JPH05176760A - ヒト白血球株化細胞 - Google Patents
ヒト白血球株化細胞Info
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- JPH05176760A JPH05176760A JP3359310A JP35931091A JPH05176760A JP H05176760 A JPH05176760 A JP H05176760A JP 3359310 A JP3359310 A JP 3359310A JP 35931091 A JP35931091 A JP 35931091A JP H05176760 A JPH05176760 A JP H05176760A
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Abstract
遺伝子再構成陰性 (5) GM−CSF依存性有り (6) ミエロペルオキシダーゼのmRNA量がHL−60
と同等に発現している (7) VNTR解析によりHL−60とは異なる細胞であ
ることが示される。 【効果】 ミエロペルオキシダーゼの生産、HL−60
細胞の代わりに分化の研究や白血病の研究に用いること
ができる新規なヒト白血球株化細胞が提供された。
Description
胞に関する。本発明の株化細胞は白血病診断に用いられ
ているミエロペルオキシダーゼの生産、HL−60細胞
の代わりに分化の研究や白血病の研究並びに抗ガン剤そ
の他各種検査薬及び治療薬の研究に用いることができ
る。
異形成症候群患者の末梢血から、新規な特徴を有する白
血球細胞を得、これを継代培養して株化することに成功
し、本発明を完成した。
ト白血球株化細胞を提供する。 (1) ブチレートエステラーゼ陽性 (2) ペルオキシダーゼ陽性 (3) 細胞表面マーカーOKM−1陽性 (4) T細胞レセプターβ鎖、免疫グロブリンJH 、JK
遺伝子再構成陰性 (5) GM−CSF依存性有り (6) ミエロペルオキシダーゼのmRNA量がHL−60
よりも増大している (7) VNTR解析によりHL−60とは異なる細胞であ
ることが示される。
者の末梢血から下記実施例に詳述する方法により得られ
た。
菌を殺菌する酵素であるミエロペルオキシダーゼの生産
が正常白血球よりも増大しているので、感染症治療薬と
して用いられるこの酵素の生産に用いることができる。
また、本発明の株化細胞は、基本的な性質がHela細
胞の1種であるHL−60細胞と類似しており、HL−
60細胞は、分化の研究、白血病の研究及び抗ガン剤そ
の他各種治療薬の研究に広く用いられているので、本発
明の株化細胞もHL−60細胞と同様、これらの研究に
用いることができる。
で遠心分離(1500rpm、10分間)を行ない、バ
フィコート(白血球層)を分離した。滅菌PBSで白血
球を2回洗浄した(4℃、1500rpm、10分
間)。得られた白血球細胞の数を算定し、1x106 細
胞/mlの細胞密度で、GM−CSF(granulocyte-ma
crophage colony stimulating factor) を10単位/m
l含むRPMI1640培地で37℃で1週間ごとの継
代培養を行なった。20代の継代培養を行なった後、軟
寒天法によりコロニー形成を行ない、細胞のクローニン
グを行なった。クローニングした細胞をさらに上記条件
で10代継代培養した後、再度軟寒天法により細胞をク
ローニングした。得られたクローンについて、GM−C
SF依存性を調べた。すなわち、GM−CSFを含むR
PMI1640培地と含まない同培地でそれぞれ培養を
行ない、GM−CSFを含む培地中での増殖速度が含ま
ない培地中での増殖速度よりも大きいか否かを調べ、大
きいもの、すなわち、GM−CSF依存性のあるものを
選択した。得られた細胞の1つをSKM−1と命名し、
微工研に寄託した。受託番号は、微工研菌寄第1266
3号である。
要、第29版に記載)により、α−ナフチルブチレート
を基質とするα−ナフチルブチレートエステラーゼ活性
を定性測定した。その結果、細胞は茶褐色に染色され、
本発明の株化細胞はブチレートエステラーゼが陽性であ
ることが判明した。
29版)により、ペルオキシダーゼ染色を行ない、細胞
のペルオキシダーゼ活性を調べた。その結果、細胞は染
色され、ペルオキシダーゼ陽性であることが判明した。
この結果、本発明の細胞は骨髄系であることがわかっ
た。
Leukocyte typing(CD分類に関する国際ワークショッ
プ)を有しているか否かを、抗OKM−1モノクローナ
ル抗体(オーソ社より市販)を用いたフローサイトメト
リーにより分析した。その結果、本発明の細胞は、細胞
表面マーカーOKM−1を有していた。
疫グロブリンJH 、JK 遺伝子再構成 T細胞レセプター(TCR)β鎖、免疫グロブリンH鎖
(JH 遺伝子)、免疫グロブリンK鎖(JK 遺伝子)の
再構成を調べた。市販のプローブ(ONCOR社製、J
H プローブ、CT βプローブ及びJK プローブをそれぞ
れ用い、該市販品の指示書に記載された条件でサザンブ
ロットハイブリダイゼーションを行なった。結果を図1
に示す。図1に示されるように、各プローブにより検出
されたバンドは、いずれも正常(再構成していない)な
バンドパターンを示していることから、本発明の細胞は
T細胞系、B細胞系の細胞ではないことが証明された。
10%加RPMI培地及びGM−CSFを含まない同培
地に、2ml当り2x105 細胞となるように調製し、
37℃で2日、4日、7日間培養し、その時の細胞数を
測定した。結果を図2に示す。図2から、本発明の細胞
はGM−CSF依存性を有することがわかる。
OのcDNAをプローブとして用いる公知の方法(Hash
inaka et al., Biochemistry, vol. 27, No. 16, pp.59
06-5914 (1988)) に基づくノーザンブロットハイブリダ
イゼーション法によりMPOのmRNAの発現量を調べ
た。対照として、HL−60を用いて同様な試験を行な
った。結果を図3に示す。図3中、レーン1がSKM−
1についての結果を、レーン2がHL−60についての
結果を示す。図3より、本発明の細胞では、MPOのm
RNAの量がHL−60細胞よりも多いことがわかる。
tandem repeat) をHL−60細胞と比較した。すなわ
ち、SKM−1細胞及び対照としてHL−60細胞より
常法に基づきDNAを抽出し、市販のDNA分類用プロ
ーブであるYNH24プローブ(Promega社より
市販、Promega社のGenePrint誌No.
3に記載)を用い、常法に基づきサザンブロットハイブ
リダイゼーションを行なった。結果を図4に示す。図4
中、レーン1はHL−60のパターン、レーン2はSK
M−1細胞のパターンを示す。図4から明らかなよう
に、両パターンは全く異なっており、本発明の細胞はH
L−60細胞とは異なる細胞であることが示された。
リンH鎖(JH 遺伝子)、免疫グロブリンK鎖(JK 遺
伝子)の再構成を調べるために行なったサザンブロット
ハイブリダイゼーションの結果を示す図である。
曲線である。
オキシダーゼmRNA量を示すノーザンブロットハイブ
リダイゼーションの結果を示す図である。
析の結果を示すサザンブロットハイブリダイゼーション
パターンである。
Claims (2)
- 【請求項1】 下記特徴を有するヒト白血球株化細胞。 (1) ブチレートエステラーゼ陽性 (2) ペルオキシダーゼ陽性 (3) 細胞表面マーカーOKM−1陽性 (4) T細胞レセプターβ鎖、免疫グロブリンJH 、JK
遺伝子再構成陰性 (5) GM−CSF依存性有り (6) ミエロペルオキシダーゼのmRNA量がHL−60
と同等に発現している (7) VNTR解析によりHL−60とは異なる細胞であ
ることが示される。 - 【請求項2】 微工研菌寄第12663号である請求項
1記載の株化細胞。
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1991
- 1991-12-31 JP JP35931091A patent/JP3238447B2/ja not_active Expired - Fee Related
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