JPH02286076A - ポリハロゲン化芳香族炭化水素の微生物学的分解 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野］ 本発明は、ポリハロゲン化芳香族炭化水累の微生物学的
分解に関するものである。

〔従来の技術〕

ハロゲン化ジベンゾ−ｐ−ジオキシンの微生物分解に関
する研究は、（１）バイエリンキア・スベシース（Ｂｅ
ｉｊｅｒｉｎｃｋｉａ　５ｐｅｃ、）を用いるケレン力
およびギブソン、並びに（２）白色腐敗菌Ｐｈ。

クリソスポリウム（Ｐｈ、　ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕ
ｍ）を用いるブンバス等による２種の研究に限られてい
る。フレツカおよびギブソンは、コハク酸塩と共に培養
した後のバイエリンキア・スベシースによるジベンゾジ
オキシン、１−および２−クロルジベンゾジオキシンか
ら対応のジヒドロジオール誘導体への反応（脱塩素化な
し）を観察した。塩素の放出を伴う他の分解は観察され
なかった。ブンバス等（２）は、白色腐敗菌ファネロヒ
エタ・クリソスポリウム（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ
　ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）と共にグルコース（５
６ミリモル）での増殖に際し３０日間の培養の後に１．
２５　ｎモルの２．３，７，１１ＴＣＤＤからの２７．
９　ｐモルの１４ＣＯ□の生成を記載している（理論的
放出量の〜２％）。パイエリンキア・スペシースによる
分解反応の使用については何も知られていないのに対し
、ヒュ７テルマンおよびトロヤノウスキー（３）は、た
とえばワラを炭素源として使用することによる土壌汚染
除去のための白色腐敗菌の使用を経験した。

他方、ハロゲン化ベンゼンの分解に関する本出願人自身
の研究は、ジベンゾジオキシン、ジベンゾフランおよび
２−ブロモジベンゾフランを高程度まで酸化しうる菌株
を見出したが、これら化合物を完全には分解することが
できなかった。

〔発明が解決しようとする課題） したがって本発明の課題は、ジベンゾフラン、ジベンゾ
ジオキシンおよび２−ブロモジベンゾフランを炭素源と
して使用しうる微生物をｍｍすると共に分離し、かつハ
ロゲン化ジベンゾジオキシンでさえ効果的に分解しうる
菌株を得ることにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明によれば、この課題はブレビバクテリウム属のＲ
ＳＴ６９−２１１、ＲＳＴ６９−２３３およびＲ５Ｔ６
９−１３６１と命名された新規な微生物菌株をライン川
の水試料から濃縮しかつ分離することにより解決された
。これらの菌株は西ドイツ国、ゲッチンゲンＤ−３４０
０，グリセバッハストラーセ８番在、ドイツチエ・ザン
ムルング・ホン・ミクロオルガニスメン（ＤＳＭ）に対
し特許目的の微生物寄託に関する国際承認のブタペスト
条約の規定に基づきＤＳＭ４７１４．４７１５および４
７１６として１９８８年７月２０日付けで寄託されてい
る。

さらに本発明は、本発明を実施するのに必須の特徴およ
び性質を備えたこれら菌株の突然変異種および変異体に
も関するものである。

本発明によれば、これらの新規な菌株はポリハロゲン化
された多環式芳香族炭化水素（より詳細にはハロジベン
ゾ−ｐ−ジオキシンおよびジベンゾフラン）を微生物分
解するために使用される。

単環式芳香族炭化水素（好ましくはフェノールもしくは
トルエン）を誘導質として添加することができる。

新規な菌株の主たる用途は微生物学的な廃水処理および
土壌の汚染除去を包含する。これら２種の用途のうち第
２の用途は、ハロゲン化された多環式芳香族炭化水素で
汚染された古い塵捨場の汚染除去および修復につき極め
て重要である。

〔実施例〕

以下、実施例により本発明を説明する。

の ジベンゾ−ｐ−ジオキシンおよびジベンゾフランを唯一
の炭素源として使用しうる細菌を、ライン川の水から分
離した。この目的で、ライン川の水に無機塩を添加し、
ジベンゾ−ｐ−ジオキシンもしくはジベンゾフラン（０
，５ｇ／Ｊりを唯一の炭素源として添加し、かつ全体を
２５Ｃ１ｄづつｌ！の三角フラスコに導入し、そして２
５０ｒｐ−で振とうしながら２８℃にて数週間にわたり
培養した。黄色もしくは褐色の着色が出現した後、これ
らフラスコをジベンゾフランを有する新たな無機塩培地
に接種し、最後に細菌を無菌寒天培地における一連の希
釈により純粋培養物として分離した。

二の目的で、無機塩培地には酵母抽出物（０，５ｇ／４
２）を補充すると共にジベンゾ−ｐ−ジオキシンもしく
はジベンゾフラン（０，５ｇ／ｌ）を１０％ＤＭＳＯ溶
液として添加し、さらにツイーン８０（５０■Ａ０を不
溶性ジベンゾフランを均一分配するために導入した。ジ
ベンゾフラン−およびジベンゾ−ｐ−ジオキシン分解す
る細菌は、培地の変色（黄色もしくは褐色）から識別す
ることができる。

分離された純粋培養物を複合培地（メルク・スタンダー
ドＩ）を有する寒天板培地に保った。長期間の培養物を
液体窒素中に貯蔵した。

ジベンゾフランおよびジベンゾ−ｐ−ジオキシンを炭素
源として使用しうる１０種の異なる純粋培養物をライン
川の水から濃縮しかつ分離した（第１表）、同じ条件下
での試験は、グラム陽性分離菌のみが２−ブロモジベン
ゾフランを分解しうろことを示した。したがって、これ
らのグラム陽性分離菌をその後の検討に用いた。何故な
ら、ハロジベンゾ−ｐ−ジオキシンの分解が直ちに生す
ると予想されたからである。

分離菌ＲＳＴ６９−２１１、ＲＳＴ６９−２３３および
ＲＳＴ６９−１３６１の綿密な特性化は次の結果を与え
た二　グラム陽性；増殖初期における明確な小環コツカ
ス期を有する不動性コツカス小環。カタラーゼは陽性で
あり、オキシダーゼおよびＫＯＨ試験は陰性であった。

菌体壁部の調製物は直接結合したＰ−ＤＡＰを含有した
。ムコール酸およびＮ−グリコリルエステルは存在しな
かった。全菌株は炭素源として次のものを利用した（第
２表）：　グルコース、蔗糖、グリセリン、ピルビン酸
、酢酸、安息香酸およびサリチル酸を利用したが、マニ
トールを利用しなかった。これらの結果は、ブレビバク
テリウム属に明らかに帰属する。これに対し、バージ−
・マニュアル・オブ・システマチック・バタテリオロジ
ーに記載された４種の菌株のそれぞれにつき明確な相違
が存在した。したがって、これら菌種をさらに決定する
ことは不可能であった。これら菌株をＤＳＭ４７１４．
４７１５および４７１６　（Ｒ３’ｒ６９−２１１　　
ＲＳＴ６９−２３３およびＲ，Ｓ　Ｔ　６９１３６１に
つき）として１９８８年７月２０日イ寸けで特許菌株と
して寄託した。

これら３種の菌株の間の相違点は、フェノールとトルエ
ンと乳酸とを炭素源として使用することに見られた。ア
ニリンおよびクロルベンゼンは、使用した濃度で炭素源
として使用することができなかった。しかしながら、褐
色もしくは橙色の着色の出現は、これら化合物の不完全
な分解を示した。さらに、菌株２３３は、炭素源として
のベンゼンもしくは０−キシレンにより増殖することが
でき、かつ４−クロルフェノールと５−クロルサリチル
酸とを分解することができた。菌株２３３における特に
単環式ハロゲン化芳香族炭化水素を包含する広範な分解
スペクトルのため、さらにジオキシンの分解についても
この菌株を用いて試験した。

分ＪＩＭＬ隨 多環式芳香族炭化水素を用いた分解試験を、テフロン被
覆されたネジ栓を備えて対応の添加剤を含んだ２０−の
無機培地を含有する１１！の三角フラスコで行なった。

残留物の分析につき、フラスコの全内容物を後処理した
。低濃度においてさえ再現性のある測定を行なうことが
できるのは、この方法のみであった。

比較的多量の菌体を１０２のＢＥ発酵装Ｎ（ブラウン、
メルスンゲン）で培養した。使用した培地は、フェノー
ル（０，８ｇ／ε）を有する標準培地１または酵母抽出
物（０，５ｇ／ｊりを有する無機培地とした。後者の場
合、さらに炭素源をＤＭＳＯ溶液（２〜ｌＯ％、無菌濾
過）として溶剤（トルエン、ベンゼン、Ｏ−キシレン）
で飽和された別途の流入空気流を介して導入し、或いは
濃厚水溶液（フェノール、サリチル酸；２０ｇ／ｊ２）
として導入した。醗酵条件は８００ｒｐｍ、２８°Ｃ１
空気１１／■ｉｎとした。

芳香族化合物の残留分析はＨＰＬＣで行なった。

この目的で、ｌＩｌ三角フラスコの全内容物（２０ｄ）
を３０％Ｂｒ１３５Ｂ溶液（ＤＭＳＯ中）の２−と共に
２８°Ｃにて３０分間振とうし、次いで２０Ｉ１１のジ
メチルホルムアミドを添加し、さらに３０分間振とうし
た後に、混合物を５０ｍ１のファルコン遠沈管に導入し
た。４，０００ｇにて１５分間にわたり遠心分離した後
、試験すべき化合物の濃度を上澄相で測定した。Ｈ（ｌ
によりｐＨ２に調整した混合物を比較として使用した。

上澄相をＲＰＢカラムにて、芳香族炭化水素の偏光度に
基づき組成の異なる８；２〜２：８の水／アセトニトリ
ル混合物を溶出剤として用いることにより分離した。試
験すべき化合物のＵＶ最大にて可変波長のＵＶ検出器（
シマズ社）を用いて検出を行なった。この残量分析の方
法は、極めて高価な抽出法よりも良好な回収率（〉９０
％）を与えた。さらに結果を向上させるため（より低い
分１ｉｌｙ）、１４−ジアミノアントラキノンを内部標
準としてジメチルホルムアミドと共に添加した。この場
合、上澄相はＨＰＬＣ分析のため６Ｎ　　ＮａＯＨでア
ルカリ化せねばならなかった。ＨＰＬＣ分析の検出限界
は１０〜１００μｇ／Ｉ！であった。

比較的少量の燐酸塩（１０ｍＭ）を含有する塩化物フリ
ーの純無機培地を用いて、塩化物と臭化物とのバランス
を決定した。ハロゲンイオンの濃度を測定するため、試
料をＨ□Ｓ　Ｏ４でｐＨ２に調整し、遠心分離し、無菌
濾過し、かつその後の分析のため４℃に貯蔵した。ＨＰ
［ＣＡＳ４Ａ分離カラムとＨＰＩＣＡＧ４Ａ予備カラム
とを用いて、グイオネックス２０００ｉ／ＳＰイオンク
ロマトグラフィーにより濃度を決定した。１．７ｍＭ　
　Ｎ　ａ　ｔｃＯｓ／　１．８　ｍＭ　　Ｎ　ａ　ＨＣ
Ｏｓを、臭化物の測定に関する溶出剤として用いた。塩
化物濃度については、先ず最初に塩化物を２ｍＭ　　Ｎ
ａＯＨで溶出させた後、他のイオンをＮａ、ＣＯ。

／　Ｎ　ａ　ＨＣＯ３で溶出せねばならなかった。この
ようにして基線分離を塩化物から容易に得ることができ
た。この方法の検出限界は０．１　ｕ　Ｍであり、すな
わち試料をイオンクロマトグラフィーにつき１：１０の
比で希釈することができた。

各種のジベンゾ−ｐ−ジオキシンの分解生成物をＩＩＩ
しかつ単離するため、これら物質をＤＭＳＯ／ツイーン
８０（９：１）に高濃度（２〜１０％）で溶解させ、１
１の三角フラスコ中における４５０ｄの０．１　Ｍ燐酸
塩緩衝液（、Ｈ７，２）に４０■／２の最終濃度まで攪
拌しながら導入し、かつ活性菌体の菌体懸濁物５Ｍ（１
２０ｄの０．１Ｍ燐酸塩緩衝液、ｐ　Ｈ７，２における
４０ｇの遠心分離された菌体物質）を添加した。三角フ
ラスコを２５Ｏｒｐｍ＋にて２８℃で振とうし、その１
部を１時間間隔で取出し、出発化合物の濃度を決定した
。出発化合物のほぼ完全な変換の後、全混合物をｎ−へ
キサンもしくはジクロルメタンで反復抽出し、抽出物を
脱水し、濃縮しかつトルエン／ジオキサン／酢酸（９０
：　２５　：　５）における調製用ＴＬＣプレート（メ
ルク社）にてクロマトグラフ精製した。ホリン試薬を噴
霧して青色を示したバンドを掻き取り、溶出し、かつ構
造をさらにＧＣ−ＭＳおよびＮＭＲにより検査した。

Ｈ’−ＮＭＲの プルカーＡＭ３６０　３６０−ＭＨ２−スーパーコン−
ＦＴ−ＮＭＲ分光光度計を用いて分析を行なった０分析
のため、クロマトグラフ分離され、かつ乾燥された試料
をＣ，Ｄ、に溶解した。３２回の走査を積算した。化学
シフトは、内部標準のテトラメチルシラン（Ｏｐｐｇｚ
）に基づいた。これらの結果を、６〜１ｐｐ■範囲にお
ける芳香族プロトン信号に基づいて拡大スペクトル（１
０Ｈｚ／ｃｍ）につき評価した。

１１分ｌＬ度ユ 質量分光光度法による分析は、フィニガンＭＡＴ８２３
０型質量分光光度計を用いてＧＣ−ＭＳカップリングに
より行なった。先行するガスクロマトグラフは、パリア
ン３７００型で行なった。

このガスクロマトグラフィーをスプリット１：１３０、
注入ブロック２５０℃かつ次の温度プログラムで行なっ
た：　３分間の等温７０″Ｃ，，１５°Ｃ／ｗｉｎにお
ける７０〜３２０℃の勾配、１７ｚｌの注入容積につき
５Ｅ３０毛細管（２０ｍ）、質量分光光度計への流入は
直接カップリングにより行なった。質量分光光度分析の
条件は次の通りとした：　　７０ｅＶのイオン衝突活性
、および３ｋＶの加速電圧。精度は１．０００ａｍｕま
で＋／−０゜２　ａｍｕであったｅ 歴ＩＪ幻（社）４足 呼吸率を測定するため、新たに培養され或いは凍結され
た菌体を０．１Ｍ燐酸塩緩衝液（ｐＨ７，２）に１０ａ
１当り０．２ｇＤＭの濃度で懸濁させた。ｌｄのこの菌
体懸濁物をピペットで１００−の加熱しうるシールおよ
び攪拌可能なオリオン０！電極を備えた培養槽に入れ、
５分間かけて基礎呼吸を記録し、１００．ｊ！の試験基
質溶液（１０ｍｇ／ｄ、ＤＭＳＯ中）を添加し、さらに
０□吸収を５分間測定した。これら２つの呼吸率の差か
ら芳香族試験基質につき特異的０．吸収率を計算するこ
とができた。

菌株２３３は２−ブロモジベンゾフラン（８０＃Ｍ）を
２ｇＤＭ／ｊ！の菌体密度につき２４時間でｌ　Ｏｕ　
ｇ　／　ｌ　（−４０ｍ　Ｍ　）未満まで分解すること
ができた。無機臭化物の放出における遅延は、中間生成
物の一次的１ｉ１１ｉ１を示した。７２時間後、約７５
％の有機結合した使用臭素をｉ１１離臭化物として回収
した。菌体培養法は、２−ブロモジベンゾフランの分解
に対し僅かな影響しか及ぼさなかった。

２．３−ジクロルジベンゾ−ｐ−ジオキシンの分解には
、全く異なる結果が観察された。非誘導菌体は４８時間
後に２，３−ジクロルジベンゾＰ−ジオキシンの部分的
分解しか示さなかったのに対し、フェノール−誘発菌体
の場合には僅か６時間後に出発物質の完全な消失が観察
された。しかしながら、この場合、塩化物の遊離の遅延
が一層明瞭に観察された。塩化物は、２４時間後に行な
った測定の間に培養混合物においてのみ観察することが
でき、その濃度は１２０時間後に１３０μＭ以上に達し
た。これは有機結合した塩素から塩化物へのほぼ定量的
な放出に相当した。菌株２３３は、ハロジベンゾ−ｐ−
ジオキシンを分解する酵素を誘発するには、明らかにた
とえばフェノールのような他の誘導質を必要とした。し
たがうて、フェノール誘発菌体による各種のへロジベン
ゾーｐ−ジオキシンおよび２−ブロモジベンゾフランの
分解を他の試験で比較測定した。環ハロゲン化基質は６
時間後に検出限界まで分解されたのに対し、２．７−ジ
クロルジベンゾ−ｐ−ジオキシンの場合には３０時間後
に出発物質の完全な消失が観察された。全ハロゲン化誘
導体につき、ハロゲン化物の放出はほぼ定量的であった
（第３表）。

ジベンゾ−ｐ−ジオキシンの分解の誘発を明瞭にするた
め、菌株２３３を各種の芳香族化合物と共に培養し、か
つ各種の単環式および多環式芳香族炭化水素の呼吸を測
定した１分解結果から予想されるように、ジベンゾジオ
キシンオキシゲナーゼ活性は、２−ブロモジベンゾフラ
ンもしくは２゜３−ジクロルジベンゾ−ｐ−ジオキシン
によりそれ自身に対し存在したとしても比較的弱くしか
誘発されない（第４表）、各種の単環式芳香族炭化水素
（フェノール、トルエン）は、ジベンゾジオキシンオキ
シナーゼの良好な誘導質として作用した。成長基質とし
てのベンゼンおよびサリチル酸は誘発効果を示さなかっ
た。

フェノールを追加炭素源として使用した場合、唯一の炭
素源としてフェノールを用いた培養に対し明確な相違が
観察された。いずれの場合にも、フェノールヒドロキシ
ラーゼおよびサリチル酸オキシゲナーゼ活性をさらに測
定した。ベンゼン増殖菌体に関する結果は、単環式およ
び多環式芳香族炭化水素の酸化に関する各種の酵素を示
唆し、これはトルエンでの極めて高い変換率にも拘わら
ず、ジベンゾ−ρ−ジオキシンの酸化が測定されなかっ
たからである。芳香族炭化水素に関する全ての培養にお
いて、ピロカテコールによる高い環開裂活性が観察され
た。

良好な誘導質（すなわちトルエン）と共に増殖させた後
の酸化系の基質特異性を検討すべく他の実験を行なった
（第５表）、多環式芳香族炭化水素のうち、フェノキサ
ジンが最高の割合で酸化されたのに対し、ジベンゾフラ
ンとジベンゾジオキシンとフェノチアジンとナフタレン
とインデンとは全て明らかに低い割合で酸化された。他
のハロゲン置換基も変換率を低下させた。Ｏ２消費はキ
サントン、カルバゾール、フェナジン、チオキサントン
、アントラキノンもしくは２，７−ジクロルジベンゾ−
ｐ−ジオキシンにつき測定できなかった。この場合、酸
化率は部分的に測定範囲以下であった。何故なら、長い
培養時間により、たとえば２．７−ジクロルジベンゾ−
ｐ−ジオキシンの遅い分解が測定されたからである。遅
延分解に関する他の証明は、チオキサントンとの長時間
培養の場合、変色（Ｅ、□−５１０ｎｍ）の出現であっ
た。著しく変色した分解生成物がフェノキサジン（Ｅｌ
ｌ、＝５７１ｎｍ）およびフェノチアジン（Ｅ、□＝５
９１　ｎｍ）の酸化においても生成された。

４−クロルピロカテコールの高変換率および３゜５−ジ
クロルピロカテコールと５−クロルサリチル酸と４−ク
ロルフェノールとクロルベンゼンとの酸化は、分解試験
で観察された２〜ブロモジヘンゾフランおよびジクロル
ジベンゾ−ｐ−ジオキシンからのハロゲン化物の放出と
一致した。菌株２３３は、明らかに単環式および多環式
芳香族ハロゲン化炭化水素の両者に関する完全分解のた
めの酵素を有する。

の ２−ブロモジベンゾ−Ｐ−ジオキシンと２．３−ジクロ
ル−および２．７−ジクロルジベンゾ−ｐ−ジオキシン
との分解に際し、中間生成物が添加後の最初の数時間で
出現し、長い培養時間の後に再び消失した。混合物をよ
り早い段階（３〜６時間）で抽出した場合、分解生成物
をこれら抽出物からクロマトグラフ精製することができ
、ホリン試薬をスプレーした際に芳香族ヒドロキシ化合
物の典型的な青色着色を示した。全分解生成物のＧＣ−
ＭＳ質量スペクトルは、１６の分子量の増加、すなわち
出発物質のモノヒドロキシ誘導体の増加を示した（第６
表）、シかしながら、分解パターンからヒドロキシル化
部位を確認することはできなかった。ヒドロキシ基の置
換部位を決定するため、２−ブロモジベンゾジオキシン
と２．７−ジブロモジベンゾジオキシンと未置換のジベ
ンゾジオキシンとの高磁場プロトンＮＭＲスペクトルを
比較のため測定した。予想通り、未胃喚のジベンゾジオ
キシンは狭い化学シフト範囲を有するＡ、−Ｂ、スペク
トルを与えたのに対し、２．７−ジクロル誘導体はその
対称性の理由で芳香族ｌ。

２．４−プロトン系を示した。２−ブロモ誘導体は、臭
素化された環におけるＡオＢ！部分と１，２゜４−置換
パターンとを示した。スペクトルのＡ２Ｂ２部分は、ヒ
ドロキシル化された２−ブロモジベンゾジオキシンの場
合には喪朱している。このことは、ヒドロキシル化が未
置換のベンゼン環で生じたことを示唆する。このスペク
トルは２−ブロモ−７−ヒドロキシジベンゾジオキシン
と２−ブロモー８−ヒドロキシジベンゾジオキシンとの
混合物として解釈することができる（４種の異なる芳香
族１，２．４−プロトン基）、ヒドロキシル化された生
成物の場合、ＮＭＲ溶剤としてのへキサデユーテロベン
ゼンの使用がプロトン信号の分離につき臨界的であった
。

加しＬ表− ジベンゾフランおよびジベンゾ−ｐ−ジオキシンを分解
する各種微生物（ライン川の水分離菌）の分解特性、お
よびダラム特性 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ １■麦 ２−ブロモジベンゾフラン分解性菌株ＲＳＴ６９−２１
１−２３３および−１３６１の生化学的性質、揮発性芳
香族炭化水素を用いる増殖試験のため、基質を蒸気相に
より添加した。

性質　　６９−２１１６９−２３３６９−１３６１ダラ
ム特性　　　　　　　＋　　　十　　　十オキシダーゼ カタラーゼ　　　　　　　＋　　　＋７　　＋炭素源で
の増殖（ｇ／　ｌ　）　ニ ゲルコース（１０） 蔗ＩＩ　（１０） マニトール（１） グリセリン（２） ＋ ＋ ＋ ＋ 十 ピルビン酸（２） 乳酸（２） 酢酸（２） 十 ＋ 十 ＋ ＋ 安息香酸（２） サリチル酸（２） ＋ ＋ １１衷（つづき） フェノール（０，８） アニリン（０，８） ベンゼン トルエン ０−キシレン クロルベンゼン 分解（ｇ／　Ｉｔ　）　： 十 十 ＋ １１表 ５日後および１０日後のフェノール誘発された６９−２
３３ｖＩｊ体による２−ブロモジベンゾフランおよび各
種のハロジベンゾ−ρ−ジオキシンの分解におけるハロ
ゲン化物バランス、ハロゲン化芳香族物質を添加しない
比較におけるハロゲン化物濃度はく２μｍとした。

＋ １１裏 トルエンと共に・増殖した後の菌株６９−２３３による
各種の単環式および多環式芳香族炭化水素に関する特異
的Ｏ１吸収率 ０＝＜０．５ｎモル／ｓｉｎ　Ｘ　ｇＤＭ。

ジベンゾ−ｐ−ジオキシン　　　　　３．８−ｐ−ジオ
キシン ０．６ ２．７−ジクロルジベンゾ ーｐ−ジオキシン　　　　　　　　Ｏ ジベンゾフラン　　　　　　　　　　５．２２−ブロモ
ジベンゾフラン　　　　　３．３フエノキサジン フェナジン カルバゾール ２２．２ フェノチアジン チオキサントン ｍ（つづき） キサンチン キサントン アントラキノン ６．６ ナフタレン インデン ベンゼン トルエン クロルベンゼン １６．９ ５２．１ １．６ フェノール クロルフェノール ６２．５ １６．３ サリチル酸 ５−クロルサリチル酸 安息香酸 ２２．２ １．２ ピロカテコール ４−クロルピロカテコール ３．５−ジクロルビロカテ コーＪし ３１２．５ １６０、２ １６．９ ｊＬＬ表 菌株６９−２３３による２−ブロモジベンゾ−ｐ−ジオ
キシン、２．３−ジクロル−および２．７ジクロルジベ
ンゾーＰ−ジオキシン並びにその分解生成物のＧＣ−Ｍ
Ｓデータ 第６表（つづき） Ｃ０ Ｃ０ 一〇１ 文献 （１）　Ｇ、　Ｍ、フレツカ、Ｄ、　Ｔ、ギプソン：バ
イエリンキア・スベシースによるジベンゾ−ｐ−ジオキ
シンおよび塩素化ジベンゾ−Ｐ＝ニジオキシン代謝、ア
プライド・エンバイロンメンタル・マイクロバイオロジ
ー　第３９巻（１９８０）、第２８８頁。

（２）Ｊ、Ａ、ブンパス、Ｍ、Ｔ、Ｄ、　　ライト、Ｓ
、　　Ｄ、オースト：白色腐敗菌による残留環境汚染物
の酸化、サイエンス、第２２８巻（１９８５Ｌ第１４３
４頁。

（３）　Ａ、　　ヒュッテルマン、Ｊ、トラヤノウスキ
ー：分解に通した白色腐敗菌およびワラでの培養による
分解困難な芳香族物質含有土壌の現場での汚染除去に関
する検討。

■、フランチウス（＆ｉ）　：汚染現場の汚染除去（１
９８６）、［土壌浄化の新規な方法」、アップファール
ビルトシャフト・イン・ホルシュンク・ラント・プラク
シス、第１８巻、第２０５〜２１８頁、ベルリン、Ｅ、
シュミット・フエアラーク出版＜１９８７）。

（４）　Ｗ、スブリンガー、ＨｏＧ、　ラスト：ポリハ
ロゲン化された単環式および多環式芳香族物質の微生物
分解、ＧＷＦワッサー／アップヮッサー、第１２９巻（
１９８Ｂ）、第７０頁。

以下、本発明の実施態様を示せば次の通りである １、ハロジベンゾジオキシンおよびジベンゾフランを含
有する土壌、沈降物および廃水を生物学的に処理するた
め、ジベンゾフランおよび２−ブロモジベンゾフランを
唯一の炭素源として使用しうるプロピバクテリウム属の
細菌。

２、微生物学的廃水処理および土壌汚染除去のための突
然変異種および変異体を包含する上記第１項記載の微生
物菌株ＲＳＴ６９−２１１、ＲＳＴ６９−２３３および
ＲＳＴ６９−１３６１゜３、ポリハロゲン化された多環
式芳香族炭化水素を微生物学的に分解するための上記第
２項記載の菌株の使用。

４、ハロジベンゾ−ｐ−ジオキシンおよびジベンゾフラ
ンを分解するための上記第３項記載の使用。

５、単環式芳香族炭化水素、好ましくはフェノールもし
くはトルエンを誘導質として添加する上記第４項記載の
使用。

代理人の氏名　　　川原１）−穂

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）ハロジベンゾジオキシンおよびジベンゾフランを
   含有する土壌、沈降物および廃水を生物学的に処理する
   ため、ジベンゾフランおよび２−ブロモジベンゾフラン
   を唯一の炭素源として使用しうるブレビバクテリウム属
   の細菌。
2. （２）微生物学的廃水処理および土壌汚染除去のための
   突然変異種および変異体を包含する請求項１記載の微生
   物菌株ＲＳＴ６９−２１１、ＲＳＴ６９−２３３および
   ＲＳＴ６９−１３６１。
3. （３）ポリハロゲン化された多環式芳香族炭化水素を微
   生物学的に分解するための請求項２記載の菌株の使用。