JPH02503918A - 経口活性化されたヘパリンムコ多糖体ベースの組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 経口活性化されたヘパリンムコ多糖体ベースの組成物 本発明は、経口投与されたとき血液凝固に対し調節特性を有する、ヘパリンムコ 多糖体ベースの組成物に関する。

本書で用いられている「ヘパリンムコ多糖体」　（又は同等の表現である「グリ コサミノグリカン」）という語は、特に以下に挙げるもののような、血液凝固因 子のうち少なくとも１つに作用することのできる全てのムコ多糖体を網羅してい るニ ー　その標準分子量が約５ｏｏｏ〜５００００であるような多ＦｔＪで形成され た、「古典的コなものとして分類できるヘパリン、 −より短い多糖類特に５〜３０の糖モチーフを含みうるオリゴ糖で形成された化 合物又は混合物、特により長いヘパリン鎖の物理的又は化学的断片化により得ら れる混合物、 −特に５〜８の糖モチーフを含む合成オリゴ糖、特に、Ａ　Ｔ　ＩＩＩに対する 定着部位を有するもの、−上述のさまざまなヘパリンムコ多糖体の塩、特に、ナ トリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩。

血液凝固のレベルで介入する単数又は複数の因子に対し作用することができると いうその能力を活用する療法において、ヘパリンムコ多糖体が提供する治療可能 性は、すでに良く知られていることである。ヘパリン自体のもつ周知の凝固阻止 特性については、ここで固執するまでもない、比較的分子量の低いヘパリンムコ 多糖体、特にＡ　Ｔ　１１に対する親和性を特徴とするヘパリンムコ多糖体の有 効性はすでに実証されている。

これらは、静脈又は動脈血栓症又はその他の静脈又は動脈血栓塞栓症の症状の予 防又は治療に用いることができ成功をおさめている。

特に静脈内、動脈内又は皮下でのこれらのヘパリンムコ多糖体化合物のいくつか の投与実験記録が、すでに完成している。しかしながら、全て腸管外であるこれ らの投与方法は、患者にとって不快感及び障害（血腫・・・）の原因であり、治 療の多くは長期にわたり毎日複数回の注射を必要とする可能性があることから一 層制約がある。

確かに腸管外経由とは別の投与方法も提案されてきている６例えば、直腸経由（ 農薬を用いることによる）、皮膚経由（軟膏を用いて）、肺経由（吸入による） 、舌下といった投与方法を挙げることができる。

しかしこれらの新しい投与経路において用いられる化合物の効能はなお、往々に して局所的で緩慢かつわずかなものであり、ひいては不確かでさえありつづけて いる。

しかしながら、今日までに行なわれてきた数多くの研究にもかかわらず、また胃 内でのヘパリンの既知の安定性にもかかわらず、経口投与された場合に真に効果 的であるヘパリンムコ多糖体ベースの化合物を開発することはなお不可能であっ た。

本発明はこの重大な問題点を補正し、特に、経口投与された場合に、これまで腸 管外投与されたヘパリンムコ多糖体化合物によってのみ治療することのできた疾 患と同じクイブの疾患の治療のためにこの投与形態での療法に使用できるほどの 充分な効率レベルで生体内でその血液凝固調節特性を示す可能性の高いヘパリン ムコ多糖体化合物を提供すること、をその目的とする。

本発明に基づく組成物は、 ａ）少なくとも１つのヘパリンムコ多糖体、ｂ）腸粘膜レベルで吸収されつる、 生理学的に受容可能な少なくとも１つの単ｒＩＮ類、 Ｃ）少なくとも１つの金属陽イオンの生理的に受容可能なイオン塩 を組み合わせて含んでいること、そしてこれらの構成成分ａ、ｂ及びＣの相互の 割合は、かかる組成物が経口にて投与された場合にこれが生体内で血液凝固阻止 作用を誘発することができるようにするものであること、を特徴とする。

当該発明人は、実際、ムコ多糖体ａ）に対して前記成分ｂ）及びＣ）を１つの組 成物の形で結びつけることによって、多糖類の消化粘膜通過ならびに血液循環路 内のその通過が有利になるということを発見した。

ただし当然のことながら、これは１つの仮定にすぎず、本発明に基づく組成物の 種々の主要成分のそれぞれの作用方法の最終的説明方法としてみなされ得ないも のである。

本発明に基づく好ましい組成物においては、単＊＊は、グルコース又はレブロー スといったヘキソースである。

さらに好ましくは、本発明に基づく組成物中の金属陽イオン塩は、塩化物である 。この選択がもたらす特別な利点の１つは、代謝的機能との塩化物の優れた相容 性の結果として得られるものである。塩化物の金属陽イオンは、有利なことに、 アルカリ土類金属とくにカルシウム又はマグネシウムの系統に、或いは又特にナ トリウム又はカリウムといったアルカリ金属の系統に属する。この塩は、塩化ナ トリウム好ましくは塩化カルシウムであることが最も多い。

又、ヘパリンがカルシウム塩の状態にある場合（ヘパリン化カルシウム）、これ は化合物の経口活性にほとんど介入しないということに留意されたい、実際、全 く異なる陽イオンのイオン塩の無い、ヘパリン化カルシウムとグルコースの混合 物は、経口で著しい効能をもたない。

同様に、グルコースを含まない、ヘパリンとイオン塩の化合物は、経口投与を行 なった場合治療に用いるのに有効な効能を持たない、ということが確認された。

上述のようなことからすでに、この組成物が経口投与される場合、その３つの主 要成分はその効能を確実なものにするためそれぞれ定められた相互の割合になけ ればならない、という結果が得られる。

当然のことながら以下に示す化合物の例は、場合によって異なる３つの構成成分 の最適な割合のレベル（特に単糖類及びイオン塩のレベル）における変動をもひ きおこしうる選択である、経口による活性をもつ組成物の形に結びつけられつる 構成成分の選択を、いかなる点でも制限する意味を持つものではない。

従って、経口投与により効能を表わす好ましい組成物は、ヘパリンみコ多糖体、 単糖類、陽イオン塩という構成成分を以下のような相対的割合で含んでいるニ ア　場合によって６００〜２５００ｕＳ１）単位、又は６００〜２５００抗−Ｘ ａ単位又は４〜１７ｍｇのヘパリンムコ多糖体、 −４〜６０ｍｇの単糖類。

−０，５〜１００ｍｇの陽イオン塩。

特に好ましい組成物は、次のものを特に含んでいるニ ー　場合によって６００〜２５００ｕｓｐ単位、又は６００〜２５００抗−Ｘａ 単位、又は４〜１７ｍｇのヘパリンムコ多糖体、 ＝　４〜５０ｍｇのグルコース、 −１，８３ｍｇ〜１４．６４ｍｇのカルシウムイオン及び３．２４ｍｇ〜１９． ９２ｍｇの塩素イオンという割合に相当する、１０〜８０ｍｇの塩化カルシウム 。

第２の有効な組成物は、以下のものを含んでいるニ ー　場合によって６０Ｃ１〜２５００ｕｓｐ単位、又は６００〜２５００抗−Ｘ ａ単位、又は４〜１７Ｂのヘパリンムコ多糖体、 −４〜６０ｍｇのレブロース又はｄ−フルクトピラノース −１０〜８０ｍｇの塩化カルシウム。

もう１つの有効な組成物には、次のものが含まれているニ ー　場合によって６００〜２５００ｕｓｐ単位、又は６００〜２５００抗−Ｘａ 単位、又は４〜１７ｍｇのヘパリンムコ多糖体、 −５〜５０ｍｇのグルコース及び −０，９〜９ｍｇの塩化ナトリウム。

抗−Ｘａ単位は、プラズマ活性に関しヘパリンの国際基準（エタロン）に基づい て表現される。

経口投与のための本発明に基づく薬学的化合物は、一般に、生体内にて血液凝固 に対する求められる調節効果を誘発するためのヘパリンムコ多糖体の有効用量に よって示された相互の相対的割合で前述のとおりの構成成分を、場合によっては 経口投与に適した受容可能な薬学的賦形剤と結びつけた形で、含んでいる。特に 、固体又は液体の佐薬は、選択された経口投与形状（錠剤、カプセル、回数溶液 など）に応じて選択される。

本発明に基づく組成物の有利な投与方法は、薬学的に受容可能な賦形剤中の溶液 の形での投与である。

本発明に基づく組成物の好ましい体裁は、この化合物を０．７〜１−特に０．８ −の溶液量の中に入れることから成るものである。

同様に、本発明に基づく組成物は、直腸、舌下投与、又はその他の有効なあらゆ る投与方法にても投与されつる。

この薬学的組成物の単位用量は、例えば６００〜２５００ｕｓｐ単位のヘパリン を含んでいる。

ヒトにおける投与薬用量を以下に一例として示すニ ー　治療すべき又は予防すべき病理に従って、場合に応じ１０００〜ｌ　０ＯＯ ＯＯｕｓｐ単位又はヘパリンとの関係において計算された１０００〜１００００ ０抗−Ｘａ単位の形で、標準的体形（６０〜８０ｋｇ）の患者−名に対し、本発 明に基づく組成物を経口投与する。

−投与は、−日３〜４回の間隔で反復する。

治療前及び治療中に行なわれた分析の既知の結果を考慮に入れるため、この治療 の方法を調整することも当然可能である。

本発明のもう１つの実施態様によると、前述の組成物は、血液凝固に対する調節 活性を有し経口投与可能な薬剤の製造に応用することができる。

本発明に基づく組成物のその他の特徴は、本発明に従った好ましい化合物、これ らの化合物を用いて行なわれた薬学的研究ならびに得られた結果についての以下 の記述から、より良く理解できることと思われる。

これらの結果は、通常腸管外投与されたムコ多糖体化合物により治療される血液 凝固のさまざまな障害を予防及び治療するため、経口で投与された本発明に基づ く組成物が示しうる効能を説明してくれている。

本発明を示す例の各々について詳細に述べる前に、−Ｍ的な操作法（プロトコー ル）について喚起しておきたい、なお、異なる例に特定的なこのプロトコールに 対する変更については、報告の途中で記すものとする。

例において関　されたー　・プロトコール化合物は、注射器にとりつけた金属製 の対型カニユーレを用いて、時間１＝００時点で被験動物（ウサギ又はラット） に対し経口投与する。

ウサギについては後で採血を行なうため、大腿静脈を除去すべく約２センチの切 開を行なった後各々のウサギの腿の内側部分のレベルで大腿静脈内にカテーテル を設置する。使用する被験動物がラットである場合、採廂は、心向穿刺により行 なわれる０次に、ラットは安楽死させるのに対し、ウサギは、固定ボックス内で 生理的食塩水の持続注入下に置く。

生物学的試験を行なうために、ヘパリンの投与直前の時間ｔ＝０．その後ｔ＝１ 時間、ｔ＝２時間、ｔ＝３時間の時点で、採血を行なう、その度毎に血液は、９ ％のクエン酸塩上でＥＰＰＥＮＤＯＲＦ社製試験管内に集められ、次に遠心分離 を受ける。その後、血漿を２本の試験管に分け、そのうちの１本を凍結させて保 存し、もう１本を用いて、生物学試験を実施する。

本発明において問題にされている生物学試験は、血漿活性の誘発により確認する ことのできる、投与された物質の十二指腸での吸収を測定する目的を持つ血漿定 量である。この血漿活性は、以下に記す４つの試験の研究に依存する： １）総括的凝固試験、ケファリン−カオリン時間試験従って抗トロンビンＩＩＩ （ＡＴＩＩ＋）に対するヘパリンの親和力により抑制された因子の研究を可能に する試験である。この試験は、５ＴＡＧＯ研究所から市販されている試薬を用い 、Ｌａｎｇｄｅｌｌ他［ｒ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆａｎｔｉ−ｈｅｍｏｐｈｉｌｉ ｃ　Ｆａｃｔｏｒ　ｏｎ　ｏｎｅ−ｓｔａｇｅ　ｃｌｏｔｔｉｎｇｔｅｓｔｓ　 　（Ｊｄｌｔ階凝固試験に対する抗血友病因子の作用）　Ｊ　Ｊ、　Ｌａｂ、　 Ｃ１１ｎ、　Ｉｎ５ｅｒｔ　　４１−６３７゜６４７．１．９５３年、内コ及び Ｌａｒｒｉｅｕ　Ｈ，Ｊ、、　Ｇ、Ｗｅｉｌａｎｄ　　［ｒ凝固試験におけるケ ファリンの使用」。

Ｎｏｖ、　Ｒｅｗ、　Ｆｒａｎｇａｉｓｅ、　Ｈｅｍａｔｏｌ、　　１２−２． 　１９９−２１０．１９５９年、内〕による症来の方法を用いて、行なわれる。

２）抗トロンビン−１７１活性 −トロンビン（凝固）時間（ＴＴ） トロンビン時間により、抗トロンビンｒＩＩを介して。

トロンビンに対するヘパリンの抑制能力を研究することができる。測定されたト ロンビン時間は、実際には、濃縮トロンビンの時間であり、′に？１度のヘパリ ンが存在する中でしか延ばされない。

３）タイトラワン タイトラワン（予備滴定されたトロンビン）の存在する中で測定されたこの凝固 時間は、循環性ヘパリンに応じて直接得られる血漿の凝固時間である。従ってこ れにより、トロンビン時間の測定値を制御することができる。

４）抗−Ｘａ活性：　ＨＥＰＡＣＬＯＴこの生物学的試験は、５ＴＡＧＯ研究所 が開発した方法に基づくヘパリンの抗−Ｘａ血漿活性の研究を可能にする時間測 定試験である。この試験は、５ＴＡＧＯ研究所から市販されている適当な試薬を 用いて行なわれた。

以下の試験は、最も頻繁には市販のヘパリンを用いて実施された。つまり、２５ ０００単位／−の力価をもつ（なおこれらの単位は以下ｒｕＪという文字で示す ）／＼バリンのカルシウム塩である。その他のヘパリンが用いられる場合には、 その旨明記する。

結果は、場合によって、相応する例の中で記されている条件の下では縦座標の軸 の上に又時々は横座標の軸の下に与えられている指示及び尺度を基準にして、測 定された時間に相当する高さをもつ垂直方向の棒の形でこれらの結果を示すグラ フ表示を用いて、図中に示されている。

匠−ユ せイカルシウム　び　ルコースの　　　る中でさまざまな　　でヘパリンを　む 　　　の　０使用される被験動物はニューシーラント系のｒＡＬＥＩＮＯ３Ｊ種 の成熟した雄のウサギであり、その平均体重は２　ｋｇ５００　”ＣＢｌａｎｑ ｕｅｆｏｒｔのＥＶＩＣＣＥＢＡ飼育場（３３２９０）からきたものである。

これらのウサギを、ＫＥＴＡＬＡＲという商品名で知られている麻酔剤（ＬＩＬ ＬＹ研究所）の筋肉的投与により（１００ｍｇ／　ｋｇ）麻酔する。

経口投与される組成物は、２５００ｕｓｐ単位すなわち２５００抗−Ｘａ単位す なわち１５ｍｇ含カルシウムヘパリン、３０ｍｇの塩化カルシウム及び２０ｍｇ のグルコースを総量０．８０−に対して含んでいる混合溶液である。

経口による３つの薬用量が研究の対象となった。

３つのグループのウサギは、それぞれ体重１ｋｇあたり１２５０ｕ、６００ｕ及 び３００ｕを限度として上記混合物の用量を受ける。

比較を目的として、もう１つのグループのウサギは尻下投与で１２５０ｕのヘパ リン（ウサギの体重１ｋｇあたり）を受け、対照グループは、経口投与で、ただ し他の２つの構成要素が無い状態で同じ用量のヘパリンを受け、プラシーボグル ープは、同じ量の生理溶液を受ける。

有利な血漿定量は一般的プロトコールに定義づけられてるＴ、Ｃ，に、及びＴ、 Ｔ、生物学試験により実施される。

これらの試験に関係する結果は、次の表１及び表ＩＩの中にまとめられている： 表　Ｉ Ｔ、Ｃ，に、の測定 ０　　２６ｓ２　　２５．５ｔ４，７　２２．３ｔ’１９　２４７５０．３　　 　＋８．５　　１８ｎ”３　　　　　ｎ”７　　　　　ｎ”５　　　　　ｎ”２ １０　２６．５＝１．７　２５．８：６．４　２３．９！２．５　２４５−、− ０．７　１７　　　−ｒｒ２　　　　　ｎ冨６　　　　　ｎ諷５　　　　　ｎ− ２２０３６二６．９　２６　　＝７．６　２５．８ｚ１．３　　２５．５＝２． １　　１８．５　　−ｎｌｌ３　　　　　ｎ震５　　　　　ｎ言５　　　　ｎ菖 ２３０　　４０．３二８　　３１．１？＋２　　２８．３ｉ２．９　　２４７＝ ２．４　　２２　　　−ｎｌ１３　　　　　　ｎ−６ｎ・５　　　　　ｎ−２４ ０４１ｔ８．７　３９．４＝１５　２８．１：４．４　　２Ｌ２ｉ１．７　　２ １．５　−ｎｌｌ３　　　　ｎ１Ｉ５　　　　ｎ１１５　　　　ｎ１１２５０　 ４４．６＝１２　４３．５！１７　２９．７−５．４　　２４５巳３．５　　２ １　　−ｎｌｌ３　　　０１Ｉ７　　　０１１４　　　　ｎ１２６０　４９．８ ｓ１５　５２．２＝２８　３１．６＝６　　２５ｚ２．６　２１　　１８ｎ婁３ 　　　　　ｎｍ７　　　　　ｒ＋−５ｎ・２１２０　６６．６士３２　６４４１ ６　４３．５ｚ２８　　２４７＝３．１　　２０　　１ｓ、５ｎｌ１３　　　　 　ｎｗＩ７　　　　ｎ１Ｉ５　　　　　ロ１１２１１３０　７５　−３７　　６ ９．７ｉ５３　　３９．４＝−２６２７，５，６２２＋９ｎ諷３　　　　ｎ１Ｉ ７　　　ｎｌ５　　　　ｎ１１２２４０　７６　　！４２　６３．ｌ！３６　４ ４．２，３１　　２６：７　　　２１．５　１８．５ｎＩ＝３　　　　ｎｌ−７ ｎ−５ｎ１Ｉ２３００　　　９０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２ ６　　１９．５表　１■ Ｔ、　Ｔ、の測定 ０　　９．３３！２．７５　８．３５二〇、８５　　８二１．４１　　　７５　 　　　　８．５　　　７．５ｎ”’３　　　　　ｎ”７　　　　　ｎｍ５　　　 　　ｎ”２１０　　９．６６！２．８８　８．６ヱ　１．２１　８．１：１．０ ８７．７５＝０．３５　　ａ、ｓ　　　　−０ａ３　　　　ｎｆ６　　　　ｎ１ １５　　　ｎｌ＋２２０１１．６６＝５．５　　１７！２１　　８．４：Ｏ＜Ｉ 　　　７．５　　　８．５　　　−ｒｌＩ１３　　　　ｎ奮６　　　　ｎｌｌ５ 　　　ｎ１１２３０　１８．１６４１０．３９　１７．６２２０．７　９．２： １．６８７．５　　　　９　　　−ｎ＝３　　　　　ｎ−６ｎ・５　　　　　ｎ １１２４０　２１３．３３＝２７．４６　　＋７．６＝２０　　１０．１！１． ９８　７．７５＝０．３５　　ｓ、ｓ　　　−ｎｌｌ３　　　　　　　　ｎｍ６ 　　　　　　　　ｎｍ４　　　　　　　　ｎ−２５０ムＬ１６：２７．４２　２ ３．５＝２４．４　２２．２＝２５．２　７．５＝０．７　　　Ｂ、５−ｎｍ１ ３　　　　ｎ１Ｉ７　　　　ｎ１１５　　　　ｎｍ２６０　４４．６６＝２６． ５５２４．１＝２４．６　２３．３＝２２．４８　７．７＝０３５　９．５　　 ７．５ｒｔｓ３　　　　　　　ｎ”７　　　　　　ｎｌ−５ｒ＋”２１２０　　 ７１６．６６＝２３．０９　２３．５＝２４．９　　２９．４二２７．９　　　 ７．７　！　０，７　　　８．５　　　　７．５ｎ曽３　　　　　ｎ鳳７　　　 　ｎ１１５　　　　　ｎ１Ｉ２１８０　　　６０　　　　２４＝２４７１９．７ ＝２２．５　　７．５　　　　８　　　７．５ｎｌＩ３　　　　ｎ１Ｉ７　　　 　ｎｌｌ５　　　　ｎ１１２２４０　　　６０　　　２４．１＝２４．５　１９ ．６＝２２．６　７．７５＝０．３５　　９．５　　７ｎｍ３　　　　　ｎ１Ｉ ７　　　　ｎ露５　　　　　ｎ１１２゜３００　　　−　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　８．５　　７これらの表中に含まれている結果を検 討すると、ウサギにおいて、特に３００ｕ／ｋｇを超える用量１例えば６００ｕ ／ｋｇ及び１２５０　ｕ／ｋｇの用量での経口投与により、ヘパリンはうまく吸 収されているという結論が導き出される。１２５０ｕ／ｋｇの用量では、経口投 与された、当該組成物で構成された混合物について、皮下投与されたヘパリンに ついてみられるものとほぼ同じ大きさであるＴＣＫで測定された血液凝固時間の 増大が見られる。「対照」グループ及び「ブラシーボ」グループにおいて誘発さ れたＴＣＫ時間の変動は、それ自体重要な意味をもつものではない。

同様の研究を、平均体重２００ｇの ｒＷＩＳＴＡＲＪ系ノラット１２匹（ＥＶＩＣ−ＣＥＢＡ飼育場）について行な った。

ヘパリンは、異なる３つの用量にて投与した（ラットグループ２．３及び４）、 対照グループ（グループ１）により、研究を補完する。

グループ１：生理食塩水（１−） グループ２：市販のヘパリン　１６００　ｕ／ｋｇグループ３：市販のヘパリン 　３２００ｕ／ｋｇグループ４：市販のヘパリン　６４００ｕ／ｋｇ実施した試 験は、前述のＴＣＫ、Ｔ、Ｔ、。

ＨＥＰＡＣＬＯＴ　（ＳＴＡＧＯ）試験であル、コれらの試験の結果は、第５図 に報告されている。

これらの結果は、特に４００　ｕ／ｋｇ〜８００　ｕ／ｋｇの用量での経口によ るヘパリンの吸収を確認している。

例　　Ｉ■ Ｕ　　　で口　゛・書ＩＡの塩イカルシウムとヘパリンをむ組　　の経口 ヘパリンと組合せて用いられる単糖類及びイオン塩の相対的濃度は重要である。

このことが、本例により実証される。

ＥＶＩＣＣＥＢＡ飼育場からきた平均体重２ｋｇの「ニューシーラント３種の成 熟した雄のウサギ２匹は、経口投与にて、合計２５００単位のヘパリンつまりウ サギの体重１ｋｇあたり１２５単位のヘパリンを含む１−の溶液に０．１−から ０．９−までの増大していく量の塩化カルシウム溶液（１０％溶液つまり１００ −あたり１０ｇのカルシウム）を加えたものを受ける。

塩化カルシウム溶液０．５−の量に相当する結果は、操作上の誤差のため誤った ものであるために、とり上げられなかった。

なお投与された化合物には、グルコースは含まれていない。

ウサギは、ＢＲＩＥＴＡＬという商品名で知られている麻酔剤（３０ｍｇ／　ｋ ｇ）を用いて（ＰＡＲＫＥ−ＤＡＶ　Ｉ　Ｓ研究所）麻酔をほどこす、採血は、 直後（Ｔｏ）及びそれぞれ１時間（ＩＨ）、２時間（２Ｈ）及び３時間（３Ｈ） 後に行なう。

Ｔ、Ｃ，に、クイトラリン、抗−Ｘａ、Ｈ６ｐａｃｌ　ｏｔ　（ＳＴＡＧＯ）の 生物学試験の結果は、第１図、第２図、第３図及び第４図に示されている。試験 の結果から、使用されるヘパリン及びヘパリン溶液の量に対して０．３−から０ ．６−の間で変化する一定量のＣａＣＪ２□でカルシウム塩が投与された場合、 つまり、２５００ｕｓｐ単位又は２５００抗−Ｘａ単位又は１６ｍｇのヘパリン に対し３０ｍｇ〜６０ｍｇの塩化カルシウムの割合でカルシウム塩が用いられた 場合の、本発明に基づく化合物のより優れた効能レベルを見極めることができる 。

例ＩＩＩ 田なる物　と糸上びつ番られた、−まった　　のヘパ１ンの月　　の　口 使用される被験動物は、ＥＶＩＣＣＥＢＡ飼育場からきた平均体重２ｋｇの「ニ ューシーラント３種の成熟した雄のウサギで、Ｇｒａｎｄｓ　Ｍｏｕｌｉｎｓ　 ｄｅ　ＰａｒｉｓからＶＩＧＡＬＡという商品名で市販されている飼料で養われ ている。

この例の混合物の構成成分は以下のとおりであるニ ー　１６０単位／ｍｇ（ｕｓｐ単位又は抗−Ｘａ単位）の活性を持つヘパリン化 カルシウムの形でのヘパリン、 −塩化ナトリウム又は塩化カルシウム、−グルコース又はレブロース。

ヘパリンは、０．８−の量でウサギの体重１ｋｇあたり１２５０単位の割合で投 与される。

各々３匹のウサギを含む異なるグループに対し溶液の形で経口投与された混合物 Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ及びＥは、それぞれ以下の表に記されている組成を有していた。

表■の各行に記されている十印は、相当する混合物の構成成分（表の上部に識別 されている）を識別している。Ｅ、Ｄという表示は、投与される物質が精製水で あることを意味する。これらの混合物の各の中に存在する構成成分の異なるイオ ンの相対的割合（ｍＭ／Ｉ２）単位）は、表■から得られる。

表　［１ 表■ Ｈａ÷　８１０　４　　２　　２　　２Ｃａ十＋　　　　　　Ｓｏ　　　　　　 　　２）３　　　　　２フ１　　　　　　２６７　　　　　　７３塩化物　９２ ０　　１０２Ｇ　　　１０２０　　１２００　　６８０クルコース１１４　　　 　１２０　　　　２．５　　　　０　　　　　０投与は、ＢＲＩ　ＥＴＡＬを筋 肉内注射して麻酔をほどこした後で行なった。

血漿定量を可能にする生物学試験を行ない、結果は以下の表中に記されている。

これらの表は、各グループの各ウサギについて、秒単位の結果を提供してい０　 　　　　　　２３２３　１Ｂ　　　２２２２２２２２２４２４２５２２２０２２ ２２　１８１時間　　　２３２８２８　２８２Ｂ　２９２８　コ１　２１；　２ ５３０２３２１２４　２２２時間　　２４３４３１　３０３０２り４５４１３５ ２＋！ｌ　３０２０２０２２２３３時間　　２４２７２７　２７２５２４３５４ ８４０２Ｇ　２り２０２０２２２０丁、τ。

０８７７ＢＢ７９１１Ｂ１１１１１ １時間　　９　８　１０　　ＩＩＩ　　８　　タ　９８９８８　８７７７２時間 　　８９１０７９９　１１９９８８８７７７３時間　　８９９　　７８９９９９ ８７７７７７タイトラリン 時間　１２３１２３１２３１２３１２３Ｑ　　　　　　１２１２１２　１１　１ ２１１　１２　１２　１２１１１２１１　１２１２１２１　Ｂ奇問　　　　　１ ３．５１４１’５　１３　１３　１５　１３　１４　１４　１４　　Ｎ　　１２ 　１２　１２　１２２時間　　　１３　Ｄ　１５　１４　１６　　Ｉｓ　１９　 １ｓ　　１５１３１４１２１２１２１２コ時間　　　１２１４１４　１２１３１ ４１４１４　１４１３１４１２１２１２１２ＨＥＰＡＣＬＯτ ０　　　　　　１３　１２　１３　１２　１２　１コ　１２　１２　１２　１３ 　１１　１２　１２　１２　１２１時間　　１４１８１７１４１６１４１り１５ １２１４１３　？２１２１２１３２時間　　１４１９１１８１Ｇ　　１８１５　 Ｓｏ　３４３０１４１４１２１２１２１３３時間　　１４２Ｇ　１６１６１４１ ４４２４１４０１４１２１２１２１２１３級１ｌ１上 上述の結果を読むと、ヘパリン化カルシウムのみでは吸収されないこと（ウサギ グループＥ）がわかり、このことは、本発明に基づく組成物のもつ利点を強調よ り優れていることから、グルコースをレブロースで置き換えると有利である。な お、レブロース又はフルクトースはグルコースの異性体であり、その相異点は単 にケトン官能基のみにある。

異なるイオンに結びつけられた塩化物の使用後に得られた結果は、塩化物イオン の存在が決定的要素であることを示しているように思われる。しかしながら、結 びつけられるイオンの選択は、化合物の効能に無関係ではない。

匠−１ ・　脈血　症をもつラットにおしるヘパリンの経ユ改１ この実験について用いられたプロトコールは以下のとおりである。

ラットにはＢＲＩＥＴＡＬを６０　ｍｇ／　ｋｇの用量で腹膜的注射して麻酔を ほどこす、開腹後、下火ｎ脈を分離し左腎静脈の下で結紮する（１＝０）、腹部 を異なる平面にて閉し直す、２時間後（ｔｏ＋２）、、溶液ｌ、２．３．４及び ブラシーボを経口投与し、溶液５を皮下注入投与する。

血栓を採取するため、血行静止の誘発から６時間後に、被験動物を再度開腹し、 側副静脈と工大静脈の上、第１の結紮か６２ｃｍ上流部分に結紮を置く、凝塊を 抽出し、３７℃で２４時間熱殺菌する。乾燥した凝塊の重量を測る。採血を、心 向穿刺で行なう。

投与は、「無作為抽出」表と呼ばれる表を用いて「無作為抽出」プロトコールに 従って行なわれた（２重盲検投与）。

ラットグループを５つ作った。これらのグループは、以下の物質から得られる異 なる５つの溶液の投与に対応するニ ー　ヘパリン、含カルシウム塩 −グルコース　５％ −塩化カルシウム　１０％ −重炭酸ナトリウム 溶液の組成は以下の表に記されている：含カルシウム　ＣａＣＬ２　グルコース 　　精製水　　重炭酸ヘパリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ナト リウム諏１　　　　　　九Ｌ　　　　　　ｒａｇ　　　　　　憚ｌ　　　　憾１ ｓｏ１．１　　　　　　０，３　　　　１，２　　　　０．９ｓｏＬ２　　　　 　　　０．コ　　　　　１，２　　　　　　　　　　　　　０．９５０１．３　 　　　　　０，３　　　　１，２　　　　　　　　　　　　　　　０，９ｓｏＬ ４　　　　　　０，３　　　　　　　　　　０，９　　　　　　　　　　１，２ ｓｏ１．５　　　　　０，３　　　　　　　　　　　　　　　　２．１１０匹の ラットから成る各のグループについて、投与されたヘパリンの用量は、以下に示 す薬用量に従って、１２５０μ／ｋｇである。

グループ１：経口にて溶液１をＯ，ｌＯｍＦグループ２：経口にて溶液２を０． １０ｄグループ３：経口にて溶液３を０．１０ｄグループ４：経口にて溶液４を ０．１０−グループ５：皮下注射にて溶液５を０．１０ｄグループ６：生理食塩 水を０．１ｍｆｆ（ブラシーポ）各グループの中には１０匹のラットが含まれて いる。

溶液の投与は、血栓症誘発から２時間後に経口にて行なわれた（上述の下火静脈 結紮）、溶液１から４までは、ブラシーボ（グループ６）と同様、経口投与され る。溶液５は皮下注射で投与される。血栓の平均重量を次に測定したところ、以 下のとおりであった。

ｍｇ単位で表わした血栓の平均重量ニ ゲループ１：１．２６±１．Ｏｌ グループ２：１．８９±１．４２ グループ３：２．５８±１．０８ グループ４：２．６４±２．３６ グループ５：０．６１±０．５９ グループ６：２．５０±１．４２ スチューデント統計方法を用いて行なった血栓の平均重量の比較研究は、以下の ような結果を明らかにしている： １）グループ１からグループ５までの血栓とブラシ−ボブループ６の血栓との平 均重量比較研究ニゲループ１／グループ６　　　　Ｐ＜０．０５グループ２／グ ループ６　　　　ＮＳ グループ３／グループ６　　　　ＮＳ グループ４／グループ６　　　　ＮＳ グループ５／グループ６　　　　Ｐ＜０．０５２）グループ１からグループ４ま での血栓とグループ５の血栓との平均重量比較研究ニ グループ１／グループ５　　　　ＮＳ グループ２／グループ５　　　　Ｐ＜０．０５グループ３／グループ５　　　　 Ｐ＜０．０５グループ４／グループ５　　　　Ｐ＜０．０５腹夏ｌ」 従ってこれらの試験は、本発明に従った少なくとも１つのヘパリンムコ多糖体、 単糖類及びイオン塩を含む組成物を生成する必要性を裏づけでいる。

実際、血栓の平均重量の比較研究に関する統計結果によると、グループ１及び５ のみがプラシーボグループ６との相異を示している。従ってこのことは、経口投 与された本発明に基づく３成分組成物の活性について有利な証明を与えている。

又一方では経口によりテストされる溶液、他方では皮下注射される溶液を利用し た比較の結果は、経口投与された化合物の活性が皮下注射された溶液の活性と異 ならないように思われるという点で、経口投与された化合物の利点を裏付けてい る。

実験的静脈血栓症をもつラットを用い同様な条件下でヘパリンを経口投与すると 、皮下投与されたヘパリンで得られるものと同じ抗血栓症効果がもたらされる。

最後に、重炭酸ナトリウムの添加は、本発明に基づく組成物の血栓症に対する活 性を減少させる又は無くするような環境のアルカローシスを誘発するように思わ れる。

さらに、前述の実験において用いられたものと同じタイプの被験動物に対して実 施された病理解剖学研究は、前述の例で用いられた用量では胃及び十二指腸の粘 膜に全く病変が見られないということを明らかにしている。

口２Ｈ圏３Ｈ １”ｌ　ハ　喝 秒 ＦＩＧ、３ ヘバクロフト（）ＩＥＰＡＣ：ＬＯ丁）秒 口２１）　　　　　　医３１１ ＦＩＧ、Ａ 秒 ＦＩＧ、５ 国際調査報告 国際調査報告 ＦＲ８８００３２６

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）ａ）少なくとも１つのへバリンムコ多糖体，ｂ）腸粘膜レベルで吸収され うる、生理学的に受容可能な少なくとも１つの単糖類、 ｃ）金属陽イオンの生理的に受容可能なイオン塩１つ を組合わせて含んでいること、そしてこれらの構成成分ａ、ｂ及びｃの相互の割 合は、かかる化合物が経口にて投与された場合にこれが生体内で血液凝固阻止作 用を誘発することができるようにするものであること、を特徴とする組成物。 （２）単糖類がヘキソース（六炭糖）の中から選ばれることを特徴とする、請求 項（１）記載の組成物。 （３）ヘキソースがグルコースであることを特徴とする、請求項（２）記載の組 成物。 （４）ヘキソースがレブロース（左旋糖）であることを特徴とする、請求項（２ ）記載の組成物。 （５）陽イオン塩が塩化物であることを特徴とする、請求項（１）乃至（４）の いずれか１項に記載の組成物。 （６）陽イオン塩がアルカリ土類陽イオン塩化物であることを特徴とする、請求 項（１）乃至（５）のいずれか１項に記載の組成物。 （７）陽イオン塩が塩化カルシウムであることを特徴とする、請求項（６）記載 の組成物。 （８）陽イオン塩がアルカリ陽イオン塩化物であることを特徴とする、請求項（ １）乃至（５）のいずれか１項に記載の組成物。 （９）陽イオン塩が塩化ナトリウムであることを特徴とする、請求項（８）記載 の組成物。 （１０）経口投与に適した受容可能な藥学的賦形剤と結びつけて生体内で血液凝 固阻止作用を誘発させるのに有効な用量で請求項（１）に記載の化合物を含んで いることを特徴とする、経口投与用の薬学的組成物。 （１１）−６００〜２５００ｕｓｐ単位のへバリンムコ多糖体、 −４〜６０ｍｇの単糖体、 −０・５〜１００ｍｇのこの陽イオンのイオン塩、を受容可能な薬学的賦形剤と 結びつけて含んでいることを特徴とする、請求項（１）、（３）、（６）、（８ ）に記載の藥学的組成物。 （１２）−６００〜２５００抗−Ｘａ単位のへバリンムコ多糖体、 −４〜６０ｍｇの単糖体、 −０．５〜１００ｍｇのこの陽イオンのイオン塩、を受容可能な薬学的賦形剤と 結びつけて含んでいることを特徴とする、請求項（１）、（３）、（６）、（８ ）に記載の薬学的組成物。 （１３）−４〜１７ｍｇのへバリンムコ多糖体、−４〜６０ｍｇの単糖体、 −０．５〜１００ｍｇのこの陽イオンのイオン塩を、受容可能な薬学的賦形剤と 結びつけて含んでいることを特徴とする、請求項（１）、（３）、（６）、（８ ）に記載の薬学的組成物。 （１４）−６００〜２５００ｕｓｐ単位のへバリンムコ多糖体、 −４〜５０ｍｇのグルコース、 −１０〜８０ｍｇの塩化カルシウム を、受容可能な薬学的賦形剤と結びつけて含んでいることを特徴とする、請求項 （１１）乃至（１３）のいずれか１項に記載の薬学的組成物。 （１５）−６００〜２５００抗−Ｘａ単位のへバリンムコ多糖体、 −４〜５０ｍｇのグルコース、 −１０〜８０ｍｇの塩化カルシウム、 を、受容可能な薬学的賦形剤と結びつけて含んでいることを特徴とする、請求項 （１１）乃至（１３）のいずれか１項に記載の薬学的組成物。 （１６）−４〜１７ｍｇのへバリンムコ多糖体、−４〜５０ｍｇのグルコース、 −１０〜８０ｍｇの塩化カルシウム、 を、受容可能な薬学的賦形剤と結びつけて含んでいることを特徴とする、請求項 （１１）乃至（１３）のいずれか１項に記載の薬学的組成物。 （１７）−６００〜２５００ｕｓｐ単位又は６００〜２５００抗Ｘａ単位又は４ 〜１７ｍｇのへバリンムコ多糖体、 −４ｍｇ〜６０ｍｇのレブロース、 −１０〜８０ｍｇの塩化カルシウム、 を、受容可能な薬学的賦形剤と結びつけて含んでいることを特徴とする、請求項 （１１）乃至（１３）のいずれか１項に記載の薬学的組成物。 （１８）−６００〜２５００抗−Ｘａ単位のへバリンムコ多糖体、 −４〜６０ｍｇのレブロース、 −１０〜８０ｍｇの塩化カルシウム、 を、受容可能な薬学的賦形剤と結びつけて含んでいることを特徴とする、請求項 （１１）乃至（１３）のいずれか１項に記載の薬学的組成物。 （１９）−４ｍｇ〜１７ｍｇのへバリンムコ多糖体、−４〜６０ｍｇのレブロー ス、 −１０〜８０ｍｇの塩化カルシウム、 を、受容可能な薬学的賦形剤と結びつけて含んでいることを特徴とする、請求項 （１１）乃至（１３）のいずれか１項に記載の藥学的組成物。 （２０）−６００〜２５００ｕｓｐ単位のへバリンムコ多糖体、 −５〜５０ｍｇのグルコース、 −０．９〜９ｍｇの塩化ナトリウム を、受容可能な薬学的賦形剤と結びつけて含んでいることを特徴とする、請求項 （１１）乃至（１３）のいずれか１項に記載の薬学的組成物。 （２１）−６００〜２５００抗−Ｘａ単位のへバリンムコ多糖体、 −５〜６０ｍｇのグルコース、 −０．９〜９ｍｇの塩化ナトリウム を含んでいることを特徴とする、請求項（１１）乃至（１３）のいずれか１項記 載の薬学的組成物。 （２２）−４ｍｇ〜１７ｍｇのへバリンムコ多糖体、−４〜６０ｍｇのレブロー ス、 −０．９〜９ｍｇの塩化ナトリウム を、受容可能な薬学的賦形剤と結びつけて含んでいることを特徴とする、請求項 （１１）乃至（１３）のいずれか１項に記載の薬学的組成物。 （２３）１単位用量には１０００〜１０００００抗−Ｘａ単位のへバリンが含ま れていることを特徴とする、薬剤として用いるための請求項（１）乃至（２２） のいずれか１項に記載の薬学的組成物。 （２４）血液凝固に対し生体内で調節活性を有する経口投与可能な薬剤の製造に 対する、請求項（１）乃至（１３）のいずれか１項に記載の組成物の応用。