JPH0394685A - Dna sequence coding aspartic acid recemase - Google Patents
Dna sequence coding aspartic acid recemaseInfo
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、アスパラギン酸ラセマーゼ産生菌より産生さ
れるアスパラギン酸ラセマーゼ（以下ＡＳＰＲと記す）
をコードするＤＮＡ配列に関するものである。Detailed Description of the Invention (Industrial Application Field) The present invention relates to aspartate racemase (hereinafter referred to as ASPR) produced by aspartate racemase-producing bacteria.
It relates to a DNA sequence encoding.
（従来技術）
従来ＡＳＰＲは、ストレブトコッ力ス フエー力リス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ％ＡＴ
ＣＣ９７９０）より部分精製されている（Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．，２４７．５１０３（１９７２））ほか、
ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｐ
．） 、ストレブトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ Ｓｐ．） ベデイオコツカス属（Ｐｅｄｉｏ
ｃｏｃｃｕｓ Ｓｐ．） ロイコノストック属（ｌｅ
ｕｃｏｎｏｓｔｏｃ Ｓｐ．） ｓ ビフイドバクテリ
ウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｓｐ．）等
に属する微生物より産生されるものが知られているが、
ＤＮＡ配列が解析された例は報告されていない。(Prior art) Conventional ASPR is
Streptococcus faecalis%AT
CC9790) is partially purified from (J. Biol
．． Chem. , 247.5103 (1972)) et al.
Lactobacillus Sp.
．． ), Streptococcus sp.
cus Sp. ) Pediococcus spp.
coccus Sp. ) Leuconostoc (le
uconostoc Sp. ) s It is known that these are produced by microorganisms belonging to the genus Bifidobacterium (Bifidobacterium Sp.), etc.
No cases have been reported in which the DNA sequence has been analyzed.
（本発明が解決しようとする問題点）
ＡＳＰＲは、アスパラギン酸のラセミ化を行なうために
必要な酵素であるが、菌体内に少量しか存在しないため
、これまで利用された事が無かった。そこで、遺伝子操
作技術を適用する事によりＡＳＰＲを産生ずる事が考え
られるが、効率良＜ＡＳＰＲを産生ずるためには、ＡＳ
ＰＲをコードするＤＮＡ配列の解析が不可欠である。(Problems to be Solved by the Present Invention) ASPR is an enzyme necessary for racemizing aspartic acid, but it has not been used until now because it exists in only a small amount within bacterial cells. Therefore, it is possible to produce ASPR by applying genetic engineering technology, but in order to produce ASPR efficiently, it is necessary to
Analysis of the DNA sequence encoding PR is essential.
本発明者らは、ＡＳＰＲをコードするＤＮＩＡを含有す
るブラスミドにより形質転換された細菌からブラスミド
を単離し、その中のＡＳＰＲをコードするＤＮＡ断片の
塩基配列を決定する事に成功し、本発明に至った。The present inventors isolated a plasmid from a bacterium transformed with a plasmid containing DNA encoding ASPR, and succeeded in determining the nucleotide sequence of a DNA fragment encoding ASPR contained therein. It's arrived.
（問題を解決するための手段）
即ち、本発明はＡＳＰＲ産生菌により産生されるＡＳＰ
ＲをコードするＤＮＡ配列である。(Means for Solving the Problems) That is, the present invention solves the problem by using ASP produced by ASPR-producing bacteria.
This is a DNA sequence encoding R.
本発明のＤＮＡ配列の決定は次の方法によって行なう事
が出来る。The DNA sequence of the present invention can be determined by the following method.
（１）ブローブの作成
ＡＳＰＲ産生菌を培養し、その抽出液からＡＳＰＲを精
製する。精製したＡＳＰＲのＮ末端のアミノ酸配列を決
定し、それに対応するＤＮＡを合成する。(1) Preparation of probe ASPR-producing bacteria are cultured, and ASPR is purified from the extract. The N-terminal amino acid sequence of purified ASPR is determined, and the corresponding DNA is synthesized.
（２）ＡＳＰＲ産生菌由来のＡＳＰＲをコードする遺伝
子のクローニンング
ＡＳＰＲ生産菌を培養し、菌体を回収後、サイトウーミ
ウラ（Ｓａｉｔｏ−Ｍｉｕｒａ）法（Ｂｉｏｃｈｉｍ．
Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ， ７２， ６１９ （１
９６３） ）などにより染色体ＤＮＡを単離する。この
染色体ＤＮＡを制限酵素で消化し、この断片と、ベクタ
ーの役割を有するプラスミドを制限酵素で消化したもの
をリガーゼにより連結する。この連結したＤＮＡでマン
デルーヒガ（Ｍａｎｄｅｌ−Ｈｉｇａ）の方法（Ｊ．Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏ１．，５３，１５９（１９７０））などに
より宿主となりつる細菌を形質転換する。得られた形質
転換体から、先に合成したＤＮＡをプローブとしてコロ
ニーパイプリダイゼイション法（ Ｇｅｎｅ， １０．
６３（ｌ９８０））により、ＡＳＰＲ遺伝子を有する
株を選択する。この株からエイチ．シーバーンボイン
アンド ジェー．ドーリー（１． Ｃ． １３ｉｒｎｂ
ｏｉｎａｎｄ Ｊ．Ｄｏｌｙ）の方法（Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７． １５１３（１９
７９））などによりＡＳＰＲをコードする遺伝子を含有
するブラスミド（以下プラスミドＡとする）を単離する
。(2) Cloning of a gene encoding ASPR derived from an ASPR-producing bacterium After culturing the ASPR-producing bacterium and collecting the bacterial cells, the Saito-Miura method (Biochim.
Biophys. Acta, 72, 619 (1
Chromosomal DNA is isolated by methods such as 963). This chromosomal DNA is digested with restriction enzymes, and this fragment and a plasmid that functions as a vector that has been digested with restriction enzymes are ligated using ligase. Using this ligated DNA, Mandel-Higa's method (J.M.
ol. Bio1. , 53, 159 (1970)), etc., to transform the host vine bacteria. From the obtained transformant, the colony piperidization method (Gene, 10.
63 (l980)) to select a strain containing the ASPR gene. H from this stock. Seaburn Boyne
And J. Dolly (1. C. 13irnb
oinand J. Doly's method (Nucleic
Acid Research, 7. 1513 (19
A plasmid (hereinafter referred to as plasmid A) containing a gene encoding ASPR is isolated by methods such as 79).
（３）ＡＳＰＲをコードする遺伝子の塩基配列の決定
ブラスミドＡのＡＳＰＲをコードするＤＮＡ断片の全塩
基配列をサンガー（ Ｓａｎｇｅｒ）ジデオキシ法（Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ，２１４．１２０５（１９８１））などに
より決定する。(3) Determination of the nucleotide sequence of the gene encoding ASPR The entire nucleotide sequence of the DNA fragment encoding ASPR of plasmid A was determined using the Sanger dideoxy method (S
science, 214.1205 (1981)).
このようにして決定された塩基配列は、その塩基配列か
ら推定されるアミノ酸配列及びアミノ酸組成を、精製さ
れたＡＳＰＨのそれと比較することにより、同定するこ
とができる。The base sequence determined in this manner can be identified by comparing the amino acid sequence and amino acid composition deduced from the base sequence with those of purified ASPH.
また。本発明のＡＳＰＲをコードするＤＮＡ配列を含む
プラスミドを生産効率のよい宿主として適した細菌に組
込むことによってＡＳＰＲを生産する事が出来る。Also. ASPR can be produced by integrating a plasmid containing a DNA sequence encoding the ASPR of the present invention into a bacterium suitable as a host with high production efficiency.
本発明においてクローニンングに用いられる宿主として
は、エシエリシア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属細菌、
例えばエシェリシア コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃ
ｏｌｔ，以下Ｅ．ｃｏｌｉと略す） ＨＢＩＯＩ，Ｅ．
ｃｏｌｉＮＭ５２２等やバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）
属細菌、例えばバチルス サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）が挙げられる。In the present invention, the hosts used for cloning include bacteria of the genus Escherichia,
For example, Escherichia coli (Escherichia coli)
olt, hereinafter referred to as E. coli) HBOI, E.
coli NM522 etc. and Bacillus
Bacteria of the genus Bacillus, such as Bacillus subtilis.
S subtillis).
ベクターの役割をするブラスミドとしては、ｐＢＲ３２
２， ｐＵｃ１ｇ， ｐＴＺ１８， ｐＵＢ１１０，
ｐＨＳＧ２９８等が挙げられるが宿主との組み合わせに
よって適宜選択することができる。また、必要に応じて
、クローニング、サブクローニングでの宿主一ベクター
系を変えてもよい。As a plasmid that acts as a vector, pBR32
2, pUc1g, pTZ18, pUB110,
Examples include pHSG298, which can be appropriately selected depending on the combination with the host. Furthermore, the host-vector system used in cloning and subcloning may be changed as necessary.
リガーゼは、例えばＴ４リガーゼが用いられる。次に実
施例に基ずいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこ
れに限定されるものではない。For example, T4 ligase is used as the ligase. Next, the present invention will be explained in detail based on Examples, but the present invention is not limited thereto.
〈実施例〉
（１）ブローブの作成
ストレブトコッカス サーモフィラスＩＡＮ１００６４
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌ
ｌｕｓ）を含む３００ｌの培地（酵母エキス５．５ｇ、
ポリベブトン１０ｇ、ブドウ糖１０ｇ，酢酸ナトリウ．
４１０ｇを１１に含有）で３７℃、２０時間培養後、菌
体を得た。得られた菌体から岡田らの方法により５０μ
ｇの精製ＡＳＰＲ標品を得た。そのＮ末端アミノ酸配列
を気相プロテインシークエンサー（モデル４７０Ａ，Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ， Ｉｎｃ．）を
用いた自動エドマン分解法により決定した。エドマン分
解により生じたチオヒダントイン化合物はＭｉｃｒｏ
ｐａｋ ＳＰＣ １８−３カラム（ Ｖａｒｉａｎ Ａ
ｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｉｎｃ）を用いたＨＰＬＣによ
り分析した。<Example> (1) Preparation of probe Streptococcus thermophilus IAN10064
(Streptococcus thermophile
300 l of medium (5.5 g of yeast extract,
Polybebutone 10g, glucose 10g, sodium acetate.
After culturing at 37° C. for 20 hours at 410 g (containing 11), bacterial cells were obtained. From the obtained bacterial cells, 50μ
A purified ASPR specimen of g was obtained. The N-terminal amino acid sequence was analyzed using a gas phase protein sequencer (model 470A, A).
pplied Biosystems, Inc. ) was determined by the automated Edman decomposition method. Thiohydantoin compounds produced by Edman degradation are Micro
pak SPC 18-3 column (Varian A
ssociates, Inc.).
得られたアミノ酸配列に対応する配列を有するオリゴヌ
クレオチドを自動ＤＮＡ合成装置（Ｍｏｄｅ１３８１Ａ
，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ， Ｉｎｃ．
）を用いて合成した。即ち、次にような配列をもつオリ
ゴヌクレオチドである。An oligonucleotide having a sequence corresponding to the obtained amino acid sequence was synthesized using an automatic DNA synthesizer (Model 1381A).
, Applied Biosystems, Inc.
). That is, it is an oligonucleotide having the following sequence.
５゜ＡＴＧＧＡ （ＡＧ）ＡＡ （ＴＣ）ＴＴ （ＴＣ
）ＴＴ （ＴＣ）Ｉ Ｉ ＩＡＴＩ ＩＴＩＧＧＩ Ｉ
Ｉ Ｉ ＡＴＧＧＧ Ｉ ＡＣ Ｉ ＡＴＧＧＣ Ｉ
ＡＣ Ｉ ＧＡ （ＡＧ）Ｉ Ｉ ＩＴＴ３゜
Ａはアデニン、Ｇはグアニン、Ｃはシトシン、Ｔはチミ
ン、■はイノシンである。また、括弧でくくられたもの
は２つの塩基が混ざったものであることを示す。5゜ATGGA (AG)AA (TC)TT (TC
)TT (TC)I I IATI ITIGGI I
I I ATGGG I AC I ATGGC I
A is adenine, G is guanine, C is cytosine, T is thymine, and ■ is inosine. Also, something enclosed in parentheses indicates a mixture of two bases.
（２）ストレブトコッカス サーモフィラス（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｌｕｓ）由
来のＡＳＰＲをコードする遺伝子のクローニングストレ
ブトコッカス サーモフィラス菌体よリバイオキミカ
エト バイオフィジカ アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ） ７２， ６１９ （１９
６３）に記載されているサイトウーミウラ（Ｓａｉｔｏ
−Ｍｉｕｒａ）法に従って染色体ＤＮＡを得る。このＤ
ＮＡなＨｉｎｄＩＩＩ （宝酒造製）により、１−３
時間消化し１−１０ｋｄのＤＮＡ断片を得た。又、ブラ
スミドｐＵｃｌ９ ３ ｕｇをＨｉｎｄＩＩＩで完全消
化し、これを上記染色体ＤＮＡのＨｉｎｄＩＩＩ断片と
Ｔ４リガーゼ（宝酒造製）を用いて１３℃でオーバーナ
イト反応により連結し、この反応液をエタノール沈殿に
より濃縮した。濃縮後、ジャーナル オブ モレキュラ
ー バイオロジ−（Ｊ．Ｍｏ１．８ｉｏ１．）５３，１
５，１５９（１９７０）に記載されているマンデルーヒ
ガ（Ｍａｎｄｅｌ−Ｈｉｇａ）の方法により連結された
ＤＮＡを含む濃縮液で、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢＩＯＩを形
質転換した。(2) Streptococcus thermophilus (Stre
Cloning of the gene encoding ASPR from Streptococcus thermophilus
Biochim. B
iophys. Acta) 72, 619 (19
Saito Umiura described in 63)
- Obtain chromosomal DNA according to the Miura method. This D
1-3 by NA HindIII (manufactured by Takara Shuzo)
After time digestion, a 1-10 kd DNA fragment was obtained. In addition, 3 ug of plasmid pUcl9 was completely digested with HindIII, and this was ligated with the HindIII fragment of the chromosomal DNA described above using T4 ligase (manufactured by Takara Shuzo) by an overnight reaction at 13°C, and this reaction solution was concentrated by ethanol precipitation. . After concentration, Journal of Molecular Biology (J.Mo1.8io1.) 53,1
A concentrated solution containing DNA ligated by the method of Mandel-Higa described in E. 5, 159 (1970). E. coli HBIOI was transformed.
この大腸菌ＨＢＩＯＩを用いたＤＮＡライブラリーをプ
レート上に約１ｘｌ０４クローン／プレートとなるよう
に５枚まき、このプレートをマスタープレートとしてニ
トロセルローのレプリカフィルター（ミリボア社、ＨＡ
ＴＦフィルター）を作製した。このレプリカフィルター
上の大腸菌を０．５Ｍ ＮａＯＨ溶液でとかし露出変性
したプラスミドＤＮＡをフィルター上に乾燥固定した（
Ｇｒｕｎｓｔｅｉｎ，Ｍ． ＆ Ｈｏｇｎｅｓｓ，Ｄ．
Ｓ． ブロシーヂングス オブ ナショナル アカデ
ミー オブ サイエンス（ Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ） ７２．３６９１ （１
９７２））． 実施例ｌの（１）で作製したオリゴヌ
クレオチドブローブの５゜末端をＴ４ボリヌクレオチド
キナーゼ（宝酒造製）、［３２γ］ ＡＴＰを用いて３
２Ｐで標識した。This DNA library using E. coli HBIOI was spread on five plates at approximately 1 x 104 clones/plate, and this plate was used as a master plate using a nitrocellulose replica filter (Millibore, HA).
TF filter) was produced. The E. coli on this replica filter was dissolved with a 0.5M NaOH solution, and the denatured plasmid DNA was dried and fixed on the filter (
Grunstein, M. & Hogness, D.
S. Proceedings of the National Academy of Sciences (Proc. Natl.A)
cad. Sci. USA) 72.3691 (1
972)). The 5° end of the oligonucleotide probe prepared in Example 1 (1) was isolated using T4 polynucleotide kinase (manufactured by Takara Shuzo) and [32γ]ATP.
Labeled with 2P.
標識したブローブをＤＮＡを固定したレプリカフィルタ
ーに会合させた．会合反応は１０μＣｉの標識ブローブ
を含む２ Ｘ Ｓ Ｓ Ｃ （０．０６Ｍ ＮａＣｌ，
０．００６Ｍ Ｓｏｄｉｕｍ ｃｌｔｒａｔｅ），２Ｘ
Ｄｅｎｈａｒｔ’ｓ，４０μｇ／ｍｌ 変性サケ精子
ＤＮＡ溶液１０ｍｌ中で１６時間行ない．、反応後、フ
ィルターを２ＸＳＳＣで室温で３０分ずつ３回洗浄した
（Ｔ． Ｍａｎｉａｔｉｓら、モレキュラー クローニ
ング（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ） Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
，ｐ３０９， １９８２）。 洗浄したフィルターより
オートラジオグラムをとり、２枚のレプリカフィルター
を重ね合わせることによりＡＳＰＨの遺伝子を含む菌を
探した。この方法により５ ｘ １０４ｃｏｌｏｎｉｅ
ｓより１株Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢＩＯＩ／ｐＡＧ２を得た
。The labeled probe was associated with a DNA-immobilized replica filter. The association reaction contained 10 μCi of labeled probe in 2×SSC (0.06M NaCl,
0.006M Sodium cltrate), 2X
Denhart's, 40 μg/ml denatured salmon sperm DNA solution (10 ml) for 16 hours. After the reaction, the filter was washed three times with 2X SSC for 30 minutes each at room temperature (T. Maniatis et al., Molecular Cloning Cold
Spring Harbor Laboratory
, p. 309, 1982). An autoradiogram was taken from the washed filter, and bacteria containing the ASPH gene were searched for by overlapping the two replica filters. By this method 5 x 104 colonies
1 strain E. from s. E. coli HBIOI/pAG2 was obtained.
この菌株よりエイチ シー バーンボインアンド ジェ
ー ドーリー（Ｈ．Ｃ．Ｂｉｒｎｂｏｉｎ ａｎｄＪ．
Ｄｏｌｙ）の方法（ヌクレイック アシッド リサー
チ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）７
．１５１３（１９７９））などによりＡＳＰＲをコード
する遺伝子有するブラスミド（ｐＡＧ２）を抽出精製し
た。From this strain, H.C. Birnboin and J.
Doly's method (Nucleic Acid Research) 7
．． A plasmid (pAG2) containing a gene encoding ASPR was extracted and purified using methods such as 1513 (1979).
（３）ＡＳＰＲをコードする遺伝子の塩基配列の決定
ｐＡＧ２の塩基配列をサイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２
１４．１２０５（１９８１）に記載されているサンガー
（Ｓａｎｇｅｒ）のジデオキシ法により全塩基配列を決
定した。(3) Determination of the base sequence of the gene encoding ASPR The base sequence of pAG2 was determined using Science 2.
The entire base sequence was determined by Sanger's dideoxy method described in 14.1205 (1981).
その結果、決定された全塩基配列のうち、ＡＳＰＲをコ
ードするＤＮＡ配列は後述表２に示す通りであった。As a result, among all the base sequences determined, the DNA sequence encoding ASPR was as shown in Table 2 below.
このうち１〜３３７番目の塩基配列は５゛−ノンコーデ
ィング部分であり、プロモーター領域を含有している。Among these, the nucleotide sequence 1 to 337 is a 5'-non-coding portion and contains a promoter region.
２６７〜２７２番目のＴＴＧＡＴＧは、ＲＮＡボリメラ
ーゼの認識部位と考えられる″−３５塩基対部位”であ
る。２９１〜２９６番目のＴＡＴＡＴＴはＲＮＡボリメ
ラーゼの結合部位と考えられる“−１０塩基対部位”
（ブリブノウ配列）である。３２５〜３３０番目のＡＧ
ＡＡＧＧは、シャインーダルガーノ配列（ＳＤ配列）で
ある。３３８〜１０６９番目の塩基配列は、構造遺伝子
部分であり、３３８〜３４０番目のＡＴＧは翻訳開始コ
ドンである。TTGATG at positions 267 to 272 is a "-35 base pair site" that is considered to be a recognition site for RNA polymerase. TATATT at positions 291 to 296 is a “-10 base pair site” that is considered to be the binding site for RNA polymerase.
(Bribnow sequence). 325th to 330th AG
AAGG is Shine-Dalgarno sequence (SD sequence). The 338th to 1069th base sequence is a structural gene part, and the 338th to 340th ATG is a translation initiation codon.
１０７０〜１１２６番目の塩基配列は３゜−ノンコーデ
ィングであり、１０７０〜１０７２番目のＴＡＧは翻訳
終止コドンである。The 1070th to 1126th base sequence is 3°-noncoding, and the 1070th to 1072nd TAG is a translation stop codon.
（４）ＡｓｐＲをコードする遺伝子の同定このようにし
て決定された塩基配列よりすいていされるアミノ酸配列
は後述表３に示す通りである。(4) Identification of the gene encoding AspR The amino acid sequences determined from the base sequences determined in this way are shown in Table 3 below.
この推定されるアミノ酸配列のＮ末端領域構造はＭｅｔ
−Ｇｌ ｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｉ １
ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ
−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ
でありストレブトコッカス サーモフィラスより精製さ
れたＡｓｐＲの自動エドマン分解により決定されたＮ末
端アミノ酸配列
Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｉ
１ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｍ ｅ ｔ − Ｇ
１ ｙ − Ｔ ｈ ｒ − Ｍ ｅ ｔ − Ａ
ｌ ａ −Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ
と完全に一致した。The structure of the N-terminal region of this deduced amino acid sequence is Met
-Glu-Asn-Phe-Phe-Ser-I 1
e-Leu-Gly-Gly-Met-Gly-Thr
-Met-Ala-Thr-Glu-Ser-Phe and the N-terminal amino acid sequence determined by automated Edman degradation of AspR purified from Streptococcus thermophilus Met-Glu-Asn-Phe-Phe-Ser-I
1e-Leu-Gly-Gly-Met-G
1 y - T h - M e t - A
It was completely consistent with l a -Thr-Glu-Ser-Phe.
また、決定したＤＮＡ配列から推定したＡｓｐＲと、ス
トレブトコッカス サーモフィラスから推定したＡｓｐ
Ｒのアミノ酸組成を比較すると、表１に示すとおりよく
一致していた。In addition, AspR estimated from the determined DNA sequence and Asp estimated from Streptococcus thermophilus
A comparison of the amino acid compositions of R showed good agreement as shown in Table 1.
表１
ＡＳＰＲのアミノ酸組成（サブユニットあたりの残基数
）表２
ＡＴｒＴＧＧＧＧＣＡ ＡＡＴＡ丁ＣＣＴＡＡ Ａ
ＡＧＡＴＡＴＴｒＧ ＧＴＣＣＡＡＡ１ＵＴ Ｔ丁
丁丁ＧＣアミノ酸配列
Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｉ
１ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＧｌｙＭｅｔ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ
−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−
ＶａｌＡｒｇ−Ｌｅｃ−Ｉ１ｅ−Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ａｒ
ｇ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−＾１ａ−ＴｈｒＬｙｓ−Ａｓｐ−
Ｇｉｎ−Ｇｓｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｖ
ａｌ−ＬｅｕＰｈｅ−Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ａｌｎ−Ｔｈｒ
−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−ＴｈｒＡｌａ−Ｔ
ｙｒ−Ｉ１ｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌｕ−ＡｓｎＰｒａ−Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−＾ｓｐ−Ａｓｐ−Ｉ１ｅ−ＧｌｕＬｙ
ｓ−Ｇｌｍ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌａｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ
−Ａｓｎ−Ｐｈｅ− １ １ｅＶａｌ−Ｌｅｎ−Ｔｈｒ
−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−
ＰｈｅＰｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌ
ａ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ− Ｉ ｌｅＰｒｏ−Ｉ１
ｅ−Ｌｅｕ−｝１ｉｓ−Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌ
ｕ−Ａｌａ−ＡｌａＡｓｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−
Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−ＧｌｙＡｒ
ｇ−Ｖａｌ−Ａｌａ− １ １ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔ
ｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−ＳｅｒＭｅｔ−１ｙｓ−Ａｌａ
−Ｇｌｙ−１１ｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−
ＶａｌＬｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌ
ｕ−Ｔｈｒ−Ｍａｌ−Ｉ１ｅ−ＰｒｏＡｓｐ−Ｔｈｒ−
Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｉ１ｅ−＾
ｓｎ−ＴｙｒＬｅｕ−Ｉ１ｅ−Ｔｙｒ−｝１ｉｕ−Ｇｌ
ｕ−Ｉ１ｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｓｅｌ−ＡｓｐＨｉｓ−
Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｉｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔ
ｙｒ−Ｇｌｕ−Ｉ１ｅＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ
−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｎ−Ａｓｎ−ＣｙｓＧ
ｌｕ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｉ１ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙ
ｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−ＬｅｕＳｅｒ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−
Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａ
ｓｎＨｉｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｖｒｏ−Ｉ１ｅ−Ａｓｐ
−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｓｅｒ−１１ｅＬｅｕ−Ａｉａ−Ａ
ｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ− Ｉ ｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−
Ａｌａ−Ｌｅｕ＾１ａ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｇｌ
ａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−ＶａｌＳｅｒ−
Ｇｌｕ−ＬｙｓTable 1 Amino acid composition of ASPR (number of residues per subunit) Table 2 ATrTGGGGCA AATA Ding CCTAA A
AGATATTTrG GTCCAAA1UT T Ding Ding GC Amino acid sequence Met-Glu-Asn-Phe-Phe-Ser-I
1e-Leu-Gly-GlyMet-Glu-Thr
-Met-Ala-Thr-Glu-Ser-Phe-
ValArg-Lec-I1e-Asn-His-Ar
g-Thr-Lys-^1a-ThrLys-Asp-
Gin-Gsu-Tyr-Leu-Asn-Tyr-V
al-LeuPhe-Asn-His-Aln-Thr
-Val-Pro-Asp-Arg-ThrAla-T
yr-I1e-Leu-Asp-Arg-Ser-Gl
u-Glu-AsnPra-Met-Pro-Phe-
Leu-Leu-^sp-Asp-I1e-GluLy
s-Glm-Asn-Leu-Lau-Arg-Pro
-Asn-Phe- 1 1eVal-Len-Thr
-Cys-Asn-Thr-Ala-His-Tyr-
PhePhe-Glu-Glu-Leu-Gln-Al
a-Ala-Thr-Asp-IlePro-I1
e-Leu-}1is-Met-Pro-Arg-Gl
u-Ala-AlaAsn-Glu-Leu-Val-
Arg-Gln-His-Thr-Thr-GlyAr
g-Val-Ala- 1 1e-Leu-Gly-T
hr-Glu-Gly-SerMet-1ys-Ala
-Gly-11e-Tyr-Glu-Arg-Gly-
ValLys-Asn-Leu-Gly-Phe-Gl
u-Thr-Mal-I1e-ProAsp-Thr-
Ala-Leu-Gin-Glu-Lys-I1e-^
sn-TyrLeu-I1e-Tyr-}1iu-Gl
u-I1e-Lys-Glu-Sel-AspHis-
Leu-Asn-Gin-Gin-Glu-Leu-T
yr-Glu-I1eLeu-Glu-Glu-Ala
-Val-Glu-Arg-Len-Asn-CysG
lu-Lys-Val-I1e-Leu-Gly-Cy
s-Thr-Glu-LeuSer-Leu-Met-
Asn-Glu-Phe-Ala-Glu-Asp-A
snHis-Tyr-Pro-Vro-I1e-Asp
-Ala-Gin-Ser-11eLeu-Aia-A
rg-Arg-Thr- I le-Glu-Arg-
Ala-Leu^1a-Glu-Arg-Asn-Gl
a-Ala-Leu-Asp-Thr-ValSer-
Glu-Lys
Claims (4)
るアスパラギン酸ラセマーゼをコードするＤＮＡ配列(1) DNA sequence encoding aspartate racemase produced by aspartate racemase-producing bacteria
ッカス属細菌である特許請求の範囲第１項記載のＤＮＡ
配列(2) The DNA according to claim 1, wherein the aspartate racemase-producing bacterium is a Streptococcus bacterium.
array
で示されるものである特許請求の範囲第１項記載のＤＮ
Ａ配列(3) DN according to claim 1, wherein the aspartate racemase is shown by the amino acid sequence shown in Table 3.
A array
項記載のＤＮＡ配列(4) Claim 1 indicated by the DNA sequence in Table 2
DNA sequence described in section
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23139489A JP2947829B2 (en) | 1989-09-08 | 1989-09-08 | DNA encoding aspartate racemase |
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|---|---|---|---|
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Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0394685A true JPH0394685A (en) | 1991-04-19 |
| JP2947829B2 JP2947829B2 (en) | 1999-09-13 |
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|---|---|---|---|
| JP23139489A Expired - Fee Related JP2947829B2 (en) | 1989-09-08 | 1989-09-08 | DNA encoding aspartate racemase |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2947829B2 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5337608A (en) * | 1992-12-18 | 1994-08-16 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Drive roller torque reference cartridge |
| US5346155A (en) * | 1992-04-30 | 1994-09-13 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Belt driven cartridge with magnetic brake assembly |
| US5516055A (en) * | 1994-03-28 | 1996-05-14 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Tape tension enhancement for belt driven tape cartridge corner rollers |
-
1989
- 1989-09-08 JP JP23139489A patent/JP2947829B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5346155A (en) * | 1992-04-30 | 1994-09-13 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Belt driven cartridge with magnetic brake assembly |
| US5337608A (en) * | 1992-12-18 | 1994-08-16 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Drive roller torque reference cartridge |
| US5516055A (en) * | 1994-03-28 | 1996-05-14 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Tape tension enhancement for belt driven tape cartridge corner rollers |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2947829B2 (en) | 1999-09-13 |
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