JPH02247121A - 人の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、人の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤に関するもので
ある。

従来の技術 動物の悪性腫瘍細胞の培養後培地より前記悪性腫瘍細胞
を除き、残った培地をｎ−ブタノールを溶媒どして抽出
操作を行い、次にこれを蒸発乾固したものからなる人の
悪性腫瘍細胞増殖抑制剤が特開昭６０−２８９３０９と
して提案されている。

発明が解決しにうとする課題 しかし、前記従来の技術によって肖られた悪性腫瘍細胞
増殖抑制剤は、有効物質が特定されていないため有機的
に合成することができず、製造コストが高いうえ不純物
が含まれていて増殖抑制効果が低かった。

本発明は、純粋で抑制効果が高く、安価な人の悪性腫瘍
細胞増殖抑制剤を提供することを目的とする。

課題を解決するための手段 本発明の人の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤は、２ヒドロキシ
−１−、（Ｐ−ヒドロキシフェニール）５−メチルへキ
リン−３−ワンよりなることを特徴とする構成を有する
。

発明の効果 本発明の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤の２−ヒト【］■シー
１−（Ｐ−ヒドロ（ジフェニール）−５メチルへキリン
−３−ワンは有機合成可能であるため、安価な抗腫瘍剤
として供給でき、悪性腫瘍細胞増殖抑制効果も高い。

また、悪十１腫瘍細胞に対する増殖抑制力が著しく正常
細胞に対して致死効果は殆んど認められず、在来の抗腫
瘍剤のにうな副作用はない。

実施例 以下、実施例により説明する。

１）製　法 １０％生新生児血清を添加したイーグルのＭＥＭ培地（
細菌学実晋提要、東大医科学研究所学友会編、４１２頁
参照）を生長用培地及び抽出用の培地として使用する。

まず、人子宮癌由来のトｌ　ｅｌａ細胞（Ｓ３）を成長
用培地で５日間３７℃で前培養し、その後１回洗って自
消を除く。次に、これを抽出用培地に３１中に移植し、
５％炭酸ガス前卵器中３５℃で静置Ｊｆｒ、養する。こ
のとぎ１０日間ぐらいまで培養を続ける。

この培養物を凍結乾燥して３１の培地から約４５ｇの吸
湿仙粗粉末を得、このうち１０ｏを５００１１１ｊ２の
メタノールに懸濁し、よく撹拌してメタノール可溶物を
分離し、溶媒を減圧留去する。

これを２００ｍ１の精製水中で溶解し、稀アンモニア水
にてＰＩ−１８，０とした後、同量のブタノールで３回
抽出する。

この操作を繰返して、８１　Ａ、　ｍｇの粗酒性物質（
Ｈｅｌａ−８Ｂと称する）を得る。

このようにして得た活性物質１−１ｅｌａ−３３をシリ
カゲル充填のカラム（直１￥４　ｃｍ、長さ３Ｑｃｍ）
に通し、クロロホルム、メタノール、１４％アンモニア
水（容積比１００：３０：１．２＞の混合液により溶出
し、活性分画を集めた。

さらに、その活性分画をシリカゲル・カラムクロントゲ
ラフ（直径３　ｃｎ＋、長さ５Ｑｃｍ）でへ４サン、酢
酸エステル（７：　１　）で溶出し、さらにその比を５
：１にかえて溶出し、活性物質１５ｍｏを得た。この活
性のある４つのフラクションを極性の低い順に記すと次
のとおりである。

（１）長鎖アルカノールフラクションコレステロール あるフラクションを集め、再度シリカゲルカラムフロン
トグラフィで精製する。

溶出にはｎ−ヘキサンと酢酸エチルを ５：１で混合した溶出液を用い、活性物質（Ｈｅｌａ−
８Ｂ）９．８（］より４Ｑｍｇの°フラクシヨンを得た
。

この一部をそのまま及びトリメデルシリル（ＶＭＳ）誘
導体としてガスクロマ［・グラフ質量分析（ＧＣ−ＭＳ
）にて分析し、本フラクションは２−ヘプタデカノール
を主成分とする混合物からなることがわかった。

そのまま分析した結果を第１図に、７Ｍ８体として分析
した結果を第２図に示し、さらに、磁気共鳴（ＮＭＲ）
のデータを第５図に示す。

また、質量分析（ＭＳ）のデータ及びＮＭＲのデータよ
り決定された成分の構造を表１に示す。

表１ さらに、本フラクションのＮＭＲ　（重水素化クロロホ
ルムの化学ジット値は第５図に示すとおり）であり、２
−ヘプタデカノールが主成分であることと合致する。

なお、合成した２−ヘプタデカノールをそのままでＧＣ
−ＭＳにて分析した結果（第２図参照）、及び７Ｍ８体
として分析した結果（第４図参照）、ＧＣの保持時間及
びＭＳが本フラクションの主成分と完全に一致した。

また、ＮＭＲも近似していた。

（２）フェノール性成分 コレステロールよりやや極性の低い、塩化鉄（Ｉ［ｌ）
で褐色に焼ける紫外吸収のある、活性のあるフラクショ
ンを集め、へ駐１ノン、酢酸１デル（容積比４：１へ・
３：１）の混合液を溶出液とし、再度シリカゲルカラム
クロマ１〜グラフイで精製し、Ｈｅ１ａ−８Ｂ　　９．
８ｑより３９ｍｑの油状物質を得た。

この油状物質の１３Ｃの核磁気共鳴吸収（第６図参照）
の結果、及びこの油状物質をそのままでＭＳにて分析（
第７図参照）さらにＴＭＳ誘導体どしてＭＳにて分析（
第８図参照）した結果、２−ヒドロヤシ−１−（Ｐ−ヒ
ドロキシフェニール）−５−メチルヘキザン３−ワンが
見出された。

その構造式は次のとおりであることがわかる。

または、 （３）脂肪酸フラクション シリカゲル−うラムクロントグラノイで集めた脂肪酸フ
ラクションを、ベンピン、酢酸エチル（容積比２：１〜
１：１、但し１％の酢酸を含む）の混液を用い、再度シ
リカゲルカラムクロマトグラ−ノイで精製し、Ｈｅ１ａ
−３Ｂ３．１ｇより１２５ｍＣｌの本フラクションを得
た。

本フラクションの一部をジアゾメタンにてメチルエステ
ル誘導体としてＧＣ−ＭＳにて分析した結果、第９図に
示すように本フラクションはいくつかの脂肪酸混合物で
あることがわかった。

Ｇ　Ｃ−Ｍ　Ｓのデータより決定された成分を表２に示
す。

表　　２ （４）モノグリセライドフラクション シリカゲルカラムクロ７トグラフイでコレステロールよ
り遥かに極性の高い活性のあるフラクションを集め、こ
れをベンピン、酢酸■デル〈容積比１：１〜１：２）の
混液を溶出液とし再度シリカゲルカラムフロントグラフ
ィでｔｉｉ製し、ｌ−１ｅｌａ−８Ｂ　　９．８ｇより
１．５＋＋＋ｃ＋の本フラクションを得た。

本フラクションはＮＭＲにてグリセライド様スペクトル
を示しく第１２図参照）、薄層クロマトグラフ（ＴＬＣ
）でＲｆ値は０．１（展開溶媒ベンゼン−酢酸エチル２
：１）であり、１−　ｍｏｎｏｌｉｎｏｌｅｎｏｙｌ　
ｇｌｙｃｅｒｏｌと一致した。

また、アセチル化により２個のアセデーＩ〜が入ること
からもモノグリセライドであると考えられ、本フラクシ
ョンの一部を１〜リメチルシリル（ＴＭＳ）誘導体とし
てＧＯ−ＭＳにて分析した結果、第１０図及び第１１図
に示すように、本フラクションは主成分をペンタデカノ
ールグリセライドとするいくつかの混合物からなること
がわかった。

Ｇ　Ｃ−Ｍ　Ｓのデータより決定された成分を表３に示
す。

表３ なお、これらが、２−モノグリセライドではなく、１−
モノグリセライドであることは、マススペクトルの解裂
パターンにおいてＭ−１５゜Ｍ　−Ｔ　Ｍ　Ｓ　ＯＣＨ
２が強くでること（１−ｉｐｉｄｉｓＬ　３７１　（１
９６６）　）より明らかである。

２）抗腫瘍活性の検定 次に、２−ヒドロキシ−１−（Ｐ−ヒドロキシフェニー
ル）−５−メチルへキリン−３−ワンを主成分とするフ
ェノール性成分の抗癌作用について検問する。悪性腫瘍
細胞試料としてＨｅ１ａ−３３及び出血癌細胞１−５１
７８Ｙ、Ｌ１２１０を１×１０　ケを１０％牛脂児血消
添加の市販合成培地ＲＰＭ１−１６４０に移植し、３７
℃で炭酸ガスインキュベータで４８時間培養後、その生
細胞を１〜リパンブル一染色法で決定してＩＣ５ｏ（半
数の細胞増殖を抑制する試料濃度μり／　ｍＪ、　）を
求めた。なお、Ｈｅ１ａ細胞の場合は３日目に判定した
。

その結果を表４に示す。

表４

【図面の簡単な説明】

第１図は、長鎖アルカノールフラクションをそのままＧ
Ｃ−ＭＳにて分析した図、 第２図は、長鎖アルカノールフラクションをＴＭＳｍ導
体としてＧＣ−ＭＳにて分析した図、第３図は、合成２
−ヘプタデカノールをそのままＧ（、−ＭＳにて分析し
た図、 第４図は、合成２−ヘプタデカノールをＴＭＳ誘導体と
してＧＣ−ＭＳにて分析した図、第５図は、長鎖アルカ
ノールフラクションのＮＭＲを示す図、 第６図は、同上の１３（、−ＮＭＲを示す図、第７図は
、フェノール性成分をそのままでＭＳにて分析した図、 第８図は、〕］−ノーシノールをＴＭＳ誘導体としてＭ
Ｓにて分析した図、 第９図は、脂肪酸フラクションをメチルエステル誘導体
としてＧ　Ｃ−Ｍ　Ｓにて分析した図、第１０図は、１
−ｍｏｎｏｌｉｎｏｌｅｎｏｙｌ　ｇｌｙｃｅｒｏｌ旧
ＴＭＳエーテルのＧＣ−ＭＳ分析図、 第１１図は、モノグリセライドフラクションをＴＭＳ誘
導体にて分析した図、 第１２図は、モノグリセライドフラクションのＮＭＲを
示す図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ２−ヒドロキシ−１−（Ｐ−ヒドロキシフェニール）−
   ５−メチルヘキサン−３−ワンよりなることを特徴とす
   る人の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤。