JPH05503531A - ステロイドスルファターゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ステロイドスルファ　−ゼ 本発明は、ステロイドスルフ１ターゼ阻害剤類、およびそれらを含有する薬学的 組成物に関する。

ステロイド核の３位に硫酸基を有する、以下、単に硫酸ステロイドと呼ぶ、ステ ロイド前駆体類あるいはプロホルモン類は、人体中でステロイド代謝の中間体と して重要な役割を果たしていることが知られている。例えば、硫酸エストロンお よび硫酸デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＡ）は、エストロンおよびエスト ラジオールのようなエストロゲン類の体内での産生において中間体類として重要 な役割を果していることが知られている。添付の図中に示されるステロイド代謝 図を参照。例えば、とりわけ硫酸エストロンは、特に閉経後の女性において主要 な循環エストロゲン前駆体の一つとして知られている。

それだけでなく、エストロンおよびエストラジオールのようなエストロゲン類は また、乳ガンのような悪性腫瘍の病状の維持に強く関係し、モしてエストロゲン の産生および作用の制御が、化学療法および外科手術、例えば外科卵巣摘出術お よび副腎摘出術、の両方の多くの抗ガン療法の明確な目標である。酵素阻害によ る化学療法について考える限りでは、努力はいままでのところアロマターゼ阻害 剤、即ち添付のエストロゲン代謝流れ図が示すようにアンドロステンジオンおよ びテストステロンのようなアンドロゲン類のそれぞれエストロンおよびエストラ ジオールへの変換に関与するアロマターゼ活性を阻害する化合物、に集中しがち であった。

これに対して、本発明はエストロゲン代謝経路において、一つの異なる場所を、 あるいはむしろ二ヶ所の異なる場所を標的とする。すなわちステロイドスルファ ターゼ活性による硫酸ＤＨＡおよび硫酸エストロンのそれぞれＤＨＡおよびエス トロンへの変換である。同じ酵素が両方の反応に関与しているかどうか、あるい は二つの別々のスルファターゼ酵素がそれらに関与しているかどうかは現在知ら れていないが、しかし本発明に関する限りでは、目標は一般にステロイドスルフ ァターゼ活性を阻害することであり、特定のステロイドスルフアーゼを標的とす る必要はない。

明白な理由のために、本発明はすでに記載されている特定の代謝経路でのエスト ロゲン産生を阻害するステロイドスルファターゼ阻害剤類を、第一の目標として いる。しかしながら、本発明は、硫酸ＤＨＡおよび硫酸エストロンに加えて、中 間体類として他の硫酸ステロイド類を含む他のステロイド代謝に対して適用され ることが期待される。

従って、本発明は一般にステロイドスルファターゼ阻害剤類に関し、そしてステ ロイドスルファターゼ活性が３位の硫酸基をモノアルキル、好ましくは低級（Ｃ ＋−Ｃｓ）アルキルチオホスホネイト基、即ち、式 式中、Ｒはアルキルである、で示される基と置換することによって強く阻害され るという発見に基づいている。

従って、本発明のある面では、ステロイドスルフ１ターゼ阻害剤類を有し、そし てステロイドスルファターゼ阻害剤として式： 式中、Ｒはアルキル、好ましくはｃｌ−ｃ、アルキルおよび環系ＡＢＣＤは、置 換あるいは非置換、飽和あるいは不飽和ステロイド環である、で示される化合物 またはそれらの薬学的に許容され得る塩を含有する薬学調製物が提供される。

特定の実施態様においては、ステロイドスルファターゼ活性を有し、そしてステ ロイドスルファターゼ阻害剤としてエストロン−３−（モノ）アルキルチオホス ホネイトおよびジヒドロエビアンドロステロン−３−（モノ）アルキルチオホス ホネイト、すなわち次式の化合物、のどちらかあるいは両方あるいはそれらの薬 物学的に許容され得る塩を含有する抗エストロゲンそれぞれにおいて、Ｒは前記 の定義に同じ、好ましくはメチルである。

イ」−フ二）０−の研究で、このような３−モノアルキルチオホスホネイトステ ロイド誘導体類がステロイドスルファター賦形剤を強（阻害することが示され、 これは正常な酵素基質、即ち対応する硫酸ステロイドと競合することによると考 えられるが、しかしこのような理論的説明が本発明を制限したりあるいは類別し たりするものではない。

一つの例外を除いて、式■のステロイド誘導体は新規の化合物であると思われ、 その一つの例外とはエストロン−３−メチルチオホスホ不イト、即ちＲがメチル である式■の化合物である。この化合物は、血中の硫酸エストロンレベルの測定 に診断試薬として使われる硫酸エストロン抗血清の作成のときに、免疫原として 以前がら既に使われていたが、しかしエストロンスルファターゼ阻害剤としての 可能性は何も認められていない（Ｃｏｘら、５ｔｅｏｉｄｓ　（１９７９）３３ ：　５４９−５６２）。

従って、もっと進んだ面では、本発明は以下の式で示される新規ステロイドスル ファター賦形剤を提供する：Ｒおよび環系ＡＢＣＤは前記定義のとおり、および それらの薬学的に許容される塩である、但しＲがメチルであるときは環系ＡＢＣ Ｄはエストロン以外であること。特に本発明のこの面に従って、以下の化合物が 新規の化合物として提供される：デヒドロエビアンドロステロンー３−メチルチ オホスホ不イト即ち、Ｒがメチルである前記の構造式■の化合物。

本発明に従って使用あるいは調製されるチオホスホネイトステロイド誘導体は、 対応するステロールとアルキルチオ亜リン酸クロライドあるいはジクロライドと の反応、即ち反応（以下余白） によって得られ得る。これは必要に応じて、ステロールの他の官能基を保護する ために適切な保護基を導入する一つかあるいはそれ以上の事前の工程を伴い、そ １．てそれらの保護基は反応の最後に除去される。

薬学的な投与のために、本発明のステロイドスルファター賦形剤、希釈剤などを 使用して、通常非鐸口投与のために、任意の適切な様式で製剤化され得る。特定 の応用として、本発明のステロイドスルファター賦形剤は、他のスルファターゼ 阻害剤か、あるいは、例えば４−ヒドロキシアンドロステンジオン（４−０１（ Ｒ）のような７０マターゼ阻害剤のいずれかと一緒に混合治療に使用されること が意図される。そのような混合療法の一つはすでに、本願中に意図されており、 即ち、硫酸エストロンから直接かあるいは硫酸ＤＨＡからアンドロステンンオン およびテストステロンを経由してかにかかわらず、エストロンおよびエストラジ オールへの両方の代謝経路をブロフクするための、エストロン−３−メチルチオ ホスホ不イトおよびデヒドロエピアンドロステロン−３−メチルチオホスホ不イ トの両方の組合せである。

本発明は、以下の実施例および以下のような添付の図面によって、さらに説明さ れる： 図１は、代謝経路およびインビボにおけるエストラジオールの産生に含まれる代 謝経路および酵素を示す、エストロン代謝図であり、 図２は、ＭＯＡＰ４５／４０細胞のスルファターゼ活性に対するエストロン−お よびＤＨＡ−３−（メチルチオホスホ不イト）の阻害効果ヲ示す棒グラフである 。

１意史上 エストロン−３−メチルチオホスホ不イトの氷で冷したメチルチオ亜リン酸ジク ロライド（３，６ｇ）の無水コリジン（１６＋ｅｌ）溶液へ、エストロン（２， ２ｇ）の無水コリジン（１２層ｌ）溶液を、攪拌しながら２時間かけて滴下した 。反応物は環境温度まで温まるままにしておき、さらに２４時間攪拌し、そして 氷上に注いだ。水相を酢酸エチルで抽出し、そして溶媒をエバポレートにょうて 抽出物より除去した。ロータリーエバポレーターで繰り返し水と共蒸留すること で余剰のコリジンを除去した。残された粘性物は、リン酸緩衝液（０，２５Ｍ。

ｐＦ１８．２０ｍ１）にゆっくりと暖めながら溶すし、そして濁った溶液を酢酸 エチルで抽出した。

水相をｐＨ２に：ｌ４ＷＩシた後、油が分離し、これは冷却およびこねた後固化 した。粉にされた。メタノール−水から結晶化され　゛た後、半水化物としてエ ストロン−３−メチルチオホスホネイト（１，４ｇ）が得られた。それはｍｐ９ ５−９８℃であり、その後部分的に再結晶化され、１５７−１６０℃で再び溶融 された。’Ｈｎｍｒ（ＣＤＣ１３）　：ｐｐｍ　１．９Ｂ（Ｐ−ｓｅｔｈｙｌ、 　ｄ、　Ｊ＝１６１１ｅｒｚ）　；　０．８６（Ｃ＋ｇ　ｍｅｔｈｙｌ、　ｓ） 。

Ｍ’　ａｔ　ｍ／ｅ　ｚ　３６４ｃ＋　（Ｇａｓ　ｃｈｒｏ＋＊ａｔｏｇｒａｐ ｈｙ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）。

Ｌ血史１ −３　メチルチオホスホネイト　の エストロンが同量のデヒドロエピアンドロステロンと置き換えられたことを除い ては、実施例１の過程が繰り返された。

生成物であるＤＨＡ−３メチルチオホスホネイトエステルをガスクロマトグラフ ィ質量分析によって分析し、図３に示されるようなＧＣ−ＭＳスペクトラムを得 た。

実１１］工 でのスルフ　−ゼ°　の スルファターゼ活性は、アリールスルファターゼ：フェノールスルファターゼＥ Ｃ３，２，６，１：として定義される。１ユニツトは、３７℃でり［１５，０の 条件で一時間当り、１．０μ■ｏｌｅの硫酸ｐ−ニトロカテコールを加水分解す る。

エストロンスルファターゼ活性は、一連の推定される酵素阻害剤の存在下に、イ ンビトロで正常なＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳ガン細胞を用いて測定した。その結果 を表Ｉおよび■に示す。３組のＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の２５ｃｍ２単層培養 物および３組の細胞の入っていないフラスコ（ブランク）を含まれている培養液 と共に、３■硫酸エストロン（２ｎＭ、　Ｎ、Ｅ、Ｎ、、　デュポン）を基質と して、エストロン−３−メチルチオホスホネイト（１０μＭ）の存在下または非 存在下に、３７℃で３時間、インキュベートした。３時間のインキニベーシコン 期間の最後に、回収率マーカーが加えられた（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｉｎｔｅｒｎ ａｔｉｏｎａｌ　ｐｌｃからの５０００　ｅｐｍのＩＪｃエストロン）。その後 、培養液（１ｍｌ）をそれぞれの試料から除去し、形成された非極性生成物（即 ち、エストロンおよびエストラジオール）をトルエン（５■ｌ）で抽出した。

生成した生成物の量は、１璽１のトルエン抽出物を液体シンチレーシ１ンスペク トロメーターで計数することによって定量された。

細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、は乳ガン細胞成長を制御する研究に広く使われて いる乳ガン細胞株である。これは受容体の無い（ＥＲ−、ＰＲ−、＾Ｒ−）細胞 株であり、そしてアメリカンタイプカルチャーフレクシ１ン（ＡＴＣＣ）から米 国でおよび英国で（例えば、Ｇｌａｘｏ　ｐｉｅからあるいは帝国癌研究財団か ら）広く入手可能である。

（以下余白） 表Ｉ エストロン−３−メチルチオホスホ不イト存在下でのＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞 のエストロゲンスルファターゼ活性阻害剤　エストロケ′ンスルフＴターセ゛活 性　対照１こ対する（ｆｍｏＩＸ２）ａケ゛ン／３時間／１０６細胞）　２−― −争−―――・―會−−φ―−−曽会−――・■響−―――――・−一轡１−１ 會−−―Ｉ−―争−―−−一譬！・−一一番−――−壽|―−−−―−１−−□ 響−―−−−−−響−――−φ−−響番一―−１−夛−・−−―−１−―−慟無 しく対照）　１２４．３±２．１１　−エストロン−３−メチル　１０．２±０ ．７参＊＊　８．２チオ本ス本ネイト １　平均±標準偏差、ｎ・３ ’　ｐｏ、Ｑ５　°”　ｐｏ、ｏｌ　°“”　ｐ　Ｏ，００１エストロン−３− メチルチオホスホネイトが濃度１０μＭのカラム１に列挙されている阻害剤類に 置き換えられたことを除−１で同一の実験プロトコールを用いて、表■の結果を 得た。

第３番目の実験結果は、硫酸ＤＮＡが基質として使われており、添付の図面の図 ２に示されている。エストロン−３−メチルチオホスホネイト（１０μＭ）は両 方とも同じ程度まで、即ち約５０％までスルファターゼ活性を阻害した。

表■ 他の興味のある化合物に対するＭＤＡ−ＭＢ〜２３１細胞のエストロゲンスルフ ァターセ活性 阻害剤　エストロゲン　対照に対する （１０μＭ）　スルファターゼ活性　２（ｆｍｏｌエスト０ケ゛ン／３時間／ １０６細胞） 無しく対照）１０５±７１− 酢酸メド０キシブαヶ′ステａ７　１３６±８″°　工３０硫酸テ°ヒドロエピ ７ンド ダｔソ゛−６（Ｄａｎａｚｏｌ）　５８±８°°５５タモキシフｔ７（Ｔａｍｏ ｘｉｆｅｎ）　１２０±５°°　１１４４−ヒトｕ４ジアド°ロステンシ′オン 　８９±７　８４エチニルエストラシ′ｔ−ル　４７±５°°°４５Ｍ　平均上 標準偏差、ｎ・３ 図２の詳細に関して、この図は、硫酸ＤＭＡを基質として用いてＭＢＡ−ＭＢ− ２３１細胞のステロイドスルファターゼ活性に対する、エストロン−３−メチル チオホスホネイト（ＥＩＭＰＴ）およびＤＨＡ−３−メチルーチオホスホネイト （ＤＭＰＴ）の阻害効果を表している。アッセイ系の実験用の基質類は、以下の ことを除いて上述の実施例３に記載されている。硫酸３ＨＤＨＡ（１μＭ、　Ｎ 、Ｅ、Ｎ、、デュポン）を含む培養液；培養期間は、３７℃で４時間；培養後加 えられる回収率マーカーは”ＣＤＨＡ（５，ＯＯＯｃｐｍ、Ａｍｅｒｓｈａ＋ｇ 　ｆｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｐｉｅから入手）；および、形成される生成物 （ＤＨＡ）の量はトルエンによる抽出後ｐｍｏｌ／４時間／１０６細胞の単位で 計算したこと、　ＡＧ＝アミノグルテチマイド（Ａ＋＊ｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉ ｍｉｄｅ）ρ ’Ｌｆｉ’１ｋｔ−７ｔ’Ｌｍ　（ｐｍｏ］／４シ０６ｈ１ｍ）ｒソ 郭 要約書 ３−モノアルキルチオホスホネイトエステル類が、ステロイ・ドスルファターゼ 活性阻害剤としておよびエストロゲン依存性ガンの治療の可能性のある治療剤、 特にエストロン３−モノメチルチオホスホネイトおよびデヒドロエピアンドロス テロン３−モノメチルチオホスホネイト、として開示されている。

補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成４年８月２１日

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. １．活性成分としてステロイドスルファターゼ阻害剤を含有する薬学的調製物で あって、該ステロイドスルファターゼ阻害剤が次式のステロイド−３−チオホス ホネイトまたそれらの薬学的に許容され得る塩であるか、あるいはそれらを含む 、▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒはアルキルおよび環系ＡＢＣＤは置換あるいは非置換、飽和あるいは不 飽和のステロイド核をあらわす、薬学的調製物。
2. ２．前記ステロイドスルファターゼ阻害剤が、ステロイド−３−モノ（Ｃ１−Ｃ ６）アルキルチオホスホネイトまたはその薬物学的に許容され得る塩であるか、 あるいはそれらを含む、請求項１に記載の薬学的調製物。
3. ３．前記ステロイドスルファターゼ阻害剤がステロイド−３−モノメチルチオホ スホネイトまたはその薬物学的に許容され得る塩であるか、あるいはそれらを含 む、請求項１に記載の薬学的調製物。
4. ４．エストロン−３−モノメチルチオホスホネイトまたはデヒドロエピアンドロ ステロン（ｄｅｈｙｄｒｏｅｐｉａｎｄｒｏｓｔｅｒｉｏｎｅ）−３−モノメチ ルチオホスホネイトの一方あるいは両方、あるいはその薬学的に許容され得る塩 を含む、エストロゲン依存性ガンの治療のための薬学的調製物。
5. ５．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、ＲＸおよびＹ、および環系ＡＢＣＤは、請求項１の定義に同じであるが、 但しＲがメチルであるときは環系ＡＢＣＤはエストロン以外である、で示される ステロイド−３−モノアルキルチオホスホネイトおよびそれらの薬物学的に許容 され得る塩。
6. ６．ＲがＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項５に記載の化合物および塩。
7. ７．デヒドロエピアンドロステロン（ｄｅｈｙｄｒｏｅｐｉａｎｄｒｏｓｔｅｒ ｉｏｎｅ）−３−メチルチオホスホネイト。
8. ８．エストロン（ｏｅｓｔｒｏｎｅ）依存性腫瘍の抗エストロゲン治療法でステ ロイドスルファターゼ阻害剤として使用される式：▲数式、化学式、表等があり ます▼ 式中、Ｒ、および環系ＡＢＣＤは請求項１の定義に同じ、で示される３−アルキ ルチオホスホネイト。
9. ９．乳ガンの抗エストロゲン治療法でステロイドスルファターゼ阻害剤として使 用される； デヒドロエピアンドロステロン−３−メチルチオホスホネイトおよび／または エストロン−３−モノメチルチオホスホネイト。