JPH06135999A - シゾサッカロミセスに特異的なポリペプチド - Google Patents
シゾサッカロミセスに特異的なポリペプチドInfo
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 新規なシゾサッカロミセス(Schizosaccharom
yces) 特異的タンパク質、それらの抗体および抗体の調
製法を提供する。 【構成】 シゾサッカロミセスに由来し、単クローン性
抗体ＪＨＦ１３−１７（ＤＳＭ ＡＣＣ２００５）によ
って認識される、ポリペプチドまたはその免疫原性部
分。 上記のポリペプチドまたはその免疫原性部分に対
する単クローン性抗体。上記のポリペプチドに対する多
クローン性抗体。多クローン性抗体の調製法であって、
a) シゾサッカロミセス由来であり、単クローン性抗体
ＪＨＦ１３−１７によって認識されるポリペプチドまた
はその免疫原性部分を単離し、 b) 好適な生物を段階
a) からのポリペプチドまたはその免疫原性部分で免疫
することを特徴とする、方法。これらのタンパク質およ
び抗体は酵母のシゾサッカロミセス属を同定するのに用
いることができる。
yces) 特異的タンパク質、それらの抗体および抗体の調
製法を提供する。 【構成】 シゾサッカロミセスに由来し、単クローン性
抗体ＪＨＦ１３−１７（ＤＳＭ ＡＣＣ２００５）によ
って認識される、ポリペプチドまたはその免疫原性部
分。 上記のポリペプチドまたはその免疫原性部分に対
する単クローン性抗体。上記のポリペプチドに対する多
クローン性抗体。多クローン性抗体の調製法であって、
a) シゾサッカロミセス由来であり、単クローン性抗体
ＪＨＦ１３−１７によって認識されるポリペプチドまた
はその免疫原性部分を単離し、 b) 好適な生物を段階
a) からのポリペプチドまたはその免疫原性部分で免疫
することを特徴とする、方法。これらのタンパク質およ
び抗体は酵母のシゾサッカロミセス属を同定するのに用
いることができる。
Description
【０００１】本発明は、新規なシゾサッカロミセス(Sch
izosaccharomyces) 特異的タンパク質およびそれらの抗
体に関する。これらのタンパク質および抗体は、酵母の
シゾサッカロミセス属を同定するのに用いることができ
る。
izosaccharomyces) 特異的タンパク質およびそれらの抗
体に関する。これらのタンパク質および抗体は、酵母の
シゾサッカロミセス属を同定するのに用いることができ
る。
【０００２】スローフ［ダブリュ・シー・スローフ(W,
C. Slooff) （１９７０年）、酵母における「属１９、
シゾサッカロミセス」、分類学的研究("Genus 19. Schi
zosaccharomyces" in the Yeast. A taxonomic study)
。ノース・オランダ・パブリッシング・カンパニー(No
rth Holland Publishing Co.)アムステルダム、７３３
〜７５５頁］は、シゾサッカロミセス・ポンベ(S. pomb
e)、シゾサッカロミセス・マリデヴォランス(S. malide
vorans) 、シゾサッカロミセス・オクトスポルス(S. oc
tosporus) およびシゾサッカロミセス・ジャポニクス
(S. japonicus)の４つの種を含む分裂酵母であるシゾサ
ッカロミセスについて記載している。シゾサッカロミセ
ス・ジャポニクスはまた、シゾサッカロミセス・ジャポ
ニクス・変種ジャポニクス(S. japonicus var. japonic
us) とシゾサッカロミセス・ジャポニクス・変種ヴェル
サティリス(S. japonicus var. versatilis)とに細別さ
れる。しかしながら、この分類は一般的には受け入れら
れておらず、オクトスポロミセス(Octosporomyces)また
はハセガワエア(Hasegawaea)のような属の付加的な命名
を導入することの可否が論議されている。
C. Slooff) （１９７０年）、酵母における「属１９、
シゾサッカロミセス」、分類学的研究("Genus 19. Schi
zosaccharomyces" in the Yeast. A taxonomic study)
。ノース・オランダ・パブリッシング・カンパニー(No
rth Holland Publishing Co.)アムステルダム、７３３
〜７５５頁］は、シゾサッカロミセス・ポンベ(S. pomb
e)、シゾサッカロミセス・マリデヴォランス(S. malide
vorans) 、シゾサッカロミセス・オクトスポルス(S. oc
tosporus) およびシゾサッカロミセス・ジャポニクス
(S. japonicus)の４つの種を含む分裂酵母であるシゾサ
ッカロミセスについて記載している。シゾサッカロミセ
ス・ジャポニクスはまた、シゾサッカロミセス・ジャポ
ニクス・変種ジャポニクス(S. japonicus var. japonic
us) とシゾサッカロミセス・ジャポニクス・変種ヴェル
サティリス(S. japonicus var. versatilis)とに細別さ
れる。しかしながら、この分類は一般的には受け入れら
れておらず、オクトスポロミセス(Octosporomyces)また
はハセガワエア(Hasegawaea)のような属の付加的な命名
を導入することの可否が論議されている。
【０００３】形態学的基準は別として、酵母の同定およ
び分類は、一般的には単糖類、二糖類および三糖類の利
用、硝酸塩の利用およびある種のビタミンの要求のよう
な生理学的特性に基づいている。しかしながら、これら
の特性による同定は常に曖昧でないとは言い切れず、過
誤を犯すこともある。
び分類は、一般的には単糖類、二糖類および三糖類の利
用、硝酸塩の利用およびある種のビタミンの要求のよう
な生理学的特性に基づいている。しかしながら、これら
の特性による同定は常に曖昧でないとは言い切れず、過
誤を犯すこともある。
【０００４】ネズミの単クローン性抗体ｍＡｂ ＪＨＦ
１３−１７によって認識されるある種のタンパク質がシ
ゾサッカロミセスに特異的であることを見出した。
１３−１７によって認識されるある種のタンパク質がシ
ゾサッカロミセスに特異的であることを見出した。
【０００５】前記のｍＡｂ ＪＨＦ１３−１７を分泌す
るハイブリドーマは、ブダペスト条約にしたがって１９
９１年３月６日にドイチェ・ザムルング・フォン・ミク
ロオルガニスメン・ウント・ツェルクルテューレン、G.
m.b.H.（ＤＳＭ）［微生物および細胞培養物のドイツコ
レクション有限会社（ＤＳＭ）］に寄託され、ＤＳＭＡ
ＣＣ２００５という番号を指定された。
るハイブリドーマは、ブダペスト条約にしたがって１９
９１年３月６日にドイチェ・ザムルング・フォン・ミク
ロオルガニスメン・ウント・ツェルクルテューレン、G.
m.b.H.（ＤＳＭ）［微生物および細胞培養物のドイツコ
レクション有限会社（ＤＳＭ）］に寄託され、ＤＳＭＡ
ＣＣ２００５という番号を指定された。
【０００６】それ故、本発明は、 １． シゾサッカロミセスに由来し、単クローン性抗体
ＪＨＦ１３−１７によって認識されるポリペプチドまた
はその免疫原性部分、 ２． 単クローン性抗体ＪＨＦ１３−１７、 ３． シゾサッカロミセスに由来するポリペプチドまた
は免疫原性部分に対する単クローン性または多クローン
性抗体であって、ポリペプチドまたはその免疫原性部分
が単クローン性抗体ＪＨＦ１３−１７によって認識され
るもの、 ４． 多クローン性抗体の調製法であって、 a) 単クローン性抗体ＪＨＦ１３−１７によって認識
されるポリペプチドまたはその免疫原性部分を単離し、 b) 好適な生物を段階 a) からのポリペプチドまたは
免疫原性部分で免疫することを特徴とする方法、 ５． シゾサッカロミセスを同定する方法であって、シ
ゾサッカロミセスを１に記載のポリペプチドまたはその
免疫原性部分に対する抗体と共にインキュベーションす
る方法、 ６． シゾサッカロミセスを同定するための、単クロー
ン性抗体ＪＨＦ１３−１７によって認識されるポリペプ
チドまたはその免疫原性部分に対する抗体の使用、 ７． シゾサッカロミセスを同定するための組成物であ
って、単クローン性抗体ＪＨＦ１３−１７によって認識
されるポリペプチドまたはその免疫原性部分に対する抗
体を含む組成物、 に関する。
ＪＨＦ１３−１７によって認識されるポリペプチドまた
はその免疫原性部分、 ２． 単クローン性抗体ＪＨＦ１３−１７、 ３． シゾサッカロミセスに由来するポリペプチドまた
は免疫原性部分に対する単クローン性または多クローン
性抗体であって、ポリペプチドまたはその免疫原性部分
が単クローン性抗体ＪＨＦ１３−１７によって認識され
るもの、 ４． 多クローン性抗体の調製法であって、 a) 単クローン性抗体ＪＨＦ１３−１７によって認識
されるポリペプチドまたはその免疫原性部分を単離し、 b) 好適な生物を段階 a) からのポリペプチドまたは
免疫原性部分で免疫することを特徴とする方法、 ５． シゾサッカロミセスを同定する方法であって、シ
ゾサッカロミセスを１に記載のポリペプチドまたはその
免疫原性部分に対する抗体と共にインキュベーションす
る方法、 ６． シゾサッカロミセスを同定するための、単クロー
ン性抗体ＪＨＦ１３−１７によって認識されるポリペプ
チドまたはその免疫原性部分に対する抗体の使用、 ７． シゾサッカロミセスを同定するための組成物であ
って、単クローン性抗体ＪＨＦ１３−１７によって認識
されるポリペプチドまたはその免疫原性部分に対する抗
体を含む組成物、 に関する。
【０００７】本発明を、特にその好ましい態様におい
て、以下に詳細に記載する。
て、以下に詳細に記載する。
【０００８】例えば、ブルネット［ブルネット・ダブリ
ュ・エヌ(Burnette, W.N.)、(1981)Anal. Biochem., 11
2, 195-203 ］によって記載されているような酵素免疫
法であって、ネズミの単クローン性抗体ｍＡｂ ＪＨＦ
１３−１７を用いた方法により、シゾサッカロミセス・
ポンベ(S. pombe)、シゾサッカロミセス・マリデヴォラ
ンス(S. malidevorans) およびシゾサッカロミセス・ジ
ャポニクス(S. japonicus)において２種類のシゾサッカ
ロミセスに特異的なポリペプチドＳＳＰ−ＡおよびＳＳ
Ｐ−Ｂが検出された。同じｍＡｂを用いて、シゾサッカ
ロミセス・オクトスポルス(S. octosporus) において、
更に２種類のシゾサッカロミセス特異的ポリペプチドＳ
ＳＰ−Ｂ′およびＳＳＰ−Ｃが見出された。しかしなが
ら、これらのポリペプチドＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、Ｓ
ＳＰ−Ｂ′またはＳＳＰ−Ｃは、シゾサッカロミセス属
に属さない下記の酵母種では検出されなかった：ブレラ
・アルバ(Bullera alba)、カンジタ・アルビカンス(Can
dida albicans)、カンジダ・クルセイ(Candida kruse
i)、カンジダ・パラプシロシス(Candida parapsilosi
s)、カンジダ・トロピカリス(Candida tropicalis)、ク
リプトコッカス・ネオフォルマンス(Cryptococcus neof
ormans) 、クリプトコッカス・テレウス(Cryprococcus
terreus)、エクソバシディウム・ジャポニクム(Exobasi
dium japonicum)、フィロバシディウム・フロリフォル
メ(Filobasidium floriforme) 、ハンセヌラ・ポリモル
ファ(Hansenula polymorpha)、クルイヴェロミセス・ラ
クチス(Kluyveromyces lactis)、ロイコスポリディウム
・ニヴァレ(Leucosporidium nivale) 、メチュニコヴィ
ア・プルケリマ(Metschnikowia pulcherrima) 、ロドト
ルラ・グラミニス(Rhodotorula graminis)、ロドトルラ
・ミヌタ(Rhodotorula minuta)、ロドトルラ・ルブラ(R
hodotorula rubra) 、サッカロミセス・セレビシエ(Sac
charomyces cerevisiae)、サッカロミコデス・ルドヴィ
ギイ(Saccharomycodesludwigii)、スポロボロミセス・
ホルサチクス(Sporobolomyces holsaticus) 、トリクス
ポロン・クタネウム(Trichsporon cutaneum)、トリゴノ
プシス・ヴァリアビリス(Trigonoposis variabilis) お
よびウスチラゴ・ゼアエ(Ustilago zeae) 。
ュ・エヌ(Burnette, W.N.)、(1981)Anal. Biochem., 11
2, 195-203 ］によって記載されているような酵素免疫
法であって、ネズミの単クローン性抗体ｍＡｂ ＪＨＦ
１３−１７を用いた方法により、シゾサッカロミセス・
ポンベ(S. pombe)、シゾサッカロミセス・マリデヴォラ
ンス(S. malidevorans) およびシゾサッカロミセス・ジ
ャポニクス(S. japonicus)において２種類のシゾサッカ
ロミセスに特異的なポリペプチドＳＳＰ−ＡおよびＳＳ
Ｐ−Ｂが検出された。同じｍＡｂを用いて、シゾサッカ
ロミセス・オクトスポルス(S. octosporus) において、
更に２種類のシゾサッカロミセス特異的ポリペプチドＳ
ＳＰ−Ｂ′およびＳＳＰ−Ｃが見出された。しかしなが
ら、これらのポリペプチドＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、Ｓ
ＳＰ−Ｂ′またはＳＳＰ−Ｃは、シゾサッカロミセス属
に属さない下記の酵母種では検出されなかった：ブレラ
・アルバ(Bullera alba)、カンジタ・アルビカンス(Can
dida albicans)、カンジダ・クルセイ(Candida kruse
i)、カンジダ・パラプシロシス(Candida parapsilosi
s)、カンジダ・トロピカリス(Candida tropicalis)、ク
リプトコッカス・ネオフォルマンス(Cryptococcus neof
ormans) 、クリプトコッカス・テレウス(Cryprococcus
terreus)、エクソバシディウム・ジャポニクム(Exobasi
dium japonicum)、フィロバシディウム・フロリフォル
メ(Filobasidium floriforme) 、ハンセヌラ・ポリモル
ファ(Hansenula polymorpha)、クルイヴェロミセス・ラ
クチス(Kluyveromyces lactis)、ロイコスポリディウム
・ニヴァレ(Leucosporidium nivale) 、メチュニコヴィ
ア・プルケリマ(Metschnikowia pulcherrima) 、ロドト
ルラ・グラミニス(Rhodotorula graminis)、ロドトルラ
・ミヌタ(Rhodotorula minuta)、ロドトルラ・ルブラ(R
hodotorula rubra) 、サッカロミセス・セレビシエ(Sac
charomyces cerevisiae)、サッカロミコデス・ルドヴィ
ギイ(Saccharomycodesludwigii)、スポロボロミセス・
ホルサチクス(Sporobolomyces holsaticus) 、トリクス
ポロン・クタネウム(Trichsporon cutaneum)、トリゴノ
プシス・ヴァリアビリス(Trigonoposis variabilis) お
よびウスチラゴ・ゼアエ(Ustilago zeae) 。
【０００９】シゾサッカロミセスに特異的なポリペプチ
ド（ＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、ＳＳＰ−Ｂ′およびＳＳ
Ｐ−Ｃ）は、例えば大腸菌やヤギおよびウサギの血清で
も検出されなかった。
ド（ＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、ＳＳＰ−Ｂ′およびＳＳ
Ｐ−Ｃ）は、例えば大腸菌やヤギおよびウサギの血清で
も検出されなかった。
【００１０】見出されたポリペプチドの相対分子量は、
通常はサイズ標準と比較することによって決定される。
タンパク質ＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−ＢまたはＳＳＰ−Ｂ′
およびＳＳＰ−Ｃのバンドは、例えばＳＤＳポリアクリ
ルアミドゲルでは変性条件下で約４０，０００〜６０，
０００の分子量範囲で検出された。下記の相対分子量
は、好ましくは個々のタンパク質バンドについて決定さ
れた。 ＳＳＰ−Ａ：５０，０００〜５４，０００、特に約５
２，０００。 ＳＳＰ−ＢまたはＳＳＰ−Ｂ′：４８，０００〜５２，
０００、特に約５０，０００。 ＳＳＰ−Ｃ：４６，０００〜５０，０００、特に約４
８，０００。
通常はサイズ標準と比較することによって決定される。
タンパク質ＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−ＢまたはＳＳＰ−Ｂ′
およびＳＳＰ−Ｃのバンドは、例えばＳＤＳポリアクリ
ルアミドゲルでは変性条件下で約４０，０００〜６０，
０００の分子量範囲で検出された。下記の相対分子量
は、好ましくは個々のタンパク質バンドについて決定さ
れた。 ＳＳＰ−Ａ：５０，０００〜５４，０００、特に約５
２，０００。 ＳＳＰ−ＢまたはＳＳＰ−Ｂ′：４８，０００〜５２，
０００、特に約５０，０００。 ＳＳＰ−Ｃ：４６，０００〜５０，０００、特に約４
８，０００。
【００１１】本発明は、更に既知の方法、例えばコグラ
ン・エル・ジー(Coghlan L.G.)とハナウゼック・エム(H
anausek M.) 、(1990), J. Immunol. Meth., 129, 135-
138の方法によって得ることができるＳＳＰ−Ａ、ＳＳ
Ｐ−Ｂ、ＳＳＰ−Ｂ′およびＳＳＰ−Ｃに対する多クロ
ーン性抗体にも関する。得られた単一特異性多クローン
性抗体を用いて、それが、シゾサッカロミセスに特異的
な該タンパク質の免疫原性部分またはエピトープのみな
らず、ポリペプチドＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、ＳＳＰ−
Ｂ′およびＳＳＰ−Ｃそのものでもあることを示すこと
ができる。最後に、本発明はｍＡｂ ＪＨ１３−１７と
は機能的に異なり、したがって本発明によるポリペプチ
ドの他のエピトープを認識する前記のポリペプチドに対
するｍＡｂをも包含する。これらのｍＡｂは、一般に知
られている方法、例えばエド・ハロウ(Ed Harlow) およ
びデヴィッド・レーン(David Lane)監修の、抗体、実験
室マニュアル(Antibodies. A Laboratory Manual) 、コ
ールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー(Cold Sp
ring Harbor Laboratory) 、コールド・スプリング・ハ
ーバー、ニューヨーク（１９８８年）の方法によって作
成される。単クローン性または多クローン性抗体、特に
ｍＡｂ ＪＨ１３−１７は、例えば免疫螢光、イムノブ
ロッティングまたはＥＬＩＳＡ試験において酵母のシゾ
サッカロミセス属を同定するのに一般に用いられる。単
クローン性抗体は別として、単一特異性の多クローン性
抗体は、一般に知られている方法、例えばアフィニティ
クロマトグラフィによってＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、Ｓ
ＳＰ−Ｂ′および／またはＳＳＰ−Ｃを単離するのに用
いることもできる。
ン・エル・ジー(Coghlan L.G.)とハナウゼック・エム(H
anausek M.) 、(1990), J. Immunol. Meth., 129, 135-
138の方法によって得ることができるＳＳＰ−Ａ、ＳＳ
Ｐ−Ｂ、ＳＳＰ−Ｂ′およびＳＳＰ−Ｃに対する多クロ
ーン性抗体にも関する。得られた単一特異性多クローン
性抗体を用いて、それが、シゾサッカロミセスに特異的
な該タンパク質の免疫原性部分またはエピトープのみな
らず、ポリペプチドＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、ＳＳＰ−
Ｂ′およびＳＳＰ−Ｃそのものでもあることを示すこと
ができる。最後に、本発明はｍＡｂ ＪＨ１３−１７と
は機能的に異なり、したがって本発明によるポリペプチ
ドの他のエピトープを認識する前記のポリペプチドに対
するｍＡｂをも包含する。これらのｍＡｂは、一般に知
られている方法、例えばエド・ハロウ(Ed Harlow) およ
びデヴィッド・レーン(David Lane)監修の、抗体、実験
室マニュアル(Antibodies. A Laboratory Manual) 、コ
ールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー(Cold Sp
ring Harbor Laboratory) 、コールド・スプリング・ハ
ーバー、ニューヨーク（１９８８年）の方法によって作
成される。単クローン性または多クローン性抗体、特に
ｍＡｂ ＪＨ１３−１７は、例えば免疫螢光、イムノブ
ロッティングまたはＥＬＩＳＡ試験において酵母のシゾ
サッカロミセス属を同定するのに一般に用いられる。単
クローン性抗体は別として、単一特異性の多クローン性
抗体は、一般に知られている方法、例えばアフィニティ
クロマトグラフィによってＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、Ｓ
ＳＰ−Ｂ′および／またはＳＳＰ−Ｃを単離するのに用
いることもできる。
【００１２】ｍＡｂ ＪＨＦ１３−１７の助けによっ
て、ＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、ＳＳＰ−Ｂ′またはＳＳ
Ｐ−Ｃをコードする遺伝子をクローニングし、特異性Ｄ
ＮＡまたはＲＮＡ配列を介してシゾサッカロミセスを同
定することも可能である。更に、ＳＳＰ遺伝子またはそ
のコード領域を他の酵母に形質転換させて、そこでそれ
らを特異性マーカーとして作用させることもできる。
て、ＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、ＳＳＰ−Ｂ′またはＳＳ
Ｐ−Ｃをコードする遺伝子をクローニングし、特異性Ｄ
ＮＡまたはＲＮＡ配列を介してシゾサッカロミセスを同
定することも可能である。更に、ＳＳＰ遺伝子またはそ
のコード領域を他の酵母に形質転換させて、そこでそれ
らを特異性マーカーとして作用させることもできる。
【００１３】シゾサッカロミセスの検出は、例えば糖蜜
からアルコールの生産、ワイン製造またはシゾサッカロ
ミセスにおけるタンパク質の異種生産において、特に品
質管理に用いられる。シゾサッカロミセスの特異的且つ
感受性の高い検出が、特に有利である。それ故、たとえ
ばサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevis
iae)とシゾサッカロミセス・ポンベ(S. pombe)との種の
間で作られたような酵母ハイブリッドを明白に同定する
ことができる。
からアルコールの生産、ワイン製造またはシゾサッカロ
ミセスにおけるタンパク質の異種生産において、特に品
質管理に用いられる。シゾサッカロミセスの特異的且つ
感受性の高い検出が、特に有利である。それ故、たとえ
ばサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevis
iae)とシゾサッカロミセス・ポンベ(S. pombe)との種の
間で作られたような酵母ハイブリッドを明白に同定する
ことができる。
【００１４】本発明を、下記の例によって更に詳細に説
明する。
明する。
【００１５】例１ 一定範囲の微生物を振盪機において２５０ｍｌエルレン
マイヤーフラスコ中でＹＰＤ培地（１％酵母エキス、２
％ペプトン、２％グルコース）中で１８０ｒｐｍ、１５
℃および３０℃で３日間培養した。培養液１０ｍｌずつ
を遠心分離した後、細胞を集めて、１０ｍＭトリス緩衝
液（ｐＨ７．５）１ｍｌに入れ、ガラスビーズを加え、
このバッチをガラスビーズミル中で処理した。次いで、
ホモジネートをレムリの方法（ユー・ケイ・レムリ(U.
K. Laemmli)、(1970) Nature, 227, 680-685 ）によっ
て加熱し１０％強度のＳＤＳポリアクリルアミドゲル中
で分離し、ニトロセルロース膜に移した（ブルネット・
ダブリュ・エヌ(Burnette, W.N.)、上記引用）。次に、
ニトロセルロースストリップを、ｍＡｂ ＪＨＦ１３−
１７（１０μｇ／ｍｌ）を含有するトリス緩衝液（１０
ｍＭトリス塩酸、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、
１％ゼラチン、４％ツウィーン(Tween) ２９）中でイン
キュベーションした。アルカリ性ホスファターゼに結合
した抗マウス抗体を抱合体として用いた。用いた基質
は、ファースト・ブルー・ビー(Fast BlueB) 塩（セル
ヴァ(Serva) 製、ハイデルベルグ）およびナフトールＡ
Ｓ−ＭＸホスフェート（シグマ・ヒェミー(Sigma Chemi
e)製、ミュンヒェン）であった。
マイヤーフラスコ中でＹＰＤ培地（１％酵母エキス、２
％ペプトン、２％グルコース）中で１８０ｒｐｍ、１５
℃および３０℃で３日間培養した。培養液１０ｍｌずつ
を遠心分離した後、細胞を集めて、１０ｍＭトリス緩衝
液（ｐＨ７．５）１ｍｌに入れ、ガラスビーズを加え、
このバッチをガラスビーズミル中で処理した。次いで、
ホモジネートをレムリの方法（ユー・ケイ・レムリ(U.
K. Laemmli)、(1970) Nature, 227, 680-685 ）によっ
て加熱し１０％強度のＳＤＳポリアクリルアミドゲル中
で分離し、ニトロセルロース膜に移した（ブルネット・
ダブリュ・エヌ(Burnette, W.N.)、上記引用）。次に、
ニトロセルロースストリップを、ｍＡｂ ＪＨＦ１３−
１７（１０μｇ／ｍｌ）を含有するトリス緩衝液（１０
ｍＭトリス塩酸、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、
１％ゼラチン、４％ツウィーン(Tween) ２９）中でイン
キュベーションした。アルカリ性ホスファターゼに結合
した抗マウス抗体を抱合体として用いた。用いた基質
は、ファースト・ブルー・ビー(Fast BlueB) 塩（セル
ヴァ(Serva) 製、ハイデルベルグ）およびナフトールＡ
Ｓ−ＭＸホスフェート（シグマ・ヒェミー(Sigma Chemi
e)製、ミュンヒェン）であった。
【００１６】相対分子量を決定するために、レインボウ
(Rainbow)TMタンパク質分子量マーカー（アメルシャム
・ブッフラーGmbH(Amersham Buchler GmbH) 、ブルンス
ヴィック）をニトロセルロースストリップに追加して適
用した。
(Rainbow)TMタンパク質分子量マーカー（アメルシャム
・ブッフラーGmbH(Amersham Buchler GmbH) 、ブルンス
ヴィック）をニトロセルロースストリップに追加して適
用した。
【００１７】ｍＡｂ ＪＨＦ１３−１７を用いて、シゾ
サッカロミセスに特異的なタンパク質を下記のシゾサッ
カロミセス株において検出した（リスト１）。生物 菌株コレクション シゾサッカロミセス・ポンベ(S. pombe) ＣＢＳ５６８０ ＣＢＳ１０５７ ＤＳＭ３７９６（ｌｅｕ，ｈｉｓ）a) ＣＳＩＲ Ｙ−４６７ ＣＢＳ１０４３ ＣＢＳ１０４３ シゾサッカロミセス・マリデヴォランス(S. malidevorans) ＮＣＹＣ ６８３ ＶＬＳＦ ０４０１ ＣＢＳ ３５５７ ＢＬＷＧ ４４２ シゾサッカロミセス・ジャポニクス変種ジャポニクス (S. japonicus var. japonicus) ＶＬＳＦ ０３／１０１ ＶＬＳＦ ０３／２０１ ＩＦＯ １６０９ ＩＦＯ １６４６ ＩＦＯ １７１２ シゾサッカロミセス・ジャポニクス変種ヴェルサチリス (S. japonicus var. versatilis) ＮＣＹＣ ４１９ ＩＦＯ １６０７ シゾサッカロミセス・オクトスポルス(S. octosporus) ＮＣＹＣ １３１ ＶＬＳＦ ０１０１ ＣＢＳ ２６３１ ＣＢＳ １８０４ ＣＢＳ ２６３２ ＣＢＳ ３７１ ＣＢＳ ６２０９ ＢＬＷＧ Ｈ８０ ＡＴＣＣ ２４７９ a)＝遺伝子マーカー
サッカロミセスに特異的なタンパク質を下記のシゾサッ
カロミセス株において検出した（リスト１）。生物 菌株コレクション シゾサッカロミセス・ポンベ(S. pombe) ＣＢＳ５６８０ ＣＢＳ１０５７ ＤＳＭ３７９６（ｌｅｕ，ｈｉｓ）a) ＣＳＩＲ Ｙ−４６７ ＣＢＳ１０４３ ＣＢＳ１０４３ シゾサッカロミセス・マリデヴォランス(S. malidevorans) ＮＣＹＣ ６８３ ＶＬＳＦ ０４０１ ＣＢＳ ３５５７ ＢＬＷＧ ４４２ シゾサッカロミセス・ジャポニクス変種ジャポニクス (S. japonicus var. japonicus) ＶＬＳＦ ０３／１０１ ＶＬＳＦ ０３／２０１ ＩＦＯ １６０９ ＩＦＯ １６４６ ＩＦＯ １７１２ シゾサッカロミセス・ジャポニクス変種ヴェルサチリス (S. japonicus var. versatilis) ＮＣＹＣ ４１９ ＩＦＯ １６０７ シゾサッカロミセス・オクトスポルス(S. octosporus) ＮＣＹＣ １３１ ＶＬＳＦ ０１０１ ＣＢＳ ２６３１ ＣＢＳ １８０４ ＣＢＳ ２６３２ ＣＢＳ ３７１ ＣＢＳ ６２０９ ＢＬＷＧ Ｈ８０ ＡＴＣＣ ２４７９ a)＝遺伝子マーカー
【００１８】菌株コレクションの略号のリスト：セント
ラールビューロー・フォール・シンメルカルチャーズ
（ＣＢＳ）、バーレン、オランダ；ドイチェ・シュタム
ザムルング・フュル・ミクロオルガニスメン・ウント・
ツェルクルテューレンGmbH（ＤＳＭ）、ブルンスヴィッ
ク、ドイツ連邦共和国；フェアズーフス−・ウント・レ
ールアンシュタルト・フュル・シュピリトゥスファブリ
カツィオン・ウント・フェルメンタツィオンステヒノロ
ギー・イン・ベルリン（ＶＬＳＦ）、ベルリン、ドイツ
連邦共和国；醗酵研究所（ＩＦＯ）、大阪、日本；カウ
ンシル・オブ・サイエンス・オブ・インダストリアル・
リサーチ（ＣＳＩＲ）、プレトリア、南アフリカ；ナシ
ョナル・コレクション・オブ・イースト・カルチャーズ
（ＮＣＹＣ）、ノルウィック、英国；バイエリッシュ・
ランデスアンシュタルト・フュル・ヴァインバウ・ウン
ト・ガルテンバウ（ＢＬＷＧ）、ヴュルツブルグ・ドイ
ツ連邦共和国；アメリカン・タイプ・カルチャー・コレ
クション（ＡＴＣＣ）、ロックヴィル、メリーランド、
アメリカ合衆国。
ラールビューロー・フォール・シンメルカルチャーズ
（ＣＢＳ）、バーレン、オランダ；ドイチェ・シュタム
ザムルング・フュル・ミクロオルガニスメン・ウント・
ツェルクルテューレンGmbH（ＤＳＭ）、ブルンスヴィッ
ク、ドイツ連邦共和国；フェアズーフス−・ウント・レ
ールアンシュタルト・フュル・シュピリトゥスファブリ
カツィオン・ウント・フェルメンタツィオンステヒノロ
ギー・イン・ベルリン（ＶＬＳＦ）、ベルリン、ドイツ
連邦共和国；醗酵研究所（ＩＦＯ）、大阪、日本；カウ
ンシル・オブ・サイエンス・オブ・インダストリアル・
リサーチ（ＣＳＩＲ）、プレトリア、南アフリカ；ナシ
ョナル・コレクション・オブ・イースト・カルチャーズ
（ＮＣＹＣ）、ノルウィック、英国；バイエリッシュ・
ランデスアンシュタルト・フュル・ヴァインバウ・ウン
ト・ガルテンバウ（ＢＬＷＧ）、ヴュルツブルグ・ドイ
ツ連邦共和国；アメリカン・タイプ・カルチャー・コレ
クション（ＡＴＣＣ）、ロックヴィル、メリーランド、
アメリカ合衆国。
【００１９】それぞれの場合に、シゾサッカロミセス・
ポンベ(S. pombe)、シゾサッカロミセス・マリデヴォラ
ンス(S. malidevorans) およびシゾサッカロミセス・ジ
ャポニクス(S. japonicus)は、相対分子量が約５２，０
００（ＳＳＰ−Ａ）および約５０，０００（ＳＳＰ−
Ｂ）の二重バンドを示した。電気泳動におけるこの二重
バンドの移動度は、総ての試験菌株において同一であっ
た。この二種類のタンパク質は、ｍＡｂ ＪＨＦ１３−
１７との交差反応性によって互いに関係しているものと
考えられる。
ポンベ(S. pombe)、シゾサッカロミセス・マリデヴォラ
ンス(S. malidevorans) およびシゾサッカロミセス・ジ
ャポニクス(S. japonicus)は、相対分子量が約５２，０
００（ＳＳＰ−Ａ）および約５０，０００（ＳＳＰ−
Ｂ）の二重バンドを示した。電気泳動におけるこの二重
バンドの移動度は、総ての試験菌株において同一であっ
た。この二種類のタンパク質は、ｍＡｂ ＪＨＦ１３−
１７との交差反応性によって互いに関係しているものと
考えられる。
【００２０】シゾサッカロミセス・オクトスポルス(S.
octosporus) の細胞エキスも、前記の方法によって二重
バンドを示した。対照的に、その電気泳動における移動
度は、上部のタンパク質バンド（ＳＳＰ−Ｂ′）がシゾ
サッカロミセス・ポンベ(S.pombe)、シゾサッカロミセ
ス・マリデヴォランス(S. malidevorans) およびシゾサ
ッカロミセス・ジャポニクス(S. japonicus)由来のＳＳ
Ｐ−Ｂのレベルで移動するという事実だけ異なる。第二
のシゾサッカロミセス・オクトスポルス(S. octosporu
s) のタンパク質（ＳＳＰ−Ｃ）の相対分子量は約４
８，０００である。電気泳動における二重バンドの移動
度は、シゾサッカロミセス・オクトスポルス(S. octosp
orus) の試験菌株において同一であった。
octosporus) の細胞エキスも、前記の方法によって二重
バンドを示した。対照的に、その電気泳動における移動
度は、上部のタンパク質バンド（ＳＳＰ−Ｂ′）がシゾ
サッカロミセス・ポンベ(S.pombe)、シゾサッカロミセ
ス・マリデヴォランス(S. malidevorans) およびシゾサ
ッカロミセス・ジャポニクス(S. japonicus)由来のＳＳ
Ｐ−Ｂのレベルで移動するという事実だけ異なる。第二
のシゾサッカロミセス・オクトスポルス(S. octosporu
s) のタンパク質（ＳＳＰ−Ｃ）の相対分子量は約４
８，０００である。電気泳動における二重バンドの移動
度は、シゾサッカロミセス・オクトスポルス(S. octosp
orus) の試験菌株において同一であった。
【００２１】例２ ｍＡｂ ＪＨＦ１３−１７と反応するタンパク質ＳＳＰ
−Ａ、ＳＳＰ−ＢおよびＳＳＰ−Ｃが分裂酵母に対して
特異的であるかどうかという問題を解決するために、２
３種の他の酵母の細胞抽出物を例１（リスト２）に記載
の方法によって検討した。試験種は次の通りであった。 ブレラ・アルバ(Bullera alba)ＤＳＭ ７０００２ カンジダ・アルビカンス(Candida albicans) カンジダ・クルセイ(Candida krusei) カンジダ・パラプシロシス(Candida parapsilosis) カンジダ・トロピカリス(Candida tropicalis) クリプトコッカス・ネオフォルマンス(Cryptococcus ne
oformans) クリプトコッカス・テレウス(Cryptococcus terreus)Ｄ
ＳＭ ７０２２２ エクソバシディウム・ジャポニクム(Exobasidium japon
icum) ＤＳＭ ４４６１ フィロバシディウム・フロリフォルメ(Filobasidium fl
oriforme) ＤＳＭ ４６５５ ハンセヌラ・ポリモルファ(Hansenula polymorpha)（ｌ
ｅｕ１）a) クルイヴェロミセス・ラクティス(Kluyveromyces lacti
s)ＳＤ１１（ｌａｃ４，ｔｒｐ１）a) ロイコスポリディウム・ニヴァレ(Leucosporidium niva
le) ＤＳＭ ４６３５ メチュニコウィア・プルヒェリマ(Metschnikowia pulch
errima) ＤＳＭ ７０８７９ ロドトルラ・グラミニス(Rhodotorula graminis) ロドトルラ・ミヌタ(Rhodotorula minuta) ロドトルラ・ルブラ(Rhodotorula rubra) サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisia
e)ＶＬＳＦ １０４ サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisia
e)（ｕｒａ３−２，ｌｅｕ２，ｈｉｓ，ｐｒａ１，ｐｒ
ｂ１，ｐｒｃ１，ｃｐｓ１）a) サッカロミコデス・ルドウィジー(Saccharomycodes lud
wigii)ＤＳＭ ３４４７ スポロボロミセス・ホルサティクス(Sporobolomyces ho
lsaticus) ＤＳＭ ７０５８０ ステリグマトミセス・ハロフィルス(Sterigmatomyces h
alophilus)ＤＳＭ ４６６８ トリコスポロン・クタネウム(Trichosporon cutaneum)
ＤＳＭ ７０６９８ トリコスポロン・クタネウム(Trichosporon cutaneum) トリゴノプシス・ヴァリアビリス(Trignopsis variabil
is) ＤＳＭ ７０７１４ ウスチラゴ・ゼアエ(Ustilago zeae) ＤＳＭ ４５００ a)＝遺伝子マーカー。
−Ａ、ＳＳＰ−ＢおよびＳＳＰ−Ｃが分裂酵母に対して
特異的であるかどうかという問題を解決するために、２
３種の他の酵母の細胞抽出物を例１（リスト２）に記載
の方法によって検討した。試験種は次の通りであった。 ブレラ・アルバ(Bullera alba)ＤＳＭ ７０００２ カンジダ・アルビカンス(Candida albicans) カンジダ・クルセイ(Candida krusei) カンジダ・パラプシロシス(Candida parapsilosis) カンジダ・トロピカリス(Candida tropicalis) クリプトコッカス・ネオフォルマンス(Cryptococcus ne
oformans) クリプトコッカス・テレウス(Cryptococcus terreus)Ｄ
ＳＭ ７０２２２ エクソバシディウム・ジャポニクム(Exobasidium japon
icum) ＤＳＭ ４４６１ フィロバシディウム・フロリフォルメ(Filobasidium fl
oriforme) ＤＳＭ ４６５５ ハンセヌラ・ポリモルファ(Hansenula polymorpha)（ｌ
ｅｕ１）a) クルイヴェロミセス・ラクティス(Kluyveromyces lacti
s)ＳＤ１１（ｌａｃ４，ｔｒｐ１）a) ロイコスポリディウム・ニヴァレ(Leucosporidium niva
le) ＤＳＭ ４６３５ メチュニコウィア・プルヒェリマ(Metschnikowia pulch
errima) ＤＳＭ ７０８７９ ロドトルラ・グラミニス(Rhodotorula graminis) ロドトルラ・ミヌタ(Rhodotorula minuta) ロドトルラ・ルブラ(Rhodotorula rubra) サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisia
e)ＶＬＳＦ １０４ サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisia
e)（ｕｒａ３−２，ｌｅｕ２，ｈｉｓ，ｐｒａ１，ｐｒ
ｂ１，ｐｒｃ１，ｃｐｓ１）a) サッカロミコデス・ルドウィジー(Saccharomycodes lud
wigii)ＤＳＭ ３４４７ スポロボロミセス・ホルサティクス(Sporobolomyces ho
lsaticus) ＤＳＭ ７０５８０ ステリグマトミセス・ハロフィルス(Sterigmatomyces h
alophilus)ＤＳＭ ４６６８ トリコスポロン・クタネウム(Trichosporon cutaneum)
ＤＳＭ ７０６９８ トリコスポロン・クタネウム(Trichosporon cutaneum) トリゴノプシス・ヴァリアビリス(Trignopsis variabil
is) ＤＳＭ ７０７１４ ウスチラゴ・ゼアエ(Ustilago zeae) ＤＳＭ ４５００ a)＝遺伝子マーカー。
【００２２】その結果、これらの酵母種のいずれにおい
ても、タンパク質はｍＡｂ ＪＨＦ１３−１７では特異
的には検出されなかった。同様に、大腸菌並びにヤギお
よびウサギ血清の細胞抽出物は、ｍＡｂ ＪＨＦ１３−
１７によって特異的に認識されたタンパク質を含まなか
った。それ故、タンパク質ＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、Ｓ
ＳＰ−Ｂ′およびＳＳＰ−ＣについてｍＡｂ ＪＨＦ１
３−１７によって認識されるエピトープは、分裂酵母に
対して特異的である。
ても、タンパク質はｍＡｂ ＪＨＦ１３−１７では特異
的には検出されなかった。同様に、大腸菌並びにヤギお
よびウサギ血清の細胞抽出物は、ｍＡｂ ＪＨＦ１３−
１７によって特異的に認識されたタンパク質を含まなか
った。それ故、タンパク質ＳＳＰ−Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、Ｓ
ＳＰ−Ｂ′およびＳＳＰ−ＣについてｍＡｂ ＪＨＦ１
３−１７によって認識されるエピトープは、分裂酵母に
対して特異的である。
【００２３】例３ ｍＡｂ ＪＨＦ１３−１７によって認識されるシゾサッ
カロミセス特異的タンパク質（ＳＳＰ、複数）のエピト
ープが特異的であるだけでなく、タンパク質そのものも
シゾサッカロミセスに対して特異的であることを証明す
るために、ＳＳＰ−ＡおよびＳＳＰ−Ｂに対する多クロ
ーン性の血清をシゾサッカロミセス・ポンベ(S. pombe)
から作成した。この目的のために、シゾサッカロミセス
・ポンベの細胞抽出物のタンパク質を例１に記載した方
法によってニトロセルロースに移し、ＳＳＰ−Ａおよび
ＳＳＰ−Ｂの位置に対応する部分を切り取った。次に、
ウサギを、これらのニトロセルロース結合ＳＳＰ−Ａお
よびＳＳＰ−Ｂを用いて、コグラン(Coglan)とハナウゼ
ック(Hanausek)の方法（J. Immunol. Method., 129, 13
5-138, (1990) ）によって免疫した。ウェスターンブロ
ット分析では、得られた単一特異性の多クローン性抗血
清は、４種のシゾサッカロミセスのＳＳＰ（ＳＳＰ−
Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、ＳＳＰ−Ｂ′およびＳＳＰ−Ｃ）と反
応するだけで、他の細胞抽出物タンパク質または異なる
酵母種由来のタンパク質とは反応しなかった。したがっ
て、前記のＳＳＰは分裂酵母に対して特異的である。
カロミセス特異的タンパク質（ＳＳＰ、複数）のエピト
ープが特異的であるだけでなく、タンパク質そのものも
シゾサッカロミセスに対して特異的であることを証明す
るために、ＳＳＰ−ＡおよびＳＳＰ−Ｂに対する多クロ
ーン性の血清をシゾサッカロミセス・ポンベ(S. pombe)
から作成した。この目的のために、シゾサッカロミセス
・ポンベの細胞抽出物のタンパク質を例１に記載した方
法によってニトロセルロースに移し、ＳＳＰ−Ａおよび
ＳＳＰ−Ｂの位置に対応する部分を切り取った。次に、
ウサギを、これらのニトロセルロース結合ＳＳＰ−Ａお
よびＳＳＰ−Ｂを用いて、コグラン(Coglan)とハナウゼ
ック(Hanausek)の方法（J. Immunol. Method., 129, 13
5-138, (1990) ）によって免疫した。ウェスターンブロ
ット分析では、得られた単一特異性の多クローン性抗血
清は、４種のシゾサッカロミセスのＳＳＰ（ＳＳＰ−
Ａ、ＳＳＰ−Ｂ、ＳＳＰ−Ｂ′およびＳＳＰ−Ｃ）と反
応するだけで、他の細胞抽出物タンパク質または異なる
酵母種由来のタンパク質とは反応しなかった。したがっ
て、前記のＳＳＰは分裂酵母に対して特異的である。
Claims (12)
- 【請求項１】シゾサッカロミセスに由来し、単クローン
性抗体ＪＨＦ１３−１７（ＤＳＭＡＣＣ２００５）によ
って認識される、ポリペプチドまたはその免疫原性部
分。 - 【請求項２】変性条件下での相対分子量が約４０，００
０〜６０，０００である、請求項１に記載のポリペプチ
ド。 - 【請求項３】シゾサッカロミセス・ポンベ(S. pombe)、
シゾサッカロミセス・マリデヴォランス(S. malidevora
ns) 、シゾサッカロミセス・ジャポニクス(S. japonicu
s)またはシゾサッカロミセス・オクトスポルス(S. octo
sporus) に由来する、請求項１または２に記載のポリペ
プチド。 - 【請求項４】請求項１に記載のポリペプチドまたはその
免疫原性部分に対する単クローン性抗体。 - 【請求項５】単クローン性抗体ＪＨＦ１３−１７（ＤＳ
Ｍ ＡＣＣ２００５）である、請求項４に記載の単クロ
ーン性抗体。 - 【請求項６】請求項１に記載のポリペプチドに対する多
クローン性抗体。 - 【請求項７】多クローン性抗体の調製法であって、 a) シゾサッカロミセス由来であり、単クローン性抗
体ＪＨＦ１３−１７によって認識されるポリペプチドま
たはその免疫原性部分を単離し、 b) 好適な生物を段階 a) からのポリペプチドまたは
その免疫原性部分で免疫することを特徴とする、方法。 - 【請求項８】シゾサッカロミセスを請求項１に記載のポ
リペプチドまたはその免疫原性部分に対する抗体と共に
インキュベーションすることを特徴とする、シゾサッカ
ロミセスの同定法。 - 【請求項９】抗体が多クローン性または単クローン性で
ある、請求項８に記載の方法。 - 【請求項１０】単クローン性抗体ＪＨＦ１３−１７（Ｄ
ＳＭ ＡＣＣ２００５）を用いる、請求項８または９に
記載の方法。 - 【請求項１１】シゾサッカロミセスを同定するための、
請求項１に記載のポリペプチドまたはその免疫原性部分
に対する抗体の使用。 - 【請求項１２】請求項１に記載のポリペプチドまたはそ
の免疫原性部分に対する抗体を含む、シゾサッカロミセ
スを同定するための組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4113949.6 | 1991-04-29 | ||
| DE4113949A DE4113949A1 (de) | 1991-04-29 | 1991-04-29 | Schizosaccharomyces spezifische polypeptide |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06135999A true JPH06135999A (ja) | 1994-05-17 |
| JP3233977B2 JP3233977B2 (ja) | 2001-12-04 |
Family
ID=6430586
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11019192A Expired - Fee Related JP3233977B2 (ja) | 1991-04-29 | 1992-04-28 | シゾサッカロミセスに特異的なポリペプチド |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5980891A (ja) |
| EP (1) | EP0511516B1 (ja) |
| JP (1) | JP3233977B2 (ja) |
| KR (1) | KR100221898B1 (ja) |
| AT (1) | ATE128717T1 (ja) |
| AU (1) | AU666646B2 (ja) |
| CA (1) | CA2067405A1 (ja) |
| DE (2) | DE4113949A1 (ja) |
| DK (1) | DK0511516T3 (ja) |
| ES (1) | ES2077905T3 (ja) |
| GR (1) | GR3018066T3 (ja) |
| IE (1) | IE68603B1 (ja) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IN150740B (ja) * | 1978-11-24 | 1982-12-04 | Hoffmann La Roche | |
| DE3906540A1 (de) * | 1989-03-02 | 1990-09-13 | Behringwerke Ag | Expressionsvektoren zur synthese von proteinen in der spalthefe schizosaccharomyces pombe |
-
1991
- 1991-04-29 DE DE4113949A patent/DE4113949A1/de not_active Withdrawn
-
1992
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- 1992-04-03 DK DK92105755.0T patent/DK0511516T3/da active
- 1992-04-03 EP EP92105755A patent/EP0511516B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-04-03 ES ES92105755T patent/ES2077905T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-04-03 AT AT92105755T patent/ATE128717T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-04-27 KR KR1019920007105A patent/KR100221898B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-04-28 AU AU15186/92A patent/AU666646B2/en not_active Ceased
- 1992-04-28 CA CA002067405A patent/CA2067405A1/en not_active Abandoned
- 1992-04-28 JP JP11019192A patent/JP3233977B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-01 IE IE921380A patent/IE68603B1/en not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-11-18 US US08/345,374 patent/US5980891A/en not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-11-10 GR GR950403166T patent/GR3018066T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE921380A1 (en) | 1992-11-04 |
| ES2077905T3 (es) | 1995-12-01 |
| DK0511516T3 (da) | 1996-01-02 |
| ATE128717T1 (de) | 1995-10-15 |
| DE59203874D1 (de) | 1995-11-09 |
| EP0511516A3 (en) | 1993-05-26 |
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