JPH04257554A - Ｈｉｖプロテアーゼの阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）
でコードされるプロテアーゼを阻害する化合物に関する
。本化合物又はその製薬上許容される塩はＨＩＶ感染の
予防、ＨＩＶ感染の治療及びその結果発生する後天性免
疫不全症候群（エイズ）の治療に有益である。本発明は
本化合物を含有した医薬組成物並びにエイズ及びＨＩＶ
ウイルス感染の治療に対する他の薬剤と一緒又は一緒で
ない本化合物の使用方法にも関する。

【０００２】ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）と称され
るレトロウイルスは免疫系の進行性破壊（後天性免疫不
全症候群；エイズ）並びに中枢及び末梢神経系の変性を
含めた複合疾患の病原体である。このウイルスは以前に
はＬＡＶ、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ　又はＡＲＶとして知られ
ていた。レトロウイルス複製に共通した特徴はウイルス
アセンブリー及び機能上必要な成熟ウイルスタンパク質
を生じるウイルスコードプロテアーゼによる前駆ポリタ
ンパク質の多量の翻訳後プロセッシングである。このプ
ロセッシングの遮断は通常感染性のウイルスの産生を妨
げるらしい。例えば、クロウフォード、Ｓ．ら、ジャー
ナル・オブ・バイロロジー、第５３巻、第８９９頁、１
９８５年（Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｓ．ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．
Ｖｉｒｏｌ．，５３、８９９、１９８５）では前駆構造
タンパク質のプロセッシングを妨げるネズミ白血病ウイ
ルスにおけるプロテアーゼの遺伝的欠失変異で非感染性
ウイルス粒子を生じることを証明した。未プロセッシン
グ構造タンパク質はヒト患者から単離された非感染性Ｈ
ＩＶ株のクローンでも観察された。 これらの結果はＨＩＶプロテアーゼの阻害がエイズの治
療及びＨＩＶ感染の予防又は治療に関して実施可能な方
法であることを示唆している。

【０００３】ＨＩＶのヌクレオチド配列決定では１つの
オープン読取り枠でｐｏｌ遺伝子の存在を示す〔ラトナ
ー、Ｌ．ら、ネーチャー、第３１３巻、第２７７頁、１
９８５年（Ｒａｔｎｅｒ，Ｌ．ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔｕ
ｒｅ，３１３，２７７（１９８５））〕。アミノ酸配列
相同性ではｐｏｌ配列が逆転写酵素、エンドヌクレアー
ゼ及びＨＩＶプロテアーゼについてコードする証拠を示
している〔トー、Ｈ．（Ｔｏｈ，Ｈ．）ら、ＥＭＢＯジ
ャーナル、第４巻、第１２６７頁、１９８５年；パワー
、Ｍ．Ｄ．ら、サイエンス、第２３１巻、第１５６７頁
、１９８６年（Ｐｏｗｅｒ，Ｍ．Ｄ．ｅｔ　ａｌ．，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ，２３１、１５６７（１９８６））；パー
ル、Ｌ．Ｈ．（Ｐｅａｒｌ，Ｌ．Ｈ．）ら、ネーチャー
、第３２９巻、第３５１頁、１９８７年〕。

【０００４】本出願人らは本発明の化合物がＨＩＶプロ
テアーゼの阻害剤であることを証明している。

【０００５】ここで定義されるような生体内変換化合物
が開示されている。本化合物はその化合物自体、製薬上
許容される塩（適切な場合）、医薬組成物成分もしくは
プロドラッグとして又は他の抗ウイルス剤、抗感染剤、
免疫調節剤、抗生物質もしくはワクチンと組合せてＨＩ
Ｖプロテアーゼの阻害、ＨＩＶ感染の予防、ＨＩＶ感染
の治療、エイズ及び／又はＡＲＣの治療に有用である。 エイズの治療方法、ＨＩＶ感染の予防方法及びＨＩＶ感
染の治療方法も開示されている。

【０００６】本発明はＨＩＶプロテアーゼの阻害、ＨＩ
Ｖ感染の予防又は治療及び発生する後天性免疫不全症候
群（エイズ）の治療における下記構造の化合物又はその
製薬上許容される塩の使用に関する。生体内変換化合物
はＨＩＶプロテアーゼ阻害剤Ｌ−６８９、５０２と共に
ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）培養株
ＡＴＣＣ５５０９５の培養により産生される。生体内変
換化合物は下記構造の化合物：

【化２】 又はその製薬上許容される塩であるとわかった。

【０００７】本発明の化合物の製薬上許容される塩（水
もしくは油溶性又は分散性生成物の形）には例えば無機
又は有機酸又は塩基から形成されるこの化合物の慣用的
無毒性塩又は四級アンモニウム塩がある。このような酸
付加塩の例としては酢酸、アジピン酸、アルギン酸、ア
スパラギン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、重硫酸
、酪酸、クエン酸、ショウノウ酸、ショウノウスルホン
酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、ドデ
シル硫酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプタ
ン酸、グリセロリン酸、ヘミ硫酸、ヘプタン酸、ヘキサ
ン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、２−ヒドロキ
シエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホ
ン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ニコチン酸、シュウ
酸、パモ酸、ペクチン酸、過硫酸、３−フェニルプロピ
オン酸、ピクリン酸、ピバル酸、プロピオン酸、コハク
酸、酒石酸、チオシアン酸、トシル酸及びウンデカン酸
の塩がある。更に、塩基性塩としてはアンモニウム塩、
ナトリウム及びカリウム塩のようなアルカリ金属塩、カ
ルシウム及びマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属
塩、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカ
ミンのような有機塩基との塩並びにアルギニン、リジン
のようなアミノ酸との塩等がある。水和物、エステル又
はアミドも本発明で包含される。このような水和物、エ
ステル又はアミドは当業者で容易に想起されるものであ
って、例えばＣ１−４　アルキルエステル及びアミドが
ある。

【０００８】本発明の化合物はＨＩＶプロテアーゼの阻
害、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の予防又は治
療及びエイズのような結果的病状の治療に有用である。 エイズの治療、ＨＩＶ感染の予防又は治療は格別限定さ
れないが様々なＨＩＶ感染状態：エイズ、ＡＲＣ（エイ
ズ関連合併症）、徴候的及び非徴候的双方のＨＩＶとの
現実的又は潜在的接触の治療を含めて定義される。例え
ば、本発明の化合物は例えば輸血、偶発的針刺又は手術
中患者血液との接触によるＨＩＶとの過去の疑がわしい
接触後にＨＩＶ感染を治療する上で有用である。

【０００９】これらの目的から、本発明の化合物は慣用
的な無毒性の製薬上許容される担体、アジュバント及び
ビヒクルを含有した投薬単位処方剤として経口、非経口
（皮下、静脈内、筋肉内、胸骨内注射又は注入技術を含
む）、吸入スプレー又は経直腸投与される。

【００１０】このため本発明によれば、ＨＩＶ感染及び
エイズの治療に関する方法及び医薬組成物が更に提供さ
れる。その治療では製剤担体及び治療上有効量の本発明
の化合物を含有した医薬組成物をかかる治療の必要な患
者に投与する。

【００１１】これらの医薬組成物は経口投与用懸濁液も
しくは錠剤；経鼻スプレー；例えば無菌注射用水性もし
くは油性懸濁液のような無菌注射製剤；又は坐剤の形で
ある。

【００１２】懸濁液として経口投与される場合、これら
の組成物は医薬処方業界で周知の技術に従い製造され、
増量剤として微結晶セルロース、懸濁剤としてアルギン
酸又はアルギン酸ナトリウム、増粘剤としてメチルセル
ロース及び当業界で公知の甘味剤／香味剤を含有してい
てもよい。速放出錠剤として、これらの組成物は微結晶
セルロース、リン酸二カルシウム、デンプン、ステアリ
ン酸マグネシウム、ラクトース及び／又は当業界で公知
の他の賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、希釈剤、滑沢
剤も含有してよい。

【００１３】経鼻エアゾール又は吸入で投与される場合
、これらの組成物は医薬処方業界で周知の技術に従い製
造され、ベンジルアルコール又は他の適切な保存剤、バ
イオアベイラビリティーを高める吸収促進剤、フッ化炭
素及び／又は当業界で公知の他の溶解又は分散剤を用い
て塩水溶液として製造してもよい。

【００１４】注射溶液又は懸濁液はマンニトール、１，
３−ブタンジオール、水、リンゲル液又は等張塩化ナト
リウム液のような適切な無毒性の非経口上許容される希
釈剤又は溶媒あるいは合成モノ又はジグリセリドを含め
た無菌低刺激性固定油及びオレイン酸を含めた脂肪酸の
ような適切な分散又は湿潤及び懸濁剤を用いて公知技術
に従い処方される。

【００１５】坐剤の形で経直腸投与される場合、これら
の組成物は常温で固体であるが但し直腸腔内で液化及び
／又は溶解して薬物を放出するカカオ脂、合成グリセリ
ドエステル又はポリエチレングリコールのような適切な
無刺激性賦形剤と薬物を混ぜることで製造される。

【００１６】０．０２〜５．０又は１０．０ｇ／日程度
の投薬レベルが前記症状の治療又は予防上有用であるが
、経口用量は２〜５倍高い。例えば、ＨＩＶ感染は１〜
３回／日で化合物１０〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の投与によ
り有効に治療される。しかしながら、いずれか特定の患
者における具体的用量レベル及び投薬頻度は一定でなく
、用いられる具体的化合物の活性、その化合物の代謝安
定性及び作用時間の長さ、患者の年令、体重、一般的健
康度、性別、食事、投与方式及び時間、排泄速度、薬物
併用、具体的症状の程度並びに治療をうける宿主を含め
た様々なファクターに依存していることが理解される。

【００１７】本発明はＨＩＶプロテアーゼ阻害化合物と
エイズの治療に有用な１種以上の薬剤との組合せにも関
する。例えば、本発明の化合物は有効量の他のエイズ抗
ウイルス剤、免疫調節剤、抗感染剤又はワクチンと共に
接触前及び／又は接触後の時期に有効に投与される。

【００１８】親化合物Ｌ−６８９、５０２の生体内変換
本発明の新規抗菌化合物はＭＡ−６８０４とも呼ばれる
生物ストレプトミセス培養株＃Ｓ−２６−４８７（ＡＴ
ＣＣ５５０９５）での接種により制御的条件下で適切な
水性栄養培地の好気性発酵中に産生される。抗生物質の
産生に用いられるような水性培地は本発明の新規化合物
を産生する上で適している。このような培地は微生物に
より同化しうる炭素源、窒素源及び無機塩を含有してい
る。多数の発酵培地がストレプトミセス培養株＃Ｓ−２
６−４８７によるＬ−６８９、５０２からＬ−６９４、
７４６への生体内変換を支持し、発酵微生物学者の日常
的技術範囲内で適切に調整される。

【００１９】一般に、炭水化物、例えばグルコース、フ
ルクトース又はデンプン並びにグリセロール、ペクチン
又はペプトン処理ミルクが単独で又は組合せて栄養培地
中で同化炭素源として使用できる。培地で利用される炭
素源の正確な量は培地の他の成分に一部依存しているが
、一般に炭素源の量は通常培地の約１〜６重量％の間で
変化する。これらの炭素源は個別的に用いられても、又
は数種のかかる炭素源が培地で混ぜられてもよい。

【００２０】多数のタンパク質性物質が発酵工程で窒素
源として用いられる。適切な窒素源としては例えば酵母
エキス、酵母加水分解産物、大豆粉、ジスチラーズソリ
ユーブル、コーン浸漬液、ペプトン処理ミルク、ラード
水、ピーナツミール及びトマトペースト等がある。窒素
源は単独で又は組合せて水性培地の約０．２〜６重量％
範囲の量で用いられる。

【００２１】培地に配合してよい栄養無機塩としてはナ
トリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグ
ネシウム、リン酸、硫酸、塩化物、炭酸その他のイオン
を生じうる慣用的な塩がある。更に、コバルト、マンガ
ン及び鉄のような微量金属も含まれていてよい。

【００２２】発酵は典型的には約２０〜約４２℃範囲、
好ましくは約２７℃の温度でバッフル化フラスコ内にお
いて行われる。ストレプトミセス培養株＃Ｓ−２６−４
８７を増殖させかつ本発明の新規化合物を産生する上で
適した栄養培地のｐＨは約５．５〜８．０の範囲、好ま
しくは約７．０となるべきである。

【００２３】抗生物質の小規模発酵は適切な栄養培地を
培養物で接種し、産生培地に移転後、好気性条件下で発
酵をシェーカー上一定温度で数日間続けることにより行
われることが都合よい。インキュベート期間終了後、生
体内変換産物は下記技術で発酵ブロスから単離される。

【００２４】小規模発酵は無菌フラスコ内で１、２、３
又は４段階種発育により行ってもよい。種段階用の栄養
培地は炭素及び窒素源のいかなる適切な組合せであって
もよい。種フラスコは最大増殖が終了するまで（通常１
〜３日間）定温室内で振盪され、得られた増殖物の一部
は次の種段階又は産生培地に接種するために用いられる
。中間段階種フラスコが用いられる場合には本質的に同
様に発育され、即ちフラスコ内容物の一部が次段階の種
培地又は産生培地に接種するために用いられる。接種さ
れた産生フラスコは一定温度で数日間（通常３〜５日間
）振盪され、インキュベート期間終了後に本発明の新規
化合物が単離される。

【００２５】大規模処理の場合には、好気性条件下で発
酵培地を維持する手段及び攪拌機を備えた適切なタンク
内で発酵を行うことが好ましい。栄養培地はタンク内で
調製され、約１２０℃に加熱することで滅菌される。冷
却後、無菌培地は即に増殖された産生生物の種培養物で
接種され、発酵が一定温度に保ちながら数日間（例えば
３〜５日間）続けられる。

【００２６】本出願のガイドライン及び実験プロトコー
ルを定める場合、ストレプトミセス＃Ｓ−２６−４８７
に関して適切な発酵又は培養条件の決定も本発明の範囲
内に属すると理解される。小及び大規模発酵を含めたこ
のような条件は当業者によって容易に確認される慣用的
応用又は通常の変更である。

【００２７】生体内変換微生物ＭＡ−６８０４の特徴細
胞壁組成の分析 ＭＡ−６８０４ペプチドグリカンはＬ−ジアミノピメリ
ン酸を含んでいる。全細胞糖分析ではガラクトース、マ
ンノース、マジュロース及び微量のグルコースを示す。

【００２８】一般的増殖特性 ＭＡ−６８０４株は酵母麦芽エキス、グリセロールアス
パラギン、無機塩−デンプン、オートミール及びトリプ
チカーゼ大豆寒天上でよく増殖する。増殖は２７〜３７
℃でおきる。培養物は酵母デキストロースブロスのよう
な液体培地でもよく増殖する。

【００２９】コロニー形態（酵母麦芽エキス寒天上）Ｍ
Ａ−６８０４：基質菌糸体は中黄色（８９ｍ、Ｙ）であ
り、コロニーは不透明、隆起状、切込み状かつゴム状で
ある。コロニー表面は荒い。着生菌糸体は２日間のイン
キュベート後に現れ、白色（２６３ホワイト）である。 胞子体は存在する場合に淡褐色灰色（６３リットル、ｂ
ｒ、Ｇｙ）である。

【００３０】微細形態 ＭＡ−６８０４着生菌糸体（０．５７μｍ　径）は基質
菌糸体から四方に伸び、直鎖状である。成熟培養物にお
いて、着生菌糸体は屈曲鎖又は広いループで生じる胞子
鎖で終結する。

【００３１】様々な生理反応 ＭＡ−６８０４培養物はトリプトン酵母エキスブロス、
酵母エキスブロス及びペプトン酵母エキス鉄寒天中２〜
３日間でメラノイド色素を産生する。デンプンは加水分
解されない。炭素源利用パターンは下記のとおりである
：Ｄ−ラフィノース；セロビオース、Ｄ−マルトース、
Ｄ−マンノースの中利用度；Ｄ−フルクトースの乏利用
度；Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、イノシトー
ル、α−Ｄ−ラクトース、β−Ｄ−ラクトース、Ｄ−マ
ンニトール、Ｌ−ラムノース、スクロース、Ｄ−キシロ
ース、Ｌ−キシロースの無利用度。

【００３２】識別 この株の化学分類的及び形態的特徴はストレプトミセス
属の株に関して公表された記載とまさるとも劣らない。 ストレプトミセス・パクタム（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ　ｐａｃｔｕｍ）　の炭素利用パターンとの類似性が
一部存在する。しかしながら、Ｓ．パクタムはメラノイ
ド色素を産生せず無色栄養増殖性を有する。赤色系の中
では、ＭＡ−６８０４はストレプトミセス・キサントフ
ァエウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｘａｎｔｈｏｐ
ｈａｅｕｓ）　〔Ｓ．ラベンジュラエ（Ｓ．ｌａｖｅｎ
ｄｕｌａｅ）の主観的異名と現在考えられている；分類
細菌学のバージーマニュアル、第４巻、１９８９年（Ｂ
ｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ４、１
９８９）〕と強い類似性を有する。この種の一部の株は
灰色と報告されている。栄養菌糸体の色及びメラノイド
色素の産生もストレプトミセス・ラベンジュラエと一致
する。ＭＡ−６８０４はストレプトミセス・ラベンジュ
ラエの株として仮同定されている。

【００３３】ＡＴＣＣ寄託 本出願の米国出願日又はその前に、Ｓ−２６−４８７と
も呼ばれるＭＡ−６８０４のサンプルは１２３０１パー
クローン・ドライブ、ロックビル、ＭＤ２０８５２のア
メリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣ
Ｃ）に寄託された。培養物受理表示は５５０９５である
。この寄託物は少なくとも３０年間ＡＴＣＣで維持され
、それを開示する特許の許諾下で公に利用可能となる。 寄託物の利用可能性は行政力で認可される特許権の減損
下で本発明を実施しうるライセンスを構成するわけでは
ないと理解すべきである。

【００３４】

【実施例１】親化合物Ｌ−６８９、５０２の合成製造及
び合成は一般に米国特許第４，６６１，４７３号；エバ
ンス、Ｂ．Ｅ．ら、ジャーナル・オブ・オーガニック・
ケミストリー、第５０巻、第４６１５頁、１９８５年〔
Ｅｖａｎｓ，Ｂ．Ｅ．ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈ
ｅｍ．，５０、４６１５（１９８５）〕；エバンス、Ｂ
．Ｅ．ら、“ヒドロキシエチレンジペプチド同配体の立
体制御合成”、プロシ・アメ・ペプチ・シンポ（Ｐｒｏ
ｃ．Ａｍ．Ｐｅｐｔ．Ｓｙｍｐ．）、第９巻、第７４３
−６頁、１９８５年；ラリー、Ｊ．Ｒ．（Ｌｕｌｙ，Ｊ
．Ｒ．）　ら、ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミ
ストリー、第５２巻、第１４８７頁、１９８７年に従う
が、それらはすべて参考のためここに組込まれる。すべ
ての温度は他に指摘のないかぎり摂氏度である。

【００３５】Ｎ−（シス−２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（
Ｓ）−インダニル）−５（Ｓ）−（１，１−ジメチルエ
トキシカルボニルアミノ）−４（Ｓ）−ヒドロキシ−６
−フェニル−２（Ｒ）−〔（４−（２−（４−モルホリ
ニル）エトキシ）フェニル）メチル〕ヘキサンアミドＬ
−６８９、５０２の製造　　　　　　　　　　　　　　
工程Ａ：Ｎ−３（Ｓ）−〔（１，１−ジメチルエトキシ
カルボニル）アミノ〕−２（ＲＳ）−ヒドロキシ−４−
フェニル−１−トリメチルシリルブタンの製造　　乾燥
ジエチルエーテル（２００ｍｌ）中マグネシウム屑（９
．７９ｇ、４０３ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に窒素下でク
ロロメチルトリメチルシラン（５０ｍｌ、３５８ｍｍｏ
ｌ）を加えた。反応を穏やかな加温により開始させ、し
かる後氷浴で冷却して穏やかな還流を維持した。発熱終
了後、反応物を室温で１時間攪拌し、しかる後ドライア
イス／アセトン浴で−７８°に冷却した。グリニャール
溶液に反応温度を−５５°以下に保てるように乾燥ジエ
チルエーテル（２５０ｍｌ）中Ｎ−２（Ｓ）−〔（１，
１−ジメチルエトキシカルボニル）アミノ〕−３−フェ
ニルプロピオンアルデヒド（１９．３ｇ、７７．４ｍｍ
ｏｌ）の溶液を攪拌下で滴下した。得られた灰色懸濁液
を室温まで加温してから、それを３０分間攪拌し、しか
る後氷（５００ｇ）及び１０％クエン酸（５００ｍｌ）
の混合液に注いで反応停止させた。有機相を集め、水相
をジエチルエーテル（３×３００ｍｌ）で抽出した。合
わせた有機相を１０％クエン酸（１×３００ｍｌ）及び
塩水（１×２００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥し、濾過し、濃縮し、黄色油状物として粗製Ｎ
−３（Ｓ）−〔（１，１−ジメチルエトキシカルボニル
）アミノ〕−２（ＲＳ）−ヒドロキシ−４−フェニル−
１−トリメチルシリルブタン（２６．６ｇ、定量的粗収
率）を得た。 分析サンプルは低圧クロマトグラフィー（シリカゲル、
２３０〜４００メッシュ；ジエチルエーテル：ヘキサン
３０％：７０％）しかる後ヘプタンからの再結晶化で得
た。ｍｐ＝９１−９５°；元素分析、計算値Ｃ１８Ｈ３
１ＮＯ３　Ｓｉ（３３７．５３）：Ｃ＝６４．０５，Ｈ
＝９．２６，Ｎ＝４．１５； 実測値：Ｃ＝６４．０５，Ｈ＝９．１３，Ｎ＝４．２２
；［α］Ｄ　２０＝−４０．０°．

【００３６】工程Ｂ：３（Ｓ）−アミノ−４−フェニル
−１−ブテンの製造 窒素下氷浴中で冷却された乾燥塩化メチレン（４００ｍ
ｌ）中工程Ａの生成物（２２．８ｇ、６７．５ｍｍｏｌ
）の攪拌溶液に細流で三フッ化ホウ素エーテル和物（４
３ｍｌ、３４５ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温まで加
温してから、それを４日間攪拌した。反応物を氷浴で冷
却し、１０％水酸化ナトリウム（４００ｍｌ）の滴下で
反応停止させた。有機相を集め、水相を塩化メチレン（
２×２５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を塩水（
１×２００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾
燥し、濾過し、濃縮し、黄色油状物として粗製３（Ｓ）
−アミノ−４−フェニル−１−ブテン（１４．２ｇ）を
得た。

【００３７】工程Ｃ：Ｎ−３（Ｓ）−〔（１，１−ジメ
チルエトキシカルボニル）アミノ〕−４−フェニル−１
−ブテンの製造　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　乾燥塩化メチレン（２００ｍｌ）中工程Ｂ
の生成物（１４．２ｇ）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカ
ーボネート（３１．０ｇ、１４２ｍｍｏｌ）の溶液を室
温で１８時間攪拌し、１０％クエン酸（３×１００ｍｌ
）、水（１×１００ｍｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム（
３×１２５ｍｌ）及び塩水（１×２５０ｍｌ）で洗浄し
、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、黄
色油状物として粗製Ｎ−３（Ｓ）−〔（１，１−ジメチ
ルエトキシカルボニル）アミノ〕−４−フェニルブテン
（３４．６ｇ）を得た。 粗生成物を低圧クロマトグラフィー（シリカゲル、２３
０〜４００メッシュ、１０×２０ｃｍカラム；ジエチル
エーテル：ヘキサン２０％：８０％）により精製し、白
色固体物としてＮ−３（Ｓ）−〔（１，１−ジメチルエ
トキシカルボニル）アミノ〕−４−フェニル−１−ブテ
ン（１６．３ｇ、収率９７．６％）を得た。分析サンプ
ルはヘプタンからの再結晶化で得た。ｍｐ＝６７．５−
６８．５°；元素分析、計算値Ｃ１５Ｈ２１ＮＯ２　（
２４７．３４）：Ｃ＝７２．８４，Ｈ＝８．５６，Ｎ＝
５．６６． 実測値：Ｃ＝７２．７８，Ｈ＝８．７６，Ｎ＝５．６４
．

【００３８】工程Ｄ：１（Ｒ）−〔１′（Ｓ）−（１，
１−ジメチルエトキシカルボニル）アミノ−２−フェニ
ルエチル〕オキシランの製造　　　　　　　　　　　　
窒素下氷浴中で冷却された乾燥塩化メチレン（１００ｍ
ｌ）中工程Ｃの生成物（９．４ｇ、３８ｍｍｏｌ）の溶
液に３−クロロ過安息香酸（テクニカルグレード、８０
〜８５％；４１ｇ、２００ｍｍｏｌ）を加えた。混合物
を０°で１８時間及び２５°で２３時間攪拌し、しかる
後ジエチルエーテル（３００ｍｌ）で希釈し、氷冷１０
％亜硫酸ナトリウム水（１リットル）に注いだ。有機相
を集め、水相をジエチルエーテル（３×１００ｍｌ）で
抽出した。合わせた有機相を１０％亜硫酸ナトリウム（
３×１００ｍｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム（３×１０
０ｍｌ）及び塩水（１×１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、白色固体物
を得た。粗生成物を低圧クロマトグラフィー（シリカゲ
ル、２３０〜４００メッシュ、８×１５ｃｍカラム；酢
酸エチル：ヘキサン２５％：７５％）により精製し、澄
明油状物として１（Ｒ）−〔１′（Ｓ）−（１，１−ジ
メチルエトキシカルボニル）アミノ−２−フェニルエチ
ル〕オキシラン（７．０ｇ、収率７０％）を得たが、こ
れは放置時に結晶化した。分析サンプルはヘプタンから
の再結晶化で得た。ｍｐ＝５１．５−５２°；元素分析
、計算値Ｃ１５Ｈ２１ＮＯ２　（２６３．３４）：Ｃ＝
６８．４２，Ｈ＝８．０４，Ｎ＝５．３２． 実測値：Ｃ＝６８．２２，Ｈ＝８．２６，Ｎ＝５．２９
；［α］Ｄ　２０＝１．３４°．

【００３９】工程Ｅ：（５Ｓ，１′Ｓ）−３−カルボエ
トキシ−５−〔１−（（１′，１′−ジメチルエトキシ
カルボニル）アミノ）−２−フェニルエチル〕ジヒドロ
フラン−２（３Ｈ）−オンの製造　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 工程Ｄの生成物９．９３ｇを無水エタノール１００ｍｌ
に溶解し、無水エタノール１７０ｍｌ中ナトリウム２．
６ｇ及びマロン酸ジエチル２０．１ｍｌの溶液に加えた
。一夜攪拌後、反応物を１０％クエン酸でｐＨ４に酸性
化し、エーテル２×５００ｍｌで抽出した。合わせた有
機抽出液を水１×５００ｍｌ、飽和ＮａＨＣＯ３　１×
５００ｍｌ、飽和塩水１×５００ｍｌで洗浄し、ＭｇＳ
Ｏ４　で乾燥した。溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲ
ル低圧クロマトグラフィーにより５０％エーテル／ヘキ
サン（又はＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で溶出させて精製し
た。半固体生成物の収量は１０．６ｇであった。後の分
画は白色固体物として望ましくない５Ｒ異性体２．５ｇ
を含有していた。

【００４０】工程Ｆ：（５Ｓ，１′Ｓ）−３−カルボエ
トキシ−３−（４−ベンジルオキシフェニルメチル）−
５−〔１−（（１，１−ジメチルエトキシカルボニル）
アミノ）−２−フェニルエチル〕ジヒドロフラン−２（
３Ｈ）−オンの製造　　　　　　　　　　無水エタノー
ル２５ｍｌ中（５Ｓ，１′Ｓ）−３−カルボエトキシ−
５−〔１−（（１′，１′−ジメチルエトキシカルボニ
ル）アミノ）−７−フェニルエチル〕ジヒドロフラン−
２（３Ｈ）−オン（工程Ｅの生成物）２ｇ（５．３ｍｍ
ｏｌ）の攪拌溶液に無水エタノール２．２ｍｌ中ナトリ
ウム０．１３ｇの溶液しかる後４−ベンジルオキシベン
ジルクロリド１．３０ｇ（５．５ｍｍｏｌ）を加えた。 溶液を窒素下で１時間にわたり５０°に加熱し、しかる
後氷浴で冷却し、１０％クエン酸２０ｍｌで酸性化し、
水２００ｍｌで希釈した。混合物をエーテル３×１００
ｍｌで抽出し、合わせたエーテル抽出液を水５０ｍｌ、
飽和ＮａＨＣＯ３　２００ｍｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４　
で乾燥した。溶媒の減圧除去及びシリカゲル低圧クロマ
トグラフィーによりヘキサン中４０％エーテルで溶出さ
せる精製から、ＴＬＣ（５０％エーテル／ヘキサン）に
よると本質的に均一な澄明無色ガラス状物１．５６ｇ（
収率５１％）を得た。

【００４１】工程Ｇ：（３Ｒ，５Ｓ，１′Ｓ）−３−（
４−ベンジルオキシフェニルメチル）−５−〔１−（（
１，１−ジメチルエトキシカルボニル）アミノ）−２−
フェニルエチル〕ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オンの
製造　　　　　　 工程Ｆの生成物１３．６ｇを１，２−ジメトキシエタン
２５０ｍｌに溶解し、それに室温で１Ｍ水酸化リチウム
１１７ｍｌを加えた。１２時間攪拌後、溶媒を減圧除去
し、残渣を１０％クエン酸２００ｍｌに懸濁し、ジエチ
ルエーテル３×５００ｍｌで抽出した。合わせたエーテ
ル抽出液を塩水５００ｍｌで洗浄し、（ＭｇＳＯ４）乾
燥し、濃縮乾固した。残渣をトルエン２５０ｍｌに溶解
し、１２時間加熱還流し、しかる後減圧下で濃縮乾固さ
せた。シリカゲル中圧クロマトグラフィーにより１５％
酢酸エチル／ヘキサンで溶出させる精製から、澄明泡状
物として３Ｒ−ラクトン３．２ｇを得た。更に同溶媒で
溶出させ、白色固体物として３Ｓ−ラクトン６．１５ｇ
を得た。

【００４２】工程Ｈ：Ｎ′−（１，１−ジメチルエトキ
シカルボニル）−５（Ｓ）−アミノ−４（Ｓ）−（１′
，１′−ジメチルエチル−１，１−ジメチルシリルオキ
シ）−６−フェニル−２（Ｒ）−（４−ベンジルオキシ
フェニルメチル）ヘキサン酸の製造　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　工程Ｇの生成物０．
６ｇをエチレングリコールジメチルエーテル／水の２：
１混合液３０ｍｌに溶解し、それに室温で１Ｍ水酸化リ
チウム５ｍｌを加えた。１時間攪拌後、混合物をクロロ
ホルム２００ｍｌ及び１０％クエン酸２０ｍｌに分配し
た。各相を分離し、水相をクロロホルム３×２０ｍｌで
抽出した。合わせた有機相を（Ｎａ２　ＳＯ４　）乾燥
し、溶媒を除去して、粗ヒドロキシ酸０．５６ｇを得た
。この残渣を乾燥ＤＭＦ５ｍｌに溶解し、ｔｅｒｔ−ブ
チルジメチルシリルクロリド０．８４５ｇ及びイミダゾ
ール０．７２５ｇを加えた。１８時間攪拌後、反応物を
水５０ｍｌに注ぎ、酢酸エチル３×２０ｍｌで抽出した
。 合わせた有機抽出液を１０％クエン酸３×２０ｍｌ、水
１×２０ｍｌ、飽和Ｎａ２　ＣＯ３　水溶液３×１０ｍ
ｌ及び塩水２０ｍｌで洗浄した。（Ｎａ２　ＳＯ４　）
乾燥後、溶媒を除去し、得られた残渣をＴＨＦ５ｍｌ、
氷酢酸５ｍｌ及び水２ｍｌの混合液に溶解した。混合物
を４時間攪拌し、しかる後水５０ｍｌに注ぎ、エーテル
３×２０ｍｌで抽出した。合わせたエーテル抽出液を水
２×２０ｍｌ、塩水で洗浄し、（Ｎａ２　ＳＯ４　）乾
燥し、溶媒を除去した。シリカゲル中圧クロマトグラフ
ィーによりＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３　で溶出させる精製か
ら、白色ガラス状固体物として生成物０．６０ｇを得た
。

【００４３】工程Ｉ：１−アミノ−２−ヒドロキシイン
ダンの分割 公知のラセミ体１−アミノ−２−ヒドロキシインダンか
ら、分割が下記実施例７（工程Ｄ及びＥ）で３−アミノ
−１，２−ジヒドロキシインダンに関して記載されたよ
うに行われた。高Ｒｆ側ジアステレオマーのケン化から
生じる（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ヒドロキシイ
ンダンはαＤ　＝−５８°（ｃ＝１．０、ＣＨＣｌ３　
）であることが示された。低Ｒｆ側ジアステレオマーの
ケン化から生じる（１Ｒ，２Ｓ）−１−アミノ−２−ヒ
ドロキシインダンはαＤ　＝＋６２°（ｃ＝１．０、Ｃ
ＨＣｌ３　）であることが示された。

【００４４】工程Ｊ：Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１
（Ｓ）−インダニル）−５（Ｓ）−（１，１−ジメチル
エトキシカルボニルアミノ）−４（Ｓ）−ヒドロキシ−
６−フェニル−２（Ｒ）−（４−ベンジルオキシフェニ
ルメチル）ヘキサンアミドの製造　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　工程Ｈの生成物０
．１２ｇを乾燥ＤＭＦ２ｍｌに溶解し、それに１（Ｓ）
−アミノ−２（Ｒ）−ヒドロキシインダン（工程Ｉ）４
０ｍｇ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物２５
ｍｇ及びジメチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル
）カルボジイミド塩酸塩７０ｍｇを加えた。トリエチル
アミンをｐＨ８．５までこの攪拌溶液に加えた（３２ｍ
ｌ）。減圧濃縮乾固のため濃縮攪拌後、残渣をクロロホ
ルム１００ｍｌに溶解し、１０％クエン酸１×５０ｍｌ
、水１×５０ｍｌ、飽和ＮａＨＣＯ３　１×５０ｍｌで
処理し、ＭｇＳＯ４　で乾燥し、濃縮乾固した。残渣を
テトラヒドロフラン１ｍｌに溶解し、ＴＨＦ中１Ｍテト
ラブチルアンモニウムフルオリド２ｍｌに加えた。室温
で一夜攪拌後、反応混合物を１０％クエン酸１０ｍｌで
希釈し、白色沈殿物を濾取した。生成物をシリカゲル低
圧クロマトグラフィーにより２％メタノール／ＣＨ２　
Ｃｌ２　で溶出させて精製し、生成物８５ｍｇを得たが
、これはＴＬＣ（３％メタノール／ＣＨ２　Ｃｌ２　）
によると本質的に均一であった。

【００４５】工程Ｋ：Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１
（Ｓ）−インダニル）−５（Ｓ）−（１，１−ジメチル
エトキシカルボニルアミノ）−４（Ｓ）−ヒドロキシ−
６−フェニル−２（Ｒ）−（４−ヒドロキシフェニルメ
チル）ヘキサンアミドの製造　　 工程Ｊの生成物８５ｍｇをメタノール１０ｍｌ及びＴＨ
Ｆ１０ｍｌに溶解し、それに１０％パラジウム炭素０．
１０ｇを加えた。混合物を水素雰囲気下室温で４８時間
攪拌し、しかる後濾過し、濃縮乾固した。残渣を熱エタ
ノール１０ｍｌに溶解し、水２０ｍｌを加えた。冷却後
白色固体沈殿物を集め、真空下Ｐ２　Ｏ５　で乾燥した
。収量は純粋生成物７２ｍｇ（収率９８％）であった。 ｍｐ２１８−２１９°（２１５°で起泡、焼結）；元素
分析、計算値Ｃ３３Ｈ４０Ｎ２　Ｏ６　：（５６０．６
９６）：Ｃ，７０．６９；Ｈ，７．１９；Ｎ，５．００
； 実測値：Ｃ，７０．６２；Ｈ，７．３９；Ｎ，４．７９
．

【００４６】工程Ｌ：Ｎ−（シス−２（Ｒ）−ヒドロキ
シ−１（Ｓ）−インダニル）−５（Ｓ）−（１，１−ジ
メチルエトキシカルボニルアミノ）−４（Ｓ）−ヒドロ
キシ−６−フェニル−２（Ｒ）−〔（４−（２−（４−
モルホリニル）エトキシ）フェニル）メチル〕ヘキサン
アミドの製造　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　無水ジオキサン１００ｍｌ中工程Ｋの生成物Ｎ−（２
（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｓ）−インダニル）−５（Ｓ
）−（１，１−ジメチルエトキシカルボニルアミノ）−
４（Ｓ）−ヒドロキシ−６−フェニル−２（Ｒ）−（４
−ヒドロキシフェニルメチル）ヘキサンアミド（０．５
０ｇ、０．９ｍｍｏｌ）、無水炭酸セシウム（１．０ｇ
、３ｍｍｏｌ）及びＮ−（２−クロロエチル）モルホリ
ン遊離塩基（２．３５ｇ、１７ｍｍｏｌ）の攪拌混合物
を３時間にわたり８０°（内部温度）に加熱した。室温
まで冷却後、混合物をクロロホルム（５０ｍｌ）で希釈
し、濾過し、減圧下で濃縮乾固し、残渣を無水エーテル
５０ｍｌ及び酢酸エチル１０ｍｌに摩砕した。白色固体
生成物を集め、真空下Ｐ２　Ｏ５　で乾燥した。収量は
純粋生成物０．５４ｇ（８９％）であった。ｍｐ１９５
−７°；元素分析、計算値Ｃ３　Ｈ５１Ｎ３　Ｏ（６７
３．８５６）：Ｃ，６９．５２；Ｈ，７．６３；Ｎ，６
．２３；実測値：Ｃ，６９．１９；Ｈ，７．４５；Ｎ，
６．１５． マレイン酸水和物：ｍｐ１１２−１１３°（分解）；元
素分析、計算値Ｃ３９Ｈ５１Ｎ３　Ｏ７　．Ｃ４　Ｈ４
　Ｏ４　．Ｈ２　Ｏ：（８０７．９４６）：Ｃ，６３．
９２；Ｈ，７．１１；Ｎ，５．２０； 実測値：Ｃ，６４．２３；Ｈ，６．９４；Ｎ，５．１０
．

【００４７】

【実施例２】Ｌ−６８９、５０２の生体内変換ストレプ
トミセス培養株＃Ｓ−２６−４８７の凍結バイアル（２
．５ｍｌ）を用いて、２５０ｍｌバッフル化エルレンメ
イヤーフラスコ内の発酵培地（５０ｍｌ）に接種した。 ２７°、２２０ｒｐｍ　で４８時間のインキュベート後
、種（２．５ｍｌ）を新らしい発酵培地（各５０ｍｌ）
含有２５０ｍｌバッフル化エルレンメイヤーフラスコに
移した。培養条件は種段階の場合と同様であった。４８
時間のインキュベート後、基質（Ｌ−６８９、５０２；
ＤＭＳＯ　　１ｍｌ中２．２ｍｇ／フラスコ）をフラス
コに加え、インキュベートを同様な条件下で７２時間続
け、主生成物としてＬ−６９４、７４６を得た。 発酵培地：

【００４８】

【実施例３】生体内変換代謝産物の単離及び精製ＨＰＬ
Ｃ法を単離操作と発酵及び精製工程のモニターのために
用いた。予備運転は２２５ｎｍでモニターした。分析運
転は２１５及び２２５ｎｍでモニターし、各ピークのス
ペクトルをコンピューターファイルに貯えた。Ｃ１８ク
ロマトグラフィー媒体を分析（４．６ｍｍ×２５ｃｍ）
及び予備（１０ｍｍ×２５ｃｍ）分離の双方に用いた。 流速は各々０．９ｍｌ／ｍｉｎ　及び３．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ　であった。２種の異なる勾配法において、２種の電
解質溶液（溶媒Ａ）を水性成分として用いた。中性緩衝
液（ｐＨ６．２）は２０ｍＭリン酸アンモニウム溶液で
あった。酸性溶液は１０ｍＭリン酸であった。有機相（
溶媒Ｂ）はアセトニトリル−水（８５：１５ｖ／ｖ）で
あった。予備単離用の１つの生体内変換バッチは９つの
シェイクフラスコサンプルから構成されていた。対応サ
ンプルを合わせた。硫酸ナトリウムを全ブロスに濃度約
５％まで加えた。全ブロスを各々等容量のメチルエチル
ケトン（ＭＥＫ）で２回抽出した。プールされたＭＥＫ
抽出液を減圧下で油状物となるまで蒸発させた。残渣を
メタノール（５ｍｌ）と共に音波処理し、遠心して、生
成した沈殿物を分離した。上澄を蒸発乾固し、予備ＨＰ
ＬＣ分離のためメタノール（１ｍｌ）に再溶解した。最
初の分離は中性勾配で行った。複数回運転からの対応分
画を合わせ、蒸発乾固させた。その分画の最終精製は酸
性勾配で行った。分画を検出されたピークに従い集めた
。いかなる有意のピークも示さない領域では、２ｍｉｎ
　分画を集めた。純粋生成物含有分画を合わせ、濃ＮＨ
４　ＯＨで中和し、蒸発乾固させた。生成物はそれを選
択的にメタノールで溶解させることにより不溶性のリン
酸アンモニウムから分離した。

【００４９】勾配プログラムは下記のとおりであった：
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　時間（
分）　　　　　　　　　　　　溶媒Ｂ％　　　　　　分
析、中性：　　　　　　　　０−２　　　　　　　　　
　　　　　３５　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　２−３　　　　　　　　　　　　　　３５
−４５　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　３−１０　　　　　　　　　　　　４５−６５　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０−１２
　　　　　　　　　　　　６５−１００　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　１２−１７　　　　　
　　　　　１００　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　１７−１８　　　　　　　　　　１００−３
５　　　　分析、酸性：　　　　　　　　０−２　　　
　　　　　　　　　　　３０　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　２−１８　　　　　　　　　
　　　３０−８０　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　１８−２０　　　　　　　　　　　　８０−
１００　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
２０−２４　　　　　　　　　　１００　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　２４−２５　　　　　
　　　　　１００−３０　　　　予備、中性：　　　　
　　　　０−２．５　　　　　　　　　　３５　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　２．５−７　　　　
　　　　　　　　　　３５−４５　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　７−３０　　　　　　　
　　　　　４５−６５　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　３０−３４．５　　　　　　　　６５−
１００　　　　　　　　　　　　　　　　　　３４．５
−４３　　　　　　　　　　１００　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　４３−４４　　　　　　　
　　　１００−３５　　　　予備、酸性：　　　　　　
　　０−２．５　　　　　　　　　　３０　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　２．５−３０　　　　　
　　　　　　　３０−７５　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　３０−３２　　　　　　　　　　　
　７５−１００　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　３２−４３　　　　　　　　　　１００　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４３−４４　
　　　　　　　　　１００−３０Ｌ−６９４、７４６：
抽出及びクロマトグラフィー精製を前記のように行った
。中性予備ＨＰＬＣでは１３．４ｍｉｎ　に溶出するピ
ークを集めた。次いでこの分画を酸性予備ＨＰＬＣで再
クロマトグラフィーに付し、２５．４ｍｉｎで最終生成
物を得た。単離工程後、純粋な生成物を得た。物理的損
失は低い全体回収率のためである。化学構造はＮＭＲ及
びＭＳ研究で確立した。

【００５０】保持時間（ｍｉｎ）　： 　　化合物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
中性勾配　　　　　　　　　　　　　　　　酸性勾配　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　分析
　　　　　　　　予備　　　　　　　　分析　　　　　
　　　予備　　　　　　Ｌ−６９４、７４６　　　　　
　８．３　　　　１３．４　　　　１７．８　　　　２
５．４　　Ｌ−６８９、５０２　　　　１４．６　　　
　３１．６　　　　１５．２　　　　ｎ．ａ．Ｌ−６９
４、７４６の構造は下記のとおりであると決定された：

【化３】 ＮＭＲによるかぎとなるスペクトル分析特徴はモルホリ
ノエチルシグナルの不存在及び４．６５ｐｐｍ　におけ
る２つのプロトンシングレットの存在であった。他の点
ではＮＭＲスペクトルは親Ｌ−６８９、５０２とよく似
ている。質量スペクトル分析ではマトリックスとして“
マジック・ブレッド”（ｍａｇｉｃｂｕｌｌｅｔ）（５
：１ジチオスレイトール／ジチオエリトリトール）を用
いて正のＦＡＢ−ＭＳ条件下で構造を確認した。

【００５１】

【実施例４】組換えＨＩＶプロテアーゼ（ＡＰＲＩＮ２
．１）の阻害アッセイ 阻害試験は大腸菌内で発現されるＨＩＶプロテアーゼと
トリチウム化ペプチド基質〔３　Ｈ〕−アセチル−Ｖａ
ｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−（β−ナフチル−Ａｌａ
）−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ
−Ａｒｇ−ＮＨ２（ＭＷ１８００）との反応により行わ
れた。カルボキシル末端における２つのアルギニン残渣
はこのペプチドを酸性ｐＨで全体的正荷電にさせ、それ
をＨ＋　形のダウエックス（ＤＯＷＥＸ）ＡＧ−５０Ｗ
−Ｘ８樹脂及び類似樹脂に結合させる。ＨＩＶプロテア
ーゼはβ−ナフチル−Ａｌａ及びプロリン残基間を開裂
して生成物３　Ｈ−アセチル−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ
−（β−ナフチル−Ａｌａ）を生じるが、これは中性又
はやや負の荷電であって、陽イオン交換樹脂と結合しな
い。したがって標識生成物を基質からうまく分離するこ
とができる。アッセイ緩衝液（ｐＨ５．５の１００ｍＭ
酢酸ナトリウム及び０．１％ＢＳＡ）中６．０〜８．０
ｎＭＨＩＶプロテアーゼ含有２５μｌ　毎にアッセイ管
にいれる。反応はｐＨ５．５の１００ｍＭ酢酸ナトリウ
ム中４．２μＭ　トリチウム化ペプチド基質２５μｌ　
ずつの添加で開始させる。 ３７°で６０分間のインキュベート後、反応を５％Ｈ３
　ＰＯ４　１００μｌ　で停止させ、しかる後カラムク
ロマトグラフィーの適用で分析する。結果は下記のとお
りである： （１）コントロール：Ｌ−６８９、５０２のＡＰＲＩＮ
２．１活性：　　　　　　　　　　濃度（ｎｇ／ｍｌ）
　　　　　　　　　　　　　阻害率（％）　　　　　　
　　　　１０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　８６　　　　　　　　　　　　５　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６９
　　　　　　　　　　　　２．５　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　５４　　　　　　　　　　　
　１．２５　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
２１　　　　　　　　　　　　０．６２５　　　　　　
　　　　　　　　　　　　−２（２）主要代謝産物のＡ
ＰＲＩＮ２．１活性：培養株＃　　　　　　　　　　　
　　　　　　　保持時間（ｍｉｎ）　　　　　濃度（ｎ
ｇ／ｍｌ）　　ＡＰＲＩＮ２．１　活性（化合物）　　
　　　　　　　　予備ＨＰＬＣ　　　　　　分析ＨＰＬ
Ｃ　　　　　　　　　　　　　　　　（阻害率％）Ｌ−
６９４、７４６　　１３．４５　　　　８．３８　　　
　　　１　　　　　　　　　　　　８８

【００５２】

【実施例５】Ｌ−６９４、７４６の有機合成実施例１工
程Ｋの生成物Ｎ−（２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｓ）−
インダニル）−５（Ｓ）−（１，１−ジメチルエトキシ
カルボニルアミノ）−４（Ｓ）−ヒドロキシ−６−フェ
ニル−２（Ｒ）−（４−ヒドロキシフェニルメチル）ヘ
キサンアミド９ｇを無水ジオキサン１４０ｍｌ中で過剰
のＢｒＣＨ２　ＣＯＯＥｔ（９ｍｌ）及び無水炭酸セシ
ウム（２ｇ）と反応させた。混合物を８０°に２４時間
加熱し、しかる後冷却し、濾過し、濃縮し、乾燥し、白
色固体物としてエチルエステルＬ−６９４、７４６を得
た。このエステルをＴＨＦ２００ｍｌに溶解し、１ＮＬ
ｉＯＨ７ｍｌを加えた。２時間攪拌後、混合物をメタノ
ールで希釈し、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（
商標））イオン交換樹脂との攪拌で酸性化し、濾過し、
濃縮乾固させた。ジエチルエーテル及びヘキサンとの摩
砕により水和物としてＬ−６９４、７４６を得た。前記
明細書は本発明の原理について示し、実施例は説明目的
で示されているが、本発明の実施には特許請求及びその
相当範囲内に属するものとしてすべての通常の変更、応
用又は修正を包含すると理解される。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　下記式の化合物： 【化１】 又はその製薬上許容される塩、水和物、エステルもしく
   はアミド。
2. 【請求項２】　　請求項１記載の化合物の製造方法であ
   って、 （１）Ｎ−（シス−２（Ｒ）−ヒドロキシ−１（Ｓ）−
   インダニル）−５（Ｓ）−（１，１−ジメチルエトキシ
   カルボニルアミノ）−４（Ｓ）−ヒドロキシ−６−フェ
   ニル−２（Ｒ）−〔（４−（２−（４−モルホリニル）
   エトキシ）フェニル）メチル〕ヘキサンアミドを与え；
   （２）工程（１）の化合物をストレプトミセス培養株＃
   Ｓ−２６−４８７と共にインキュベートし；及び（３）
   請求項１記載の化合物を単離する；工程からなる方法。
3. 【請求項３】　　ＨＩＶプロテアーゼの阻害に有用な医
   薬組成物であって、有効量の請求項１記載の化合物及び
   製薬上許容される担体を含む組成物。
4. 【請求項４】　　ＨＩＶ感染の予防もしくは治療又はエ
   イズもしくはＡＲＣの治療に有用な医薬組成物であって
   、有効量の請求項１記載の化合物及び製薬上許容される
   担体を含む組成物。
5. 【請求項５】　　哺乳動物に有効量の請求項１記載の化
   合物を投与することからなるＨＩＶプロテアーゼの阻害
   方法。
6. 【請求項６】　　ＨＩＶ感染の予防、ＨＩＶ感染の治療
   又はエイズもしくはＡＲＣの治療のための方法であって
   、哺乳動物に有効量の請求項１記載の化合物を投与する
   ことからなる方法。
7. 【請求項７】　　ＭＡ６８０４の培養株。