JPH05227861A

JPH05227861A - 非ヒトキメラ細胞

Info

Publication number: JPH05227861A
Application number: JP4144568A
Authority: JP
Inventors: Yair Reisner; レイスナーヤイアー
Original assignee: Yeda Research and Development Co Ltd
Current assignee: Yeda Research and Development Co Ltd
Priority date: 1991-06-04
Filing date: 1992-06-04
Publication date: 1993-09-07
Anticipated expiration: 2013-02-25
Also published as: JP2718596B2; EP0517199A1

Abstract

(57)【要約】【目的】長期に安定な、異種好ましくはヒト組織また
は細胞を有する非ヒトキメラ哺乳動物を提供する。【構成】哺乳動物Ｍ１とは別の種の哺乳動物Ｍ３（好
ましくはヒト）由来の造血細胞以外の組織または細胞、
およびＭ３以外の種の遺伝的に決定された造血細胞不全
症を有する哺乳動物Ｍ２（好ましくはＭ１と同じ種であ
る）由来の造血細胞、その造血細胞が実質的に抑制また
は破壊されている哺乳動物Ｍ１に、二重移植することに
より、長期に安定な、造血細胞以外の異種組織または細
胞を有する非ヒトキメラ哺乳動物Ｍ４が得られる。特
に、長期のヒト組織または悪性腫瘍細胞を有するキメラ
マウスは、ヒト臓器または黒色腫細胞由来の組織および
重症の複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）を有するマウス由来
の骨髄細胞の二重移植により得られた。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野本発明は、長期に安定な、異種好ましくはヒトの組織ま
たは細胞を有する非ヒトキメラ哺乳動物、およびその作
成方法に関する。さらに詳しくは、本発明は、重症複合
免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスからの骨髄細胞とヒトド
ナーからの悪性腫瘍細胞の二重移植によって得られる、
長期に安定なヒト悪性腫瘍細胞を有するキメラマウスに
関し、これは異なる薬剤またはそれらの組合せの化学療
法感受性試験に使用できる。

【０００２】背景技術の説明免疫不全動物は、造血疾患の研究のための実験モデルと
して使用されている。異種骨髄の移植は、例えばラット
とマウスのような近縁関係の種の間でのみ成功している
（ｖａｎＢｅｋｋｕｍ，Ｄ．Ｗ．＆Ｌｏｗｅｎｂ
ｅｒｇ，Ｂ．：ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐ
ｌａｎｔａｔｉｏｎ：ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｃｈ
ａｎｉｓｍｓａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＰｒａｃｔ
ｉｃｅ，Ｄｅｋｋｅｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ，３１１−３
５０，１９８５の総説参照）。最近、ヒト起源の免疫系
を有するマウスの作成が試みられている。このような動
物はヒト造血細胞やヒト免疫系の研究のモデルとして使
用できる。一例としてはヒト免疫系からの細胞を「重症
複合免疫不全症」（ＳＣＩＤ）と呼ばれる遺伝状態を有
する自然変異株マウスへ移植することによって得られる
ＳＣＩＤ−ｈｕマウスがある（ＭｃＣｕｎｅ，Ｊ．Ｍ．
ｅｔａｌ．：Ｓｃｉｅｎｃｅ２４１，１６３２，
１９８８；ＮａｍｉｋａｗａＲ．，Ｗｅｉｎｂａｅｃ
ｈｅｒ，Ｋ．Ｎ．，Ｋａｎｅｓｈｉｍａ，Ｈ．，Ｙｅ
ｅ，Ｅ．Ｊ．ａｎｄＭｃＣｕｎｅ，Ｊ．Ｍ．：Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．１７５，１０５５，１９９０）。これら
のモデルにおけるヒト細胞の移植は初めてマウスへのＨ
ＩＶの感染を可能にしたが（Ｎａｍｉｋａｗａ，ｅｔ
ａｌ．，前出）ヒト細胞の生存は極度に限られていた。
移植後２〜３カ月を過ぎるとマウスの抹消血には、有意
な数のヒトリンパ球は検出されなかった。しかもＭｃＣ
ｕｎｅのモデルでは、ＳＣＩＤマウスに移植されたヒト
胎児肝からの造血幹細胞は、腎線維膜下に移植できるヒ
ト胎児胸腺上皮の移植片を補充しないことには、植え付
けることができないかまたはＴ細胞に分化されなかっ
た。他のマウスモデルは、ヒト造血幹細胞の、遺伝的な
免疫不全Ｂｇ／Ｎｕ／Ｘｉｄマウスへの移植に基づくも
のである。この場合も、ヒトリンパ球は移植片対宿主病
を誘導しなかった（Ｋａｍｅｌ−Ｒｅｉｄ，Ｓ．ａｎｄ
Ｄｉｃｋ，Ｊ．Ｅ．：Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，１７
０６，１９８８）。

【０００３】以前の臨床研究において、ヒトＳＣＩＤ
（Ｒｅｉｓｎｅｒ，Ｙ．ｅｔａｌ．：Ｂｌｏｏｄ，６
１，３４１，１９８３）、または白血病患者（Ｋｅｅｖ
ｅｒ，Ｃ．Ａ．ｅｔａｌ．：Ｂｌｏｏｄ，７３，１３
４０，１９８９）へのＴ細胞枯渇骨髄の移植後、ヒト幹
細胞からの成熟Ｔ細胞への分化は遅く、１〜４カ月を要
することが示唆されている。マウスでのこのようなＴ細
胞の分化は致死全身照射（ＴＢＩ）後約１４〜２１日ご
ろに起こる。再構築の速度におけるこれらの差を考慮す
ると、マウスの微小環境内では、マウスおよびヒトサイ
トカイン間、ならびに再認識に関与する他の分子間の弱
い交差反応性により、ヒト幹細胞の分化は非効率的で遅
いと言えることは、明白である。

【０００４】免疫および造血系を強く抑制した後は、致
死ＴＢＩ後と同様、骨髄が提供されないとマウスは２週
以内に死亡する。このようなマウスではヒト幹細胞が理
論的に生育し、マウスの造血系を再構築したとしても、
成熟免疫担当リンパ球または他のリンパ球への分化が遅
いことから、マウスを感染から保護するのに充分な数に
達するのが阻害され、さらに、造血コンパートメントの
不十分な補充は造血細胞不全による死からマウスを保護
できない。他方、実質的な数の造血およびリンパ系細胞
が残る亜致死条件のプロトコール（例えば亜致死ＴＢ
Ｉ）では、内因性のマウス細胞が移植ヒト細胞と効果的
に競合できて、結局はヒト移植片を拒絶することにな
る。

【０００５】致死的照射した正常マウスへのヒト骨髄の
移植による安定なヒト−マウスキメラの作成は、日本特
許出願第３０９２５５／９１号、およびＬｕｂｉｎ，
Ｉ．ｅｔａｌ．：Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５２，４２７，
１９９１に開示されている。有用なマウス−ヒトキメラ
モデルの作成のために、一方では迅速な造血再構築への
要求と、他方ではヒトＴおよびＢ細胞の遅い分化速度の
矛盾は、ＳＣＩＤマウスを骨髄レシピエントとしてでは
なく骨髄ドナーとして使用することにより解決された。
ＳＣＩＤマウスの骨髄細胞は、ＴおよびＢ細胞を除くす
べての造血細胞株を迅速に再構築させる。ＴおよびＢ細
胞はＳＣＩＤマウスでの抗原リセプター遺伝子の再配置
の欠如のため、ＳＣＩＤ多能性（pluripotent ）幹細胞
から増殖することはできない（Ｓｃｈｕｌｅｒ，Ｗ．ｅ
ｔａｌ．：Ｃｅｌｌ，４６，９６３，１９８６）。胸
腺と骨髄中のの得られる「中空のスペース」が、正常ヒ
トＴおよびＢ細胞により徐々に占有されるか否かを試験
するために、ＳＣＩＤマウス骨髄の移植物を、大豆凝集
素による分別凝集によりＴおよびＢ細胞を枯渇させてお
いた（ＳＶＢＡ- ）ヒト骨髄の移植物と組合せた。次に
羊赤血球とロゼットを形成する（Ｅ+-）残存ＣＤ２+ リ
ンパ球を除去することによりヒトＢＭ細胞が得られ、こ
れをＳＢＡ-Ｅ-と命名した（Ｒｅｉｓｎｅｅｒ，Ｙ．ｅ
ｔａｌ．：Ｌａｎｃｅｔｉｉ，３２７，１９８
１）。

【０００６】すなわち正常ＢＡＬＢ／ｃマウスに致死的
照射し、これにＴおよびＢ細胞を枯渇させたヒト骨髄細
胞を移植し、１日後にＳＣＩＤマウスからのＴ細胞枯渇
骨髄細胞を移植することにより、長期に安定なヒト−マ
ウスキメリズムを達成した。前述したように、Ｔおよび
Ｂ細胞系統を除くすべての造血細胞株が急速に再構築さ
れるように、骨髄ドナーとしてＳＣＩＤマウスを使用し
た。移植後２〜４カ月後に移植マウスの抹消血中にまず
表現型成熟ヒトＴおよびＢ細胞が検出され、これが移植
後９カ月以上検出され続けた。非操作（すなわちＴおよ
びＢ細胞が枯渇されていない）ヒト骨髄を静脈内にまた
は腹腔内に移植した場合、移植片対宿主疾患を認めず抹
消血中に同様のリンパ系キメリズムが認められた。

【０００７】Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｔ．ｅｔａｌ．（Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．
Ａ．，８３，４５２９−４５３２，１９８６）は、同種
移植的骨髄移植との組合せにより、肝臓同種移植の成功
例を記載している。すなわちＢＡＬＢ／ｃマウスの骨髄
で再構築した致死的照射したＣ３Ｈ／ＨｅＮマウスの腎
線維膜下に移植した場合、ＢＡＬＢ／ｃマウスの肝切片
は受け入れられた。さらに重要なことに、このようなキ
メラマウスはＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（骨髄ドナーとは
Ｈ−２が異なる）からの肝を拒絶した。従ってこの系で
は肝移植片に対する寛容は骨髄ドナーの株に限定されて
いる。非ヒト哺乳動物の、骨髄ドナー以外のドナー（ヒ
ト異種移植片を含む）からの組織または細胞を移植する
ことが好ましいことは明らかであり、これは本発明によ
り達成される。

【０００８】発明の要約本発明は、造血細胞が実質的に抑制されているかまたは
破壊されており、Ｍ３以外の種の哺乳動物Ｍ２由来の造
血細胞により置換されている哺乳動物Ｍ１由来であり、
哺乳動物Ｍ２は遺伝的に決定された造血細胞不全を有し
ており、このＭ１に哺乳動物Ｍ３の正常造血細胞以外の
組織または細胞が移植されている、哺乳動物Ｍ３由来の
正常造血細胞以外の、長期に安定な異種組織または細胞
を有する非ヒトキメラ哺乳動物Ｍ４に関する。

【０００９】哺乳動物Ｍ３からの組織は好ましくは臓器
片であり、細胞は好ましくは悪性腫瘍細胞である。本発
明はまた、ヒト固形腫瘍または白血病由来の悪性腫瘍細
胞を有するキメラ非ヒト哺乳動物Ｍ４に関し、これは内
因性造血細胞が、遺伝的に決定された造血細胞不全を有
する非ヒト哺乳動物Ｍ２由来の外因性造血細胞により置
換されている。

【００１０】別の実施態様において本発明は、ヒトの臓
器由来の組織を有するキメラ非ヒト哺乳動物Ｍ４に関
し、ここで内因性造血細胞は、遺伝的に決定された造血
細胞不全を有する非ヒト哺乳動物Ｍ２由来の外因性造血
細胞により置換されている。

【００１１】本発明のキメラ非ヒト哺乳動物Ｍ４は、非
ヒト哺乳動物Ｍ１の免疫系を破壊しこの処置哺乳動物Ｍ
１に、哺乳動物Ｍ１とは別の種の哺乳動物Ｍ３由来の正
常造血細胞以外の組織または細胞を移植し、この処置哺
乳動物にさらにＭ３以外の種の、遺伝的に決定された造
血細胞不全を有する非ヒト哺乳動物Ｍ２由来の造血細胞
を移植することよりなる方法により、樹立することがで
きる。別の方法では、哺乳動物Ｍ１にまず哺乳動物Ｍ２
の骨髄を移植し、次に哺乳動物Ｍ３の組織または細胞が
移植される。

【００１２】本発明の好適な実施態様において、非ヒト
レシピエント哺乳動物Ｍ１はマウスであり、非ヒト哺乳
動物ドナーＭ２はＳＣＩＤマウスであり、哺乳動物ドナ
ーＭ３はヒトである。

【００１３】別の実施態様において本発明は、ヒト固形
腫瘍または白血病細胞を移植された本発明のキメラ哺乳
動物Ｍ４を薬剤で処置し、この処置の効果を追跡するこ
とよりなる、ヒト固形腫瘍または白血病に対する薬剤の
化学療法感受性試験方法に関する。こうしてこれらのモ
デルで抗癌剤をインビボで評価することができる。ある
実施態様において、哺乳動物に患者の固形腫瘍または白
血病由来の細胞が移植され、この患者の治療での１つの
薬剤または薬剤の組合せの抗癌活性が、移植されたキメ
ラ哺乳動物中で評価される。

【００１４】好適な実施態様の詳細な説明本発明の非ヒト哺乳動物Ｍ１は任意の哺乳動物であり、
例えば馬、羊、齧歯類（例えばウサギ、ハムスター、モ
ルモット、ラット、マウス）などがある。それは任意の
株のマウスでもよい。好ましくはＭ１は、ＢＡＬＢ／ｃ
マウス、またはヒト遺伝子（例えばヒトサイトカイン遺
伝子またはヒトＨＬＡ決定基）を有するトランスジェニ
ックマウスなどの正常のマウスである。Ｍ１はまた、ヌ
ードマウス、ＣＢＡ／ＮおよびＢｇ／Ｎｕ／Ｘｉｄマウ
スのような免疫不全症マウスでもよい。すなわちこの方
法により、ヒト組織の植え付けは数種類の免疫不全症株
のマウス（例えばＳＣＩＤマウスまたはヌードマウス）
に限定されることなく、マウスのすべての正常株に拡張
される。さらにマウスの免疫不全症株は、例えばＢｇ／
Ｎｕ／Ｘｉｄまたはヌードマウスを照射し、次にＳＣＩ
Ｄ骨髄および本発明のヒト組織または細胞を移植するこ
とにより、より広い免疫不全症を有する新しいキメラに
形質転換することができる。

【００１５】遺伝的に決定された造血細胞不全を有する
哺乳動物ドナーＭ２は、Ｍ１種と同じ種でも、または異
なる哺乳動物種Ｍ２でもよい。好ましくはＭ１とＭ２は
同じ種である。

【００１６】本発明において、遺伝的に決定された造血
細胞不全を有する任意の非ヒト哺乳動物はドナーＭ２と
して使用できる。遺伝的に決定された造血細胞不全を有
する有用なマウスの株としては、免疫不全症Ｂｇ／Ｎｕ
／Ｘｉｄマウス、および赤血球不全Ｗ／Ｗマウスがあ
る。他のマウスおよび哺乳動物株も研究者により同定ま
たは作成されるであろうし、Ｍ１またはＭ２として本発
明の使用に適しているであろう。

【００１７】哺乳動物Ｍ２の遺伝的に決定された造血細
胞不全の性質に依存して、哺乳動物Ｍ２由来の移植され
た多能性幹細胞は、Ｍ２の造血細胞不全の程度により産
生されない細胞系統を除いて、哺乳動物Ｍ１の造血細胞
株を再構築する。

【００１８】哺乳動物Ｍ３はＭ１以外の種であり、好ま
しくはヒトである。

【００１９】すなわち本発明の好適な実施態様におい
て、致死的照射マウスにヒト固形腫瘍または白血病細胞
およびＳＣＩＤマウス骨髄細胞を移植し、大腸癌、乳
癌、卵巣癌、膵臓癌、肺癌、胃癌、腎臓癌または前立腺
癌の細胞、または黒色腫、神経芽細胞腫または膠芽細胞
腫細胞の悪性腫瘍細胞、または急性または慢性の骨髄
性、リンパ性または単球性白血病からの癌細胞を有する
マウスが産生される。

【００２０】本発明による安定な非ヒトキメラ哺乳動物
Ｍ４を産生する方法は以下の工程からなる：（ｉ）非ヒト哺乳動物Ｍ１を、その免疫系を本質的に破
壊するように処置し、（ｉｉ）この処置哺乳動物Ｍ１に
哺乳動物Ｍ１以外の種の哺乳動物Ｍ３（哺乳動物Ｍ３は
好ましくはヒトである）由来の正常造血細胞以外の組織
または細胞を移植し、（ｉｉｉ）さらに好ましくはＭ１
と同じ種であり、遺伝的に決定された造血細胞不全を有
する非ヒト哺乳動物ドナーＭ２からの骨髄細胞または他
の任意の適当なソースの多能性幹細胞を移植し、こうし
て、哺乳動物ドナーＭ２さらにＭ３由来（例えばヒト）
組織または細胞由来の造血細胞系統を有するキメラ非ヒ
ト哺乳動物Ｍ４を得る。

【００２１】キメラ非ヒト哺乳動物Ｍ４の別の産生方法
では、工程（ｉｉ）と（ｉｉｉ）を入れ換えて工程
（ｉ）の処置哺乳動物Ｍ１をまず免疫不全症哺乳動物Ｍ
２の骨髄を移植する。こうして得られたキメラ哺乳動物
は長期に安定であり、哺乳動物Ｍ３からの組織または細
胞でさらに移植するために数週間保存することができ
る。

【００２２】キメラ哺乳動物Ｍ４に組織または細胞を寄
与している哺乳動物Ｍ３は好ましくはヒトであるが、牛
または馬などの他の動物を使用することもできる。例え
ば長期に安定な牛悪性腫瘍細胞を有するキメラマウス
を、本発明に従い作成することができる。

【００２３】哺乳動物Ｍ１の免疫系の抑制または破壊の
ための工程（ｉ）の処置には、処置により哺乳動物Ｍ２
からの多能性の幹細胞が順調に再増殖してくるという条
件下で、照射（例えばガンマ線照射）、化学療法、また
はこの両者の組合せ、または造血細胞に対するモノクロ
ーナル抗体を使用したサイトリダクション（ｃｙｔｏｒ
ｅｄｕｃｔｉｏｎ）などが含まれる。

【００２４】ヒト悪性腫瘍細胞のソースは、手術により
切開された腫瘍または転移腫瘍の組織または白血病細胞
でもよい。ヒトの組織（例えば胸腺、肝臓、脾臓、膵
臓、リンパ節など）は、健常または非健常の対象から得
られ、小片として哺乳動物Ｍ１中に移植される。

【００２５】悪性腫瘍細胞を有する本発明のキメラ哺乳
動物Ｍ４は、種々のヒトの固形腫瘍や白血病の研究の実
験モデルとして使用することができ、薬剤の化学療法感
受性試験の１手段を与える。

【００２６】ヒト組織を有する本発明のキメラ哺乳動物
Ｍ４は、種々のヒトの疾患（例えばウイルス感染症や自
己免疫疾患）の研究の実験モデルとして使用することが
でき疾患のための薬剤のスクリーニング、感受性試験お
よびモニタリングの有用な手段となる。例えばヒトの肝
臓組織の移植はＢ型およびＣ型肝炎の研究のモデルとな
り、胸腺、脾臓またはリンパ節の移植はＡＩＤＳの研究
を可能にし、膵臓の移植は糖尿病のモデルとなるであろ
う。

【００２７】本発明によれば、化合物または生体分子に
ついて、手術中に除去された新鮮な試料から確立された
ヒトの腫瘍に対する効果を試験することができる。ほと
んど大半数のヒトの癌患者からの腫瘍は、本発明のヒ
ト：マウスキメラ中で増殖することが期待され、ヒトで
のインビボ試験に近い条件下で、癌に対して非常に多く
の新しい薬剤を試験することが可能になる。新しい薬剤
の抗癌活性を試験する以外に、確立されている化学療法
剤やそれらの組合せの固体の癌の抗癌活性を試験して、
このような患者に対して最も有効な薬剤を同定すること
も可能であろう。

【００２８】さらに別の実施態様において、リンホカイ
ン活性化キラー細胞（ＬＡＫ）としても知られているＩ
Ｌ−２活性化抹消血単核細胞（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，
Ｓ．Ａ．ｅｔａｌ．：Ｊ．Ｅｘｐｅｒ．Ｍｅｄ．，１
６１，１１６９−１１８８，１９８５およびＥｎｇｌ．
Ｊ．Ｍｅｄ．，３１６，８９９−９４１，１９８７；Ｌ
ｏｔｚｅＭ．Ｔ．ｅｔａｌ．：Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．，１２５，２９７２−２９７８，１９８０；Ｌｏｔ
ｚｅ，Ｍ．Ｔ．ｅｔａｌ．：ＣａｎｃｅｒＲｅ
ｓ．，４１，４４２０−４４２５，１９８１；Ｇｒｉｍ
ｍ，Ｅ．Ａ．ｅｔａｌ．：Ｊ．Ｅｘｐｅｒ．Ｍｅ
ｄ．，１５８，１３６５−１３７１，１９８３）、また
は腫瘍浸潤性リンパ球（ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａ
ａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＴＩＬ）（Ｒｏ
ｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．ｅｔａｌ．：Ｎ．Ｅｎｇ
ｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３１９，１６７６−１６８０，１９
８８）が、ヒトの癌を有する哺乳動物（例えばマウス）
Ｍ４に移植され、随時サイトカイン（例えばＩＬ−２）
とともに免疫療法におけるＬＡＫまたはＴＩＬ細胞の効
果が試験される。

【００２９】ここで本発明を、非限定的に提示された以
下の例で説明する。

【００３０】例例１．ＢＡＬＢ／ｃマウスへのヒト黒色腫細胞の移植８〜１２週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（ＯｌａｃＦ
ａｒｍｓ，Ｂｉｃｅｓｔｅｒ，Ｅｎｇｌａｎｄから入手
した）を、ｆｏｃａｌｓｋｉｎｄｉｓｔａｎｃｅ
（Ｆ．Ｓ．Ｄ．）が７５ｃｍのガンマビーム１５０−Ａ
60Ｃｏソースから０．７−０．９Ｇｙ／分の線量率で
１０ＧｙＴＢＩの線量を１回照射した。１日後、Ｎａ
ｉｔｏ，Ｓ．ｅｔａｌ．（ＩｎｖａｓｉｏｎＭｅｔ
ａｓｔａｓｉｓ，７，１６−２９，１９８７）により記
載された方法で解剖された原発癌から調製された１−５
×１０6 個の黒色腫細胞を、各マウスの皮下に移植し
た。２４時間後、ＴＢＩ後の２日目に、Ｒｅｉｓｎｅｒ
ｅｔａｌ．（Ｒｅｉｓｎｅｒ，Ｙ．，ｅｔａ
ｌ．：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，７５，２９３３，１９７８）の方法に若干の修飾を
加えて（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｅ．，ｅｔａｌ．：Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３８，４６０，１９８７）調製し
た８〜１２週齢の雄のＳＣＩＤマウス（Ｗｅｉｚｍａｎ
ｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅＡｎｉｍａｌＢｒｅｅｄｉｎ
ｇＣｅｎｔｅｒから得られた）からのＴ細胞枯渇骨
髄細胞（２×１０6 ）を、静脈内潅流により処置マウス
に移植した。染色した細胞を肉眼で観察することにより
腫瘍の増殖を毎日追跡した。３カ月の観察期間の間に、
骨髄移植の最初の３０日間に生き延びた１２匹の移植さ
れた評価可能なマウスのうち１０匹は、原発性の腫瘍が
生じた。１０匹のうち２匹に自発性の転移が観察され
た。

【００３１】例２．ＢＡＬＢ／ｃマウスへのヒトの大
腸、乳房または白血病細胞の植え付け例１のように調製したＴ細胞枯渇ＳＣＩＤ骨髄細胞（１
×１０6 ）の移植の前または後に致死的照射したＢＡＬ
Ｂ／ｃマウスの皮下に移植した時（マウス１匹当り１×
１０6 細胞）、大腸、乳房または異なるタイプの白血病
の確立された細胞株からのヒト腫瘍細胞は３０日以上受
け入れられた。３カ月の観察期間の間、数匹のマウスに
原発性の腫瘍が生じた：大腸（１３／１７）、乳房（６
／１２）、白血病（Ｋ５６２，４／４）。

【００３２】例３．臓器の移植ＢＡＬＢ／ｃマウスにＴＢＩ照射（第０日）し、次にＳ
ＣＩＤ骨髄（１×１０6 細胞）を移植した（第１日）２
週間後、Ｎａｋａｍｕｒａｅｔａｌ．（前述）の方
法で、ヒトの組織（胸腺、肝臓、脾臓、膵臓、リンパ
節）の小片（約１ｃｍ2 ）をＢＡＬＢ／ｃマウスの腎線
維膜下に移植した。移植したヒトの組織の植皮を組織学
的および／または免疫組織化学的に評価した。胸腺移植
物の免疫組織学的試験は、移植後１カ月の観察期間の間
にヒトの胸腺移植物の基質構造は、ＢＡＬＢ／ｃマウス
の腎線維膜下に受け入れられ維持されたことを示唆して
いる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】哺乳動物Ｍ３由来の正常造血細胞以外の
組織または細胞有する非ヒトキメラ哺乳動物Ｍ４におい
て、哺乳動物Ｍ４は、造血細胞が実質的に抑制されてい
るかまたは破壊されている、Ｍ３以外の種の哺乳動物Ｍ
２由来の造血細胞により置換されている哺乳動物Ｍ１由
来であり、哺乳動物Ｍ２は遺伝的に決定された造血細胞
不全を有しており、この哺乳動物Ｍ１に哺乳動物Ｍ３の
組織または細胞が移植されている、上記非ヒトキメラ哺
乳動物Ｍ４。
【請求項２】哺乳動物Ｍ３はヒトである「請求項１」
記載の非ヒトキメラ哺乳動物Ｍ４。
【請求項３】ヒト悪性腫瘍細胞を有する「請求項１」
記載の非ヒトキメラ哺乳動物Ｍ４。
【請求項４】ヒト固形腫瘍細胞を有する「請求項３」
記載の非ヒトキメラ哺乳動物Ｍ４。
【請求項５】ヒト白血病細胞を有する「請求項３」記
載の非ヒトキメラ哺乳動物Ｍ４。
【請求項６】ヒトの臓器の組織を有する「請求項１」
記載の非ヒトキメラ哺乳動物Ｍ４。
【請求項７】哺乳動物Ｍ２と哺乳動物Ｍ１は同じ哺乳
動物種である「請求項１」記載の非ヒトキメラ哺乳動物
Ｍ４。
【請求項８】哺乳動物Ｍ２とＭ１はいずれもマウスで
ある「請求項７」記載の非ヒトキメラ哺乳動物Ｍ４。
【請求項９】哺乳動物Ｍ２は重症複合免疫不全症（Ｓ
ＣＩＤ）を有するマウスである「請求項８」記載の非ヒ
トキメラマウス。
【請求項１０】哺乳動物Ｍ１は通常のマウスである
「請求項９」記載の非ヒトキメラマウス。
【請求項１１】哺乳動物Ｍ１はＢＡＬＢ／ｃマウスで
ある「請求項１０」記載の非ヒトキメラマウス。
【請求項１２】哺乳動物Ｍ１のはトランスジェニック
マウスであるかまたはＳＣＩＤマウス以外の免疫不全症
マウスである、「請求項１」記載の非ヒトキメラマウ
ス。
【請求項１３】ヒト悪性腫瘍細胞を有する「請求項１
１」記載の非ヒトキメラマウス。
【請求項１４】ヒトの臓器の組織を有する「請求項１
１」記載の非ヒトキメラマウス。
【請求項１５】（ａ）非ヒト哺乳動物Ｍ１をその免疫
系を本質的に破壊するように処置し、（ｂ）この処置哺
乳動物Ｍ１に哺乳動物Ｍ１以外の種の哺乳動物Ｍ３由来
の正常造血細胞以外の組織または細胞を移植し、（ｃ）
工程（ｂ）の処置動物にさらに、哺乳動物Ｍ３以外の種
の、遺伝的に決定された造血細胞不全を有する哺乳動物
Ｍ２に由来する造血細胞を移植して、哺乳動物ドナーＭ
２由来の造血細胞を有しさらに哺乳動物ドナーＭ３から
の正常造血細胞以外の組織または細胞を有するキメラ非
ヒト哺乳動物Ｍ４を得ることを特徴とする「請求項１」
記載の非ヒトキメラ哺乳動物Ｍ４を作成する方法。
【請求項１６】（ａ）非ヒト哺乳動物Ｍ１をその免疫
系を本質的に破壊するように処置し、（ｂ）工程（ａ）
の処置哺乳動物に哺乳動物Ｍ３以外の種の、遺伝的に決
定された造血細胞不全を有する哺乳動物Ｍ２由来の造血
細胞を移植し、（ｃ）工程（ｂ）の処置哺乳動物Ｍ１に
さらに、哺乳動物Ｍ１以外の種の哺乳動物Ｍ３に由来す
る正常造血細胞以外の組織または細胞を移植して、哺乳
動物ドナーＭ２由来の造血細胞を有しさらに哺乳動物ド
ナーＭ３からの正常造血細胞以外の組織または細胞を有
するキメラ非ヒト哺乳動物Ｍ４を得ることを特徴とする
「請求項１」記載の非ヒトキメラ哺乳動物Ｍ４を作成す
る方法。
【請求項１７】工程（ａ）の処置は、化学療法、致死
的照射または化学療法と致死的照射の組合せからなる、
「請求項１５」記載の方法。
【請求項１８】工程（ａ）の処置は、化学療法、致死
的照射または化学療法と致死的照射の組合せからなる、
「請求項１６」記載の方法。
【請求項１９】哺乳動物Ｍ３はヒトであり、工程
（ｂ）で移植されるヒト細胞は固形腫瘍細胞および白血
病細胞よりなる群から選択される悪性腫瘍細胞である
「請求項１５」記載の方法
【請求項２０】哺乳動物Ｍ３はヒトであり、工程
（ｃ）で移植されるヒト細胞は固形腫瘍細胞および白血
病細胞よりなる群から選択される悪性腫瘍細胞である
「請求項１６」記載の方法
【請求項２１】哺乳動物Ｍ１はマウスであり、哺乳動
物Ｍ２はマウスであり、哺乳動物Ｍ３はヒトであり、工
程（ｂ）で移植されるヒト悪性腫瘍細胞は大腸癌、乳
癌、卵巣癌、膵臓癌、肺癌、胃癌、腎臓癌または前立腺
癌、または黒色腫、神経芽細胞腫または膠芽細胞腫、ま
たは急性または慢性の骨髄性、リンパ性または単球性白
血病からの細胞である、「請求項１５」記載の方法。
【請求項２２】工程（ｂ）で移植される悪性腫瘍細胞
は黒色腫細胞である「請求項２１」記載の方法。
【請求項２３】（ａ）レシピエントマウスにその免疫
系を本質的に破壊するように致死的照射を行い、（ｂ）
この照射処置マウスにヒト悪性腫瘍細胞を移植し、
（ｃ）工程（ｂ）の移植マウスにさらにＴ細胞枯渇ＳＣ
ＩＤマウス骨髄細胞を移植してヒト悪性腫瘍細胞を有す
るキメラマウスを得ることよりなる、移植されたヒト悪
性腫瘍細胞とＳＣＩＤマウス由来の造血細胞を有する
「請求項９」記載のキメラマウスを作成する方法。
【請求項２４】キメラマウスはヒト悪性腫瘍細胞を有
するＢＡＬＢ／ｃマウスである「請求項２３」記載の方
法。
【請求項２５】キメラマウスはヒト腫瘍細胞を有する
トランスジェニックマウスまたは免疫不全症マウスであ
る「請求項２３」記載の方法。
【請求項２６】ヒト固形腫瘍または白血病細胞を有す
る「請求項１」記載のキメラ哺乳動物を薬剤で処置し、
この処置の効果を追跡することよりなる、ヒト固形腫瘍
または白血病に対する薬剤の化学療法感受性試験方法。
【請求項２７】キメラ哺乳動物は、その固体の腫瘍ま
たは白血病由来の細胞が移植されていることを特徴とす
る、各腫瘍または白血病に対する薬剤の化学療法活性の
試験のための「請求項２５」記載の方法。