JPH05507923A

JPH05507923A - 細胞間付着仲介因子

Info

Publication number: JPH05507923A
Application number: JP91510983A
Authority: JP
Inventors: ポールソン，ジェイムズ，シー．; ペレツ，メリー，エス．; ガエータ，フェデリコ，シー．，エー．
Original assignee: サイテル　コーポレイション
Priority date: 1990-06-15
Filing date: 1991-05-22
Publication date: 1993-11-11

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】細胞間付着仲介因子発明の分野本発明は、炎症を減少または抑制し、そして炎症性疾患の過程および細胞間の付着により仲介される他の病理学的状態を処置する組成物および方法に関する。発明の背景脈管内皮細胞および血小板は、多数の生物学的応答において、血流中のある種の細胞、例えば、食作用のもつ白血球に選択的に結合することによって重要な役割を演する０例えば、内皮細胞は単球および顆粒球が炎症の応答において血管壁を通してかつ取り囲む組織の中に移動するまえに、それらと優先的に結合する。ある種の炎症をトリガーする化合物は、脈管の内皮に直接作用して、血管壁への白血球の付着を促進することが知られており、次いで細胞は壁を通してかつ損傷または感染の区域の中に稼動する。脈管の内皮への細胞の付着はまた、腫瘍の転移に関係すると考えられる。循環する癌細胞は、明らかに体の正常の炎症のメカニズムを利用し、そして内皮が活性化される血管の壁の区域に結合する。血小板もまた、同様な応答に関係する。血小板は止血が開始される間に活性化されるようになることが知られており、そして大部分形態学的、生化学的および機能的変化（例えば、急速な顆粒のエキソサイト−シスまたは脱顆粒）を行い、ここで血小板のアルファ顆粒膜は外部の血漿膜と融合するようになる。その結果、新しい細胞表面のタンパク質が発現されるようになり、これらは活性化された血小板の新しい機能、例えば、他の活性化された血小板および他の細胞の両者に結合する能力を与える。活性化された血小板は成長する血栓の中に補充されるか、あるいは血液の循環から急速に除去される。活性化された血小板は、単球および好中球を包含する、食作用の白血球に結合することが知られている。このプロセスにより仲介される病理学的および他の生物学的プロセスの例は、アテローム性動脈硬化症、血液凝固および炎症を包含する。最近の研究において、内皮細胞および血小板上の特殊化された細胞表面レセプター、それぞれ、内皮白血球付着分子（ＥＬＡＭ−１）および顆粒膜タンパク質− １４０（ＧＭＰ−１４０）と表示する、は、内皮および血小板による種々の循環する細胞の認識に関係することが明らかにされた。これらのレセプターは、レクチン様ドメイン、表皮成長因子に対する相同性をもつ領域、および補体制御タンパク質に相同性を有する領域である（参照、Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａら、５ｃｉｅｎｃｅ２４３：１１６０　（１９８９）　、これをここに引用によって加える）０例えば、ＥＬＡＭ−１は、多数の炎症性応答における第１段階である、内皮白血球付着を仲介することが知られている。詳しくは、ＥＬＡＭ−１はヒト好中球、単球、好酸球、ある種の１９２３球（Ｎ、　Ｇｒａｂｅｒら、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１４５：８１９　（１９９０））、ＮＫ細胞、および前骨髄球細胞系ＨＬ−６０と結合する。用語「セレクチン」は、ＥＬＡＭ−１およびＣＡＭＰ−１４０を包含する、レセプターの一般のクラスについて示唆されてきている。なぜなら、それらのレセプターはレクチン様ドメインを有しそしてそれらの付着機能は選択的性質をもつからである。これらの細胞表面のレセプターは種々の細胞上で発現される。ＧＭＰ−１４０（また、ＰＡＤＧＥＭとして知られている）は血小板および内皮細胞の表面上に存在し、ここでそれは血小板−白血球および内皮−白血球の相互作用を仲介する。セレクチンのクラスの他のメンバーはＭＥＬ−１４抗原およびそのヒト類似体ＬＡＭ−１であり、これらはリンパ球の細胞表面のレセプターであり、そしてリンパ節のホーミングレセプターとして作用する。しかしながら、セレクチンレセブターにより認識されるリガンドの正確な性質は大部分未知のままである。セレクチン類の作用をブロッキングし、こうして細胞の付着を阻害するために、種々の他の方法が従来開発されてきている０例えば、ＥＬＡＭ−１に対して向けられたモノクローナル抗体の使用は、病理学的応答、例えば、炎症のための処置として内皮−白血球の付着を阻害する方法として提案されてきている。内皮のインフーリエ−キン−８もまた、白血球−内皮細胞の相互作用の阻害因子であることが知られている。リガンド−レセプターの相互作用が解明されると、療法的養生法において有用であるセレクチン仲介細胞付着の、高度に特異的な、効率よい阻害剤を開発することができる。また、１種または２種以上のりガントを使用して、製剤学的化合物、例えば、抗炎症剤または酸化防止剤を損傷部位にターゲツティングすることができる。しかしながら、今日まで、１種または２種以上のりガントおよびレセプター分子のレセプター分子への相互作用の不十分な理解はこれらの努力を妨害している０本発明はこれらおよび他の関係する必要性を満足する。発明の要約本発明によれば、セレクチン細胞表面のレセプターに選択的に結合しかつ少なくとも１つのオリゴ糖成分を有する新規な組成物が提供される。この組成物はセレクチン細胞表面レセプターにより仲介される細胞間の付着を阻害し、これにより、例えば、炎症および細胞の付着に関連する他の病理学的応答を阻害することができる。一般に、組成物はシアル酸およびフコース、ＶＡｆａ塩およびリン酸塩からなる。関係する１！様において、セレクチンと結合する組成物は糖タンパク質、グリコリピドまたはオリゴ糖であることができる。１つの面において、医薬組成物が提供される。この医薬組成物は、例えば、セレクチンレセブターに選択的に結合することができるリガンドのオリゴ糖成分を含んでなるリポソームおよび医薬として許容される担体であることができる。リガンドを含有するリポソームは、また、普通の化学療法剤のためのターゲツティング賦形剤として働き、この化学療法剤はリポソーム内に含有されそしてセレクチンレセプターを発現するターゲツティングされた細胞に供給される。典型的には、化学療法剤は抗炎症因子または酸化防止剤である。リポソーム内に封入された化学的因子をターゲツティングするためにここに記載するりガントを使用することは、薬物の治療学的レベルを減少しそして副作用を最小とする便利で有効な方法である。他の面において、本発明は、患者に療法的に有効投与量のセレクチン細胞表面のレセプターに選択的に結合することができる成分を含んでなる化合物を投与することによって、病気の過程、例えば、炎症および再潅流傷害を引き起こす細胞間の付着を患者において阻害する方法からなる。細胞表面のレセプター、例えば、ＥＬＡＭ−１またはＧＭＰ−１４０は、脈管内皮細胞または血小板上で発現されることができる。炎症のプロセスは、例えば、慢性関節リウマチであることができる。投与される化合物は次の化学式オリゴ糖部分を有することができる；ＮｅｕＧｃｃｒ２，３Ｇａｌβ１．　４　（Ｆｕｃαｌ、３）ＧｌｃＮＡｃβ１−Ｒ，、ここでＲ１はアミノ酸、オリゴペプチド、脂質またはオリゴ糖である。図面の簡単な説明第１図は、非シアル化Ｌｅ”　（ＣＨＯ−ｋ　１およびＬＥＣ１２）を発現する細胞と比較した、ＩＬ−１β活性化された内皮細胞に結合するセレクチン（ＬＥＣＩＩ）を発現する細胞の能力を示す。第２図は、ＳＬＸ決定基に結合しないモノクローナル抗体と比較した、３７°Ｃ（第２Ａ図）および４℃（第２Ｂ図）においてＨＬ−６０細胞へのセレクチン仲介の結合をブロックするＳＬＸに対して特異的なモノクローナル抗体の能力を示す。第３図は、活性化された内皮細胞への結合に対する、ＳＬＸおよび非ＳＬＸ特異的モノクローナル抗体とのＬＥＣＩＩ（第３Ａ図）およびＬＥＣ１２（第３Ｂ図）細胞のインキュベージロンの効果を示す。第４図は、活性化された内皮細胞への結合前にＨＬ−６０，ＬＥＣｌｌおよびＬＥＣ１２細胞をシアリダーゼで処理することによって得られた結果を示す。第５図は、活性化された内皮細胞へのＨＬ−６０細胞の結合を阻害するＳＬＸ、Ｌｅ”または同様な炭水化物構造をもつグリコリピドを含有するリポソームの能力を比較する。第６図は、ＳＬＸおよびＬｅ”決定基に対して特異的なモノクローナル抗体によりＧＭＰ−１４０仲介血小板の付着の阻害を比較する。第７図は、活性化された血小板へのＨＬ−６０細胞の結合を阻害するＳＬＸ、Ｌｅ”または同様な炭水化物構造をもつグリコリピドを含有するリポソームの能力を比較する。第８図は、活性化された血小板へのＰＭＨの結合を阻害するＳＬＸ、Ｌｅ”または同様な炭水化物構造をもつグリコリピドを含有するリポソームの能力を比較する。第９図は、末端のシアル酸Ｎ　ｅ　ｕ　Ａ　ｃまたはＮｅｕＧｃをもつグリコリピドによるＧＭＰ−１４０仲介付着の阻害を示す。好ましい態様の説明炎症および細胞の付着により仲介される他の病気の応答を阻害する組成物および方法が提供される０本発明は、また、セレクチン細胞表面レセプターにより仲介される細胞の付着をブロックまたは阻害する能力を有する化合物（例えば、糖接合体およびモノクローナル抗体）を提供する。このような化合物を調製する方法もまた提供される。さらに、化合物の診断および治療学的使用が提供される。本発明の基礎は、セレクチン細胞表面レセプターにより認識される炭水化物成分の発見である。前述したように、セレクチン類は、また細胞付着分子のｒＬＥＣ −ＣＡＭ、族として知られており、種々の細胞の表面上で発現される独特の糖タンパク質である０例えば、ＥＬＡＭ−１は脈管内皮細胞上で誘導的に発現される（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ６ｔ　ａｌ、＋　前掲およびＨｅ５ｓｉｏｎ　ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、＋　８７：１６７３−１６７７　（１９９０）　、それらの両者をここに引用によって加える）、このレセプターは炎症性サイトカイン、例えば、インターリューキンＩβ（ＩＬ−Ｉβ）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、ならびにバクテリアの内毒素（リボ多ＩＩ）により誘発されることが証明されている（参照、Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、　８４：９２３Ｂ−９２４２（１９８７）　、これをここに引用によって加える）、これらの化合物は、試験管内で内皮細胞に直接作用して多形核白血球（好中球）および単球の付着を増強する（Ｂｅｖｉ　１ａｃｑｕａら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、前掲）。前述したように、ＧＭＰ−１４０は血小板および内皮分泌顆粒の膜糖タンパク質である（Ｇａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ、　３４３．７５７−７６０　（１９９０）、これをここに引用によって加える）、ＧＭＰ−１４０をそれらの表面上で発現する活性化された血小板は卓球および好中球に結合しくＪｕｎｇｉら、坦μ担６７：６２９−６３６　（１９８６））　、そしてまた、単球祿細胞系、例えば、ＨＬ６０およびＵ９３７に結合することが知られている（Ｊｕｎｇｉら、前掲Ｈ５ｔｌｂｅｒｓｔｅｉｎ　ら、Ｊ　Ｃ１１ｎ　Ｉｎｖｅｓｔ　７９：８６７−８７４（１９８７））、それらのすべてをここに引用によって加える。ＧＭＰ−１４０は分子量１４０，０００のアルファ顆粒膜タンパク質であり、血小板の刺激および顆粒の分泌の際に活性化された血小板の表面上で発現される（Ｈｓｕ　Ｌｉｎら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　２５９：９１２１−９１２６　（１９８４）　；Ｓ　ｔｅｎｂｅｒｇら、Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、、１０１：８８０− ８８６　（１９８５）　ＨＢｅｒｗａｎ　ら、ムら、Ｂｌｏｏｄ　７０：３５５ａ　（１９８７））においてウェイベルーパレイド（Ｗｅｉｂｅｌ−Ｐａｌａｄｅ）体（ｌｌｏｎｆａｎｔｉら、坦ｏｏｄ　７３：１１０９−１１１２　（１９８９））内に発見された。　Ｆｕｒｉｅら、米国特許第４．７８３，３３０号は、ＧＭＰ−１４０と反応性のモノクローナル抗体を記載している０以上の参考文献のすべてをここに引用によって加える。第３のセレクチンレセプターは、リンパ球ホーミングレセプター、ＭＥＬ−１４抗原またはＬＡＭ−１である（Ｇａ１１ａｔｉｎら、Ｎａ　ｔｕｒｅ３０４：３０−３４　（１９８３）　；　Ｓｉｅｇｅｌｌｍａｎら、５ｃｉｅｎｃｅ　２４３：１１６５１１７２（１９８９）；Ｒｏｓｅｎ＋　Ｃｅ旦」と旦［、１：９１３−９１９　（１９８９）　；およびＬａ５ｋｙ　ｅｔ　ａｌ、＋加える。リンパ球ホーミングに加えて、ＭＥＬ−１４抗原／ＬＡＭ−１は内皮への好中球の結合において初期に機能すると信じられる。セレクチンレセブターの構造および機能は上のレセプターの各々をコードする全長のｃＤＮＡのクローニングおよび発現により解明された（参照、例えば、Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａら、５ｃｉｅｎｃｅ＋　堕μｍ１　（Ｅ　Ｌ　Ａ　Ｍ−ｌ　）　、Ｇｅｎｇら、前掲（ＧＭＰ１４０）、およびＬａ５ｋｙら、前掲（ＭＥＬ− １４抗原〕）、セレクチンの細胞外成分は、従来記載されたタンパク質への相同性に基づいて３つのセグメントに分けることができる。Ｎ末端頭載（約１２０７ミノ＃）は、低い親和性のＩｇＥレセプターＣＤ２３を包含するＤｒｊｃｋａｍｅｒ、　ＩＪＬ−土工１■−，２６３：９５５７−９５６０　（１９８Ｂ）’　（これをここに引用によって加える）に記載されているＣ型補乳動物しクチンタンパク質族に関係する。ポリペプチドのセグメントがそれに続き、これは表皮成長因子（ＥＧＦ）のモチーフを含有するタンパク質に関係する配列を有する。最後に、ＥＦＧドメインの後に、各々約６０アミノ酸の１または２以上の直列の反復モチーフが存在し、これらは補体制御タンパク質の族の中に存在するものに関係する。セレクチンレセプターはレクチン様ドメインを含んでなるので、これらの分子の特異性はタンパク質−炭水化物の相互作用に基づくように思われる。ここに提供される証拠が示すように、レウィス（Ｌｅｗｉｓ）Ｘ抗原（ここでＳＬＸと表示する）のシアル化、フコシル化Ｎ−アセチルラクトサミン単位は、セレクチンレセブターのレクチン領域によりＵｌ識される部分である。とくに、証拠ばＥＬＡＭ−１およびＣ，ＭＰ−１４０の両者によるこの部分の認識を示す。本発明の組成物は、種々の立体配置にあるこのシアル化、フコシル化Ｎ−アセチルラクトサミン単位を含んでなる。本発明のオリゴ糖成分を記載するために使用する命名は常用の命名法に従う０個々の単糖についての標準の略号を使用する０例えば、２−Ｎ−アセチルグルコサミンはＧｌｃＮＡｃにより、フコースはＦｕｃにより、ガラクトースはＧａｌにより、そしてグルコースはＧｌｃにより表す。本発明のオリゴ線上に存在することができる２つのシアル酸は、５−Ｎ−アセチルニューラミン酸（ＮｅｕＡｃ）および５−Ｎ−グリコリルニューラミン酸（ＮｅｕＧｃ）である。特記しない限り、フコース（Ｌ−異性体）を除外してすべての糖は環状ピラノース立体配置においてＤ−異性体である。環状の２つのアノマーはαおよびβにより表す。単糖は一般にグリコシド結合により連鎖されてオリゴ糖および多糖を形成する。環の平面に関する結合の向きはαおよびβにより示す、２つの単糖の間の結合を形成する特定の炭素原子も記載する。こうして、ガラクトースのＣ−１とグルコースのＣ−４との間のβグリコシド結合はＧａｌβ１，４Ｃ１ｃにより表わされる。Ｄ−糖（例えば、Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ、Ｄ−ＧａｌおよびＤ−ＮｃｕＡｃ）について、表示αはＣ−１（ＮｅｕＡｃにおいてＣ−２）に結合するヒドロキシルが環の平面より下にあることを意味し、モしてβは環の上にあることを意味する。Ｌ−フコースの場合において、表示 αはヒドロキシルが環の上に存在することを意味し、そしてβはそれが下にあることを意味する。ＳＬＸが白血球−内皮細胞および白血球−血小板細胞の付着を仲介する炭水化物のりガントとして同定されると、ＳＬＸまたはその擬ＳＬＸ　（ｍｉｎｅ　ｔ　ｉ　ｃ　ｓ）を含んでなる化合物は精製することができ、あるいは新しく合成することができる。一旦得られると、このような化合物は、例えば、セレクチンレセプターを発現する細胞へのＳＬＸを有する細胞の結合の競争阻害を包含する、種々の目ＬＸとの相互作用は防止され、内皮または血小板への白血球および他の細胞の正常の結合および病理学的結合は妨害される。こうして、１または２以上のＳＬＸ単位または擬ＳＬＸを含有する化合物は、例えば、炎症、アレローム性動脈硬化症、凝固および他の内皮または血小板仲介病理学的事象の有効な阻害因子として働くことができる。ＳＬＸを含有する化合物は、多数の細胞からの細胞表面の糖タンパク質またはグリコリピドから得ることができる。例えば、ＳＬχ抗原はＬＥＣＩＩ細胞、ＣＨＯ細胞のグリコジル化突然変異の細胞表面の糖タンパク質のＮ一連鎖した炭水化物蒸上に存在する。ＬＥＣｌｌは、ＳＬＸ配列の中にシアル酸およびフコースの両者を有する末端構造を含有する、この独特の塘タンパク質を発現する：ここでＲは次の通りである：（参照、５ｔａｎｌｅｙら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｂｅｍ、、　２６３：１１３７４　（１９８８）、これをここに引用によって加える。）下に記載する手順を使用して、ＬＥＣ１１変異体が活性化されたヒト脈管内皮細胞に結合することが証明された。野生型ＣＨＯ細胞および特定のグリコジル化パターン（ＳＬＸ）をもたない他の関係するグリコジル化突然変異のＣＨＯ細胞細胞間一レベルの結合を示した。ＬＥＣＩＩ細胞により発現されたＳＬＸ成分において、シアル酸はＮｅｕＡｃの形態である。シアル酸は、結合に有意に影響を与えないで、他の形態、例えば、Ｎｅ　ｕＧｃであることができる０例えば、ウシ赤血球から分離したＳＬＸはＮｅｕＧｃを含んでなる。下の実施例■において証明するように、セレクチンレセブターに対する親和性は両者の形態について同一である。こうして、用語ｒＳＬＸ、は、ここで使用するとき、末端のシアル酸がＮｅｕＡｃ。ＮｅｕＧｃまたはシアル酸の他の同等の形態である、上に示した最小の四糖単位を意味する。ＮｅｕＡｃとしてシアル酸残基を示すここにおいて例示する構造は、これらの他の形態、とくにＮｅ　ｕＧｃを包含すると理解すべきである。基本的ＳＬＸ成分上の天然に存在する変化はまたセレクチンレセブターにより認識される０例えば、下の実施例■において提供された証拠は、構造ＮｅｕＧｃｃｒ２．３ＧｌｃＮＡｃβ１．３Ｇａｌβ１．４　（Ｆｕｃαｌ、３）Ｃ１ｃＮＡｃβ１，３β１．４Ｇｌｃβを育する、ＳＹと呼ぶ（またＶＩＭ抗原として知られている）オリゴ糖成分はセレクチンレセブターならびにＳＬＸに結合する。ＳＹ２成分は２つのシアル化Ｎ−アセチルラクトサミン単位（その１つはＳＬＸである）を含んでなる。こうして、セレクチンレセプターにより認識されるオリゴ糖は多数のＮ−アセチルラクトサミン単位を含んでなり、それらの少な（とも１つはフコシル化されている（参照、Ｔｅｉｍｅｙｅｒら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）　８８　：　１１３８−１１４２（１９９１）　、これをここに引用によって加える。ＳＬＸ単位を得るために使用する源は、グリコリピドまたは糖タンパク質の炭水化物蒸上の成分を発現する任意の細胞を包含する。こうして、多形核好中球、リンパ球、腫瘍細胞またはＨＬ−６０を使用してこの単位は精製されている。活性化された脈管内皮細胞に結合する他の細胞を、リガンドの分離に使用することもできる（参照、Ｓｙｓｉｎｇｔｏｎ　ら、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１３４：２４９８−２５０６　（１９８５）、　Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　２５９：１１９４９−１１９５７　（１９８４）、　Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉら、Ｊ、Ｂｉｏｌ。Ｃｈｅｓｓ、、　２５９：１１９４３−１１９４８　（１９８４）、　Ｐａ１ｅｔｔａら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　４８：２Ｂ−２８７（１９８８））、それらのすべてをここに引用によって加える。ＳＬＸまたはその擬ＳＬＸを含有する化合物は、表面塘タンパク質、糖ペプチド、オリゴ糖およびグリコリピドを細胞から分離するためのこの分野においてよく知られている方法を使用して天然源から調製することができる（参照、例えば、Ｇｅｒａｒｄ＋　’Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ　ｇｌｉｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）およびＴｈｏｍａｓら、ｒＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓ＋ｅｎｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｒ＋ｓＪ　、両者共ｕ’　ｏｔ’　ｇ土ＱＪＬＬＬＩ、　Ｖｏｌ、１８２゜Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　（ＤｅｕｔｓｅｈｅｒＷ、１９９０）　、これをここに引用によって加える）０例えば、ＬＥＣＩＩ細胞を使用して、例えば、５ｔａｎｌｅｙら、前掲の方法を使用して、ＳＬＸ単位を含有する糖タンパク質およびグリコリピドを得ることができる。簡単に述べると、１つの方法において、ＬＥＣＩＩ細胞を水庖性口内炎ウィルスで感染させる０次いで、ＬＥＣＩＩにより示される構造的炭水化物変更は、ウィルスのＧＩ！タンパク質のＮ一連鎖した２触角状（ｂｉａｎｔｅｎａｒｙ）の炭水化物上に発現される。このウィルスを平衡勾配遠心により精製し、そして糖ペプチドを５ｔａｎｌｅｙらにより記載されているようにプロテイナーゼ消化により精製する。いくつかのアプローチを使用して、ＨＬ−６０，ＨＴ−２９゜ｃｏｉｏ２０５、好中球およびセレクチンレセブターにより認識されるリガンドを含有する他の細胞系からセレクチン結合性部分を単離する。リガンドは一般にこれらの細胞型の細胞表面上に発現されるので、１つのアプローチはりガントに冨んだ血漿膜分画を分離することを含んで成る。いったん血漿膜が分離されると、リガンドを分離し、引き続いてモノクローナル抗体、とくにＳＬＸオリゴ糖構造と反応性のもの、例えば、モノクローナル抗体ＦＨ６，５ＮＨ３およびＣ５ＬＥＸ−１を使用して同定することができる。セレクチンレセブターリガンドを特性決定するために、垢ペプチドからのオリゴ糖の解放はオリゴＷ鎖の構造分析の第１段階である。これはタンパク質−炭水化物連鎖の化学切断によるか、あるいはエンドグリコシダーゼでオリゴ糖を解放することによって達成される。はとんどの場合において、異なる手順を使用して個々の糖タンパク質のために正確な条件を確立することができる。アスパラギン連鎖オリゴ垢はヒドラジツリシス、エンドグリコシダーゼ、激しいアルカリ性加水分解およびトリフルオロアセトリシスにより解放される。０連鎖炭水化物単位はアルカリ性β−排除により解放される。オリゴ糖はゲル濾過により糖ペプチドから分離される０次いで、生ずるオリゴ糖をゲル濾過、ＨＰＬＣ，薄層クロマトグラフィーおよびイオン交換クロマトグラフィーの組み合わせを使用して互いに分離する。次いで分離したオリゴ糖を完全に分析する。精製したオリゴ糖単位の完全な構造の分析は、単糖単位、それらの環形、立体配置（ＤまたはＬ）、アノマーの連鎖（αまたはβ）、糖とそれらの配列との間の連鎖の位置の決定を必要とする。さらに、任意の置換基の位置が確立される。メチル化を使用して、単糖の間のグリコシド連鎖の位置を決定する。１１残基のアノマーの立体配置は５００−　Ｍｎ２曙のＮＭＲ分光分析を使用してアドレスすることができる。完全な構造の炭水化物分析の実施に使用する条件および方法は、Ｂｅｅｌｅｙ＋Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　Ｔｅｃｈｎｉ　ｕｅｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ　ａｎｄ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏ　＊ＢｕｒｄｏｎおよびＫｎｉｐｐｅｎｂｅｒｇ　、　擺、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、アムステルダム（１９８５）に一般に記載されており、これをここに引用によって加える。オリゴ糖の糖を完全に特性決定するための当業界の技術は、いくつかの分析技術、例えば、ＦＡＢ−ＭＳ　（急速原子衝突音質スペクトル）、ＨＰＡＥ（高いｐｌ＋のアニオン交換クロマトグラフィー）および’Ｈ−ＮＭＲの使用を包含する。これらの技術は相互補完的である。これらの技術を使用してオリゴ糖の構造を完全に特性決定する方法の最近の例は、分析において、Ｓｐｅｌｌｍａｎｎら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ。２６４：１４１００　（１９８９）、および５ｔａｎｌｅｙら、前掲の中に見いだすことができる。他の方法は正イオン急速原子衝突賞量スペクトル（ＦＡＢ− ＭＳ）およびガスクロマトグラフィー−電子質量スペクトル（ＧＣ／Ｅ　Ｉ−ＭＳ）によるメチル化分析を包含する（参照、ＥＰＯ出願第８９３０５１５３．２号、これをここに引用によって加える）。グリコリピド上のセレクチンリガンドを特性決定する１つのアプローチは、細胞を有機溶媒で破砕し、グリコリピドを分離し、そしてＳＬＸに対するモノクローナル抗体、例えば、ＦＨ６，５ＮＨ３゜５ＮＨ４，Ｃ３ＬＥＸ−１ま７’、：はＶＩＭ−２と反応性のグ＋Ｊ　コＩＪビドを同定し、次いでオリゴＩＩ鎖の構造を決定することから成る。ＳＬＸを含有するグリコリピドおよびガングリオシドを得るために、グリコリピドの調製の標準的方法を使用することができる（参照、例えば、Ｌｅｄｅｅｎら、Ｊ、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、、　２１：８２９　（１９７３）　、これをここに引用によって加える）０例えば、グリコリピドをＨＬ−６０，ＨＴ−２９，ＰＭＮ、ヒト白血球、およびセレクチンリガンドを発現する他の細胞系から一般に当業者に知られている方法によって抽出する（参照、例えば、Ｓｙｍｉｎｇｔｏｎ　ら、Ｊ、ｌ１ｎｕｎｏ１．、１３４：２４９Ｂ　（１９８５）およびＭａｃｈｅｒおよびＢｅｃｋｓｔｅａｄ、　Ｌｅｕｅｍｉａ　Ｒｅｓ、＋　１４：１１９ −１３０（１９９０））。細胞を懸濁液中で増殖させ、そして遠心により収得する。グリコリピドを、Ｋａｎｎａｇｉ　ら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、（：ｈｅｍ、、　２５７：１４８６５　（１９８２）に記載されているように、細胞沈澱物からクロロホルム／メタノール２：１およびイソプロピルアルコール／ヘキサン／水５５　：　２５　：　２０で抽出する。生ずる抽出物をクロロホルム／メタノール／水（３：２：１）で分配する。生ずる抽出液の上相はガングリオシドを含有し、そして下相はグリコリピドを含有する。ガングリオシド（少なくとも１つのシアル酸成分を含有するグリコスフィンゴリピド）を含有する上相を、ＬｅｄｅｅｎおよびＹｕ＋　Ｍｅｔｈｏｄｓｈ鉦鯰Ｌ８３：１３９（１９８２）に詳細に記載されているようにして分離し、そしてＤＥＡＥ−セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）クロマトグラフィーにより中性および酸性の分画に分割する。生ずるガングリオシドをプールし、凍結乾燥し、そしてクロロホルム／メタノール（２：１）中に溶解する。フォルテ（Ｆｏｌｃｈ）分配の下相はグリコリピドを含有する。これらを分離し、そして調製用薄層クロマトグラフィーでクロロホルム／メタノール／水（６０：３５：８）を溶媒系として使用してＳｙｍｆｎｇｔｏｎにより記載されているように分離する。セレクチンのリガンドを含有するガングリオシドおよびグリコリピドを同定するために、免疫化学的グリコリピド分析をＭａｇｎａｉら、シ巳ｎ工」劫旦回ｍ、　１０９：３９９　（１９８０）の手順に従い実施する。簡単に述べると、前述のガングリオシドのプールを薄層クロマトグラフィーによりクロマトグラフィーにかける０次いで薄層のプレートを１１１標識したＦＨ６、またはＳＬＸに特異的に結合する他のモノクローナル抗体とインキュベーションする。標識した抗体とインキュベーションした後、プレートをラジオグラフの検出フィルムに露光し、そして現像する。Ｘ線フィルム上の黒いスポットはモノクローナル抗体に結合するガングリオシドに相当し、そしてそれらのガングリオシドを、シリカプレートの対応する区域をかき取り、そしてガングリオシドをクロロホルム／メタノール／水で溶離することによって回収する。ガングリオシドをまた乾燥し、そしてクロロホルムの中に再懸濁させ、そして同様な薄層系で展開し、そして放射線標識した抗体でプロービングする。グリコリピドから誘導されたオリゴ糖の構造分析は、本質的にガングリオシドについて記載したように実施する。ＳＬＸ単位を含んでなるオリゴ糖はこの分野において知られている方法により糖タンパク質から調製することができる（参照、例えば、Ｇｅｒａｒｄ、前掲、ｐｐ、５３７−５３９）　、典型的には、Ｎ−グリコシダーゼ（Ｎ−グリカナーゼ）を使用してＮ一連鎖オリゴ糖を切断するが、〇一連鎖基はエンド−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼで切断する。種々の成分に結合したＳＬＸまたはその擬ＳＬＸを含有する合成化合物は、所望の特定の用途に依存して調製することができる０例えば、ＳＬＸはセラミド部分を還元性末端のＧｌｃＮＡｃ単位のＣ−１に連鎖することによってガングリオシドに転化することができる。ＳＬＸ構造はまた、広範な種類の他の分子、例えば、種々の置換されたアミノ酸、複素環化合物、分枝鎖または直鎖状の炭素鎖をもつエーテル結合、およびアリールまたはアルキルアリール部分をもつエーテル結合に連鎖することができる。ＳＬＸ単位はまた、種々のアミノ酸、擬アミノ酸、オリゴペプチドまたはタンパク質に結合することができる。用語「アルキル」は、ここで使用するとき、分枝鎖または直鎖状の飽和または不飽和の炭化水素鎖、例えば、１〜７個の炭素原子を有する低級アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ブチル、ｎ−ヘキシルなど、シクロアルキル（３−７炭素）、シクロアルキルメチル（４〜８炭素）およびアリールアルキルを意味する。用語「アリール」は、芳香族炭化水素から１つの原子を除去することによって誘導された基、例えば、ベンゼンからのフェニルを意味する。芳香族炭化水素は１より多い不飽和の炭素環、例えば、ナフチルを有することができる。「複素環化合物」は３またはそれより多くの原子を有する環の化合物を意味し、ここで原子の少なくとも１つは炭素以外（例えば、Ｎ、　０．　Ｓ、　Ｓｅ、　ＰまたはＡｓ）である、このような化合物の例は、フラン類、ピリミジン類、プリン類、ピラジン類などを包含する。多価の形態のＳＬＸの合成のために、ＳＬＸを含有するモノマーの単位を結合して１〜約４またはそれ以上のＳＬＸ成分を有する分子を形成することができる。このような多価の形態の１つの例は、オリゴ糖単位が、次の成分：ｎおよびｍは同一であるか、あるいは異なり、そして２〜１２の整数であり、ＹはＯまたはＳであり、そしてＷはＯ１９またはＮＨである）により連鎖しているか、あるいは２は５〜１４員環であり、そして環上の置換基はシスまたはトランスの関係にあり、そして置換基は１，２〜Ｌ　（ｐ／２）＋１の配置にあり、ここでｐは環の大きさである）により連鎖されているものである。環が複素環（例えば、窒素原子を含んでなるもの）である場合、オリゴ糖成分は好ましくは環上の窒素原子に連鎖される。この目的に適当な複素環化合物の例は、ピペラジンおよびホモピペラジンである。あるいは、ＳＬＸまたは擬ＳＬＸの多価の形態は、所望の成分を多数の結合部位をもつ前取て形成した担体成分に結合することによってつくることができる０例としてＳＬＸをリジンおよびリジンを含有するペプチド、タンパク質、糖タンパク質またはこのような化合物のアスパラギン側鎖のアミノ基に結合することが挙げられる。ＳＬＸの多価の形態を調製する１つの方法は、所望の単糖残基を多糖に付加することである。例えば、ＳＬＸの直線のコア構造を含有する多糖を多価のＳＬＸを含有する多糖に転化することは、酵素のフコシル化により達成される０群Ｂのストレプトコッカスから得られた天然の多１ｉＩａ型の使用が好ましい。全体の２００．０００ダルトンの多糖ならびにその断片をこの目的に使用することができる。こうして、約ｓ、　ｏｏｏ〜約３００．０００の分子量を有する多糖を使用することができる。約２５，０００〜約１００．０００の分子量が好ましい。多＄１１ａ型上の側鎖の数は多糖についてフコシル化して活性を有するようにすることができる。典型的には、約５〜約２００の側鎖をフコシル化し、好ましくは約５０〜約１５０をフコシル化する。ＳＬＸ成分の合成は化学的、酵素的方法、または化学的および酵素的方法の組み合わせを使用して達成することができる。（参照、例えば、ＥＰＯ公開第３１９，２５３号、これをここに引用によって加える。）好ましい方法（下の反応のスキーム■）において、１または２以上のＮ−アセチルグルコサミン単位（ＮｅｕＡｃ−Ｒ）を含有する化合物を順次にガラクトシルトランスフェラーゼ（Ｎ−アセチルグルコサミンβ１，４ガラクトシルトランスフエラーゼ（Ｅ、Ｃ。２．４．１．９０））、シアリルトランスフェラーゼ（Ｇａｌβ１．４ＧｌｃＮＡｃα２，３シアリルトランスフエラーゼ（Ｅ、Ｃ０２，４，９９，６）またはＣ，ａｌβ１，３ＮＡｃα２．３シアリルトランスフエラーゼ（Ｅ、Ｃ，２，４９９、４）およびフコシルトランスフェラーゼ（Ｎ−アセチルグルコサミニドα １，３フコシルトランスフエラーゼ（Ｅ、Ｃ，２，４，１，１５２））と反応させて、最終のＳＬＸを含有する構造を生成することができる。この場合において、Ｒは担体成分または適当な担体成分への結合を可能とする活性化可能な中間体であることができる。各酵素反応は、ドナー基質として適当なヌクレオチド糖を使用して、ＳＬＸの合成において次の中間体を発生させる。グリコジル転移反応は、最適には、アルカリ性ホスファターゼ（例えば、子ウシ腸から、ＣＩＡＰ）を添加して、反応を阻害することがあるヌクレオシドホスフェート副生物を消費して実施することができる。反応スキームｌ５ＬＸに類似する炭水化物基の調製用酵素的合成のために一般的な条件は知られている（参照、Ｔｏｏｎｅら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４５：５．（６５−５４２２（１９８９）　；　Ｗｏｎｇら、　Ｊ、Ａ＋ｓ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、４７：５４１６−５４１８　（１９８２）　；　［Ｊｎｖｅｒｚａｇｔら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　１１２：９３０８−９３０９　（１９９０）　；　Ｐｒｔｅｅｌｓ　ら、Ｊ、Ｂｉｏｌ。夏１１工２５６：１０４５６−１０４６３　（１９８１）　、それらのすべてをここに引用によって加える）、主要な酵素反応の各々は示されている（Ｂｅｙｅｒら、Ａｄｖ、Ｅｎｚ　ｐｉｏｌ、　５２：２３−１７６　（１９８１）　；丁ｏｏｎｅ　ら、前掲；およびＨｏｗａｒｄら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２６２：１６８３０−１６８３７　（１９８１）　ｉそれらのすべてをここに引用によって加える）、ｔｌＩ製用反応のために、ガラクトシルトランスフェラーゼおよびｌまたは２以上のシアリルトランスフェラーゼを天然源から精製する（Ｂｅｙｅｒら、前掲および−ｅｉｎｓｔｅｉｎら、て加える）、フコシルトランスフェラーゼはまた、ＣｒａｗｌｅｙおよびＢｉｎｄｓｇａｕｌ、　Ｃａｒｂｈ　ｄ、Ｒｅｓ、　１９３：２４９−２５６　（１９８９）（これをここに引用によって加える）に一般的に記載されているように、自然源から同定することができる。ガラクトシルトランスフェラーゼおよびシアリルトランスフェラーゼのＤＮＡはクローニングされており（ＰａｕｌｓｏｎおよびＣｏ１１ｅｙ、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ＋ｗ、　２６４：１７６１５−１７６１８　（１９８９）　、これをここに引用によって加える）、大規模な調製的合成のための可溶性組み換え酵素の製造が可能にされた（Ｃｏｌｌｅｙら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｓ、　２６４　：１７６１９−１７６２２　（１９８９））　。大規模の反応のために十分な量のフコシルトランスフェラーゼを得るために、当業者のあるものはこの酵素をクローニングし、そして組み換え体の可溶性酵素として発現することができる。好ましい方法として、Ｃｈｉｒｇｗｉｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ　１８：５２１４−５２９９　（１９７９）に記載されているように、ＲＮＡを野生型ＣＨＯ細胞およびＬＥＣＩＩ細胞から抽出し、そしてポリＡ＋ＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）−セルロースのクロマトグラフィーにより分離することができる。次に、ＬＥＣ−１１細胞からのｃＤＮＡを、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ■ｍｌ」ユニａｂｏｒａｔｏｒ　ＭａｎｕａＬ第２版（１９８９）　、　Ｃｏ１ｄ　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ　Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク（これをここに引用によって加える）に記載されているようにして調製することができる。ｃＤＮＡは、Ｄａｖｉｓ（Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｅｘ　ｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｉｍｕｎｏｌ　、Ｖｏｌ−２＋　ｐｐ、１−１３（１９８６）の方法により、野生型ＣＨＯ細胞からの過剰のポリＡ＋ＲＮＡを使用して抽出することができ、このＣＨＯ細胞は所望のフコシルトランスフェラーゼを発現しないが、それ以外はＬＥＣＩＩ細胞のｍＲＮＡ種の大部分を有する０次いで、ｃＤＮＡライブラリー〇ＤＭ８発現ベクターの中で抽出したｃＤＮＡを使用して構成することができる（Ｓｅｅｄ、　Ｎａｔｕｒｅ　３２９：８４０−８４２　（１９８７））、フコシルトランスフェラーゼを発現するクローンは、Ｌａｒｓｅｎら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　８６：３２２７−８２３１（１９８９）に記載されている発現クローニングにより、ＣＯ５−１細胞のトランスフェクションを使用しそしてＦＨ６抗体またはＳＬＸ抗原に対して特異的な他の抗体でＳＬＸ抗原を発現する細胞をスクリーニングすることによって分離することができる０次いで、フコシルトランスフェラーゼの全長のクローンを使用して、Ｃｏ　ｌ　ｌ　ｅｙら、前掲により教示されているようにし、可溶性組み換え酵素を産生ずることができる。ＳＬＸの他の源はα１−酸性糖タンパク質であり、これは血漿糖タンパク質であり、その炭水化物部分をフコシル化してＳＬＸを生成することができる（参照、幻ヱ勧よ、±１■Ｊｂ旦吐Ｐ」１１四亘凹工江ｌ−１１３２−１１３５（１９９０）　、それらの両者をここに引用によって加える）。ＳＬＸ化合物の酵素的合成または組み合わせた化学的および酵素的合成は好ましいが、化学的合成は、また、下の反応のスキーム■およびＵａに示すようにして可能である。（Ｃ）スキーム■ スキーム［ａＳＬＸ構造の成分片は合成されているｍ　Ｎ１ｃｏｌａｏｕら（Ｊ、Ａｓ＋、Ｃｈｅｍ。Ｓａｃ、　１１２：３６９３　（１９９０））は、グリコスフィンゴリピドの腫瘍に関連するＬｅ”族の完全な合成を発表した。その中に保護された三糖Ｇａｌ β１，４　（Ｆｕｃαｌ、３）Ｇｌ　ｃＮＡｃ　（Ａ）の合成が記載されている。この中間体と適当なグリコジルアクセプター（例えば、アルコール部分）との反応は化合物（Ｂ）を生ずる。グルコサミン成分の選択的脱保護およびアセチル化は、本質的にＮ１ｃｏｌａＯＵらに記載されているようにして実施して化合物（Ｃ）を得る。（Ｃ）と前述したようなシアリルトランスフェラーゼとの反応は所望の生成物５ＬＸ−Ｒを与えるが、これは反応スキーム■を使用して比較的低い収率で生成することができる。修飾されたフコシドを、合成の反応スキームに含めて、この成分が異るＳＬＸ＠似体を得ることができる０例えば、α−Ｄ−アラビノシルグリコシドは、既知の手順、Ｎ１ｃｏｌａｏｕら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｌｌ、Ｓｏｃ、　１１２：３６９３−３６９５　（１９９０）に従い、トリー〇−ベンジルアラビノシルハライドを使用して合成することができる。他のアリールまたはアルキル置換アラビノシル成分を合成（Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｌｌ、Ｓｏｃ、　１０７：１２７４　（１９８５）、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ、Ａｌｄｒｉｃｈｉｓｉｃａ　Ａｃｔａ　１９：５９−６８　（１９８６）およびその中の参考文献）、そして同一方法において三糖の中に導入することができる。これらのすべてをここに引用によって加える。別の反応スキームＩ［ａに従い、三糖（トリサツカリド）（Ａ）を部分的脱保護して（Ｄ）を生成し、引き続いてこれを過アセチル化シアル酸メチルエステルと反応させ、Ｋａｍｅｙａｍら、ＸＶ　Ｉｎｔｌ、Ｃａｒｂｏｈ　ｄ。シ見シＡａｂｔ、　Ｎｏ、ＡＯ９６，（１９９０）、およびＣａｒｂｉｈ　ｄｒａｔｅ　Ｒｅｓ、　２０９：ｃｌ−ｃ４　（１９９１）　（これらをここに引用によって加える）に記載されている手順に従い、クロマトグラフィーによる精製後（Ｆ）を生成する。（Ｆ）を順次にメチルヒドラジンとの反応、Ｎ−アセチル化、〇−脱アセチル化およびエステルのハイブリダイゼーシヨンで処理すると、５ＬＸ−Ｒが得られる。反応スキーム■およびＩｌａの好ましい例は、次のものを包含する：アルキル（直鎖状、分枝鎖状、飽和、１不飽和および多不飽和）；セリン（ＤまたはＬ）ｉセリンを含有するペプチド；ジおよびトリーアルカノールアミン（例えば、（ＨＯ（ＣＨＩ）、）！　ＮＨ。（ＨＯ（Ｃ）（ｔ）−）　ｓ　Ｎ　；ここでｎｍＣｔ−ｃ、、、直鎖状、分枝鎖状、不飽和、１不飽和および多不飽和として）、Ｒもまた、当業者が所望の使用に包含するように、了り−ル、置換子り−ル（例えば、Ｍｅ、　ＯＨ，Ｉ　；　 ”’Ｉを包含する単独または組み合わせ）、アルキルアリール、了り−ルアルキルまたは他の成分であることができる。フェノール系化合物、例えば、チロシンの中へのヨウ素の導入はこの分野において知られている。ラジカルの基を含有するフェノール類はＩｔｓ■放射性同位元素の導入のために有用であり、診断において有用である化合物を生成する。ここに記載するＳＬＸリガンドは、また、セレクチンにより仲介される細胞間の付着を阻害することができる化合物の存在について測定するために使用することができる。ある数の方法を使用して、セレクチン仲介応答を阻害する能力について試験化合物の生物学的活性をアッセイすることができる。理想的には、本発明のアッセイは種々の化合物の大規模の試験管内または生体内のスクリーニングを可能とする。スクリーニングすべき試薬または被験化合物は、典型的には、合成または天然に生産された生物分子、例えば、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質（例えば、モノクローナル抗体）、炭水化物（例えば、オリゴ１１）　、　糖接合体、核酸などであろう、化合物は、例えば、前述のオリゴ糖を合成する方法を使用して合成的に生産される（さらにＫｈｄｅｍ、　Ｃａｒｂｏｈ　ｄｒａｔｅ　Ｃｈｅａ＋１ｓｔｒ　（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、カリフォルニア州すンディエゴ、１９８８を参照のこと）、これをここに引用によって加える）、定められた組成のポリペプチドを合成する方法はこの分野においてよく知られている（参照、Ａｔｈｅｒｔｏｎら、５ｏｌｉｄＰｈａｓｅ　Ｓ　ｎｔｈｅｓｉｓ（ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、オックスフォード、１９８９）これをここに引用によって加える）０合成被験化合物がポリマー（例えば、ポリペプチドまたは多ｗ）である場合、それらは好ましくは系統的方法で変更して、所望の作用を有する七ツマ−の配列を同定する（参照、例えば、米国特許第４，８３３，０９２号、これをここに引用によって加える）、被験化合物はまた、任意の天然源、例えば、動物、植物、菌類、またはバクテリアの細胞から前述の標準の手順に従い単離することができる。潜在的に有用なモノクローナル抗体は、下により詳細に記載する標準的方法に従い調製することができる。本発明の測定は、リガンド分子の拮抗因子または作動因子として作用する化合物を同定するとき有用である。拮抗因子はリガンドの生理学的作用を逆転するか、あるいはレセプターへのリガンドの結合を排除する化合物である。拮抗因子は、通常、レセプター結合部位についてリガンドと直接または間接的に競争し、こうして、レセプターに結合するりガント分子の比率を減少させる。典型的には、拮抗因子は天然リガンドのトポグラフィ−的同等物であり、そしてセレクチン上の結合部位についてリガンドと直接的に競争する。このような化合物をここにおいて「擬（ｍｉｍｅ　ｔ　ｔ　Ｃ）Ｊと呼ぶ。擬５ＬＸ（ＳＬＸ　ｍｉｍｅｔｉｃ）は、それがセレクチンレセプターにより認識されることにおいてＳＬＸ成分の代替因子としてコンフォメーション的および機能的に働く分子である。あるいは、リガンドおよび被験化合物がレセプターに同時に結合することができる場合、化合物は非競争的である。非競争的阻害因子は、レセプターに結合したりガント分子の比率を減少するよりむしろ、レセプター−リガンドの相互作用の引き続く生理学的作用を減少または阻害することによりて作用する。最後に、本発明の測定法を使用して、合成または天然に存在する作動因子、すなわち、レセプターに結合し、そして天然リガンドの生理学的応答に類似する応答を開始する化合物を同定することができる。リガンド−レセプターの相互作用の阻害因子を試験管内でスクリーニングする多数の直接的および間接的方法が利用可能であり、そして当業者に知られている０例えば、特定のセレクチンを発現する細胞へのＳＬＸを有する細胞の付着を阻害する能力を決定することができる。前述したように、セレクチンレセプターはクローニングされており、こうして遺伝子を広範な種類の細胞、例えば、ＣＯ３細胞、ＣＨＯ細胞などにおいて挿入および発現することができる。さらに、通常ＳＬＸを発現しない細胞は、形質転換された細胞にリガンドを合成する能力を与える、１または２以上のグリコジルトランスフェラーゼ遺伝子で形質転換することができる。（参照、例えば、Ｌａｗｓら、Ｃｅ１ｌ　６３：４７５−４８４　（１９９０）、これをここに引用によって加える。）典型的には、被験化合物または試薬を、標識したＳＬＸを有する細胞および固体表面上に固定化された活性化内皮Ｈ胞とインキュベーションする０次いで、細胞の付着の阻害は、適当な洗浄後、表面に結合した標識を検出することによって決定される。下に記載する例示する測定において、前骨髄球ＨＬ−６０細胞および活性化されたヒト内皮細胞または活性化された血小板を使用する。セレクチンレセブターに対して特異的なりガントが今回同定されたので、単離したリガンド分子もまた測定において使用することができる。用語「単離されたセレクチン結合因子」または「単離されたＳＬＸ部分」は、ここで使用するとき、その天然状態以外において、例えば、リガンドを通常発現する細胞の細胞膜に関連しない、セレクチン結合性またはＳＬＸを有する化合物を意味する。こうして、単離されたＳＬＸ部分は単離された分子、例えば、オリゴ糖または糖接合体の１つの成分であることができる。単離された分子は合成することができ、又はＳＬＸを有する細胞の膜から調製することができる。あるいは、単離されたセレクチン結合因子またはＳＬＸ成分は、測定において使用する前に、リポソームに含金させるか、あるいは固体表面に取り付けることができる。ＳＬＸを有するリポソームを調製する方法および種々の生物分子を固定化する方法は、下に詳細に説明する。典型的には、本発明の試験管内測定は、レセプターまたはりガントに結合することが知られている化合物の結合を競争的に阻害する被験化合物の能力を検出する、競争測定である。ＳＬＸとレセプターまたはリガンドとの間の結合を通常試験する。他の結合相互作用の阻害もまた、適当であり、例えば、モノクローナル抗体（例えば、ＦＨ６）とＳＬＸとの間または擬ＳＬＸとセレクチン阻害因子との間の結合の阻害を使用することができる。ｆｉ争測測定多数のタイプが知られている（参照、例えば、米国特許第３，３７６．１１０号、米国特許第４，０１６．０４３号、およびＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ＋　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　；　ＡＬａｂｏｒａｔｏｒ　Ｍａｎｕａｌ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐｕｂｌｃａｔｉｏｎｓ、　ニューヨーク（１９８８）　、これをここに引用によって加える）。本発明のアッセイはまた、競争測定を使用してよりむしろ、１つの成分単独への被験化合物の結合の測定にも適する９例えば、免疫グロブリンを使用して、ＳＬＸ成分を含有する化合物を同定することができる。モノクローナル抗体のための標準的手順、例えば、ＥＬ　Ｉ　ＳＡを使用することができる（参照、Ｈａｒｌｏ−およびＬａｎｅ、前掲）、ＳＬＸ抗原を含んでなるグリコリピドを測定するとき、モノクローナル抗体と抗原との反応性をＴＬＣ免疫染色により本来Ｍａｇｎａｎｔ　ら、担ｔａｌ　ｔ、Ｂｉｏｃ加堕、　１０９：３９９−４０２　（１９８０）に記載されている方法によるか、あるいはＫａｎｇｉ　ら、Ｃａｎｃｅｔ二Ｒｅｓ工４３：４９９７−５００５（１９８３）に記載されているように固相ラジオイムノアッセイによって測定することができる。これら文献をここに引用によって加える。糖タンパク質は標準的イムノブロッティング手順によりＨａｒｌｏ−およびＬａｎｅ、前掲に記載されているようにして測定することができる。サンドイッチアッセイのフォーマットもまた、適当である（参照、例えば、米国特許第４，６４２，２８５号および米国特許第４，２９９，９１６号および米国特許第４，３９１，９０４号、およびＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前掲それらのすべてをここに引用によって加える）。典型的には、結合測定において同定された化合物をさらに試験して、レセプター−リガンドの相互作用を阻害する能力について決定することができる。他の測定のフォーマットは、相互作用から生ずるリガンドまたはセレクチンを有する細胞における種々の生理学的変化の存在または不存在を検出することを含む。適当な測定の例は、次のものを包含する：結合により誘発される転写活性の変化の測定（参照、例えば、ＥＰＯ公開Ｎｏ、３７１２８２０）　、種々の細胞仲介細胞外作用の検出（参照、例えばＰＣＴ公開Ｎｏ、９０１００５０３　）　、および個々の細胞の膜ポテンシャルの変化の検出（参照、例えば、米国特許第４．３４３，７８２号〕、それらのすべてをここに引用によって加える。あるいは、単離されたレセプターまたはりガントにおけるコンフォメーシッンの変化を検出することができる；参照、例えば、米国特許第４．８５９，６０９号、これをここに引用によって加える。リガンド、レセプターまたは被験化合物を包含する、測定の任意の成分を固体表面に結合することができる。固体表面上に生物分子を固定化する多数の方法はこの分野において知られている０例えば、固体表面は膜（例えば、ニトロセルロース）、マイクロタイタープレート（例えば、ＰｖＣまたはポリスチレン）またはビーズであることができる。所望の成分を非特異的結合を通して共有結合的または非共有結合的に取り付けることができる。広範な種類の天然または合成の有機および無機のポリマーを、固体表面の材料として使用することができる０例示するポリマーは、次のものを包含する：ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（４−メチルブテン）、ポリスチレン、ポリメタクリレート、ポリ（エチレンテレフタレート）、レーヨン、ナイロン、ポリ（ビニルブチレート）、シリコーン、ポリホルムアルデヒド、セルロース、セルロースアセテート、ニトロセルロースなど、使用できる他の材料は、紙、ガラス、セラミック、金属、メタロイド、半導体材料、サーメットなどを包含する。さらに、次のものが包含されるニゲルを形成する物質、例えば、タンパク質、例えば、ゼラチン、リボ多糖類、シリケート、アガロースおよびポリアクリルアミドまたはいくつかの水性相を形成するポリマー、例えば、デキストラン、ポリアルキレングリコール（２〜３炭素原子のアルキレン）または界面活性剤、例えば、両親媒性化合物、例えば、リン脂質、長鎖（１２〜２４炭素原子）アルキルアンモニウム塩など、固体表面が多孔質であるとき、種々の孔大きさを系の性質に依存して使用することができる。表面を調製するとき、複数の異なる材料、とくにラミネートを使用して、種々の性質を得ることができる０例えば、タンパク質のコーティング、例えば、ゼラチンを使用して、非特異的結合を回避し、共有結合の接合を簡素化し、シグナルの検出の増強などをすることができる。化合物と表面との間の共有結合を望む場合、表面は通常多官能性であるか、あるいは多官能性化されることができる０表面上に存在しかつ連鎖に使用することができる官能基は、カルボン酸、アルデヒド、アミノ基、シアノ基、エチレン基、ヒドロキシル基、メルカプト基などを包含することができる。広範な種類の化合物を種々の表面に結合する方法はよく知られており、そして文献において詳細に例示されている。参照、例えば、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ＥｎｚｙｓＩｅｓ、　Ｉｔｉｒ。Ｃｈｉｂａｔａ、　Ｈａｌｓｔｅｄ　Ｐｒｅｓｓ、　二ｓ−ヨーク、１９７８、およびＣｕａｔｒｅｃａｓａｓ。Ｊ、、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２４５３０５９（１９７０）　、これをここに引用によって加える。共有結合に加えて、アッセイ成分を非共有結合により結合する種々の方法は典型的には表面への化合物の非特異的吸収である。典型的には、表面を第２化合物でブロッキングして、標識した測定成分の非特異的結合を防止する。あるいは、表面は１つの成分を非特異的に結合するが、他の成分を有意に結合しないように設計する０例えば、レクチン、例えば、コンカナバリンＡを有する表面は炭水化物を含有する化合物と結合するが、グリコジル化を欠如する標識したタンパク質と結合しない、測定成分の非共有結合による取り付けのための種々の固体表面は、米国特許第４．４４７．５７６号および米国特許第４．２５４．０８２号（これらをここに引用によって加える）において概観されている。多数の測定フォーマントは、標識した測定成分、例えば、ＳＬＸリガンド、擬ＳＬＸ、免疫グロブリン、レセプター、または被験化合物を使用する。標識はこの分野においてよく知られている方決に従い測定の成分に直接または間接にカップリングすることができる。広範な種類の標識を使用することができる。成分はいくつかの方法の１つにより標識することができる。検出の最も普通の方法は１Ｈ１Ｉｔｓ　ｌ　、　３５３．　ＩｔＣまたはｚｔＰ標識した化合物などを使用するオートラジオグラフィーである。放射性アイソトープの選択は、合成の容易さ、種々の安定性、および選択したアイソトープの半減期のための研究の好ましさに依存する。他の非放射性標識は、標識した抗体に結合するリガンド、蛍光団、化学発光剖、酵素、および標識したりガントのための特異的結合対のメンバーとして働くことかで−きる抗体を包含する。標識の選択は、要求される感度、化合物との接合の容易さ、安定性の要件、および入手可能な計器に依存する。非放射性標識は間接的手段によりしばしば達成される。一般に、リガンド分子（例えば、ビオチン）は分子に共有結合される０次いで、リガンドは抗リガンド（例えば、ストレプトアビジン）分子に結合し、ここで抗リガンド分子は本来的に検出可能であるか、あるいはシグナル系、例えば、検出可能な酵素、蛍光性化合物、または化学発光性成分に共有結合することができる。リガンドおよび抗リガンドは広く変化することができる。リガンドが天然抗リガンド、例えば、ビオチン、チロキシンおよびコーチゾルおよびコーチゾルを有する場合、それは標識した、天然の抗リガンドと組み合わせて使用することができる。あるいは、ハブテンまたは抗原性化合物を抗体と組み合わせて使用できる。分子はまた、シグナル発生化合物に、例えば、酵素または蛍光団との結合により、直接接合させることができる。標識として開運の酵素は、主として、ヒドラーゼ、とくにホスファターゼ、エステラーゼおよびグリコシダーゼ、またはオキシドレダクターゼ、とくにペルオキシダーゼであろう、蛍光性化合物は、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロンなどを包含する。化学発光性化合物は、ルシフェリンおよび２．３−ジヒドロフタラジンジオン、例えば、ルミノールを包含する。使用することができる種々のシグナル生成系の概観については、米国特許第４．３９１−、９０４号を参照のこと、これをここに引用によって加える。前述したように、アクセス可能なＳＬＸ単位または擬ＳＬＸを含んでなる種々の阻害因子の化合物に加えて、本発明はまた、セレクチンにより仲介される細胞間の付着を阻害することができるモノクローナル抗体ならびにこのような抗体を同定する方法を提供する。モノクローナル抗体は、セレクチンのリガンドまたはレセプターに結合し、そして細胞の付着をブロッキングする。こうして、種々の免疫グロブリン分子の生成および掻作について当業者に入手可能な複数の技術を応用して細胞間の付着を阻害することができる。ここで使用するとき、用語「免疫グロブリン」は免疫グロブリン遺伝子により実質的にコードされる１または２以上のポリペプチドから成るタンパク質を意味する。認識される免疫グロブリン遺伝子は、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロンおよびミニ−の定常領域の遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリンの可変領域の遺伝子を包含する。免疫グロブリンは、抗体以外の種々の形態、例えは、Ｆｖ、Ｆａｂ、およびＦ（ａｂ’）ｇで、ならびに−末鎖で存在することができる（例えば、Ｈｕｓ　ｔｏｎら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　８５：５８７９−５８８３（１９８Ｂ）およびＢｉｒｄら、５ｃｉｅｎｃｅ　２４２：４２３−４２６　（１９８Ｂ））これらをここに引用によって加える。（参照、一般に、ＴＡｏｏｄら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第２版、Ｂｅｎｊａｓｉａ、ニューヨーク（１９８４）、およびＨｕｎｋａｐｉ　１ｌｅｒおよびＨｏｏｄ、　Ｎａｔｕｒｅ　３２３：１５−１６　（１９８６）　、これらをここに引用によって加える。）ＳＬＸ抗原と結合する抗体は、種々の手段により生成することができる。ヒト以外の、例えば、ネズミ、ウサギ目、ウマのモノクローナル抗体の産生はよく知られており、そして動物をＳＬＸ抗原、あるいは抗原を含んでなる糖タンパク質またはグリコリピドを含有する調製物により免疫することができる。免疫した動物から得られた抗体産生細胞を不滅化しそしてスクリーニングするか、あるいはまずウィルス表面のタンパク質とレセプター分子との相互作用を阻害する抗体の産生についてスクリーニングし、次いで不滅化する。モノクローナル抗体の産生についての一般手順の説明については、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ＋　Ａｎｔｆｂｏｄｆｅｓ　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　Ｍａｎｕａｌ　（１９８Ｂ）、前掲を参照のこと。ヒト抗原（ヒト組織から分離されたＳＬＸ単位の場合において）に対してヒトモノクローナル抗体の発生は、普通の技術とともに異なることがある。こうして、ヒト以外の抗体の抗原結合領域、例えば、Ｆ（ａｂ’）、または超可変ＮＭを、組み換えＤＮＡ技術によりヒトの一定領域（Ｆｃ）またはフレームワーク領域に転移して、実質的にヒト分子を産生ずることができる。このような方法は一般にこの分野において知られておりそして、例えば、米国特許第４．８１６，３９７号、欧州特許全行第１７３，４９４号および欧州特許全行第２３９，４００号（これらをここに引用によって加える）に記載されている。あるいは、ヒ）ＳＬＸに特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその一部分をコードするＤＮＡ配列は、Ｈｕｓｅら、５ｃｉｅｎｃｅ　２４６：１２７５−１８１　（１９Ｂ９）（これをここに引用によって加える）の一般の手順に従いヒトＢ細胞からのＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、次いで所望の特異性の抗体（または結合性断片）をコードする配列をクローニングおよび増幅することによって単離することができる。多数の現在入手可能なモノクローナル抗体を本発明に従い使用して、セレクチンにより仲介される細胞間の付着を阻害することができる０例えば、Ｃ３ＬＥＸ− １（参照、Ｃａｍｐｂｅｌｌら、Ｊ、Ｂｔｏｌ、Ｃｈｅｓ。２５９：１１２０Ｂ−１１２１４（１９８４））　、Ｓ　Ｌ　Ｘとわずかに異なる配列を認識するＶＩＭ−２（参照、Ｍ　ａ　ｃ　ｈ　ｅ　ｒら、前掲）、ＦＨ６（米国特許第４，９０４．５９６号に記載されている）（すべて参考文献をここに引用によって加える）、あるいはＳ、Ｈｋｏｍｏｒｉ博士（ＢｉｏｍｅｎｂｒａｎｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅ、ワシントン州シアトル）により発生されたＳＨｓまたはＳＨ，。免疫グロブリンを包含する本発明の化合物は、後述するように医薬製剤の調製において使用することができる。化合物がオリゴ糖または糖接合体である場合、ＳＬＸまたは擬ＳＬＸ部分は種々の形態で提供することができるが、セレクチンレセブター、例えば、ＥＬＡＭ−１，ＧＭＰ−１４０またはＭＥＬ−１４抗原と有効に結合し、これにより細胞間の付着を阻害することができるべきである。本発明の医薬組成物は、多数の疾患に関連する細胞の付着をブロッキングまたは阻害することができる０例えば、多数の炎症性疾患は脈管内皮細胞および血小板上に発現されるセレクチンに関連する。用語「炎症」はここにおいて特異的および非特異的の両者の防御系の反応を意味する。特異的防御系の反応は抗原に対する特異的免疫系の反応である。特異的防御系反応の例は、抗原例えばウィルスに対して抗体の応答、および遅延型過敏性を包含する。非特異的防御系反応は、一般に免疫学的記憶が不可能である白血球により、仲介される炎症応答である。このような細胞は、マクロファージ、好酸球および好中球を包含する。非特異的反応の例は、蜂の刺創後の直ちの腫脹、バクテリアの感染部位におけるＰＭＮ白血球の集まり（例えば、細菌性肺炎における肺の浸潤および膿瘍における膿の形成）を包含する。他の処置可能な疾患は、次のものを包含する：例えば、慢性関節リウマチ、虚血後の白血球仲介組織の損傷（再潅流傷害）、凍傷の損傷又はショック、急性白血球介在肺傷害、（例えば、大人の呼吸困難症候群）、喘息、外傷性のショック、敗血症性ショック、腎炎、および急性および慢性の炎症、例えば、アトピー性皮膚炎、転宿、および炎症性の腸の病気０種々の血小板仲介病理学的事象、例えば、アレローム性動脈硬化症および凝固もまた、処置することができる。さらに、腫瘍の転移は循環する癌細胞の付着の阻害により阻害または防止することができる。この例には結腸癌および黒色腫が包含される。１例として、再潅流傷害は本発明の組成物による処置がとくに可能である。ＧＭＰ−１４０セレクチンーリガンドの相互作用を阻害する組成物は、とくに再潅流傷害の処置または防止に有用であることがある０本発明は心臓外科の前に予防的に使用して、外科後の回復を増強することができる。ＧＭＰ−１４０は血小板および内皮細胞のウェイベルーバレイド（Ｗｅｉｂｅｌ −Ｐａｌａｄｅ）体の中に貯蔵され、そしてトロンビンにより活性化された後に解放されて、好中球および単球の付着を仲介するので、ＧＭＰ−１４０−リガンドの相互作用の阻害因子は、血栓性疾患をしばしば伴う組織の損傷を最小とする場合に特に有用であることがある０例えば、このような阻害因子は、最近の発作、心筋梗塞、深部静脈の血栓症、肺塞栓症などを経験した患者において、とくに療法的価値を有する。化合物は血栓溶解治療において特に有用である。本発明の組成物は、敗血症性シーＩ７りまたは散在性腺管内凝固（Ｄ　Ｉ　Ｃ）の二次作用を治療するために特に使用される０敗血症性ショックまたはＤＩＣの間の組織の中への白血球の遊走は病理学的組織の破壊をしばしば生ずる。さらに、これらの患者は広く微小循環の血栓症および拡散性炎症を有することがある。ここにおいて提供される医薬組成物はこれらの部位における白血球の遊走を阻害し、そして組織の損傷を緩和する。セレクチンーリガンドの相互作用の阻害因子はまた、外傷性のショックおよびそれに関連する急性組織の損傷の処置において有用である。セレクチンは損傷の部位への白血球の補充、とくに作用損傷および炎症の場合にＥＬＡＭ−１の補充において役割を演するので、それらの阻害因子を局所的または全身的に投与して、このような傷害に関連する組織の損傷を抑制することができる。そのうえ、炎症部位に対するこのような阻害因子の特異性のために、例えば、ＥＬＡＭ−１が発現される場合、これらの組成物は、伝統的抗炎症剤と比較したとき、より有効であり、そして合併症を引き起こす可能性がより少ない。こうして、本発明はまた、前述の状態を処置するとき使用できる医薬組成物を提供する。この医薬組成物は、生物分子またはＳＬＸ単位を含んでなる他の化合物、ＳＬＸに結合する抗体、またはＳＬＸリガンドとセレクチンレセブターとの間の相互作用を阻害する他の化合物、および製剤学的に有効な担体から構成されている０本発明の生物分子は、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質（例えば、免疫グロブリン）、炭水化物（例えば、オリゴ環または多＄ｌ類）、糖接合体（例えば、グリコリピドまたは糖タンパクｆ）、核酸などであることができる。医薬組成物は種々の薬物供給系における使用に適当である。薬物を供給する本発明の簡単な概観については、Ｌａｎｇｅｒ、　５ｃｉｅｎｃｅ　２４９　：　１５２７−１５３３（１９９０）を参照のこと、これをここに引用によって加える。哺乳動物における炎症の応答の複雑さに照らして、当業者は容易に認識するように、本発明の医薬組成物はＳＬＸを有する化合物と、他の細胞付着分子の機能を妨害することが知られている他の化合物とを混合してなることができる０例えば、付着分子のインテグリン族の構成員は感染点における白血球の管外遊走にある役割を演すると考えられる。セレクチンレセプターを包含する、細胞間付着レセプター、およびそれらの役割の免疫機能の概観については、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ＋Ｎａｔｕｒｅ　３４６　：　４２５−４３４（１９９０）を参照のこと、これをここに引用によって加える。さらに、本発明の医薬組成物を使用する首尾よい処置はまた、処置すべき状態の進展の状態により決定することができる。異なる付着分子は病気または状態の過程の間に種々の因子に対する応答において上下に調節することができるので、当業者は認識するように、異なる医薬組成物は異なる炎症性状態の処置のために要求されることがある。１つの態様において、医薬組成物のＳＬＸリガンドを使用して、普通の抗炎症性薬剤または他の薬剤を組織の損傷の特異的部位へ集中させることができる。セレクチン結合性オリゴ糖成分、例えば、ＳＬＸリガンドまたは擬ＳＬＸを使用して、薬物をセレクチンレセブター、例えば、脈管内皮細胞上のセレクチンレセプターへ集中させることによって、このような薬物は損傷部位におけるより高い濃度を達成することができる。普通の抗炎症性化学療法剤からの副作用は、より低い投与量、損傷部位への薬剤の局在化および／または供給前の薬剤の封入により実質的に軽減することができる。集中（ターゲツティング）成分、すなわち、ＳＬＸリガンドまたは所望のセレクチンに結合する擬ＳＬＸは化学療法剤に直接または間接的にカップリングすることができる。一般にこの分野において知られている手段により実施することができるカップリングは、リガンドがレセプターに結合する能力を実質的に阻害してはならないか、あるいは化学療法剤の活性を実質的に減少すべきではない０種々の化学療法剤をターゲツティングのためにカップリングすることができる０例えば、カップリングすることができる化学療法剤は、次のものを包含する二本発明のＳＬＸを有する化合物、免疫調節因子、血小板活性化因子（ＰＡＦ）アンタゴニスト、シクロオキシゲナーゼ阻害因子、リポキシゲナーゼ阻害因子、およびロイコトリエンアンタゴニスト、い（つかの好ましい成分は、シクロスポリンＡ１インドメタシン、ナプロキセン、ＦＫ−５０６、マイコフェノール酸などを包含する。同様に、酸化防止剤、例えば、スーパーオキサイドジムターゼは、ＳＬＸリガンドまたは擬ＳＬＸによりターゲツティングするとき、再潅流傷害の処置において有用である。同様に、抗癌剤はＳＬＸリガンドまたは擬ＳＬＸを化学療法剤にカップリングすることによってターゲツティングすることができる。カップリングすることができる因子の例は、ダウロマイシン、ドキソルビシン、ビンブラスチン、プレオマイシンなどを包含する。セレクチンレセブターのターゲツティングは、また、水溶液の中に集合体として存在する両親媒性勧賞または二重特性の分子（極性：非極性）を経て達成することができる０両親媒性物質は、非極性の脂質、極性脂質、単糖および三糖、スルファチド、リソレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸および塩類を包含する。これらの分子は、乳濁液および泡、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質の分散液および薄板状層として存在することができる。これらはここにおいて一般にリポソームと呼ぶ、これらの調製物において、供給すべき薬物は、リポソームの一部分として、ＳＬＸリガンドまたはセレクチンレセブターに結合する擬ＳＬＸと組み合わせて組み込まれる。こうして、所望の化学療法剤を充填したリポソームを所望の組織の損傷部位にセレクチンーＳＬＸリガンドの相互作用により向けることができる。リポソームが影響を受けた細胞の近傍に送られるとき、リポソームは選択した療法組成物を供給する。本発明のリポソームは標準的小胞形成性脂質から形成され、これらの脂質は一般に中性および負に帯電したリン脂質およびステロール、例えば、コレステロールを包含する。脂質の選択は、一般に、例えば、リポソームの大きさおよび血流の中のリポソームの安定性を考慮して決定される。典型的には、リポソームの中の主たる脂質成分はホスファチジルコリンである０種々の鎖長さおよび飽和度の種々のアシル鎖の基を有するホスファチジルコリンは入手可能であるか、あるいはよく知られた技術により分離または合成することができる。一般に、小さい飽和度のホスファチジルコリンは、濾過滅菌の目的で、とくにリポソームを約０．３ミクロン以下の大きさにしなくてはならないとき、いっそう容易に大きさが決められる。リポソームの大きさの決定および濾過滅菌のとき使用する方法を下に記載する。リン脂質のアシル鎖の組成はまた、血液中のリポソームの安定性に影響を与えることがある。１つの好ましいホスファチジルコリンは部分的に水素化された卵のホスファチジルコリンである。種々のターゲツティング因子（例えば、リガンド、レセプターおよびモノクローナル抗体）を使用するリポソームのターゲツティングはこの分野においてよく知られている。（参照、例えば、米国特許第４．９５７．７７３号および米国特許第４，６０３．０４４号、これら両者をここに引用によって加える）０種々の分子量の糖タンパク質およびグリコリピドをターゲツティング因子として使用することができる。典型的には、約３００，０００ダルトン以下、好ましくは約４０．０００〜約２５０．０００ダルトン、より好ましくは約５７，０００〜約１５０．０００ダルトンの分子量を有する糖タンパク質を使用する。約１０，０００ダルトン以下、好ましくは約６００〜約４，０００ダルトンの分子量のグリコリピドを使用する。ターゲツティング因子をリポソームにカップリングする標準的方法を使用することができる。これらの方法は、一般に、液体の成分、例えば、ターゲツティング因子の取り付けのために活性化することができるホスファチジルエタノールアミン、あるいは誘導体化された親油性化合物、例えば、脂質誘導体化プレオマイシンを、リポソームの中に組み込むことを包含する。抗体ターゲラテッドリポソームは、例えば、プロティンＡを組み込んだリポソームを使用して構成することができる（参照、Ｒｅｎｎｅｉｓｅｎら、、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６５　：１６３３７−１６３４２　（１９９０）およびＬｅｏｎｅｔｔｉら、、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ　ｌｌ５Ａ８７　：　２４４８−２４５１（１９９０）　、これら両者をここに引用によって加える）。ターゲツティングのメカニズムは、一般に、ターゲツティング因子がセレクチンレセブターとの相互作用に利用可能であるような態様で、ターゲツティング因子をリポソームの表面上で配置することを必要とする。リポソームは、典型的には、コネクタ一部分が膜の形成の時に膜の中にまず組み込まれるような方法で構成される。コネクタ一部分は、膜の中にしっかり埋め込まれかつ定着される親油性部分をもたなくてはならない、それは、また、リポソームの水性表面上で化学的に利用可能である親水性部分をもたなくてはならない、親水性部分は、後に添加されるターゲツティング因子と安定な化学結合を形成するために化学的に適当であるように、選択される。したがって、コネクター分子は、ターゲツティング因子と反応しかつ親水性反応性基をその正しい位置に、リポソームの表面から外に伸びた状態で、保持するために適当な親油性および親水性の両者の反応性基をもたなくてはならない、ある場合において、ターゲット因子をコネクター分子に直接取り付けることができるが、はとんどの場合において、化学架橋として作用する第３分子を使用して、こうして膜の中に存在するコネクター分子を小胞表面の中から外に、３次元的に、伸びたターゲット因子と連鎖させることがいっそう適当である。リポソームの電荷はリポソームを血液からクリアーするとき重要な決定因子であり、負に帯電したリポソームは網状内皮系によりいっそう急速に取り上げられ（Ｊｕｌｉａｎｏ＋　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏ　ｈ　ｓ、ｌ１ｅｓ、ｃｏｍｍ。６３　：　６５Ｈ１９７５））、こうして血流の中でより短い半減期を有する。延長した循環半減期をもつリポソームは、典型的には、治療および診断の使用に望ましい。血流の中で８，１２または２４時間まで維持することができるリポソームは、本発明のセレクチンーリガンド阻害因子の持続した解放を提供するか、あるいは網状内皮系により除去される前に、阻害因子（これは標識して生体内の診断の像映を提供することができる）を所望の部位にターゲツティングすることを促進することができる。典型的には、約５〜１５モル％の負に帯電したリン脂質、例えば、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリンまたはホスファチジルイノシトールを有するリポソームを調製する。添加した負に帯電したリン脂質、例えば、ホスファチジルグリセロールは自発的リポソームの凝集を防止し、こうして不所望のリポソームの凝集の形成の危険を最小することができる。膜剛性化因子、例えば、スピンゴミエリンまたは飽和中性リン脂質（少なくとも約５０モル％の濃度において）および５〜１５モル％のモノシアリルガングリオシドは、一般に米国特許第４．８３７．０２８号（これをここに引用によって加える）に記載されているように、血流の中のリポソーム調製物の循環を増加することができる。さらに、リポソームの懸濁液は、貯蔵のときの遊離基および脂質の過酸化による損傷に対してリポソームおよび薬物を保護する脂質保護因子を含むことができる。親油性遊離基のクエンチャ−１例え　□ば、アルファトコフェロールおよび水溶性鉄特異的キレート剤、例えば、フェリオキアニンが好ましい。例えば、５ｚｏｋａ　ら、Ａｎｎ、Ｒｅｖ、Ｂｉｏ　ｈ　ｓ、Ｂｉｏｅｎ　、　９　：　４６７（１９８０）、米国特許第４．２３５．８７１号、米国特許第４，５０１，７２８号および米国特許第４，８３７，０２８号（これらをここに引用によって加える）に記載されているように、リポソームを調製する種々の方法が利用可能である。１つの方法は、不均一な大きさの多層小胞を生成する。この方法においては、小胞形成脂質を適当な有機溶媒または溶媒系の中に溶解し、そして真空下にまたは不活性気体中で乾燥して、薄い脂質のフィルムを形成する。必要に応じて、このフィルムを適当な溶媒、例えば、第３ブタノールの中に溶解し、次いで凍結乾燥して、より均質な液体混合物を形成し、これはいっそう容易に水和する粉末様形態である。このフィルムをターゲラテッド薬物およびターゲツティング成分の水溶液でカバーしそして、典型的には１５〜５０分間撹拌しながら、水和させる。生ずる多層状小胞の大きさの分布は、より激しいセレクチンレセプターの条件下に脂質を水和するか、あるいは可溶化洗浄剤を添加することによって、より小さい大きさにシフトさせることができる。水和媒体は、最終のリポソーム懸濁液の中の内部の体積において所望の濃度で、ターゲラテッド薬物を含有する。典型的には、薬物溶液は１０〜１００■ｇ／ｍｌを緩衝化生理的塩類溶液の中に含有する。ターゲツティング成分Ｘ分子またはセレクチンと結合する擬ＳＬＸの濃度は、一般に、約０．１〜２０ｍｇ／ｍｌである。リポソームの調製後、リポソームの大きさを規制して、所望の大きさの範囲およびリポソームの大きさの比較的狭い分布を達成することができる。１つの好ましい大きさの範囲は約０．２〜０．４ミクロンであり、これは普通のフィルター、典型的には０．２２ミクロンのフィルターを通して濾過することによって、リポソームの懸濁液の滅菌を可能とする。フィルターの滅菌法は、リポソームが約０．２〜０．４ミクロンに低下する場合、高い生産量の基準で実施することができる。リポソームを所望の大きさにサイジングするいくつかの技術を利用可能である。１つのサイジング法は米国特許第４．７３７．３２３号（これをここに引用によって加える）に記載されている。浴またはプローブ趙音波処理によるリポソーム懸濁液の超音波処理は、約０．０５ミクロンより小さいサイズの小さい単一層の小胞への漸進的大きさの減少をもたらす、均質化は、大きいリポソームをより小さいものに断片化する剪断エネルギーに頌る他の方法である。典型的な均質化手順において、多層小胞を標準の乳濁液ホモジナイザーに通して再循環させて、選択した大きさ、典型的には約０．１〜約０．５ミクロンが観測されるようにする０両者の方法において、粒子サイズの分布は普通のレーザービームの粒子サイズの弁別によりモニターすることができる。小孔を存するポリカーボネートの膜または非対称のセラミック膜を通すリポソームの押出しもまた、リポソームの大きさを比較的よく定められた大きさの分布に減少する有効な方法である。典型的には、懸濁液を、所望のリポソームの大きさ分布が達成さるまで、膜に１または２回以上を通して循環させる。リポソームは連続的により小さい孔の膜を通して押出して、リポソームの大きさを徐々に制限する。最も効率よい封入によってさえ、初期のリポソーム懸濁液は遊離の（封入されていない）形態の５０％またはそれより多（の薬物およびターゲツティング因子を含有することがある。したがって、遊離の薬物またはターゲツティング因子を最終の注射可能な懸濁液から除去することが重要である。リポソーム懸濁液から捕捉されない化合物を除去するためにいくつかの方法を利用することができる。１つの方法においては、懸濁液の中のリポソームを高速遠心により沈澱させて、遊離の化合物および非常に小さいリポソームを上澄み液の中に残す、他の方法は、懸濁液を限外濾過により濃縮し、次いで濃縮されたリポソームを薬物不合置換媒体の中に再懸濁させることを包含する。あるいは、ゲル濾過を使用して大きいリポソーム粒子を溶体分子から分離することができる。遊離の薬物および／またはターゲツティング因子を除去する処理の後、リポソームの懸濁液を静脈内投与のために所望の濃度にする。これは、リポソームが：ａｖＭされている場合、例えば、遠心または限外濾過によるか、あるいは、薬物の除去工程が合計の懸濁液の体積を増加する場合、懸濁液を濃縮することによって、注射媒体の中にリポソームを再懸濁させることができる０次いで、懸濁液を前述したように濾過により滅菌する。リポソーム−リガンドの調製物は非経口的または局所的に投与することができ、ここで投与量は、例えば、投与の方法、供給すべき薬物、処置する特定の病気などに従い変化する。ＳＬＸリガント、および／またはセレクチンレセブターの結合する擬ＳＬＸを含んでなる医薬組成物について、化合物の投与量は、例えば、特定の化合物、投与方法、処置する特定の病気およびその程度、患者の全体の健康および状態、および処方する医師に従い変化するであろう０例えば、再潅流傷害の処置のために、投与量は７０ｋｇの患者について約５０μｇ〜２．０００ｍｇ７日の範囲である。理想的には、治療の投与は心筋梗塞または他の損傷後できるだけ早（開始すべきである。医薬組成物は、非経口的、局所的、経口的または局所的投与のために、例えば、エアゾールによりまたは経皮的に、予防的および／または治療学的処置のために意図される。医薬組成物は、投与方法に依存して、種々の単位投与形態で投与することができる。例えば、経口的投与に適当な単位投与形態は、粉末、錠剤、ピル、カプセル剤および糖剤を包含する。好ましくは、医薬組成物は静脈内に投与する。こうして、本発明は、医薬として許容されうる担体、好ましくは水性担体の中に溶解または懸濁した化合物の液からなる、静脈内投与のための組成物を提供する０種々の水性担体、例えば、水、緩衝化水、０．４％の生理的食塩水などを使用することができる。これらの組成物は、普通の、よく知られた滅菌技術により滅菌するか、あるいは濾過滅菌することができる。生ずる水溶液はそのまま包装するか、あるいは凍結乾燥することができ、凍結乾燥した調製物は投与の前に無菌の水溶液と組み合わせる。＆Ｉｌ成物は、近似の生理学的状態に要求されるように、医薬として許容される補助剤、例えば、ｐＨｌｉ節剤および緩衝剤、張度ｇｉｒｔ剤、湿潤剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレート、テリエタノールアミンオレエートなどを含有することができる。医薬製剤における効能を増加するために、他のＳＬＸリガンドまたは擬ｓＬＸと組み合わせて「カクテル」を形成することができる、ＳＬＸリガンドまたは擬ＳＬＸの濃度は、広く、例えば、約０．０５％より低い濃度から、通常少なくとも１重量％から１０〜３０重量％程度に高くまで変化することができ、そして主として流体の体積、粘度などにより選択した特定のモードに従い選択されるであろう、カクテルはまた、セレクチンレセブターに結合するモノクローナル抗体、例えば、ＥＬＡＭ−１またはＧＭＰ−１４０に対するモノクローナル抗体を、ＳＬＸリガンド、擬リガンドまたはリガンドに対するモノクローナル抗体と組み合わせて含んで、リガンド−レセプターの相互作用を効率よく阻害することができる。前述したように、カクテルの成分はリポソーム調製物を経て供給することができる。こうして、静脈内注入のための典型的な製剤学的組成物は、２５０■ｌの無菌のリンゲル溶液、および２５■ｇの化合物を含有するように構成することができる。非経口的に投与可能な化合物を調製する実際の方法は当業者に知られているか、あるいは明らかでありそして、例えば−Ｒｅｓｉｎ　ｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｎａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｅｉｎｃｅｓ、第１７版、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ５ｐａｎｙ、ペンシルベニア州イーストン（１９８５）　（これをここに引用によって加える）により詳細に記載されている。固体の組成物について、普通の無毒の固体の担体を使用することができ、これらは、例えば、製剤学的等級のマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどを包含する。経口的投与のために、製剤学的に許容されうる無毒組成物は、正常使用される賦形剤、例えば、前に列挙した任意のもの、および一般に１０〜９５％の活性成分、すなわち、本発明の１種または２種以上のＳＬＸリガンドまたは１ｉｉｓＬＸ、好ましくは２０％を組み込むことによってドメインされる（参照、勤コ四山シ１゜動刃１）・エアゾールの投与のために、化合物は好ましくは微粉砕した形態で界面活性剤および噴射剤と一緒に供給される。ＳＬＸオリゴ糖のリガンドまたは擬リガンドの典型的な百分率は０．０５〜３０重量％、好ましくは１〜１０重量％である。界面活性剤は、もちろん、無毒であり好ましくは噴射剤の中に可溶性である。このような物質の代表的なものは、６〜２２個の炭素原子を含有する脂肪酸、例えば、カプロン酸、オクタン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リルン酸、オレステアリン酸およびオレイン酸と脂肪族多価アルコールまたはその環状無水物、例えば、エチレングリコール、グリセロール、エリスリトール、アラビトール、マンニトール、ソルビトール、ソルビトールから誘導されたヘキシトール無水物、およびこれらのエステルのポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレン誘導体とのエステルまたは部分的エステルである。混合エステル、例えば、混合または自然のグリセリドを使用することができる。界面活性剤は組成物の０．１〜２０重量％、好ましくは０．２５〜５重量％を構成する０組成物の残部は通常噴射剤である。液化した噴射剤は典型的には周囲条件において気体であり、そして圧力下に凝縮される。適当な液化した噴射剤の例は、５個まで炭素を含有する低級アルカン、例えば、ブタンおよびプロパン、好ましくはフッ化またはフッ化塩化されたアルカンである。上の混合物を、また、使用できる。エアゾールを調製するとき、適当な弁を装備した容器に、微粉砕した化合物および界面活性剤を含有する、適当な噴射剤を充填する。こうして成分は、弁の作用により解放されるまで、高圧下に維持される。化合物を含有する組成物は、予防的および／または治療的処置のために投与される。治療的応用において、組成物は、前述したように、病気に既に悩まされる患者に、病気およびその合併症の症状を治癒するか、あるいは少なくとも部分的に阻止するために十分な量で投与される。これを達成するために適切な量は「治療的有効投与量」として定義される。この使用のために有効な量は、病気のひどさおよび患者の体重および全体的状態に依存するが、一般に７０ｋｇの患者について約０．５ｍｇ〜約２．０００ｍｇのＳＬＸオリゴ糖または［ＳＬＸ／日の範囲であり、約５■ｇ〜約２００ｍｇの化合物７日の投与量を普通に使用する。予防の適用において、本発明の化合物を含有する組成物は特定の病気に感受性であるか、あるいはそうでなければその病気の危険がある患者に投与される。このような量は「予防的有効量」であると定義される。この使用において、正確な量は再び健康の患者の状態および体重に依存するが、一般に約０．５ｍｇ〜約１，０００ｍｇ／７０ｋｇの患者、普通に約５ｍｇ〜約２００ｍｇ／　７０ｋｇの体重の範囲である。組成物の単一または多数の投与を実施することができ、投与のレベルおよびパータンは処置の医者により選択される。いずれの場合においても、医薬配合物は患者を有効に処置するために十分な量のＳＬＸオリゴ糖または擬ＳＬＸを提供すべきである。本発明の化合物はまた、診断試薬として使用することができる。例えば、標識した化合物を使用して、炎症を有することが疑われる患者において炎症または腫瘍の転移の区域を捜し出すことができる。この使用のために、化合物は１２５３１４０またはトリチウムで標識することができる。次の実施例によって、本発明をさらに説明する。これらの実施例は本発明を限定しない。ス皇■土ゴルジ　）゛のα１３−フコシルトランスフェーゼのＬＥＣＩｌ、）（Ｌ−６０，ＨＴ−２９、ある積の腺癌（と（に、ｃｏｌｏ２０５細胞）および多形核白血球（ＰＭＮ、好中球）は、非常に特異的なフコシルトランスフェラーゼＩを含有し、これはフコースをＧＤＰ−フコースからシアル化された基質ＮｅｕＡｃα２゜３Ｇａｌβ１，４ＧｌｃＮＡｃまたはＮｅｕＧｃｃｘ２．３Ｇａ１β１．４Ｃ，１ｃＮＡｃに転移させることができる。この分野においてよく知られているように、フコースはゴルジ装置の内腔の中のオリゴｗ！鎖に特異的フコシルトランスフェラーゼを経て転移され、これは５ｃｈａｃｔｅｒおよびＲｏｓｅｍａｎ＋　’Ｔｈｅ　Ｂｔｏｃｈｅ＋５ｉｓｔｒｙｏｆ　Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｎｄ　Ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓ」＋　Ｈ，Ｌｅｎｎａｒｚ編、ＰｌｅｎｕｗＰｒｅｓｓ、ニューヨーク、ｐｐ、８５ −１６０（１９８０）　（これをここに引用によって加える）に総説されている。フコシルトランスフェラーゼの細胞下の局在位置はゴルジ装置の中であるので、これらの酵素を分離する最初の工程はこの新規なかつ特異的α１，３−フコシルトランスフェラーゼを発現するゴルジ装置の分画を分離することである。ゴルジ装！由来の小胞分画を、Ｂａｔｃｈら、Ｃｅ１ｌ　３９　：　４０５　（１９８４）（これをここに引用によって加える）に記載されている手順の変法により調製する。ＬＥＣＩ　１．ＨＬ−６０，ＨＴ−２９，ＰＭＮ。ｃｏｌｏ２０５またはα１．　３−フコシルトランスフェラーゼＩを含有する他の細胞系を、はぼ５Ｘ１０’細胞／■１の密度に懸濁液中で増殖させる。細胞を懸濁培養物から２．ＯＯＯＸｇにおける遠心により収得する。１２リツトルの懸濁液（５Ｘ１０”）から生ずる沈澱物を、トリス−Ｃ１（１０ミリモル）　、ｐｉ　’ｙ、ｏ、加熱不活性化した胎児子ウシ血清（７％）およびアプロチニン（１００ｔ１ｇ／ｍｌ、　Ｓｉｇｍａ　ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ、、ミゾリー州セントルイス）を含有する３体積（包装した細胞体積）の水冷した０、２５Ｍスクロース（Ｗ／Ｖ）の中に再懸濁させる。細胞を緊密に適合するウニトン（Ｗｈｅａｔｏｎ）ガラスのダウンス（ｄｏｕｎｃｅ）ホモジナイザーでＡ乳鉢を使用して破砕する（はぼ６０ストローク）、ホモジネートを机上臨床用遠心機で５００Ｘｇにおいて５分間遠心する。遠心機の中の溶液の上部に残留する脂質および不溶性物質を廃棄する。（もった上澄み液をきれいな管に移し、次いで上澄み液のスクロース濃度をトリス−ＣＩ　（２０ｍＭ）、ｐＨ７，０の中の４０％（Ｗ／Ｖ）のスクロースに反射計の助けにより調節する。この懸濁液の５■ｌを超遠心管に移し、そして順次に２．５■ｌのトリス−ＣＩ（１０ｍＭ、ｐＨ７，０）の中の３５％（ｗ　／　ｖ　）のスクロースおよび２．０■ｌの１０５Ｍのトリス−ＣＩ緩衝液の中の３９％（ｗ／ｖ　）のスクロースで層状にする。この勾配を５Ｗ−４１０−ター（Ｂｅｃｋｍａｎ）中で５℃において１１０．０００Ｘ　ｇで１時間遠心する。ゴルジ装置に富んだ小胞は２９％から３５％のスクロースの内部相から集められる。他の細胞下の分画は勾配の中の他の内部相において見いだされる；例えば、小胞はゴルジ誘導小胞などの下の粗いおよび滑らかな内質の小網のバンドから誘導される。２９％〜３５％の内相から除去されたバンドは、シアリルトランスフェラーゼ活性の存在および量について分析する。酵素シアリルトランスフェラーゼはゴルジ装置誘導小胞内に見いだされることのみが知られており、そして当業者により２９〜３５％の内相から集められた結合の真実性を評価するためにマーカーとして使用されている。シアリルトランスフェラーゼのアッセイは、Ｂｒｊ　ｌｅｓら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２５２　：　１１０７　（１９７７）に記載されているように、アクセプターとしてアシアロフェツインを使用して実施する。ＬＥＣ細胞からのすぐれたゴルジ装置誘導小胞の調製物は、３．０ナノモル／ｍｇタンパク質／時間の比活性を有する。次いで、生ずるゴルジ装置の調製物を、前述の酵素の合成において使用するα１，３−フコシルトランスフェラーゼＩ源として使用する。１庫±１ＳＬＸ　る　によ　ｌの・　の°１ＥＬＡＭ−１を発現する活性化された内皮細胞に結合するＬＥＣ１１細胞（ＳＬＸを発現する）の能力を、構造Ｌｅ″すなわちＳＬＸの非シアル化形態を発現する、ＣＨＯ細胞および他のグリコジル化変異体ＬＥＣｌ　２の能力と比較した。 ■料ゼラチンコーティングした４８ウエルのアッセイプレート上で増殖させた継代培養５のヒト調静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）（Ｃ１ｏ　ｎ　ｅｔｉｃｓ）を、内皮細胞源として使用した。細胞をＩＬ−１β（Ｇｅｎｚｙｍｅ）で３０μｇ／■ｌにおいて刺激した。細胞は正確に４時間刺激した。アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシボン（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）（＾ＴＣＣＮｏ、　ＣＣＬ２４０）を、対照のりガントを有する細胞の源として使用した。これらは、ペニシリン（１００単（立／ｍｌ）／ストレプトマイシン（１００μｇ　／　５ｏ１）　（ＩｒｖｉｎＳｃｉｅｎｔｉｆｃ）、Ｌ−グルタミン（２ｍｌ、）　（Ｉｒｖｉｎ　５ｃｉｅｎＬｉｆｃ）および１０％の胎児ウシ血清（Ｈａｚｌｅｔｏｎ）を含有するＲＰＭ１１６４０（以後ＣＲＰＭＩと呼ぶ）の中の塊状培養から収穫した。ＬＥＣｌｌ、ＬＥＣ１２およびＣＨＯ−Ｋ　１は、Ｐ、５ｔａｎｌｅｙ博士により提供された。それらは、リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチド（Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン（１００単位／ｍｌ）／ストレプトマイシン（１００単位／ｍ１）（ｌｒｖｉｎ　５ｃｔｅｎｔｉｆｃ）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）（Ｉｒｖｉｎ　５ｃｉｅｎｔｉｆｃ）１０％の胎児ウシ血清（ＨａｚｌｅＬｏｎ）を含有するアルファＭＥＭの中の懸濁培養において増殖させた。王！１、ＬＥＣｌｌ、ＬＥＣＩ２およびＣＨＯ−Ｋｌを収得し、そしてＣＲＰＭＩ中で洗浄した。生存細胞の計数をトリバンブルーを使用して行った。冬型の３Ｘ１０”細胞を１０ｍ１の試験管内で沈澱させ、そして３００μＩの”　Ｃｒ　（４５０ｕ　Ｃｉ）　（Ｎｅ−Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）を各沈澱物に添加した。試験管をおだやかに撹拌しなから３７°Ｃにおいて１時間インキュベーションした。２、標識した細胞を培地中で３×洗浄し、そして２　ＸＩＯ’　／４００μ＋　（６■ｌ）に再懸濁させた０次いで、試験管を４℃の水浴の中に入れた。３、ＩＬ−１βと４時間インキュベージタンした後、活性化されたＨＵＶＥＣを含有するアッセイプレートをインキュベーターから取り出し、そしてこのプレートを４℃の水浴の中に入れることによって１５分間冷却した。４、両者の試料の中の温度が平衡になったとき、培地を測定ウェルからパスツールピペットで１度に数ウェルで取り出した。５、標識した細胞をウェルに２Ｘ１０’細胞／ウエルに等しい４００μｌの体積で添加した。各細胞！！！濁液の３つの４００μｌのアリコートをガラス管の中にインプットＣＰＭの決定のために入れた。６、プレートを氷水浴の中で３０分間インキュベーションした。７、結合しない細胞をアッセイプレートのウェルから、パスツールピペットを使用する系統的再懸濁および引き続＜　０．７■ｌの培地の添加および除去により除去した。８、培地のすべてをウェルから除去し、そして０．１２５モルのトリス、２％のＳＤＳおよび１０％のグリセリンの溶液を添加した（０．３ｍ１）　。プレートを３０分間放置し、次いで０．５−１のｄＨ露０を各ウェルに添加した。９、各ウェルにおける流体をＰ１００Ｏビペフトで再！！濁させ、そしてガラス試験管に移した。ＰｌｏｏＯの先端を試験管の中に入れた。１０、入力ＣＰＭ試料を含有するものを包含する試験管をガンマカウンターでカウントした。１１、各ウェルにおいて結合したＣＰＭを各試料についての入力ＣＰＭで割って、結合した％を決定した。３回の反復アッセイの点の平均および標準偏差をプロットした。この実験において得られた結果を表１に示し、これが示すように、ＳＬＸを発現する細胞はＥＬＡＭ−１を発現する活性化された脈管内皮細胞に有効に結合する能力を有する。これらのデータが示すように、高いレベルの独特な炭水化物のＳＬＸを発現するＬＥＣＩＩ細胞は例外的によく■Ｌ−１β活性化ＨＵＶＥＣに結合するが、有意の量のこの炭水化物を欠如するＬＥＣ１２およびＣＨＯ−に１は活性化されたＨＵＶＥＣの劣った結合因子である。この結論は、さらに、この結合が、４°Ｃにおいて起こるという、ＥＬＡＭ−１仲介結合の特徴を示す観察により支持される。叉施班１ＳＬＸに・して　・なモノクロ−ルによる　日の・　のＥＬＡＭ−１についての好中球上のリガンドが、末端の糖がＮｅｕＡｃ＋ｒ２，３Ｇａ１β１，４　（ｃｒｌ、３Ｆｕｃ）ＧｌｃＮＡｃ（ＳＬＸ）である、オリゴ糖を含有することを証明する、２＆１１の実験を記載する。これらの実験は、ＩＬ−１β刺激されたＨＵＶＥＣへのＨＬ−６０細胞のＥＬＡＭ−１仲介付着をブロックする、シアル化ＬｅＸおよび非シアル化形１１Ｌｅ” に対して特異的なモノクローナル抗体の能力をアッセイすることによって実施する。Ａ、モノクローナル　のパネル１柱本発明の実験のために開始した培養物からの継代培養３のＨＵＶＥＣを前述したように使用した。　２ＲＡの３回反復試験のウェルを対照として放置した。４つの３回反復試験物をＩＬ−１β（Ｃ；ｅｎｚｙｍｅ）で１０μｇ／閣ｌにおいておよび２０ｕｇ／ｍｌにおいて４回刺激した。アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシランから入手したＨＬ−６０細胞をリガンドを有する細胞源として使用した。これらは、ペニシリン（１００単位／■ｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／５ｌ）（Ｉｒｖｉｎ　５ｃｉｅｎｔｉｆｃ）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）　（Ｉｒｖｉｎ　５ｃｉｅｎｔｉｆｃ）および１０％の胎児ウシ血清（Ｈａｚｌｅｔｏｎ）を含有するＲＰＭ１１６４０　（以後ｃＲＰＭＩと呼ぶ）の中の塊状培養から収得した。モノクローナル抗体の調製物は５ＮＨ３（ＩｇＭ）を約２０μｇ／ｍｌでおよびＳＨＩ　Ｃ１ｇＧ３）を約１０μｇ７ｍｌで含んでいた。５ＮＨ３はＳＬＸに対して特異的であるが、ＳＨＩは非シアル化構造を認識する。土星１、ＨＬ−６０を収得し、そしてＣＲＰＭＩ中で洗浄した。生存細胞の計数をトリパンブルーを使用して行った。３Ｘ１０’個の細胞を２Ｘ１０ｍｌの試験管内に入れ、そして３００μＩの”Ｃｒ　（４５０ＩＩＣｉ）（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）を各試験管に添加した。試験管をおだやかに撹拌しながら３７℃において１時間インキュベーションした。２、抗体はハイブリドーマの培養上澄み液として供給し、そして０．０１％のＮ　ａ　Ｎ　ｓおよび０．０５％のチメロサルを含有した。これらの保存剤を除去するために、５■ｌの各抗体を３　Ｘ　５００ｍ１の旧式の組織培養培地の各々に対して７２時間かけて透析した。３、抗体を透析から集め、そして３．５１の各々を１ｏｓｔの試験管に入れた。残部をＨＬ−６０の結合についてのＥＬＩＳＡアッセイにおいて使用するために保持した。７■ｌのＲＰＭｌ１６．５％のＦｅ２を第４の試験管に対照として使用するために入れた。４、！［ＷｉシたＨＬ−６０をＣＲＰＭＩ中中で３回洗浄し、そして１本の管の中にプールした０次いで、それらを遠心し、そして培地の中で１■ｌに再懸濁させた。５、　２００ｔｔｌの細胞Ｍｉｆｉ液を抗体を含有する試験管の各々に添加し、そして４００μｌを対照の管に添加した。管をおだやかに撹拌しながら３７℃において２０分間インキュベーションした。６、！Ｉｆ激したＨＵＶＥＣのアッセイプレートをインキュベーターから取り出し、そして培地をウェルからパスツールピペットで、１度に数ウェルで、取り出した。７、　０．５ｍｌの細胞！！！濁液を３回反復試験のウェルの各々に添加した。対照の細胞を刺激しないおよび刺激したＨＵＶＥＣ上で両者のＩＬ−１℃濃度においてプレートした。試験細胞を刺激したウェルにのみ添加した。８、各細胞の０．５１のアリコートをガラス管に添加して、インプットＣＰＭを決定するために使用した。９、アッセイのプレートをインキュベーター（５％のＣＯ□、３７℃）へ３０分間戻した。１０、各細胞懸濁液のアリコートを等しい体積のトリパンブルーと混合し、そして細胞を顕微鏡で生存について検査した。結果は次の通りであった：対照＝９８％、５Ｈ１＝９２％、および５Ｈ３＝９９％。１１、結合しないｌ！Ｉｌ胞をアッセイプレートのウェルからパスツールピペットを使用する系統的再懸濁および引き続（０，７園ｌの培地の添加および除去により除去した。１２、培地のすべてをウェルから除去し、そして０．１２５Ｍトリス、２％のＳＤＳ　（Ｂ　ｉ　ｏ−Ｒａ　ｄ）および１０％のグリセリン（Ｆｉｓｈｅｒ）の溶液を添加した（０．３ｍ１）　、プレートを３０分間放置し、次いで０．６ｍｌのｄＨｔｏを各ウェルに添加した。１３、各ウェルにおける流体をＰ１００Ｏピペットで再懸濁させ、そしてガラス試験管に移した。Ｐｌｏｏｏの先端を試験管の中に入れた。１４、入力カウント７分（ＣＰＭ）試料を含有するものを包含する試験管をガンマカウンターでカウントした。１５、各ウェルにおいて結合したＣＰＭを各試料についてのインプットＣＰＭで割って、結合した％を決定した。３回の反復アッセイの点の平均および標準偏差をプロットした。反復実験は、高ＩＬ−１βを使用して内皮細胞を誘発した実験において最良であると判定された。結果は、モノクローナル抗体５ＮＨ３がＥＬＡＭ−ルセプターを介してのＩＬ− １β刺激ＨＵＶＥＣへのＨＬ−６０細胞の結合をブロックすることを示した。ＳＬｘ決定基と結合しない対照の抗体ＳＨＩは、ＥＬＡＭ−１へのＨＬ−６０細胞の結合をブロックしなかった。これが示唆するように、リガンドの中の末端のシアル酸はＥＬＡＭ−１への結合に必要である。Ｂ、モノクローナル　のパネル２材料ゼラチンでコーティングした４８ウエルのアッセイプレート（Ｃ。５ｔａｒ）上で増殖させた継代培養３のＨＵＶＥＣを内皮細胞源として使用した。プレートを前述したように調製した。２組の３回反復試験のウェルを対照として刺激しないで放置した。各プレート上の７つの３回反復試験物を０．５ｍ１（７）　Ｂ　Ｇ　Ｍ　−Ｍ　Ｖ中（ＩＤＩＬ−ｉで３０１１ｇ／ａｌにおいて刺激した。ｍ胞は正確に４時間刺激した。ＨＬ−６０細胞（ＡＴＣＣ）をリガンドを有する細胞源として使用した。これらをＣＲＰＭＩの中の塊状培養から収得した。モノクローナル抗体を含有する新鮮なハイプリドーマの上澄み液は次のものを含んでいた：ＦＨ６（ＩｇＭ）より低い親和性のｍＡｂ；ＳＮＨ−３（ＩｇＭ）（２０μ　ｇ／ｍｌ）　；　５ＮＨ−１（１ｇＧ３）（１０μ　ｓ／ｍｌ）　；ＦＨ−２（ＩｇＭ）Ｌｅ”反応性ｍＡｂ　：　５Ｈ−４（Ｉ　ｇＧｓ　）高い親和性の抗体；およびＣ３ＬＥＸ −１（ＩｇＭ）（Ｐ、Ｔｅｒａｓａｋｉ博士により提供された、ＵＣＬＡ、精製された免疫グロブリンとして、２．３Ｂｇ／ｍｌ、このアッセイにおいて使用するために５％のＦＣＳを含有するダルベツコ変更イーグル培地（ＤＭＥＭ）の中で９℃ｇ／■１に希釈した）、抗体の比活性は次の通りであった：ＰＨ６，５ＮＨ−４，５ＮＨ３およびＣ５ＬＥＸ−１はＳＬＸに対して特異的であった；ＦＨ２およびＳＨＩは非シアル化しｅｘに対して特異的であった。１里１、ＨＬ−６０を収得し、そしてＣＲＰＭＩ中で洗浄した。生存細胞の計数をトリパンブルーを使用して行った。３Ｘ１０’細胞を２Ｘ１０ｓ＋１の試験管内に入れ、そして３００Ｉｌｌの”　Ｃｒ　（４５０ｔｔ　Ｃｉ）　（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）を各試験管に添加した。試験管をおだやかに撹拌しながら３７℃において１時間インキュベージコンした。２、標識したＨＬ−６０を５％のＦＣＳを含有するＤＭＥＭ　（以後ｃＤＭＥＭと呼ぶ）の中で３回洗浄し、そして１本の管の中にプールした０次いで、それらを遠心し、そして同一培地の中で４Ｘ１０’細胞／１厘１に再懸濁させた。３、　３．２謹ｌの各モノクローナル抗体の培養上澄み液、および３．２ｍｌの精製したＣ３ＬＥＸ−１（２９μｇ）を別々の試験管に添加した；対照の試験管には６．４ｍｌの培地を添加した。４、　２００μＩの細胞懸濁液（約８Ｘ１０’細胞に等しい）をモノクローナル抗体を含有する試験管に添加し、そして４００μｌを対照の管に添加した。管をおだやかに撹拌しながら３７℃において２０分間インキュベーションした。５、刺激したＨＵＶＥＣのアッセイプレートをインキュベーターから取り出し、そしてウェルをｃＤＭＥＭで１回洗浄し、そして培地をウェルからパスツールピペットで、１度に数ウェルで、取り出した。６、　０．４ｍｌの細胞懸濁液を２つのプレートの１つの各ウェルに添加した。対照の細胞を刺激しないおよび刺激したＨＵＶＥＣ上で両者のＩＬ−１℃濃度においてプレートした。抗体処理した細胞を刺激したウェルにのみ添加した。７、各細胞懸濁液の０．４ｍｌのアリコートをガラス管に添加して、入力ＣＰＭを決定するために使用した。８、アッセイプレートを３７℃において３０分間インキュベーションした。９、各細胞懸濁液の残部およびアッセイプレートを水浴の中にいれて２０分間冷却した。１０、細胞懸濁液を上の３７℃のプレートについてのように冷却したプレート上でプレートした。このプレートを４０℃において３０分間インキエベーシゴンした。このアッセイの残りの工程は上の節Ａの工程１１〜１５に記載するように実施したが、ただし工程１２において、プレートを３０分でなく１５分間放置した。第２Ａ図に示す結果が示すように、すべてＳＬＸに対して特異的であるモノクローナル抗体５ＮＨ−３，ＦＨ６，５ＮＨ−４およびＣ３ＬＥＸ−１は、３７℃においてインキュベージコンしたとき、ＥＬＡＭ−１レーｔ！１ターを介り、て（７）ＩＬ−１β刺激したＨＵＶＥＣへのＨＬ−６０細胞の結合を有意にブロックした＠　Ｌ　ｅ　”に対して特異的であるモノクローナル抗体（ＦＨ２および５ＨＩ）は有効な阻害因子ではない、こうして、ＥＬＡＭ−１のためのりガントは細胞表面の糖タンパク質またはグリコリピドにおいて見いだされるシアル化Ｌｅ ”抗原または同様な構造体を含有する。４℃においてインキュベージコンするとき（第２Ｂ図）、抗体ＦＨ６および５ＮＨ−３（両者はＩｇＭ）は結合を増強した。これらの試験において、ウェルの中のＨＬ−６０細胞の有意の凝集が存在するように思われ、これはこの観察を説明することができる。Ｃ，モノクロ−ル　はＥＬＡＭ−１る　へのＬＥＣｌ　の・　プロ・り　るこの組の実験において、ＩＬ−１β刺激ＨＵＶＥＣへのＬＥＣ１１細胞（これはＳＬＸを発現する）およびＬＥＣｌ　２細胞（これはＬｅ”を発現する）のＥＬＡＭ−１仲介付着をブロックする、ＳＬＸおよびシアル化されてない形態Ｌｅｌ ′に対して特異的なモノクローナル抗体の能力。且料継代培養４のＨＵＶＥＣは内皮細胞源として働いた。血小板を前述したように調製した。２組の３回反復試験物ウェルを対照として放置した。各プレート上の７つの３回反復試験物を０．５ｓ＋１の体積のＢＧＭ−ＭＶの中でＩＬ−１βで３０μｇ／ｍＩにて刺激した。細胞を正確に４時間刺激した。一般に５ｔａｎｌｅｙら、Ｊ、Ｂｔｏｌ、Ｃｈｅｓ、　２６３　：１１３７４　（１９８８）に記載されている、ＬＥＣＩＩおよびＬＥＣ１２細胞はＰ、５ｔａｎｌｅｙ博士により提供された。それらは、リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチド（Ｇｂｃｏ）、ペニシリン（１００単位／ｍｌ）／ストレプトマイシン（１００単位／　ｓ＋１）　（ＩｒｖｉｎｅＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）　、Ｌ−グルタミン（２ｓＭ）　（Ｉｒｖｉｎｅ　５ｃｉｅｎｔｉｆ　ｉｃ）および１０％のＦＢＳ　（Ｈａ　ｚ　ｅ　Ｉ　ｔ　ｏｎ）を含有する完全アルフｙ　Ｍ　Ｅ　Ｍの中で懸濁培養で増殖させた。これらの実験において使用したモノクローナル抗体は、上の節Ｂに記載されている。それらは次のものを包含する：ＦＨ６，５ＮＨ−３，５Ｈ−１．ＦＨ−２，５ＮＨ−４およびＣ３ＬＥＸ−１゜王！１、ＬＥＣｌｌおよびＬＥＣ１２細胞を収得し、そしてＣＲＰＭ■の中で洗浄した。生存細胞の計数をトリパンブルーを使用して行った。３Ｘ１０”細胞を２Ｘ１０ｍｌの試験管内に入れ、そして３００μｍの”　Ｃｒ　（４５０ｕ　Ｃｉ）　（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）を各試験管に添加した。試験管をおだやかに撹拌しなから３７°Ｃにおいて１時間インキエベーシテンした。２、放射線標識した細胞をｃＤＭＥＭの中で３回洗浄し、そして１本の管の中にプールした０次いで、それらを遠心し、そして同一培地の中で４Ｘ１０”細胞／１１に再懸濁させた。３、　１．６ｍｌの各モノクローナル抗体の培養上澄み液、および１．６１の精製したＣ３ＬＥＸ−１（１５μｇ）を別々の試験管に添加した；対照の試験管には３．２ｍｌの培地を添加した。４．４Ｘ１０’　ＬＥＣＩ　ｌまたはり、ＥＣ１２１１胞に等しい２００μｌの細胞懸濁液をモノクローナル抗体を含有する試験管に添加し、そして４００μｌを対照の管に添加した。管をおだやかに撹拌しながら３７℃において２００分間インキュページンした。５、刺激したＨＵＶＥＣのアッセイプレートをインキユベーターから取り出し、そしてウェルをｃＤＭＥＭで１回洗浄し、そして培地をウェルからパスツールピペットで、１度に数ウェルで、取り出した。６、細胞懸濁液およびアッセイのプレートを水浴の中に入れて２０分間冷却した。？、０．４ｍｌの細胞懸濁液を前述のアッセイのプレートの各ウェルに添加した。対照の細胞を刺激しないＨＵＶＥＣおよび刺激したＨＵＶＥＣ上でプレートした。抗体処理した細胞を刺激したウェルのみに添加した。８、各細胞懸濁液の０．４１１のアリコートをガラス管に添加して、入力ＣＰＭを決定するために使用した。９、アッセイのプレートを３７℃において３０分間インキュベーションした。二のアッセイの残りの工程は上の節Ａの工程１１〜１５に記載するように実施したが、ただし工程１２において、プレートを１５分間放置した。第３Ａ図および第３Ｂ図に示す結果が示すように、モノクローナル抗体５ＮＨ− ３，ＦＨ６，５ＮＨ−４およびＣ３ＬＥＸ−１（すべてはＳＬＸに対して特異的である）は、ＥＬＡＭ−ルセブターを介してのＩＬ−１β刺激ＨＵＶＥＣへのＩ、ＥＣＩＩ細胞の結合を有意にブロックした。ＳＬＸエピトープを発現しないＬＥＣ１２細胞は活性化された内皮に結合しなかった。Ｌｅ”　（ＦＨ２および５ＨＩ）に対して特異的なモノクローナル抗体は、ＬＥＣＩＩの結合の小さい阻害を引き起こした。ＳＬＸはＥＬＡＭ−ルセブターの主要なりガントであるというさらなる証明は、ＬＥＣＩＩおよびＨＬ−６０細胞からシアル酸を除去することによって提供された。これらの実験において、付着アッセイの前にＬＥＣＩＩおよび１１２細胞をクロストリジウム・ぺ土ヱユ欠ヱ入（且毀旦赴憇」肛紅ｎｕｕ）ネウラミニダーゼ（シアリダーゼ）　、１６Ｕ／ｓ＋ｌ　ＣＸ型、Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）で９０分間３７℃において”Ｃｒ標識っけの間に処理した。第４図に示す結果は、シアリダーゼは活性化された内皮細胞へのＬＥＣＩＩおよびＨＬ −６０細胞の付着を７０〜８５％だけ減少することを証明している。１隻■■ グ「コスフィンゴ１ビドの１ボソームは　れたへのＳＬＸ　Ｏム　ブローク　るこの実施例は、ＳＬＸ、Ｌｅ”または同様であるが、同一ではない化合物である末端の炭水化物単位をもつ、種々の生合成的に産生されたグリコスフィンゴリピドを含有するリポソームの調製を記載する。ＩＬ−１βで処理することによってＥＬＡＭ−１を発現するように刺激された内皮細胞への、ＳＬＸを発現するＨＬ −６０細胞およびＬＥＣＩＩ細胞の結合をブロックするＳＬＸまたは擬ＳＬＸを含有するリポソームの能力を示す。材料この実験において使用したグリコスフィンゴリピドを表１に示す；それらはＢｉｏｓｅｎｂｒａｎｅ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　、ワシントン州シアトルから入手し、そして精製するか、あるいは生合成的に産生され、そしてＮＭＲおよび質量スペクトルにより、Ｈａｋｏｍｏｒｉ、　Ｓ、１．ら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ。２５９　：　４６７２　（１９８４）　、およびＦｕｋｕｓｈｉ　Ｙ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ＋＊。２５９　：　１０５１１　（１９８４）　（これらをここに引用によって加える）に一般に記載されているように、特性決定した。５−ｄｉＬｅ”　（ＳＬＸ）は、酵素源としてｃｏｌｏ２０５細胞系および基質としてＳＨを使用してフコシル残基を付加することによって酵素的に合成した。フコシル化しないｄｉＬｅ” は基質としてｎＬｃ６および細胞系ＮＣＩ　Ｈ−６９を使用して同様に合成した。参照、ｎｏｉｓｅｓ　ｅｔ　ａｌ、。Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｓ、　２６０　：　７６１９　（１９８５）、これをここに引用によって加える。ＳＰＧおよびＳＨはウシ赤血球から精製し、そしてｎＬｃ６はＳＨから末端のシアロシル残基を化学的に除去することによって産生された。グリコスフィンゴリピドを含有するリポソームを次のようにして調製した：１００μｇのグリコリピドをクロロホルム−メタノール（２：１）中の３００ｕｇのホスファチジルコリン（Ｓ　ｉ　ｇｍａ、卵黄）および５００ｔ！ｇのコレステロール（Ｓｉｇｍａ）に添加し、そして全体の溶液をＮ２により１５■Ｉのねじ付きふたをもつ管の中で蒸発乾固した。ゼラチンをコーティングした４８ウエルのアッセイプレート（Ｃ。５ｔａｒ）上の全面成長に成長させた、継代培養３のＨＵＶＥＣを内皮細胞源として使用した。プレートを前述したように調製した。２組の３回反復試験のウェルを刺激しないで放置した。１４の３回反復試験物を０．５繻ｌの体積のＢＧＭ−ＭＶの中でＩＬ−１βで３０℃１ｇ／ｗｈ　ｌにおいて刺激した。細胞を正確に４時間刺激した。ＨＬ−６０細胞およびＬＥＣＩＩ細胞を前述したように培養した。土星１、ゼラチン上でコンフルエントに増殖したＨＵＶＥＣを含有する１枚の４８ウエルのＣｏ５ｔａｒのクラスター皿をインキュベーターから取り出し、そして各ウェル中の媒体をパスツールピペットで除去し、そしテ０．５ｍｌ０）新鮮なＥＧＭ−ＭＶｆ：タハ３０ｔＩｇ／ｍ１（ＤＩＬ−１βを含有する同一培地で置換し、次いでプレートをインキュベーターに４時間戻した。２、ＨＬ−６０およびＬＥＣＩＩ細胞を収得し、そしてＣＲＰＭｌの中で洗浄した。生存細胞の計数をトリバンプルーを使用して行った。各細胞型の６Ｘ１０” 細胞を次のようにして放射線標識した：各型の３Ｘ１０”細胞を２Ｘ１０ｍｌの試験管の中に入れ、そして３００μｍの”　Ｃｒ　（４５０μＣｉ）　（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）を各試験管に添加した。試験管をおだやかに撹拌しながら３７℃において１時間インキュページ町ンした。３、放射線標識したＨＬ−６０およびＬＥＣＩＩ細胞をＣＲＰＭｌの中で３回洗浄し、そして１本の試験管の中にプールした０次いで、それらを遠心し、そして同一培地の中に２Ｘ１０’細胞／■ｌに再懸濁させた。４、刺激したＨＵＶＥＣアッセイブレートをインキュベーターから取り出し、そしてウェルを５ｓ＋ｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＲＰＭ１１６４０で２回洗浄した。５、リポソームは次のようにして調製した：蒸発させた沈澱物を１００ｍ１の無水エタノール中に溶解し、そして２分間超音波処理した。超音波処理しながら２曽ｌのＰＢＳを試験管に２分かけてゆっくり添加した。このストックを使用直前にＲＰＭ１１６４０の中で１＝１０に希釈し、そして５０Ｉ！ＩのＢＳＡの温溶液を１００ｗｇ／ｍｌにおいて各１ｍｌの希釈したリポソームに５■ｇ／■ｌのＢＳＡの最終濃度に添加した。６、培地をアッセイプレートのウェルからパスツールピペットで、１度に数ウェルで除去し、そしてＯ，ｈｌのリポソーム懸濁液を６のＩＬ−１β刺激したアッセイのウェルの各々に添加した。対照ウェルに、リポソームを含有するウェルにおけるのと同一濃度でエタノール、ＲＰＭ１１６４０およびＢＳＡを含有するリポソーム緩衝液を入れた。対照緩衝液は刺激しないＨＵＶＥＣおよび刺激したＨＵＶＥＣ上でプレイティングした。リポソームを含有する試料を刺激したウェルにのみ添加した。７、プレートを３７℃にて４００分間インキュページンし、次いで５０ｍ１の” Ｃｒｔｌ議したＨＬ−６０またはＬＥＣＩＩ細胞をアッセイのウェルに添加した。各細胞系を各リポソーム調製物について３回反復試験物でアッセイした。各細胞懸濁液の５０−１の３つのアリコートを入力ＣＰＭの決定に使用するガラス管に添加し、そしてアッセイプレートを３７℃において３０分間インキュベーションした。８、結合しない細胞はアッセイプレートのウェルから、系統的再懸濁によりパスツールピペットを使用して、次いで０．７ｍｆの培地の添加および除去により除去した。すべての培地をウェルから除去し、そして０．１２６Ｍ　Ｔｒ　ｉ　ｓ、　２％のＳＤＳおよび１０％のグリセリンを添加した（０．３ｍ１）　、プレートを１５分間放置し、次いで０．５ｍｌのｄＨｘｏを各ウェルに添加した。９、各ウェルの中の流体を再懸濁させ、そしてガラスの試験管に移した。ピペットの先端を管の中に入れた。インプットＣＰＭ試料を含有するものを包含する管をガンマカウンターでカウントした。各ウェルにおいて結合したＣＰＭを各試料について入力ＣＰＭで割って、結合した％を決定した。３回反復試験のアッセイの点の平均および標準偏差をプロットした。第５図に示すように、５ＬＸ（Ｓ−ｄｉＬｅ”、表１）を含有する末端配列を有する選択したグリコリピドを含有するリポソームは、４°Ｃにおいて活性化された内皮細胞へのＨＬ−６０細胞の付着を劇的に阻害した。Ｌｅ”　（ｄ　１−Ｌｅ”　）または他の関係する。構造（表１）をもつグリコリピドを含有するリポソームは、炭水化物基の構造に依存しない最小の阻害を示した。同様な結果はＬＥＣＩＩ細胞の付着で得られた。実験を３７℃において実施したとき、ＨＬ−６０細胞の付着はＳＬＸ構造（Ｓ−ｄ　ｉ　Ｌ　ｅ”　、　７０％）をもつグリコリピドを含有するリポソームにより減少し、そしてまた、より少ない程度にＬｅ ”　（ｄ　１−Ｌｅ”　、４０％）を含有するリポソームにより減少し、Ｌｅ” はまた、ＥＬＡＭ−１と、より低い親和性で、相互作用することができることが示唆される。これらの実験が示すように、生合成的に産生されたＳＬＸまたは同様な擬ＳＬＸ化合物は、リポソーム組成物に配合するとき、例えば、炎症部位の中への白血球の浸潤の減少のための療法的化合物として働くことができる。ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞は、ＥＬＡＭ−ルセプターを介しての活性化された内皮細胞へのＨＬ−６０およびＬＥＣＩＩの付着と対照的に、主としてＶ −ＣＡＭ（内皮細胞）−ＶＬＡ−４（Ｊｕｒｋａｔ細胞）付着対を通してＴＬ− １活性化された内皮細胞に結合する。Ｊｕｒｋａｔ細胞の付着はＳＬＸを含有するリポソームにより阻害されず、インテグリン分子ＶＬＡ−４のαサブユニットに対するモノクローナル抗体により完全に阻害された。この結果が証明するように、ＨＬ−６０およびＬＥＣ１１細胞のＳ　Ｌ　Ｘ　＋Ｊボソームの阻害は内皮細胞へのリポソームの結合に帰属される立体的作用でなく、ＳＬＸリポソームはＥＬＡＭ−１のりガントの結合部位と直接競争することによって付着を阻害するという結論が支持される。ス】１１ｙＳＬＸに・　る　は　れたヒトプレートへのＧＭＰ−１４０入　るこの実施例において、活性化されたヒト血小板へのＨＬ−６０細胞のＧＭＰ−１４０仲介付着をブロックする、ＳＬＸおよびシアル化されないＬｅ”に対して特異的なモノクローナル抗体の能力を決定した。林料ＨＬ−６０細胞は前述し、そしてリガンドを有する細胞源として使用した。Ｊｕｒｋａｔ細胞をリガンドをもたない対照として使用した。モノクローナル抗体５Ｈ−１，ＦＨ−２，５ＮＨ−４およびＣ５ＬＥＸ−１は、また、前述した。土産１、血液を正常のヒトのドナーからＡＣＤ抗凝固剤（デキロース、２．０ｇｉクエン酸ナトナトリウム２．４９およびクエン酸１．２５ｇ　ｉ　ｄ　Ｈ。０で１００ｍ１とする）を含有する注射器に６部の血液７１部の抗凝固剤の比で抜き出した。血小板は分別遠心分離により次のようにして分離した：血液を８００ｒｐｍ（はぼ９０Ｘｇ）で室温において１５分間遠心した。上澄み液を集め、そして１２００ｒｐ■（はぼ４００Ｘ　ｇ　）で６分間遠心した。上澄み液を取り出し、そして２０００ｒｐ■（１２００Ｘ　ｇ　）で１０分間遠心した。血小板のボタンをタイロード−ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ６，５（Ｎ　ａ　Ｃｌ　８．Ｏｇ　；ＫＣＩ　０．２ｇ　；ＮａＨｚ　ＰＯ４−Ｈ！　００．０５７ｇ　；ＭｇＣ１ｇ　− ，６Ｈｚ　Ｏ０，１８４ｇ　；ＮａＨＣＯｚ　Ｏ，１ｇ　：デキトロース１．Ｏｇ；およびＨＥＰＥＳ　２．３８３ｇ　；　Ｄ　Ｉ水で１リツトルとする、ＩＮ　ＮａＯＨでｐ［１６，５に調節する）で２回洗浄し、次いでＰＢＳ中で１回洗浄した。血小板をＰＢＳ中で１０１／■１の濃度に懸濁させた。２、血小板を最後に再懸濁するほぼ２０分前に、４８ウエルのプレートを０．１％のゼラチンでコーティングし、そして３７℃において１５分間インキュベーションした。過剰のゼラチンを血小板の添加直前にピペットで除去した。血小板を０．２５単位のトロンビン／ｍｌ　（ＳｉｇｍａＴ−６７５９）の血小板懸濁液の添加により活性化した。血小板を室温において２０分間放置した。３、結合し、活性化された血小板を調製するために、３００μｌの血小板懸濁液をゲルコーティングしたプレートの各ウェルに添加した。プレートを３７℃において１５分間インキエベーシッンし、次いで８００ｒｐｍ　（９０Ｘ　ｇ　）で２分間回転した。プレートをＰＢＳで３回洗浄することによって、結合しない血小板を除去した。４、血小板は高度に反応性のＦｃレセプターを有するので、抗体調製物から凝集したＩｇＧの吸収を防止するために、血小板のＦｃレセプターを次のようにしてブロックした：精製したマウスＩｇＧＷ　６　／　３２　（Ｉ　ｇ　Ｇ　ｚ−）を２７層ｇ／閤１において６３℃に５分間加熱することによって凝集させた。　３００ｍ１のＰＢＳ中の加熱した調製物を２０ｙｇ／腸ｌにおいて血小板コーティングしたプレートの各ウェルに添加した。プレートを３７℃において１５分間インキュベーションし、次いでＰＢＳで洗浄した。５、ＨＬ−６０およびＪｕｒｋａｔ細胞を収得し、そしてＣＲＰＭｌの中で洗浄した。生存細胞のカウントをトリバンブルーを使用して行い、冬型の３Ｘ１０” 細胞を２Ｘ１０ｍｌの試験管の中に入れ、そして３００．１の”　Ｃｒ　（４５０μＣ３）　（Ｎｅｗ　Ｅｎｇ、１ａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）を各試験管に添加した。試験管をおだやかに撹拌しなから３７°Ｃにおいて１時間インキエベーシッンした。６、放射線標識した細胞をＣＲＰＭＩの中で３回洗浄し、そして１本の試験管の中にプールした０次いで、それらを遠心し、そして同一培地の中に２Ｘ１０’細胞／ｍｌに再懸濁させた。７、　１．６■ｌの各モノクローナル抗体の培養懸濁液、および１．６１の精製したＣ３ＬＥＸ−１（１５ｙｇ）を別々の試験管に添加した；対照の試験管には１．６■ｌの培地を添加した。８、Ｊｕｒｋａｔ細胞の懸濁液（４Ｘ１０’細胞を含有する）の１００μｌの標識したＨＬ−６０を、モノクローナル抗体を含有する試験管の各々に添加した。それらを３７℃においておだやかに撹拌しながら２０分間インキユベーシゴンした。このインキュベージ５ン期間後、０．３＋＋１の各細胞の懸濁液（７，５ｘｌＯ’細胞を含有する）を、結合した活性化された血小板を含有する前述のアッセイプレートの各ウェルに添加した。９、アッセイプレートを９０Ｘｇで２分間遠心し、次いで室温において５分間インキュベーションした。プレートを放射性廃棄物の容器の中に逆さにし、そしてプレートをタオル上にプロッティングすることによって、結合しない細胞をアッセイブレートの各ウェルから除去した。３００μｍのＰＢＳを各ウェルに注意して添加し、そしてプレートを逆さしかつプロッティングすることによって、ウェルを３回洗浄した。培地のすべてをウェルから除去し、そして０．１２５モルのトリス、２％のＳＤＳおよび１０％のグリセリンの０．３■ｌの溶液を添加した。プレートを１５分間放置し、次いで０．６Ｗ１のｄＨｚ。を各ウェルに添加した。１０、各ウェルの中の流体をピペットで再懸濁させ、そしてガラスの試験管に移した。先端を管の中に入れた。入力試料を含有するものを包含する試験管をガンマカウンターでカウントした。各ウェルにおいて結合したＣＰＭを各試料について入力ＣＰＭで割って、結合した％を決定した。入力ＣＰＭは工程８に記載する各細胞懸濁液の０．３■ｌのアリコートをカウントすることによって決定した。第６図に示す結果が示すように、ＳＬＸに対して特異的なモノクローナル抗体５ＮＨ−４およびＣ３ＬＥＸ−１は、活性化された血小板上のＧＭＰ−１４０へのＨＬ−６０細胞の結合をブロックした。１もまた、この結合をブロックしたが、その程度は低かった。この実施例が示唆するように、ＳＬＸおよびＬｅ”の両者はＧＭＰ−１４０のためのりガントであることができるが、ＳＬＸの構造はＬｅ”の構造よりＧＭＰ−１４０についてより高い親和性を有することができる。災旌■豆この実施例は、トロンビンで処理することによってＧＭＰ−１４０を発現するように刺激された血小板への、ＳＬＸを発現するＨＬ−６０細胞およびＰＭＨの結合をブロックする、ＳＬＸまたは擬ＳＬＸを含有するリポソームの能力を証明する。このアッセイは、一般に、Ｌａｒｓｅｎら、皿６３　：　４６７−４７４　（１９９０）　（これをここに引用によって加える）に記載されているプロトコールに従った。 ■且グリコスフィンゴリピドは実施例■に記載されているようにして調製した。血小板は実施例Ｖに記載されているように調製したが、ただしＦｃレセプターのブロッキングは実施しなかった。ＨＬ−６０細胞は前述したように調製した。ＰＭＮはボランティアのドナーからヘパリン処理したバキュテイナ−（ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ）管の中に抜き出した全血５０１から調製し、前記管は倒立して血液を混合した。すべての工程は２２〜２４℃において実施した。各２５謄ｌの血液を１５−１の七ノーポリ溶解培地（Ｍｏｎｏ−Ｐｏｌｙ　Ｒｓｓｏｌｖｉｎｇ　Ｍｅｄｉｕｍ）（Ｆｌｏｗ−Ｌａｂｓ）の上に層状にした。管を８００×ｇで２５分間、次いで１３００Ｘｇでさらに２５分間遠心した。ＰＭＨ層を除去し、そしてきれいな５０ｃｃの遠心管の中に入れた。２０ｍＭＨＥＰＥＳ　（Ｇｉｂｃｏ）および０．２％のグルコース（Ｆ　ｉ　ｓ　ｈ　ｅ　ｒ）を含有する３０口ｌのバンクの均衡塩溶液（Ｇ　ｉ　ｂ　ｃ　ｏ）を各管に添加し、次いでこれらを１９００Ｘｇで３分間遠心した。ＰＭＮを同一緩衝液の中で１９００Ｘｇで３分間遠心することによって３回洗浄した。ＰＭＮを血球計でカウントし、２　ＸＩＯ’　／ｍｌに再懸濁させ、そして使用するまで室温において保持した。主星１．２０μｍの活性化された血小板の調製物を２８本の１．５ｍｌのエッペンドルフ管（１４の二重反復実験の試料）の各の中に入れた。２．２０μｌの希釈したリポソームをｌＯμｇ、５μｇまたは２ａｇで、あるいは２０μｌの対照緩衝液を各二重反復実験の適当な管に添加した。３、血小板をリポソーム調製物と室温において２００分間インキュページせした。４、好中球またはＨＬ−６０細胞の各々を２Ｘ１０”細胞／ｍｌで１組のリポソーム処理した血小板に添加した。２０μｌの細胞懸濁液を各管に添加した。５、管を混合し、そして室温において２０分間放置した０次いでそれらを血球計に適用し、そして細胞に陽性（付着した血小板２個以上／セル）または陰性（付着した血小板２個未満／セル）とスコアを付けた。第７図に示すように、ＳＬＸを含有する末端の配列を有する選択されたグリコリピド（Ｓ−ｄｉＬＥ”、表１〕を含有するリポソームは、活性化された血小板へのＨＬ　−６０細胞の付着を劇的に阻害した。Ｌｅ”　（ｄｉ−Ｌｅχ）または他の関係する炭水化物の構造をもつグリコリピド（表１）は、炭水化物基の構造に依存しない、最小の阻害を示した。同様な結果はＰＭＮ細胞の付着を使用して得られた〔第８図）、これらの実験が示すように、生合成的に産生されたＳＬＸまたは同様な［ＳＬＸ化合物は、リポソーム組成物に配合するとき、例えば、炎症性部位における血小板への白血球の結合を減少するための、療法的化合物として働くことができる。裏施■距ヘキササツカリドＳＬＸは　ハ　への　の　ム　プロ・り　るこの実施例において、ＧＭＰ−１４０の付着を阻害する最小のテトラサツカリドＳＬＸの能力をヘキササツカリドの能力と比較した。簡単に述べると、血小板および好中球を前述の方法で分離した。血小板をトロンビンで活性化し、次いで種々のオリゴ糖の希釈物とインキュベーションした。好中球を添加し、そして活性化された血小板への好中球の付着に対するサツカリドの作用を決定した。使用したオリゴ糖は次の通りであった：ＳＬＸ　（ｈｅｘａ）、ＮｅｕＡｃａ２，３ＧａＩβ１，４　（αｌ、３Ｆｕｃ）ＧｌｃＮＡｃβ１．３Ｇａｌβ１，４Ｇｌ　ｃ　０−ＣＨｘ　ＣＨ寡ＳｉＭｅ３　（岐阜大学のハセガワ教授提供）およびＳＬＸ　（ｔｅｔｒａ）、ＮｅｕＡｃａ２゜３Ｇａｌβ １，４　（αｌ、３Ｆｕｃ）ＧｌｃＮＡｃ。土星１、血小板を前述したように分離し、そしてトロンビンと０．２５Ｕ／ｍｌの最終濃度で室温において２０分間インキュベーションすることによって活性化した（２ｘｌＯ’　／ｍｌ）　。２、好中球は、前述したように、七ノーポリ溶解培地（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ−Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の上にヘパリン処理した血液を層状にし、次いで２００Ｏｒｐ■において２５分間遠心し、次いで２５００ｒｐ＋＊でさらに２５分間遠心することによって分離した。３、アッセイのために、２０μＩの血小板懸濁液（２ｘｉｏ”　／ｓ＋１）をエフペンドルフ遠心管の中に入れた０等しい体積のオリゴ垢の調製物を５００μｇ／ｍｌ〜２．０μｇ／ｍｌの濃度において、あるいはグリコリピド−リポソーム調製物（前述したように調製した）を２μｇ／ｌ〜０．２５μｇ／ｍｌの濃度において添加し、そして管を室温において２０分間放置した０次いで２０μＩの好中球の調製物（２ＸＩＯ”　／ｍｌ）を添加し、そして管を室温においてさらに２０分間放置した。好中球への活性化された血小板の付着を顕微鏡的にアッセイした。１００の好中球を評価した。それらに、２またはそれ以上の血小板が取り付けられている場合は陽性と、そして２より少ない血小板が取り付けられている場合は陰性とスコアを付けた。２またはそれ以上の結合した血小板をもつ細胞の百分率を計算した。同一実験の結果を表２に示す。ｍ−１５０％の阻害に要求される量オリゴ糖　（μモル）実験１　実験２ＳＬＸ　（ｈｘａ）　４．８　２．２ＳＬＸ　（ｔｅＬｒａ）　６９．０　５４．０−Ｌ　ｅ　”　７８．０　４３．０表２に示すように、トロンビンで活性化された血小板への好中球のＧＭＰ−１４０仲介結合を５％阻害するために、５ＬＸ−ｈｘａサツカリドよりほぼ２０倍以上の５ＬＸ−ｔｅｔｒａサツカリドが要求される。要求されるテトラ−サツカリドの量は、非シアル化Ｌｅ”を使用したとき、同様な程度の阻害に必要な量にほぼ等しい、これらの結果が示唆するように、ことにＧＩｃＮＡｃβ１，３Ｇａｌを含む５〜６１１のＳＬＸ成分は、結合に必要なＧＭＰ−１４０のためのリガンドの部分を構成する。１嵐斑！々のＳＬＸ　゛　る・　のブローキングこの実施例は、リポソーム上で種々のグリコリピド構遺体を試験する実験を記載する。とくに、ＳＹ２、すなわち、フコースがＳＬＸにおけるように究極のＧＩｃＮＡＣに取り付けられるのではなく終わりから２番目のＧｌｃＮＡｃに取り付けられるシアル化多糖、を試験した。血小板および好中球を前述の方法により分離した。血小板をトロンビンで活性化し、次いで前述したように調製したリポソームの中に埋め込まれた種々のグリコリピドの希釈物とインキエベーシタンした。好中球を添加し、そして活性化された血小板への好中球の付着へのグリコリピドの作用を決定した。検査した種々のグリコリピドの構造は次の通りである：　５ＤｉＹ２゜ＮｅｕＧｃα２＋　３ＧａｌβＬ　４（Ｆｕｃｃｒｌ、３）Ｇ１ｃＮａｃβ１．３Ｇａｌ βＬ　４（Ｆｕｃｃｒｌ。３）ＧｌｃＮＡｃβ１．３Ｇａｌβ１．４ＧｌｃβＬ　ＩＣｅｒ　ｊ　ＳＬＸ、　ＮｅｕＧｃｃｒ２．３Ｇａｌβ１゜４（Ｆｕｃαｌ、　３）Ｇ１ｃＮＡｃβ１．３Ｇａｌβ１．４ＧＩｃβＬ　ＩＣｅｒ；ＳＹ２．　ＮｅｕＧｃｃｒ２＋３Ｇａ　ｌβ１．４ＧｌｃＮＡｃβ１．３ＧａｌβＬ　４（Ｆｕｃαｌ＋　３）ＧＩｃＮＡｃβｌ、　３Ｇａｌβ１１４ＧＩｃβ１＋　ＩＣｅｒ　；　５ｌｌｒ　ＮｅｕＧｃｃｒ２＋　３Ｇａｌβ１．４Ｇ１ｃＮＡｃβ１．３Ｇａｌβ１゜４Ｇ１ｃＮＡｃβ１．３Ｇａｌβ１．４Ｇ１ｃβ１＋　ＩＣｅｒ　ｉ　ＳＰＧ＋　ＮｅｕＧｃｃｒ２＋　３Ｇａｌβ１゜４Ｇ１ｃＮＡｃβ１．３Ｇａｌβ１．４Ｇ１ｃ β１．　ＩＣｅｒ。２つの同一の実験の結果を表３に示す。ｌ−−１５０％の阻害に要求される量オリゴＩ！（μモル）ＳＹ２　（実Ｍ　１　）　０．３２５ＳＹ２　（実験２　）　０．３４５ＳＬＸ　（ｈｅｘａ）　０−３０ＳｄｉＹ２　０．３６ｓｐｃ　阻害せずＳ）［阻害せずこれらの結果が示すように、ＳＹ２は、ＳＬＸおよびＳＤ　ｉＹ２と同様によく、トロンビン活性化された血小板への好中球のＧＭＰ−１４０仲介付着を阻害した。２施■■ ＳＬＸの　の・　を　しての・　のプロ・キングこの実施例は、ＧＭＰ−１４０についてのシアル化Ｌｅ”　（ＳＬＸ）の親和性が、末端のシアル酸がＮ−７セチルネウラミネート（ＮｅｕＡｃ）またはＮ−グリコールネウラミネート（ＮｅｕＣｃ）であるかどうかにかかわらず同一であることを証明する。すべての材料は前述したように調製した。血小板および好中球を記載した方法により分離した。血小板をトロンビンで活性化し、次いでリポソームの中に含有された種々のグリコリピドの希釈物とインキュベーターンした。好中球を添加し、そして活性化された血小板への好中球の付着に対するグリコリピドの作用を決定した。合成のＳＬＸ　（ＮｅｕＡｃ）およびウシ赤血球から精製されたシアリルバラグロボシドの酵素的フコシル化により調製されたＳＬＸの調製物ＳＬＸ　（ＮｅｕＧｃ）を直接比較した実験の結果を表４に示す。表−一↓ ５０％の阻害に要求される量オリゴ糖　源　（μモル）ＳＬＸ　（ウシ赤血球）　０．７４（ＮｅｕＧｃ）ＳＬＸ　（合成）　０．６７（ＮｅｕＡｃ）これらの結果が示すように、５ＬＸ−ヘキササツカリドは、シアル酸がＮｅｕＡｃまたはＮｅ　ｕＧｃであるにかかわらず、トロンビン活性化された血小板への好中球のＧＭＰ−１４０仲介付着を等しくよく阻害した。この結果が示すように、シアル酸のＮ−アセチルまたはＮ−グリコリル誘導体は、また、ＥＬＡＭ−１によるＳＬＸの認識を可能とするであろう。種々のグリコリピドもまた、同一アッセイにおいて試験した。結果を第９図に表す、試験したグリコリピドの構造は次の通りである：ＳＬχ（ｈｅｘａ）、　ＮｅｕＧｃａ２．３Ｇａｌβ１．４（Ｆｕｃｃｒｌ、　３）ＧｌｃＮａｃβ１．３Ｇａｌβ１゜４４ＧｌｃβＬ　ＩＣｅｒａｍｉｄｅ；　α２＋　３　ＳＬＸ　ｃｅｒ、ＮｅｕＡｃｃｒ２．　３Ｇａｌβ１．４（Ｆｕｃα１．　３）ＧＩｃＮＡｃβ１．　３　Ｇａｌβ１．　４ＧｌｃβＬ　ＩＣｅｒａｓｉｄｅ：　α２．　６ＳＬＸ　ｃｅｒ、　ＮｅｕＡｃｃｒ２．６Ｇａｌβ１．４　（ｆｕｃｃｒｌ、　３）ＧｌｃＮａｃβ１．３Ｇａｌβｌ。４ＧＩｃβ　１＋　ＩＣｅｒａｗｉｄｅ；　ＳＨ＋　ＮｅｕＧｃｃｒ２＋　３Ｇａｌ　ｆｌｌｌ　４Ｇ１ｃＮＡｃβ　１．　３Ｇａｌ　β１P ４Ｇ１ｃＮＡｃβ１．３Ｇａｌｌ！１．４Ｇｌｃβ１＋　ＩＣｅｒａｓｉｄｅ。ス」１ＩＫＡ　ＳＬＸ　る・　のブローキングこの実施例は、合成ＳＬＸがＥＬＡＭ−１と結合し、そして活性化された内皮への好中球の付着を阻害することを証明する。この実施例もまた、シアル酸の連鎖がＥＬＡＭ−１への結合に影響を与えることを示す。２つの合成化合物を調製した。１つは、天然に存在するＳＬＸにおけるように、 α２，３連鎖のシアル酸を含んでいた。第２は、レセプターの結合への連鎖の性質の重要性を検査するために、α２゜６連鎖のシアル酸からなっていた。リポソームは、１２μ夏の無水ＥＴＯＨを各管に添加し、５０℃の水浴の中で短時間加温し、そして２分間超音波処理することにより調製した。２３８μｌの加温したリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）を各管にゆっくり添加し、その間超音波処理し、そしてさらに１０分間超音波処理した。ストックのリポソームの最終濃度は５％のＥＴＯＨ／ＰＢＳ中の４００ｕｇのグリコリピド／鴎ｌであった。土星１、ＨＵＶＥＣ，ＰＭＮ、およびリポソームを前述したように調製した。２、刺激したＨＵＶＥＣアッセイブレートをインキュベーターから取り出し、そして試料を５＋ｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＲＰＭ１１６４０で２回洗浄した。３、リポソームのスックをＨＢＳＳ／Ｂ５Ａ１１Ｉｉ液中で希釈して次に等しい溶液を調製した：４０）ｔｇ／ａ１．３０℃１ｇ／＠ｌ、１５μｇ／ｍｌ、７．５μｇ／−１，３，７５μｇ／ｍｌおよび１．８７μｇ／■１．同様な希釈物をＰＢＳ−５％のＥＴＯＨから成る対照ストックから調製した。４、培地をアッセイプレートのウェルからパスツールピペットで、１度に数ウェルで、除去した。５．０．０５■ｌの各リポソーム懸濁液を刺激したアッセイプレート上の二重反復実験のウェルに添加した。対照のウェルに、リポソームを含有するウェルにおけるのと同一濃度でエタノール、ＨＢＳＳおよびＢＳＡを含有するリポソーム緩衝液を添加した。対照緩衝液を刺激しないＨＵＶＥＣおよび刺激したＨＵＶＥＣ上でプレイティングした。リポソームを含有する試料を刺激したウェルにのみ添加した。６、プレートを３７℃において４０分間インキュベージ５ンし、次いで５０μｌのＰＭＮをアッセイのウェルに添加した。細胞の最終濃度は１００μｍ中で５Ｘ１０’ウエルであった。７、アッセイプレートをインキュベーター（５％のＣｏｔ、３１°Ｃ）に８分間戻した。８、結合しない細胞をアッセイプレートから系統的再懸濁により、ｐ２００マルチチャンネルのピペットを使用し、次いで０．２纏ｌの培地を添加および除去することによって除去した。９、培地のすべてをウェルから除去し、そして５０μｌの可溶化緩衝液を添加した。これは０．１％のＮｏ−４０洗浄剤を含有するクエン酸塩緩衝液（２４，３ｍｌの０．１Ｍクエン酸、１０．５ｇ／　５００■１　；　２５．７鵬ｌの０．２Ｍリン酸ナトリウム、１４．２／　５００置１およびＳＱＨｇＯで１００層ｌ）から成っていた。１０、７”レートをロータリー震盪器上で１０分間インキュベージ５ンし、次いで０．０５ｍ１の０ＰＤＡ溶液〔８薯ｇの０−フェニレン−ジアミン、Ｓ　ｉ　ｇｍａ　カタログＮｏ、Ｐ−１５２６，８１の３０％　Ｈｚ　Ｏｘおよび１０量１のクエン酸塩緩衝液（上のような）〕を各ラウェに添加した、この反応を１５分間進行させ、次いで２５μＩの４Ｎ硫酸を各ウェルに添加して反応を停止させた。１１、試薬を１００μｌの体積の可溶化緩衝液および０ＰＤＡ溶液を５０μｍの４硫酸と混合することによって調製した。１２、　１００μｍの上澄み液を２ウエルの各々から取り出し、そして柔軟なＥＬ　Ｉ　ＳＡアッセイプレート（Ｆａｌｃｏｎ）に移した。プレートを分光光度測定的に４９２０諷において３０分以内に走査した。２つの実験の結果を下表５に表す。ｉ（２，６）ＳＬｅｘ　（２，３）ＳＬｅｘ濃度　平均　平均１　２０μ　ｇ　７抛ｌ　Ｏ，６６３０，１５６２１５μｇ／ｓｌ　’　０．６３６　０．２７０３７．５μｇ　７抛ｌ　Ｏ，６０２０，３５９４３，７５μｇ　／ｓｌ　Ｏ，６５５０，４８３５１，８７μｇ／曽１　０．６９０　０．５８０６．４７μｇ／■１　０．６９５　０．６４２７　０ｐ　ｇ　７抛ｌ　Ｏ，７１００，７１６対照＋ＩＬ−ＩＢ　対照−ＩＬ−ＩＢ濃度　平均　平均１　２０１１　ｇ　７抛ｌ　Ｏ，６５７０，０１０２１５μｓ　７抛ｌ　Ｏ，７４００，０１０３７，５μ　ｇ／閣１　０．６５８　０．０１３４　３．７５μ ｇ／■１　０．６９８　０．００９５　１．８７℃１ｇ／■Ｉ　Ｏ，７２５０，０１４６，４７μ　ｇ／園１　０．７８２　０．０１８７　０μ　ｇ／請１　０．７０８　０．０１にれらの結果が示すように、合成α（２，３）シアリルＬｅ ”を含有するが、α（２，６）シアリルＬｅ”を含有しないリポソームは、ＥＬＡＭ−１依存結合アッセイにおいて、活性化された内皮への好中球の付着を阻害する。こうして、シアル酸のα２，３連鎖はＥＬＡＭ−１による認識のために必要であると思われる。さらに、結果が示すように、合成的に産生されたオリゴ糖、α（２，３）シアリルＬｅ”はＥＬＡＭ−１に結合し、そして活性化された内皮への好中球の結合をブロックする。したがって、この化合物またはこの化合物の誘導体は潜在的抗炎症薬物の候補を構成する。１施１Ｘ土エンド−−ガークトシ゛−ゼによるＨＬ−６０の几この実施例は、ＨＬ−６０ｉｌ胞のシアル化Ｌｅ”の内部のβ−ガラクトース主鎖の糖連鎖がエンド−β〜ガラクトシダーゼによる切断に対して感受性であるかどうかを決定する実験を記載し、ここでエンド−β−ガラクトシダーゼはポリラクトサミニル構造の中の内部のβ−ガラクトース連鎖を切断するが、Ｇａ１ＮＡｃがマンノースに結合しているとき（コア型構造）β−ｇａｌを切断しないことが知られている酵素である。土星血小板を前述の方法により分層し、そしてトロンビンで活性化した。培養した）（Ｌ６０細胞を後述するようにエンド−β−ガラクトシダーゼで処理し、そして活性化された血小板へのＨＬ６０細胞のＧＭＰ−１４０仲介付着への酵素処理の作用を決定した。）（Ｌ６０細胞の酵素処理は次のようにして実施した：　１２．４Ｘ１０’細胞を２０ｍＭ　ＨＥ　Ｐ　Ｅ　Ｓおよび０．２％のグルコースを含有するバンク均衡塩溶液で２回洗浄し、次いで通常の生理的塩類溶液で１回洗浄した。エンド− β−ガラクトシダーゼ（０，１単位、ＩＣＮ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ。Ｉｎｃ、　＋カリフォルニア州アービン）を２００μｌの通常の生理的塩類溶液および２００μｌの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６，０１）中に溶解した。２００μｌ　（０，０５単位の酵素を含有する）を３ｘｌＯ”のＨＬ６０細胞に添加し、そして２００μＩの酢酸塩緩衝液を緩衝液対照として使用する同様な数の細胞に添加した０両者の管を３７℃においておだやかに撹拌しながら６０分間インキュベージジンした０次いで管を氷の中で冷却し、そして細胞をＨＥＰＥＳおよびグルコースを含有するＨＢＳＳ中で３回洗浄し、次いでカウントしそして２　ｘｌＯ”　７抛ｌに懸濁させた。アッセイのために、２抛ｌのタイロード−ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７，２）をエッペンドルフ管の中に入れた。同一体積の活性化された血小板（２ＸＩＯ”　／ｓ＋１）およびＨＬ６０細胞（２ｘｌＯ’　／ｓ＋１）を添加しそして、混合後、管を室温において２０分間放置した。ＨＬ６０細胞への血小板の付着を活性化された血小板の好中球への付着について前述したように顕微鏡的に評価した。これらの実験が示すように、エンド−β−ガラクトシダーゼでＨＬ６０細胞を処理すると、トロンビン活性化された血小板へＨＬ６０細胞が結合する能力が８７．５％だけ阻害された。こうして、ＧＭＰ−１４０のための最小のＳＬＸを含有するテトラサツカリドのりガントは、多分、マンノースよりむしろラクトースまたはポリラクトサミニル構造に結合している。叉施ｆｌエフコシル　は　ハ　への　の　Ａ　プロ・り　るこの実施例において、ＧＭＰ− １４０仲介付看を阻害するフコシル化多糖の能力を非フコシル化多糖のへキササツカリドのＳＬＸおよびＬｅ”のそれと比較した。簡単に述べると、血小板および好中球を前述の方法により分離した。血小板をトロンビンで活性化し、次いで種々のオリゴ塘の希釈物とインキエベーシゴンした。好中球を添加し、そして活性化された血小板への好中球の付着へのサツカリドの作用を決定した。使用したオリゴ糖は次の逼りであった：天然多糖およびそのフコシル化誘導体（両者の調製は下に記載する）；ＳＬＸへキササツカリド、ＬＮＦ　ＩＩＩ　（Ｌｅ真）およびＬＮＦ　Ｉ（構造は前述した）。ＳＬＸの線状コア構造を含有する多糖を多価のＳＬＸを含有する多糖に、酵素的フコシル化により転化した。天然多ｐ　Ｉ　ａ型は、Ｊｅｎｎｉｎｇｓら、Ｂｉｏｃｈｅｓ＋、２２１２５８−１２６３（１９８３）　（これをここに引用によって加える）に記載されているように群Ｂのストレプトコッカス（−Σｔｒ旦　ｔｏｃｏｃｃ旦」−）から得た。適当なバクテリアの菌株は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシラン（Ａｓ＋ｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）に受託され、そして受託Ｎｏ、　１２４００．３１５７４゜１２４０１、および３１５７５を有する。フコシル化多糖を調製するために、１ｍｇの天然Ｉａ型多糖を６μ】の１モルの塩化マンガン、グアノシン５′−ジホスフェートβ−Ｌ−フコースと放射性トレーサー（比活性１．８２　Ｘ　１０’ｃｐｍ／　ｔ１モル）、９０μｌの水中の０．９ｐモル、および水１３７μｌの混合物の中に溶解した。これに、Ｐｒ１ｅｅｌｓ　ら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｓ、２５６１０４５６−１０４６３（１９８１）（これをここに引用によって加える）にすでに記載されているように、ヒト乳から分離された３／４フコーストランスフエラーゼの１００μｌの溶液を添加した。この反応混合物を水と共に数回、膜（１００Ｋのカットオフ）に対して濃縮し、そして保持液を凍結乾燥して粉末にした。再懸濁および標識のカウントは、有効なアクセプター鎖のほぼ半分（すなわち、１００）がフコシル化されてきていることを示した。土星血小板を前述したように分離し、そして室温においてトロンビンと０．２５Ｕ／ −１の最終濃度で２０分間インキエベーシゴンすることによつて活性化した（２　ｘｌＯ”　／ｍｌ）　。好中球は、前述したように、七ノーポリ溶解培地（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ。Ｆｌｏｗ　ＬａｂｏｒａＬｏｒｉｅｓ）の上でヘパリン処理した血液を層状にし、次いで２０００ｒｐｍで２５分間遠心し、次いで、さらに２５分間２５００ｒｐ−で遠心することによって分離した。アッセイのために、２０ｕｌの血小板懸濁液（２Ｘ１０”／■１）をエッペンドルフ管の中に入れた０等しい体積のオリゴ糖の調製物を５００Ｉｇ／■ｌ〜２．０μｇ／ｌｌＩの濃度で添加し、そして管を室温において２０分間放置した０次いで、２０μｌの好中球調製物（２Ｘ１０”／ｓｌ）を添加し、そして管をさらに２０分間室温において放置した。好中球への活性化された血小板の付着を顕微鏡的に評価した。１００好中球を評価した。それらは、２またはそれ以上の血小板が結合している場合は陽性と、そして２より少ない血小板が結合していた場合は陰性とスコアをつけた。２またはそれ以上の結合した血小板をもつ細胞の百分率を計夏した。表６に示すように、フコシル化多糖は、トロンビン活性化された血小板への好中球のＧＭＰ−１４０仲介結合を非常に効率よく阻害した。５０％の阻害は１μｇ／腸Ｉより小さい量で達成された。これは、天然多糖に要求される２０μｇ／ｍｌに匹敵し、そして同様な程度の阻害についてＳＬＸヘキササツカリドの８μｇ／−１に匹敵する。ｌ一旦５０％の阻害に要求される量オリゴＷ　（μモル）天然多糖　２０フコシル化多糖　くｌ５ＬＸヘキササツカリド　８ＬＮＦ　Ｉ［（Ｌｅ”）　３５ＬＮＦ　Ｉ　阻害なし本発明を理解を明瞭とする目的で多少詳細に例示および実施例により記載したが、明らかなように、ある種の変化および変更は添付する請求の範囲を逸脱しないでなすことができる。Ｆｌに、１ＨＬ−６０Ｆｌに、４Ａ。Ｆｌに、４１１ＦＩＧ、５Ａ。Ｆｌに、５Ｅｌ。モノクローナル抗体による血小板の付着の阻害ＦＩＧ、６゜リポソーム濃度Ｆｌに、　？リポソーム濃度（ｕｇ／ｍ１）ＦＩＧ、＆グリコリピド（ｕｇ／ｍ１）ＦＩＧ、９゜要約書新規なセレクチンリガンドが同定され、そして該リガンード−及びそれと反応する抗体の種々の用途が提供され、この用途にはリポソーム製剤の標的に向けられた供給が含まれる。国際調査報告一一一一−＾　”’　ＰＣＴ／ＵＳ９１１０３５９２１＋＋ｗ＋＋−＾−−−ＰＣＴ／ＵＳ９１１０３５９２５＊ｒｔａＬ　！ｉｏ、ＰＣＴｚｌＪｊ９１／Ｉ：１５り２＾ｒｔ　ＵｎＬｔ　ｕ３４ｅｒＬａＬ　ＮＯ，ＰＣＴ／ｕ５９Ｌ／１ａ１５’ｌ１２

Claims

【特許請求の範囲】

１．医薬として許容される担体およびセレクチン結合性オリゴ糖成分を有する化合物を含んでなる医薬組成物。
２．オリゴ糖成分がフコースおよびシアル酸を含有する、請求項１に記載の組成物。
３．前記オリゴ糖成分がＲ１−Ｇａｌβ１，４（Ｆｕｃα１，３）ＧｌｃＮＡｃ β１−Ｒ２であり、ここでＲ１はＮｅｕＡｃα２，３、ＮｅｕＧｃα２，３、ＮｅｕＡｃα２，３Ｇａｌβ１，４ＧｌｏＮＡｃβ１，３およびＮｅｕＧｃα２，３Ｇａｌβ１．４ＧｌｃＮＡｃβ１，３から成る群より選択され、そしてＲ２は１，３βＧａｌ、１，２αＭａｎおよび１，６αＧａｌＮＡｃから成る群より選択される、請求項１に記載の組成物。
４．前記オリゴ糖成分が多糖類上に存在する、請求項１に記載の組成物。
５．前記多糖類が群Ｂのストレプトコッカスのフコシル化多糖Ｉａ型である、請求項４に記載の組成物。
６．前記多糖類が約５，０００〜３００，０００の分子量を有する、請求項５に記載の組成物。
７．前記多糖類が約５〜約２００のフコシル化側鎖を含んでなる、請求項５に記載の組成物。
８．前記多糖類が約５０〜約１５０のフコシル化側鎖を含んでなる、請求項７に記載の組成物。
９．前記化合物が糖タンパク質またはグリコリピドである、請求項１に記載の組成物。
１０．セレクチン結合性成分が脈管内皮細胞または血小板上で発現されたセレクチンレセプターに結合する、請求項１に記載の組成物。
１１．前記細胞表面レセプターがＥＬＡＭ−１またはＧＭＰ−１４０である、請求項１に記載の組成物。
１２．医薬として許容される担体およびセレクチン結合性オリゴ糖成分を含んでなる化合物を有するリボソームを含んでなる医薬組成物。
１３．前記リボソームが抗炎症性化学療法剤を封入している、請求項１２に記載の組成物。
１４．前記抗炎症剤がシクロスポリンＡである、請求項１２に記載の組成物。
１５．前記オリゴ糖成分がフコースおよびシアル酸を含有する、請求項１２に記載の組成物。
１６．オリゴ糖成分がＲ１−Ｇａｌβ１，４（Ｆｕｃα１，３）ＧｌｃＮＡｃβ １−Ｒ２であり、ここでＲ１はＮｅｕＡｃα２，３、ＮｅｕＧｃα２，３、ＮｅｕＡｃα２，３Ｇａｌβ１，４ＧｌｃＮＡｃβ１，３およびＮｅｕＧｃα２，３Ｇａｌβ１，４ＧｌｃＮＡｃβ１，３から成る群より選択され、そしてＲ２は１，３βＧａｌ、１，２αＭａｎおよび１，６αＧａｌＮＡｃから成る群より選択される、請求項１２に記載の組成物。
１７．前記化合物が糖タンパク質である、請求項１２に記載の組成物。
１８．前記糖タンパク質が４０，０００〜約２５０．０００ダルトンの分子量を有する、請求項１２に記載の組成物。
１９．前記化合物がグリコリピドである、請求項１に記載の組成物。
２０．前記グリコリピドが約６００〜約４，０００ダルトンの分子量を有する、請求項１４に記載の組成物。
２１．前記化合物がオリゴ糖である、請求項１２に記載の組成物。
２２．前記セレクチン結合性成分が脈管内皮細胞または血小板上で発現されたセレクチンレセプターに結合する、請求項１２に記載の組成物。
２３．医薬として許容されうる担体およびセレクチンと選択的に結合することができるオリゴ糖成分を有する化合物を含んでなり、前記化合物が：Ｌ１−Ｘ１を含んでなり、ここでＬ１はオリゴ糖成分であり、そしてＳＬＸおよびＳＹ２から成る群より選択され、Ｘ１はＨ，ＯＨ，ＮＨ２，ＮＨＲ１，ＯＲ１，Ｏアリール、Ｏアルキルアリール、Ｏセラミド、Ｒ１、アリールおよびアルキルアリールから成る群より選択され、ここでＲ１はＣ１−Ｃ２０アルキルである、医薬組成物。
２４．Ｌが ▲数式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、ｎおよびｍは同一であるか、あるいは異なり、そして２〜１２の整数であり、ＹはＯまたはＳであり、そしてＷはＯ，ＳまたはＮＨである）に連鎖しているか、あるいは ▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、ｎおよびｍは２〜約１２の整数であり、ＹはＯまたはＳであり、そしてＷはＯ，ＳまたはＮＨである）に連鎖しているか、あるいは ▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、Ｚは５〜１４員の環であり、そして該環上の置換基はシスまたはトランスの関係にあり、そして置換基は１．２〜１、（ｐ／２）＋１の配置にあり、ここでｐは環の大きさである）に連鎖している、請求項２３に記載の組成物。
２５．２つの窒素原子および各成分が窒素原子に連鎖した請求項２３に記載の２つのオリゴ糖成分を有する複素環化合物を含んでなる組成物。
２６．前記複素環化合物がピペラジンまたはホモピペラジンの群から選択される６または７員の環である、請求項２５に記載の組成物。
２７．請求項２３に記載のオリゴ糖成分に連鎖したアミノ酸を含んでなる組成物。
２８．前記アミノ酸がリジン、ホモリジン、オルニチン、ジアミノ酪酸、アスパラギンまたはジアミノプロピオン酸である、請求項２７に記載の組成物。
２９．前記アミノ酸がオリゴペプチドの中に組み込まれている、請求項２８に記載の組成物。
３０．前記オリゴペプチドがリジン、ホモリジン、オルニチン、ジアミノ酪酸、アスパラギンまたはジアミノプロピオン酸を含んでなる、請求項２９に記載の組成物。
３１．前記オリゴペプチドがさらにアラニン、チロシンまたは放射性ヨウ化チロシンを含んでなる、請求項３０に記載の組成物。
３２．前記オリゴペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の方向において、▲数式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、Ｒ１およびＲ２は任意のアミノ酸残基である）を含んでなる、請求項３１に記載の組成物。
３３．医薬として許容されうる担体およびセレクチン細胞表面レセプターにより認識されるオリゴ糖リガンドに選択的に結合することができる免疫グロブリンを含んでなる組成物。
３４．前記リガンドが配列ＮｅｕＡｃα２，３Ｇａ１β１，４（α１，３Ｆｕｃ）ＧＩｃＮＡｃβ１を含んでなる、請求項３３に記載の組成物。
３５．前記オリゴ糖のリガンドが白血球により発現される、請求項３３に記載の組成物。
３６．前記セレクチンが脈管内皮細胞または血小板により発現される、請求項３３に記載の組成物。
３７．前記セレクチンがＥＬＡＭ−１である、請求項３３に記載の組成物。
３８．前記免疫グロブリンがＣＳＬＥＸ−１，ＦＨ６，ＳＮＨ，ＳＮＨ４またはＶＩＭ−２である、請求項３３に記載の組成物。
３９．前記組成物が単位投与形である、請求項３３に記載の組成物。
４０．セレクチンレセプターに選択的に結合することができる化合物を含んでなる、セレクチン仲介細胞間付着を阻害するための組成物。
４１．前記化合物がフコースおよびシアル酸残基を有するオリゴ糖成分を含んでなる、請求項４０に記載の組成物。
４２．前記オリゴ糖成分がＳＬＸまたはＳＹ２である、請求項４１に記載の組成物。
４３．前記化合物が免疫グロブリンである、請求項４０に記載の組成物。
４４．前記細胞表面レセプターが脈管内皮細胞または血小板上で発現される、請求項４０に記載の組成物。
４５．前記細胞表面レセプターがＥＬＡＭ−１またはＧＭＰ−１４０である、請求項４０に記載の組成物。
４６．前記セレクチン仲介細胞間付着が炎症性疾患の応答に関連する、請求項４０に記載の組成物。
４７．前記炎症性疾患の過程が再潅流傷害、喘息、乾癬、敗血症性ショックまたは腎炎である、請求項４６に記載の組成物。
４８．治療学的に有効投与量の請求項１，１２，２３，３３に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる、患者におけるセレクチン仲介細胞間付着を阻害する方法。
４９．前記細胞間の付着が炎症性の状態に関連する、請求項４８に記載の方法。
５０．前記炎症性の状態が再潅流傷害、喘息、乾癬、敗血症性ショックまたは腎炎である、請求項４９に記載の方法。
５１．患者に療法的に有効投与量の細胞表面のレセプターに選択的に結合することができる少なくとも１つのオリゴ糖成分を有する化合物を投与することを含んでなる、患者におけるセレクチン細胞表面レセプターにより仲介される細胞間の付着を障害する方法。
５２．オリゴ糖部分がフコースおよびシアル酸残基を含んでなる、請求項５１に記載の方法。
５３．前記オリゴ糖成分がＲ１−Ｇａ１β１，４（Ｆｕｃα１，３）ＧｌｃＮＡｏβ１−Ｒ２であり、ここでＲ１はＮｃｕＡｃα２，３、ＮｅｕＧｃα２，３、ＮｅｕＡｃα２，３Ｇａｌβ１，４ＧｌｃＮＡｃβ１，３およびＮｅｕＧｃα２，３Ｇａｌβ１，４ＧｌｌｃＮＡｃβ１，３から成る群より選択され、そしてＲ２は１，３βＧａｌ、１，２αＭａｎおよび１，６αＧａｌＮＡｃから成る群より選択される、請求項５１に記載の方法。
５４．細胞表面レセプターがＥＬＡＭ−１またはＧＭＰ−１４０である、請求項５１に記載の方法。
５５．前記オリゴ糖成分がリボソーム上に存在する、請求項５１に記載の方法。
５６．前記オリゴ糖成分が多糖上に存在する、請求項５１に記載の方法る
５７．前記多糖が群Ｂのストレプトコッカスのフコシル化多糖頬Ｉａ型である、請求項５１に記載の方法。
５８．前記セレクチンが白血球、単球または好中球の内皮細胞への付着を仲介する、請求項５１に記載の方法。
５９．細胞間の付着が炎症性の状態に関連する、請求項５１に記載の方法。
６０．前記炎症性の状態が再潅流傷害、喘息、乾癬、敗血症性ショック、腎炎または外傷性のショックである、請求項５９に記載の方法。
６１．前記細胞間の付着が転移に関連する、請求項５１に記載の方法。
６２．患者に療法的に有効投与量の細胞表面のレセプターに選択的に結合することができるオリゴ糖部分を有する生物分子を投与することを含んでなる、患者におけるセレクチン細胞表面のレセプターにより仲介される炎症性疾患の過程を処置する方法。
６３．オリゴ糖成分がシアル酸およびフコースを含有する、請求項６２に記載の方法。
６４．生物分子はＮｃｕＡｃα２，３Ｇａｌβ１，４（Ｆｕｃα１，３）ＧＩｃＮＡｃβ１−Ｒ１、ＮｅｕＧｃα２，３Ｇａｌβ１，４（Ｆｕｃα１，３）ＧｌｃＮＡｃβ１−Ｒ１、およびＮｃｕＧｃα２，３Ｇａｌβ１，４ＧｌｃＮＡｃβ １，３Ｇａｌβ１，４（Ｆｕｃα１，３）ＧｌｃＮＡｃβ１−Ｒ１から成る群より選択される化学式を有し、ここでＲ１はアミノ酸、オリゴペプチド、タンパク質、糖タンパク質および多糖から成る群より選択される、請求項６２に記載の方法。
６５．細胞表面のレセプターがＥＬＡＭ−１またはＧＭＰ−１４０である、請求項６２に記載の方法。
６６．次の段階：被験化合物をセレクチンレセプターおよび単離されたセレクチン結合剤と接触させ、そして前記レセプターと前記セレクチン結合剤との間の結合を被験化合物が阻害する能力を検出する、を含んでなる、セレクチン仲介細胞付着を阻害する能力について被験化合物を測定する方法。
６７．前記結合剤がＳＬＸ成分、擬ＳＬＸ（ＳＬＸ　ｍｉｍｅｔｉｃ）または免疫グロブリンである、請求項６６に記載の方法。
６８．前記レセプターが活性化された内皮細胞または血小板上に存在する、請求項６６に記載の方法。
６９．前記レセプター、因子または被験化合物が標識されている、請求項６６に記載の方法。
７０．前記レセプターまたは因子が固体表面上に固定化されている、請求項６６に記載の方法。
７１．前記結合の阻害を検出する段階が、レセプターを担持する細胞における生理学的変化を検出することによって実施される、請求項６６に記載の方法。
７２．前記被験化合物がオリゴ糖または糖接合体である、請求項６６に記載の方法。
７３．前記被験化合物がフコースおよびシアル酸を含んでなる、請求項６６に記載の方法。
７４．前記被験化合物がＳＬＸ成分を含んでなる、請求項７３に記載の方法。
７５．前記被験化合物が免疫グロブリンである、請求項６βに記載の方法。
７６．オリゴ糖成分を有する被験化合物をセレクチンレセプターと接触させ、そして前記レセプターへの前記化合物の結合を決定することを含んでなる、オリゴ糖成分がセレクチンレセプターに選択的に結合する能力を測定する方法。
７７．前記被験化合物が標識されている、請求項７６に記載の方法。
７８．レセプターが固体表面上に固定化されている、請求項７６に記載の方法。
７９．前記成分がフコースおよびシアル酸を含んでなる、請求項７６に記載の方法。
８０．前記接触の段階が、さらに、被験化合物をセレクチン結合剤と接触させることを含んでなり、そして結合を決定する段階がレセプターと結合剤との間の結合の阻害を検出することによって実施される、請求項７６に記載の方法る
８１．前記結合剤が免疫グロブリンである、請求項８０に記載の方法。
８２．前記結合剤がＳＬＸ成分を含んでなる、請求項８０に記載の方法。
８３．被験化合物を単離されたＳＬＸ成分と接触させ、そして該単離されたＳＬＸ成分への被験化合物の結合を決定することを含んでなる、ＳＬＸ成分に選択的に結合する能力について被験化合物を測定する方法。
８４．前記単離されたＳＬＸ成分が固体表面上に固定化されている、請求項８３に記載の方法。
８５．前記被験化合物が標識されている、請求項８３に記載の方法。
８６．前記被験化合物が免疫グロブリンである、請求項８３に記載の方法。
８７．前記接触段階が、さらに、被験化合物をＳＬＸ結合剤と接触させることを含んでなり、そして結合を決定する段階が単離されたＳＬＸ成分とＳＬＸ結合剤との間の結合の阻害を検出することによって実施される、請求項８３に記載の方法。
８８．前記ＳＬＸ結合剤が免疫グロブリンである、請求項８７に記載の方法。
８９．前記ＳＬＸ結合剤がセレクチンレセプターである、請求項８７に記載の方法。
９０．適当な担体、および式：Ｒ１−Ｇａｌβ１，４（Ｒ２）ＧｌｃＮＡｃβ−Ｒ３（ここで、Ｒ１はＮｅｕＡｃα２，３、ＮｅｕＧｃα２，３、ＮｅｕＡｃα２，３Ｇａｌβ １，４ＧｌｃＮＡｃβ１，３、又はＮｅｕＧｃα２，３Ｇａｌβ１，４ＧｌｃＮａｃβ１，３であり；Ｒ２はし−Ｆｕｃα１，３、Ｄ−Ｆｕｃα１，３、Ａｒａ α１，３、（Ｒ，Ｓ）−５−アルキル−Ａｒａα１，３または（Ｒ，Ｓ）−５− アリール−Ａｒａα１，３であり、Ｒ３は１，３βＧａｌ、１，２αＭａｎまたは１，６αＧａｌＮＡｃである）を有するセレクチン結合性オリゴ糖成分を有する化合物を含んでなろ製剤学的組成物。
９１．前記オリゴ糖成分が糖タンパク質またはグリコリビドである、請求項９０に記載の組成物。
９２．前記オリゴ糖成分が脈管内皮細胞または血小板上のセレクチンレセプクーと結合する、請求項９０に記載の組成物。
９３．細胞表面レセプターがＥＬＡＭ−１またはＧＭＰ−１４０である、請求項９０に記載の組成物。