JPH03211460A - フリーラジカル測定キット及び測定条件 - Google Patents
フリーラジカル測定キット及び測定条件Info
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- JPH03211460A JPH03211460A JP34487389A JP34487389A JPH03211460A JP H03211460 A JPH03211460 A JP H03211460A JP 34487389 A JP34487389 A JP 34487389A JP 34487389 A JP34487389 A JP 34487389A JP H03211460 A JPH03211460 A JP H03211460A
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- Japan
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- kit
- radical
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- blood
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- Pending
Links
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
血中のフリーラジカルは心筋梗塞などの虚血性疾患やア
ルコール性障害動脈硬化、老化などに深い関わりを持ち
その測定は臨床上の価値が高いしかしながら、その測定
は熟練した研究者でも困難であった。この発明は不安な
フリーラジカルをスピントラ・ノブ剤５．５ｄｌｓｅｔ
ｈｙｌ −１−ｐｙｒｒｏｌ ｉｎｅ−ｎ−ｏｘＩｄｃ
（ＤＭＰＯと略される）と反応させ、安定で測定しゃす
いＤＭＰＯラジカルアダクト（ＤＭＰＯとフリーラジカ
ルの反応生成物質）にしてそれを迅速に分離、測定する
第一線の病院でも可能な方法とその為のキットをあられ
したものである。
ルコール性障害動脈硬化、老化などに深い関わりを持ち
その測定は臨床上の価値が高いしかしながら、その測定
は熟練した研究者でも困難であった。この発明は不安な
フリーラジカルをスピントラ・ノブ剤５．５ｄｌｓｅｔ
ｈｙｌ −１−ｐｙｒｒｏｌ ｉｎｅ−ｎ−ｏｘＩｄｃ
（ＤＭＰＯと略される）と反応させ、安定で測定しゃす
いＤＭＰＯラジカルアダクト（ＤＭＰＯとフリーラジカ
ルの反応生成物質）にしてそれを迅速に分離、測定する
第一線の病院でも可能な方法とその為のキットをあられ
したものである。
、フリーラジカル測定キット：このキットは三段からな
っている。キットの上段には２００μｍのラジカル反応
液があり、濾紙によって、中段としきられている。中段
は分子量１万以上の蛋白質を通さない限外濾過膜によっ
て。
っている。キットの上段には２００μｍのラジカル反応
液があり、濾紙によって、中段としきられている。中段
は分子量１万以上の蛋白質を通さない限外濾過膜によっ
て。
下段に区切られており下段は手で外せるようになってい
る。上段の上にはキャップが付いている。キットの膜は
セルロース、その他はシリコンコートをしたアクリル樹
脂で出来ている。普段はキャップを締めたままキャップ
を下向きＪこして冷蔵庫に保存する。
る。上段の上にはキャップが付いている。キットの膜は
セルロース、その他はシリコンコートをしたアクリル樹
脂で出来ている。普段はキャップを締めたままキャップ
を下向きＪこして冷蔵庫に保存する。
−ラジカル反応液の組成喝、５ ｄｉｍｅｔｈｙｌ−１
−ｐｙｒｒｏｌｉｎｅ−ｎ−ｏｘｉｄｅ （’ｉ！子
スビスピン共鳴法用、 ０５Ｍ、高速液体クロマトグラ
フィー用は０．０００２５Ｍ） 、 ＮａＣ１１３６ｍ
Ｍ、 ＩＣ１２，７ｍＭ、 ＮａＨ２ＰＯ４０，５ｉ
Ｍ、 Ｎａｌ’ＩＣ０３１０１Ｍ、 ｐ［Ｉ７．４・電
子スピン共鳴法の設定条件＋７Ｍチュープルを朋いる。
−ｐｙｒｒｏｌｉｎｅ−ｎ−ｏｘｉｄｅ （’ｉ！子
スビスピン共鳴法用、 ０５Ｍ、高速液体クロマトグラ
フィー用は０．０００２５Ｍ） 、 ＮａＣ１１３６ｍ
Ｍ、 ＩＣ１２，７ｍＭ、 ＮａＨ２ＰＯ４０，５ｉ
Ｍ、 Ｎａｌ’ＩＣ０３１０１Ｍ、 ｐ［Ｉ７．４・電
子スピン共鳴法の設定条件＋７Ｍチュープルを朋いる。
試料は偏平セルにｓｏｏμ＋吸い上げ、 ｘ−ｂａｎｄ
、ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ １００
ｋｔｌｚ、 ＊ｏｄｕｌａＮｏｎａｍｐｌｉｔｕｄｅＯ
，ＳＧ、ｍｉｃｒｏｗａｖｅｐｏｗｅｒ９．４−９．７
ＧＨｚ、ｍｉｃｒｏｗａｖｅｐｏｗｅｒ８０−１０ｉｆ
、 ２９５０−３３５０Ｇのスペクトルを求める。全体
の測定時間は３分以内で行なう。
、ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ １００
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，ＳＧ、ｍｉｃｒｏｗａｖｅｐｏｗｅｒ９．４−９．７
ＧＨｚ、ｍｉｃｒｏｗａｖｅｐｏｗｅｒ８０−１０ｉｆ
、 ２９５０−３３５０Ｇのスペクトルを求める。全体
の測定時間は３分以内で行なう。
得られたスペクトルの２同項分した高さがフリーラジカ
ル濃度である。ラジカル種はスペクトルの形状により決
定される。
ル濃度である。ラジカル種はスペクトルの形状により決
定される。
、高速液体クロマトグラフィーの設定条件：分離カラム
、 ＴＯＳＯ社＆’ＴＳＫ−８０ＴＭに分離溶液（アセ
トニトリル：超純水：メチルアルコール：酢ｆｌ＝５：
５： ４ ； ０．０２）を流速１ｍ１／分で流す、試
料１０μｍを注入し、２−５分後に捉えられる。波長２
３７ ｎ ｍの光を吸収する物質のピークをグラフに描
きその面積を計算し、対照の既知濃度の５．５ｄｉｍｅ
ｔｈｙｌ−１−ｐｙｒｒｏｌｉｎｅ−ｎ−ｏｘｉｄｅラ
ジカルアダクトと比較し濃度を求める。
、 ＴＯＳＯ社＆’ＴＳＫ−８０ＴＭに分離溶液（アセ
トニトリル：超純水：メチルアルコール：酢ｆｌ＝５：
５： ４ ； ０．０２）を流速１ｍ１／分で流す、試
料１０μｍを注入し、２−５分後に捉えられる。波長２
３７ ｎ ｍの光を吸収する物質のピークをグラフに描
きその面積を計算し、対照の既知濃度の５．５ｄｉｍｅ
ｔｈｙｌ−１−ｐｙｒｒｏｌｉｎｅ−ｎ−ｏｘｉｄｅラ
ジカルアダクトと比較し濃度を求める。
・フリーラジカル測定キットの使用法
キ・、トのキヤツジを外し、キットの上段に血７４１１
００μＩを加え、キャップを締めて軽く振り、スイング
式低速遠心機でまず６００回転毎分２分間、続いて３０
００回転毎分で５分間遠心する。遠心後、キット下段を
外し１分離された５、 ５−ｄｌｓｅｔｈｙｌ−１−ｐ
ｙｒｒｏＩ Ｉｎｅ−ｎ−ｏｘｉｄｅラジカルアダクト
を電子スピン共鳴法と高速液体クロマトグラフィー法で
定量する。
００μＩを加え、キャップを締めて軽く振り、スイング
式低速遠心機でまず６００回転毎分２分間、続いて３０
００回転毎分で５分間遠心する。遠心後、キット下段を
外し１分離された５、 ５−ｄｌｓｅｔｈｙｌ−１−ｐ
ｙｒｒｏＩ Ｉｎｅ−ｎ−ｏｘｉｄｅラジカルアダクト
を電子スピン共鳴法と高速液体クロマトグラフィー法で
定量する。
４゜図の説明図面の簡単な説明
この図は、フリーラジカル測定キットを示している第１
図は平面図、第２図は立面図、第３図は底面図であるキ
ットは円柱状で先端は細くなっている。上端には牛ヤノ
ブが付いている。
図は平面図、第２図は立面図、第３図は底面図であるキ
ットは円柱状で先端は細くなっている。上端には牛ヤノ
ブが付いている。
キット内部は透過性のある膜により三段に別れており、
上段にラジカル反応液２００μｌが入っている。
上段にラジカル反応液２００μｌが入っている。
上段と中段は薄い濾紙で、中段と下段は限外濾過膜によ
り区切られている。
り区切られている。
キットの中段と下段の間にはキットの壁に切れ込みがあ
り１手で下段を外すことが出来る。キットは全長５ｃｍ
、直径２ｃｍの大きさである第−図 上面図。
り１手で下段を外すことが出来る。キットは全長５ｃｍ
、直径２ｃｍの大きさである第−図 上面図。
第二図
正面図
第三図
底面図
ｉ＋２Ｄ鴫−
Claims (1)
- 血液をスピントラップ剤溶液と反応させ、直ちに溶液中
からスピントラップ剤ラジカルアダクトを２枚の膜を濾
過させて試料分離する簡易キット及び、その分析方法の
電子スピン共鳴法と高速液体クロマトグラフィー法の設
定条件
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34487389A JPH03211460A (ja) | 1989-12-31 | 1989-12-31 | フリーラジカル測定キット及び測定条件 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34487389A JPH03211460A (ja) | 1989-12-31 | 1989-12-31 | フリーラジカル測定キット及び測定条件 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03211460A true JPH03211460A (ja) | 1991-09-17 |
Family
ID=18372653
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34487389A Pending JPH03211460A (ja) | 1989-12-31 | 1989-12-31 | フリーラジカル測定キット及び測定条件 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03211460A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0699904A1 (en) * | 1994-09-02 | 1996-03-06 | Kureha Chemical Industry Co., Ltd. | Method for detecting organopathyinducing factors |
| WO1996009540A1 (en) * | 1994-09-21 | 1996-03-28 | Diacron S.R.L. | Reagent for the determination of free radicals |
| US6355489B1 (en) | 1997-03-21 | 2002-03-12 | Diacron S.R.L. | Method for the determination of oxygen-centered free radicals |
| JP2008224318A (ja) * | 2007-03-09 | 2008-09-25 | Olympus Corp | 多層型凝集判定容器 |
-
1989
- 1989-12-31 JP JP34487389A patent/JPH03211460A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0699904A1 (en) * | 1994-09-02 | 1996-03-06 | Kureha Chemical Industry Co., Ltd. | Method for detecting organopathyinducing factors |
| WO1996009540A1 (en) * | 1994-09-21 | 1996-03-28 | Diacron S.R.L. | Reagent for the determination of free radicals |
| US6355489B1 (en) | 1997-03-21 | 2002-03-12 | Diacron S.R.L. | Method for the determination of oxygen-centered free radicals |
| JP2008224318A (ja) * | 2007-03-09 | 2008-09-25 | Olympus Corp | 多層型凝集判定容器 |
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