JPH05336981A - Production of optically active m-hydroxy acid - Google Patents

Production of optically active m-hydroxy acid

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JPH05336981A
JPH05336981A JP17749792A JP17749792A JPH05336981A JP H05336981 A JPH05336981 A JP H05336981A JP 17749792 A JP17749792 A JP 17749792A JP 17749792 A JP17749792 A JP 17749792A JP H05336981 A JPH05336981 A JP H05336981A
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JP
Japan
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acid
genus
porous material
hydroxy acid
pores
Prior art date
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Pending
Application number
JP17749792A
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Japanese (ja)
Inventor
Akihisa Kanda
彰久 神田
Toshimitsu Nakajima
敏光 中嶋
Hideki Fukuda
秀樹 福田
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Original Assignee
Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
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Publication date
Application filed by Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd filed Critical Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
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  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

PURPOSE:To industrially and advantageously obtain the subject compound useful as a synthetic intermediate, etc., for medicines, agricultural chemicals, etc., by culturing a microorganism capable of producing a beta-hydroxy acid together with a porous material, using the resultant immobilized microorganism immobilized in the porous material and miniaturizing the culture vessel. CONSTITUTION:A porous material of a structure having a skin layer comprising small holes of 5-500mum diameter on the surface, holes having 100-1000mum diameter in the interior thereof and small holes having 5-500mum diameter in a partition wall of the holes is added to a SAKAGUCHI flask, etc. A culture medium containing butyric acid or isobutyric acid is then added thereto and a microorganism capable of producing a beta-hydroxy acid [e.g. Candida.rugosa KT8201 (FERM BP-110)] is subsequently inoculated and cultured at 30 deg.C by shaking. The culture solution is then separated and extracted with an organic solvent such as ethyl acetate to industrially and advantageously afford the objective optically active beta-hydroxy acid [e.g. L-(-)-beta-hydroxyiosbutyric acid] to be a synthetic intermdiate for medicines, agricultural chemicals, etc.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【0001】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、光学活性なβ−ヒドロ
キシ酸の製造方法に関する。更に詳しくは、2種の異な
る官能基を有し、医薬、農薬などの有用な合成中間体と
なる光学活性なβ−ヒドロキシ酸を固定化された微生物
を用いて製造する方法に関する。
FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to a method for producing an optically active β-hydroxy acid. More specifically, it relates to a method for producing an optically active β-hydroxy acid, which has two different functional groups and serves as a useful synthetic intermediate for pharmaceuticals, agricultural chemicals and the like, by using a microorganism immobilized thereon.

【0002】[0002]

【従来の技術】近年、生化学、有機化学などの著しい進
展により、種々の生理活性物質が分離同定、あるいは合
成され、それらの立体構造と生理活性との相関が明らか
にされるに伴い、光学活性もその重要な因子として確認
されるようになった。現在、種々の手法を用いて光学活
性な生理活性物質の合成研究が盛んに行われているが、
本発明者らが本特許で対象としている光学活性な脂肪酸
系のβ−ヒドロキシ酸は、2種の官能基を持ち、その特
性の違いを利用して、種々の光学活性物質へ容易に誘導
し得ることから、学際的にも産業的にも、魅力ある物質
群である。
2. Description of the Related Art In recent years, due to remarkable progress in biochemistry and organic chemistry, various physiologically active substances have been separated and identified or synthesized, and the correlation between their three-dimensional structure and physiological activity has been clarified. Activity has also been confirmed as an important factor. Currently, synthetic research of optically active physiologically active substances is being actively conducted using various methods.
The optically active fatty acid β-hydroxy acid, which is the subject of the present inventors in this patent, has two kinds of functional groups, and by utilizing the difference in the characteristics, it is easily induced to various optically active substances. As a result, it is a group of substances that is both interdisciplinary and industrially attractive.

【0003】既に工業的に実施し得る経済的なβ−ヒド
ロキシ酸の生産法は、精力的に研究され、微生物の代謝
制御を利用して立体特異性を異にするDおよびL型の各
種β−ヒドロキシ酸の選択的かつ効率的な生産法が開発
されている(特公昭59−21599号公報、特公昭5
9−21600号公報、特公昭60−16235号公
報、特公昭61−12676号公報、特公昭59−53
838号公報、特公昭61−12678号公報、特公昭
62−57311号公報、特公昭62−57312号公
報、特公昭61−42559号公報、特公昭61−42
560号公報、特公昭63−19153号公報、特公昭
62−54474号公報、特開昭57−65189号公
報、特公平04−8035号公報、特公平04−803
6号公報)。なかでも、例えば血圧降下剤であるカプト
プリルの原料となるD −β−ヒドロキシイソ酪酸(以
下、HIBAと略す場合がある)などは、すでに工業生
産されている。
Economical methods for producing β-hydroxy acids that can be industrially carried out have been vigorously studied, and various β- and β-types of D and L having different stereospecificities are utilized by utilizing metabolic control of microorganisms. -A selective and efficient production method of hydroxy acid has been developed (Japanese Patent Publication No. 59-21599 and Japanese Examined Patent Publication 5).
9-21600, Japanese Patent Publication 60-16235, Japanese Patent Publication 61-12676, Japanese Patent Publication 59-53.
Japanese Patent Publication No. 838, Japanese Patent Publication No. 61-12678, Japanese Patent Publication No. 62-57311, Japanese Patent Publication No. 62-57312, Japanese Patent Publication No. 61-42559, Japanese Patent Publication No. 61-42.
560, JP-B-63-19153, JP-B-62-54474, JP-A-57-65189, JP-B-04-8035, and JP-B-04-803.
No. 6). Among them, for example, D -β-hydroxyisobutyric acid (hereinafter, sometimes abbreviated as HIBA), which is a raw material of captopril which is a blood pressure lowering agent, has already been industrially produced.

【0004】光学活性なβ−ヒドロキシ酸(以下、単に
β−ヒドロキシ酸と略す場合がある)、例えばHIBA
の工業生産では安価で大量入手が容易な脂肪酸、アルコ
ールがその原料として利用され、脂肪酸のβ−水酸化法
は脂肪酸の主代謝経路であるβ−酸化酵素系や、類縁の
分岐状アミノ酸代謝経路と共通すると思われる酵素系を
利用するものである。これらの代謝経路では、その代謝
主要経路にATPが必須であり、したがって代謝系を活
性化し、β−ヒドロキシ酸の生産速度を上昇させるに
は、好気的条件下にグルコース、グリセリンなどの微生
物のエネルギー源を補給しながら培養することが重要で
ある。したがって現在、主要なβ−ヒドロキシ酸、例え
ばHIBAは、前述のごとく、変異改良により代謝制御
された微生物を通気攪拌槽でサスペンジョン回分培養し
て工業生産されている。
Optically active β-hydroxy acid (hereinafter sometimes simply referred to as β-hydroxy acid), for example, HIBA
In industrial production, fatty acids and alcohols, which are cheap and easily available in large quantities, are used as the raw materials, and the β-hydroxylation method of fatty acids uses the β-oxidase system, which is the main metabolic pathway of fatty acids, and the related branched amino acid metabolic pathway It utilizes an enzyme system that is thought to be common with. In these metabolic pathways, ATP is essential in the main metabolic pathway, and therefore, in order to activate the metabolic system and increase the production rate of β-hydroxy acid, microorganisms such as glucose and glycerin are required under aerobic conditions. It is important to culture while supplementing the energy source. Therefore, as described above, major β-hydroxy acids, such as HIBA, are currently industrially produced by suspension-batch culturing microorganisms whose metabolism is controlled by mutation improvement in an aeration stirred tank.

【0005】[0005]

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、サスペ
ンジョン回分培養では、培養終了後、生産物(β−ヒド
ロキシ酸)と分離した微生物を再利用することが困難で
あるため、β−ヒドロキシ酸の生産能(代謝活性)を有
し、かなりの高菌体濃度にまで高められた活性微生物を
結果的には破棄しなければならず、工業的な生産技術と
しては不十分な操作と言わざるを得ない。微生物を繰り
返し利用する技術としては、まず微生物をなんらかの担
体に固定化することが考えられるが、一般的な、κ−カ
ラギーナン、アルギン酸ソーダなどによるゲル包括法
は、(1)ゲル化剤、固定化反応試薬を要する、(2)
基質や生産物の粒子内物質移動速度が小さい、(3)無
菌操作が困難、(4)担体の再使用が不可能、(5)担
体の機械的強度が弱いなどの欠点を有している。そのた
めβ−ヒドロキシ酸の製造のような、微生物の代謝系を
利用する場合は、前記の(2)〜(3)が致命的な問題
となり、このような包括固定化法を応用することは、工
業的には困難である。そこで、β−ヒドロキシ酸の工業
生産においては、活性を有する微生物を最大限有効利用
するために、前記の(1)〜(4)の問題を、とりわけ
(2)、(3)の問題を克服できるような新たなβ−ヒ
ドロキシ酸生産微生物の固定化法の開発が望まれてい
た。
However, since it is difficult to reuse the microorganisms separated from the product (β-hydroxy acid) in the suspension batch culture after the completion of the culture in the suspension batch culture, the β-hydroxy acid production ability is low. It is necessary to discard active microorganisms that have (metabolic activity) and have been raised to a considerably high bacterial cell concentration, and this is an operation that is insufficient as an industrial production technique. . As a technique for repeatedly using microorganisms, it is possible to first immobilize the microorganisms on some carrier, but the general gel encapsulation method using κ-carrageenan, sodium alginate, etc. is (1) gelling agent, immobilization Requires reaction reagents, (2)
It has drawbacks such as low mass transfer rate of particles in substrates and products, (3) aseptic operation is difficult, (4) carrier cannot be reused, and (5) carrier has weak mechanical strength. . Therefore, when utilizing a microbial metabolic system such as the production of β-hydroxy acid, the above-mentioned (2) to (3) are fatal problems, and the application of such a comprehensive immobilization method is Industrially difficult. Therefore, in industrial production of β-hydroxy acid, the above problems (1) to (4), especially the problems (2) and (3), are overcome in order to maximize the effective use of active microorganisms. It has been desired to develop a new immobilization method for β-hydroxy acid-producing microorganisms.

【0006】[0006]

【課題を解決するための手段】本発明者らは前記課題を
解決するために鋭意検討した。その結果、β−ヒドロキ
シ酸生産微生物を、その表面にスキン層を有し、機械的
強度の比較的強い多孔質材と共に培養することにより、
該多孔質材に無菌的に自然に該微生物を固定化すること
ができ、光学活性なβ−ヒドロキシ酸を製造することが
できることを見出し、本発明を完成するに到った。ま
た、本発明におけるβ−ヒドロキシ酸生産微生物の固定
化法は、従来からの包括固定化法に比べ、はるかに基質
や生産物の粒子内物質移動速度の大きいものであり、こ
の固定化法を採用することにより、繰り返し回分操作、
あるいは連続操作によるβ−ヒドロキシ酸の工業生産が
可能となり、活性を有するβ−ヒドロキシ酸生産微生物
を最大限に有効利用できる方法を提供するものである。
Means for Solving the Problems The inventors of the present invention have made extensive studies to solve the above problems. As a result, by culturing the β-hydroxy acid-producing microorganism with a porous material having a skin layer on its surface and relatively high mechanical strength,
The inventors have found that the microorganism can be naturally and aseptically immobilized on the porous material, and an optically active β-hydroxy acid can be produced, and thus the present invention has been completed. Further, the immobilization method of the β-hydroxy acid-producing microorganism in the present invention has a much higher mass transfer rate within the particles of the substrate and the product than the conventional entrapping immobilization method. By adopting, repeated batch operation,
Alternatively, it is possible to industrially produce β-hydroxy acid by continuous operation, and to provide a method for maximally effectively utilizing an active β-hydroxy acid-producing microorganism.

【0007】即ち、本発明の要旨は、β−ヒドロキシ酸
生産微生物を多孔質材と共に培養し、該多孔質材内に固
定化された該微生物を用いて生産することを特徴とする
光学活性なβ−ヒドロキシ酸の製造方法に関する。
That is, the gist of the present invention is that an .beta.-hydroxy acid-producing microorganism is cultured with a porous material, and the microorganism immobilized on the inside of the porous material is used for production. The present invention relates to a method for producing β-hydroxy acid.

【0008】本発明の方法における担体としては、多孔
質材が用いられる。多孔質材としては、なかでもその表
面に細孔を持つスキン層を有するものが好適に使用され
る。また該多孔質材の内部は空孔と該空孔の隔壁に小孔
を有する構造であるものが好ましい。多孔質材のスキン
層に存在する細孔の径は、通常5〜500μm、好まし
くは10〜40μmである。5μmよりも小さいとβ−
ヒドロキシ酸生産微生物の担体内への侵入が妨害され、
500μmより大きいと逆に一旦入ったものが漏洩し易
くなる。該多孔質材の内部に存在する空孔の径は、通常
100〜1000μm、好ましくは100〜500μm
である。1000μmより大きいとコロニーを作りにく
くなる。また、空孔の隔壁に存在する小孔の径は、通常
5〜500μm、好ましくは10〜40μmである。5
μmよりも小さいとβ−ヒドロキシ酸生産微生物が通過
しにくくなり、500μmより大きいとコロニーの形成
が阻害される。
A porous material is used as the carrier in the method of the present invention. As the porous material, one having a skin layer having pores on its surface is preferably used. Further, it is preferable that the inside of the porous material has a structure having pores and small holes in the partition walls of the pores. The diameter of the pores present in the skin layer of the porous material is usually 5 to 500 μm, preferably 10 to 40 μm. If it is smaller than 5 μm, β-
The entry of hydroxy acid-producing microorganisms into the carrier is hindered,
On the contrary, if it is larger than 500 μm, once it enters, it becomes easy to leak. The diameter of the pores present inside the porous material is usually 100 to 1000 μm, preferably 100 to 500 μm.
Is. If it is larger than 1000 μm, it becomes difficult to form colonies. The diameter of the small holes existing in the partition walls of the holes is usually 5 to 500 μm, preferably 10 to 40 μm. 5
If it is smaller than μm, it becomes difficult for β-hydroxy acid-producing microorganisms to pass through, and if it is larger than 500 μm, the formation of colonies is inhibited.

【0009】本発明においては、多孔質材としてこのよ
うな構造を有する担体であれば、いかなるものも利用で
きる。具体的にはセルロース多孔質材、セルロース・キ
チン質複合多孔質材、あるいはこれらに各種官能基を付
与したもの、例えばジエチルアミノエステル化セルロー
ス多孔質材、カルボキシメチル化セルロース多孔質材、
ジエチルアミノエステル化セルロース・キチン複合多孔
質材、カルボキシメチル化セルロース・キチン複合多孔
質材などをその代表的なものとして挙げることができ
る。本発明においては、特に限定されるものではない
が、好ましくは、セルロース多孔質材、セルロース・キ
チン質複合多孔質材等が挙げられる。
In the present invention, any carrier can be used as the porous material as long as it has such a structure. Specifically, a cellulose porous material, a cellulose-chitin composite porous material, or those having various functional groups added thereto, for example, diethylaminoesterified cellulose porous material, carboxymethylated cellulose porous material,
Typical examples thereof include a diethylaminoesterified cellulose / chitin composite porous material and a carboxymethylated cellulose / chitin composite porous material. In the present invention, although not particularly limited, a cellulose porous material, a cellulose / chitin-based composite porous material and the like are preferable.

【0010】このようなスキン層を有する多孔質は、公
知の方法により容易に製造することができる。例えば、
セルロース多孔質材を得る場合は、ビスコースと炭酸カ
ルシウム等の発泡剤を混合し、ノズルより押し出し、液
滴状に酸浴に落下させて、セルロースの再生と発泡とを
同時に行うことによって製造される。この際、ビスコー
スの熟成条件と酸浴の条件を変化させることで、空孔お
よび小孔構造の異なる数種類の多孔質材が得られる。通
常、この空孔は放射状になるが、発泡の状態によって
は、連泡状になる場合もある。連泡状の場合も、隔壁に
小孔を持ち、外表面にスキン層を有するならば、同様に
利用可能である。このようにノズルより噴出して製造さ
れるスキン層を有する多孔質材の形状は一般的に球形あ
るいは偏平した球形となる。このように球形に近い形状
は、培養する際、培養槽内での多孔質材の充填率を上げ
るうえで非常に好都合となる。多孔質材の粒子の径は、
いかなる径のものでも利用可能ではあるが、通常3〜7
mmであり、また培養槽内でβ−ヒドロキシ酸生産微生
物を効果的に固定化するには、培養槽径に対する多孔質
材の径を1/10以下にすることが望ましい。
The porous body having such a skin layer can be easily manufactured by a known method. For example,
In the case of obtaining a cellulose porous material, it is produced by mixing viscose and a foaming agent such as calcium carbonate, extruding from a nozzle, dropping in a droplet form into an acid bath, and simultaneously performing regeneration and foaming of cellulose. It At this time, by changing the aging conditions of viscose and the conditions of the acid bath, several kinds of porous materials having different pore and small pore structures can be obtained. Usually, the holes are radial, but depending on the state of foaming, they may be continuous bubbles. Even in the case of an open cell, it can be similarly used if it has a small hole in the partition wall and a skin layer on the outer surface. The shape of the porous material having the skin layer ejected from the nozzle in this manner is generally spherical or flattened. Such a shape close to a sphere is very convenient for increasing the filling rate of the porous material in the culture tank during culturing. The diameter of the particles of the porous material is
It can be used in any diameter, but usually 3 to 7
In addition, in order to effectively immobilize the β-hydroxy acid-producing microorganisms in the culture tank, it is desirable that the diameter of the porous material is 1/10 or less of the diameter of the culture tank.

【0011】また、多孔質材としてセルロース以外の、
例えば、アルギン酸カルシウムゲルを用いる場合も、表
面に5〜500μmの細孔を持つスキン層を有し、内部
に100〜1000μmの放射状、あるいは連泡状の空
孔を、その隔壁には5〜500μmの小孔を有する担体
であれば利用可能である。この担体は、アルギン酸ナト
リウム水溶液に、炭酸水素ナトリウムなどの発泡剤を添
加後、攪拌し、得られた泡沫状液体を、塩化カルシウム
溶液に滴下してゲル化させることによって作成される。
この際、アルギン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムの
濃度の組合せを変えることにより、様々な孔径の担体が
得られる。また、滴下する際の液滴の大きさを調節する
ことによって、様々な粒径の担体を作成できる。この場
合の粒径も培養槽径に対して1/10以下にすること
が、培養槽内でβ−ヒドロキシ酸生産微生物を効果的に
固定化する上で望ましい。
Further, as the porous material, other than cellulose,
For example, when calcium alginate gel is used, it has a skin layer having pores of 5 to 500 μm on the surface, radial or open pores of 100 to 1000 μm inside, and 5 to 500 μm in the partition walls. Any carrier having small pores can be used. This carrier is prepared by adding a foaming agent such as sodium hydrogen carbonate to an aqueous solution of sodium alginate, stirring the mixture, and dropping the resulting foamy liquid into a calcium chloride solution to cause gelation.
At this time, carriers having various pore sizes can be obtained by changing the combination of the concentrations of sodium alginate and sodium hydrogen carbonate. Further, by adjusting the size of the droplets when dropped, carriers with various particle sizes can be prepared. In this case, it is desirable that the particle size be 1/10 or less of the culture tank diameter in order to effectively immobilize the β-hydroxy acid-producing microorganisms in the culture tank.

【0012】本発明におけるβ−ヒドロキシ酸生産微生
物としては、酵母が通常使用される。酵母としては特に
限定されるものではなく使用可能であるが、代表的なも
のとして、ブレラ(Bullera) 属、キャンディダ(Candid
a) 属、クリプトコッカス(Cryptococcus)属、デバリオ
マイセス(Debaryomyces)属、エンドミセス(Endomyces)
属、ハンゼヌラ(Hansenula) 属、パキゾーレン(Pachyso
len)属、ピキア(Pichia)属、ロードスポリディウム(Rho
dosporidium)属、ロードトルーラ(Rhodotorula)属、ロ
ードコッカス(Rhodococcus) 属、サッカロミセス(Sacch
aromyces) 属、サッカロミコプシス(Saccharomycopsis)
属、シゾサッカロミセス(Schizosaccharomyces) 属、シ
ュバニオミセス(Schwanniomyces)属、スポリディオブラ
ス(Sporidiobulus) 属、トルロプシス(Torulopsis)属、
トリコスポロン(Trichosporon)属、ウィンゲア(Wingea)
属の酵母が挙げられる。具体的には、ブレラ・アルバ(B
ullera alba) IFO1030、キャンディダ・パラプシロシス
(Candida parapsilosis) IFO0708、同 IFO1022、キャン
ディダ・パラルゴーサ(Candida pararugosa) IFO0966、
同 KT84015、キャンディダ・ルゴーサ(Candida rugosa)
IFO0750、同 KT8201、同 KT8202 、同 IFO0591、キャ
ンディダ・ユーティリス(Candida utilis) IFO0396、ク
リプトコッカス・ラウレンティ(Cryptococcus Iaurenti
i) IFO0609、クリプトコッカス・テレウス(Cryptococcu
s terreus) IFO0727、デバリオミセス・ハンセンイ(Deb
aryomyces hansenii) IFO0032 、同 KT84016、同 IFO00
26、エンドミセス・オベテンシス(Endomyces ovetensi
s) CBS192.55 、エンドミセス・テトラスペルマ(Endomy
ces tetrasperma) CBS765.70 、同 KT84012、ハンゼヌ
ラ・アノマラ(Hansenula anomala) IFO0120 、ハンゼヌ
ラ・ヘネイチ(Hansenula heneicii) IFO1477、パキゾー
レン・タノスフィラス(Pachysolen tannosphilus) IFO1
007 、ピキア・ブルトニ(Pichia burtonii) IFO0844 、
同 KT84013、ピキア・ファリノサ(Pichia farinosa) IA
M4327 、ピキア・メンブラナエファシエンス(Pichia me
mbranaefaciens) IAM4904 、ロードスポリディウム・ト
ルロイデス(Rhodosporidium toruloides) IFO0559 、ロ
ードトルーラ・ルブラ(Rhodotorula rubra) IFO0383 、
ロードコッカス・ロードクロウス(Rhodococcus rhodoch
rous) IFO3338 、サッカロミセス・セレビシエ(Sacchar
omyces cerevisiae) IFO0735、同IAM4274、サッカロミ
セス・ルキシ(Saccharomyces rouxii) IFO0493、サッカ
ロミセス・ウバルム(Saccharomyces uvarum) IFO0751、
サッカロミコプシス・リポリティカ(Saccharomycopsis
lipolytica) IFO1542 、同 IFO1545、同 KT84011、シゾ
サッカロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)
IFO0362 、シュバニオミセス・ペルソニ(Schwanniomyce
s persoonii) IFO1842、スポリディオブルス・ジョンソ
ンニ(Sporidiobulus johnsonni) IFO6903 、トルロプシ
ス・キャンディダ(Torulopsis candida) IFO0380、トル
ロプシス・グロペンギエセリ(Torulopsis gropengiesse
ri) IFO0659 、トルロプシス・マグノリアエ(Torulopsi
s magnoliae) IFO0705、トリコスポロン・ベイゲリ(Tri
chosporon beigelii) ATCC22310 、トリコスポロン・フ
ァーメンタンス(Trichosporon fermentans) CBS2529 、
トリコスポロン・プルランス(Trichosporon pullulans)
IFO0114、トリゴノプシス・バリアビリス(Trigonopsis
variabilis) IFO0380、ウィンゲア・ロベルツィ(Winge
a robertsii) IFO1277、およびそれらから誘導された変
異株である。
Yeast is usually used as the β-hydroxy acid-producing microorganism in the present invention. The yeast is not particularly limited and can be used, but typical ones include genus Bullera and Candid.
a) Genus, Cryptococcus genus, Debaryomyces genus, Endomyces
Genus, Hansenula, Pachyso
len genus, Pichia genus, Rhodosporidium (Rho
genus dosporidium, genus Rhodotorula, genus Rhodococcus, Sacchomyces
aromyces), Saccharomycopsis
Genus, Schizosaccharomyces (Schizosaccharomyces) genus, Schwanniomyces (Schwanniomyces) genus, Sporidioburas (Sporidiobulus) genus, Torulopsis (Torulopsis) genus,
Trichosporon genus, Wingea
Yeast of the genus is mentioned. Specifically, Brera Alba (B
ullera alba) IFO1030, Candida parapsilosis
(Candida parapsilosis) IFO0708, IFO1022, Candida pararugosa IFO0966,
KT84015, Candida rugosa
IFO0750, KT8201, KT8202, IFO0591, Candida utilis IFO0396, Cryptococcus Iaurenti
i) IFO0609, Cryptococcu
s terreus) IFO0727, Debaryomyces Hansenyi (Deb
aryomyces hansenii) IFO0032, KT84016, IFO00
26, Endomyces ovetensi
s) CBS192.55, Endomys Tetrasperma (Endomy
ces tetrasperma) CBS765.70, KT84012, Hansenula anomala IFO0120, Hansenula heneicii IFO1477, Pachysolen tannosphilus IFO1
007, Pichia burtonii IFO0844,
KT84013, Pichia farinosa IA
M4327, Pichia membrana efaciens
mbranaefaciens) IAM4904, Rhodosporidium toruloides IFO0559, Rhodotorula rubra IFO0383,
Rhodococcus rhodoch
rous) IFO3338, Saccharomyces cerevisiae (Sacchar
omyces cerevisiae) IFO0735, IAM4274, Saccharomyces rouxii IFO0493, Saccharomyces uvarum IFO0751,
Saccharomycopsis
lipolytica) IFO1542, IFO1545, KT84011, Schizosaccharomyces pombe
IFO0362, Schwanniomyce
s persoonii) IFO1842, Sporidiobulus johnsonni IFO6903, Torulopsis candida IFO0380, Torulopsis gropengiesse
ri) IFO0659, Torulopsis magnoliae
s magnoliae) IFO0705, Trichosporon Beigeri (Tri
chosporon beigelii) ATCC22310, Trichosporon fermentans CBS2529,
Trichosporon pullulans
IFO0114, Trigonopsis barrierbilis
variabilis) IFO0380, Wingea Roberti
a robertsii) IFO1277 and mutants derived therefrom.

【0013】なお、このうち、キャンディダ・ルゴーサ
KT8201 、同 KT8202 、サッカロミコプシス・リポリテ
ィカ KT84011、エンドミセス・テトラスペルマ KT8401
2、ピキア・ブルトニ KT84013、キャンディダ・パラル
ゴーサ KT84015、デバリオマイセス・ハンセンイ KT840
16については、工業技術院微生物工業研究所に表1に示
した番号で寄託してある。
Of these, Candida rugosa
KT8201, KT8202, Saccharomycopsis repolitica KT84011, Endomyces tetrasperma KT8401
2, Pichia Burtoni KT84013, Candida Pararugosa KT84015, Debaryomyces Hansenyi KT840
16 has been deposited at the Institute for Microbial Industry, Institute of Industrial Science and Technology, with the numbers shown in Table 1.

【0014】[0014]

【表1】 [Table 1]

【0015】本発明におけるβ−ヒドロキシ酸生産微生
物の変異株を得るためには、自然変異あるいは人工変異
が利用され、通常、効率的に行うためには紫外線照射お
よび、N−メチル−N−ニトロ−N’−ニトロソグアニ
ジンなどの変異誘起剤による処理が用いられるが、特に
この方法に限定されるものではない。
In order to obtain the mutant strain of the β-hydroxy acid-producing microorganism of the present invention, natural mutation or artificial mutation is used. Usually, in order to perform efficiently, ultraviolet irradiation and N-methyl-N-nitro are usually used. Treatment with a mutagenesis agent such as -N'-nitrosoguanidine is used, but is not particularly limited to this method.

【0016】また、これらの微生物により生産される光
学活性なβ−ヒドロキシ酸は、L −(+)−β−ヒドロ
キシ酪酸、L −(+)−β−ヒドロキシ吉草酸、L
(+)−β−ヒドロキシイソ酪酸、L −(+)−β−ヒ
ドロキシイソカプロン酸、L −(+)−β−ヒドロキシ
プロピオン酸、D −(−)−β−ヒドロキシ酪酸、D
(−)−β−ヒドロキシ吉草酸、D −(−)−β−ヒド
ロキシイソ酪酸、D −(−)−β−ヒドロキシイソカプ
ロン酸、D −(−)−β−ヒドロキシプロピオン酸など
である。
Further, optically active beta-hydroxy acid produced by these microorganisms, L - (+) - β- hydroxybutyrate, L - (+) - β- hydroxy valeric acid, L -
(+)-Β-hydroxyisobutyric acid, L -(+)-β-hydroxyisocaproic acid, L -(+)-β-hydroxypropionic acid, D -(-)-β-hydroxybutyric acid, D-
(-)-Β-hydroxyvaleric acid, D -(−)-β-hydroxyisobutyric acid, D -(−)-β-hydroxyisocaproic acid, D -(−)-β-hydroxypropionic acid and the like.

【0017】次に、具体的に培養においてスキン層を有
する多孔質材にβ−ヒドロキシ酸生産微生物を固定化す
る方法を説明する。β−ヒドロキシ酸生産のための培養
方法および培養槽形式は、使用する微生物の種類、多孔
質材の種類により適宜選択される。培養方法としては、
回分、半回分、連続培養等、いかなる方法も採用できる
が、β−ヒドロキシ酸の製造方法においては、基質であ
るグルコース濃度、β−脂肪酸を一定濃度以下に押さえ
る必要があることから、消費量に応じて基質を流加する
半回分培養、または定常状態を作りだす連続培養が好ま
しい。基質としてのβ−脂肪酸は、目的とするβ−ヒド
ロキシ酸に対応するものが使用される。例えば、生産物
がヒドロキシイソ酪酸の場合はイソ酪酸、ヒドロキシ酪
酸の場合は酪酸が使用される。また、培養槽形式として
は、塔型醗酵槽(気泡塔型、噴流槽型、ドラフトチュー
ブ型等)、攪拌槽等、いかなるものも使用できるが、よ
り効率的に固定化するには、多孔質材まわりに働く剪断
力が比較的小さい塔型醗酵槽が好ましい。
Next, a method for specifically immobilizing a β-hydroxy acid-producing microorganism on a porous material having a skin layer in culture will be described. The culture method and culture tank format for β-hydroxy acid production are appropriately selected depending on the type of microorganism and the type of porous material used. As a culture method,
Although any method such as batch, semi-batch, continuous culture, etc. can be adopted, in the method for producing β-hydroxy acid, glucose concentration as a substrate and β-fatty acid must be kept below a certain concentration. Accordingly, a semi-batch culture in which a substrate is fed, or a continuous culture in which a steady state is created is preferable. As the β-fatty acid as the substrate, one corresponding to the desired β-hydroxy acid is used. For example, isobutyric acid is used when the product is hydroxyisobutyric acid, and butyric acid is used when the product is hydroxybutyric acid. Further, as the culture tank type, any type such as a tower type fermentation tank (bubble tower type, jet tank type, draft tube type), a stirring tank, etc. can be used, but in order to immobilize more efficiently, it is porous A tower type fermenter having a relatively small shearing force acting around the material is preferable.

【0018】培養条件は特に限定されるものではなく、
温度25〜45℃、pH4〜9、培養時間1〜14日程
度であり、通常の条件下で行われる。また、好気的条件
であっても嫌気的条件であってもよい。好気的条件で培
養を行う場合の通気量は、特に限定されるものではない
が通常1〜10vvm(1分間あたりの通気量を培養液
量で割った値)程度である。
The culture conditions are not particularly limited,
The temperature is 25 to 45 ° C., the pH is 4 to 9, the culturing time is about 1 to 14 days, and it is carried out under normal conditions. Further, it may be an aerobic condition or an anaerobic condition. The aeration rate when culturing under aerobic conditions is not particularly limited, but is usually about 1 to 10 vvm (a value obtained by dividing the aeration rate per minute by the culture solution amount).

【0019】気泡塔型醗酵槽を用いる場合、図1のよう
に多孔質材を充填し、多孔質材を完全に培地で浸し、培
養槽下部より通気して培養を行う。このとき、培地は、
多孔質材の容積に対し、多すぎない方がよい。すなわ
ち、通気したときに、多孔質材が若干流動するために必
要十分な量、これは培養槽の形式、多孔質材の大きさに
よって適宜選択されるが、多孔質材の占めるみかけの容
積に対して、およそ1〜2割増が望ましい。多孔質材が
全く流動しない場合には、槽内での培地の攪拌が行われ
にくくなり、物質移動、酸素移動が悪くなるために、β
−ヒドロキシ酸生産微生物の増殖および固定化の効率が
低下し、好ましくない。
When a bubble column type fermentation tank is used, the porous material is filled as shown in FIG. 1, the porous material is completely immersed in the medium, and the culture is performed by aerating from the lower part of the culture tank. At this time, the medium is
It is better not to be too large with respect to the volume of the porous material. That is, when aerated, the amount necessary and sufficient for the porous material to slightly flow, which is appropriately selected depending on the type of the culture tank and the size of the porous material. On the other hand, about 10 to 20% increase is desirable. If the porous material does not flow at all, it becomes difficult to stir the medium in the tank, mass transfer and oxygen transfer deteriorate, and β
-The efficiency of growth and immobilization of hydroxy acid-producing microorganisms is reduced, which is not preferable.

【0020】上記方法によって、β−ヒドロキシ酸生産
微生物は多孔質材内の放射状または連泡状の空孔にコロ
ニーを形成し、比較的安定に保持される。固定化のメカ
ニズムは、空孔壁面にβ−ヒドロキシ酸生産微生物が付
着して、そこからコロニーが広がる場合、および、一旦
空孔内に入ったβ−ヒドロキシ酸生産微生物がかたまっ
て増殖した結果、小孔から外部に出られなくなる場合な
どが想定される。いずれの場合もスキン層に存在する細
孔、放射状または連泡状の空孔隔壁の小孔のサイズは、
固定化しようとするβ−ヒドロキシ酸生産微生物のサイ
ズに対して、β−ヒドロキシ酸生産微生物が通過可能で
あるが、ある程度移動が制約されるような、孔径である
ことが重要である。
By the above-mentioned method, the β-hydroxy acid-producing microorganisms form colonies in the pores of the porous material, which are radial or open-celled, and are retained relatively stably. The mechanism of immobilization is that when β-hydroxy acid-producing microorganisms adhere to the pore wall surface and colonies spread from there, and as a result of β-hydroxy acid-producing microorganisms that once entered the pores aggregate and proliferate, It is assumed that it may not be possible to go outside from the small hole. In any case, the size of the pores present in the skin layer, the pores of the radial or open-celled partition walls,
It is important that the pore size is such that the β-hydroxy acid-producing microorganisms can pass through the size of the β-hydroxy acid-producing microorganisms to be immobilized, but movement is restricted to some extent.

【0021】このようにしてβ−ヒドロキシ酸生産微生
物を多孔質材と共に培養し、該多孔質材内に固定化され
た微生物の代謝を利用して光学活性なβ−ヒドロキシ酸
を製造することができ、産生したβ−ヒドロキシ酸の培
地からの分離、精製は、有機溶媒、例えばエーテル、ク
ロロホルム、酢酸エチル等による抽出等により容易に行
うことができる。
In this way, the β-hydroxy acid-producing microorganism can be cultured with the porous material, and the metabolism of the microorganism immobilized in the porous material can be used to produce an optically active β-hydroxy acid. The β-hydroxy acid thus produced can be easily separated and purified from the medium by extraction with an organic solvent such as ether, chloroform or ethyl acetate.

【0022】[0022]

【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに詳しく説
明するが、本発明はもとよりこれらに限定されるもので
はない。 実施例1 500mlの坂口フラスコに、25mlの培地(グルコ
ース30g/L、(NH4 2 HPO4 13g/L、K
2 PO4 7g/L、NaCl 100mg/L、Mg
SO4 ・7H2 O 1g/L、ZnSO4 ・7H2
100mg/L、FeSO4 ・7H2 O 90mg/
L、MnSO4 ・4−6H2 O 10mg/L、CuS
4 ・5H2 O 5mg/L、イーストエキス3g/
L、さらに生産物がヒドロキシイソ酪酸の場合はイソ酪
酸、ヒドロキシ酪酸の場合は酪酸20g/L、pH7.
5)およびスキン層のある直径4mmの球形セルロース
ビーズ(レンゴー製セルロースビーズII型、スキン層の
細孔の径:40μm、空孔の径:300μm、小孔の
径:40μm)150個を加えて、オートクレーブ後、
表2および表3に示す菌株を用いて植菌し、振盪速度1
00 oscillations/min 、30℃で培養した。グルコー
スがなくなった時点で、ビーズを残して培地を回収し、
オートクレーブした新鮮培地(組成は同上)を入れ、再
び培養を行った。基質がなくなった時点で培養を終了し
た。各培地から表2および表3のそれぞれに示すβ−ヒ
ドロキシ酸を酢酸エチルによって抽出し、分析に用い
た。
EXAMPLES The present invention will be described in more detail by way of examples, which by no means limit the scope of the present invention. Example 1 In a 500 ml Sakaguchi flask, 25 ml of medium (glucose 30 g / L, (NH 4 ) 2 HPO 4 13 g / L, K
H 2 PO 4 7 g / L, NaCl 100 mg / L, Mg
SO 4 · 7H 2 O 1g / L, ZnSO 4 · 7H 2 O
100mg / L, FeSO 4 · 7H 2 O 90mg /
L, MnSO 4 · 4-6H 2 O 10mg / L, CuS
O 4 · 5H 2 O 5mg / L, yeast extract 3g /
L, further isobutyric acid when the product is hydroxyisobutyric acid, butyric acid 20 g / L when the product is hydroxybutyric acid, pH 7.
5) and 150 spherical cellulose beads having a skin layer and having a diameter of 4 mm (Cellulose beads type II made by Rengo, pore diameter of skin layer: 40 μm, pore diameter: 300 μm, small pore diameter: 40 μm) , After autoclaving,
The strains shown in Tables 2 and 3 were used to inoculate, and the shaking speed was 1
The cells were cultured at 30 oscillations at 00 oscillations / min. When the glucose is exhausted, collect the medium leaving the beads,
An autoclaved fresh medium (the same in composition) was added, and the culture was performed again. The culture was terminated when the substrate was used up. The β-hydroxy acids shown in Tables 2 and 3 were extracted from each medium with ethyl acetate and used for analysis.

【0023】一方、ビーズを入れずに坂口フラスコで振
盪培養した菌体を、常法に従いκ−カラギーナンビーズ
に包括固定化したものを、500ml坂口フラスコに新
鮮培地25mlとともに加え、振盪速度100 oscilla
tions/min 、30℃で培養した。グルコースがなくなっ
たところで培養液を新鮮培地と入れ替え、再び培養し、
前記と同様にして生産物の抽出を行った。なお、抽出さ
れたβ−ヒドロキシ酸の分析は、キャピュラリーカラム
HP−FFAPを装着した、ヒューレッド・パッカード
製ガスクロマトグラフィーにより行った。それぞれ、1
回目、2回目でのβ−ヒドロキシ酸の培地中濃度は表4
および表5に示すように、κ−カラギーナンビーズを用
いて菌体を固定した場合には、酸素供給が悪くなるた
め、生産性は悪いが、セルロースビーズを用いれば、良
好な生産性が得られ、また、繰り返し使用が可能であっ
た。
On the other hand, microbial cells cultured by shaking in a Sakaguchi flask without beads were entrapped and immobilized on κ-carrageenan beads according to a conventional method and added to a 500 ml Sakaguchi flask together with 25 ml of a fresh medium, and a shaking speed of 100 oscilla.
Cultured at 30 ° C. at tions / min. When the glucose is exhausted, replace the culture medium with a fresh medium, culture again,
The product was extracted in the same manner as above. The extracted β-hydroxy acid was analyzed by gas chromatography manufactured by Hewlett Packard equipped with a capillary column HP-FFAP. 1 each
The concentrations of β-hydroxy acid in the medium at the second and second times are shown in Table 4.
As shown in Table 5 and Table 5, when the bacterial cells were fixed using κ-carrageenan beads, the oxygen supply was poor and the productivity was poor. However, when the cellulose beads were used, good productivity was obtained. Also, it could be used repeatedly.

【0024】[0024]

【表2】 [Table 2]

【0025】[0025]

【表3】 [Table 3]

【0026】[0026]

【表4】 [Table 4]

【0027】[0027]

【表5】 [Table 5]

【0028】実施例2 図1の醗酵槽(容量2L)に、スキン層を持つセルロー
ス担体(レンゴー製、直径4mm、スキン層の細孔の
径:40μm、空孔の径:300μm、小孔の径:40
μm)を800ml充填し、後述の合成培地を、容積が
合計1Lになるように加えて培養し、β−D −ヒドロキ
シイソ酪酸の生産を行った。菌株は、Candida rugosa K
T8501 、培地組成は、グルコース40g/L、イソ酪酸
20g/L、(NH4 2 HPO4 13g/L、KH2
PO4 7g/L、NaCl 100mg/L、MgSO
4 ・7H2 O 1g/L、ZnSO4 ・7H2 O 10
0mg/L、FeSO4 ・7H2 O 90mg/L、M
nSO4 ・4−6H2 O 10mg/L、CuSO4
5H2 O 5mg/L、塩酸チアミン1.8mg/L、
ビオチン1mg/Lである。まず、30℃、通気量2.
5L/minで回分培養を行ない、グルコースがなくな
った時点で、20%グルコース溶液および20%イソ酪
酸溶液を、グルコースは濃度0.02g/L以下、イソ
酪酸は濃度3g/Lになるように流加し、β−D −ヒド
ロキシイソ酪酸を生産した。24時間ごとに、培地を交
換し、生産を繰り返したときの、醗酵槽あたりの生産速
度を表6に示す。その結果、スキン層のあるセルロース
ビーズは、菌体の脱落が少ないため、2回目、3回目で
も高い生産速度を保っていることがわかる。
Example 2 A fermenter (capacity 2 L) shown in FIG. 1 was used. A cellulose carrier having a skin layer (made by Rengo, diameter 4 mm, pore diameter of skin layer: 40 μm, pore diameter: 300 μm, small pore size) was used. Diameter: 40
(800 μm) and 800 ml of the synthetic medium described later was added thereto so that the total volume became 1 L, and the mixture was cultured to produce β- D -hydroxyisobutyric acid. The strain is Candida rugosa K
T8501, medium composition: glucose 40 g / L, isobutyric acid 20 g / L, (NH 4 ) 2 HPO 4 13 g / L, KH 2
PO 4 7 g / L, NaCl 100 mg / L, MgSO
4 · 7H 2 O 1g / L , ZnSO 4 · 7H 2 O 10
0mg / L, FeSO 4 · 7H 2 O 90mg / L, M
nSO 4・ 4-6H 2 O 10 mg / L, CuSO 4
5H 2 O 5 mg / L, thiamine hydrochloride 1.8 mg / L,
Biotin is 1 mg / L. First, 30 ° C., ventilation amount 2.
After performing batch culture at 5 L / min, when glucose was exhausted, a 20% glucose solution and a 20% isobutyric acid solution were flown so that the concentration of glucose was 0.02 g / L or less and the concentration of isobutyric acid was 3 g / L. Was added to produce β- D -hydroxyisobutyric acid. Table 6 shows the production rate per fermentor when the medium was replaced and the production was repeated every 24 hours. As a result, it can be seen that the cellulosic beads having the skin layer maintain a high production rate even at the second and third times because the bacterial cells are less likely to fall off.

【0029】[0029]

【表6】 [Table 6]

【0030】実施例3 実施例2と同様の要領で、β−D −ヒドロキシ酪酸の連
続生産を行った。担体としては、スキン槽のあるレンゴ
ー製セルロース担体(スキン層の細孔の径:40μm、
空孔の径:300μm、小孔の径:40μm)を用い
た。菌株は、Candida rugosa KT8201 であり、培地組成
は実施例2と同様のものを用いた。まず、30℃、通気
量2.5L/minで回分培養を行ない、グルコースが
なくなった時点で、20%グルコース溶液および20%
酪酸溶液を、グルコースは濃度0.02g/L以下、酪
酸は濃度3g/Lに保ちながら流加し、流加量と等量の
培地を抜きだしながらβ−D −ヒドロキシ酪酸を生産し
た。図2に、連続操作開始後の流出液中のβ−D −ヒド
ロキシ酪酸の濃度の時間変化を示す。このように、連続
培養においても、好気的プロセスであるβ−D −ヒドロ
キシ酪酸生産を、効率的に行えることが確認された。
Example 3 In the same manner as in Example 2, continuous production of β- D -hydroxybutyric acid was carried out. As the carrier, a Rengo cellulose carrier having a skin tank (pore diameter of skin layer: 40 μm,
Diameter of pores: 300 μm, diameter of small pores: 40 μm) was used. The strain was Candida rugosa KT8201, and the medium composition used was the same as in Example 2. First, batch culture was performed at 30 ° C. and an aeration rate of 2.5 L / min, and when glucose was exhausted, 20% glucose solution and 20%
A butyric acid solution was fed while maintaining glucose at a concentration of 0.02 g / L or less and butyric acid at a concentration of 3 g / L, and β- D -hydroxybutyric acid was produced while withdrawing the same amount of medium as the fed amount. FIG. 2 shows the change over time in the concentration of β- D -hydroxybutyric acid in the effluent after the start of continuous operation. Thus, it was confirmed that β- D -hydroxybutyric acid, which is an aerobic process, can be efficiently produced even in continuous culture.

【0031】[0031]

【発明の効果】本発明の製造方法により、β−ヒドロキ
シ酸生産微生物を繰り返し使用するなどの有効利用が可
能となり、光学活性なβ−ヒドロキシ酸の生産性の向
上、生産のための培養槽の小型化が実現される。また、
生産されたβ−ヒドロキシ酸と微生物の分離が容易とな
り、β−ヒドロキシ酸の精製などの後処理プロセスでの
負荷の軽減が図れるなど、工業的に有利な方法である。
INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the production method of the present invention, it becomes possible to effectively utilize β-hydroxy acid-producing microorganisms repeatedly, and thus the productivity of optically active β-hydroxy acid is improved and the culture tank for production is improved. Miniaturization is realized. Also,
This is an industrially advantageous method because the produced β-hydroxy acid can be easily separated from the microorganism, and the load in the post-treatment process such as the purification of β-hydroxy acid can be reduced.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図1】図1は本発明において気泡塔型醗酵槽を用いる
場合の概略図を示す。
FIG. 1 shows a schematic view of the case where a bubble column type fermenter is used in the present invention.

【図2】図2は本発明の方法を用いてβ−D −ヒドロキ
シ酪酸を連続的に生産した場合の流出液中のβ−D −ヒ
ドロキシ酪酸の濃度と時間変化を示す。
FIG. 2 shows the concentration of β- D -hydroxybutyric acid in the effluent and changes with time when β- D -hydroxybutyric acid was continuously produced using the method of the present invention.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 C12R 1:72) (C12P 7/42 C12R 1:78) (C12P 7/42 C12R 1:84) (C12P 7/42 C12R 1:865) (C12P 7/42 C12R 1:85) (C12P 7/42 C12R 1:88) ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 5 Identification code Internal reference number FI Technical display location C12R 1:72) (C12P 7/42 C12R 1:78) (C12P 7/42 C12R 1:84) (C12P 7/42 C12R 1: 865) (C12P 7/42 C12R 1:85) (C12P 7/42 C12R 1:88)

Claims (5)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】 β−ヒドロキシ酸生産微生物を多孔質材
と共に培養し、該多孔質材内に固定化された該微生物を
用いて生産することを特徴とする光学活性なβ−ヒドロ
キシ酸の製造方法。
1. A method for producing an optically active β-hydroxy acid, which comprises culturing a β-hydroxy acid-producing microorganism with a porous material, and producing using the microorganism immobilized in the porous material. Method.
【請求項2】 多孔質材が、その表面に細孔を持つスキ
ン層を有し、その内部に空孔と該空孔の隔壁に小孔を有
する構造であることを特徴とする請求項1記載の製造方
法。
2. The porous material has a structure having a skin layer having pores on the surface thereof, and having pores therein and small pores in partition walls of the pores. The manufacturing method described.
【請求項3】 多孔質材のスキン層に存在する細孔の径
が5〜500μm、空孔の径が100〜1000μm、
該空孔の隔壁に存在する小孔の径が5〜500μmの範
囲にあることを特徴とする請求項2記載の製造方法。
3. The diameter of the pores present in the skin layer of the porous material is 5 to 500 μm, the diameter of the pores is 100 to 1000 μm,
The manufacturing method according to claim 2, wherein the diameter of the small holes present in the partition walls of the holes is in the range of 5 to 500 µm.
【請求項4】 β−ヒドロキシ酸が、L −(+)−β−
ヒドロキシ酪酸、L−(+)−β−ヒドロキシ吉草酸、
L −(+)−β−ヒドロキシイソ酪酸、L −(+)−β
−ヒドロキシイソカプロン酸、L −(+)−β−ヒドロ
キシプロピオン酸、D −(−)−β−ヒドロキシ酪酸、
D −(−)−β−ヒドロキシ吉草酸、D −(−)−β−
ヒドロキシイソ酪酸、D −(−)−β−ヒドロキシイソ
カプロン酸、またはD −(−)−β−ヒドロキシプロピ
オン酸である請求項1〜3いずれかに記載の製造方法。
4. The β-hydroxy acid is L -(+)-β-
Hydroxybutyric acid, L -(+)-β-hydroxyvaleric acid,
L -(+)-β-hydroxyisobutyric acid, L -(+)-β
-Hydroxyisocaproic acid, L -(+)-β-hydroxypropionic acid, D -(-)-β-hydroxybutyric acid,
D -(-)-β-hydroxyvaleric acid, D -(−)-β-
The production method according to any one of claims 1 to 3, which is hydroxyisobutyric acid, D -(-)-β-hydroxyisocaproic acid, or D -(-)-β-hydroxypropionic acid.
【請求項5】 β−ヒドロキシ酸生産微生物が、ブレラ
(Bullera) 属、キャンディダ(Candida) 属、クリプトコ
ッカス(Cryptococcus)属、デバリオマイセス(Debaryomy
ces)属、エンドミセス(Endomyces) 属、ハンゼヌラ(Han
senula) 属、パキゾーレン(Pachysolen)属、ピキア(Pic
hia)属、ロードスポリディウム(Rhodosporidium)属、ロ
ードトルーラ(Rhodotorula) 属、ロードコッカス(Rhodo
coccus) 属、サッカロミセス(Saccharomyces) 属、サッ
カロミコプシス(Saccharomycopsis)属、シゾサッカロミ
セス(Schizosaccharomyces)属、シュバニオミセス(Sch
wanniomyces)属、スポリディオブラス(Sporidiobulus)
属、トルロプシス(Torulopsis)属、トリコスポロン(Tri
chosporon)属、ウィンゲア(Wingea)属に属する微生物、
もしくはそれらから誘導された変異株である請求項1〜
4いずれかに記載の製造方法。
5. The β-hydroxy acid-producing microorganism is a brera.
(Bullera), Candida, Cryptococcus, Debaryomyces
ces, Endomyces, Hansenula
senula), Pachysolen, Pichia
hia genus, Rhodosporidium genus, Rhodotorula genus, Rhodococcus
genus coccus, genus Saccharomyces, genus Saccharomycopsis, genus Schizosaccharomyces, schwaniomyces
wanniomyces), Sporidiobulus
Genus, Torulopsis, Trichosporon
genus chosporon), microorganisms belonging to the genus Wingea,
Alternatively, it is a mutant strain derived from them.
4. The method according to any one of 4 above.
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7273734B2 (en) 2001-07-16 2007-09-25 Canon Kabushiki Kaisha Process for producing a polyester
JP2015142577A (en) * 2008-07-04 2015-08-06 フィリップ マルリエ Method for producing alkenes by enzymatic decarboxylation of 3-hydroxyalkanoic acids
US11242308B2 (en) 2014-10-17 2022-02-08 Cargill, Incorporated Methods for producing an ester of an alpha, beta-unsaturated carboxylic acid
US12103912B2 (en) 2013-10-17 2024-10-01 Cargill, Incorporated Methods for producing alkyl hydroxyalkanoates

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