JPH03503538A - 抗ウイルス薬およびａｚｔの抗ウイルス活性を高める方法 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 抗ウィルス薬およびＡＺＴの抗ウィルス活性を高める方法産更２１員 この発明は、抗ウイルス性プリンヌクレオシド、プリンヌクレオシド類縁体およ び両方のプロドラッグに関するものである。また、この発明は、ＡＺＴを上記プ リン化合物と組み合わせて投与することにより、化合物３°アジド−３゛デオキ シ−チミジン（ｒＡＺＴＪ）の抗ウィルス活性を高める方法に関するものである 。

ＡＺＴは、レトロウィルスが原因であると考えられているある種のウィルス感染 症の処置において有用な抗ウィルス剤として有望であることを示した。特に、Ａ ＺＴは、ひと免疫不全ウィルスに対して有望であることを示した。

現在、ＡＺＴは、エイズ関連コンプレックスの患者におけるエイズ（ＡＩＤＳ、 後天性免疫不全症候群）の処置に使用され、また最近ニューモサイティス（ｐｎ ｅｕａ＋ｏｃｙｔｉｓ）カリニ性肺炎の症状が発現したエイズ患者に対して使用 されている。それは、ひと血液末梢単核白血球におけるひと免疫不全ウィルス（ ｒＨＩＶＪ）抗原のレベルを下げるのに有効であると思われる。チャイソン等、 「二ニー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシンＪ、３１５巻、１６１ ０−１６１１頁（１９８６）。

ＡＺＴは、３°−ヒドロキシ基がアジド基により置換されているチミジン類縁体 である。細胞に入ると、ＡＺＴは、チミジンを燐酸化する同じ細胞性キナーゼに よりＡＺＴモノホスフェートに燐酸化される。次に、ＡＺＴモノホスフェートは 、他の細胞性キナーゼによりジホスフェートおよびトリホスフェート形態に燐酸 化される。

ＡＺＴ）ジホスフェートは、レトロウィルスＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼ（ または「逆転写酵素」）を妨げる、すなわちウィルスの複製を阻止すると言われ ている。またインビトロ試験は、ウィルスが細胞に入り、複製を開始した後、Ａ ＺＴトリホスフェートがウィルス逆転写酵素によりＨＩＶのＤＮＡコピー中へ組 み込まれる機構を支持すると言われている。その結果、ＡＺＴは３“位において 追加のヌクレオチドを受は入れられないことから、ＡＺＴ）ジホスフェートを組 み込むと増大中のＤＮＡ鎖は未熟な状態で終結される。ＡＺＴは、ウィルス逆転 写酵素に対してひとＤＮＡポリメラーゼよりも幾分大きな親和力を有する。すな わち、細胞複製を遮断せずにＨ！■複製を緩慢にすることができる。

チミジンキナーゼによるＡＺＴからＡＺＴモノホスフェートへの燐酸化は、この プロセスにおける律速段階として示唆されている。

リッチマンおよびカーリン、「ジャーナル・オブ・エクスベリメンタル・メディ シン」、１６６巻、１１４４−１１４９頁（１９８７年ｌＯ月）。リッチマンお よびカーリンは、ＡＺＴが、エイズウィルス逆転写酵素の阻止に充分な高い濃度 では正常なひとの末梢血液マクロファージにおいてトリホスフェート形態に燐酸 化され得ないと述べた。彼等は、ＡＺＴの低レベルの組み込みが、リンパ芽球ラ インＯＥＭと比べて４倍低いレベルの酵素チミジンキナーゼと関連していること を示唆した。チミジンキナーゼのこの低い活性は、ＣＥＮ細胞と比べてＡＺＴヌ クレオチドの９倍低い蓄積と関連し、またＡＺＴヌクレオチドの９倍低いレベル は、マクロファージにおける抗ウィルス活性の１００−１０００倍の低下と関連 することが報告された。

いかに多くのＡＺＴ）ジホスフェートが新たに形成されたウィルス核酸中へ組み 込まれるか、および／またはいかに有効に逆転写酵素が阻止されるかに対して、 少なくとも２つの重要なパラメーターが影響を与えることが示唆されている。す なわち、（１）存在するＡＺＴ）ジホスフェートの量および（２）存在するチミ ジントリホスフェート（ｒＴ　Ｔ　Ｐ　Ｊ）の量。ＡＺＴ）−ジホスフェートは 、新たに合成された核酸への組み込みに関してＴＴＰときっ抗することが信じら れている。すなわち、リッチマンおよびカーリンにより報告されたＡＺＴの有効 性の低下の一部分は、燐酸化以外の因子に関連した可能性がある。例えば、マク ロファージは、ＯＥＭ細胞よりも本質的に高いＴＴＰプールを有し得る。しかし ながら、ＴＴＰプールは測定されなかった。ＡＺＴ組み込みに関するパラメータ ーとしての存在するＴＴＰの量の重要性は、ＡＺＴ存在下でのＨＩＶ複製に対す る薬剤リバビリンの効果により支持される。ボート等、「サイエンス」、２３５ 巻、１３７６−１３７９頁（１９８７年３月）は、リバビリンが、末梢血液リン パ球およびＨ９細胞の両方においてエイズウィルスに対するＡＺＴの有効性を低 下させること、およびリバとリンが、エイズ感染および非感染細胞の両方におい て約１０の係数でモノ−、ジーおよびトリホスフェート形態へのＡＺＴの燐酸化 を減少させることを報告した。著者等は、リバビリンが、酵素チミジンキナーゼ のフィードバック阻害をもたらすＴＴＰプールの増加を通じてＡＺＴトリホスフ ェート形成を減少させる、すなわちその酵素によりＡＺＴからＡＺＴ）ジホスフ ェートへの燐酸化を低下させるか、またはＡＺＴトリホスフェートとＨ７Ｖ逆転 写酵素の相互作用を減少させることにより作用し得ることを提案した。

ＡＺＴは使用はある種の欠点を有する。例えば、ＡＺＴが長い時間にわたって耐 容性を示し得るか否かは知られていない。最近の臨床経験はまだある程度に制限 されており、慢性的ＡＺＴ処置の長期効果はまだ評価されていない。他方、ＡＺ Ｔは、骨髄毒性を含め多くの副作用を有することが知られている。すなわち、最 も一般的な副作用は大赤血球性貧血症である。これは輸血を必要とする程度に重 症であり得、ＣＤ４（Ｔ４）リンパ球数が２００　／　ｘＮ以下である患者のＩ ＩＰ〜４５％に生じることが報告されている。か粒球減少症は、ＣＤ４数が≦２ ００７ｘｘ”の患者の５５％以下およびＣＤ４数が＞　２００７ｘｘ”の患者の ４０％以下において生じる（これらの患者の各々１９％および１３％はブラセボ によりか粒球減少症を示した）ことが報告されている。「フィジシャンズ・デス ク・レファレンス」、８２０頁（第４２版、１９８８年）。葉酸塩またはビタミ ンＯ１２欠乏症の患者は、ＡＺＴにより誘発される骨髄機能低下に対して高い感 受性を示し得る可能性がある。多くの場合、患者は低用量のＡＺＴに耐容性を示 し、その結果白血球数および貧血が改善され得る。また、ＡＺＴ受容者において かなり大きな割合で重い頭痛、悪心、不眠および筋肉痛が報告されている。

ＡＺＴはまた、抗菌活性を有することが示された。ＡＺＴおよび抗葉酸塩抗生物 質、すなわちスルホンアミドの両方による細菌処置での高い効果が報告されてい る。Ｅ、ウェル等、「アンティマイクロバイアル・エージェンツ・アンド・ケモ セラピー」、３１巻、２７４４頁（１９８７）。著者等は、スルホンアミドの存 在下でＡＺＴに対して観察された高い感受性の機構については考察しなかった。

しかしながら、彼等は、ＡＺＴおよびスルホンアミドの両方によるニューモサイ スティス・カリニ肺感染症患者の処置が有用と思われるという彼等の臨床観察に ついては報告した。

酵素Ｓ−アデノシルホモシスティン（ｒｓＡＨＪ）ヒドロラーゼは、Ｓ−アデノ シルホモシスティンからアデノシンおよびＬ−ホモシスティンへの可逆的加水分 解を触媒する。これらの基質の濃度がミクロモル範囲よりも高い場合、反応は合 成に有利である。ウニランド、「ファーマロジカル・レビューズ」、３４巻、２ ２３−２５３頁（１９８２）。抗ウィルス活性がＳＡＨヒドロラーゼの阻害によ ることが報告されているアデノシンの非環状および炭素環状類縁体が幾つか存在 する。デ・クラーク、「バイオケミカル・ファーマコロジー」、３６巻、２５６ ７−２５７５（１９８７）。ＳＡＨヒドロラーゼ阻害剤の中で、抗ひとレトロウ ィルスまたは抗ＨＩＶ活性を有することが報告されたものは無かった。

代謝および代謝作用を含むＡＩＣＡリボシド（５−アミノ−１−Ａ−Ｄ−リボフ ラノシル−イミダゾール−４−カルボキシアミド）の薬理学的特性は、トーマス 等により「ジャーナル・オブ・セルラー・フィジオロジー」、１０３巻、３３５ −３４頁（１９８１）に記載されている。ＡＩＣＡリボシドは、１９５０年代に スルホンアミド抗生物質の存在下で育てられた細菌の培養培地から発見された。

スルホンアミドの抗葉酸塩特性は、次に異化され、ＡＩＣＡリボシドとして排出 される細胞におけるＡＩＣＡモノホスフェートの蓄積を誘発するプリン代謝の遮 断を誘発する。チャイニーズ・ハムスター肺線維芽細胞を用いた試験の後、トー マス等は、ＡＴＣＡリボシドが、２００μＭの濃度で、ピリミジンウリジンの付 加により打ち消されるピリミジン欠乏を伴う細胞生長を阻止することを書いた。

この文献はまた、細胞生長に対するプリン・ヌクレオシド、例えばアデノシンお よびデオキシアデノシンの毒性作用に関する莫大な文献を引用している。また、 アデノシン・デアミナーゼを阻害し、アデノシンおよびデアミナーゼアデノシン の蓄積を誘発する他の化合物、例えばＥＨＮＡおよびデオキシアデノシンは、ピ リミジン飢餓を通して細胞毒性を示す。これらの他の分子は、単純なピリミジン 飢餓に加えて追加的細胞毒性作用を有する。細胞毒性免疫抑制化合物としてのア デノシンおよびデオキシアデノシンに関する試験が行なわれた。グルーバー等、 「アナルス・オブ・ザ・ニューヨーク・アカデミ−・オプＱサイエンス」、５１ 巻、３１５−３１８頁（１９８５）。

トーマス等（前出）によるＡＩＣＡリボシドに関する試験の結果、２００μＭＡ ＩＣＡリボシドでホスホリボシル−ピロホスフェート（ＰＲＰＰ）貯蔵の下降と 合同してＡＴＰおよびＧＴＰ貯蔵が拡張されるという結論が導かれた。プリン貯 蔵（ＡＴＰおよびＧＴＰ）は、５０μＭおよび２００μＭのＡＩＣＡリボシドで 約４０％拡張されたと言われ１こ。５０μＭおよび２００μＭのＡＩＣＡリボシ ドで、アデニン取り込みにより測定されたＰＲＰＰ利用能は、各々１８％および ８２％低下した。プリン貯蔵の増加およびＰＲＰＰ利用能の減少の連続した作用 の結果、酵素オロテート・ホスホリボンル・トランスフェラーゼ−オロテート・ デカルボキシラーゼ（ＯＰＲＴ−ＯＤＣ）が阻害されると考えられた。この酵素 は、オロテートをウリジン・モノホスフェートに変換する。５０μＭおよび２０ ０μＭのＡＩＣＡリボシド濃度で育てられた細胞は、ウリジンを成長培地に加え ることにより可逆性を示し、それらの細胞を囲む成長培地におけるオロテート貯 蔵の付随的増加を示す低い成長速度を呈した。トーマス等は、ＡＩＣＡリボシド が、ＡＴＰ、、ＧＴＰおよびＰＲＰＰ貯蔵に対するその作用によりピリミジン飢 餓を誘発するという結論に達した。報告された阻害作用は単にピリミジン飢餓の 結果であると思われるが、ピリミジン飢餓を誘発する他の化合物は多くの他の細 胞毒性作用を有していた。

トーマス等はまた、ＵＴＰおよびＣＴＰ貯蔵が約１０の係数により減少すると報 告した。ＴＴＰ貯蔵は測定されなかった。かなり高い用量である７００μＭのＡ ＩＣＡリボシドの場合、それ以上ＡＴＰおよびＧＴＰ貯蔵は上昇しないが、ＰＲ ＰＰ貯蔵はまだ減少していることが報告された。そのＡｌ０Ａリボシド濃度で観 察された作用を組み合わせると、細胞毒性もオロテート貯蔵も無かったが、まだ ＵＴＰおよびＣＴＰは減少していた。まだ正常な成長が行なわれていたため、オ ラテートの欠乏は補われたピリミジンこ渇を示した可能性がある。

ＡＺＴは、エイズの処置に適したものとして初めて市販された抗ウィルス剤であ るが、それは非常に高価で毒性があると認められており、頻繁な服用を必要とし 、限られた供給においてのみ利用可能である。すなわち、毒性が低くさらに容易 に利用可能な抗ウィルス剤またはＡＺＴの副作用を減らす薬剤またはその両方が 望まれており、非常に有用であることが理解される。この発明はそれらの薬剤を 提供する。

＾匪２！枚 この発明は、抗ウィルス剤としてのある種のプリン・ヌクレオシドおよびヌクレ オチドまたはそれらの類縁体またはプロドラッグの用途、さらに、上記プリン化 合物の治療有効量と組み合わせてＡＺＴを投与することを含むＡＺＴの抗ウィル ス、抗菌および抗寄生虫活性を高める方法に関するものである。好ましい抗レト ロウイルス性プリン化合物は、ＴＴＰレベルを減少させる機能を有するか、また は酵素５−アデノシル−ホモシスティン・ヒドロラーゼを阻害する機能を有する か、または両方の機能を有する化合物である。抗ウイルス性および抗レトロウイ ルス性プリン・ヌクレオシドには、ＡＩ　　ＣＡ、ＡＩＣＡリボシド、および炭 素環状ＡＩＣＡリボシドがあり、ＡＩＣＡリボシドが好ましい。好ましい抗ウイ ルス性および抗レトロウイルス性プリン・ヌクレオシド・プロドラッグには、５ −アミノ−３°−（２−メチル−１−プロポキシカルボニル）−１−β−Ｄ−リ ボフラノシル−イミダゾール−４−カルボキシアミド、５−アミノ−３°−（１ −プロポキシカルボニル）−１−β−Ｄ−リボフラノシル−イミダゾール−４− カルボキシアミドおよび２“、３′−シクロカルボナートＡＩＣＡリボシドがあ る。後者のプロドラッグはまた、何等かの類似活性を有すると思われる。

他の因子の中でも、この発明は、プリン・ヌクレオシドＡＩＣＡリボシド、ＡＩ ＣＡリボシド・プロドラッグおよびある穫のＡＩＣＡリボシドＷ４縫体が抗ウィ ルス活性を有し、モしてＡＺＴとこれらの化合物を組み合わせると、ＡＺＴの抗 ウィルス活性が高められるという発見に関するものである。ＡＺＴの抗ウィルス 作用において観察される増加には、約１０またはそれ以上の係数の範囲が含まれ る。従って、ＡＺＴを上記プリン・ヌクレオシドもしくは類縁体またはそのいず れかのプロドラッグと共に用いることにより、必要とされるＡＺＴの濃度を減ら すことができ、その結果、ＡＺＴ関連副作用および毒性、服用頻度が減らされ、 またＡＺＴ処置の費用も減らすことができる。

関連した態様において、この発明は、ウィルス、特にレトロウィルスの複製を低 減化または阻止する方法であり、治療有効量のＡＺＴを、治療有効量のプリン・ ヌクレオシドもしくは類縁体またはそのいずれかのプロドラッグと共に投与する ことを含み、逆転写酵素によるＤＮＡへのＡＺＴトリホスフェートの取り込みを 増加させる方法に関するものである。

別の態様において、この発明は、レトロウィルス、特にひとレトロウィルスの複 製を低減化または阻止する方法であり、治療有効量のＳＡＨヒドロラーゼ阻害剤 の投与を含む方法に関するものである。

ＡＩＣＡおよびＡＩＣＡリボシドは、１０μＭ程度の低い濃度であってもＳＡＨ ヒドロラーゼの強力な阻害剤であることが測定された。

上述のプリン・ヌクレオシド類縁体およびプロドラッグはまた、ＳＡＨヒドロラ ーゼを阻害する機能を有する。ＡＺＴを用いずにこれらのプリン・ヌクレオシド を投与することにより、ウィルス複製を低減化または阻止することができ、それ らは単独でエイズまたはＨＩＶ感染症患者の処置に使用され得る。

ある種の抗癌剤は、核酸への取り込みに関してＴＴＰときっ抗すると思われる。

それらの活性は、それらの燐酸化速度により制限されると考えられる。従って、 別の態様において、この発明は、ＴＴＰレベルを下げるプリン・ヌクレオシドま たは類縁体、例えばＡＩＣＡリボシドと一緒に上記薬剤を投与することにより、 上記薬剤、例えば５−フルオロウラシルおよび２°−デオキシ−５−フルオロウ リジンの活性を高める方法に関するものである。

上記用途におけるこの発明の化合物の用量は、通常、約！〜約１０００　ｍ９／ 　ｋｇ／　日、好ましくは約１０〜約３００　ｎ／ｋｖ／　日、特に約１０〜約 １００ｘ９７に９７日の範囲である。

図面の簡単な説明 第１（ａ）図。ひとマクロファージ・セルラインＵ９３７においてねずみウィル ス（ｆＭ　Ａ　Ｊ）によりパッケージされ、ラット線維芽細胞ラインに移され、 ネオマイシンで選択されたねずみベクター（ｒＢ　ＡＧＪ）を用いた、ＡＩＣＡ リボシドおよびＡＺＴの抗ウィルス作用。

ｐ値は非処理細胞と処理細胞を比較したものである。

第１（ｂ）図。ねずみヘルパー細胞および感染ライン線維芽細胞によりパッケー ジされたネオマイシン耐性遺伝子含有ベクター（ｒＮ２Ｊ）を用いた。ＡＩＣＡ リボシドおよびＡＺＴの抗ウィルス作用。ｐ値は非処理細胞と処理細胞を比較し たものである。

第２図。ＨＩＶ感染前におけるＣＥＮひとＴセルラインと（ａ）　ＡＩＣＡリボ シドおよび（ｂ）ＡＺＴとの２４時間ブレインキュベーション後のウィルス力価 （シンジチアの数）の減少。

第３図。）ＩＩＶ感染時点でＡＩＣＡリボシドをＣＥＮひとＴセルラインに加え ることによるウィルス力価（シンジチアの数）の減少。

第４図。（ａ）Ａ　Ｉ　ＣＡリボシドおよび（ｂ）Ａ　Ｚ　Ｔを用い、各々３回 反復した、ＨＩＶ感染ＣＥＮひとＴ細胞に関する３実験から平均化した対照のパ ーセントとしてのウィルス力価の減少。ｐ値は非処理細胞と処理細胞を比較した ものである。

第５図。（ａ）ＡＩＣＡリボシドおよび（ｂ）ＡＺＴと）（ＩＶ感染ひとＴセル ライン５ｕｐＴ−１との２４時間ブレインキュベーション後における対照のパー セントとしてのウィルス力価の減少。ｐ値は非処理細胞と処理細胞を比較したも のである。

第６図。ＨＩＶ感染ひとＴ−セルライン（ａ）　ＣＥ　Ｍおよび（ｂ）　Ｓ　ｕ ｐＴ−１においてＡＩＣＡリボシドと組み合わせてＡＺＴを用いることによる３ 実験から平均化した対照のパーセントとしてのウィルス力価の減少。

第７図。ＨＩＶ感染５ｕｐＴ−１細胞において（１）ＡＩＣＡリボシド、（２） ５−アミノ−３°−（２−メチル−１−プロポキシカルボニル）−１−β−Ｄ− リボフラノシル−イミダゾール−４−カルボキシアミド（または「３°−イソブ トキシカルボニルＡＩＣＡリボフラノシル」）（製剤ＡおよびＢ）および（３） ５−アミノ−３°−（１−プロポキシカルボニル）−１−β−Ｄ−リボフラノシ ル−イミダゾール−４−カルボキシアミドを用いた場合の対照のパーセントとし てのウィルス力価の減少。

第８図。ＡＺＴの存在下、（ａ）　ＯＥ　Ｍおよび（ｂ）　Ｓ　ｕｐＴ　−１セ ルラインを用いた場合のＴ−細胞成長並びに（ｃ）Ｗ　Ｉ　−Ｌ　２セルライン を用いた場合のＢ−細胞成長に対するＡＩＣＡリボシドの影響を示す成長曲線。

第９図。Ｔ−細胞成長およびＢ−細胞成長に対するＡＩＣＡリボシドの影響を示 す成長曲線。

第１０図。ＳＡＨヒドロラーゼ活性に対するインキュベージタン時間およびＡＩ ＣＡリボシド濃度の影響。

鎮 この明細書で使用されている下記の語は、特に別の意味を記載していなければ、 次の意味を有するものとする。

「アルキル」という語は、直鎖、分枝鎖状および炭素環状基を含む飽和脂肪族基 を包含する。

「アルケニル」という語は、少なくとも１個の二重結合を有する不飽和アルキル 基［例、ＣＨ３ＣＨ＝ＣＨ（Ｃ）（’）”−コを包含し、直鎖および分枝鎖状ア ルケニル基の両方を含む。

「アルキニル」という語は、少なくとも１個の三重結合を有する不飽和基［例、 ＣＨ，＝Ｃ（ＣＨ”）−］を包含し、直鎖および分枝鎖状基の両方を含む。

「アリール」という語は、少なくとも１個の芳香環を有する芳香族炭化水素残基 およびヘテロ芳香族基を包含する。

「アルキレン」という語は、ニラジカルである直鎖および分枝鎖状プロピレン（ 例、−Ｃ）（２Ｃ）（ＣＨ”−）、３−メチルベンチレン、［例、ＣＨｔ　ＣＨ ｔ　Ｃ）（ＣＨ’　ＣＨ”−コなどの基がある。

「炭化水素残基」という語は、脂肪族（アルキル、アルケニルおよびアルキニル 基並びに飽和および不飽和結合の混合を含む基を含む）、脂環式（炭素環状）、 アリール（芳香族）またはそれらの組み合わせであり得る炭素および水素から成 る有機基を包含し、直鎖、分枝鎖状もしくは環状構造またはそれらの組み合わせ を有する基、並びにハロゲン原子（複数も可）またはへテロ原子、例えば窒素、 酸素および硫黄および通常有機化合物および基に見出されるそれらの官能基（例 、アミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ラクトン基など）により置換された基 を意味し得る。

］１ 「ヒドロカルビルカルボニル」という語は、基Ｒ’Ｃ−（式中、Ｒ。

は炭化水素残基である）を包含する。

シルエステル基および炭酸エステル基の両方を含む。

「ハロ」または「ハロゲン」という語は、フッ素、塩素、臭素および］１ 「炭酸エステル」という語は、基−０ＣＯＲ’（式中、Ｒｏは炭化水素残基であ る）および上記の基を少なくとも１個有する化合物を包残基である）および上記 の基を少なくとも１個有する化合物を包含する。

「混合エステル」という語は、少なくとも１個の炭酸エステル基および少なくと も１個のアシルエステル基を有する化合物を包含する。

発明の詳細な記載 この発明は、プリン・ヌクレオシド抗ウィルス剤の用途並びにＡＺＴの抗ウィル ス、抗菌および抗寄生虫活性を高める方法、特にレトロウィルス、例えばエイズ （ＨＩＶ）ウィルスに対するＡＺＴの効力を高める方法に関するものである。こ の発明は、抗ウィルス剤、特に抗レトロウィルス剤としてのＡＩＣＡリボシド、 ＡＩＣＡリボシド・プロドラッグおよびある種のＡＩＣＡリボシド類縁体および 類縁体プロドラッグの用途を提供する。この発明はまた、ＳＡＨヒドロラーゼを 阻害し、チミジン・トリホスフェート貯蔵を減らすことによりレトロウィルス活 性を阻止または低減化する方法を提供する。

抗ウィルス剤として、またＡＺＴの抗ウィルス活性を高めるためのＡＩＣＡリボ シドを含むこれらのプリン・ヌクレオシド化合物の使用の効果はインビトロで立 証されている。これらのプリン・ヌクレオシド化合物を用いることにより、ウィ ルス、細菌および寄生虫感染症患者の処置におけるＡＺＴの活性が高められる。

これらの分子を患者に送達するために、それらは経口投与されることが最も多い ことが予想される。これらの化合物はまた、静脈内経路、直接筋肉内注射、皮下 経路、皮膚または粘膜への局所経路、直腸経路または吸入法により投与され得る 。医薬用として許容し得る組成物はよく知られている。有用なプロドラッグは、 体内への導入時に、それらの活性ＡＩＣＡリボシド形態に代謝するものである。

他のプロドラッグは、炭素環状ＡＴＣＡリボシド（Ｔ（＋／−）−５−アミノ− １−［β〜２′α、３゛α−ジヒドロキシ−４゛β−（ヒドロキシメチル）シク ロペンチル］イミダゾール−４−カルボキシアミド」）に代謝するものである。

プリン・ヌクレオシドＡＩＣＡリボシドは尿酸に代謝され得るため、この化合物 は、アロプリノールまたは尿酸合成を阻止する他の薬剤、または尿酸排せつ剤、 例えばプロベネシドと共に使用され得る。また、その代謝物がＡＩＣＡリボチド ・トランスホルミダーゼを阻害するある種の薬剤、例えばメトトレキセイトもこ の発明の化合物と共に使用され得る。それらは、内在的に合成されるＡＩＣＡリ ボチドの上昇を誘発し得る。さらに、尿酸に分解しない炭素環状ＡＩＣＡリボシ ドは、ウィルス感染性と闘うか、またはＡＺＴの活性を高めるために使用され得 る。

若干の実験により、ＡＩＣＡリボシドは、有効な抗ウィルス剤であることが証明 された。ＡＪＣＡリボシドは、ＴＴＰ貯蔵を減少さ仕る、すなわちチミジンキナ ーゼ活性を上昇させると信じられている。これはまた、逆転写酵素およびウィル ス核酸への取り込みに関してＴＴＰときっ抗するＡＺＴトリホスフェートの能力 を向上させる。ＡＩＬＡおよびＡＩＣＡリボシドはまた、Ｓ−アデノシル−ホモ システィン（「ＳＡＮ」）ヒドロラーゼ、すなわちＳＡＮをアデノシンおよびホ モシスティンに変換する酵素の非常に強力な阻害剤であることが発見された。こ の酵素の阻害によりＳＡＮの蓄積が生じ、また、Ｓ−アデノシルメチオニンｆｆ ５ＡＮＪ）のＳＡＮへの酵素的変換が阻害される。この後者の阻害は、通常ＳＡ ＮからＳＡＮへの変換を通じて生じた５°メチル化により安定化されているウィ ルスｍＲＮＡの不安定化を誘発し得る。

ＡＺＴおよびＡＩＣＡリボシドを例えば互いに組み合わせて一製剤として一緒に または別々に投与する場合、少なくとも付加的効果を有するべきである。さらに 、新たなプリン・ヌクレオシド合成中間体（プリン合成に関する最初の始動段階 の後）またはそれらのヌクレオシドまたは塩基のいずれか１つは、ＡＩＣＡリボ チドに急速に変換されると予測され得、有用である。−例は、ＳＡＩ　ＣＡ（ス クシニルアミノイミダゾールカルボキシアミド）リボチドまたはそのヌクレオシ ドまたは塩基である。他の例には、アミノイミダゾールカルボン酸リボシドがあ る。

結果が部分的に第６図に示されている後記実施例３および４に記載されている通 り、ＡＺＴと共に僅が５０μＭの濃度でＡＩＣＡリボシドを投与すると、所定量 のＡＺＴに関して劇的に抗ウィルス活性が高められることが見出された。この明 細書に記載され、請求の範囲で主張されているＡＩＣＡ、ＡＩＣＡリボシドおよ び誘導体化合物を用いることにより、ウィルス、特に）（ＩＶを含むレトロウィ ルスおよびひとレトロウィルスに対するＡＺＴの抗ウィルス活性を高めることが できる。

抗ウイルス性であると考えられているのは、ＡＺＴのトリポスフエート形態であ る。ＡＺＴは細胞に入り、トリポスフエートに燐酸化される。レトロウィルスで は、逆転写酵素の阻害に加えて、ＡＺＴトリホスフェートは、逆転写酵素により ＤＮＡに組み込まれ、鎖ターミネータ−として作用すると考えられる。次に提案 されている作用形態により拘束されるわけではないが、これらの化合物は、ウィ ルス逆転写酵素によりウィルスＤＮＡにおける取り込みに関してＴＴＰときっ抗 する場合、またさらにＳＡＮヒドロラーゼの阻害後におけるメチル化の阻止また は縮小を通して合成されたウィルス核酸を不安定化することによりＡＺＴ）リホ スフェートを助けると信じられている。他の細胞構成成分、例えば膜燐脂質およ び蛋白質の低メチル化はまた、この抗ウィルス活性に寄与し得る。

上記プリン・ヌクレオシド、例えばＡＩＣＡリボシドによる処理は、ＳＡＮヒド ロラーゼ阻害に加えて、ＴＴＰ貯蔵の減少、従ってチミジンキナーゼ活性の上昇 およびレトロウィルス逆転写酵素により新たに形成された核酸への取り込みに関 してＴＴＰときっ抗するＡＺＴ）リホスフェートの能力の増強を誘発するべきで ある。後者の作用形態に関して述べると、プリン・ヌクレオシドまたは類縁体、 例えばＡＩＣＡリボシドは、ＴＴＰ貯蔵（並びにＣＴＰおよびＵＴＰ貯蔵）を減 少させるピリミジン飢餓作用を誘発し、またＴＴＰ貯蔵の減少はチミジンキナー ゼ活性の増加と結びついていると信じられており、ＡＺＴからＡＺＴトリホスフ ェートへの燐酸化における律速段階であると仮定されている。プリン・ヌクレオ シドまたは類練体、例えばＡＩＣＡリボシドで処理すると、結果的にＴＴＰレベ ルが減少し、ＡＺＴトリホスフェートのレベルが増加し、レトロウィルス逆転写 酵素またはそれを阻害することによりさらに多くのＡＺＴ）リホスフェートがウ ィルスＤＮＡに取り込まれる、すなわち−ＡＺＴ処理に対してさらに有効な抗ウ ィルス活性が達成されるという結果を伴うと考えられる。

幾つかのレトロウィルス検定を用いることにより、抗ウィルス剤として、またＡ ＺＴに対するレトロウィルスの感受性を高める薬剤として提案されたプリン・ヌ クレオシド、例えばＡＩＣＡリボシドの作用を試験した。これらの検定は、培養 中の細胞を用いて行なわれた。実施例１において、細胞成長に対するＡＩＣＡリ ボシドおよびＡＺＴの効果を評価した。第８図で示されている通り、ＡＺＴおよ びＡＩＣＡリボシドの組み合わせは、Ｂ−細胞成長の減少を誘発せず、５００μ ＭのＡＩＣＡリボシドでのみＴ細胞成長は選択的に改変されるということが立証 された。第９図は、単独で２種のＴ−セルライン（ＣＥＮおよび５ｕｐＴ−１） およびＢ−セルライン（Ｗｌ−Ｌ２）に加えられたＡＩＣＡ−リボシドによる似 た結果を示す。

実施例２に記載されている通り、幾つかのレトロウィルス検定システムを利用し て、様々なプリンヌクレオシド化合物の抗ウィルス活性を試験した。−検定シス テムでは、選択可能なマーカー（ネオマイシン耐性遺伝子）を含む複製欠損ねず み白血病ウィルス構築物（ｒＮ２Ｊ）を使用した。Ｎ２ウィルス構築物は、パッ ケージに必要なレトロウィルス蛋白質の製造をコードする箪２のレトロウィルス 構築物を含み、従って、Ｎ２ベクターを感染性アンフォトロフィック（ａｍｐｈ ｏｔｒｏｐｈｉｃ）ねずみレトロウィルスに偽型分類（ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅ） 　Ｌ得るＮ２とも呼ばれるプロデューサーまたは「ヘルパー」セルラインに存在 する。現在ネオマイシン耐性遺伝子を含むこの感染性レトロウィルスは、プロデ ューサー・ラインから得られ、ネオマイシン耐性をもたない細胞、この場合２０ ８Ｆラツト線維芽細胞を感染させるのに使用される。

２０８Ｆ細胞を選択された抗ウイルス薬剤により処理するか、または処理しなか った。次いで、ネオマイシンを培養細胞に導入した。

抗ウイルス薬剤により殺されなかったレトロウィルスにより運ばれたネオマイシ ン耐性遺伝子を含むそれらの細胞のみ成長するため、コロニーの数が少ないと、 抗ウイルス薬剤の効果は高くなる。言い替えれば、この検定では、各コロニーは 、細胞には入ったが、抗ウイルス薬剤により殺されなかったウィルス粒子を表し 、すなわちネオマイシンの存在下で細胞がコロニーに成長できたことを示す。抗 ねずみレトロウィルス活性および抗ひとレトロウィルス活性間の良い相関関係が 観察された。２０８Ｆラツト線維芽細胞ラインは、ミラー等、ＰＮＡＳ、８０巻 、４７０９−４７１３頁（１９８３）に記載されたものである。各実験点につい てトリブリケイトのベトリ皿を用いた。第１ｂ図および第１ｃ図は、これらの検 定の結果を示す。

Ｎ２コロニー検定では、０．０１μＭのＡＺＴが、５００μＭのＡＩＣＡリボシ ドよりも幾分優れた抗ウィルス活性を有することが示された。

ＢＡＧレトロウィルス・ベクター構築物（ネオマイシン耐性およびベーターガラ クトシダーゼ・マーカー遺伝子を有する）（チエツク、ＰＮＡＳ、８４＠、１５ ６−１６０頁（１９８７））をもつヒとマクロファージ・ライン（ｕ９３７）を ＭＡ（アンフォトロフィックＭＬＶ「ねずみ白血病ウィルス〕）により感染させ る第２の似た検定システムを利用した。）ｆＡを用いて、複製欠損ＢＡＧベクタ ーを偽型分類し、次いで２０８Ｆ細胞について滴定した。この検定によると、そ の結果は第１ｃ図に示されているが、０．０１μＭＬｖｃ）ＡＺＴおよび５００ μＭのＡＩＣＡリボシドは、ねずみレトロウィルスに対して両方とも有効であっ た。第１図で見出されるデータは、ひとレトロウィルスＨＩＶに感染したびとＣ ＥＮセルラインに対するＡＺＴおよびＡＩＣＡリボシドの効果を示すさらに別の 実験のデータと類似している。

ＣＥＮシンシチウム検定においてＨＩＶ感染前にＡＩＣＡリボシドまたはＡＺＴ をブレインキュベーションした実施例３の結果は、第２図に示されている。ＡＩ ＣＡリボンドは、０．０１８Ｍおよび０．１μＭのＡＺＴ用量の抗ウイルス効果 と同様に、５μＭおよび５０μＭの用量で抗ウイルス効果を示した。感染前に細 胞をＡｌ０Ａリボシドとブレインキュベーションしなかった類似実験の結果を第 ３図に示す。これらの結果は、ＡＩＣＡリボシドがプレインキュベージぢンによ り抗ウィルス剤としてさらに有効となったことを示す。

実施例３と同様に行なわれた３つの検定のウィルス滴定結果を平均化し、対照の パーセンテージとしてプロットしたものを第４図に示す。ＡＺＴは、第５ｂ図で 示されている通り、実施例４の５ｕｐＴ−１ンンシチウム検定において１０μＭ またはそれより高い濃度でエイズウィルスに対して１００％有効であった。低い 濃度（０，０１μＭ−１１１Ｍ）のＡＺＴおよび５μＭ−５００μＭの濃度のＡ ｒｃＡリボシドを使用すると、第５ａ図および第５ｂ図に示されている通り、有 効性は１００％未満であったが、シンポジウム形成の阻止との良好な用量応答関 係が得られた。

重要なことに、実施例３および４の記載と同様に行なわれた他の検定は、２つの 異なるひとＴ−セルラインでＨＩ　Ｖに関して５０μＭのＡＩＣＡリボシドを０ ．０１８ＭのＡＺＴと組み合わせて使用すると、この量の１０−１００倍のＡＺ Ｔを単独で用いた場合と同レベルの抗ウイルス効果が得られることを立証した。

ＧＥＭシンシチウム検定テハ、１，０．ｕＭ（７）ＡＺＴの用量は、０．０１　 μＭｃ）ＡＺＴを５０μＭのＡＩＣＡリボシドと組み合わせて投与した場合と同 程度の有効性であった（第６ａ図）。すなわち、この実施例では、ＡＩＣＡリボ シドを用いずにＡＺＴを使用する場合と同じ効果を得るのにＡＺＴの用量を１０ ０倍縮小することができる。同様に、５ｕｐＴ−１検定では、０．１μＭのＡＺ Ｔは、０．０１８ＭのＡＺＴを５０μＭのＡＺＴと共に投与した場合と同程度の 有効性であった（第６ｂ図）。第１０図は、実施例５の結果をプロットしたもの で、ＡＩＣＡリボシドによるＳＡＮヒドロラーゼ阻害を示す。

ＡＩＣＡリボシドを化学的に修飾することにより、リボシル部分の（２°−１３ ′−または５°−）ヒドロキシル酸素の１個またはそれ以上がヒドロカルビルオ キシカルボニルまたはヒドロカルビルカルボニル部分により置換されているＡＩ ＣＡリボシド・プロドラッグを得ることができる。これらの化合物は、ＡＩＣＡ リボシドのプロドラッグとして機能し、胃腸系から良好な状態で吸収される。エ ステル側鎖基を修飾すると、胃腸系からの吸収および競争的初回通過代謝並びに 血液脳関門の横断に関してさらに薬剤を利用可能にする場合における能力が改善 され得ると考えられる。プロドラッグ分子が活性部位に接近または到達すると、 無傷の修飾基は内在的に開裂されてＡＩＣＡリボシドが再生され得る。抗ウィル ス剤として有用で、ＡＺＴの活性を高めるための有利な治療特性を有するＡＩＣ Ａリボンドの一連のプロドラッグが記載されている。これらのプロドラッグ化合 物の構造は第１表に示され、代表的化合物の製法が記載されている。記載された 方法により似た修飾が行なわれ、炭素環状ＡＩＣＡリボシドのプロドラッグが生 成される。炭素環状ＡＩＣＡリボシドは、中間体として使用するためにこの化合 物の製法を報告している、前出等、「ヌクレイツク・アシッズ・リサーチ・シン ポジウム・シリーズ」、１２巻、２５−２８頁（１９８３）に記載された方法に より製造され得る。

抗ウィルス痢として様々なＡＩＣＡリボシド・プロドラッグを用いた実施例４の 結果を第７図にプロットする。これらの実験は、プロドラッグが５０μＭ濃度で のＡＩＣＡリボシドと同程度に有効であることを示した。各プロドラッグは、Ｈ ＩＶに対する抗ウィルス活性に関するこの５ｕｐＴ−１シンシチウム検定におい て重大な抗ウィルス活性を有した。

この発明に従い使用される好ましいプロドラッグ化合物には、次式 は−ＣＯＲｔであり、Ｒ，およびＲ１は独立して、好ましく（よｌ〜約２４個の 炭素原子を有する炭化水素残基であるカー、また（よｘｌ、Ｘ。

およびｘ３の２つは一緒になって、環状炭酸基を形成する力（、ただし％Ｘｌ、 Ｘ、およびｘ３の全てが水素であることｉよなＬ））を有する化合物が含まれる 。好ましいＲ１およびＲ１基に（よ低級アルキル基が含まれ、特に好ましいのは 、少なくとも１個の第２炭素原子を有するものである。２４より多くの炭素原子 を有する炭イし水素残基が使用され得、この発明の範囲内に含まれると考えられ る。

好ましい化合物には、１個または２個のエステル基を有する（ヒ合物がある。さ らに好ましいのは、１個のエステル基を有する化合物である。特に好ましいのは 、リボシル環の３゛−また（よ５°−位にエステル基を有する化合物である。

る。

特に好ましい一化合物では、ＸｔおよびＸｔは水素であり、Ｘ、はイソブトキシ カルボニルである。

この発明の好ましい炭酸エステルおよびアシルエステル化合物は、好都合には下 記反応式に従って製造され得る。

（式中、Ｘｌ、Ｘｓ、Ｘ３、Ｒ＋およびＲ１は、式（１）ニ関して定義シタ意味 と同じである） 反応（１）は、溶媒中、■、ＡＩＣＡリボシドおよび■、適当な酸塩化物または クロロホルメートを合わせることにより行なわれる。

酸塩化物は、好都合には慣用的方法、例えば対応する酸とチオニルクロリドとの 反応により製造され得る。市販されている酸塩化物もある。多くのクロロホルメ ートは市販されている。また、クロロホルメートは、好都合にはホスゲンと適当 なアルコールとの反応による、当業界の熟練者に周知の慣用的方法により製造さ れ得る。反応（１）は、約−１Ｏ℃〜約５℃、好ましくは約−５℃〜約Ｏ℃の温 度で行なわれ、一般に約２〜約４時間以内に完了する。操作し易くするため、こ の反応は溶媒中で行なわれる。適当な溶媒には、ジメチルホルムアミド（Ｄ　Ｎ 　Ｆ　）、ピリジン、メチレンクロリドなどがある。

便宜上、この反応は環境圧力で行なわれる。反応生成物（複数も可）は、慣用的 方法、例えばカラム・クロマトグラフィー、結晶化などにより単離される。認め られ得る通り、この反応の結果、生成物の混合物、すなわちリボシル部分の２° 、３゛および／または５゛位におけるモノ、ジおよびトリエステルを得ることが できる。生成物のエステルは、当業界の熟練者によく知られている慣用的方法、 例えば薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ ＬＣ）、力゛ラム・クロマトグラフィー、結晶化などにより分離され得る。

５゛−モノエステルは、好都合には２゛および３゛位がブロックされた中間体を 得るための下記反応式に従い製造され得る。

反応（２）は、■、■、■および■を合わせることにより行なわれる。これらの 反応体についてはどの順序でも合わせられるが、■、■および■の混合物に■を 加えるのが好ましい方法であり得る。この反応は、約りＯ℃〜約２５℃、好まし くは約り５℃〜約２５℃の温度で行なわれ、一般に約５時間以内に完了する。中 間体■は慣用的方法により単離される。

反応（３）は、中間体■と適当な酸塩化物またはクロロホルメートとの反応であ り、反応（１）に関して記載した要領で行なわれる。

反応（４）は、望ましければ、２′および３′位から環状遮断基を除去するため の所望による段階である。この反応は、■、適当な脱遮断剤と反応させることに より行なわれる。適当な脱遮断剤には、水／アセトン、テトラエチルーアンモニ ウムフルオリド／ＴＨＦ、酢酸／水中Ｈ樹脂などがある。それらの脱遮断反応は 慣用的であり、当業界の熟練者に周知である。

混合エステル化合物は、好都合にはまず反応（１）に従ってＡＩＣＡリボシドを 適当な酸塩化物と反応させてアシルエステル基を付加し、次いで反応（１）に従 ってアシルエステル置換化合物を適当なりロロホルメートと反応させて混合エス テルを得ることにより製造され得る。

以下、この発明の理解を助けるため、一連の実験の結果を記載する。勿論、この 発明に関する下記実施例は、この発明を具体的に限定するものと考えられるべき ではなく、現在既に知られているか、または後で開発されたこの発明の均等内容 事項は、後で主張されているこの発明の範囲内に包含されると考えられる。

実施例１ 細胞成長に対する抗ウイルス性候補物質の効果の評価に関するリンパ芽球検定。

幾つかのリンパ芽球ラインを、様々な用量の抗ウィルス剤と組み合わせて使用す ることにより、細胞成長に対するそれらの効果を測定した。この方法では、抗ウ イルス性化合物を加えた後、ある期間にわたる１日細胞数を正常細胞成長曲線と 比較することができる。

２種の代表的なＴ−セルライン、５ｕｐＴ−１およびＧＥＭ並びにＢ−セルライ ン、Ｗｌ−Ｌ２を、１０％加熱不活化胎児牛血清（ジエミニーバイオプロダクツ ）および１％グルタミン（ギブコ）を補ったＲＰＭ１１６４０（アービン・サイ エンティフィック）５０ｘＱ中で中対数期５ｘｔｏ’細胞／ｌ（ｌに成長させ、 接種状態を標準化し、対数的に増大する細胞の集団を確認した。

２０酎の新鮮な成長培地中０．５ｘｌＯ’細胞／１１２の割合で均一に懸濁した 細胞を、適当な数のＴ−２５フラスコ（コーニング）に接種した。対照条件を含 め、フラスコの各セットを各セルラインにつき一定用量範囲の抗ウイルス性化合 物で処理した。各投与条件を３回同じ形で反復した。フラスコ全部を５％ＣＯ， インキュベーター中で５日間３７℃でインキュベーションした。

５日間２４時間毎に、各フラスコの０　、２　ｘ（ｌ試料３つを９　、８　ｗＱ のイソトン（フィッシャー・サイエンティフィック）中で希釈し、細胞カウンタ ー（クールター・カンパニー）で計数した。各フラスコの平均を記録し、次いで 各トリプリケイト抗ウィルス剤用量の平均を平均化し、記録した。

第８図（ａ）は、Ｏ〜５０μＭの濃度のＡＩＣＡリボシドをθ〜ｌＯμＭの濃度 のＡＺＴと組み合わせたものは、ＧＥＭ細胞成長に対してあったとしても殆ど影 響を与えなかったこと示す。５００μＭのＡＩＣＡリボシドを用いた場合のみ、 細胞成長が顕著に減少した。

ＡＺＴ濃度を０．０１−１０．０μＭのＡＺＴに変えた場合、この細胞成長の減 少は、この５００ｕＭのＡＩＣＡリボシド濃度ではあまり変化しなかった。５ｕ ｐＴ−１セルラインに関する第８図（ｂ）における結果は全く類似していた。第 ８図（ｃ）は、全部のＡＩＣＡリボシドおよびＡＺＴ濃度においてＷｌ−Ｌ２細 胞の成長に対する重大な影響が無かったことを示す。

第９図は、Ｂ細胞対Ｔ細胞成長に対するＡＩＣＡリボシドの影響を示す。ＡＩＣ Ａリボシドは、５００μＭ以下の濃度ではＷＩ−Ｌ２（Ｂ細胞）成長に回答影響 を与えなかった。ＡＩＣＡリボシドは、５００μＭの濃度でＴ細胞成長（ＣＥＮ および５ｕｐＴ−１細胞）において約３０〜約５０％の減少を示した。

実施例２ 抗ウイルス性化合物の検出に関するコロニー耐性。

レトロウィルスに対する抗ウイルス性化合物の特性検定を目的とするこのコロニ ー形成生物検定では、ネオマイシン耐性を与える能力を有する複製欠損レトロウ ィルス性ベクター構築物（Ｕ９３７／ＢＡＧまたはＮ２）を偽型分類し、単一細 胞を感染させ、ネオマイシン選択下、受容細胞にコロニーを形成させる。各感染 により、細胞の独立した群を生成し得るネオマイシン耐性細胞が生じるため、コ ロニーを数えることができ、その結果、コロニー数および１次つィルス濃度間の 一次関係が得られる。この方法により、見込みのある抗ウイルス候補物質をスク リーニングすることができる。３つの別々のねずみレトロウィルス検定を用いる ことにより、この明細書に記載されているプリン・ヌクレオシドの抗ウイルス有 効性を立証した。結果を第１図に示す。

０９３７／ＢＡＧ＋ＭＡ：　　ＢＡＧと名付けたレトロウィルス性ベクタ゛−構 築物（チェブコ、前出）をもつＵ９３７細胞を、ｌＯ％加熱不活化胎児牛血清（ ジエミニーバイオプロダクツ）、１％２００ｍＭグルタミン（ギブコ）および５ ００μ９／ｘＱネオマイシン（シグマ）を補ったＲＰＮ１１６４０（アービン・ サイエンティフィック）中ＩＱ当たり５．０Ｘ１０５細胞の割合に成長させた。

１Ｏｊｆ１２の５ｘｌＯ’細胞／村を採取し、ねずみアンフオトロフイツク・ウ ィルス（１０４力価）を含む培地２村に再懸濁し、３７℃で１時間５％ＣＯ２中 、緩く蓋をした遠心分離管においてインキュベーションした。細胞を遠心分離し 、１０％加熱不活化胎児生血清および１５２００ｍＭグルタミンを含む２０ｘＱ のＲＰＭ１１６４０中で再懸濁し、３７℃および５％ＣＯｔで一夜１２−１６時 間インキュベーションした。

１奸の対数期２０８Ｆラツト線維芽細胞を、適当な数の６０ｘｇ培養皿（コーニ ング）中、ｌＸｌ０’細胞／−ｊｌｇの割合で１０％加熱不活化胎児牛血清およ び１％２００ａ＋Ｍグルタミンを含むアルファＭＥＮ（アービン・サイエンティ フィック）に入れ、３０分間インキュベーターにおいて結合させた。２０８Ｆ細 胞を、感染前４μ９７１（ｌポリブレン（シグマ）で−夜（１２−１６時間）前 処理することにより、均一で速動性のウィルス感染を確実に１、た。抗ウィルス 剤（複数も可）を適量加え、細胞をレトロウィルスによる感染面２４時間プレイ ンキュベージジンした。

Ｕ９３７／ＢＡＧ＋ＭＡｍ胞を１２０Ｏｒｐｍで５分間沈澱させ、ネオマイシン 耐性１クイルスを含む上清を採取した。２ズρを前処理した２０８Ｆラツト線維 芽細胞（細胞はほぼ５０％全面成長状態であった）上に置いた。次いで、プレー トをさらに２４時間インキュベーションした。

成長培地中５００μ？／ｘ（ｌネオマイシンを用いることにより、適当なプレー トにおいてネオマイシン選択を開始した。８日間、１週間に３回培地を変えなが ら、選択を続行した。感染後８日目に、全プレートを燐酸緩衝食塩水で２回洗浄 し、３０分間！、ｗ６の９５％メタノール（シグマ）により固定させた。メタノ ールを除去し、プレートを一夜風乾させ１ニ。

乾燥後、ブレ・−トを２１のＩ：２０グレムサ（シグマ）により１時間染色した 。染料を吸引し、プレートを蒸留水で洗浄した。５０個Ｎ２：　　１０％加熱不 活化胎児牛血清および１％ＩＩＭグルタミンを補ったアルファＭＥＮにおいて、 ２０８Ｆラツト線維芽細胞を成長させた。対数期細胞を、１プレート当たりＳｘ Ｑ中Ｉ　Ｘ　１０’細胞の割合で６０ｘｘプレート上に置き、結合させ、４μ９ ／１１Ｑポリブレンにより一夜前処理した。感染の２４時間萌、適量の抗ウイル ス性化合物を各条件培地に加えた。感染当日、５０μＱの１０Ｓ力価Ｎ２ウィル スを適当なプレートに加え、２４時間インキュベーションさせに０ 翌日ネオマイシン選択（５００μｇ／ＪＩＣ）を開始し、感染後８日間１週間に ３回の割合で培地を変えながら続行した。選択の８日目、プレートを２回ＰＢＳ 洗浄液でリンスし、９５％メタノールにより固定し、ｌ：２０グレムサ細胞染料 で染色１５た。５０個またはそれ以上のアグリゲート細胞を含むコロニーを全て 計数した。ＡＩＣＡリボシドおよびＡＺＴを用いＬ結果を第１ａ−１ｂ図に示す 。

実施例３ Ｃｅｍ−ＳＳ細胞を用いた抗ウィルス活性に関するＨｉｖンンシチウム形成検定 。

次の細胞形態学的感染性生物検定を用いることにより、ＨＩＶ−１に対する抗ウ ィルス活性の特性検定を行った。次の検定では、−感染単位のウィルスが単一細 胞に感染し、その感染の焦点発現、すなわちシンシチウムを開始する。ｌ感染単 位が独立した応答になるため、ウィルス誘導性細胞変性作用の数および一次ウイ ルス濃度の間に一次関係が存在する。ウィルス不活化に関する検定においてこの 方法を適用すると、候補の抗ウィルス剤を評価することができる。

ＯＥＭ−ＳＳ（シンシチウム感受性Ｌｅｕ３ａ−陽性ＧＥＭセルライン）細胞を 、ｌＯ％加熱不活化胎児牛血清（ノエミニーバイオプロダクツ）および１％２０ ０μＭグルタミン（ギブコ）を補ったＲＰＭＩ１６４０細胞培養培地（アービン ・サイエンティフィック）中で成長させた。検定開始の前日、対数期細胞を成長 培地でｌ：２に分配することにより、プレート条件を標準化し、対数的に増大す る細胞の集団を確実にした。５０μ９７Ｒ（ｌポリ−１−リジン（ＮＷ＝２９５ ０００ジグ？ＸｒＰＬＬＪ）５０μ（Ｉｔ：よ’）９６つｚル（１）プレー）（ ：ｌスター）を前処理し、室温で６０分間放置した。残留ＰＬＬをＰＢＳの２回 洗浄により除去した。使用時まで、プレートをインキュベーター中で貯蔵した。

検定当日、細胞を計数し、充分な細胞を採取し、２００μｇの容量においてｌウ ェル当たり５．０Ｘ１０’細胞の割合で各ウェルに入れた（または２０ｘ（ｌの ５．０Ｘ１０”細胞／ｘ（ｌが、各９６ウエル・マイクロタイター・プレートに 適当であった）。

２００μｇの容量において５．０Ｘ１０’細胞／ウエルの割合でＰＬＬ前処理マ イクロタイター・プレート上に細胞を取り出した。３７℃および５％ＣＯ２で３ ０分間結合させた後、抗ウィルス剤（複数ＨＩＶ−１ウィルスのストック（感染 Ｈ−９細胞から単離された）を成長培地中で希釈すると、ｌウェル当たり１００ ＳＦＵ（シンシチウム形成単位）が得られた。希釈したＨＩＶ−１ウイルス２０ μａを適当なウェルに加えた。次いで、プレートを全て３７℃および５％ＣＯ， で５日間インキュベーションした。感染後５日目、細胞に１００μｇ培地変化を 与えた。感染後７日目、４０Ｘでシンシチウム計数を行った。結果を第２−４お よび６（ａ）図にプロットする実施例４ ＳｕｐＴ−１細胞を用いた抗ウィルス活性に関するＨＩＶシンシチウム形成検定 。

この検定は実施例３記載の方法に従い行なわれるが、ただし、５ｕｐＴ−１細胞 を使用した。５ｕｐＴ−１細胞を使用し、感染後５日目に培地を変えず、感染後 ５日目にシンシチウムを４０で計数した。

結果を第５．６（ｂ）および７図にプロットする。

実施例５ Ｓａｎヒドロラーゼ阻害。

ＳＡＮヒドロラーゼ活性に対するインキュベーション時間およびＡＩＣＡリボシ ド濃度の影響を次の要領で測定した。ＳＡＮヒドロラーゼの５つの試料を、０． １Ｏ１２５，５０および１００μＭのＡＩＣＡリボシド濃度でインキュベーショ ンした。インキュベージ！ン緩衝液ハ、２５ｍＭ燐酸力’Ｊウム（ｐＨ７，０） 、ｌｓＭのＥＤＴＡ。

１ｓＭのＤＴＴおよび０．０４％ＢＳＡを成分とした。インキュベージジン混合 物に加えられた酵素は全部でｌＯμ９であった。指示された時点で、ＩＯμｇの 試料を回収し、次の検定システムで検定した。スナワチ、２５＋ａＭ燐酸力ｊＪ 　ｆｚム、ｐＨ７，０，４０ｍＭｆ７）ＤＬ−ホモシスティン、１ｍＭのＥＤＴ Ａ％　Ｉ＋ＭのＤＴＴ、１０μＭ（７）ＥＨＮＡ、０．１％ＢＳＡお、及び１０ μＭのＵ−１４Ｃ７デノシン（５９０１ＩＣ１／ミリモル）。！５μｇの３０％ ＴＣＡを加えることにより、反応を止めた。次いで、試料を遠心分離にかけ、１ ５μｇを除去し、ＳＡＮおよびアデノシン・マーカーを随伴するコダック・セル ロース１３２５４ＴｃＬプレートに適用した。次いで、これらのプレートを、！ −ブタノール：メタノール：ＨｔＯ：水酸化アンモニウム（６０：２０：２０： ２）の溶媒系で展開した。アデノシンおよびＳ−アデノシル・ホモシスティンを ＵＶ光線下で可視化し、スポットをプレートから切断した。液体シンチレーショ ン分光法によりスポットの放射能を測定した。第１０（ａ）図に示されたｌｏｇ ％（Ｖ／Ｖ、　Ｘ　ｉ　００）対時間（分）の傾きからＫ　　　値を測定した。

Ｋ　　　の逆数不活化　　　　　　　　不活化 対１／ＡＩＣＡリボシド濃度のプロットから、Ｋ、（Ｘ切片）およびＫｍａｘ（ Ｙ切片）の値を決定した（第１０（ｂ）図）。

実施例６ ＡＩＣＡリボシドの炭酸エステルの製造。

次の方法に従ってＡＩＣＡリボシドの炭酸エステルを製造する。

炭素環状ＡＩＣＡリボシドの炭酸エステルも同様にして製造される。

７０ミリモル分量のＡＩＣＡリボシドを、５０ａ＋ＣのＮ、Ｎ−ジメチルホルム アミドおよび５０ｍ６のピリジンから成る混合物に懸濁し、次いで水塩浴中で冷 却する。生成した混合物に、約１５〜３０分間の期間にわたって連続撹はんしな がら、無水条件下、適当なりロロホルメート（９４ミリモル、２０パーセント過 剰）を加える。塩浴を除去する。反応混合物を約１〜２時間かけて室温に放暖す る。６：Ｉメチレンクロリド；メタノールで溶離するシリカゲルＴＬＣにより、 反応の推移をモニターする。ＡＩＣＡリボシドの消滅は、反応の完了を示す。高 度真空下（浴温４０℃未満）溶媒を濃縮除去する。

この残留物を、メチレンクロリドでパックしたシリカゲル・カラムによるクロマ トグラフィーにかけ、最初メチレンクロリド、次いでメチレンクロリド：メタノ ール（９５：５）により溶離する。同一（ＴＬＣ）パターンを示すフラクション をプールし、次いで溶離液を濃縮すると、泡状物が得られる。この泡状物を一夜 室温で高度真空下乾燥する。

生成物の炭酸エステルの収率は約４５〜６５％である。−次産物は５′−炭酸エ ステルであるが、他の生成物であるエステルも製造される。

実施例７ ３′−イソブトキシカルボニルＡＩＣＡリボシドの製造。

ピリジン（５０ｄ）およびＮ　、　Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０１１２）の 混合物にＡＩＣＡリボシド（１８，０６９，７０ミリモル）を溶かした溶液を、 水塩混合物中で冷却した。それに、イソブチルクロロホルメート（１１，４７９ ，９４ミリモル）を連続撹はんしながら３０分間かけてゆっくりと加えた。反応 の最初の赤色は、約４０分で淡黄色に変わった。撹はんを２時間続行し、その最 後に、メチレンクロリド：メタノール（９：ＩＸＲｆ＝０．３）で溶離したシリ カゲルＴＬＣを行うと、反応の完了が示された。メタノール（２ｍ□を加えて未 反応試薬を中和した。高度真空下、反応混合物から溶媒を濃縮除去した（浴温的 ４０℃）。残存する粘着性の塊を、９：１メチレンクロリド：メタノール混合物 にバックされたシリカゲル・カラム・クロマトグラフィーにかけた。カラムを同 混合物で溶離し、幾つかのフラクションを集めた。同−ＴＬＣスポットを示すフ ラクションをプールし、濃縮すると、オフホワイトの泡状物が得られた。この泡 状物から単離された生成物は、ｎｍｒスペクトルに基づき与えられた構造＝３゛ −イソブトキシカルボニル−ＡＩＣＡリボシドを有した。収量８．５９、ｍｐ７ １−７３°（鮮明なｍｐではない）、ＩＲ（ヌジ９−）し）１７２５ｃｉ−’（ ０ＣＯ−ＣＨｔＣＨ（ＣＨｓ）ｔ）、ｎａ＋ｒ（Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏ−ｄｏ）、δｐ ｐｍ％０．９［ｄ、　６Ｈ（ＣＨｓ）ｔコ、１．９（ｏ＋、１１−ｉ、イソブチ ル側鎖のＣＨ）、３　、６　（ｍ、　２８％　　５’　　ＣＨ＊）、３　、９　 （ｄ、２Ｈ，イソブチル側鎖のＣＨ，）、４．１（ｍ、ｆＨ，４°−ＣＨ）、４ ．６（Ｌ　　ＩＨ。

２’−ＣＨ）、５．０１（ｄｄ、　　Ｉ　Ｈ１３’−ＣＨ）、５．４５−５．５ ５（＠、２Ｈ％１　’　−ＣＨおよび５’−０Ｈ）、５．９２（ｄ、ＩＨ，２− ０Ｈ）、６．０２（広いｓ、２Ｈ，５ＮＨｚ）、６．６−６．９（広いｄ、２Ｈ 。

４　　Ｃ０ＮＨｘ）、７．３５（Ｓ、ＩＨ，２−ＣＨ）。

この化合物のスペクトルを、その母体化合物、ＡＩＣＡリボシドの場合と比較す ると、３’−ＣＨ（ＡＩ　ＣＡリボシドでは４．Ｏ５ｐｐｍで現れる）が、同じ 炭素原子に結合した酸素における置換故に１　ｐｐｍダウンフィールドに移った が、全ての他のプロトンの位置は大部分変化しないままであったことが示され、 置換が３″−Ｃにおけるものであることが確認された。

実施例７の生成物のｎｍｒは、それが、３′−イソブトキシ−炭酸エステルの少 なくとも８０％であることを示したが、ＨＰＬＣ分析は幾つかのピークを示した 。各ピークに対応するフラクションを集め、ＨＰＬＣで分析した。各ピークはま た、ＡおよびＢと称する２種の主要な生成物の存在を示した。それらの一方（生 成物Ａ）はＡＩＣＡリボシドであることが測定され、他方（生成物Ｂ）は少量で 単離され、そのｎｌｒおよびマススペクトル・データに基づきＡＩＣＡリボシド −２°、３“−環状カーボネートとして特性検定された。ｎｌｒ（Ｄ　Ｍ　５Ｏ −ｄａ）、δｐｐｍ、３．６−３．７（ｉ、２Ｈ，５°　ＣＨｔ）、４　、３　 （ｑ。

１）１．４’−ＣＨ）、５．３５（ｍ、ＩＨ，３’−ＣＨ）、５．６（ｍ、ＩＨ 。

２°−ＣＨ）、５．２−６．７（広い、ＩＮ、５’−０Ｈ）、−５，８−６゜０ （広い、２Ｈ１５−ＮＨ，）、６．１（ｄ、ＩＨ，Ｉ’−ＣＨ）、６．７−６． ９５（広い、ｄ、２Ｈ，４Ｃ０ＮＨ１）、７．４５（Ｓ、１）（。

２−ＣＨ）。マススペクトル、（ＦＡＢ）Ｍ　　２８４、Ｍ　　’２８５、＋ Ｍ　１２８６゜これらのデータは、化合物（生成物Ｂ）の構造がＡＩＣＡリボシ ドの２’、３’−環状カーボネートであることを確認した。

この化合物の好ましい合成方法を下記実施例８に示す。

実施例８ ＡＩＣＡ２’、３°−環状カーボネートの製造。

ピリジン（５０ｍの中ＡＩＣＡリボシド（５，１６９，２０ミリモル）の懸濁液 に、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（９２，５９，２５ミリモル）を一度 で加え、室温で５日間撹はんし、その最後にメチレンクロリド：メタノール（６ ：１％Ｒｆ＝０．４）で溶離するシリカゲルＴＬＣを行うと、反応の完了が示さ れた。反応混合物からピリジンを濃縮除去した。残留物を、メチレンクロリド： メタノール（９：１）で溶離するシリカゲル・カラム・クロマトグラフィーにか けた。

同−ＴＬＣを示したフラクションをプールし、濃縮すると、泡状物（収量４．０ ９）が得られた。この生成物は、実施例７記載の合成による副産物の一つとして 単離され、ｎａ＋ｒおよびマススペクトル分析により特性検定された、Ａｌ０Ａ リボシド−２’、３’−環状カーボネートと同じであった。

実施例９ ５゛−アセチルＡＩＣＡリボシドの製造。

乾燥アセトン（１１５ｍ１２）および無水エタノール（１３８ｊ＋Ｑ）に乾燥Ｈ Ｃｅガス（９，０９）を溶カルだ混合物に、ＡＩＣＡリボシド（１２゜９９）を 加えた。混合物を室温で２時間撹はんした。反応の完了をＴＬＣによりモニター した。反応混合物を室温でさらに２時間撹はんした時点で、ＴＬＣを行うと、反 応の完了が示された。反応混合物を、水酸化アンモニウム（１８ｉ１２）および 水（１６８１１２）から成る水冷混合物にゆっくりと注いだ。数ｘＱの水酸化ア ンモニウムを加えることにより、溶液のｐ）（を約８に調節した。反応物を１０ ０ｍｇに濃縮した。塩化アンモニウム沈澱物をろ過により除去した。ろ液を再び 濃縮すると、さらに塩化アンモニウムが沈澱した。ろ過後、ろ液を濃縮乾固した 。残留物を、メチレンクロリドの２００ｊ１１２アリコートにより３回抽出した 。メチレンクロリドを濃縮すると、泡状物が得られ、これをｎｓ＋ｒ分光法によ り特性検定すると、生成物２°、３゛−イソプロピリデンＡＩＣＡリボシドであ った。これは、それ以上精製せずに次の反応で使用された。

水塩混合物中で冷却した２５ｘＱの乾燥ピリジンに２゛、３°−イソプロピリデ ンＡＩＣＡリボシドを溶かした溶液に、１０１１Ｉ２の無水酢酸を撹はんしなが ら滴下した。混合物を２時間かけて室温に放暖した。この反応は、ＴＬＣ（９： ｌメチレンクロリド：メタノール）により完了していることが示された。溶媒を 反応混合物から濃縮除去した。残留物を、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドの２つ の２５村アリコートと共に２回濃縮した。その生成物を２４時間８０％酢酸１０ ０ｘＱにより処理した。６：ｌメチレンクロリド：メタノールで溶離するシリカ ゲルＴＬＣによって、反応の完了が示された。水および酢酸を減圧下濃縮除去し た。残留物を４時間１００ｍ（アリコートの水と共濃縮することにより、酢酸を 除去した。残留物を２５ｘ（ｌのｌ：ｌエタノール：水から結晶化した。結晶性 生成物をろ過により集め、水で洗浄し、真空乾燥すると、融点１６’５−１６６ ℃の３．０９の上記生成物が得られた。ＩＲ（ヌジョール）、１７４５ＣＩ−’ （−０ＣＯＣＨｓ）、ｎｍｒ（Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏｄｓ）、δｐｐｍ２．０（Ｓ、３ Ｈ，Ｃ０ＣＨｓ）、４．０−４．１（ｍ、２Ｈ，５°−ＣＨハ、４．１−４．４ （ｍ、３Ｈ，２’−ＣＨ，３’−ＣＨ，４’−ＣＨ）、５．３（ｄｌ　１Ｈ，１ ’−ＣＨ）、５゜４−５．６（載　２Ｈ５３°−ＯＨ，４’−０Ｈ）、５．７− ５．９（広い、２Ｈ，５−Ｎｌ２）、６．６−７．０（広い、ｄ、　２　Ｈ，Ｃ ＯＮ　Ｈｚ）、７゜３（５、ＩＨ，２−ＣＨ）。

実施例６〜９および「発明の詳細な記載」に記載された方法を用いることにより 、第１表に列挙された化合物が製造された。また、第■およびｍ表に列挙された 化合物もこれらの方法により製造される。

第１表 次式で示される化合物 化合物　　　　Ｘ□　　２ν一一一　　為−ｍ−２−ＣＯＣ町（Ｊ（０Ｍ３）、 　　＜ＯＣＲ，ＣＭ（ＣＭ、）２−Ｈ３−ＣＤＣＭ、ＣＨ，−Ｈ−Ｈ ４−ＣＤＣＩ！、ＣＩ、ＣＭ、　　　　−Ｈ−ＨＯ ６−Ｃｏ−（ＣＩ２）、ＣＫ、　　　　−Ｈ−ＨＯ ７−ＣＣＨ，−１（−）１ ８　　　　　　　　−Ｍ　　　　　　　　−ＣＣ）ｉ、　　　　　　　−ＣＣＨ 。

脂 ９　　　　　　　　　　　　　　　　−Ｈ−ＣＣ）町、　　　　　　　　　　　 　　　−ＨＯ 蓋 １０　　　　　　　　　　　　　　−ＣＣＨ（ＣＨ，）、　　　　　　　−Ｈ− ＩＩ諺 １１　　　　　　　　　　　　　　−ＣＧ（ＯＨ，）、　　　　　　　　−１１ −ＨＯｏ　　　　　　　　　　　。

Ｃｌ　　　　　　　　　　　　　　−ＣＣＨ，−ＣＣＩＫ、　　　　　　　　　 　　　　−ＣＣＨ。

第２表 値 ユ２　　　　　　　　　　　　　　　　−ＣＭ（側山諦 ｉ３　　　　　　　　　　　　　　　　　−ＣＯＣ（ＣＭ、）。

１６　　　　　　　　　　　　　　−ＣＣＨｌＯＨ（Ｃ町）。

第３表 、、　　　　　−ＣＯｃＨ，Ｃ’１（２００Ｒ，−、−ｎ■ ２Ｂ　　　　　　”’Ｈ−Ｈ＝＝Ｃ−０−Ｃ，Ｃ！（２０ＣＲ。

０９３７／ＢＡＧ　十ＨＡ　：Ｉｏ二４Ｓ？會＊　ｐｃＯ，ｏＩ ＦＩＧ、　／ａ。

Ｎ２　コロニー七釦定。

會＊　ｐＪ、ｏｏｌ ＦＩＧ　ｌｂ ＨＩＶ　ＣＥ賛　シンシチウム壽じと ＦＩＧ　２”’　　　　　　Ｃ”）”、Ｋ”ｒｚＫ−’＝＊　＞Ｅ、、Ｆ−ＡＴ ）ん５３゜ ＦＩＧ　４σ、８１、。、□５５５．つ、戟ＡＩＣ＾１ｊ不シド（−） Ａ２Ｔ［ｄｌ　　　　　　　　　　　　倉？（０，０５★脅Ｐ＜０．０１ ＡＩＣ＾リボシド（Ｐ剛 貴ｐ＜０．０５ ＦＩＧ　８ｏ。

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Claims (47)

【特許請求の範囲】
1. （１）ＡＺＴをＡＩＣＡリボシドと連係的に投与することを含む、抗ウイルス効 果の増強法。
2. （２）ＡＺＴをＡＩＣＡリボシドプロドラッグと連係的に投与することを含む、 ＡＺＴの抗ウイルス効果の増強法。
3. （３）ＡＩＣＡプロドラッグが、５−アミノ−３′（２−メチル−１−プロポキ シカルボニル）−１−δ−Ｄ−リボフラノシル−イミダゾール−４−カルボキシ アミドおよび５−アミノ−３′−（１−プロポキシカルボニル）−１−β−Ｄ− リボフラノシル−イミダゾール−４−カルボキシアミドからなる群から選ばれる 、請求項２記載の方法。
4. （４）ＡＩＣＡリボシドプロドラッグが、ＡＩＣＡリボシル部分、およびＡＩＣ Ａリボシル部分当量当り少なくとも１個のヒドロカルビルオキシ−カルボニルま たはヒドロカルビルカルボニル部分を有する修飾ＡＩＣＡリボシドを含む、請求 項２記載の方法。
5. （５）プロドラッグのリボシル部分のヒドロキシル酸素の少なくとも１個がヒド ロカルビルオキシカルボニルまたはヒドロカルビルカルボニル部分で置換されて いる、請求項４記載の方法。
6. （６）プロドラッグのリボシル部分のヒドロキシル酸素の少なくとも１個がヒド ロカルボキシカルボニル部分で置換されている、請求項４記載の方法。
7. （７）プロドラッグがＡＩＣＡリボシル部分の当量当り１−２個のヒドロカルビ ルオキシカルボニルまたはヒドロカルビルカルボニル部分を有する、請求項４記 載の方法。
8. （８）プロドラッグが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は独立して水素、▲数式、化学式、表等がありま す▼または▲数式、化学式、表等があります▼（ここで、Ｒ１およびＲ２は独立 してヒドロカルビル）であるか、またはＸ１、Ｘ２およびＸ３の２個が一緒にな って環状カーボネート基を形成する。但し、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３の全部が水素 ではない］ で示されるものである、請求項２記載の方法。
9. （９）プロドラッグのＲ１およびＲ２が第２級炭素原子を有するヒドロカルビル 基である、請求項８記載の方法。
10. （１０）プロドラッグのＸ１またはＸ３が▲数式、化学式、表等があります▼で ある、請求項８記載の方法。
11. （１１）プロドラッグのＲ２が第２級炭素原子を有する、請求項１０記載の方法 。
12. （１２）ＡＺＴを治療有効量のＳＡＮヒドロラーゼ阻害手段と連係的に投与する ことを含む、ＡＺＴの抗ウイルス効果の増強法。
13. （１３）ＳＡＮヒドロラーゼ阻害手段がプリンヌクレオシドである、請求項１２ 記載の方法。
14. （１４）プリンヌクレオシドがＡＩＣＡリボシドである、請求項１３記載の方法 。
15. （１５）プリンヌクレオシドがＡＩＣＡリボシドプロドラッグである、請求項１ ３記載の方法。
16. （１６）ＡＩＣＡリボシドを約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ／日の 量で投与する、請求項１４記載の方法。
17. （１７）ＡＩＣＡリボシドプロドラッグを約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０００ｍｇ ／ｋｇ／日の量で投与する、請求項１４記載の方法。
18. （１８）ＡＺＴを治療有効量のプリンヌクレオシドまたはプリンヌクレオシド類 似体であって逆転写酵素によるＡＺＴトリホスフェートのＤＮＡへのとり込みを 増加させるものと連係的に投与することを含む、ＡＺＴの抗ウイルス活性の増加 法。
19. （１９）プリンヌクレオシドがＡＩＣＡリボシドである、請求項１８記載の方法 。
20. （２０）プリンヌクレオシドがＤＮＡへのチミジントリホスフェートのとり込み を減少させることによりＡＺＴトリホスフェートのとり込みを増加させるもので ある、請求項１８記載の方法。
21. （２１）プリンヌクレオシド類似体が炭素環状ＡＩＣＡリボシドである、請求項 １８記載の方法。
22. （２２）プリンヌクレオシドが細胞内チミジントリホスフェートを減少させるこ とによりチミジントリホスフェートのとり込みを減少させるものである、請求項 ２０記載の方法。
23. （２３）プリンヌクレオシドがチミジンキナーゼ活性を増加させることによりチ ミジントリホスフェートのとり込みを減少させるものである、請求項２０記載の 方法。
24. （２４）プリンヌクレオシドがＡＩＣＡリボシドである、請求項２２または２３ 記載の方法。
25. （２５）治療有効量のＡＩＣＡリボシドを投与することを含む、ウイルスの感染 性減少または防止法。
26. （２６）ウイルス感染がレトロウイルスにより起るものである、請求項２５記載 の方法。
27. （２７）レトロウイルスがひとレトロウイルスである、請求項２６記載の方法。
28. （２８）ひとレトロウイルスがひと免疫不全ウイルスである、請求項２７記載の 方法。
29. （２９）ＡＩＣＡリボシドを１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ／日の量 で投与する、請求項２５、２６、２７または２８の何れかに記載の方法。
30. （３０）治療有効量のＡＩＣＡリボシドプロドラッグの投与を含む、ウイルスの 感染性減少または防止法。
31. （３１）ウイルス感染がレトロウイルスにより起るものである、請求項３０記載 の方法。
32. （３２）レトロウイルスがひとレトロウイルスである、請求項３１記載の方法。
33. （３３）ひとレトロウイルスがひと免疫不全ウイルスである、請求項３２記載の 方法。
34. （３４）ＡＩＣＡリボシドプロドラッグを約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０００ｍｇ ／ｋｇ／日の量で投与する、請求項３０、３１、３２または３３記載の方法。
35. （３５）ＡＩＣＡリボシドプロドラッグが、５−アミノ−３′−（２−メチル− １−プロポキシカルボニル）−１−β−Ｄ−リボフラノシル−イミダゾール−４ −カルボキシアミド、−５−アミノ−３′−１−プロポキシカルボニル）−１− β−Ｄ−リボフラノシル−イミダゾール−４−カルボキシアミドおよび２′，３ ′−シクロカーボネートＡＩＣＡリボシドからなる群から選ばれる、請求項３０ 記載の方法。
36. （３６）ＡＺＴをＡＩＣＡと連係的に投与することを含む、ＡＺＴの抗ウイルス 効果の増強法。
37. （３７）ＡＺＴをＡＩＣＡリボシド類似体と連係的に投与することを含む、ＡＺ Ｔの抗ウイルス効果の増強法。
38. （３８）ＡＩＣＡリボシド類似体が５−アミノ−３′−（２−メチル−１−プロ ポキシカルボニル）−１−β−Ｄ−リボフラノシル−イミダゾール−４−カルボ キシアミドである、請求項３７記載の方法。
39. （３９）ＡＩＣＡリボシド類似体が炭素環状ＡＩＣＡリボシドである、請求項３ ７記載の方法。
40. （４０）ＡＩＣＡリボシド類似体が炭素環状ＡＩＣＡリボシドプロドラッグであ る、請求項３７記載の方法。
41. （４１）さらに、尿酸合成防止手段を投与することを含む、請求項１、２、８、 １４、１５、１６、１７、１９、２１、２４、２５、２９、３０、３４、３５お よび３８の何れかに記載の方法。
42. （４２）ＡＺＴをＡＩＣＡリボシドまたはＡＩＣＡプロドラッグまたは両者と連 係的に投与することを含む、ＡＺＴの抗菌作用効果の増強法。
43. （４３）抗がん剤をＡＩＣＡリボシドまたはＡＩＣＡリボシドプロドラッグまた は両者と連係的に投与することを含む、活性がりん酸化速度に関係がある抗がん 剤の活性の増強法。
44. （４４）ＡＩＣＡリボシドの投与を含む、がん化学治療法。
45. （４５）がんがＴ細胞悪性化である、請求項４４記載の方法。
46. （４６）ＳＡＮヒドロラーゼ阻害手段が炭素環状ＡＩＣＡリボシドである、請求 項１３記載の方法。
47. （４７）ＳＡＮヒドロラーゼ阻害手段が炭素環状ＡＩＣＡリボシドプロドラッグ である、請求項１３記載の方法。