JPH03128324A - 光活性化によりアントラサイクリンの細胞毒性を増強する方法 - Google Patents
光活性化によりアントラサイクリンの細胞毒性を増強する方法Info
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- JPH03128324A JPH03128324A JP2137301A JP13730190A JPH03128324A JP H03128324 A JPH03128324 A JP H03128324A JP 2137301 A JP2137301 A JP 2137301A JP 13730190 A JP13730190 A JP 13730190A JP H03128324 A JPH03128324 A JP H03128324A
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
-
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(発明の産業上の利用分野)
本発明は、500〜700nmの波長の光の助けによる
アントラサイクリンの光活性化方法に関するものであり
、この方法により、これらの物質の細胞毒性が10〜1
0000因子だけ増加される。
アントラサイクリンの光活性化方法に関するものであり
、この方法により、これらの物質の細胞毒性が10〜1
0000因子だけ増加される。
本発明の特に重要な特徴は、可視スペクトルの赤色範囲
内に含まれる波長の照射の使用である。
内に含まれる波長の照射の使用である。
(発明の詳細な説明)
本発明のアントラサイクリンの光活性化方法の特徴及び
利点が、以下に更に詳細に示される。
利点が、以下に更に詳細に示される。
再蒸留脱イオン水中の濃厚アントラサイクリン溶液のア
リコートが、通常の細胞培地で適当に希釈されて、培養
に適した濃度を得る。
リコートが、通常の細胞培地で適当に希釈されて、培養
に適した濃度を得る。
細胞培養液は、培地及び容器(例えば、べ) IJ皿、
フラスコ等)の両方に関する限り、通常の方法により調
製される。
フラスコ等)の両方に関する限り、通常の方法により調
製される。
細胞毒性効果を測定し、且つ評価するために、好適な通
常の技術は、細胞の型、測定すべき効果(細胞増殖に関
する効果、種々の細胞成分の合成活性に関する効果、形
態学的効果、構造的効果及び超構造的効果、生体細胞の
比率に関する細胞活力度、等)に応じて選択され使用さ
れる。
常の技術は、細胞の型、測定すべき効果(細胞増殖に関
する効果、種々の細胞成分の合成活性に関する効果、形
態学的効果、構造的効果及び超構造的効果、生体細胞の
比率に関する細胞活力度、等)に応じて選択され使用さ
れる。
カプセルは、1〜48時間の期間にわたってアントラサ
イクリンを含む新しい培地により培養される。
イクリンを含む新しい培地により培養される。
アントラサイクリン濃度は、通常、投与が照射の不在下
で行なわれる場合に検出可能な方法で検討中の効果を生
じる値よりも低い。
で行なわれる場合に検出可能な方法で検討中の効果を生
じる値よりも低い。
培養中、培養液は、培養に使用されるアントラサイクリ
ンの可視吸収帯内の500〜700nmの範囲中の選ば
れた波長の光でもって、5〜500n+W / crA
の強さ、i 0〜500 J /c+ftの光線量で照
射される。
ンの可視吸収帯内の500〜700nmの範囲中の選ば
れた波長の光でもって、5〜500n+W / crA
の強さ、i 0〜500 J /c+ftの光線量で照
射される。
光は生物試験体に対し垂直方向で投与され、所望の波長
の照射を得るためにレーザーまたは適当にフィルターさ
れたランプにより発生させる。
の照射を得るためにレーザーまたは適当にフィルターさ
れたランプにより発生させる。
レーザーの使用は、光学繊維または光案内技術が光輸送
のために使用される場合に、必須である。
のために使用される場合に、必須である。
処理は、処理中の細胞試験体に最適の雰囲気及び温度条
件が確保される室中で行なわれる。
件が確保される室中で行なわれる。
照射は、アントラサイクリンの存在下で行なわれ、15
分と細胞中のアントラサイクリンの全永存時間との間の
期間を有する。
分と細胞中のアントラサイクリンの全永存時間との間の
期間を有する。
本発明者らは、アントラサイクリンによる最初の30分
間の培養が比較的小さな効果のものであること、及び所
定の光線量による光活性化により最高の直接の細胞毒性
効果を得るためには60〜90分の最適時間が存在する
ことを見い出した。
間の培養が比較的小さな効果のものであること、及び所
定の光線量による光活性化により最高の直接の細胞毒性
効果を得るためには60〜90分の最適時間が存在する
ことを見い出した。
処理に好適なアントラサイクリンは、可視吸収ビク(こ
れは、もとのダウマイシン分子及びアドリアマイシン分
子に関して約480nmにある)の500〜700nm
の波長へのシフトに関与する置換基を有する、ダウノル
ビシン(ダウノマイシン)誘導体及びドキソルビシン(
アドリアマイシン)誘導体である。例として、イミノ誘
導体及びアミノ誘導体が挙げられる。更に一般に、本発
明者らは、本発明の光活性化方法が500〜700r+
mの範囲内で吸収を示す全てのアントラサイクリンに適
用し得ることを見い出した。
れは、もとのダウマイシン分子及びアドリアマイシン分
子に関して約480nmにある)の500〜700nm
の波長へのシフトに関与する置換基を有する、ダウノル
ビシン(ダウノマイシン)誘導体及びドキソルビシン(
アドリアマイシン)誘導体である。例として、イミノ誘
導体及びアミノ誘導体が挙げられる。更に一般に、本発
明者らは、本発明の光活性化方法が500〜700r+
mの範囲内で吸収を示す全てのアントラサイクリンに適
用し得ることを見い出した。
本発明者らは、本発明の光活性化処理により、光活性化
の不在下でごく限られた結果を与えるアントラサイクリ
ン投薬量で得られる細胞毒性活性が、処理後の経口の細
胞増殖の如き長期効果に関して測定した場合に10の因
子だけ増大され、処理の終了時の細胞死亡の如き直接の
効果に関して測定した場合に典型的に10000の因子
だけ増大されることを見い出した。
の不在下でごく限られた結果を与えるアントラサイクリ
ン投薬量で得られる細胞毒性活性が、処理後の経口の細
胞増殖の如き長期効果に関して測定した場合に10の因
子だけ増大され、処理の終了時の細胞死亡の如き直接の
効果に関して測定した場合に典型的に10000の因子
だけ増大されることを見い出した。
これらの結果は、腫瘍学分野に於いて極めて重要であり
、この分野では、知られているように、アントラサイク
リンは重い副作用を伴なう細胞毒性活性を示す。事実、
本発明の処理により、減少されたアントラサイクリン投
薬量で高い細胞毒性効果を得、こうして副作用を減少す
ることが可能である。
、この分野では、知られているように、アントラサイク
リンは重い副作用を伴なう細胞毒性活性を示す。事実、
本発明の処理により、減少されたアントラサイクリン投
薬量で高い細胞毒性効果を得、こうして副作用を減少す
ることが可能である。
更に、光活性化は、組織及び血液の両方が比較的透過性
である波長の光の助けにより起こることが非常に重要で
ある。
である波長の光の助けにより起こることが非常に重要で
ある。
以下の実施例は、説明の目的のために示されるものであ
り、限定目的のために示されるものではない。
り、限定目的のために示されるものではない。
災施拠土
FRT L5として分類されるフィッシャーラット甲
伏線細胞(Fisher Rat Thyroid C
e1l)の培養を、5%の牛血清(グランド・アイラン
ド・バイオロジカル・カンパニイ(Grand Isl
andBiological Co、) )の添加でも
ってコーン(Coon)(K、C,バイオロジカル・カ
ンバニイ(BiologicalCO,))により改良
されたハム([lam) F −12培地中で5%のC
ozを含む雰囲気中37°Cの保温によりペトリ皿中で
通常に行なった。
伏線細胞(Fisher Rat Thyroid C
e1l)の培養を、5%の牛血清(グランド・アイラン
ド・バイオロジカル・カンパニイ(Grand Isl
andBiological Co、) )の添加でも
ってコーン(Coon)(K、C,バイオロジカル・カ
ンバニイ(BiologicalCO,))により改良
されたハム([lam) F −12培地中で5%のC
ozを含む雰囲気中37°Cの保温によりペトリ皿中で
通常に行なった。
増殖曲線を測定するために、適当な数の培養ペトリ皿を
トリプシン処理しくtrypsinized)、ついで
細胞を、約106個/ m 1の細胞濃度を有するよう
な方法で増殖培地中で再懸濁した。105個程鹿の細胞
数を含む懸濁液容量を直径60mmの皿に注ぎ、3 m
!!、の培地で覆い、種々の皿中の均一な細胞分布を有
するために細胞懸濁液を撹拌下に保った。
トリプシン処理しくtrypsinized)、ついで
細胞を、約106個/ m 1の細胞濃度を有するよう
な方法で増殖培地中で再懸濁した。105個程鹿の細胞
数を含む懸濁液容量を直径60mmの皿に注ぎ、3 m
!!、の培地で覆い、種々の皿中の均一な細胞分布を有
するために細胞懸濁液を撹拌下に保った。
皿を保温槽中に24時間入れ、ついで5−イミノダウノ
マイシン(5−IDと称する)を含む新しい反応培地で
2時間保温した。
マイシン(5−IDと称する)を含む新しい反応培地で
2時間保温した。
5−イミノダウノマイシンを、脱イオン再蒸留水中の1
.78X10−’M溶液中で調製し、0.50.200
.400及び11000n/ n/!の濃度を有するよ
うな量で種々の皿に添加した。
.78X10−’M溶液中で調製し、0.50.200
.400及び11000n/ n/!の濃度を有するよ
うな量で種々の皿に添加した。
これらの皿の保温は暗所で行ない、一方、同時に、同様
にして調製し50ng/n/!のイミノダウノマイシン
濃度を有する皿を、595nmの波長の赤色光照射下で
保温した。
にして調製し50ng/n/!のイミノダウノマイシン
濃度を有する皿を、595nmの波長の赤色光照射下で
保温した。
光は90°の角度で皿に達し、横断光線断面は皿の部分
よりも大きかった。照射密度は皿中央部で40 mW
/ c++lであり、端部で15 mW / CTAで
あった。
よりも大きかった。照射密度は皿中央部で40 mW
/ c++lであり、端部で15 mW / CTAで
あった。
投与された光L%Iを、34mW/cfflの平均密度
に基いて計算し、245J/cnlであることがわかっ
た。
に基いて計算し、245J/cnlであることがわかっ
た。
培養液を、37°Cの空気流中の室内で照射した。
処理の結果を第1図に示す。この図は、皿の媒精(0日
日)及び2時間の保温(1日日)の後の日数の関数とし
て生存細胞/ralの計数を示す。
日)及び2時間の保温(1日日)の後の日数の関数とし
て生存細胞/ralの計数を示す。
第1図の曲線の意味は、以下のとおりである。
(a) Q X(b)
50 X(C)
200 X(d) 400
X(e) 1000
X(f) 50
x曲線(f)を曲線(b)と比較して、50n
g/mlの5−IDによる2時間の保温が、生存の細胞
数の大きさの程度を低げることをもたらすことがわかる
。
50 X(C)
200 X(d) 400
X(e) 1000
X(f) 50
x曲線(f)を曲線(b)と比較して、50n
g/mlの5−IDによる2時間の保温が、生存の細胞
数の大きさの程度を低げることをもたらすことがわかる
。
災胤拠主
実施例1の方法に従って、FRT L5細胞を再懸濁
し、血中に分布させ、72時間保温した。
し、血中に分布させ、72時間保温した。
この時点で、5−IDを、11000n/ mlの培地
中の濃度を有するような量で皿に導入し、皿を2時間保
温した。この期間中、種々の皿を、平均34mW/cf
flの皿上の一定の照射密度で15〜120分の時間に
わたって595nmの赤色光で照射した。
中の濃度を有するような量で皿に導入し、皿を2時間保
温した。この期間中、種々の皿を、平均34mW/cf
flの皿上の一定の照射密度で15〜120分の時間に
わたって595nmの赤色光で照射した。
夫々の照射期間は、その終了が保温の終了と一敗するよ
うに選んだ。
うに選んだ。
120分で皿に投与された光の平均線量は、245J/
c這であった。
c這であった。
結果が第2図に示され、図中、未照射培養液に対する細
胞生存率が光線ffi (J /CTA)の関数として
表わされる。
胞生存率が光線ffi (J /CTA)の関数として
表わされる。
これらの結果は、この実施例の処理が短時間(約30分
)で高致死効果を有し、一方、短時間の同じ5−D11
度に於ける照射しない保温は測定し得る効果をもたない
ことを実証する(第1図の曲線(e)を参照のこと)。
)で高致死効果を有し、一方、短時間の同じ5−D11
度に於ける照射しない保温は測定し得る効果をもたない
ことを実証する(第1図の曲線(e)を参照のこと)。
実益盟主
夫々の皿を、5−IDによる2時間の保温中にわずかに
15分間照射した以外は、実施例2を繰返した。
15分間照射した以外は、実施例2を繰返した。
上記の15分の照射を、保温の開始に関して次第に遅ら
せて、正確には0.15分、30分、45分、60分、
75分、90分及び105分の遅延でもって、開始した
。
せて、正確には0.15分、30分、45分、60分、
75分、90分及び105分の遅延でもって、開始した
。
結果が第3図に示され、図中、未照射培養液に対する細
胞生存率が、5−IDによる保温の開始に関して照射開
始からの遅延の関数として示される。
胞生存率が、5−IDによる保温の開始に関して照射開
始からの遅延の関数として示される。
この図から、最良の結果が60〜90分の遅延により得
られることがわかる。
られることがわかる。
第1図は、皿の媒精後の日数の関数として生存細胞/m
eの計数を示すグラフである。 第2図は、光線量(J/c++りの関数として未照射培
養液に対する細胞生作率を示すグラフである。 第3図は、5−IDによる保温の開始に関して照射開始
からの遅延の関数として、未照射培養液に対する細胞生
存率を示すグラフである。 第 図 00 00 (J/am2)
eの計数を示すグラフである。 第2図は、光線量(J/c++りの関数として未照射培
養液に対する細胞生作率を示すグラフである。 第3図は、5−IDによる保温の開始に関して照射開始
からの遅延の関数として、未照射培養液に対する細胞生
存率を示すグラフである。 第 図 00 00 (J/am2)
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、細胞中のアントラサイクリンの永存中に、500〜
700nmを含む波長の光による照射による光活性化方
法が行なわれることを特徴とする、アントラサイクリン
の細胞毒性を増強する方法。 2、前記の照射が、アントラサイクリンの可視吸収帯に
含まれる波長の光により行なわれることを特徴とする、
請求項1記載の方法。 3、前記の照射が5〜500mW/cm^2の強さで行
なわれることを特徴とする、請求項1記載の方法。 4、前記の照射が10〜500J/cm^2の光線量で
行なわれることを特徴とする、請求項1記載の方法。 5、前記の照射がレーザー光により行なわれることを特
徴とする、請求項1記載の方法。6、前記の照射が、ラ
ンプにより発生され適当にフィルターされた光により行
なわれることを特徴とする、請求項1記載の方法。 7、光が、案内光技術により投与されることを特徴とす
る、請求項1記載の方法。 8、前記の照射が細胞中のアントラサイクリン永存の期
間内に投与されることを特徴とする、請求項1記載の方
法。 9、処理に適したアントラサイクリンが、可視吸収ピー
クの500〜700nmを含む波長へのシフトを伴なう
置換基を有する、ダウノルビシン(ダウノマイシン)の
誘導体及びドキソルビシン(アドリアマイシン)の誘導
体であることを特徴とする、請求項1記載の方法。 10、人間及び動物の治療に使用される、請求項1〜9
記載の方法。 11、腫瘍治療に使用される、請求項10記載の方法。
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---|---|---|---|
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IT20679A/89 | 1989-05-29 |
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Family Applications (1)
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