JPH0591873A - ユーカリ属植物における形質転換体プロトプラストを使用した細胞融合培養方法 - Google Patents
ユーカリ属植物における形質転換体プロトプラストを使用した細胞融合培養方法Info
- Publication number
- JPH0591873A JPH0591873A JP3280334A JP28033491A JPH0591873A JP H0591873 A JPH0591873 A JP H0591873A JP 3280334 A JP3280334 A JP 3280334A JP 28033491 A JP28033491 A JP 28033491A JP H0591873 A JPH0591873 A JP H0591873A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- eucalyptus
- protoplast
- protoplasts
- plant
- cell fusion
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 ユーカリ属植物における形質転換体プロトプ
ラストを使用した細胞融合によって得られたコロニーか
ら、倍数性候補コロニーを効率的に選抜する培養方法を
提供することを目的とする。 【構成】 形質転換された Eucalyptus saligna （ユー
カリ属植物の一種）の苗条原基及び形質転換してない E
ucalyptus camaldulensis の苗条原基から誘導したプロ
トプラストを融合処理し、得られた融合細胞をケナフの
カルスから誘導されたプロトプラストと混合し、ホルモ
ン類などを添加したガンボーグのＢ５培地に加えシャー
レにプレートした。２７℃で４２日間培養した後 Genet
icinを加えた変性したガンボーグＢ５の培地に移し、暗
条件で２０日間培養することによりGeneticin耐性の倍
数性候補コロニーを選抜した。
ラストを使用した細胞融合によって得られたコロニーか
ら、倍数性候補コロニーを効率的に選抜する培養方法を
提供することを目的とする。 【構成】 形質転換された Eucalyptus saligna （ユー
カリ属植物の一種）の苗条原基及び形質転換してない E
ucalyptus camaldulensis の苗条原基から誘導したプロ
トプラストを融合処理し、得られた融合細胞をケナフの
カルスから誘導されたプロトプラストと混合し、ホルモ
ン類などを添加したガンボーグのＢ５培地に加えシャー
レにプレートした。２７℃で４２日間培養した後 Genet
icinを加えた変性したガンボーグＢ５の培地に移し、暗
条件で２０日間培養することによりGeneticin耐性の倍
数性候補コロニーを選抜した。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ユーカリ属植物におけ
る形質転換体プロトプラストを使用した細胞融合方法に
関し、更に詳しくは融合する２種類のユーカリ属植物の
プロトプラストのうち、その一方に形質転換体プロトプ
ラストを使用し、細胞融合によって得られたコロニーか
ら倍数体候補コロニーを効率よく選抜する方法に関す
る。
る形質転換体プロトプラストを使用した細胞融合方法に
関し、更に詳しくは融合する２種類のユーカリ属植物の
プロトプラストのうち、その一方に形質転換体プロトプ
ラストを使用し、細胞融合によって得られたコロニーか
ら倍数体候補コロニーを効率よく選抜する方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】細胞融合により得られた倍数性細胞の選
抜にはさまざまな手法が使用されているが、一般的な方
法としては不活性化剤の利用があげられる。
抜にはさまざまな手法が使用されているが、一般的な方
法としては不活性化剤の利用があげられる。
【０００３】ヨードアセトアミドなどの不活性化剤で処
理されたプロトプラストは、分裂能を失い融合したハイ
ブリッド細胞のみが分裂することになる。
理されたプロトプラストは、分裂能を失い融合したハイ
ブリッド細胞のみが分裂することになる。
【０００４】この方法はイネ、ブラシカ、ニンジンなど
草本類で使われているが、ユーカリなどの木本性植物の
細胞融合については、その基礎となるプロトプラストの
培養が困難である場合が多く、カンキツ類（小林、大河
原１９９０、植物細胞工学、２巻 第４５〜４９頁）以
外その体細胞雑種の報告例はほとんどなく、この場合は
不活性化剤は使用されてない。
草本類で使われているが、ユーカリなどの木本性植物の
細胞融合については、その基礎となるプロトプラストの
培養が困難である場合が多く、カンキツ類（小林、大河
原１９９０、植物細胞工学、２巻 第４５〜４９頁）以
外その体細胞雑種の報告例はほとんどなく、この場合は
不活性化剤は使用されてない。
【０００５】本発明者らはすでにユーカリ属植物をはじ
めとする木本性植物のプロトプラストの培養方法につい
て提案した（特開昭６４−４３１３８号公報、特開平２
−１２９６３１号公報）。
めとする木本性植物のプロトプラストの培養方法につい
て提案した（特開昭６４−４３１３８号公報、特開平２
−１２９６３１号公報）。
【０００６】これらの方法によれば、再生を目的とする
ユーカリ属植物などの木本性植物のプロトプラストを分
裂、増殖の旺盛な草本性植物のプロトプラスト特にケナ
フのプロトプラストと共存させて培養し、コロニーある
いはカルスを得た後、回転培養器に移して苗条原基を作
出し、さらに、植物体を再生させることが可能となっ
た。
ユーカリ属植物などの木本性植物のプロトプラストを分
裂、増殖の旺盛な草本性植物のプロトプラスト特にケナ
フのプロトプラストと共存させて培養し、コロニーある
いはカルスを得た後、回転培養器に移して苗条原基を作
出し、さらに、植物体を再生させることが可能となっ
た。
【０００７】細胞融合によって得られる倍数性細胞の培
養については、特願平３−６３６９２号明細書で提案し
た方法、すなわち、細胞融合したプロトプラストの分
裂、コロニー形成が困難な木本性植物について細胞融合
したのち、分裂、増殖の旺盛な草本性植物のプロトプラ
ストと共存下で培養することにより、目的とする分裂、
増殖能を有する倍数性細胞の培養が可能となった。しか
し、細胞融合で得られる倍数性細胞の効率的な選抜方法
については全く知見が得られていなかった。そこで体細
胞雑種作出の基礎となる倍数性細胞の選抜の簡素化につ
いて鋭意検討を行った結果、本発明を完成するに至っ
た。
養については、特願平３−６３６９２号明細書で提案し
た方法、すなわち、細胞融合したプロトプラストの分
裂、コロニー形成が困難な木本性植物について細胞融合
したのち、分裂、増殖の旺盛な草本性植物のプロトプラ
ストと共存下で培養することにより、目的とする分裂、
増殖能を有する倍数性細胞の培養が可能となった。しか
し、細胞融合で得られる倍数性細胞の効率的な選抜方法
については全く知見が得られていなかった。そこで体細
胞雑種作出の基礎となる倍数性細胞の選抜の簡素化につ
いて鋭意検討を行った結果、本発明を完成するに至っ
た。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】ユーカリ属植物の形質
転換体プロトプラストを使用した細胞融合によって得ら
れたコロニーの中から、倍数性コロニーを効率的に選抜
する培養方法を提供するものである。
転換体プロトプラストを使用した細胞融合によって得ら
れたコロニーの中から、倍数性コロニーを効率的に選抜
する培養方法を提供するものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は、融合すべき二
種類のユーカリ属植物のうち、少なくとも一方に形質転
換体プロトプラストを使用し、細胞融合し、次いで分裂
増殖の旺盛な草本性植物のプロトプラストと共存培養す
ることによって得られたコロニーを抗生物質を含む培地
で培養することにより、倍数体候補コロニーを選抜する
ユーカリ属植物の細胞融合培養方法である。
種類のユーカリ属植物のうち、少なくとも一方に形質転
換体プロトプラストを使用し、細胞融合し、次いで分裂
増殖の旺盛な草本性植物のプロトプラストと共存培養す
ることによって得られたコロニーを抗生物質を含む培地
で培養することにより、倍数体候補コロニーを選抜する
ユーカリ属植物の細胞融合培養方法である。
【００１０】なお、本発明に用いるプロトプラストを単
離するために使用する苗条原基、及び苗条、カルスの作
出方法、プロトプラストの単離・調整方法は本発明者等
が提案した特開昭６３−３０１７８４号公報、特開平２
−１２８６３１号公報に記載されている方法に従って行
えばよい。
離するために使用する苗条原基、及び苗条、カルスの作
出方法、プロトプラストの単離・調整方法は本発明者等
が提案した特開昭６３−３０１７８４号公報、特開平２
−１２８６３１号公報に記載されている方法に従って行
えばよい。
【００１１】本発明に用いる形質転換体苗条原基の作出
方法等については本発明者等が提案した特開平２−１３
８９６６号公報の方法に従って行えばよい。
方法等については本発明者等が提案した特開平２−１３
８９６６号公報の方法に従って行えばよい。
【００１２】以下、ユーカリ属植物の形質転換されたプ
ロトプラストとの細胞融合方法、融合処理後に得られる
倍数性細胞のプロトプラストの培養方法および選抜方法
等について詳しく説明する。
ロトプラストとの細胞融合方法、融合処理後に得られる
倍数性細胞のプロトプラストの培養方法および選抜方法
等について詳しく説明する。
【００１３】（形質転換されたユーカリプロトプラスト
との細胞融合方法）２種類のユーカリプロトプラストを
単離・調整したのち、一般的に用いられている細胞融合
方法、例えばＰＥＧ法、電気刺激法などにより融合処理
を行う。これによって倍数性プロトプラストが得られ
る。
との細胞融合方法）２種類のユーカリプロトプラストを
単離・調整したのち、一般的に用いられている細胞融合
方法、例えばＰＥＧ法、電気刺激法などにより融合処理
を行う。これによって倍数性プロトプラストが得られ
る。
【００１４】（倍数性プロトプラストの培養方法および
選抜方法）融合・調整して得られた目的とするユーカリ
属植物のプロトプラスト（倍数性細胞）とこれと共存し
て培養する草本性植物のプロトプラストを各々１０4 な
いし１０5 コ／ｍｌの濃度に調整する。次に、両プロト
プラストを１：３〜３：１の割合で混合して、例えばガ
ンボーグのＢ５培地、ムラシゲ・スクーグのＭＳ培地等
をプロトプラストの性質に応じて選択して植物ホルモン
類、例えばナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、２，４−ジクロ
ロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）、インドール酢酸（Ｉ
ＡＡ）等のオーキシン類およびベンジルアデニン（Ｂ
Ａ）、１−（２−クロロ−４−ピリジル）−３−フェニ
ルウレア（４ＰＵ）、カイネチン、ゼアチン、チジアズ
ロン等のサイトカイニン類を添加した液体培地あるいは
培地固化剤であるGellam Gumを添加した培地で培養す
る。
選抜方法）融合・調整して得られた目的とするユーカリ
属植物のプロトプラスト（倍数性細胞）とこれと共存し
て培養する草本性植物のプロトプラストを各々１０4 な
いし１０5 コ／ｍｌの濃度に調整する。次に、両プロト
プラストを１：３〜３：１の割合で混合して、例えばガ
ンボーグのＢ５培地、ムラシゲ・スクーグのＭＳ培地等
をプロトプラストの性質に応じて選択して植物ホルモン
類、例えばナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、２，４−ジクロ
ロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）、インドール酢酸（Ｉ
ＡＡ）等のオーキシン類およびベンジルアデニン（Ｂ
Ａ）、１−（２−クロロ−４−ピリジル）−３−フェニ
ルウレア（４ＰＵ）、カイネチン、ゼアチン、チジアズ
ロン等のサイトカイニン類を添加した液体培地あるいは
培地固化剤であるGellam Gumを添加した培地で培養す
る。
【００１５】プレートしたプロトプラストの培養初期
は、暗条件で培養するのが好適であり、培養期間中の温
度としては、２０℃ないし３０℃が好ましいが、特に２
５℃ないし２８℃の間が好ましい。
は、暗条件で培養するのが好適であり、培養期間中の温
度としては、２０℃ないし３０℃が好ましいが、特に２
５℃ないし２８℃の間が好ましい。
【００１６】培養後３０〜５０日後に例えば、Genetici
n （Ｇ４１８）５〜３０μｇ／ｍｌ、カナマイシン１０
０〜１０００μｇ／ｍｌ、ハイグロマイシン１００〜５
００μｇ／ｍｌ等の抗生物質を添加し、選抜期間１０〜
３０日間で目的とする抗生物質耐性の倍数性のコロニー
のみが得られる。
n （Ｇ４１８）５〜３０μｇ／ｍｌ、カナマイシン１０
０〜１０００μｇ／ｍｌ、ハイグロマイシン１００〜５
００μｇ／ｍｌ等の抗生物質を添加し、選抜期間１０〜
３０日間で目的とする抗生物質耐性の倍数性のコロニー
のみが得られる。
【００１７】以下、実施例によって本発明を更に詳しく
説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもの
ではない。
説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもの
ではない。
【００１８】
実施例１供試植物 細胞融合に供するプロトプラストを単離する材料とし
て、倍数性細胞を選抜するマーカーを有する特開平２−
１３８９６６号公報記載の方法で形質転換したユーカリ
属植物（ Eucalyptus saligna 以下 E.salignaと記す）
から作出した苗条原基及びマーカーを有しない E.salig
na非形質転換苗条原基を用いた。さらに、これと共存さ
せて培養する草本性植物のプロトプラストとしてケナフ
（ Hibisc-us cannabinus ) のカルス由来のものを使用
した。
て、倍数性細胞を選抜するマーカーを有する特開平２−
１３８９６６号公報記載の方法で形質転換したユーカリ
属植物（ Eucalyptus saligna 以下 E.salignaと記す）
から作出した苗条原基及びマーカーを有しない E.salig
na非形質転換苗条原基を用いた。さらに、これと共存さ
せて培養する草本性植物のプロトプラストとしてケナフ
（ Hibisc-us cannabinus ) のカルス由来のものを使用
した。
【００１９】（プロトプラストの単離・調整方法）形質
転換された E.salignaの苗条原基より作出されたカル
ス、形質転換されていない E.salignaの苗条原基より作
出されたカルスおよびケナフから作出されたカルス各々
１ｇに対して、２０ｍｌの酵素液（１％セルラーゼオノ
ズカＲＳ、０．０５％ペクトリアーゼＹ−２３．１％ポ
リビニルピロリドン（ＰＶＰ）、１３％マニトール、ｐ
Ｈ５．６）を加えて２７℃の温度、振盪回数３０ｒｐｍ
で１６時間の酵素処理を行ない３種のプロトプラストを
別々に単離した。
転換された E.salignaの苗条原基より作出されたカル
ス、形質転換されていない E.salignaの苗条原基より作
出されたカルスおよびケナフから作出されたカルス各々
１ｇに対して、２０ｍｌの酵素液（１％セルラーゼオノ
ズカＲＳ、０．０５％ペクトリアーゼＹ−２３．１％ポ
リビニルピロリドン（ＰＶＰ）、１３％マニトール、ｐ
Ｈ５．６）を加えて２７℃の温度、振盪回数３０ｒｐｍ
で１６時間の酵素処理を行ない３種のプロトプラストを
別々に単離した。
【００２０】得られたプロトプラストの懸濁液をナイロ
ンメッシュでろ過して未消化の細胞塊等を除き、さらに
７５０ｒｐｍで３分間の遠心分離処理をして酵素液とプ
ロトプラストを分離し、１３％マニトールで２回洗浄し
た後、２種類のE.salignaのプロトプラストをそれぞれ
１０6 コ／ｍｌの濃度に調整し、融合に供試した。な
お、ケナフのプロトプラストは５×１０4 コ／ｍｌの濃
度に調整し、共存培養に供試した。
ンメッシュでろ過して未消化の細胞塊等を除き、さらに
７５０ｒｐｍで３分間の遠心分離処理をして酵素液とプ
ロトプラストを分離し、１３％マニトールで２回洗浄し
た後、２種類のE.salignaのプロトプラストをそれぞれ
１０6 コ／ｍｌの濃度に調整し、融合に供試した。な
お、ケナフのプロトプラストは５×１０4 コ／ｍｌの濃
度に調整し、共存培養に供試した。
【００２１】（プロトプラストの融合と培養方法および
選抜方法）上記の方法により調整した２種類の E.salig
naのプロトプラストを分子量１，５４０〜６，０００の
４０％ポリエチレングリコール液（ＰＥＧ）で融合処理
を行った。その後、０．５Ｍマニトール、５０ｍＭ Ｃ
ａＣｌ2 ２Ｈ2 Ｏ液（洗い液）でプロトプラストを洗浄
することにより細胞融合したプロトプラストが得られ
た。なお、この融合処理は、電気パルスによっても行う
ことができる。
選抜方法）上記の方法により調整した２種類の E.salig
naのプロトプラストを分子量１，５４０〜６，０００の
４０％ポリエチレングリコール液（ＰＥＧ）で融合処理
を行った。その後、０．５Ｍマニトール、５０ｍＭ Ｃ
ａＣｌ2 ２Ｈ2 Ｏ液（洗い液）でプロトプラストを洗浄
することにより細胞融合したプロトプラストが得られ
た。なお、この融合処理は、電気パルスによっても行う
ことができる。
【００２２】次に、融合した E.salignaのプロトプラス
トを５×１０4 コ／ｍｌの濃度に調整し、これにケナフ
のプロトプラストを３：１（ユーカリ３：ケナフ１）の
割合で混合する。
トを５×１０4 コ／ｍｌの濃度に調整し、これにケナフ
のプロトプラストを３：１（ユーカリ３：ケナフ１）の
割合で混合する。
【００２３】これを表−１に示したガンボーグのＢ５培
地にＮＡＡ ５ｍｇ／ｍｌ、ＢＡ０．５ｍｇ／ｍｌ、シ
ョ糖１％、マニトール９％を加えた液体培地、あるいは
Gelrite ０．０５％を含む培地２ｍｌに懸濁して直径６
ｃｍのシャーレにプレートした。
地にＮＡＡ ５ｍｇ／ｍｌ、ＢＡ０．５ｍｇ／ｍｌ、シ
ョ糖１％、マニトール９％を加えた液体培地、あるいは
Gelrite ０．０５％を含む培地２ｍｌに懸濁して直径６
ｃｍのシャーレにプレートした。
【００２４】培養後約３０日目にマニトールの濃度を６
％に下げた上記と同様のホルモン濃度の液体培地を添加
した。
％に下げた上記と同様のホルモン濃度の液体培地を添加
した。
【００２５】さらに、２７℃の温度の暗条件で４２日間
培養した後、表−１に示すガンボーグのＢ５培地に０．
０２ｍｇ／ｍｌのＮＡＡ、０．５ｍｇ／ｍｌの４ＰＵ、
１％のショ糖、３％のマニトール、１０μｇ／ｍｌのＧ
４１８を加えた液体選抜培地に移し、暗条件で２０日間
培養することによりＧ４１８耐性の倍数性コロニーが選
抜される。なお、選抜効率の結果を表２に示した。表に
示した結果からわかるように倍数性コロニーの候補の割
合は、細胞融合処理後に得られた全コロニーに対して約
１２％となり、倍数性細胞選抜の過程を簡素化できるこ
とが明らかとなった。
培養した後、表−１に示すガンボーグのＢ５培地に０．
０２ｍｇ／ｍｌのＮＡＡ、０．５ｍｇ／ｍｌの４ＰＵ、
１％のショ糖、３％のマニトール、１０μｇ／ｍｌのＧ
４１８を加えた液体選抜培地に移し、暗条件で２０日間
培養することによりＧ４１８耐性の倍数性コロニーが選
抜される。なお、選抜効率の結果を表２に示した。表に
示した結果からわかるように倍数性コロニーの候補の割
合は、細胞融合処理後に得られた全コロニーに対して約
１２％となり、倍数性細胞選抜の過程を簡素化できるこ
とが明らかとなった。
【００２６】
【表１】
【００２７】実施例２供試植物 細胞融合に供試するプロトプラストを単離する材料とし
て、倍数性細胞を選抜するマーカーを有する Eucalyptu
s saligna の形質転換苗条原基及びマーカーを有しない
非形質転換苗条原基（ Eucalyptus camaldulensis ) を
用いた。さらに、これと共存させて培養する草本性植物
のプロトプラストとしてケナフ（ Hibi-scus cannabinu
s ) のカルス由来のものを使用した。
て、倍数性細胞を選抜するマーカーを有する Eucalyptu
s saligna の形質転換苗条原基及びマーカーを有しない
非形質転換苗条原基（ Eucalyptus camaldulensis ) を
用いた。さらに、これと共存させて培養する草本性植物
のプロトプラストとしてケナフ（ Hibi-scus cannabinu
s ) のカルス由来のものを使用した。
【００２８】実施例−１と同様の方法によりプロトプラ
スト単離、融合処理を行いＧ４１８を含む液体培地で選
抜することによりＧ４１８耐性のコロニーを選抜した。
なお、選抜効率の結果を表２に示した。表２に示した結
果からわかるように倍数性コロニーの割合は、細胞融合
処理後に得られた全コロニーに対して５％となり、倍数
性細胞選抜の過程を簡素化できることか明らかになっ
た。
スト単離、融合処理を行いＧ４１８を含む液体培地で選
抜することによりＧ４１８耐性のコロニーを選抜した。
なお、選抜効率の結果を表２に示した。表２に示した結
果からわかるように倍数性コロニーの割合は、細胞融合
処理後に得られた全コロニーに対して５％となり、倍数
性細胞選抜の過程を簡素化できることか明らかになっ
た。
【００２９】
【表２】
【００３０】
【発明の効果】以上説明したようにこれまでのユーカリ
の細胞融合は、選抜マーカーを持たないプロトプラスト
同士の細胞融合であったために細胞融合処理後に得られ
るコロニー数が多く、目的である細胞の選抜が困難であ
った。しかし、細胞融合すべき一方に形質転換されたユ
ーカリのプロトプラストを用いることより効率的に目的
である細胞を選抜することが可能となり、植物の新品種
創成に極めて有力な方法を提供する。
の細胞融合は、選抜マーカーを持たないプロトプラスト
同士の細胞融合であったために細胞融合処理後に得られ
るコロニー数が多く、目的である細胞の選抜が困難であ
った。しかし、細胞融合すべき一方に形質転換されたユ
ーカリのプロトプラストを用いることより効率的に目的
である細胞を選抜することが可能となり、植物の新品種
創成に極めて有力な方法を提供する。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ０１Ｈ 4/00 8502−2Ｂ
Claims (1)
- 【請求項１】 融合する２種類のユーカリ属植物プロト
プラストのうち、少なくとも一方に形質転換体プロトプ
ラストを使用して細胞融合し、次いで分裂増殖の旺盛な
草本性植物のプロトプラストと共存培養することによっ
て得られたコロニーを抗生物質を含む培地で培養するこ
とにより、倍数体候補コロニーを選抜することを特徴と
するユーカリ属植物の細胞融合培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3280334A JPH0591873A (ja) | 1991-10-02 | 1991-10-02 | ユーカリ属植物における形質転換体プロトプラストを使用した細胞融合培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3280334A JPH0591873A (ja) | 1991-10-02 | 1991-10-02 | ユーカリ属植物における形質転換体プロトプラストを使用した細胞融合培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0591873A true JPH0591873A (ja) | 1993-04-16 |
Family
ID=17623557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3280334A Pending JPH0591873A (ja) | 1991-10-02 | 1991-10-02 | ユーカリ属植物における形質転換体プロトプラストを使用した細胞融合培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0591873A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG89425A1 (en) * | 2000-10-11 | 2002-06-18 | Niwa Kozo | Man-planted forest, method of planting trees and method of growing plants |
-
1991
- 1991-10-02 JP JP3280334A patent/JPH0591873A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG89425A1 (en) * | 2000-10-11 | 2002-06-18 | Niwa Kozo | Man-planted forest, method of planting trees and method of growing plants |
| AT411517B (de) * | 2000-10-11 | 2004-02-25 | Niwa Kozo | Verfahren zum pflanzen von bäumen und verfahren zum ziehen von pflanzen |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Melchers et al. | Somatic hybridisation of plants by fusion of protoplasts: I. Selection of light resistant hybrids of “haploid” light sensitive varieties of tobacco | |
| Puite et al. | Somatic hybrid potato plants after electrofusion of diploid Solanum tuberosum and Solanum phureja | |
| DE69232132T3 (de) | Verfahren zur schöpfung einer transformierten reispflanze | |
| Power et al. | The isolation, culture and regeneration of leaf protoplasts in the genus Petunia | |
| Gosch et al. | Isolation, culture, and induction of embryogenesis in protoplasts from cell-suspensions of Atropa belladonna | |
| Sacristan et al. | Incorporation of hygromycin resistance in Brassica nigra and its transfer to B. napus through asymmetric protoplast fusion | |
| Kim et al. | Highly efficient plant regeneration and Agrobacterium-mediated transformation of Helianthus tuberosus L. | |
| Soh et al. | Morphogenesis in plant tissue cultures | |
| Toriyama et al. | Diploid somatic-hybrid plants regenerated from rice cultivars | |
| Ito et al. | Plant regeneration of eucalypts from rotating nodule cultures | |
| Karim et al. | Cell suspension, isolation and culture of protoplasts of Allium cepa | |
| Saxena et al. | Transplantation of isolated nuclei into plant protoplasts: A novel technique for introducing foreign DNA into plant cells | |
| YAMAGUCHI et al. | Characteristics of regenerated plants via protoplast electrofusion between melon (Cucumis melo) and pumpkin (interspecific hybrid, Cucurbita maxima× C. moschata) | |
| Kuchuk et al. | Plant regeneration from leaf protoplasts of evening primrose (Oenothera hookeri) | |
| JPH0591873A (ja) | ユーカリ属植物における形質転換体プロトプラストを使用した細胞融合培養方法 | |
| Gill et al. | Plant regeneration from hypocotyl protoplasts of mothbean (Vigna aconitifolia) | |
| Hodges et al. | Transformation and Regeneration of Rice | |
| Negrutiu et al. | In vitro morphogenesis of Arabidopsis thaliana: The origin of the explant | |
| Bergman et al. | Electroporation of rapeseed protoplasts–transient and stable transformation | |
| Nenz et al. | An efficient and rapid procedure for plantlet regeneration from chicory mesophyll protoplasts | |
| KR20130106944A (ko) | 세포질 웅성 불임성을 가지는 ｎｗｂ―ｃｍｓ 양채류 식물체 및 이의 용도 | |
| Gill et al. | Regeneration of plants from mesophyll protoplasts of Nicotiana plumbaginifolia Viv. | |
| Myers et al. | Plant regeneration of wild Glycine species from suspension culture-derived protoplasts | |
| Jin et al. | Protoplasts from Agrobacterium rhizogenes-transformed cell line of Medicago sativa L. regenerated to hairy roots | |
| EP0424930B1 (en) | Method for culturing tomato protoplasts |