時間の室温でのインキユベート後に、混
合物を分離し、液体をピペットで除去し、抗体コンジュ
ゲート溶液（ＡＫ１：１０,０００、緩衝液２中）１０
０μｌを添加し、混合物を１／２時間室温でインキユベ
ートした。次いで混合物を分離し、液体をピペットで除
去し、そして穏やかに動かしながら２×１５分間４００
μｌの洗浄緩衝液で処理した。次いで混合物を分離し、
緩衝液３（０.１Ｍトリス／ＨＣｌ緩衝液、０.１Ｍ Ｎ
ａＣｌ及び５０ｍＭ ＭｇＣｌ2、pＨ９.５）１５０μ
ｌで処理した。再び混合物を分離し、そして緩衝液３中
ＡＭＰＰＤ１：１００を含む検出溶液と共に水浴上３７
℃で１５分間インキユベートし、次いで化学発光を発光
光度計により４７７ｎｍで測定した［ルマック（Ｌｕｍ
ａｃ）のルマカウンター（Ｌｕｍａｃｏｕｎｔｅ
ｒ）］。
【００８７】結果 重合体中のクマリン染料の信号増巾の結果として、ＤＮ
Ａの直接的な蛍光標識化よりも明らかに高感度が達成さ
れた。ＤＮＡ１〜０.１ｐｇでの検出限界は化学発光感
度により殆んど達成された。
Ａの直接的な蛍光標識化よりも明らかに高感度が達成さ
れた。ＤＮＡ１〜０.１ｐｇでの検出限界は化学発光感
度により殆んど達成された。
【００８８】実施例１２ 重合体-オリゴヌクレオチドプローブの増巾されたＤＮ
Ａとのハイブリダイゼーシヨン この感度の増加により、重合体-オリゴヌクレオチドプ
ローブの蛍光を用いることによる検出及びこれによる特
に簡単な検出は、公知の検出技術、例えば化学発光、ブ
ロモクロロインドリルホスフエート／ニトロブルーテト
ラゾリウム色素反応及び放射性法と比較して非常に良好
な代替法となる。
Ａとのハイブリダイゼーシヨン この感度の増加により、重合体-オリゴヌクレオチドプ
ローブの蛍光を用いることによる検出及びこれによる特
に簡単な検出は、公知の検出技術、例えば化学発光、ブ
ロモクロロインドリルホスフエート／ニトロブルーテト
ラゾリウム色素反応及び放射性法と比較して非常に良好
な代替法となる。
【００８９】標的のＤＮＡの増巾はポリメラーゼ連鎖反
応（ヨーロッパ特許第２００,３６２号及び同２０１,１
８４号）により、他にヘアピン増巾法（ヨーロッパ特許
第４２７,０７４号）により行った。
応（ヨーロッパ特許第２００,３６２号及び同２０１,１
８４号）により、他にヘアピン増巾法（ヨーロッパ特許
第４２７,０７４号）により行った。
【００９０】ＰＣＲ反応に対しては、ニトロソモナス・
ユーロペエ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ ｅｕｒｏｐａ
ｅ）のゲノムＤＮＡ２μｇ、プライマー（ｐｒｉｍｅ
ｒ）１（５′ｄＡＴＣＣＡＧＴＴＧＣＴＴＣＡＡＣ）及
びプライマー２（５′ＡＣＴＧＧＣＡＧＧＣＡＧＣＡ
Ｇ）２μモル、シータス（Ｃｅｔｕｓ）／パーキン-エ
ルマー（Ｐｅｒｋｉｎ-Ｅｌｍｅｒ）のＴａｑ-ポリメラ
ーゼ２.５単位並びにそれぞれの場合にＰＣＲ緩衝液
（５０ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭトリス／ＨＣｌ、pＨ８.
３）１００μｌの全量中ｄＮＴＰＳ２００μモル、１.
５ｍＭ ＭｇＣｌ2及び０.０１％ゼラチンを使用した。
増巾はシータス／パーキン-エルマー社のＰＣＲプロセ
ッサーで行った。
ユーロペエ（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ ｅｕｒｏｐａ
ｅ）のゲノムＤＮＡ２μｇ、プライマー（ｐｒｉｍｅ
ｒ）１（５′ｄＡＴＣＣＡＧＴＴＧＣＴＴＣＡＡＣ）及
びプライマー２（５′ＡＣＴＧＧＣＡＧＧＣＡＧＣＡ
Ｇ）２μモル、シータス（Ｃｅｔｕｓ）／パーキン-エ
ルマー（Ｐｅｒｋｉｎ-Ｅｌｍｅｒ）のＴａｑ-ポリメラ
ーゼ２.５単位並びにそれぞれの場合にＰＣＲ緩衝液
（５０ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭトリス／ＨＣｌ、pＨ８.
３）１００μｌの全量中ｄＮＴＰＳ２００μモル、１.
５ｍＭ ＭｇＣｌ2及び０.０１％ゼラチンを使用した。
増巾はシータス／パーキン-エルマー社のＰＣＲプロセ
ッサーで行った。
【００９１】負荷物を用いて、最初にＤＮＡの初期溶融
を９４℃で２分３０秒間行い、次いでサイクル当りＤＮ
Ａを９４℃で１分間変性し、プライマーのアニーリング
を４０〜４５℃で２分間行い、そしてプライマー伸長を
７２℃で３分間行った。最後に３５回のサイクル後に２
０分間の伸長を７２℃で行い、負荷物を４℃に冷却し
た。
を９４℃で２分３０秒間行い、次いでサイクル当りＤＮ
Ａを９４℃で１分間変性し、プライマーのアニーリング
を４０〜４５℃で２分間行い、そしてプライマー伸長を
７２℃で３分間行った。最後に３５回のサイクル後に２
０分間の伸長を７２℃で行い、負荷物を４℃に冷却し
た。
【００９２】増巾したＤＮＡを１００℃で５分間変性
し、次いで負荷物を０℃まで冷却し、氷冷した２０×Ｓ
ＳＣ２００μｌを添加し、この混合物を直ぐに、シユラ
イヒヤー・アンド・シユール社のマニホールド（Ｍａｎ
ｉｆｏｌｄ）II型濾過具を用いてニトロセルロース又は
ナイロン膜に適用した。次いでフイルター上のＤＮＡを
８０℃下に２時間定着させた。
し、次いで負荷物を０℃まで冷却し、氷冷した２０×Ｓ
ＳＣ２００μｌを添加し、この混合物を直ぐに、シユラ
イヒヤー・アンド・シユール社のマニホールド（Ｍａｎ
ｉｆｏｌｄ）II型濾過具を用いてニトロセルロース又は
ナイロン膜に適用した。次いでフイルター上のＤＮＡを
８０℃下に２時間定着させた。
【００９３】重合体-オリゴヌクレオチドプローブを用
いるスロット・ブロットハイブリダイゼーシヨン及び検
出は実施例１１と同様に行った。
いるスロット・ブロットハイブリダイゼーシヨン及び検
出は実施例１１と同様に行った。
【００９４】結果 標的の核酸の増巾と重合体中のクマリン色素の信号増巾
とを組合せることにより、個々のＤＮＡ分子の検出を可
能にする感度が達成された。この結果重合体の蛍光を介
する解釈は、高感度化学発光法の真の代替法となる。ま
た酵素的な化学発光生成と比べて、重合体中の蛍光は、
直接測定することができる。
とを組合せることにより、個々のＤＮＡ分子の検出を可
能にする感度が達成された。この結果重合体の蛍光を介
する解釈は、高感度化学発光法の真の代替法となる。ま
た酵素的な化学発光生成と比べて、重合体中の蛍光は、
直接測定することができる。
【００９５】本発明の特徴および態様は以下の通りであ
る： １．式（Ｉ）
る： １．式（Ｉ）
【００９６】
【化２２】Ａ−Ｌ−Ｂ−［−Ｌ−Ａ］y （Ｉ） ［式中、Ａは生物学的に活性な部分を意味し、Ｂはラジ
カルを生成する部分を意味し、Ｌは結合員の基を意味
し、そしてｙは数０又は１を意味する］の生物学的に活
性な開始剤。
カルを生成する部分を意味し、Ｌは結合員の基を意味
し、そしてｙは数０又は１を意味する］の生物学的に活
性な開始剤。
【００９７】２．Ａがビオチン、ジギトキシン、ジギト
キシゲニン、又はヌクレオチド単位１〜８０のオリゴヌ
クレオチドであり、Ｌが次の基：−ＳＯ2−，−ＣＯＯ
−，−ＳＯ2ＮＨ−，−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−
Ｏ−，−ＮＨ−ＣＳ−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−
ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ−，−Ｏ−，−ＮＨ−，−Ｓ−から選
択され、Ｂが次の構造 １）一般式（Ｖ）
キシゲニン、又はヌクレオチド単位１〜８０のオリゴヌ
クレオチドであり、Ｌが次の基：−ＳＯ2−，−ＣＯＯ
−，−ＳＯ2ＮＨ−，−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−
Ｏ−，−ＮＨ−ＣＳ−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−
ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ−，−Ｏ−，−ＮＨ−，−Ｓ−から選
択され、Ｂが次の構造 １）一般式（Ｖ）
【００９８】
【化２３】Ｒ11−Ｎ＝Ｎ−Ｒ12 （Ｖ） ［式中、Ｒ11及びＲ12はＣ1〜Ｃ20アルキル、Ｃ3〜Ｃ10
シクロアルキル、Ｃ7〜Ｃ20アラルキル又は基
シクロアルキル、Ｃ7〜Ｃ20アラルキル又は基
【００９９】
【化２４】
【０１００】を意味し、但しＹはＣＮ、Ｎ3或いは
【０１０１】
【化２５】
【０１０２】を意味し、なおＲ13、Ｒ14及びＲ15は相互
に独立してＣ1〜Ｃ20アルキル又はＣ3〜Ｃ6シクロアル
キルを意味し、或いはＲ13及びＲ14が連結しているなら
ばＣ2〜Ｃ30アルキレンを意味し、或いは更に基Ｒ13又
はＲ14の、両方が同時にではなくて、１つはフエニル、
トリル、キシリル、ベンジル又はフエネチルを意味し、
Ｒ16は独立してＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアル
キル又はＣ6〜Ｃ12アリールを意味する］のアゾ構造、 ２）一般式（VI）
に独立してＣ1〜Ｃ20アルキル又はＣ3〜Ｃ6シクロアル
キルを意味し、或いはＲ13及びＲ14が連結しているなら
ばＣ2〜Ｃ30アルキレンを意味し、或いは更に基Ｒ13又
はＲ14の、両方が同時にではなくて、１つはフエニル、
トリル、キシリル、ベンジル又はフエネチルを意味し、
Ｒ16は独立してＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアル
キル又はＣ6〜Ｃ12アリールを意味する］のアゾ構造、 ２）一般式（VI）
【０１０３】
【化２６】
【０１０４】［式中、Ｚはヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルキ
ル又はＣ6〜Ｃ20アリールを表わし、Ｒ17及びＲ18は相
互に独立してＣ1〜Ｃ6アルキル又はＣ6〜Ｃ20ナフチル
を表わし、及びｎは数１〜６を表わす］のテトラアリー
ル／アルキルエタン、 ３）式（VII）
ル又はＣ6〜Ｃ20アリールを表わし、Ｒ17及びＲ18は相
互に独立してＣ1〜Ｃ6アルキル又はＣ6〜Ｃ20ナフチル
を表わし、及びｎは数１〜６を表わす］のテトラアリー
ル／アルキルエタン、 ３）式（VII）
【０１０５】
【化２７】
【０１０６】［式中、Ｒ20、Ｒ21及びＲ23は相互に独立
して-(-ＣＨ2-)-mＨを表わし、但しｍは数１〜６を表わ
す］のジニトリル、 ４）一般式（VIII）
して-(-ＣＨ2-)-mＨを表わし、但しｍは数１〜６を表わ
す］のジニトリル、 ４）一般式（VIII）
【０１０７】
【化２８】
【０１０８】［式中、ｌは数０〜６を意味し、そしてＲ
24はフエニレン、ナフチレン、Ｃ3〜Ｃ6アルキレン又は
Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキレンを意味する］のパーオキサイ
ド、から選択される、上記１の式（Ｉ）の生物学的に活
性な開始剤。
24はフエニレン、ナフチレン、Ｃ3〜Ｃ6アルキレン又は
Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキレンを意味する］のパーオキサイ
ド、から選択される、上記１の式（Ｉ）の生物学的に活
性な開始剤。
【０１０９】３．Ｂが式（Ｖａ）
【０１１０】
【化２９】
【０１１１】［式中、ｐは数１〜２０を意味し、Ｙ1は
ＣＮ、Ｎ3、ＣＯＯＲ26を意味し、そしてＲ25及びＲ26
は相互に独立してＣ1〜Ｃ6アルキル又はＣ3〜Ｃ6シクロ
アルキルを意味する］のアゾ構造である。
ＣＮ、Ｎ3、ＣＯＯＲ26を意味し、そしてＲ25及びＲ26
は相互に独立してＣ1〜Ｃ6アルキル又はＣ3〜Ｃ6シクロ
アルキルを意味する］のアゾ構造である。
【０１１２】上記１の生物学的に活性な開始剤。
【０１１３】４．式 開始剤１：
【０１１４】
【化３０】
【０１１５】開始剤２：
【０１１６】
【化３１】
【０１１７】開始剤３：
【０１１８】
【化３２】
【０１１９】開始剤４：
【０１２０】
【化３３】
【０１２１】開始剤５：
【０１２２】
【化３４】
【０１２３】開始剤６：
【０１２４】
【化３５】
【０１２５】の上記１の生物学的に活性な開始剤。
【０１２６】５．一般式（IX）
【０１２７】
【化３６】Ｘ1−Ｒ−（−Ｘ1）y （IX） ［式中、Ｂは上に定義した通りであり、そしてＸ1はＮ
ＣＯ、ＮＣＳ、ＣＯＣｌ、ＣＯＯＨ、ＣＯ−Ｏ−ヒドロ
キシコハク酸イミド、ＯＨ、ＮＨ2、ＳＨ、Ｃｌ、Ｂｒ
又はＩであり、そしてｙは０又は１である］のラジカル
生成化合物を、Ｘ1で示した基に対して化学的不活性な
溶媒中において１又は２当量の生物学的に活性な基質Ａ
と０〜４０℃の温度で反応させる上記１の一般式（Ｉ）
ＣＯ、ＮＣＳ、ＣＯＣｌ、ＣＯＯＨ、ＣＯ−Ｏ−ヒドロ
キシコハク酸イミド、ＯＨ、ＮＨ2、ＳＨ、Ｃｌ、Ｂｒ
又はＩであり、そしてｙは０又は１である］のラジカル
生成化合物を、Ｘ1で示した基に対して化学的不活性な
溶媒中において１又は２当量の生物学的に活性な基質Ａ
と０〜４０℃の温度で反応させる上記１の一般式（Ｉ）
【０１２８】
【化３７】Ａ−Ｌ−Ｂ−［−Ｌ−Ａ]y （Ｉ） の生物学的に活性な開始剤の製造法。
【０１２９】６．上記１〜３の式（Ｉ）の生物学的に活
性な開始剤をラジカル重合に使用すること。
性な開始剤をラジカル重合に使用すること。
Claims (1)
- 【請求項１】 式（Ｉ） 【化１】Ａ−Ｌ−Ｂ−［−Ｌ−Ａ］y （Ｉ） ［式中、Ａは生物学的に活性な部分を意味し、Ｂはラジ
カルを生成する部分を意味し、Ｌは結合員の基を意味
し、そしてｙは数０又は１を意味する］の生物学的に活
性な開始剤。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4234074 | 1992-10-09 | ||
| DE4234074.8 | 1992-10-09 | ||
| DE4322885.2 | 1993-07-09 | ||
| DE4322885A DE4322885A1 (de) | 1992-10-09 | 1993-07-09 | Biologisch aktive Initiatoren für die radikalische Polymerisation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06234806A true JPH06234806A (ja) | 1994-08-23 |
Family
ID=25919324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27293993A Pending JPH06234806A (ja) | 1992-10-09 | 1993-10-06 | ラジカル重合用の生物学的に活性な開始剤 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0591809A2 (ja) |
| JP (1) | JPH06234806A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012132936A1 (ja) * | 2011-03-30 | 2012-10-04 | 株式会社Adeka | 重合性液晶組成物、偏光発光性塗料、新規ナフトラクタム誘導体、新規クマリン誘導体、新規ナイルレッド誘導体及び新規アントラセン誘導体 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2724461B1 (fr) * | 1994-09-09 | 1996-12-20 | Prolabo Sa | Microsphere de latex biotinylee, procede de preparation d'une telle microsphere et utilisation en tant qu'agent de detection biologique |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8423228D0 (en) * | 1984-09-14 | 1984-10-17 | Unilever Plc | Specific binding materials |
| US4822883A (en) * | 1986-02-19 | 1989-04-18 | Pennwalt Corporation | Peroxide free radical initiators containing hindered amine light stabilizer groups |
| DE4132467A1 (de) * | 1991-09-30 | 1993-04-01 | Bayer Ag | Fotochemisch reaktive initiatoren fuer die radikalische polymerisation |
-
1993
- 1993-09-27 EP EP93115566A patent/EP0591809A2/de not_active Withdrawn
- 1993-10-06 JP JP27293993A patent/JPH06234806A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012132936A1 (ja) * | 2011-03-30 | 2012-10-04 | 株式会社Adeka | 重合性液晶組成物、偏光発光性塗料、新規ナフトラクタム誘導体、新規クマリン誘導体、新規ナイルレッド誘導体及び新規アントラセン誘導体 |
| US9475991B2 (en) | 2011-03-30 | 2016-10-25 | Adeka Corporation | Polymerizable liquid crystal composition, polarized light-emitting coating material, novel naphtholactam derivative novel coumarin derivative, novel nile red derivative, and novel anthracene derivative |
| JP6027962B2 (ja) * | 2011-03-30 | 2016-11-16 | 株式会社Adeka | 重合性液晶組成物、偏光発光性塗料、新規ナフトラクタム誘導体、新規クマリン誘導体、新規ナイルレッド誘導体及び新規アントラセン誘導体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0591809A3 (ja) | 1994-08-03 |
| EP0591809A2 (de) | 1994-04-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1317207C (en) | Solution phase nucleic acid sandwich assay and polynucleotide probes useful therein | |
| JP2797047B2 (ja) | 受身固定により核酸フラグメントを固体支持体上に不動化する方法、そのようにして得られた固体支持体およびその使用 | |
| US5453461A (en) | Biologically active polymers | |
| EP0276302B1 (en) | Nucleic acid probe assay methods and compositions | |
| JP2548112B2 (ja) | 担体およびオリゴヌクレオチドの合成 | |
| US5478893A (en) | End-attachment of oligonucleotides to polyacrylamide solid supports for capture and detection of nucleic acids | |
| US5710264A (en) | Large comb type branched polynucleotides | |
| US5093232A (en) | Nucleic acid probes | |
| US5278043A (en) | Ruthenium-lumazine energy transfer systems | |
| US4910300A (en) | Method for making nucleic acid probes | |
| JP4714320B2 (ja) | アミノ基転移による固相核酸標識化 | |
| US5547860A (en) | Sulphocoumarin-containing nucleotides and their use in processes for detecting nucleic acids | |
| RU2142467C1 (ru) | Полинуклеотиды, способ их получения, гибридизационный анализ нуклеиновой кислоты | |
| EP1257695B1 (en) | Biomolecules having multiple attachment moieties for binding to a substrate surface | |
| US5700921A (en) | Labeling nucleic acids | |
| US4895955A (en) | Non-radioactive carbodiimide precursor to nucleic acid probes | |
| JP2004309486A (ja) | マルチシグナル標識化試薬及びそれらの標識化方法並びに定量化方法 | |
| JPH06234806A (ja) | ラジカル重合用の生物学的に活性な開始剤 | |
| US5155216A (en) | Nucleic acids labeled with a chemiluminescent acridine ester | |
| US5534630A (en) | Biologically active initiators for radical polymerization | |
| US7129229B2 (en) | Hydrazide building blocks and hydrazide modified biomolecules | |
| US8067581B2 (en) | Biomolecules having multiple attachment moieties for binding to a substrate surface | |
| EP1309730B1 (en) | New hydrazide building blocks and hydrazide modified biomolecules | |
| JP2002179683A (ja) | ポリアミノ酸誘導体から成る核酸関連物質反応試薬 | |
| JPH0692968A (ja) | ビオチン導入試薬 |