JPH0622772A - Production of palmitoleic acid utilizing blue-green algae - Google Patents
Production of palmitoleic acid utilizing blue-green algaeInfo
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- JPH0622772A JPH0622772A JP4695791A JP4695791A JPH0622772A JP H0622772 A JPH0622772 A JP H0622772A JP 4695791 A JP4695791 A JP 4695791A JP 4695791 A JP4695791 A JP 4695791A JP H0622772 A JPH0622772 A JP H0622772A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、藍藻を利用してパルミ
トオレイン酸を製造する方法に関するものである。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for producing palmitooleic acid using cyanobacteria.
【０００２】[0002]
【従来の技術】パルミトオレイン酸は脳血栓の治療薬と
して有用であると言われ、その量産方法の確立が注目さ
れている。従来、パルミトオレイン酸は、マカデミアナ
ッツの実の中に含まれていることが知られており、この
マカデミアナッツの中からパルミトオレイン酸を抽出す
ることが行われていたが、微生物を利用したパルミトオ
レイン酸の製造方法はまだ知られていない。2. Description of the Related Art Palmitooleic acid is said to be useful as a therapeutic drug for cerebral thrombosis, and attention has been paid to establishing a mass production method thereof. Conventionally, palmitooleic acid is known to be contained in the seeds of macadamia nuts, and palmitooleic acid has been extracted from this macadamia nut. The method for producing tooleic acid is not yet known.
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記事情に鑑
み成されたもので、藍藻を利用してパルミトオレイン酸
を効率よく製造する方法を提供することを目的とする。The present invention has been made in view of the above circumstances, and an object thereof is to provide a method for efficiently producing palmitooleic acid using cyanobacteria.
【０００４】[0004]
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
本発明は、パルミトオレイン酸を生産した藍藻に塩酸メ
タノールから成るメチル化剤を加えて加熱する工程と、
前記工程で生成したパルミトオレイン酸のメチル化物を
ｎ−パラフィン系炭化水素等の抽出剤で抽出する工程と
を含むことを特徴とする藍藻を用いたパルミトオレイン
酸の製造方法である。また、シネココッカス（Synechoc
occus）属又はアナベナ（Anabaena）属に属し、パルミ
トオレイン酸生産能を有する菌株を集菌したものに塩酸
メタノールから成るメチル化剤を加えて加熱する工程
と、前記工程で生成したパルミトオレイン酸のメチル化
物を抽出剤で抽出する工程とを含むことを特徴とする藍
藻を利用するパルミトオレイン酸の製造方法である。In order to achieve the above object, the present invention comprises a step of heating a cyanobacteria producing palmitooleic acid by adding a methylating agent consisting of hydrochloric acid methanol, and heating the same.
And a step of extracting the methylated product of palmitooleic acid produced in the above step with an extractant such as n-paraffin hydrocarbon, and the like, is a method for producing palmitooleic acid using cyanobacteria. Also, Synechococcus
occus) or Anabaena genus and having collected palmitooleic acid-producing strains, a step of heating by adding a methylating agent consisting of hydrochloric acid methanol, and palmitoolein produced in the above step And a step of extracting an acid methylated product with an extractant, which is a method for producing palmitooleic acid utilizing cyanobacteria.
【０００５】[0005]
【作用】パスツール研究所が提案している藍藻の分類に
よれば、藍藻は先ず単細胞種（Unicellular）と多細胞
種又は糸状体種（Filamentous）に分けられ、前者の単
細胞種は、シネココッカス（Synechococcus）属、シネ
コシステイス（Synechocystis）属、グロエオバクター
（Gloeobactor）属、グロエオカプサ（Gloeocapsa）属
に分けられ、後者の多細胞種は、デルモカルパ（Dermoc
arpa）属、プレウロカプサ（Pleurocapsa）属、オシラ
トリア（Oscillatoria）属、スピルリナ（Spirulina）
属、トリコデスミウム（Trichodesmium）属、アナベナ
（Anabaena）属、カロスリクス（Calothrix）属、ノス
トック（Nostoc）属、フィシェレラ（Fischerella）
属、マスチゴクラダス（Mastigocladus）属、スチゴネ
マ（Stigonema）属に分けられる。この藍藻からパルミ
トオレイン酸を抽出する方法を種々検討した結果、塩酸
メタノールから成るメチル化剤を加えて加熱することに
より、ｎ−パラフィン系炭化水素に効率よく抽出される
メチル化物になることがわかった。特に、シネココッカ
ス属のユニセルラー（Unicellular） ATCC 27265、アナ
ベナ属やスピルリナ属のフィラメンタス（Filamentou
s） ATCC 33047, 33081等がパルミトオレイン酸を多く
生産し、それらの菌株を培養して増菌したものから上記
方法で抽出することにより、効率よくパルミトオレイン
酸を製造することが可能である。[Function] According to the classification of cyanobacteria proposed by Pasteur Institute, cyanobacteria are first divided into single cell type (Unicellular) and multicellular type or filamentous type (Filamentous), and the former single cell type is Synecococcus ( Synechococcus genus, Synechocystis genus, Gloeobactor genus, and Gloeocapsa genus, the latter multicellular species is the Dermocalpa (Dermocpa)
genus arpa), genus Pleurocapsa, genus Oscillatoria, Spirulina
Genus, Trichodesmium genus, Anabaena genus, Calothrix genus, Nostoc genus, Fischerella
It is divided into the genus, the genus Mastigocladus, and the genus Stigonema. As a result of various studies on the method for extracting palmitooleic acid from cyanobacteria, it is possible to obtain a methylated product which can be efficiently extracted into n-paraffin hydrocarbons by adding a methylating agent consisting of hydrochloric acid methanol and heating. all right. In particular, Unicellular ATCC 27265 of the genus Synechococcus and Filamentou of the genera Anabaena and Spirulina
s) ATCC 33047, 33081, etc. produce a large amount of palmitooleic acid, and it is possible to efficiently produce palmitooleic acid by extracting from the strains grown by culturing these strains by the above method. is there.
【０００６】[0006]
【実施例】本発明の実施例をその工程順に説明する。先
ず、後述する培地で培養した藍藻を集めた乾燥菌体１０
〜１００ｍｇを入れた試験管に、脂肪酸をメチル化する
ために５％塩酸メタノールを３ｍｌ加える。前記塩酸メ
タノールは２％〜１０％メタノールでもよい。また加え
る量も２〜５ｍｌ程度がよい。次に、前記試験管を９５
〜１００℃の沸騰水浴中で、２〜４時間加熱する。その
後、室温（約２５℃）まで冷却後、純水０．３〜１．０
ｍｌを加える。以上により藍藻中のパルミトオレイン酸
はメチル化物になっている。そしてｎ−ヘキサン１．０
〜３．０ｍｌを加え、よく撹拌し、ｎ−ヘキサンを分取
する。この操作を３〜５回繰返す。なおｎ−ヘキサンの
代わりにｎ−ヘプタン又はｎ−オクタン等のｎ−パラフ
ィン系炭化水素又はエーテル、クロロホルム、ジクロロ
エタン、石油エーテル等を用いてもよい。次に不活性ガ
スであるアルゴン、窒素またはヘリウムでｎ−ヘキサン
を飛ばして濃縮する。このようにして得られた濃縮物を
逆相クロマトグラフおよびフラクションコレクタを用い
て、〔化１〕のパルミトオレイン酸エステルを単離す
る。その条件は、直径３０〜５０ｍｍ長さ２５０〜５０
０ｍｍの充填剤入りカラムＣ−１８にカラム圧1000〜15
00psiで、メタノール−水（80〜85：20〜15）を移動相
として、流速０．７〜２．０ｍｌ／ｍｉｎである。検出
器は差動屈折計である。EXAMPLES Examples of the present invention will be described in the order of steps. First, dried bacterial cells 10 obtained by collecting cyanobacteria cultured in the medium described below.
To a test tube containing -100 mg, add 3 ml of 5% hydrochloric acid methanol to methylate fatty acids. The hydrochloric acid methanol may be 2% to 10% methanol. Also, the amount to be added is preferably about 2 to 5 ml. Next, the test tube is replaced with 95
Heat in boiling water bath at ~ 100 ° C for 2-4 hours. Then, after cooling to room temperature (about 25 ° C), pure water 0.3 to 1.0
Add ml. As a result, palmitooleic acid in cyanobacteria is a methylated product. And n-hexane 1.0
~ 3.0 ml is added, well stirred, and n-hexane is separated. This operation is repeated 3 to 5 times. Instead of n-hexane, n-paraffin hydrocarbon such as n-heptane or n-octane or ether, chloroform, dichloroethane, petroleum ether and the like may be used. Then, n-hexane is blown off with an inert gas such as argon, nitrogen or helium to concentrate. The concentrate thus obtained is used to isolate the palmitooleic acid ester of [Chemical Formula 1] using a reverse phase chromatograph and a fraction collector. The condition is a diameter of 30 to 50 mm and a length of 250 to 50.
Column pressure of 1000 to 15 in column C-18 with 0 mm packing material
At 00 psi with methanol-water (80-85: 20-15) as mobile phase, the flow rate is 0.7-2.0 ml / min. The detector is a differential refractometer.
【０００７】[0007]
【化１】 [Chemical 1]
【０００８】次に、菌株とそれを培養した培地について
説明する。 （実施例１）菌株はアナベナ属のフィラメンタス（Fila
mentous） ATCC 33047である。Next, the strain and the medium in which it is cultured will be described. (Example 1) The strain is Filamentus of the genus Anabaena.
mentous) ATCC 33047.
【０００９】培地は以下の組成のものである。The medium has the following composition.
【００１０】ＮａＣｌ １０ｇ／ｌ ＮａＮＯ3 １．５ｇ／ｌ ビタミンＢ12 １μｇ／ｌ ＫＨ2ＰＯ4 ３０ｍｇ／ｌ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ７５ｍｇ／ｌ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ３６ｍｇ／ｌ クエン酸 ６ｍｇ／ｌ ＥＤＴＡ−２Ｎａ １ｍｇ／ｌ Ｎａ2ＣＯ3 ２０ｍｇ／ｌ Ferric ammonium ６ｍｇ／ｌ Trace metal mix １ｍｇ／ｌ 培地温度は、２５℃である。NaCl 10 g / l NaNO 3 1.5 g / l Vitamin B 12 1 μg / l KH 2 PO 4 30 mg / l MgSO 4 .7H 2 O 75 mg / l CaCl 2 .2H 2 O 36 mg / l Citric acid 6 mg / l EDTA-2Na 1 mg / l Na 2 CO 3 20 mg / l Ferric ammonium 6 mg / l Trace metal mix 1 mg / l Medium temperature is 25 ° C.
【００１１】明るさは、培養容器表面において、約６０
０ ｌｕｘである。The brightness is about 60 on the surface of the culture vessel.
0 lux.
【００１２】ｐＨは、７．４〜７．６である。The pH is 7.4 to 7.6.
【００１３】この実施例１の培養条件で培養した上記菌
株からは、上記〔化１〕のパルミトオレイン酸は乾燥菌
体１ｇ当り、４６ｍｇ得られた。From the above strain cultivated under the culturing conditions of Example 1, 46 mg of palmitooleic acid of the above [Chemical formula 1] was obtained per 1 g of dry cells.
【００１４】（実施例２）菌株はシネココッカス属のユ
ニセルラー（Unicellular）ATCC 27265である。(Example 2) The strain is Unicellular ATCC 27265 of the genus Synechococcus.
【００１５】培地は実施例１と同じものである。The medium is the same as in Example 1.
【００１６】培地温度は、２５℃である。The medium temperature is 25 ° C.
【００１７】明るさは、培養容器表面において、約６０
０ ｌｕｘである。The brightness is about 60 on the surface of the culture vessel.
0 lux.
【００１８】ｐＨは、７．４〜７．６である。The pH is 7.4 to 7.6.
【００１９】この実施例２の培養条件で培養した上記菌
株からは、上記〔化１〕のパルミトオレイン酸は乾燥菌
体１ｇ当り、４０ｍｇ得られた。From the strain cultivated under the culturing conditions of Example 2, 40 mg of the palmitooleic acid of the above [Chemical formula 1] was obtained per 1 g of the dried microbial cells.
【００２０】（実施例３）菌株はアナベナ属のフィラメ
ンタス（Filamentous） ATCC 33047である。(Example 3) The strain is Filamentous ATCC 33047 of the genus Anabaena.
【００２１】培地は以下の組成のものである。The medium has the following composition.
【００２２】ＮａＣｌ １０ｇ／ｌ ＮａＮＯ3 １．５ｇ／ｌ ビタミンＢ12 １μｇ／ｌ ＫＨ2ＰＯ4 ３０ｍｇ／ｌ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ７５ｍｇ／ｌ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ３６ｍｇ／ｌ クエン酸 ６ｍｇ／ｌ ＥＤＴＡ−２Ｎａ １ｍｇ／ｌ Ｎａ2ＣＯ3 ２０ｍｇ／ｌ Ferric ammonium ６ｍｇ／ｌ Trace metal mix １ｍｇ／ｌ ＣＨ3ＣＯＯＮａ ３０ｍｇ／ｌ 培地温度は、２５℃である。NaCl 10 g / l NaNO 3 1.5 g / l Vitamin B 12 1 μg / l KH 2 PO 4 30 mg / l MgSO 4 .7H 2 O 75 mg / l CaCl 2 .2H 2 O 36 mg / l Citric acid 6 mg / l EDTA-2Na 1 mg / l Na 2 CO 3 20 mg / l Ferric ammonium 6 mg / l Trace metal mix 1 mg / l CH 3 COONa 30 mg / l The medium temperature is 25 ° C.
【００２３】明るさは、培養容器表面において、約６０
０ ｌｕｘである。The brightness is about 60 on the surface of the culture vessel.
0 lux.
【００２４】ｐＨは、７．４〜７．６である。The pH is 7.4 to 7.6.
【００２５】この実施例３の培養条件で培養した上記菌
株からは、上記〔化１〕のパルミトオレイン酸は乾燥菌
体１ｇ当り、５０ｍｇ得られた。From the above strain cultivated under the culture conditions of Example 3, 50 mg of the palmitooleic acid of the above-mentioned [Chemical formula 1] was obtained per 1 g of dry cells.
【００２６】（実施例４）菌株はアナベナ属のフィラメ
ンタス（Filamentous） ATCC 33047である。(Example 4) The strain is Filamentous ATCC 33047 of the genus Anabaena.
【００２７】培地は実施例１と同じものである。The medium is the same as in Example 1.
【００２８】培地温度は、２５℃である。The medium temperature is 25 ° C.
【００２９】明るさは、培養容器表面において、約１２
００ ｌｕｘである。The brightness is about 12 on the surface of the culture container.
00 lux.
【００３０】ｐＨは、７．４〜７．６である。The pH is 7.4 to 7.6.
【００３１】この実施例４の培養条件で培養した上記菌
株からは、上記〔化１〕のパルミトオレイン酸は乾燥菌
体１ｇ当り、４９ｍｇ得られた。From the strain cultivated under the culturing conditions of Example 4, 49 mg of the palmitooleic acid of the above [Chemical formula 1] was obtained per 1 g of the dried microbial cells.
【００３２】[0032]
【発明の効果】本発明によれば、藍藻を利用してパルミ
トオレイン酸を効率よく製造することができ、その量産
に対応することができる。INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, palmitooleic acid can be efficiently produced using cyanobacteria, and mass production thereof can be dealt with.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 阿部 秀夫 埼玉県狭山市柏原3618−26狭山ニュータウ ン132−６ ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continued Front Page (72) Hideo Abe Inventor Hideo Abe 3618-26 Kashiwabara, Sayama City, Saitama 132-6 Sayama New Town
Claims (2)
酸メタノールから成るメチル化剤を加えて加熱する工程
と、前記工程で生成したパルミトオレイン酸のメチル化
物を抽出剤で抽出する工程とを含むことを特徴とする藍
藻を利用するパルミトオレイン酸の製造方法。1. A step of heating a cyanobacteria producing palmitooleic acid by adding a methylating agent comprising methanolic hydrochloric acid, and a step of extracting a methylated product of palmitooleic acid produced in the step with an extractant. A method for producing palmitooleic acid using cyanobacteria, which comprises:
し、パルミトオレイン酸の生産能を有する菌株を集菌し
たものに塩酸メタノールから成るメチル化剤を加えて加
熱する工程と、前記工程で生成したパルミトオレイン酸
のメチル化物を抽出剤で抽出する工程とを含むことを特
徴とする藍藻を利用するパルミトオレイン酸の製造方
法。2. A step of heating a strain obtained by collecting a strain belonging to the genus Synechococcus or the genus Anabaena and having a palmitooleic acid-producing ability by adding a methylating agent consisting of hydrochloric acid methanol, and the palmi produced in the step. And a step of extracting a methylated product of tooleic acid with an extractant, the method for producing palmitooleic acid using cyanobacteria.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4695791A JPH0622772A (en) | 1991-03-12 | 1991-03-12 | Production of palmitoleic acid utilizing blue-green algae |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4695791A JPH0622772A (en) | 1991-03-12 | 1991-03-12 | Production of palmitoleic acid utilizing blue-green algae |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0622772A true JPH0622772A (en) | 1994-02-01 |
Family
ID=12761769
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4695791A Pending JPH0622772A (en) | 1991-03-12 | 1991-03-12 | Production of palmitoleic acid utilizing blue-green algae |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0622772A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9758756B2 (en) | 2012-11-09 | 2017-09-12 | Heliae Development Llc | Method of culturing microorganisms using phototrophic and mixotrophic culture conditions |
| US10240120B2 (en) | 2012-11-09 | 2019-03-26 | Heliae Development Llc | Balanced mixotrophy method |
-
1991
- 1991-03-12 JP JP4695791A patent/JPH0622772A/en active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9758756B2 (en) | 2012-11-09 | 2017-09-12 | Heliae Development Llc | Method of culturing microorganisms using phototrophic and mixotrophic culture conditions |
| US10240120B2 (en) | 2012-11-09 | 2019-03-26 | Heliae Development Llc | Balanced mixotrophy method |
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