JPH05139967A - Carcinostatic agent - Google Patents
Carcinostatic agentInfo
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- JPH05139967A JPH05139967A JP3045694A JP4569491A JPH05139967A JP H05139967 A JPH05139967 A JP H05139967A JP 3045694 A JP3045694 A JP 3045694A JP 4569491 A JP4569491 A JP 4569491A JP H05139967 A JPH05139967 A JP H05139967A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、α−リノレン酸とコレ
ステロールで置換された多糖誘導体とを含有する脂肪乳
剤を有効成分とする制癌剤に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a carcinostatic agent containing a fat emulsion containing α-linolenic acid and a cholesterol-substituted polysaccharide derivative as an active ingredient.
【０００２】[0002]
【従来の技術】従来、癌の化学療法剤としてアルキル化
剤、代謝拮抗剤、抗生物質および植物アルカロイドなど
が製造されている。また、他に最近では、ある種の植物
エキスに免疫賦活作用があることがわかり、抗癌剤とし
て実用化されつつある。さらに、α−リノレン酸などの
ある種の遊離脂肪酸あるいはそのエステルに制癌作用が
あることが知られている（特開昭62-12716号公報、化学
と工業、39、151-153(1986))。Conventionally, alkylating agents, antimetabolites, antibiotics, plant alkaloids and the like have been produced as cancer chemotherapeutic agents. In addition, recently, it has been found that a certain kind of plant extract has an immunostimulatory action, and it is being put to practical use as an anticancer agent. Further, it is known that certain free fatty acids such as α-linolenic acid or esters thereof have an antitumor effect (Japanese Patent Laid-Open No. 62-12716, Chemistry and Industry, 39 , 151-153 (1986). ).
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】前記のように、制癌剤
として数多くの製剤が公知であり、またその製剤化につ
いても種々の提案がなされてきたが、いずれの制癌剤な
いしは製剤も制癌効果が強いものは、副作用が強く、実
際の使用面で多大の制約があり、低毒性で優れた制癌作
用を有する制癌剤の開発が強く望まれている。As described above, many preparations are known as carcinostatic agents, and various proposals have been made for their preparation. However, any carcinostatic agent or preparation has a strong carcinostatic effect. However, there is a strong demand for the development of an antitumor agent that has strong side effects, is extremely limited in actual use, and has low toxicity and an excellent antitumor effect.
【０００４】血液中にα−リノレン酸などの遊離脂肪酸
を注入すると、遊離の脂肪酸は血液には溶けないことか
ら毛細血管をつまらせ、また高級脂肪酸は血液中の蛋白
質と結合し易いので直接血管に投与しても、体内患部へ
の運搬が難しく薬効が発現されないという問題点が予想
される。このように、α−リノレン酸などの遊離脂肪酸
を制癌剤とするためには、生体内で安定に患部まで運搬
されうるような運搬体（キャリアー）を共用する必要が
あった。When free fatty acids such as α-linolenic acid are injected into blood, the free fatty acids do not dissolve in the blood and clog the capillaries, and higher fatty acids are easily bound to proteins in the blood, so that they are directly vascularized. It is expected that there will be a problem in that, even if administered to, the drug will not be easily delivered to the affected part in the body and no drug effect will be exhibited. As described above, in order to use free fatty acids such as α-linolenic acid as an anticancer agent, it was necessary to share a carrier that can be stably transported to the affected area in vivo.
【０００５】本発明の目的は、前記の問題を解決して癌
細胞に対するα−リノレン酸の効果を増強するためキャ
リアーを共用した制癌剤を提供することである。An object of the present invention is to provide a carcinostatic agent which shares a carrier in order to solve the above problems and enhance the effect of α-linolenic acid on cancer cells.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】本発明は、多糖類の単糖
単位100 個あたり0.1 〜10個の割合で多糖類の側鎖コレ
ステロールが結合している多糖−コレステロール誘導体
とα−リノレン酸と水とを含有する脂肪乳剤を有効成分
とする制癌剤である。多糖−コレステロール誘導体は、
多糖類の水酸基を介してコレステリル基を含む置換基が
結合しているものであればよく、特に好ましくは、多糖
の１級水酸基又は２級水酸基が、−OCH2CONHCH2CH2NHCO
R または−OCONH(CH2)6NHCOR（但し、Ｒはコレステリル
基）で置換されているものである。The present invention provides a polysaccharide-cholesterol derivative in which side chain cholesterol of the polysaccharide is bound at a ratio of 0.1 to 10 per 100 monosaccharide units of the polysaccharide, and α-linolenic acid. It is a carcinostatic agent containing a fat emulsion containing water as an active ingredient. The polysaccharide-cholesterol derivative is
What is necessary is that the substituent containing a cholesteryl group is bonded via the hydroxyl group of the polysaccharide, and particularly preferably, the primary hydroxyl group or secondary hydroxyl group of the polysaccharide is -OCH 2 CONHCH 2 CH 2 NHCO.
R or —OCONH (CH 2 ) 6 NHCOR (wherein R is a cholesteryl group).
【０００７】多糖類としては、天然由来又は化学合成
品、例えば、プルラン、アミロペクチン、アミロース、
グリコーゲン、シクロデキストリン、デキストラン、ヒ
ドロキシエチルデキストラン、マンナンおよびその誘導
体などである。コレステロールの結合度が、多糖類の単
糖単位100 個あたり0.1 個未満では、安定な脂肪乳剤が
得られず、10個を超えるものは水溶性に欠け、また、合
成が困難である。The polysaccharides include naturally-occurring or chemically synthesized products such as pullulan, amylopectin, amylose,
Glycogen, cyclodextrin, dextran, hydroxyethyl dextran, mannan and its derivatives and the like. If the binding degree of cholesterol is less than 0.1 per 100 monosaccharide units of the polysaccharide, a stable fat emulsion cannot be obtained, and if it exceeds 10, it lacks water solubility and is difficult to synthesize.
【０００８】本発明の脂肪乳剤を有効成分とする制癌剤
は、前記多糖−コレステロール誘導体の他に脂溶性制癌
剤であるα−リノレン酸を含むものである。α−リノレ
ン酸としては遊離のα−リノレン酸以外に: そのメチル
エステル、エチルエステルなどの低級アルコールエステ
ルを利用することもできる。また、脂肪乳剤の油相中に
は大豆油、ゴマ油、ナタネ油、綿実油、魚油、中鎖脂肪
酸トリグリセライドエステルなどの油性物質を同時に含
有させることもできる。The anti-cancer agent containing the fat emulsion of the present invention as an active ingredient contains α-linolenic acid which is a fat-soluble anti-cancer agent in addition to the polysaccharide-cholesterol derivative. As the α-linolenic acid, other than the free α-linolenic acid, a lower alcohol ester such as its methyl ester or ethyl ester may be used. The oil phase of the fat emulsion may also contain oily substances such as soybean oil, sesame oil, rapeseed oil, cottonseed oil, fish oil and medium chain fatty acid triglyceride ester.
【０００９】本発明の制癌剤において多糖−コレステロ
ール誘導体の比率は、安定な乳剤を形成できる比率であ
ればよく、望ましくは多糖誘導体／（α−リノレン酸＋
油性物質）＝0.1 〜10(wt/wt）が適している。また、脂
肪乳剤の水相には注射用蒸留水、滅菌水などの純水の
他、ブドウ糖液または生理食塩水を使用してもよい。本
発明の脂肪乳剤の油相濃度は高濃度の方が好ましいが、
高濃度になると比重および粘度が高くなり過ぎることか
ら実用的には（α−リノレン酸＋油性物質）／水相比で
0.01〜0.5(wt/wt)が適している。In the anticancer agent of the present invention, the ratio of the polysaccharide-cholesterol derivative may be any ratio as long as a stable emulsion can be formed, and preferably the polysaccharide derivative / (α-linolenic acid +
Oily substance) = 0.1-10 (wt / wt) is suitable. Moreover, in addition to pure water such as distilled water for injection and sterilized water, glucose solution or physiological saline may be used for the aqueous phase of the fat emulsion. The oil phase concentration of the fat emulsion of the present invention is preferably high,
Since the specific gravity and viscosity become too high at high concentrations, practically, it is (α-linolenic acid + oily substance) / water phase ratio.
0.01 to 0.5 (wt / wt) is suitable.
【００１０】本発明の脂肪乳剤は基本的には、多糖誘導
体の他に、α−リノレン酸の如き油性物質及び水からな
るが、それ以外に等張剤、乳化補助剤及び抗酸化剤等を
添加することも可能である。本発明の制癌剤は、静脈注
射、動脈注射、リンパ管内注射および疾患部位への直接
投与が可能である。The fat emulsion of the present invention basically comprises, in addition to the polysaccharide derivative, an oily substance such as α-linolenic acid and water, but other than that, an isotonic agent, an emulsifying auxiliary agent and an antioxidant are also included. It is also possible to add. The antitumor agent of the present invention can be administered by intravenous injection, arterial injection, intralymphatic injection, and direct administration to the disease site.
【００１１】脂肪乳剤の調製には、マントン・ゴーリー
型ホモジナイザー等の各種のホモジナイザー機または高
出力超音波発生機などの利用が挙げられる。また乳化後
の油滴の粒径の調整にはゲル濾過、限外濾過または超遠
心分離法等が挙げられる。For the preparation of the fat emulsion, various homogenizers such as a Manton-Gorley homogenizer or a high-power ultrasonic generator can be used. In addition, gel filtration, ultrafiltration, ultracentrifugation or the like may be used to adjust the particle size of the oil droplets after emulsification.
【００１２】[0012]
【発明の効果】本発明の制癌剤は、少量のα−リノレン
酸で強い制癌効果を発揮できる制癌剤組成物である。INDUSTRIAL APPLICABILITY The anticancer agent of the present invention is an anticancer agent composition which can exert a strong anticancer effect with a small amount of α-linolenic acid.
【００１３】[0013]
【実施例】実施例に基づき本発明を具体的に説明する。
以下、特に断らないかぎり百分率は重量％を示す。 プルラン−コレステロール／α−リノレン酸脂肪乳剤の
調製 合成例１ プルラン−コレステロール誘導体の合成 トルエン（100ml)にコレステロール(3.86g, 10mmol) を
溶かし、これにピリジン（４ml) とヘキサメチレンジイ
ソシアネート(23.9ml, 148mmol) を加え、80℃で24時間
反応させた。反応終了後、トルエンおよび未反応のヘキ
サメチレンジイソシアネートを減圧除去した。これに石
油エーテル(500ml) を加え、生成物を抽出した。生成物
は2.44ｇの白色粉体（収率45％）であった。EXAMPLES The present invention will be specifically described based on examples.
In the following, percentages represent% by weight unless otherwise specified. Preparation of Pullulan-Cholesterol / α-Linolenic Acid Fat Emulsion Synthesis Example 1 Synthesis of Pullulan-Cholesterol Derivative Cholesterol (3.86 g, 10 mmol) was dissolved in toluene (100 ml), and pyridine (4 ml) and hexamethylene diisocyanate (23.9 ml, 148 mmol) was added, and the mixture was reacted at 80 ° C. for 24 hours. After completion of the reaction, toluene and unreacted hexamethylene diisocyanate were removed under reduced pressure. Petroleum ether (500 ml) was added thereto, and the product was extracted. The product was 2.44 g of white powder (yield 45%).
【００１４】生成物は、ＩＲスペクトル、 1Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルおよび元素分析により、Ｎ−（６−イソシア
ナトヘキシル）コレステリルカルバメイトであると同定
された。 ＩＲスペクトル：N-H 伸縮（3260cm-1）、N=C=O 伸縮：
（1680cm-1）、C-O-C 伸縮（1130cm-1） 1 Ｈ−ＮＭＲスペクトル：δ(ppm) 0.68(s,3H), 0.70-
2.40(28H),0.85(d, 6H, J=9Hz), 0.92(d, 3H, J=7Hz)
1.02(s, 3H)1.30-1.55(m, 8H), 3.10(m, 2H), 3.20(t,
2H, J=9Hz)4.30-4.80(2H), 5.40(d, 1H, J=5Hz) 元素分析 分析値（％）Ｈ：10.7 Ｃ：75.5 Ｎ：５．
２ 計算値（％）Ｈ：10.5 Ｃ：75.8 Ｎ：5.1 （計算値はＮ−（６−イソシアナトヘキシル）コレステ
リルカルバメイトの理論計算値である）。The product is IR spectrum, 1 H-NMR
It was identified by spectral and elemental analysis to be N- (6-isocyanatohexyl) cholesteryl carbamate. IR spectrum: NH stretching (3260 cm -1 ), N = C = O stretching:
(1680 cm -1 ), COC stretching (1130 cm -1 ) 1 H-NMR spectrum: δ (ppm) 0.68 (s, 3H), 0.70-
2.40 (28H), 0.85 (d, 6H, J = 9Hz), 0.92 (d, 3H, J = 7Hz)
1.02 (s, 3H) 1.30-1.55 (m, 8H), 3.10 (m, 2H), 3.20 (t,
2H, J = 9Hz) 4.30-4.80 (2H), 5.40 (d, 1H, J = 5Hz) Elemental analysis analysis value (%) H: 10.7 C: 75.5 N: 5.
2 Calculated value (%) H: 10.5 C: 75.8 N: 5.1 (The calculated value is the theoretical calculated value of N- (6-isocyanatohexyl) cholesteryl carbamate).
【００１５】プルラン（重量平均分子量50000, 1.22g,
糖単位当り7.44mmol) を無水ジメチルスルホキシド(100
ml)に溶かし、ピリジン（８ml) を加えた。これに、先
に合成したＮ−（６−イソシアナトヘキシル）コレステ
リルカルバメイト（0.106g,0.19mmol) を加え、100 ℃
で８時間反応させた。反応終了後、ジメチルスルホキシ
ドを減圧除去し、これにエタノール(500ml) を加えて生
成物を析出させた。このものを濾別採取し、エタノール
を除去した。さらにセルロースチューブを用いて透析に
より目的物を精製し、採取した。収量0.99g （収率74.7
％） 生成物は、ＩＲスペクトル、 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルお
よび元素分析によりプルランの100 単糖あたり1.8 個の
コレステリル基が結合している下記構造を有するコレス
テロール−プルラン誘導体であることが確認された。Pullulan (weight average molecular weight 50000, 1.22 g,
7.44 mmol per sugar unit) was added to anhydrous dimethyl sulfoxide (100
ml) and pyridine (8 ml) was added. To this, N- (6-isocyanatohexyl) cholesterylcarbamate (0.106 g, 0.19 mmol) synthesized previously was added, and the mixture was heated to 100 ° C.
And reacted for 8 hours. After completion of the reaction, dimethylsulfoxide was removed under reduced pressure, and ethanol (500 ml) was added thereto to precipitate a product. This product was collected by filtration to remove ethanol. The target substance was further purified by dialysis using a cellulose tube and collected. Yield 0.99g (Yield 74.7
%) The product was confirmed by IR spectrum, 1 H-NMR spectrum and elemental analysis to be a cholesterol-pullulan derivative having the following structure in which 1.8 cholesteryl groups are bonded per 100 monosaccharides of pullulan.
【００１６】[0016]
【化１】 [Chemical 1]
【００１７】 1 Ｈ−ＮＭＲ δ(ppm) 0.60-1.70 帰属ａ， 3.00-4.00 帰属ｂ， 4.30-5.70 帰属ｃ。 元素分析 (％) 生成物 ：Ｈ 6.35 Ｃ 40.97 Ｎ 0.26 プルラン（原料）：Ｈ 6.67 Ｃ 40.55 Ｎ 0 プルラン100 単糖当りｘ個のコレステリル基が導入され
ているとすると、 Ｎ／Ｃ＝（14.0×２ｘ）／12.0×（６＋35ｘ）＝0.26／
40.97 ｘ＝1.8 個となり、プルラン100 単糖当り、1.8 個のコ
レステリル基が導入されていることがわかった。得られ
たプルランを（CHP-50-1.8）とする。 1 H-NMR δ (ppm) 0.60-1.70 attribution a, 3.00-4.00 attribution b, 4.30-5.70 attribution c. Elemental analysis (%) Product: H 6.35 C 40.97 N 0.26 Pullulan (raw material): H 6.67 C 40.55 N 0 Pullulan 100 If x cholesteryl groups are introduced per monosaccharide, N / C = (14.0 × 2x) /12.0x (6 + 35x) = 0.26 /
It was 40.97 x = 1.8, and it was found that 1.8 cholesteryl groups were introduced per 100 pullulan monosaccharides. The obtained pullulan is designated as (CHP-50-1.8).
【００１８】実施例１ （脂肪乳剤の調製）合成例１で得られたプルラン−コレ
ステロール誘導体（CHP-50-1.8）の水溶液（0.8mg/ml）
３mlにα−リノレン酸のエタノール溶液（26.7mg/ml) 1
80μl を加え（重量比：プルラン−コレステロール誘導
体／α−リノレン酸＝１／２）、窒素気流下、０℃の氷
浴中で５〜180 分間超音波照射（プローブ型、20Ｗ）
し、脂肪乳剤を調製し、その粒径を動的光錯乱法にて測
定した。図１は、超音波照射時間と脂肪乳剤の粒径との
関係を示す図である。図１により、超音波照射時間５〜
180 分で、200nm 〜350nm の平均粒径の脂肪乳剤が得ら
れることがわかった。Example 1 (Preparation of fat emulsion) Aqueous solution (0.8 mg / ml) of pullulan-cholesterol derivative (CHP-50-1.8) obtained in Synthesis Example 1
Ethanol solution of α-linolenic acid in 3 ml (26.7 mg / ml) 1
Add 80 μl (weight ratio: pullulan-cholesterol derivative / α-linolenic acid = 1/2) and sonicate for 5 to 180 minutes in a 0 ° C ice bath under a nitrogen stream (probe type, 20W).
Then, a fat emulsion was prepared and its particle size was measured by the dynamic optical confusion method. FIG. 1 is a diagram showing the relationship between the ultrasonic irradiation time and the particle size of a fat emulsion. According to FIG. 1, the ultrasonic irradiation time 5 to
It was found that in 180 minutes a fat emulsion with an average particle size of 200 nm to 350 nm was obtained.
【００１９】（制癌効果実験）継代培養した２種類のヒ
ト大腸癌細胞（ＲＰＭＩ4788種およびＢＭ314 種）懸濁
液（１×104cells/ml)に、先に調製したプルラン−コレ
ステロール被覆α−リノレン酸内包脂肪乳剤（平均粒径
300nm)をα−リノレン酸濃度で５，10,20および40μg/m
lとなるように添加し、その制癌効果を評価した。ま
た、比較として同じ濃度でのα−リノレン酸のみの添加
（濃度10,20, 40，および80μg/ml) 、プルラン−コレ
ステロール誘導体のみを添加（濃度５, 10, 20および40
μg/ml) した時の制癌効果を評価した。細胞は５％ＣＯ
2 存在下、37℃で５日間培養した。５日後、細胞をトリ
プシン処理により剥離し、トリパンブルーで細胞を染色
して（Ａ）無処理時の生細胞数と（Ｂ）薬物添加時の生
細胞数からＢ／Ａ×100 を細胞の生存率として求めた。(Anti-carcinogenic effect experiment) Two kinds of human colon cancer cell (RPMI4788 species and BM314 species) suspensions (1 × 10 4 cells / ml) which were subcultured were added to the previously prepared pullulan-cholesterol-coated α. -Linolenic acid encapsulated fat emulsion (average particle size
300 nm) at 5,10,20 and 40 μg / m in α-linolenic acid concentration
It was added so that it might become 1 and the anticancer effect was evaluated. As a comparison, addition of α-linolenic acid alone (concentrations of 10, 20, 40, and 80 μg / ml) and pullulan-cholesterol derivative alone (concentrations of 5, 10, 20, and 40) were also used for comparison.
μg / ml) was evaluated for its anticancer effect. Cells are 5% CO
The cells were cultured in the presence of 2 at 37 ° C for 5 days. After 5 days, the cells were detached by trypsin treatment, stained with trypan blue, and (A) the number of living cells without treatment and (B) the number of living cells after addition of the drug, B / A × 100 was determined to survive. Calculated as a rate.
【００２０】結果を図２に示した。図２により、２つの
大腸癌細胞に対してプルラン−コレステロール誘導体は
直接に毒性および制癌効果を示さないが、α−リノレン
酸を内包した脂肪乳剤は、濃度40μg/mlでは生存率が０
％となり、強い制癌効果を示す。また、この制癌効果
は、α−リノレン酸の単独添加に比べて極めて強くなっ
た。The results are shown in FIG. As shown in FIG. 2, the pullulan-cholesterol derivative has no direct toxicity or antitumor effect on the two colon cancer cells, but the fat emulsion containing α-linolenic acid has a survival rate of 0 at a concentration of 40 μg / ml.
%, Showing a strong anticancer effect. In addition, this anti-cancer effect was extremely strong as compared with the case where α-linolenic acid was added alone.
【００２１】実施例２ （α−リノレン酸の細胞内取り込み実験）前記２種類の
ヒト大腸癌細胞懸濁液（５×104cells/5ml) に14Ｃで放
射ラベルされた２mg/ml のα−リノレン酸懸濁液および
プルラン−コレステロール／α−リノレン酸脂肪乳剤
（α−リノレン酸＝1.86mg/ml)をそれぞれα−リノレン
酸濃度で20, 40, 60および80μg/mlとなるように添加
し、５％ＣＯ2 存在下、37℃で１時間培養した。その後
トリプシン処理により細胞を剥離し、細胞内に取り込ま
れなかったα−リノレン酸をシリコンオイル比重遠心法
により分離した（10,000Ｇ，３分間）。シリコンオイル
を通過した細胞に液体シンチレーションカクテルを加
え、β線カウンターにより14Ｃの放射活性を測定し、そ
の結果より細胞内に取り込まれたα−リノレン酸の量を
測定した。Example 2 (Intracellular uptake of α-linolenic acid) 2 mg / ml α radiolabeled with 14 C was added to the above-mentioned two types of human colon cancer cell suspensions (5 × 10 4 cells / 5 ml). -Linolenic acid suspension and pullulan-cholesterol / α-linolenic acid fat emulsion (α-linolenic acid = 1.86mg / ml) were added so that the concentration of α-linolenic acid was 20, 40, 60 and 80μg / ml, respectively. Then, the cells were cultured at 37 ° C. for 1 hour in the presence of 5% CO 2 . After that, the cells were detached by trypsin treatment, and α-linolenic acid that was not incorporated into the cells was separated by a silicone oil gravity centrifuge method (10,000 G, 3 minutes). Liquid scintillation cocktail was added to cells that had passed through silicone oil, and 14 C radioactivity was measured by a β-ray counter. From the results, the amount of α-linolenic acid incorporated into the cells was measured.
【００２２】結果を図３に示す。図３により、２種類の
ヒト大腸癌細胞内へのα−リノレン酸の取込量は、本発
明の制癌剤を投与したときと、α−リノレン酸を単独投
与したときとの間に大きな違いはなかった。しかし、実
施例１により本発明の制癌剤は強い制癌効果を示した。
このことからα−リノレン酸を多糖−コレステロール誘
導体を用いて脂肪乳剤とすることによって、癌細胞に対
して強い効果を発揮できる制癌剤とすることができる。The results are shown in FIG. According to FIG. 3, the amount of α-linolenic acid taken up into the two types of human colon cancer cells is not significantly different between when the anticancer agent of the present invention is administered and when α-linolenic acid is administered alone. There wasn't. However, the anticancer agent of the present invention showed a strong anticancer effect according to Example 1.
From this, by using α-linolenic acid as a fat emulsion using a polysaccharide-cholesterol derivative, it can be used as a carcinostatic agent capable of exerting a strong effect on cancer cells.
【図１】動的光散乱法で測定した本発明の脂肪乳剤の粒
径と超音波照射時間との関係を示すグラフである。縦軸
は平均粒径（ｎｍ）、横軸は超音波照射時間（分）であ
る。FIG. 1 is a graph showing the relationship between the particle size of a fat emulsion of the present invention measured by a dynamic light scattering method and ultrasonic irradiation time. The vertical axis represents the average particle size (nm), and the horizontal axis represents the ultrasonic wave irradiation time (minutes).
【図２】本発明の脂肪乳剤、プルラン−コレステロール
誘導体、およびα−リノレン酸の、２種類のヒト大腸癌
細胞に対する制癌効果を示すグラフである。ａはプルラ
ン−コレステロール誘導体、ｂはα−リノレン酸、ｃは
プルラン−コレステロール被覆α−リノレン酸内包脂肪
乳剤の場合である。縦軸は生存率（％）、横軸はα−リ
ノレン酸、またはプルラン−コレステロール誘導体（CH
P-50-1.8）の濃度（μg/ml）である。FIG. 2 is a graph showing the carcinostatic effect of the fat emulsion, pullulan-cholesterol derivative, and α-linolenic acid of the present invention on two types of human colon cancer cells. a is a pullulan-cholesterol derivative, b is α-linolenic acid, and c is a pullulan-cholesterol-coated α-linolenic acid-containing fat emulsion. The vertical axis is the survival rate (%), and the horizontal axis is α-linolenic acid or pullulan-cholesterol derivative (CH
P-50-1.8) concentration (μg / ml).
【図３】本発明の脂肪乳剤とα−リノレン酸懸濁液の投
与量の違いによるα−リノレン酸の、２種類のヒト大腸
癌細胞内取込量の変化を示すグラフである。○はα−リ
ノレン酸、●はプルラン−コレステロール被覆α−リノ
レン酸内包脂肪乳剤の場合である。縦軸は、細胞内取込
量（pg/cell)、横軸は、α−リノレン酸濃度（μg/ml)
である。FIG. 3 is a graph showing changes in the uptake of α-linolenic acid into two types of human colon cancer cells due to the difference in dose between the fat emulsion of the present invention and the α-linolenic acid suspension. ◯ represents α-linolenic acid, and ● represents pullulan-cholesterol-coated α-linolenic acid-containing fat emulsion. The vertical axis is the intracellular uptake (pg / cell), and the horizontal axis is the α-linolenic acid concentration (μg / ml).
Is.
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【手続補正書】[Procedure amendment]
【提出日】平成３年５月２日[Submission date] May 2, 1991
【手続補正１】[Procedure Amendment 1]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】請求項１[Name of item to be corrected] Claim 1
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【手続補正２】[Procedure Amendment 2]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】０００６[Correction target item name] 0006
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】本発明は、多糖類の単糖
単位100 個あたり0.1 〜10個の割合で多糖類に側鎖コレ
ステロールが結合している多糖−コレステロール誘導体
とα−リノレン酸と水とから形成される脂肪乳剤を有効
成分として含有する制癌剤である。多糖−コレステロー
ル誘導体は、多糖類の水酸基を介してコレステリル基を
含む置換基が結合しているものであればよく、特に好ま
しくは、多糖の１級水酸基又は２級水酸基が、−OCH2CO
NHCH2CH2NHCOR または−OCONH(CH2)6NHCOR（但し、Ｒは
コレステリル基）で置換されているものである。The present invention provides a polysaccharide-cholesterol derivative in which side chain cholesterol is bound to the polysaccharide at a ratio of 0.1 to 10 per 100 monosaccharide units of the polysaccharide , and α-linolenic acid. fat emulsion formed from water is a cancer drug containing as an active ingredient. The polysaccharide-cholesterol derivative may be one in which a substituent containing a cholesteryl group is bound via a hydroxyl group of the polysaccharide, and particularly preferably, the primary hydroxyl group or secondary hydroxyl group of the polysaccharide is -OCH 2 CO 2.
NHCH 2 CH 2 NHCOR or -OCONH (CH 2) 6 NHCOR (where, R represents a cholesteryl group) are those substituted with.
【手続補正３】[Procedure 3]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００１７[Correction target item name] 0017
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【００１７】 1 Ｈ−ＮＭＲ δ(ppm) 0.60-1.70 帰属ａ， 3.00-4.00 帰属ｂ， 4.30-5.70 帰属ｃ。 元素分析 (％) 生成物 ：Ｈ 6.35 Ｃ 40.97 Ｎ 0.26 プルラン（原料）：Ｈ 6.67 Ｃ 40.55 Ｎ 0 プルラン100 単糖当りｘ個のコレステリル基が導入され
ているとすると、 Ｎ／Ｃ＝（14.0×２ｘ）／12.0×（６＋35ｘ）＝0.26／
40.97 ｘ＝1.8 個となり、プルラン100 単糖当り、1.8 個のコ
レステリル基が導入されていることがわかった。得られ
たプルランを CHP-50-1.8 とする。 1 H-NMR δ (ppm) 0.60-1.70 attribution a, 3.00-4.00 attribution b, 4.30-5.70 attribution c. Elemental analysis (%) Product: H 6.35 C 40.97 N 0.26 Pullulan (raw material): H 6.67 C 40.55 N 0 Pullulan 100 If x cholesteryl groups are introduced per monosaccharide, N / C = (14.0 × 2x) /12.0x (6 + 35x) = 0.26 /
It was 40.97 x = 1.8, and it was found that 1.8 cholesteryl groups were introduced per 100 pullulan monosaccharides. The resulting pullulan and C HP-50-1. 8.
【手続補正４】[Procedure amendment 4]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００２１[Correction target item name] 0021
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【００２１】実施例２ （α−リノレン酸の細胞内取り込み実験）前記２種類の
ヒト大腸癌細胞懸濁液（５×104cells/5ml) に14Ｃ−α
−リノレン酸懸濁液 (2mg/ml) およびプルラン−コレス
テロール／α−リノレン酸脂肪乳剤（α−リノレン酸＝
1.86mg/ml)をそれぞれα−リノレン酸濃度で20, 40, 60
および80μg/mlとなるように添加し、５％ＣＯ2 存在
下、37℃で１時間培養した。その後トリプシン処理によ
り細胞を剥離し、細胞内に取り込まれなかったα−リノ
レン酸をシリコンオイル比重遠心法により分離した（1
0,000Ｇ，３分間）。シリコンオイルを通過した細胞に
液体シンチレーションカクテルを加え、β線カウンター
により14Ｃの放射活性を測定し、その結果より細胞内に
取り込まれたα−リノレン酸の量を測定した。Example 2 (Intracellular Uptake of α-Linolenic Acid) 14 C - α was added to the above-mentioned two types of human colon cancer cell suspensions (5 × 10 4 cells / 5 ml).
-Linolenic acid suspension (2 mg / ml) and pullulan-cholesterol / α-linolenic acid fat emulsion (α-linolenic acid =
1.86 mg / ml) at the α-linolenic acid concentration of 20, 40, 60
And 80 μg / ml, and the mixture was cultured at 37 ° C. for 1 hour in the presence of 5% CO 2 . After that, the cells were detached by trypsin treatment, and α-linolenic acid that was not incorporated into the cells was separated by a silicone oil gravity centrifuge method (1
(0000G, 3 minutes). Liquid scintillation cocktail was added to cells that had passed through silicone oil, and 14 C radioactivity was measured by a β-ray counter. From the results, the amount of α-linolenic acid incorporated into the cells was measured.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 佐藤 智典 京都府京都市東山区大和大路五条下る２丁 目上る 上梅屋町166−203 (72)発明者 福井 洋樹 京都府京都市左京区高野西開町15−301 (72)発明者 山口 茂彦 京都府伏見市深草西浦町８−102−312 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Inventor Tomonori Sato 2 Gojo-dori, 2-chome, Yamatooji, Higashiyama-ku, Kyoto 166-203 Kamiumeya-cho (72) Inventor Hiroki Fukui Nishino-cho, Takano-shi, Kyoto 15-301 (72) Inventor Shigehiko Yamaguchi 8-102-312, Fukakusa Nishiura-cho, Fushimi-shi, Kyoto Prefecture
Claims (1)
個の割合で多糖類の側鎖コレステロールが結合している
多糖−コレステロール誘導体とα−リノレン酸と水とを
含有する脂肪乳剤を有効成分とする制癌剤。1. 0.1 to 10 per 100 monosaccharide units of a polysaccharide
A carcinostatic agent comprising, as an active ingredient, a fat emulsion containing a polysaccharide-cholesterol derivative in which side chain cholesterol of a polysaccharide is bound at a ratio of α, linolenic acid and water.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3045694A JPH05139967A (en) | 1991-02-20 | 1991-02-20 | Carcinostatic agent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3045694A JPH05139967A (en) | 1991-02-20 | 1991-02-20 | Carcinostatic agent |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05139967A true JPH05139967A (en) | 1993-06-08 |
Family
ID=12726494
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3045694A Pending JPH05139967A (en) | 1991-02-20 | 1991-02-20 | Carcinostatic agent |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05139967A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1166745A4 (en) * | 1999-03-31 | 2005-07-20 | Nof Corp | Cosmetics containing polysaccharide-sterol derivatives |
| CN105663282A (en) * | 2016-02-17 | 2016-06-15 | 广州欧化药业有限公司 | Peony seed oil lipid emulsion and preparation method thereof |
-
1991
- 1991-02-20 JP JP3045694A patent/JPH05139967A/en active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1166745A4 (en) * | 1999-03-31 | 2005-07-20 | Nof Corp | Cosmetics containing polysaccharide-sterol derivatives |
| CN105663282A (en) * | 2016-02-17 | 2016-06-15 | 广州欧化药业有限公司 | Peony seed oil lipid emulsion and preparation method thereof |
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