JPH0238968A - 血液分画層検出方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、比重遠心分離した血液において血液分画層を
検出する方法に関する。

［従来の技術］ 比重分離液を使用した遠心分離による血液の血球の分離
は、医療分野、特に臨床検査やＬＡＫ療法といった検査
及び治療において多（用いられている他、研究において
も用いられている汎用性の高い方法である。

従来、遠心分離された血液において各分画層の位置の検
出は人手によって行なわれている。たとえばヒト血液を
比重１．０７７の比重分離液を用いて遠心分離した場合
、採取を行いたい分画層、例えば、リンパ球分画層の位
置は目視にて確認していた。

［発明が解決しようとする課題］ 従来、採取を行いたい細胞の分画が遠心容器中のどの位
置に存在するかを目視で確認しながら、ピペット採取し
ていたため回収率が悪いという問題点があった。

［課題を解決するための手段］ 本発明によれば、比重分離液を加えた血液を遠心分離し
て形成した血液分画層を有する遠心容器に６００ｎｍ以
上の波長の光をあて、透過光量、反射光量及び散乱光量
から成る群から選択された光量を測定し、白血球分画層
の位置及び量を検出することを特徴とする血液分画層検
出方法が提供される。

本発明においては、６００ｎｍ以上の波長の先の各分画
層における（１）［透過光量Ｊ、（２）反射光量又は（
３）散乱光量を測定する。

添付図面を参照して、本発明を具体的に説明する。

第１図は、透過光量を利用した、本発明の１つの具体例
を示す概略図である。この図により本発明の詳細な説明
する。

まず、遠心容器１の中に血液、特にヒト血液を入れ、比
重分離液を加えて遠心分離する。遠心容器ｌの中で、血
しょう分画層２、白血球分画層３、比重分離液分画層４
及び赤血球分画層５の各分画層が分離している。このう
ち、白血球分画層３の位置を知るため、たとえば光源６
より光を集光レンズ７にて集光し、各分画層にあてる。

波長６００ｎｍ以上の光が通過する光波長選択用フィル
ター８を使用して、各分画層を透過した光において６０
０ｎｍ以上の光の光量を先ディテクター９にて測光する
。

血しょう分画層２は、通常、重層時に血液に加えた平衡
緩衝液の成分、例えば、リン酸バッファ、ハンクス平衡
緩衝液、生理食塩水などの一部を含む。リン酸バッファ
や生理食塩水は可視光領域〜９００ｎｍにおいて光の吸
収に波長特異性はほとんどないが、ハンクス平衡緩衝液
はｐＨ指示薬であるフェノールレッドを含むことが多く
、４３０ｎｎ＋及び５５７ｎｍ近傍に特異吸収波長を持
つ。

比重分離液層４、例えばパーコール（ＰｅｒｃｏＬファ
ルマシア製）などは、光の実用範囲波長内に特異吸収波
長がない。

赤血球分画層５は、赤血球のタンパクの影響で２７６ｎ
ｎ及び３４４ｎｍに、ヘモグロビンの特異吸収波長であ
る４３０ｎｍ及び５５５　ｎｌ１１（酸化されると４１
５ｎｍ、　５４０ｎａ＋及び５７６　ｎｍ）近傍に特異
吸収波長を有する。

一方、白血球分画層３には可視光領域〜９００ｎｍにお
いて、特異吸収波長はない。また、吸光量は白血球の数
に比例する。このためｌ＼モグロビン（赤血球）及びフ
ェノールレッドの波長特異性のない波長領域で光量変化
を測定することにより、白血球の数に比例する光量変化
を得ることができる。

以上より白血球分画層の位置及ｒＪ量を６００ｎｍ以上
の波長の光量変化によって知ることができる。

光の波長は、６００−９００ｎｍ、特に６００〜７００
ｎｍであることが好ましい。

白血球分画層の位置の検出は、光源６及び集光レンズ７
から構成された光源レンズ系と、フィルター８及び光デ
イテクタ−９から構成されたセンサーを遠心力方向（即
ち、図面の下方向）にスキャンニングし、各位置での透
過光量を測定し、その光量変化の大小にて求めることが
できる。

白血球分画層の上米端位置及び丁未端位置を検出できる
ので、白血球分画層の深さがわかり、白血球分画層の体
積、すなわち白血球分画層の量も求めろことができる。

さらに、而しよう分画層２及び比重分離液層４の位置も
求めることができる。

ディテクターとして、ＴＶカメラ及びその信号解析装置
を使用してもよい。

第１図に示すように、各層において透過光量を測定する
ことによって、白血球分画層の位置及び量を検出するが
できる。同様に、第２図に示すように反射光量を測定す
ることによって、あるいは第３図に示すように散乱光量
を測定することによりても白血球の位置及び量を検出で
きる。

［発明の好ましい態様］ 以下に、本発明の実施例を示す。

実施例１ 石英ガラス製遠心管（直径１５ｍｍ）にパーコール（比
重１．０９）３ｘ（を入れ、その上にラット血液をＰＢ
Ｓ−で４倍に希釈した溶液４ｍ（ｌを静かに重層した後
、１２００Ｇで２０分間遠心分離した。

７００ｎｍの波長の光の透過光量及び反射光量について
遠心管の長さ方向の位置による光量変化を調べた。第４
図に透過光量の光量変化、第５図に反射光量の光量変化
の結果を示す。

光量変化は式 ％式％ ［ｏ：　リファレンススペクトル強度 ■　：分画層通過（又は反射）スペクトル強度にて求め
た。なお、リファレンススペクトル強度は、ＰＢＳ−を
用いて求めたスペクトル強度である。

第４図において、白血球分画層の位置で透過光１が低く
なっており、白血球分画位置を検出できる。

第５図において、白血球分画層の位置で反射光１が高く
なっており、白血球分画位置を検出できる。

［発明の効果］ 本発明によれば、比重遠心分離後の白血球分画位置が正
確に検出できるため、臨床検査や医療において白血球を
多く、高純度にて採取できる。

また自動ピペッティング装置などと組み合せてピペット
を駆動すれば、比重遠心分離後の白血球分画層を自動的
に採取できるようになり、検査及び医療の現場において
、省人化及び省力化にら荷動である。

【図面の簡単な説明】

第１図は透過光１を利用した本発明の概略図、第２図は
反射光量を利用した本発明の概略図、第３図は散乱光量
を利用した本発明の概略図、第４図は透過光量の光量変
化の１つの例を示す図、及び 第５図は反射光量の光量変化の１つの例を示す図である
。 Ｉ・・・遠心容器、２・・血しょう分画層、３・・白血
球分画層、４・・・比重分離液分画層、５・・・赤血球
分画層、６・・・光源、７・集光レンズ、８・・・フィ
ルタ、９・・ディテクター 特許出頼人　住友電気工業株式会社 代　理　人　弁理士　青　山　葆　はか１名字１　図 第４図 第２図 第３図 危を斐ンこ　［％１ 第５図 尤量吏イこ 〔％〕

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、比重分離液を加えた血液を遠心分離して形成した血
   液分画層を有する遠心容器に６００ｎｍ以上の波長の光
   をあて、透過光量、反射光量及び散乱光量から成る群か
   ら選択された光量を測定し、白血球分画層の位置及び量
   を検出することを特徴とする血液分画層検出方法。