JPH04244955A - 毛細管ゾーン電気泳動法用のカラム端における電気および電気化学検出器 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は毛細管電気輸送的装置，
さらに詳しくいえば電気的または電気化学的測定におい
て、電気輸送的に分離されたものを検出するための改良
されたシステムに関する。米国政府はこの発明について
ＮＳＦ契約Ｎｏ．　ＣＨＥ−８６５７１９３に準じて権
利を有している。

【０００２】

【従来の技術】毛細管を用いたゾーン電気泳動法は液体
分離の分野における重要な技術となるに至っている。ヨ
ルゲンソン等のサイエンス２２２（１９８３）２６６−
２７２、ゴードン等のサイエンス２４２（１９８８），
２２４−２２８、ユーイング等のアナリティカル　　ケ
ミストリ６１（１９８９），２９２Ａ−３０３Ａ、ウォ
ーリングフォード等のアドバンセス　　イン　　クロマ
トグラフィ２９（１９８９），１−７６と、クールのア
ナリティカル　　ケミストリ６２（１９９０）４０３Ｒ
−４１４Ｒを参照されたい。毛細管電気泳動法は小さい
ものから大きい分子に至るまでのものを分離するために
利用されてきたが、いくつかの下位の技術分野を持つも
のであって、それらは毛細管ゾーン電気泳動法（ＣＺＥ
）、毛細管ゲル電気泳動法、ミセル電気輸送毛細管電気
泳動法および毛細管アイソ電気収束法である。ＣＺＥ法
は極端に高い電界、例えば典型的には３００Ｖ／ｃｍを
利用するものであるから、イオンを含む溶液の分離に高
い効率を示している。

【０００３】ＣＺＥ法においては新しい検出の技術が要
請されており、特に効果的に検出量中のサンプル要素の
極めて少量の検出に対応できる検出器が絶対的に要求さ
れている。現在までに開発された検出システムとしては
、直接および間接ＵＶ吸収によるもの、（ハジャーテン
のジャーナル　　オブ　　クロマトグラフィ３４７（１
９８５），１９１−１９８とハジャーテン等によるジャ
ーナル　　オブ　　クロマトグラフィ，４０３（１９８
７），４７−６１）、蛍光法によるものユルゲンソン等
のアナリティカル　　ケミストリ５３（１９８１），１
２９８−１３０２とクール等のアナリティカル　　ケミ
ストリ６０（１９８８）、２６４２−２６４４）と、ラ
ジオアイソトープによるもの（ペントニー等のアナリテ
ィカル　　ケミストリ６１（１９８９），１６４２−１
６４７）および質量分析スペクトル法によるもの（スミ
ス等のアナリティカル　　ケミストリ６０（１９８８）
，４３６−４４１、リー等のバイオメッドエンバイロン
、マススペクトラム１８（１９８９），８４４−８５０
、モーズレイ等のクロマトグラフィ４８０（１９８９）
，１９７−２１０、カプリオリ等のジャーナル　　オブ
　　クロマトグラフィ，４８０（１９８９），２４７−
２５８）と、電気測定では（ミッカーズ等，ジャーナル
オブ　　クロマトグラフィ１６９（１９７９），１１−
２０、ハング等のアナリティカル　　ケミストリ５９（
１９８７），２７４７−２７４９と、ウォーリングフォ
ード等によるアナリティカル　　ケミストリ，５９（１
９８７），１７６２−１７６６）の検出器がある。

【０００４】電気的な検出器は電気化学検出器より優れ
たものとして区別されている。電気化学的な検出器は検
出領域に入った粒子とかスペシース（種）が受ける化学
的変化に対応する電気的な効果を含むものである。電気
的な検出器は検出領域に入った粒子とかスペシースの電
流または電流のコンダクタンスまたは抵抗の変化に応答
するものである。電気的検出器においては、化学的な反
応は不必要であり、要求されない。ＣＺＥのために現存
する電気的または電気化学的な検出器はカラム中または
オンカラムまたはポストカラム検出法が使用された高い
電圧から検出プロセスが干渉されないように用いられる
。

【０００５】ある方法はレーザを用いて毛細管の中に４
０μｍ直径の孔を構成する。その後に小さな白金線の電
極がそれらの孔の中でオンカラム導電率を実行するため
に配置される。分離のために設けられる高い電界からの
背景雑音を最小にするためにはこれらの電極を毛細管の
反対側に正確に位置させることが臨界的に要求されてい
ることが示されている（ハング等のアナリティカル　　
ケミストリ５９（１９８７），２７４７−２７４９）。 米国特許出願番号ＮＯ．　４４３，０５９号、１９８９
年１１月２８日出願によるザーレ等によるオンカラム導
電検出器が示されており、そこにおいてオンカラム検出
電極は分離マイクロカラムの出口に接して配置されてい
る。 電極はそれらの端部だけで導電率が測定されるように電
極の側面は電気的絶縁材料により覆われている。他の方
法は毛細管における毛細管を多孔性のガラスの毛細管で
覆い、オフカラムの電気検出を行うものである。（ウォ
ーリングフォード等のアナリティカル　　ケミストリ５
９（１９８９），１７６２−１７６６）。

【０００６】電流検出システムにおいては良い結果が得
られているが、それらはそこに用いられる構造の製造が
難しいこと，高価であること，しばしば信頼性を欠くこ
とにおいて不満足である。これによりこれらはＣＺＥに
おける電気化学的検出の両モードの良く知られている応
用にのみ制限的に用いられている。ユーイング等のアナ
リティカル　　ケミストリ６１（１９８９），２９２Ａ
−３０３Ａ、クールのアナリティカル　　ケミストリ６
２（１９９０），４０３Ｒ−４１４Ｒ、ハング等のアナ
リティカル　　ケミストリ６１（１９８９），７６６−
７７０、ハング等のジャーナル　　オブ　　クロマトグ
ラフィ４２５（１９８８），３８５−３９０、ハング等
のジャーナル　　オブ　　クロマトグラフィ４８０（１
９８９），２８５−２８８、ウォーリングフォード等の
アナリティカル　　ケミストリ６０（１９８８），１９
７２−１９７５、ウォーリングフォード等のアナリティ
カル　　ケミストリ６０（１９８８），２５８−２６３
、ウォーリングフォード等のジャーナル　　オブクロマ
トグラフィ４４１（１９８８），２９９−３０９、とウ
ォーリングフォード等のアナリティカル　　ケミストリ
６１（１９８９）９８−１００を参照されたい。

【０００７】

【発明の目的】本発明の第１の目的はＣＺＥ法において
有効な検出量中の極めて少ないサンプル要素に対応する
ことができる信頼性が高く、比較的に安価なオフカラム
の電気的および電気化学的検出器を提供することにある
。本発明の他の目的はＣＺＥ分離に用いられる毛細管に
発生する高い電圧降下に関連する検出上の問題を除去す
ることができるカラム端の導電率または電流測定電極を
提供することにある。

【０００８】

【発明の要約】これらおよびその他の目的はＣＺＥのた
めの導電率測定または電流測定検出器において達成され
るものであって、それらの検出用のマイクロ電極は分離
用毛細管の出口に配置される。これらの“出口端検出器
”は製造が容易である。それらはＣＺＥ分離の間に印加
される高い電圧によって発生する電気的な干渉の影響を
受けない。さらにエンドカラム（カラム端検出器）は既
に存在するオンカラム導電率測定法およびポストカラム
電流電極法に匹敵する検出感度を持ちうるものであって
、この解決にほとんど犠牲を払っていない（ユーイング
等のアナリティカル　　ケミストリ６１（１９８９），
２９２Ａ−３０３Ａ、ハング等のアナリティカル　　ケ
ミストリ５９（１９８７），２７４７−２７４９、とハ
ング等のアナリティカル　　ケミストリ６１（１９８９
），７６６−７７０）。典型的な動作条件においてエン
ド−カラム式ＣＺＥ導電率測定器の使用においてはオン
カラムＣＺＥ導電率測定器と比較して２５％だけ余分な
領域を持つ必要があることが見出されている。カラム端
電流測定法においては検出リミットは５６アトモル（ａ
ｍｏｌ）ほど低く、そして効率はカテコールについて論
理段は１４３，０００であった。

【０００９】

【実施例】図１はカラム端導電率検出器を用いたＣＺＥ
分離装置を示す図である。分離用の毛細管１００は内径
が８０μｍ，外径が３５４μｍであって、溶融珪素のマ
イクロカラムであって、その長さは６０ｃｍである（ポ
リマイクロ　　テクノロジー社，フェニックス　　アリ
ゾナ）。反転可能な高電圧電力供給装置１１０（Ｒ５０
Ｂ形，ニューヨーク　　ブルスターのヒポトロニクス社
）は接地電圧に対して分離用毛細管の出口において０〜
３０ＫＶの可変電圧を提供することができる。

【００１０】この毛細管は支援用の電解液が充填されて
おり、プラスチックジャケット２００の中の検出用のマ
イクロ電極の近くで終わりになっている。このジャケッ
トはほぼ２５ｍｍの長さであって、その直径はほぼ６．
４ｍｍである。入口容器１２０と出口容器１３０にも同
様に支援用電解液が入っており、その結果、液体が充填
されている毛細管１００はそれらの間に連続する溶液お
よび電気的な接続を作り出している。後述するように毛
細管の中に存在する電解質はプラスチックジャケット２
００に設けられた孔２９０により出口側の容器に流れ込
む。前記ジャケットは出口容器の１つの壁から部分的に
内部に挿入されて、そこで支持されている。効果的な電
気輸送の電圧が電源１１０から導線１４０と１５０と接
地電極１７０と電極１６０を介して供給されている。検
出用のマイクロ電極（後述する）はプラスチックジャケ
ット２９０の内部の毛細管１００の出口に位置させられ
ている。カラム端導電率検出器の出力は電解質の中の材
料の関数と変わるものであるが、その出力は配線２０を
介して導電率系１８０に導かれ、そこで記録される。導
電率の計測は検出用のマイクロ電極と接地電極１７０と
の間において成される。

【００１１】図２はプラスチックジャケット組立の断面
図である。リード線２７０は長さ１ｃｍの溶融シリカの
毛細管２２０の中に位置させられており（１５０μｍ内
径，３５５μｍ外径，ポリマイクロ　　テクノロジー社
）、プラスチックジャケットの中の中間位置まで延びて
いる。同様に分離用毛細管１００はプラスチックジャケ
ットの中間に他の方向から延びてきている。エポキシ樹
脂２１０とテフロン（登録商標）のワッシャー２４０が
毛細管２２０の支持体を形成している。同様にしてエポ
キシ２５０とテフロン（登録商標）のワッシャー２６０
が分離用毛細管１００の支持体を形成している。プラス
チックジャケットの中間部の回りには毛細管２２０と分
離用毛細管１００が位置させられているチャンネル２８
０が形成されている。このチャンネルはその両端をそれ
ぞれテフロン（登録商標）のワッシャー２４０と２６０
で密封されている。孔２９０がプラスチックジャケット
の一面に設けられており、検出用マイクロ電極に沿って
前記溶液が分離用毛細管１００から流れ出て容器１３０
に流れ込むように設けられている。

【００１２】図３は検出用のマイクロ電極３００を拡大
して示した図であって、そのマイクロ電極は５０μｍ直
径の白金線（カリフォルニア　　ファイン　　ワイヤ社
，カリフォルニア州　　グローバー市）製である。マイ
クロ電極は毛細管２２０の中心に設けられており、エポ
キシ３１０（トールシール，マサチュセッツ州　　レキ
シントン，バリアン社）によって保持固定させられてい
る。マイクロ電極の表面は分離電極の出口に対面させら
れており、砂磨きにより平坦にされている。

【００１３】毛細管２２０の端部は分離用毛細管に対面
しており、短いがより大きな支持用の溶融シリカ毛細管
３２０（ほぼ３５５μｍの内径を持っている）により位
置させられており、それはリングまたはカラー構造をし
ている。毛細管２２０の外表面は毛細管３２０の内表面
にエポキシにより密封固定されている。毛細管３２０の
他端は分離用毛細管１００の出力口から１乃至２ｍｍ離
れており、ほぼ検出用電極３００に対して僅かに突き出
している。これにより、分離用の毛細管１００と毛細管
２２０の間に壁状で１〜５μｍの空隙、より好ましくは
１〜２μｍの空隙、をもつ１乃至２ｍｍの長さをもち、
出口容器に開口２９０を介して放出される溶出液用のた
めの、ギャップ３３０が残される。溶質ギャップの形状
は何はともあれ、分析のために分離用毛細管に注入され
た試料の量に依存する。本発明による導電検出器では、
各々の要素領域または帯域の抵抗は各々の前記帯域が前
記溶質ギャップを流れるときの抵抗として測定される。 もしギャップの長さが長すぎて１つのバンドを越えると
きには溶質ギャップを通過する時間によって測定に干渉
が発生する。壁の分離距離を減少させることによってギ
ャップの長さを短くすることができるが、付随して死容
量（デッドボリューム）の増加をもたらすという欠点が
現れる。

【００１４】図４は電流計測のためのＣＺＥシステムの
略図である。分離用毛細管４００は溶融シリカの毛細管
で５μｍの内径と１４０μｍの外径を持っており、ポリ
マイクロテクノロジー社（アリゾナ，フェニックス）の
ものである。この毛細管（５０から７０ｃｍの長さ）で
プラスチック容器４１０を形成するステンレス製の金具
４２０（形状を誇張して示してある）により固定され、
その金具は容器の一方の壁にエポキシで固定されている
。この容器は電気化学的なセルとして機能する。前記金
具は電気泳動のためのカソードとして機能する。高い直
流電圧供給装置４３０が電気泳動のための電解を提供す
る。電極４４０はバッファ容器４７０中に配置されてお
り、電源に導線４５０により接続されている。同様に鋼
の口金４２０は電源に導線４６０により接続されている
。検出器４８０のマイクロ電極５３０（後述する）の端
部はプラスチック容器４１０の反対側に設けられている
切溝を介して操作させられ、顕微鏡で観察しながらマイ
クロマニュピュレータ（ニューポート４２２形）によっ
て、分離用毛細管４００の端部に対向させられる。

【００１５】図５は電流検出器の略図的な平面図である
。検出器を構成するために１本の炭素ファイバ，１０μ
ｍの直径で南カリフォルニア州のグリーンビルのアムコ
　　パフォーマンス製作所製がガラスファイバのガラス
の毛細管５００の中に吸い込まれている。この毛細管は
ファイバ５３０のまわりに垂直にマイクロ電極プーラー
によって引き延ばされている。このファイバ５３０はマ
イクロ電極として使用される。光学顕微鏡で観察しなが
ら一滴のエポキシ５４０が前記ファイバがガラスの毛細
管に入っているところに適用される。硬化した後にファ
イバは手術用のメスで０．１乃至１ｍｍの長さを露出し
た状態で切断される。ガラスの毛細管の開口端には水銀
が充填され、ニクロム線５９０のある長さのものがその
中に挿入されてディーユーシーオー（ＤＵＣＯ）セメン
トを滴下して固める。

【００１６】炭素繊維の検出器は顕微鏡スライド５１０
にその繊維の一端がスライドの端から突出するように固
定されている。全体の検出器の組立はコネチカット州の
オリエール社のマイクロマニュピュレータ５２０に乗せ
られる。炭素繊維の先端が分離用毛細管の４００の孔に
一致させられる。炭素繊維の先端の分離用毛細管の間の
距離はほぼ１乃至５μｍである。炭素繊維電極５３０と
分離用毛細管４００の出口は電気化学セル４１０のバッ
ファ液の中に沈められ、そこには参照電極５５０が配置
されている。参照電極５５０はポテンシオスタット５７
０に配線５６０により接続されている。ニクロム線５９
０はポテンシオスタットに配線５８０により配線されて
いる。

【００１７】（実　　験）導電率検出　　導電率の測定
のためにカラム端導電率検出器はＣＺＥ毛細管（図３参
照）の出口に直接に配置される。試料は毛細管の陰極側
または陽極側から入口を知られている高さ（７乃至１２
ｃｍ）だけ出口に対してある一定の時間（５乃至１０秒
）だけ高くすることにより重力によって導入された。

【００１８】電流検出　　電流検出測定のためにセルは
０．１Ｍの塩化カリウムが支持電解液として導入された
。検出はナトリウム飽和カロメル参照電極（ＳＳＣＥ）
の２電極形状によって実行された。電気化学的検出は０
．８ＶＳＳＣＥで実行された。測定されるべき電流が低
い場合は装置の検出間を外界の雑音源の影響を極小にす
るためにファラデイケージの中に入れる必要があった。 注入は電気泳動により行われた。

【００１９】化学物質　　全ての化学物質はシグマ　　
ケミカル　　コーポレイション（ミズリー州，セントル
イス）から求めたものであって、さらに純化する必要は
ないのでそのまま精製しないで用いられた。導電率検出
は２０ｍＭのモルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）／
ヒスチジンｐＨ６．０でそれに陽イオン界面活性剤，テ
トラジルトリメチル臭化アンモニウム（ＴＴＡＢ）より
なるバッファバッファ溶液を用いて，そこに添加される
（１ｍＭの最終密度）。溶液として用いられる水は水浄
化装置（ＬＤ−２Ａ形　　メガピュア　　コーニング　
　ガラス社　　ニューヨーク）のものが用いられた。電
流検出はＭＥＳを用いて行われた。しかしこれらのバッ
ファは固体の水酸化ナトリウムを添加することによって
希望するｐＨに調節された。カテコールアミンと貯蔵溶
液は０．１Ｍの可塩素酸中に０．０１Ｍ溶液として準備
され、操作用のバッファを用いて希望する濃度に希釈さ
れた。

【００２０】結果および議論 　　カラム端導電率測定　　図６は電気泳動のグラフを
示すものであってこれは６種類の異なる５×１０−５Ｍ
の各カルボン酸が図１から図３に示されるＣＺＥ装置に
導入されて得られる。それらの酸はギ酸塩（ピーク１）
、酢酸塩（ピーク２）、プロピオン酸塩（ピーク３）、
酪酸塩（ピーク４）、吉草酸塩（ピーク５）、およびカ
プロン酸塩（ピーク６）である。バッファ液はＭＥＳ／
ＨＩＳ（それぞれ２０ｍＭ）でｐＨ６で１ｍＭのＴＴＡ
Ｂを用いた。注入は重力により成された。感度と分解は
先に実験が成されたもの（アナリティカル　　ケミスト
リ６１（１９８９），７６６−７７０のハング等による
実験結果を示す図１を参照）と極めて類似するものであ
る。バッファ液中のＴＴＡＢは電気浸透圧，浸透圧流れ
の方向を逆転させるものであるから、電力供給の方向も
また最も動きやすいアニオンが最初に検出器にくるよう
に反転させた。

【００２１】このカラム端導電検出はオンカラム導電率
検出器よりも、より多くの死容量（デッドボリューム）
を持つ。この付加的なデッドボリュームは図３に示され
ている毛細管１００，２２０，３２０間の溶質ギャップ
３３０から５乃至６ｎＬに相当するだけのものであると
推定される。このデッドボリュームが分離効率に与える
効果を調べるために以下のような実験が行われた。安息
香酸陰イオン（Ｃ６　Ｈ５　ＣＯＯ−　）が１×１０−
５Ｍで注入されたときのピーク形状がオンカラムＵＶ吸
収とカラム端導電率検出を用いて記録された。ＵＶ吸収
検出はカラム端の、導電率検出器位置よりも９ｃｍ上流
のところであるから、移動による追加される帯域幅の増
加は極小である（ハング等のジャーナル　　オブ　　ク
ロマトグラフィ４８０，（１９８４），９５−１１０）
。カラム端導電率検出器から得られたピークはＶＵ吸収
検出から得られたものよりも２３％広いものであり、そ
れは２３ｎＬの注入によるものである。カラム端導電率
検出器の追加されるデッドボリュームに原因する余分な
帯域の拡大は予想される余分な拡大と比較することがで
きる。

【００２２】典型的な注入量（２０ｎＬ）で８０μｍの
内径の毛細管において、この追加される領域拡大は２５
％以下であり、これは非常に簡単な構成から得られる利
益に比較して適当な量であると思われる。さらに、カラ
ム端導電率検出器はどのような毛細管電気泳動システム
の排出口にも容易に適用されるものであり、それは極め
て簡単で一般的なＣＺＥの用途を示唆するものである。 さらにくわえて、この発明による導電率検出器は内部の
基準が利用されるときにおいて、絶対的な基準における
量的な計測をすることができる。

【００２３】カラム端電流検出　　前述したように、Ｃ
ＺＥ装置の電流検出は、実質的に溶融シリカの毛細管と
炭素繊維のマイクロ電極を含むものである。本発明によ
るカラム端電流検出においては、電気泳動のために検出
電極を高い電解から分離する必要はないのであって、そ
の理由は分離用毛細管の孔の開口の外側における電圧降
下は無視できるほど小さいからである。マイクロ電極は
毛細管の開口に対面させられ、それと突き合わされてい
るが毛細管の中に挿入されるものではない。それにより
、毛細管の出力において薄い層のセルが形成される。こ
の実施例におけるマイクロ電極の直径は毛細管の内径の
ほぼ２倍であるから良好な酸化効率が得られる。検出器
の感度は円筒状の図５に示す炭素繊維電極が用いられる
ときは、円板状の電極が用いられる場合に比べてほぼ一
桁程度増加させられる。毛細管からの溶出は電極の回り
に鞘形状の流れを明確に形成するから、検出器において
より効果的な溶液の酸化が行われる。図７および図８に
おける電気泳動の分離の条件は分離電圧が２０ＫＶ，電
気化学的検知機能電圧が０．７Ｖで注入は２０ＫＶで５
分間であった。

【００２４】図７に示されている電気泳動図は等モル（
１×１０−５Ｍ）の濃度のドーパミン（ピーク７）、イ
ソプロテレノール（ピーク８）、カテコール（ピーク９
）と３，４−ディハイドロオキシフェニル酢酸（ピーク
１０）が５μｍの内径の毛細管であって、５６．６ｃｍ
の長さにおいて得られたものである。カチオンと中性物
質とアニオンはこの技術をもってしても容易に分離され
ない。

【００２５】図８はこの検出システムの直線性の別の研
究によって得られたものである。等モル（５×１０−６
）のドーパミンの混合物（ピーク１１）と、イソプロテ
ノール（ピーク１２）と、カテコール（ピーク１３）は
内径５μｍで長さ５６．６ｃｍの毛細管に注入された。 ピークは９６０アトモル（ａｍｏｌ）ドーパミン、８７
０アトモル（ａｍｏｌ）イソプロテレノールと５６０ア
トモル（ａｍｏｌ）カテコールに対応する。この分離を
最適化するために特別の配慮はしていない。実験溶液の
ための較正曲線（カリブレーションカーブ）が計算され
た。一組の実験においてカテコールの検出は注入全量が
１．１３フェムトモル（ｆｍｏｌ）から０．１１３ピコ
モル（ｐｍｏｌ）（１０−５から１０−３）に渡って行
われた。直線回帰分析により、傾斜と相関係数について
、それぞれ７．７×１０−３と０．９９１を得た。

【００２６】他の実験において、ドーパミン、イソプロ
テノールとカテコールの検出によって、平均全注入量が
８０アトモル（ａｍｏｌ）から４．０フェムトモル（ｆ
ｍｏｌ）（５．０×１０−７から２．５×１０−５Ｍ）
において行われた。直線回帰分析により、相関係数につ
いて０．９９８がＤＡについて，０．９９９がＩＰにつ
いて、０．９９３がＣＡＴについて得られた。これらの
化合物のための検出の電解はＤＡについては６４アトモ
ル（ａｍｏｌ）、ＩＰについては７０アトモル（ａｍｏ
ｌ）、ＣＡＴについては５６アトモル（ａｍｏｌ）（Ｓ
／Ｎ＝２，ピークツウピークの雑音は１０個以上のピー
クの幅により評価された）であった。これらの値は最も
少ない注入量により行われ、それは５×１０−７Ｍ（８
０アトモル）である。

【００２７】本発明は前述した好適な実施例について特
定の実施例を示してなされたものであり、実施例は例示
のために示されたもので、発明の範囲を限定するもので
はなく、発明の範囲は添付の特許請求の範囲により規定
されるべきものであると理解されたい。

【図面の簡単な説明】

【図１】カラム端導電率検出器を用いたＣＺＥ分離装置
の略図である。

【図２】プラスチックジャケット組立の断面図である。

【図３】カラム端検出用のマイクロ電極の拡大図である
。

【図４】カラム端電流検出器を用いたＣＺＥ分離装置の
略図である。

【図５】電流検出方式によるカラム端の略図を示してい
る。

【図６】カラム端導電率検出によって得られた電気泳動
図である。

【図７】カラム端電流検出法によって得られた電気泳動
図である。

【図８】カラム端電流検出法によって得られた電気泳動
図である。

【符号の説明】

１００　　分離用毛細管 １１０　　電源 １２０　　入口容器 １３０　　出口容器 １４０，１５０　　導線 １６０　　電極 １７０　　接地電極 １８０　　導電率計 ２００　　プラスチックジャケット ２１０　　エポキシ ２２０　　毛細管 ２４０　　テフロンのワッシャ ２５０　　エポキシ樹脂接着剤 ２６０　　テフロンのワッシャ ２７０　　導線 ２８０　　チャンネル ２９０　　孔 ３００　　マイクロ電極 ３１０　　エポキシ樹脂接着剤 ３２０　　毛細管 ３３０　　　　隙間 ４００　　分離用毛細管 ４１０　　プラスチック容器 ４２０　　ステンレスの止め金 ４３０　　高圧直流電源 ４４０　　電極 ４５０　　導線 ４７０　　バッハァ用の容器 ４８０　　検出器 ５００　　ガラス毛細管 ５１０　　顕微鏡のスライド ５２０　　マイクロマニュピュレータ ５３０　　マイクロ電極（炭素繊維電極）５５０　　参
照用電極 ５６０　　リード線 ５９０　　ニクロム線

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　出口端をもちそこから電気泳動的に分
   離された溶質液が流れ出す出口をもつ分離用毛細管と、
   バッファ溶液を前記分離用毛細管の出口端がそのバッフ
   ァ領域に浸積されている容器と前記分離用毛細管の出口
   端から離れてバッファ領域内に前記分離用毛細管から流
   出する流出物に応答するように配置されている検出電極
   を含む、毛細管ゾーン電気泳動法用の装置。
2. 【請求項２】　　前記検出電極と出口間の距離は流出液
   が分離用電極からの流出する液がバッファ液によって実
   質的に希釈されないような小さな距離である請求項１記
   載の毛細管ゾーン電気泳動法用の装置。
3. 【請求項３】　　請求項１記載の装置において、さらに
   検出用電極が挿入されている第２の毛細管がもうけられ
   ており、前記第２の毛細管は前記分離用毛細管の出口か
   ら離れて配置され，流出液が流れ出す流出ギャップを規
   定するものである毛細管ゾーン電気泳動法用の装置。
4. 【請求項４】　　請求項１記載の装置において、さらに
   溶質が流れ出す溶質ギャップを形成するための手段が配
   置されている毛細管ゾーン電気泳動法用の装置。
5. 【請求項５】　　請求項１記載の装置において、前記容
   器内に接地電極が設けられており、前記接地電極と検出
   電極は溶液の抵抗を検出するための電極対を形成する毛
   細管ゾーン電気泳動法用の装置。
6. 【請求項６】　　請求項３記載の装置において、容器中
   にはさらに接地電極を用いられており、前記接地電極と
   前記検出電極は溶質電気の抵抗を検出するための対の電
   極を形成する毛細管ゾーン電気泳動法用の装置。
7. 【請求項７】　　請求項４記載の装置において、容器中
   に接地電極が設けられており、前記接地電極と前記検出
   電極は溶質電気の抵抗を検出するための対の電極を形成
   するものである毛細管ゾーン電気泳動法用の装置。
8. 【請求項８】　　請求項１記載の装置において、前記検
   出電極と前記出口端との距離は前記分離用毛細管から流
   出する流出液が前記検出電極に実質的に連続的に接触す
   るように十分小さいものである毛細管ゾーン電気泳動法
   用の装置。
9. 【請求項９】　　請求項１記載の装置はさらに参照電極
   を容器中に含み、前記参照電極と検出電極は検出電極位
   置において、電気化学的な反応を検出するための電極対
   を形成する毛細管ゾーン電気泳動法用の装置。
10. 【請求項１０】　　請求項８記載の装置において、容器
    中に参照電極が設けられており、前記参照電極と前記検
    出電極は検出用電極位置における電気化学的反応を検出
    するために１つの電極対を形成するものである毛細管ゾ
    ーン電気泳動法用の装置。
11. 【請求項１１】　　毛細管電気泳動法用の電気的な検出
    方法であって、バッファ溶液容器中に分離用の毛細管出
    口を配置する工程と、分離用毛細管の出口から十分小さ
    な距離であり，分離用毛細管から流出した流出液がバッ
    ファ液によって実質的に希釈されない程度の短い距離内
    に検出電極を配置する工程と、バッファ溶液中に接地用
    電極を配置する工程と、前記検出用の電極と接地電極間
    に電流を流す工程と、溶出液が流れる溶出ギャップを形
    成する工程と、電気泳動法による分離のために，前記分
    離用毛細管に沿って，一方が出口である２点間に電圧を
    印加する工程とを含む毛細管電気泳動法用の電気的な検
    出方法。
12. 【請求項１２】　　毛細管電気泳動法用の電気化学的な
    検出方法であって、分離用毛細管の出口をバッファ溶液
    の容器内に位置させる工程と、検出電極を前記流出口か
    ら十分に短い距離で，前記流出物から溶質液が前記分離
    用毛細管から流れ出したときに前記流出液が実質的に前
    記検出電極に連続的に接触するような距離に検出電極を
    配置する工程と、バッファ溶液中に参照電極を配置する
    工程と、検出電極と参照電極間に電圧を設定する工程と
    、前記毛細管の前記１点は前記出口である２点間に電圧
    を印加する工程を含む、毛細管電気泳動法用の電気的な
    検出方法。