JPH0398589A - ヒノキチオールの生産方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 「産業上の利用分！ＩＴＪ 本発明は、ヒノキチオールを組織培養により生産する方
法に関する， 「従来技術」 ヒノキチ才一ルは、゛台湾ヒノキ、青森ヒバ等の樹木の
酸性油に含まれる精油成分で，七貝環化合物として位置
付けられ、古くから抗菌，抗カビカがあることが知られ
、結核、歯槽膿漏、悪性円形脱毛症等の治療薬として或
る期間使われ、今日でも養毛剤，歯周疾患治療薬，薬用
ねり歯みがきに使われている。さらに、医薬分野のみな
らず食品保存の分野でも、有用かつ無害な防腐剤として
期待され、その利用が研究されてきている．また、最近
になって、ヒノキチ才一ルに青果物の老化の原因となっ
ているエチレンの発生抑制、呼吸抑制作用があることが
発見され，農産物の鮮度保持にも優れた効果があること
が認められたため、ヒノキチ才−ルの需要が益々増大し
ているのが現状である。

ところが、このように広い抗菌スペクトルとエチレン抑
制作用のあるヒノキチ才−ルの製造を、従来では次のよ
うな方法で行なっていた。

すなわち、まず、青森ヒバの製材時に生じる才ガクズを
水蒸気蒸留し、この水蒸気を冷却装置により冷却して油
木分離後ヒバ原油を得る．１′４られたヒバ原油をアル
カリ液でアルカリ処理し、酸性油を抽出する．そして，
得られた酸性油をさらに蒸留してヒノキチ才−ル油にし
、これを結晶化することでヒノキチ才一ルを得る．ここ
で得られるヒノキチ才−ルは，才ガクズＩｔ当たり約６
０ｇである。

「発明が解決しようとする問題点」 しかし、上記従来のヒノキチ才一ル製造方法によると、
製材による副産物としてのオガクズを使うので量的な制
限が伴い、大量のヒノキチオールを抽出することは困難
である．また、材木から作ろうとすると非常に高価なも
のとなって実用性を失う． 本発明は，原料上の制限なしに、ヒノキチ才一ルの大量
生産を可能にすることを目的とする．「問題点を解決す
るための手段」 本発明者は，食品保存，青果物の鮮度保持に極めて有用
なヒノキチ才−ルを，従来の方法とは全く違った方法で
安定的かつ大量に得られないかとの着恕のもとに種々の
研究を行なった結果、ヒノキチ才一ルを二次代謝産物と
して持つ植物の組織培養によって、ヒノキチオールを得
る方法を見出した． 植物が生産する有用物質を自生あるいは栽培によらず、
組織培養によって製造する試みが数多くなされ、特許出
願さている（例えば．特開昭６ｌ−２３８７２７号、特
開平１−９５７７１号）が、ヒノキチオールを組織培養
により生産する試みはなされていない． すなわち本発明は、二次代謝産物としてのヒノキチ才一
ルの産生能を有する植物またはその植物の組織細胞から
カルスを誘導し、得られたカルスを培地により培養して
ヒノキチオールを得ることにある． ヒノキチオール産生能を有する植物として現在判明して
いるものには、台湾ヒノキ、青森ヒバのほか、ウェスタ
ン・レッド・シダーがある。

本発明は，まず、ヒノキチ才一ル産生能を有する植物の
殺菌した茎や葉または無閑幼苗を，植物ホルモンを添加
した寒天培地に植付＆ｊ、２２゜Ｃ〜２５℃の明または
暗条件下で培養することにより，カルスの誘導を行なう
．カルスは，約４週間で得られる． カルスの誘導促進に供される植物ホルモンは，才一キシ
ン類あるいはサイトカイニン類が好適である．オーキシ
ン類としては，インドール酢酸、ナフタレン酢酸、２．
４−ジクロロフエノキシ酢酸等が、また、サイトカイニ
ン類としては、カイネチン、ペンジルアデニン，ゼアチ
ン等が挙げられる．植物ホルモンの添加濃度は、カルス
の誘導促進が好適に得られる０．０１ｐｐｍ−１０＋）
ｌ：）ｍから選ばれる．寒天培地としては、植物の組織
培養に通常用いられるＭＳ（ムラシゲ・スクーグ（Ｍｕ
ｒａｓｈｉｇｅ　＆Ｓｋｏｏｇｌ　ｌ培地のほか、Ｒｅ
ｉｎｅｒｔ−Ｗｈｉｔｅ培地ＳＳＳ培地が好ましい． こうして得られたカルスは、次いで増殖のための固形培
地または液体培地に植え継ぎをし、増殖を行なう．固形
培地としては、上記の寒天培地が用いられ，液体培地と
しては、ｕＳ（ムラシゲ・スクーグ）培地が好適である
．液体培地の方が大徹培養には好ましい．この場合、カ
ルスを振どうまたは通気撹拌培養することにより，大量
のカルスを得ることができる． 最後に，こうして増殖させて得たカルスを乾燥させた後
、メタノール抽出し．　ＩＩＰＬＣにより分析した結果
、ヒノキチ才一ルの生産を確認した．このようにして得
たヒノキチ才一ルの含有量は、カルス乾物中１３６．４
ｐｐｍ．すなわちＩｔ当り１３６．４ｇと、才ガクズ中
の含有量をはるかに上回った． 「発明の実施例」 （実施例ｌ） 青森ヒバの葉の付いた枝を中性洗剤でよく洗い、長さ６
ｃＩＩ１前後に切り揃え、０．１％昇末液に３０分間浸
漬し、滅菌水で３回洗浄した． 次に、殺菌した枝および葉を無菌的に長さ２〜３ｃ＋＊
に切断したものを寒天培地上に値付け、照明下２４℃で
３０日間培養したところ，葉先および枝、葉の切断面か
ら、カルスが誘導された。

寒天培地は、ＭＳ（ムラシゲ・スク〜ク）培地に、寒天
０，７％、ＮＡＡ　（ナ７クレン酢酸１１ｐｐｍ．カイ
ネチン０．１ｐｐａ＋　．シヨ糖３％を添加し、１ｆｔ
閑後、直径６ｃｍのガラスシャーレに２０ｍｌづつ無閑
的に分注し、固化したものを用いた． 誘導されたカルス０．　１ｇを、ＮＡＡ　Ｏ．ｉｐｐｍ
、カイネチン０．０１　ｐｐｍとしたＭＳ培地にｔｔａ
えたところ，２４゜Ｃ、３０日間の培養で，カルス０．
３ｇを得た。このようにして得たカルス１５ｇを６０℃
で風乾させ、乾燥カルスを得た．この乾燥カルス０．９
５ｇをメタノール抽出した後、ＨＰＬＣで分析したとこ
ろ、ヒノキチ才一ルを検出した。乾燥カルス中のヒノキ
チ才−ル含有率は１３６．４　Ｉｌｌ）ＴＩであった．
Ｈ　Ｐ　Ｌ　Ｃには、逆相カラム（旭化成工業株式会社
製アサヒバックＯＤＤ−５０　　内径４．６ｍｎ＋　Ｘ
長さ２５０ｍｍ　）を使用し、溶出には、下記に示す二
種の溶液を移動相として用い、その二種の液の濃度を直
線的濃度勾配で変化させた． 溶液Ａ：０．１％リン酸 溶液Ｂ：０．１％リン酸含有アセトニトリル濃度勾配は
、クロマト開始時に溶ｔｉＡと溶液Ｂの比が７：３であ
ったものが、その後の２０分間で同じくｌ：９となるよ
うに変化させた．流速は毎分１ｍｌとした． ヒノキチ才一ル標品の分析結果を第１図に、カルス抽出
物を第２図に示す．図中、縦軸方向は溶出時間を分で示
してある． （実廊例２） 冴森ヒバの種子を水に入れ、一晩冷蔵庫に入れ，水にｒ
７いた種子を捨て，残りを０．１％昇木液に３０分浸漬
、滅菌水で３回洗浄した．次に、殺菌した種子を、寒天
培地（１．５％寒天液を加温溶解後、試験管にｌＯｍｌ
分注し、滅菌固化させたもの）に一粒づつ撒き、２４℃
の暗黒下で保存したところ，２週間〜３週間で発芽した
．発芽２週間後に、幼苗をそのまま又は茎の部分を切り
取ったものを、寒天培地の上に置き、２４℃，３０日間
の培養でカルスが誘導された． 寒天培地は，実施例ｌと同様、ＵＳ培地に、寒天０．７
　％．　ＮＡＡ　ｌｐｐｍ、カー１’ネチン０．ｌｐｐ
Ｉ１．　ショｔ！３％を加え、滅菌後、直径６ｃｍのシ
ャーレに２０ｍｌづつ分注したものを用いた． このカルスを、寒天培地（ＭＳ培地に．　ＮＡＡ　Ｏ．
ｉｐｐｍ、カイネチン０．０１　ｐｐｍを加え、過熱、
滅菌し、シャーレに２０−ｌづつ分注したもの）に１０
０　ｍｇづつ植付け、２５℃、３０日間の培養でＩｇの
カルスを得た．得られたカルス１９．　５ｇを６０℃の
温風で乾燥させ、１．８　ｇの乾燥カルスを得た．これ
をメタノルで抽出し、Ｈ　Ｐ　Ｌ　Ｃで分析したところ
、ヒノキチ才−ルを検出した。乾燥カルス中のヒノキチ
オール含有率は７２．０ｐｐｍであった． ＨＰＬＣの分析条件は，実廁例と同じである．種子由来
カルスの分析結果を第３図に、カルス抽出物とヒノキチ
オール標品との混合物の分析結果を第４図に示す。図中
、縦軸方向の数値は実施例ｌに準じる。

「允明の効果」 以上のように本発明によれば，ヒノキチ才−ル産生能を
有する植物の組織培養によってヒノキチオールを得るの
で，原科制限を受けることなく、ヒノキチオールを安定
的に生産でき，実質上大量生産することも可能である． は同種子由来カルスの分析結果を示すクロマトグラム、
第４図は同カルス抽出物とヒノキチオール標品との混合
物の分析結果を示すクロマトグラムである．

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒノキチオール産生能を有する植物または該植物
   の組織細胞から誘導したカルスを培地により培養してヒ
   ノキチオールを得ることを特徴とするヒノキチオールの
   生産方法。