JPH02265473A

JPH02265473A - 組織培養方法

Info

Publication number: JPH02265473A
Application number: JP8506189A
Authority: JP
Inventors: Toshiya Yamamoto; 俊哉山本; Hirochika Sakano; 弘親坂野; Akira Nishikawa; 西川　晶; Hideo Hirohara; 広原　日出男
Original assignee: Sumitomo Chemical Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Chemical Co Ltd
Priority date: 1989-04-03
Filing date: 1989-04-03
Publication date: 1990-10-30
Anticipated expiration: 2014-08-23
Also published as: JP2936578B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〈産業上の利用分野〉本発明は、植物の組織培養方法に関するものである。

〈従来の技術〉近年、組織培養を利用した植物育種がさかんになってき
ている。

植物育種に利用される組織培養には、朽培養、花粉培養
、未熟胚培養、種子胚培養、幼葉培養、板端培養、胚軸
培養等がある。その方法は豹、花粉、未熟胚、種子胚、
幼葉、板端、胚軸等の組織からカルス（ここでいつカル
スとは、カルス、不定胚、胚様体等組織培養によって生
産される培養体の総称の意味である。）を形成させ、得
られたカルスからの植物体再分化により植物体を得る方
法である。その結果、遺伝子の固定や変異を獲得するこ
とができる。

約培養、花粉培養では花粉由来の半数体の植物体を得る
ことができ、得られた半数体の植物体を二倍化させるこ
とにより、遺伝子を早期に固定することができる。その
結果新しい品種を効率的に育成することができ、イネ科
植物、特にイネ、ムギ類では約培養、花粉培養が新しい
品種の育成に利用されている。

組織培養を植物育種に利用するとき重要なのは再分化植
物体を多数得ることであり、そのためには、植物組織か
らの高いカルス形成率とカルスからの高い植物体再分化
率を得ることが重要である。

この点について、アミノ酸類やビタミン類等の添加物を
、植物組織からカルスを形成させる培地即ちカルス形成
培地や、カルスから植物体を再分化させる培地即ち植物
体再分化培地に添加する等の工夫がなされてきたが、必
ずしも実用的に充分な方法とはいえない。

また、植物ホルモンを用いる植物組織培養方法としては
、例えば２，４−ジクロロフェノキシ酢酸とナフタレン
酢酸とを含む同一培地で、植物組織からのカルス形成と
カルスからの植物体再分化とをさせる方法により、組織
培養にかかる労力を削減できることが報告されている（
中村ら、北陸作物学会報、第２０巻、第１〜４頁１９８
５年）。

〈発明が解決しようとする課題〉しかしながら、従来知られている方法では、充分に高い
カルス形成率と高い植物体再分化率を得ることはできな
い。

く課題を解決するための手段〉本発明者らは、植物組織からの高いカルス形成率とカル
スからの高い植物体再分化率を得る方法について鋭意検
討した結果、植物の組織培養において、植物組織を組織
培養用培地に植え付ける前に、該植物組織を天然または
合成オーキシンを含む水溶液（さらに、天然または合成
サイトカイニンをも含んでいてもよい）で処理すること
により、植物組織からの高いカルス形成率とカルスから
の高い植物体再分化率とを得ることができることを見出
し、本発明に至った。

以下、本発明の詳細な説明する。

植物組織、例えば杓、花粉、未熟胚、種子胚、幼葉、板
端、胚軸等を例えばエタノール、次亜塩素酸ソーダ等で
滅菌した後、滅菌した植物組織を天然または合成オーキ
シンを含み、さらに天然または合成サイトカイニンをも
含んでいてもよい水溶液で処理する。即ち、植物組織を
天然または合成オーキシンを含み、さらに天然または合
成サイトカイニンをも含んでいてもよい上記水溶液に浸
漬し静置する、浸漬し攪拌する、浸漬し減圧後静置また
は攪拌する等の処理をする。

その後、植物組織を植物組織培養用培地に植え付ける。

該培地としては、例えばＮ６培地（Ｓｃｉ、Ｓｉｎ、第
１８巻、６５９頁、６６８頁、１９７５年）、ＭＳ培地
（Ｐｈｙｓｉｏｌ、ＰＩａｎｔ、第１５巻、４７３頁、
４９７頁、１９６２年）、ポテト培地（Ａｃｔａ　Ｇｅ
ｎ、Ｓｉｎ、第３巻、２５頁、３１頁、１９７６年）、
ポテト■培地（Ｈａｐｌｏｉｄｓｏｆ　Ｈｉｇｈｅｒ　
Ｐｌａｎｔｓ　ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　２６頁、４Ｉ頁、ス
プリンガー発行、１９８６年）等が用いられる。植え付
は後２週間から６週間で高率でカルスが形成される。

本発明方法においては、さらに、得られたカルスから植
物体を再分化させるのに新しい培地に植え付けをせずに
、同一の培地で植物体の再分化を行うことができ、労力
の減少をはかることもできる。

上記のようにして、通常植物組織植え付は後３０〜６５
日で再分化植物体を得ることができる。

本発明において用いられる天然または合成オーキシンの
具体例としては、天然オーキシンであるインドール酢酸
（以下、ＩＡＡと記す。）、合成オーキシンである２、
４−ジクロロフェノキシ酢酸（以下、２．４−Ｄと記す
。）、ピクロラム、ダイカンバ、インドール酪酸（以下
、ＩＢＡと記す。）、ナフタレン酢酸（以下、ＮＡＡと
記す。）、ナフタレンアセトアミド、５−クロロ−ＩＨ
−インダゾール−３−イル酢酸エチル、ＭＣＰＡ、２．
４．５−Ｔ、２，３゜６−ＴＢ、ジクロルプロップ、メ
コプロップ、２．４−ＤＢｌＭＣＰＢ、フェノプロップ
が挙げられ、インドール酢酸、インドール酪酸、ナフタ
レン酢酸の使用が好ましい。

また、天然または合成サイトカイニンの具体例としては
、天然サイトカイニンであるゼアチン、トランス−リボ
シルゼアチン、合成サイトカイニンであるカイネチン、
ベンジルアデニン（以下、ＢＡと記す。）、チジアジュ
ロン、４−ビリジルフェニルウレア、ＣＰＰＵ、２−イ
ソペンテニルアデニン、２−イソペンテニルアデノシン
が挙げられ、ゼアチン、カイネチン、ベンジルアデニン
の使用が好ましい。

植物組織の前処理に用いられる水溶液には、少なくとも
一種類以上の天然または合成オーキシンが含まれている
ことが必要であり、さらに一種類以上の天然または合成
サイトカイニンを併用することにより、植物体の再分化
率が高まることがある。

用いられる天然または合成オーキシンの濃度は通常０．
１−１００　ｍｇ／ｌ、好ましくは０．５〜５０ｍｇ／
　ｌである。天然または合成オーキシンと天然または合
成サイトカイニンとを併用する場合、通常各々を０．１
〜１００　ｍｇ／ｌ、好ましくは０．５〜５０ａ＋ｇ／
ｌの濃度、で用いる。

植物組織の前処理においては、通常上記の水溶液に１時
間〜３日間、好ましくは６時間〜２日間浸漬することに
より行われる。

尚、この前処理に用いられる水溶液中には、さらにジベ
レリン類、アブシジ＞Ｎｓブラシノライド類、エチレン
等を含んでいてもよい。

〈実施例〉以下、試験例にて本発明をより詳細に説明するが、もち
ろん本発明は以下の例のみに限定されるものではない。

尚、以下の試験例にお−０）て、カルス形成率は植え付
けた朽当たりの形成されたカルス数を表わし、植物体再
分化率は植え付けた陽当たりの再分化植物体数を表わす
。

試験例１〜８イネ（Ｏｒｙｚａ　５ａｔｉｖａ　Ｌ、　）品種「黄金
時」および「コシヒカリ」を用いて、次に示すような方
法にて薊培養を行った。

圃場にて「黄金時」および「コシヒカリ」を栽培し、■
核期中ないし後期の花粉を含む幼穂をサンプリングした
。サンプリングした幼穂をガーゼ、アルミホイルで包み
、５℃で７日間低温処理した後、朽を無菌的に取り出し
、種々のオーキシン等を含む水溶液に２４時間浸漬した
。

その後、植物ホルモンを含まないＮ６培地に朽を植え付
けた。形成されたカルス数の調査は、朽植え付は後４０
日に行った。形成されたカルスはその培地でさらに培養
を続け、再分化植物体数の調査を朽植え付は後６０日に
行った。

また、比較例１および２は上述と同様にして朽を無菌的
に取り出し、オーキシン等を含む水溶液に浸漬せず、２
．０　ｍｇ／ｌの２．４−Ｄと０．５　ｍｇ／ｌのＢＡ
とを含むＮ６培地に朽を植え付け、５０日後に形成され
たカルス数を調査した。形成されたカルスをさらに５．
　Ｏｎ＋ｇ／ｌのＢＡと０．１　ｍｇ／ｌのＮＡＡとを
含むＮ６培地に植え付け、さらに６０日後に再分化植物
体数の調査を行った。

黄金時を用いた試験結果を第１表に示す。

また、コシヒカリを用いた試験結果を第２表に示す。

第１表第２表試験例９〜！３小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍ　Ｌ、）品
種「チャイニーズスプリング」を用いて、次に示すよう
な方法にて薊培養を行った。

温室にて「チャイニーズスプリング」を栽培し、ｌ核期
中ないし後期の花粉を含む幼穂をサンプリングした。サ
ンプリングした幼穂をガーゼ、アルミホイル間低温処理した後、釣を無菌的に取り出し、種々のオー
キシン等を含む水溶液に１２時間浸漬した。

その後、植物ホルモンを含まないポテト■培地に朽を植
え付けた。形成されたカルス数の調査は、約植え付は後
４０日に行った。形成されたカルスはその培地でさらに
培養を続け、再分化植物体数の調査を、朽植え付は後６
５日に行った。

また、比較例３は上述と同様にして朽を無菌的に取り出
し、オーキシン等を含む水溶液に浸漬せず、１．　５　
Ｂ／Ｉの２．４−Ｄと０．５ｍｇ／ｌのカイネチンとを
含むポテト■培地に豹を植え付け、５０日後に形成され
たカルス数を調査した。形成されたカルスをさらに０．
５ｍｇ／ｌのカイネチンと０．　５　ｍｇ／ｌのＮＡと
を含むＮ６培地に植え付け、さらに６２日後に再分化植
物体数の調査を行った。

結果を第３表に示す。

第３表試験例１４〜１７トマト　（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ　ｅｓｃｕｌｅｎ
ｔｕｍ　ＭＩＬＬ　Ｌ。

）品種「ポンチローザ」を用いて、次に示すような方法
にて胚軸の培養を行った。

「ポンチローザ」種子を滅菌後、寒天上で無菌的に発芽
させた。発芽後約７日の胚軸を切取り、種々のオーキシ
ン等を含む水溶液に３０時間浸漬した。

その後、カイネチンを含むＭＳ培地に胚軸を植え付けた
。形成されたカルス数の調査は胚軸植え付は後３０日に
行った。形成されたカルスはその培地でさらに培養を続
け、再分化植物体数の調査を、朽植え付は後５５日に行
った。

また、比較例４は上述と同様にして得た胚軸を、オーキ
シン等を含む水溶液に浸漬せず１、　０　ｍｇ／ｌのＩ
ＡＡと１．　０　ｍｇ／ｌのＢＡとを含むＭＳ培地に植
え付け、４２日後に形成されたカルス数を調査した。形
成されたカルスをさらに２．　０　ｍｇ／ｌのＢＡを含
むＭＳ培地に植え付け、さらに５２日後に再分化植物体
数の調査を行った。

結果を第４表に示す。

第４表〈発明の効果〉本発明の植物の組織培養方法を用いることにより、植物
組織からの高いカルス形成率とカルスからの高い植物体
再分化率を得ることができる。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）植物の組織培養において、植物組織を組織培養用
培地に植え付ける前に、該植物組織を天然または合成オ
ーキシンを含む水溶液で処理することを特徴とする植物
の組織培養方法。
（２）植物の組織培養において、植物組織を組織培養用
培地に植え付ける前に、該植物組織を天然または合成オ
ーキシンと天然または合成サイトカイニンとを含む水溶
液で処理することを特徴とする植物の組織培養方法。
（３）植物の組織培養において、植物組織を組織培養用
培地に植え付ける前に、該植物組織を天然もしくは合成
オーキシンを含む水溶液または天然もしくは合成オーキ
シンと天然もしくは合成サイトカイニンとを含む水溶液
で処理した後、組織培養用培地に植え付け、培養してカ
ルスを形成させ、得られたカルスをさらに同一の培地で
培養を続けて植物体の再分化を行うことを特徴とする植
物の組織培養方法。