JPH05103698A - アルカリ性ホスフアターゼのイソ酵素とイソホルムの分離、識別、量化方法 - Google Patents
アルカリ性ホスフアターゼのイソ酵素とイソホルムの分離、識別、量化方法Info
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- JPH05103698A JPH05103698A JP4024672A JP2467292A JPH05103698A JP H05103698 A JPH05103698 A JP H05103698A JP 4024672 A JP4024672 A JP 4024672A JP 2467292 A JP2467292 A JP 2467292A JP H05103698 A JPH05103698 A JP H05103698A
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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- C12Q1/007—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving isoenzyme profiles
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Abstract
(57)【要約】
本発明は主として、体液または組織抽出物のサンプルに
おいて、支持体媒質に、一つの緩衝液と、少なくとも１
種の非イオン系洗剤と少なくとも１種のアニオン系洗剤
とを加えて、アルカリ性ホスファターゼのイソ酵素とイ
ソホルムの分離と識別と量化のための方法に関するもの
である。肝臓、骨、胎盤、高分子、腸のイソ酵素とＬｐ
Ｘに結びつくイソ酵素は、特に、できる限り、確認試験
に依存することを避けて、確実に検証することができ
る。
おいて、支持体媒質に、一つの緩衝液と、少なくとも１
種の非イオン系洗剤と少なくとも１種のアニオン系洗剤
とを加えて、アルカリ性ホスファターゼのイソ酵素とイ
ソホルムの分離と識別と量化のための方法に関するもの
である。肝臓、骨、胎盤、高分子、腸のイソ酵素とＬｐ
Ｘに結びつくイソ酵素は、特に、できる限り、確認試験
に依存することを避けて、確実に検証することができ
る。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は本質的に、体液または、組織の抽
出液中に存在するアルカリ性ホスファターゼのイソ酵素
とイソホルムを分離しかつ識別（同定）することことを
可能にする電気泳動法に関するものである。
出液中に存在するアルカリ性ホスファターゼのイソ酵素
とイソホルムを分離しかつ識別（同定）することことを
可能にする電気泳動法に関するものである。
【０００２】本発明はまた、本発明の電気泳動法で確認
されたイソ酵素とイソホルムを量化（ｑｕａｎｔｉｆｉ
ｃａｔｉｏｎ）することを可能にする濃度測定法（ｄｅ
ｎｓｉｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ）に関するもの
である。
されたイソ酵素とイソホルムを量化（ｑｕａｎｔｉｆｉ
ｃａｔｉｏｎ）することを可能にする濃度測定法（ｄｅ
ｎｓｉｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ）に関するもの
である。
【０００３】本発明はまた、本発明の方法の実施に利用
する調剤及び本方法の生成物にも関する。
する調剤及び本方法の生成物にも関する。
【０００４】ＡＬＰと略称されるアルカリ性ホスファタ
ーゼという用語は（ＥＣ３．１．３．１）はアルカリ性
のｐＨにおいてリン酸エステルの加水分解を触媒する酵
素を包括するものである。
ーゼという用語は（ＥＣ３．１．３．１）はアルカリ性
のｐＨにおいてリン酸エステルの加水分解を触媒する酵
素を包括するものである。
【０００５】ＡＬＰは細胞膜に存在し、かつ、生体の殆
どの組織内にみられる。それらの位置に応じて、腸酵
素、腎酵素、骨酵素、肝酵素、胎盤酵素、及び胎児期の
腸酵素と言う。ＡＬＰはまた、血清中にも循環してい
る。
どの組織内にみられる。それらの位置に応じて、腸酵
素、腎酵素、骨酵素、肝酵素、胎盤酵素、及び胎児期の
腸酵素と言う。ＡＬＰはまた、血清中にも循環してい
る。
【０００６】人間の生体内では、４種類の遺伝子がＡＬ
Ｐの発現を制御している。すなわち普通のある組織遺伝
子（特に骨酵素、肝酵素、及び腎酵素をコードする）
と、腸遺伝子、胎盤遺伝子、胎児腸遺伝子であり、それ
ぞれのかかる遺伝子は対応するイソ酵素をコードする。
Ｐの発現を制御している。すなわち普通のある組織遺伝
子（特に骨酵素、肝酵素、及び腎酵素をコードする）
と、腸遺伝子、胎盤遺伝子、胎児腸遺伝子であり、それ
ぞれのかかる遺伝子は対応するイソ酵素をコードする。
【０００７】これらのイソ酵素のそれぞれは、それらの
物理化学的特性は変更するが、その生物学的特性は保存
する翻訳後の一つまたは幾つかの修正を施して、イソホ
ルムとすることができる。
物理化学的特性は変更するが、その生物学的特性は保存
する翻訳後の一つまたは幾つかの修正を施して、イソホ
ルムとすることができる。
【０００８】次のようなイソホルムは現在公知である。
すなわち、免疫グロブリンに結合したイソ酵素、四分裂
イソ酵素、シアル酸分か異常であるイソ酵素、細胞膜デ
ブリスに結合したイソ酵素（高分子と称する）、リポ蛋
白、例えばＬｐＸに結合したイソ酵素。
すなわち、免疫グロブリンに結合したイソ酵素、四分裂
イソ酵素、シアル酸分か異常であるイソ酵素、細胞膜デ
ブリスに結合したイソ酵素（高分子と称する）、リポ蛋
白、例えばＬｐＸに結合したイソ酵素。
【０００９】アルカリ性ホスファターゼの各種のイソ酵
素とイソホルムの数と量は、一方では個人の年令に応
じ、また他方では健康状態に応じて著しく変る。
素とイソホルムの数と量は、一方では個人の年令に応
じ、また他方では健康状態に応じて著しく変る。
【００１０】骨イソ酵素と、肝イソ酵素については特別
に調査した、つまり、骨系統及び／または肝−胆汁系に
影響する一切の一次ないし二次病理学は場合によって、
血清中の骨イソ酵素及び／または肝イソ酵素の増加また
は減少を起させかつ、他のイソ酵素または一つないし幾
つかのイソホルムの出現を伴う可能性があるからであ
る。
に調査した、つまり、骨系統及び／または肝−胆汁系に
影響する一切の一次ないし二次病理学は場合によって、
血清中の骨イソ酵素及び／または肝イソ酵素の増加また
は減少を起させかつ、他のイソ酵素または一つないし幾
つかのイソホルムの出現を伴う可能性があるからであ
る。
【００１１】周知のように、血清の骨イソ酵素の割合は
幼児から成人に向けて減少し、大増殖の時点でピークを
示す。幼児時代の増殖の停止が、骨イソ酵素の割合の異
常減少によって認められる。大増殖に伴って、血清中
に、第二の骨酵素部分が表われるが、これは四量体とし
て表われる。
幼児から成人に向けて減少し、大増殖の時点でピークを
示す。幼児時代の増殖の停止が、骨イソ酵素の割合の異
常減少によって認められる。大増殖に伴って、血清中
に、第二の骨酵素部分が表われるが、これは四量体とし
て表われる。
【００１２】この部分は正常な成人の血清にはないが、
しかし、病的な増殖性隆起が骨のレベルで存在する場合
はこれは成人にみられる（パゼット病、骨の腫瘍転
移）。
しかし、病的な増殖性隆起が骨のレベルで存在する場合
はこれは成人にみられる（パゼット病、骨の腫瘍転
移）。
【００１３】骨破壊作用の特徴は、シアル酸分が少ない
骨イソ酵素が存在することであろう。
骨イソ酵素が存在することであろう。
【００１４】肝イソ酵素は、健康な個人の全生涯を通じ
てその割合は通常は一定である。
てその割合は通常は一定である。
【００１５】繊維症のように肝臓の変性病は、肝臓の濾
過不良を起しかつ、肝細胞の漸進的な破壊を招く病気で
あるが、結局は肝イソ酵素の減少そして、消滅を招くこ
とになる。
過不良を起しかつ、肝細胞の漸進的な破壊を招く病気で
あるが、結局は肝イソ酵素の減少そして、消滅を招くこ
とになる。
【００１６】肝臓内または肝臓外胆汁帯（例えば近傍の
腫瘍によって起る肝炎や硬変症や、肝臓転移や肝臓圧
迫）は逆に、高分子の肝胆汁またはアルファ１部分と言
われるイソホルム（膜のデブリスに結合された）ならび
に様々なリポ蛋白に結びつく肝臓イソホルムのような他
のイソホルムの出現を伴う肝臓イソ酵素の増大を越すこ
とになろう。
腫瘍によって起る肝炎や硬変症や、肝臓転移や肝臓圧
迫）は逆に、高分子の肝胆汁またはアルファ１部分と言
われるイソホルム（膜のデブリスに結合された）ならび
に様々なリポ蛋白に結びつく肝臓イソホルムのような他
のイソホルムの出現を伴う肝臓イソ酵素の増大を越すこ
とになろう。
【００１７】急性炎症がない場合は、シアル酸分が低下
した肝臓イソ酵素が存在することは腫瘍の存在の兆候で
ある。
した肝臓イソ酵素が存在することは腫瘍の存在の兆候で
ある。
【００１８】シアール酸の含量が異常である肝イソ酵素
が見られるのは幼児の一過性血中リン酸塩過剰症の場合
である（幼児の場合の気道または消化道ビールス感
染）。
が見られるのは幼児の一過性血中リン酸塩過剰症の場合
である（幼児の場合の気道または消化道ビールス感
染）。
【００１９】アルカリ性ホスファターゼの別の類型のイ
ソ酵素の識別によって病理学的障害を検知することもで
きる。
ソ酵素の識別によって病理学的障害を検知することもで
きる。
【００２０】このようにして、妊娠以外の胎盤性のイソ
酵素の存在は腫瘍性の病状が急速に進んでいる兆候であ
り、腸のイソ酵素とイソホルムの量が多ければ、ある血
液循環系の病気のしるしでありかつ、胎児期の腸イソ酵
素は肝臓の初期の腫瘍（肝腫）の場合に見られることは
公知である。
酵素の存在は腫瘍性の病状が急速に進んでいる兆候であ
り、腸のイソ酵素とイソホルムの量が多ければ、ある血
液循環系の病気のしるしでありかつ、胎児期の腸イソ酵
素は肝臓の初期の腫瘍（肝腫）の場合に見られることは
公知である。
【００２１】したがって、アルカリ性ホスファターゼの
調査によって、診断上のみならず、病気の変化を追求す
るか、または処理効果を明確に表出するための患者の監
視上、かなりの助けとなろう。
調査によって、診断上のみならず、病気の変化を追求す
るか、または処理効果を明確に表出するための患者の監
視上、かなりの助けとなろう。
【００２２】各種のイソ酵素は通常アガロースまたはポ
リアクリルアミドゲルを用い、または酢酸セルロース膜
上を用いた電気泳動により分離される。
リアクリルアミドゲルを用い、または酢酸セルロース膜
上を用いた電気泳動により分離される。
【００２３】用いた技法次第では、検知されないか、は
っきり識別できないイソ酵素またはイソホルムもある。
感度も、必ずしも満足なものばかりではなく、したがっ
て早期の病理学的検知の妨げとなっている。
っきり識別できないイソ酵素またはイソホルムもある。
感度も、必ずしも満足なものばかりではなく、したがっ
て早期の病理学的検知の妨げとなっている。
【００２４】様々な類型の電気泳動の結果に及ぼす非イ
オン系洗剤の利用の影響は文献に記述されている。Ｆｉ
ｓｈｍａｎ Ｌは「サンプル及びゲル母材にＴｒｉｔｏ
ｎＸ−１００を用いる人体組織、血清及び腹水液のアル
カリ性ホスファターゼのアクリルアミド円板ゲル電気泳
動」という題名でＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＭｅｄｉｃｉ
ｎｅ、９巻３号、１９７４年３月、３０９〜３１５頁に
発表されている論文において、各種サンプル中及びアク
リルアミドゲルへの非イオン系洗剤Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−
１００の利用によって、このゲル中への高分子のイソ酵
素を浸透せしめることができ、これはこの洗剤がない場
合は添加点に留っていて一つの拡散域のように見えるこ
とを明らかにした。
オン系洗剤の利用の影響は文献に記述されている。Ｆｉ
ｓｈｍａｎ Ｌは「サンプル及びゲル母材にＴｒｉｔｏ
ｎＸ−１００を用いる人体組織、血清及び腹水液のアル
カリ性ホスファターゼのアクリルアミド円板ゲル電気泳
動」という題名でＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＭｅｄｉｃｉ
ｎｅ、９巻３号、１９７４年３月、３０９〜３１５頁に
発表されている論文において、各種サンプル中及びアク
リルアミドゲルへの非イオン系洗剤Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−
１００の利用によって、このゲル中への高分子のイソ酵
素を浸透せしめることができ、これはこの洗剤がない場
合は添加点に留っていて一つの拡散域のように見えるこ
とを明らかにした。
【００２５】このことは「アルカリ性ホスファターゼイ
ソ酵素」という題名で、ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＣＨＥＭＩ
ＳＴＲＹ、２８巻１０号、１９８２年１０月、２００７
〜２０１６頁、Ｗｉｎｓｔｏｎ−Ｓａｌｅｍ、Ｗａｓｈ
ｉｎｇｔｏｎ Ｕ．Ｓ．に発表のＭＯＳＳ等の論文に確
認されている。
ソ酵素」という題名で、ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＣＨＥＭＩ
ＳＴＲＹ、２８巻１０号、１９８２年１０月、２００７
〜２０１６頁、Ｗｉｎｓｔｏｎ−Ｓａｌｅｍ、Ｗａｓｈ
ｉｎｇｔｏｎ Ｕ．Ｓ．に発表のＭＯＳＳ等の論文に確
認されている。
【００２６】もう一つ米国特許ＵＳ−Ａ−４ ０３０
９９５に提案されているのは分子量が６００ないし２０
００の範囲内にあるＴｒｉｔｏｎ、Ｂｒｉｊまたは、Ｔ
ｗｅｅｎのような非イオン系の各種洗剤を、アガロース
ゲルまたはセルロース膜上でのアルカリ性ホスファター
ゼの電気泳動用に使用することである。各イソ酵素は支
持体内に浸透し、感度は改善されるが、分離の質に影響
は及ぼさない。
９９５に提案されているのは分子量が６００ないし２０
００の範囲内にあるＴｒｉｔｏｎ、Ｂｒｉｊまたは、Ｔ
ｗｅｅｎのような非イオン系の各種洗剤を、アガロース
ゲルまたはセルロース膜上でのアルカリ性ホスファター
ゼの電気泳動用に使用することである。各イソ酵素は支
持体内に浸透し、感度は改善されるが、分離の質に影響
は及ぼさない。
【００２７】アニオン系洗剤については、これは各種の
イソホルムに負の電荷をもたらし、泳動の全長にわたっ
て、これらイソホルムを拡げることを可能にならしめ
る。しかし、これらの利用には欠点がある。すなわち、
これらの洗剤は電流を増加させ（ゲル破壊の危険あり）
かつ従って、ジュール効果を増大させ（酸素の変質が可
能）、これらの洗剤は、また、往々にして蛋白質（従っ
て酵素）のレベルにおいて変性剤であり、これらは「抗
酵素」（ａｎｔｉ−ｅｎｚｙｍｅｓ）にさえなり、つま
り、ホスファターゼ作用の抑止を起させさえする可能性
がある。最後に、これらの洗剤は、与えられたイソホル
ムの場合、余りも大きい電荷を与える可能性があり、電
気泳動の際イソホルムを余りにも強く泳動させかつ、こ
れをゲルから逸出させさえする可能性がある。
イソホルムに負の電荷をもたらし、泳動の全長にわたっ
て、これらイソホルムを拡げることを可能にならしめ
る。しかし、これらの利用には欠点がある。すなわち、
これらの洗剤は電流を増加させ（ゲル破壊の危険あり）
かつ従って、ジュール効果を増大させ（酸素の変質が可
能）、これらの洗剤は、また、往々にして蛋白質（従っ
て酵素）のレベルにおいて変性剤であり、これらは「抗
酵素」（ａｎｔｉ−ｅｎｚｙｍｅｓ）にさえなり、つま
り、ホスファターゼ作用の抑止を起させさえする可能性
がある。最後に、これらの洗剤は、与えられたイソホル
ムの場合、余りも大きい電荷を与える可能性があり、電
気泳動の際イソホルムを余りにも強く泳動させかつ、こ
れをゲルから逸出させさえする可能性がある。
【００２８】カチオン系洗剤のみを使用する場合は、そ
の電荷が変る高分子部分が、血清蛋白の電気泳動におい
てそれが採る方向とは反対方向へ泳動し、したがって、
解釈が難しくなる。
の電荷が変る高分子部分が、血清蛋白の電気泳動におい
てそれが採る方向とは反対方向へ泳動し、したがって、
解釈が難しくなる。
【００２９】これらの一切の理由から、アニオン系また
はカチオン系の洗剤はアルカリ性ホスファターゼの識別
用としては、電気泳動技法には、普通、全く使用されな
い。
はカチオン系の洗剤はアルカリ性ホスファターゼの識別
用としては、電気泳動技法には、普通、全く使用されな
い。
【００３０】現在まで、特に、骨及び肝臓のイソ酵素の
正しい分離と確実な識別を得ることができたのは、二重
分析を必要とする補助技法に依存する場合だけであっ
た。
正しい分離と確実な識別を得ることができたのは、二重
分析を必要とする補助技法に依存する場合だけであっ
た。
【００３１】したがって、同じ支持体上に分析すべきサ
ンプルのみならず、５６℃で１０分間熱変性を施したサ
ンプルも泳動させて、酢酸セルローズ膜上で電気泳動を
実施することは公知である。
ンプルのみならず、５６℃で１０分間熱変性を施したサ
ンプルも泳動させて、酢酸セルローズ膜上で電気泳動を
実施することは公知である。
【００３２】イソ酵素源（肝臓または骨の）次第で様々
な速度でアルカリ性ホスファターゼからシアル酸の残渣
を除去するノイラミニダーゼでサンプルを処理すること
は、これも、公知であり、これによって肝酵素または骨
酵素に相当する電気泳動帯の分離を確実に改善すること
ができる。公知の各技法によれば、濃度測定分析によっ
てでさえも、補助試験に依存することなしには２分離部
分を、はっきりとは観察することはできない、注目すべ
きことだが、ノイラミニダーゼは無唾液グリコプリテイ
ン（ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）で構成
された腸管イソ酵素には作用しない。
な速度でアルカリ性ホスファターゼからシアル酸の残渣
を除去するノイラミニダーゼでサンプルを処理すること
は、これも、公知であり、これによって肝酵素または骨
酵素に相当する電気泳動帯の分離を確実に改善すること
ができる。公知の各技法によれば、濃度測定分析によっ
てでさえも、補助試験に依存することなしには２分離部
分を、はっきりとは観察することはできない、注目すべ
きことだが、ノイラミニダーゼは無唾液グリコプリテイ
ン（ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）で構成
された腸管イソ酵素には作用しない。
【００３３】各二重分析技法は不幸にして遅くて、経費
が高い。
が高い。
【００３４】洗剤の使用を含む公知の各方法による分析
時間も、洗剤が一般にゲルに添加されるのはゲルの鋳込
み（ｃａｓｔｉｎｇ）と冷却の後であるという事実によ
って長くなる。すなわちいわゆる電気泳動の前に必要な
のは、３０分間、平衡化と称する緩衝液にゲルを入れる
ことである。このような緩衝液の保存時間はほんの僅か
（６０日）にすぎないし、従って１年もかかる分析を実
施する場合は更新せねばならない。
時間も、洗剤が一般にゲルに添加されるのはゲルの鋳込
み（ｃａｓｔｉｎｇ）と冷却の後であるという事実によ
って長くなる。すなわちいわゆる電気泳動の前に必要な
のは、３０分間、平衡化と称する緩衝液にゲルを入れる
ことである。このような緩衝液の保存時間はほんの僅か
（６０日）にすぎないし、従って１年もかかる分析を実
施する場合は更新せねばならない。
【００３５】本発明の目的はアルカリ性ホスファターゼ
の骨または肝イソ酵素を正しく分離することと、一切の
他のイソ酵素またはイソホルムをはっきりと、識別して
しかも非常に強い感度を与えることを可能ならしめる電
気泳動技法を提供することである。
の骨または肝イソ酵素を正しく分離することと、一切の
他のイソ酵素またはイソホルムをはっきりと、識別して
しかも非常に強い感度を与えることを可能ならしめる電
気泳動技法を提供することである。
【００３６】同様に、本発明の目的はサンプルの二重分
析には頼らずに実施することができるような分離を可能
ならしめることである。
析には頼らずに実施することができるような分離を可能
ならしめることである。
【００３７】本発明のもう一つの目的は体液または組織
抽出物中のアルカリ性ホスファターゼの、骨イソ酵素と
肝イソ酵素を直接量化（ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ）することを可能ならしめる電気泳動法を提供するこ
とである。
抽出物中のアルカリ性ホスファターゼの、骨イソ酵素と
肝イソ酵素を直接量化（ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ）することを可能ならしめる電気泳動法を提供するこ
とである。
【００３８】特に興味ある一つの目的はすぐ使える状態
にあり、保存が長くかつ、サンプルを立派に着色するこ
とができ、しかも、より簡単な方法の過程において使用
可能であり、かつ公知の各技法で採用する手順に比べ
て、持続時間をかなり短くした電気泳動キットを提供す
ることである。
にあり、保存が長くかつ、サンプルを立派に着色するこ
とができ、しかも、より簡単な方法の過程において使用
可能であり、かつ公知の各技法で採用する手順に比べ
て、持続時間をかなり短くした電気泳動キットを提供す
ることである。
【００３９】驚くべきことは電気泳動で用いられるアガ
ロースのゲルでは非イオン系洗剤とアニオン系洗剤の同
時使用によって上記の各目的を達成することができた。
ロースのゲルでは非イオン系洗剤とアニオン系洗剤の同
時使用によって上記の各目的を達成することができた。
【００４０】本発明によれば、支持媒体上に緩衝液と、
少なくとも１種の非イオン系の洗剤と、少なくとも１種
類のアニオン系洗剤を加えることを特徴とする、体液ま
たは組織抽出物サンプル中のアルカリ性ホスファターゼ
のイソ酵素とイソホルムを分離し、識別するための電気
泳動法が提供される。これらの洗剤は緩衝液に溶けてい
る方が好ましい。
少なくとも１種の非イオン系の洗剤と、少なくとも１種
類のアニオン系洗剤を加えることを特徴とする、体液ま
たは組織抽出物サンプル中のアルカリ性ホスファターゼ
のイソ酵素とイソホルムを分離し、識別するための電気
泳動法が提供される。これらの洗剤は緩衝液に溶けてい
る方が好ましい。
【００４１】好ましくは、各洗剤が緩衝液中に存在する
量は０．１ないし１０ｇ／ｌである。
量は０．１ないし１０ｇ／ｌである。
【００４２】有利には、非イオン系洗剤とアニオン系洗
剤の割合は１：０．５ないし２：１の範囲内にある。
剤の割合は１：０．５ないし２：１の範囲内にある。
【００４３】好ましくは、緩衝液のｐＨは８ないし１１
の範囲内にある。好ましい一実施態様ではｐＨは９．４
５である。
の範囲内にある。好ましい一実施態様ではｐＨは９．４
５である。
【００４４】使用緩衝液は好ましくはホウ酸を含むトリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタンである。
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタンである。
【００４５】アニオン系洗剤は胆汁酸（ｂｉｌｉａｒｙ
ａｃｉｄｓ）と胆汁塩から選ぶことができ、かつ、こ
の場合、好ましくは、デオキシコール酸ナトリウムまた
はタウロコール酸ナトリウムからなっていてもよい。
ａｃｉｄｓ）と胆汁塩から選ぶことができ、かつ、こ
の場合、好ましくは、デオキシコール酸ナトリウムまた
はタウロコール酸ナトリウムからなっていてもよい。
【００４６】または、アニオン系洗剤は次式の化合物か
らなっていてもよい。 Ｒ1 −ＸＮａ （ここにＲ1 は炭素原子が６ないし１２の直鎖または分
岐アルキル鎖を表わし、またＸは硫酸塩、スルホン酸塩
及びカルボン酸塩の群から選んだ基を表わす）
らなっていてもよい。 Ｒ1 −ＸＮａ （ここにＲ1 は炭素原子が６ないし１２の直鎖または分
岐アルキル鎖を表わし、またＸは硫酸塩、スルホン酸塩
及びカルボン酸塩の群から選んだ基を表わす）
【００４７】本発明の方法では、アニオン系洗剤として
そのアミン官能基が、炭素原子が６ないし１２であるＮ
−アルキルまたはＮ−アルキル置換基を担持するアミノ
酸誘導体を用いることもできる。
そのアミン官能基が、炭素原子が６ないし１２であるＮ
−アルキルまたはＮ−アルキル置換基を担持するアミノ
酸誘導体を用いることもできる。
【００４８】電気泳動用の支持媒質は酢酸セルローズ
膜、ポリアクリルアミドまたはアガロースゲルであって
もよい。
膜、ポリアクリルアミドまたはアガロースゲルであって
もよい。
【００４９】この最後の場合（アガロースゲル）、各洗
剤はゲルの鋳造（ｃａｓｔｉｎｇ）に先立ってアガロー
スの緩衝化液に添加するか、あるいは平衡緩衝液に混ぜ
て、既に鋳造したゲルに添加してもよい。
剤はゲルの鋳造（ｃａｓｔｉｎｇ）に先立ってアガロー
スの緩衝化液に添加するか、あるいは平衡緩衝液に混ぜ
て、既に鋳造したゲルに添加してもよい。
【００５０】非イオン系の洗剤はＴｒｉｔｏｎ、Ｂｒｉ
ｊ及びＴｗｅｅｎ型の各誘導体や、リュブロル、エチル
フエニルポリオキシエチレングリコール及びＮ，Ｎ−ジ
メチルドデシルアミンＮ−オキサイドからなる群から選
ばれる。
ｊ及びＴｗｅｅｎ型の各誘導体や、リュブロル、エチル
フエニルポリオキシエチレングリコール及びＮ，Ｎ−ジ
メチルドデシルアミンＮ−オキサイドからなる群から選
ばれる。
【００５１】本発明の方法には更に、本方法で分離され
識別されたアルカリ性ホスファターゼのイソ酵素とイソ
ホルムの量化の段階も含むことができる。この量化は、
５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルフォスフエー
トと、ニトロテトラゾリウムブルーを含む溶液中で１５
分間ゲルをインキュベートした後、約６００ｎｍで濃度
測定分析により実施することができる。
識別されたアルカリ性ホスファターゼのイソ酵素とイソ
ホルムの量化の段階も含むことができる。この量化は、
５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルフォスフエー
トと、ニトロテトラゾリウムブルーを含む溶液中で１５
分間ゲルをインキュベートした後、約６００ｎｍで濃度
測定分析により実施することができる。
【００５２】本発明のもう一つの目的はアガロースゲル
と、少なくとも１種の非イオン系洗剤と少なくとも１種
のアニオン系洗剤からなる洗剤薬品とを含む、アルカリ
性ホスファターゼのイソ酵素の電気泳動用キットであ
る。好ましくは、これらキットのアガロースゲルはこれ
に緩衝液に溶かした洗剤を、アガロースを含むゲルの凝
固の前に添加して製作する。
と、少なくとも１種の非イオン系洗剤と少なくとも１種
のアニオン系洗剤からなる洗剤薬品とを含む、アルカリ
性ホスファターゼのイソ酵素の電気泳動用キットであ
る。好ましくは、これらキットのアガロースゲルはこれ
に緩衝液に溶かした洗剤を、アガロースを含むゲルの凝
固の前に添加して製作する。
【００５３】各洗剤は上記のものから選ぶ。
【００５４】本発明の他の目的はこれら洗剤を含むアガ
ロースのゲルである。有利な方法としては、本発明のキ
ットの作成に当って、アガロースが凝固する前に各洗剤
の他に、クロルヘキシジンを添加する。この物質は良好
な保存料であり、本発明の一目的はこの目的で、実験室
の試薬にこれを利用することである。
ロースのゲルである。有利な方法としては、本発明のキ
ットの作成に当って、アガロースが凝固する前に各洗剤
の他に、クロルヘキシジンを添加する。この物質は良好
な保存料であり、本発明の一目的はこの目的で、実験室
の試薬にこれを利用することである。
【００５５】本発明のもう一つの目的は体液や組織抽出
物のサンプル中のイソ酵素やイソホルムの識別と量化の
ために本発明のキットを利用することである。
物のサンプル中のイソ酵素やイソホルムの識別と量化の
ために本発明のキットを利用することである。
【００５６】本発明は下記に再記載する（実施例１ない
し４）電気泳動ゲルの調製の実施例ならびに使用実施例
（実施例５）によって例示する。
し４）電気泳動ゲルの調製の実施例ならびに使用実施例
（実施例５）によって例示する。
【００５７】実施例 １ないし４（調製） アガロースの標準溶液は下記のように調製する。すなわ
ち、１ｌの蒸溜水に、下記を逐次添加する。すなわち、
０．３８モルのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン、０．０６２モルのホウ酸、ｐＨを９．４５にするた
めの約０．０２モルの水酸化ナトリウム。完全溶解後、
１０ｇのアガロースならびに、所望のゲルの特徴（組
織、保水率等）を得られるようにする周知の各添加物
を、強く攪拌し乍ら添加する。この混合物を９５℃に加
熱する。完全に溶解したら、これを５５℃に冷却する。
ち、１ｌの蒸溜水に、下記を逐次添加する。すなわち、
０．３８モルのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン、０．０６２モルのホウ酸、ｐＨを９．４５にするた
めの約０．０２モルの水酸化ナトリウム。完全溶解後、
１０ｇのアガロースならびに、所望のゲルの特徴（組
織、保水率等）を得られるようにする周知の各添加物
を、強く攪拌し乍ら添加する。この混合物を９５℃に加
熱する。完全に溶解したら、これを５５℃に冷却する。
【００５８】実施例 １ １０エチレン残基を含む１ｇのエチルフエニルポリオキ
シエチレングリコ−ルと０．７５ｇのＮ−ラウロイルサ
ルコシン酸ナトリウムならびに２００ｍｇのクロルヘキ
シジンを標準溶液に添加する。溶解が完了したら、攪拌
を停止し、適当な支持体上でアガロースゲル（１０×
７．５ｃｍのゲル２００ないし２５０個）の鋳込みを実
施する。
シエチレングリコ−ルと０．７５ｇのＮ−ラウロイルサ
ルコシン酸ナトリウムならびに２００ｍｇのクロルヘキ
シジンを標準溶液に添加する。溶解が完了したら、攪拌
を停止し、適当な支持体上でアガロースゲル（１０×
７．５ｃｍのゲル２００ないし２５０個）の鋳込みを実
施する。
【００５９】実施例 ２ １０エチレン残基を含む１ｇのエチルフエニルポリオキ
シエチレングリコ−ルと０．９ｇのＮ−ラウロイル−Ｎ
−メチルタウリン酸ナトリウムならびに２００ｍｇのク
ロルヘキシジンを標準溶液に添加する。完全溶解後、攪
拌を停止し、適当な支持体上でアガロースゲル（１０×
７．５ｃｍのゲル２００ないし２５０個）の鋳込みを実
施する。
シエチレングリコ−ルと０．９ｇのＮ−ラウロイル−Ｎ
−メチルタウリン酸ナトリウムならびに２００ｍｇのク
ロルヘキシジンを標準溶液に添加する。完全溶解後、攪
拌を停止し、適当な支持体上でアガロースゲル（１０×
７．５ｃｍのゲル２００ないし２５０個）の鋳込みを実
施する。
【００６０】実施例 ３ １０エチレン残基を含む１ｇのポリオキシエチレンラウ
リルエーテル、ＰＥＧ９−１０（平均分子量５８２）と
０．７５ｇのＮ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウムな
らびに２００ｍｇのクロルヘキシジンを標準溶液に添加
する。完全溶解後、攪拌を停止し、適当な支持体上にア
ガロースゲル（１０×７．５ｃｍのゲル２００ないし２
５０個）を鋳込む。
リルエーテル、ＰＥＧ９−１０（平均分子量５８２）と
０．７５ｇのＮ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウムな
らびに２００ｍｇのクロルヘキシジンを標準溶液に添加
する。完全溶解後、攪拌を停止し、適当な支持体上にア
ガロースゲル（１０×７．５ｃｍのゲル２００ないし２
５０個）を鋳込む。
【００６１】実施例 ４ １０エチレン残基を含む１ｇのＮ−酸化ジメチルＮ−Ｎ
ドデシルアミンと０．７５ｇのＮ−ラウロイルサルコシ
ン酸ナトリウムならびに２００ｍｇのクロルヘキシジン
を標準溶液に添加する。完全溶解後、攪拌を停止し、適
当な支持体上にアガロースゲル（１０×７．５ｃｍのゲ
ル２００ないし２５０個）の鋳込むを実施する。
ドデシルアミンと０．７５ｇのＮ−ラウロイルサルコシ
ン酸ナトリウムならびに２００ｍｇのクロルヘキシジン
を標準溶液に添加する。完全溶解後、攪拌を停止し、適
当な支持体上にアガロースゲル（１０×７．５ｃｍのゲ
ル２００ないし２５０個）の鋳込むを実施する。
【００６２】注目すべきことが、アガロースゲル中の保
存料薬品としてのクロルヘキシジンの使用（普通、外科
手術時に手の消毒用に、あるいは、例えば、口腔疾患の
場合、強力な消毒剤として、一般的に使用される）は、
特に、有利である。すなわち、得られる結果は、従来の
ナトリウムアシドを使用する場合と同様に良好である。
後者の場合は、例えば、水配管の場合、金属物体に接触
すれば、爆発性の化合物が形成されるおそれがある。
存料薬品としてのクロルヘキシジンの使用（普通、外科
手術時に手の消毒用に、あるいは、例えば、口腔疾患の
場合、強力な消毒剤として、一般的に使用される）は、
特に、有利である。すなわち、得られる結果は、従来の
ナトリウムアシドを使用する場合と同様に良好である。
後者の場合は、例えば、水配管の場合、金属物体に接触
すれば、爆発性の化合物が形成されるおそれがある。
【００６３】更に、出願人はこのために、アルカリ性ホ
スファターゼのイソ酵素の電気泳動分析以外の類型の電
気泳動分析を対象とするアガロースまたは寒天のゲル用
にクロルヘキシジンを使用して成功している。保存料薬
剤としてこのクロルヘキシジンの利用によって細菌やカ
ビ類や、酵母や藻類の、様々な実験室用試薬中での発生
が防止されるが、これは何度も繰返して効果があること
が判明した。
スファターゼのイソ酵素の電気泳動分析以外の類型の電
気泳動分析を対象とするアガロースまたは寒天のゲル用
にクロルヘキシジンを使用して成功している。保存料薬
剤としてこのクロルヘキシジンの利用によって細菌やカ
ビ類や、酵母や藻類の、様々な実験室用試薬中での発生
が防止されるが、これは何度も繰返して効果があること
が判明した。
【００６４】実施例 ５（使用） 実施例１，２，３，４で述べた各調製法に従って求めた
ゲルをテーブル上に置き、吸い取って過剰の緩衝液を除
き、各サプルを普通の方法に従って電気泳動に供する。
この際、ゲルは１５０Ｖで２５分間（１０×７．５ｃｍ
のゲルの場合の値）電気泳動を施し、好ましくは、この
場合、電気泳動緩衝液として、アガロースの標準溶液の
調製に用いたと同じ緩衝液を使用する。電気泳動終了
後、ゲルは基質である５−ブロモ−４−クロロ−３−イ
ンドイルリン酸塩と、硝酸テトラゾリウムブルーを含む
ｐＨ１０．６の緩衝液２−アミノ−２−メチルプロパノ
ール溶液１０ｍｌにより、４５℃で１５分間培養する。
次に、ゲルは蒸溜水及び１または５％酢酸溶液で洗浄
し、次に乾燥する。洗浄後、ゲルは、同様に吸い取り、
何回か圧搾し、そして乾燥する。
ゲルをテーブル上に置き、吸い取って過剰の緩衝液を除
き、各サプルを普通の方法に従って電気泳動に供する。
この際、ゲルは１５０Ｖで２５分間（１０×７．５ｃｍ
のゲルの場合の値）電気泳動を施し、好ましくは、この
場合、電気泳動緩衝液として、アガロースの標準溶液の
調製に用いたと同じ緩衝液を使用する。電気泳動終了
後、ゲルは基質である５−ブロモ−４−クロロ−３−イ
ンドイルリン酸塩と、硝酸テトラゾリウムブルーを含む
ｐＨ１０．６の緩衝液２−アミノ−２−メチルプロパノ
ール溶液１０ｍｌにより、４５℃で１５分間培養する。
次に、ゲルは蒸溜水及び１または５％酢酸溶液で洗浄
し、次に乾燥する。洗浄後、ゲルは、同様に吸い取り、
何回か圧搾し、そして乾燥する。
【００６５】更に注目すべきことだが、硝酸テトラゾリ
ウムブルーは基質の、ある紫色の化合物への変態によっ
て得られる着色を増幅する。緩衝液中での１５分間の培
養は素晴らしい成果を得るのには全く十分である。
ウムブルーは基質の、ある紫色の化合物への変態によっ
て得られる着色を増幅する。緩衝液中での１５分間の培
養は素晴らしい成果を得るのには全く十分である。
【００６６】これらのゲルは、電気泳動後は、サンプル
に含まれる各種のイソホルムとイソ酵素に応じた一連の
紫色の着色帯を呈し、かつ、殆どの場合、肉眼で識別す
ることができる。
に含まれる各種のイソホルムとイソ酵素に応じた一連の
紫色の着色帯を呈し、かつ、殆どの場合、肉眼で識別す
ることができる。
【００６７】様々な発生源の多くのサンプルの場合、信
頼性をもって、かつ補助分析に頼ることなく下記のイソ
酵素とイソホルムを識別することができた。すなわち、
リポ蛋白に結びつくイソ酵素、ＬｐＸに結びつくイソ酵
素で、Ｘ部分は一過性の幼児の血中リン酸過剰症におけ
る、高分子酵素、胎児期の腸酵素、四量体酵素（第二の
骨酵素、第二及び第三の胎盤酵素、様々な腸酵素のよう
なもの）、肝臓酵素、骨酵素、成人の腸酵素及び胎盤性
の肝、骨、腸酵素を表わし、これら酵素部分はそれぞれ
免疫グロブリンに結合した形で存在している。
頼性をもって、かつ補助分析に頼ることなく下記のイソ
酵素とイソホルムを識別することができた。すなわち、
リポ蛋白に結びつくイソ酵素、ＬｐＸに結びつくイソ酵
素で、Ｘ部分は一過性の幼児の血中リン酸過剰症におけ
る、高分子酵素、胎児期の腸酵素、四量体酵素（第二の
骨酵素、第二及び第三の胎盤酵素、様々な腸酵素のよう
なもの）、肝臓酵素、骨酵素、成人の腸酵素及び胎盤性
の肝、骨、腸酵素を表わし、これら酵素部分はそれぞれ
免疫グロブリンに結合した形で存在している。
【００６８】約６００ｎｍでの比重測定分析によって、
与えられたサンプル中に存在する各種の酵素部分を正確
に定量することができる。もしこのような分析を経時的
に同一患者について実施すればこれらによって、病気の
動向の追跡、または精密な診断が可能となる。
与えられたサンプル中に存在する各種の酵素部分を正確
に定量することができる。もしこのような分析を経時的
に同一患者について実施すればこれらによって、病気の
動向の追跡、または精密な診断が可能となる。
【００６９】上記の例は本発明の特に有利な実施態様を
例示しているけれども、これらは発明の範囲を制限する
ものでは全くない。
例示しているけれども、これらは発明の範囲を制限する
ものでは全くない。
【００７０】緩衝液中の非イオン系洗剤及びアニオン系
の洗剤の混合物は、支持体が例えば酢酸セルローズで構
成されているような電気泳動法にも利用することができ
る。
の洗剤の混合物は、支持体が例えば酢酸セルローズで構
成されているような電気泳動法にも利用することができ
る。
【００７１】例えば、上記のように２洗剤を含むこのよ
うな緩衝液を含まないゲルＢｅｃｋｍａｎ Ｐａｒａｇ
ｏｎ（登録商標）ＳＰＥを扱う場合は、このような従来
のゲルをこのような緩衝液中で培養させても本発明の枠
を逸脱するのではない。すなわち、方法はより時間がか
かっても得られる結果は全く同じであり、このような実
施方法は本発明の枠を逸脱しない代替法をなすもので
る。
うな緩衝液を含まないゲルＢｅｃｋｍａｎ Ｐａｒａｇ
ｏｎ（登録商標）ＳＰＥを扱う場合は、このような従来
のゲルをこのような緩衝液中で培養させても本発明の枠
を逸脱するのではない。すなわち、方法はより時間がか
かっても得られる結果は全く同じであり、このような実
施方法は本発明の枠を逸脱しない代替法をなすもので
る。
Claims (26)
- 【請求項１】 体液または組織抽出物において、支持媒
質上に緩衝液と、少なくとも１種類の非イオン系洗剤を
加え、当該非イオン系洗剤の他に少なくとも１種類のア
ニオン系洗剤を加えることを特徴とする、アルカリ性ホ
スファターゼからイソ酵素ならびにイソホルムを分離
し、識別する電気泳動法。 - 【請求項２】 これらの洗剤が緩衝液に溶解しているこ
とを特徴とする請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 各洗剤が緩衝液１ｌあたり０．１ないし
１０ｇの量だけ緩衝液中に存在していることを特徴とす
る請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 非イオン系洗剤とアニオン系洗剤の比が
１：０．５ないし２：１の範囲内にあることを特徴とす
る請求項１ないし３の任意の１項記載の方法。 - 【請求項５】 緩衝液のｐＨが８ないし１１の範囲内に
あることを特徴とする請求項１ないし４の任意の１項記
載の方法。 - 【請求項６】 使用緩衝液がホウ酸を含むトリス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタンであることを特徴とする前
記各請求項の任意の１項記載の方法。 - 【請求項７】 アニオン系洗剤が胆汁酸及び胆汁酸塩の
内から選ばれることを特徴とする前記各請求項の内の任
意の１項記載の方法。 - 【請求項８】 洗剤が胆汁酸塩、好ましくはデオキシコ
ール酸ナトリウムまたはタウロコール酸ナトリウムであ
ることを特徴とする請求項７記載の方法。 - 【請求項９】 アニオン系洗剤が式 Ｒ1 −ＸＮａ （式中Ｒ1 は炭素原子が６ないし１２の直鎖または分岐
状のアルキル鎖を表わし、Ｘは硫酸塩、スルホン酸塩な
らびにカルボン酸塩の群から選んだ基を表わす）の化合
物からなることを特徴とする請求項１ないし６の任意の
１項記載の方法。 - 【請求項１０】 アニオン系洗剤が、そのアミン基が、
炭素原子が６ないし１２の置換基Ｎ−アルキルまたはＮ
−アルキル置換基を担持するアミノ酸誘導体であること
を特徴とする請求項１ないし６の任意の１項記載の方
法。 - 【請求項１１】 支持媒質が酢酸セルローズの膜である
ことを特徴とする前記各請求項の任意の１項記載の方
法。 - 【請求項１２】 支持媒質がポリアクリルアミドのゲル
であることを特徴とする請求項１ないし１０の任意の１
項記載の方法。 - 【請求項１３】 支持媒質がアガロースのゲルであるこ
とを特徴とする請求項１ないし１０の任意の１項記載の
方法。 - 【請求項１４】 洗剤がゲルの鋳込み前に、アガロース
緩衝液に加えられることを特徴とする請求項１３記載の
方法。 - 【請求項１５】 洗剤が既に鋳込まれたアガロースのゲ
ルに平衡緩衝液中の混合物として加えられることを特徴
とする請求項１３記載の方法。 - 【請求項１６】 非イオン系の洗剤が、トリトン、Ｂｒ
ｉｊ及びＴｗｅｅｎ型の誘導体やリュブロール、エチル
フエニルポリオキシエチレングリコール及びＮ，Ｎ−ジ
メチルドデシルアミンＮ−オキサイドからなる群から選
ばれることを特徴とする前記各請求項９の任意の１項記
載の方法。 - 【請求項１７】 アルカリ性ホスファターゼの分離識別
されたイソ酵素とイソホルムの量化の段階も含んでいる
ことを特徴とする前記各請求項の任意の１項記載の方
法。 - 【請求項１８】 電気泳動の後５−ブロモ−４−クロロ
−インドリルフォスフエートとニトロテトラゾリウムブ
ルーを含む基質を用いてゲルのインキュベートを１５分
間行うことと、得られた着色帯を約６００ｎｍで濃度測
定分析を行い、量化を可能ならしめることを特徴とする
請求項１７記載の方法。 - 【請求項１９】 アガロースのゲルと洗剤薬品とからな
り、このアガロースのゲルが、洗剤薬品として少なくと
も１種の非イオン系洗剤と少なくとも１種のアニオン系
洗剤を含んでいることを特徴とするアルカリ性ホスファ
ターゼのイソ酵素の電気泳動用キット。 - 【請求項２０】 アガロースのゲルが、アガロースが凝
固する前に、これに緩衝液に溶解した洗剤を導入して製
造されることを特徴とする請求項１９記載の方法。 - 【請求項２１】 このまたはこれらの洗剤が、請求項７
ないし１０の任意の１項の各洗剤から選ばれることと、
このまたはこれらの非イオン系の洗剤が請求項１６記載
の洗剤から選ばれることを特徴とする請求項１９と２０
の何れか１項記載のキット。 - 【請求項２２】 請求項１９ないし２１の任意の１項記
載のキットに含まれるアガロースのゲル。 - 【請求項２３】 緩衝液に溶けたアガロースの標準溶液
を調製し、これを加熱し、これを冷却せしめ、かつ、凝
固前に、これに少なくとも１種の非イオン系洗剤と、少
なくとも１種のアニオン系洗剤を添加することを特徴と
するアルカリ性ホスファターゼのイソ酵素の電気泳動用
のキットの製法。 - 【請求項２４】 凝固の前に、クロルヘキシジンも添加
することを特徴とする請求項２３記載の方法。 - 【請求項２５】 体液及び組織抽出物のサンプル中のア
ルカリ性ホスファターゼの、イソ酵素とイソホルムの識
別と量化のための、請求項１９ないし２１の任意の１項
記載のキットの利用。 - 【請求項２６】 請求項２２記載のアガロースゲル中の
薬剤保存料としてクロルヘキサジンの利用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE9100026A BE1005220A3 (fr) | 1991-01-15 | 1991-01-15 | Procede de separation, d'identification et de quantification d'isoenzymes et d'isoformes de la phosphatase alcaline. |
| BE09100026 | 1991-01-15 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05103698A true JPH05103698A (ja) | 1993-04-27 |
Family
ID=3885274
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4024672A Pending JPH05103698A (ja) | 1991-01-15 | 1992-01-14 | アルカリ性ホスフアターゼのイソ酵素とイソホルムの分離、識別、量化方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5264098A (ja) |
| EP (1) | EP0495346B1 (ja) |
| JP (1) | JPH05103698A (ja) |
| BE (1) | BE1005220A3 (ja) |
| DE (1) | DE69119576T2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995030756A1 (en) * | 1994-04-18 | 1995-11-16 | United States Biochemical Corporation | Thermostable alkaline phosphatase of thermus thermophilus |
| CA2247188C (en) * | 1996-02-26 | 2002-08-06 | Guoquiang Dong | Purification and characterization of alkaline phosphatase from thermotoga neapolitana |
| US7204922B1 (en) | 1999-07-26 | 2007-04-17 | Johan-Valentin Kahl | Method and device for the electrophoretic separation of particles, especially of macromolecules, by electrophoresis |
| FR2806161B1 (fr) * | 2000-03-10 | 2002-09-20 | Sebia Sa | Methode de separation, d'identification et de quantification des isophosphatases alcalines par electrophorese |
| AU2003267094A1 (en) * | 2002-09-11 | 2004-04-30 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | System and methods for electrophoretic separation of proteins on protein binding membranes |
| WO2011008746A2 (en) | 2009-07-14 | 2011-01-20 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Serum markers associated with early and other stages of breast cancer |
| WO2009014552A1 (en) * | 2007-07-26 | 2009-01-29 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Method for detecting disease markers |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4030995A (en) * | 1976-07-13 | 1977-06-21 | Sigma Chemical Company | Alkaline phosphatase isoenzyme determination |
-
1991
- 1991-01-15 BE BE9100026A patent/BE1005220A3/fr not_active Expired - Fee Related
- 1991-12-23 EP EP91870218A patent/EP0495346B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1991-12-23 DE DE69119576T patent/DE69119576T2/de not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-01-14 JP JP4024672A patent/JPH05103698A/ja active Pending
- 1992-01-15 US US07/821,411 patent/US5264098A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
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|---|---|
| DE69119576T2 (de) | 1997-03-27 |
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| BE1005220A3 (fr) | 1993-06-01 |
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| DE69119576D1 (de) | 1996-06-20 |
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