JPH01502663A - アルキン―カルボニル金属のクラスターを含む新型の低温バイオプローブ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 アルキン−カルボニル金属のクラスターを含む新型の低温バイオプローブ 本発明は、一般には、カルボニル金属錯体の特徴、すなわち波数域２１００〜１ ８５０ＣＩｌ−’でＩＲ’ｃ。の極めて強い吸収帯（実際には、タンパク質分子 に空いている「窓」で）の存在を利用した、低温バイオプローブなどのカルボニ ル基配位錯体の使用法に関する。さらにこの特徴から、天然化合物の混合物のい かなる分析にも利用できる上記の誘導体およびマーカーが得られる。赤外−フー リエ変換（ＩＲ−ＦＴ）分光分析法を適切に用いれば、この問題への理想的な対 処が可能である。

ＩＲ−ＦＴによる分光法の進展には、対象となる生理活性物質の最良の特異性を 示す有機金属生理活性物質の特異的合成が必要である。

そのために、フランス特許出願第８２１６０２４号では、ＩＲ−ＦＴによるホル モンレセプタに関して、低温バイオプローブまたはトレーサーなど、カルボニル 金属とエストローゲンの錯体が提供されている。

本発明は、強度のｃｏ振動が存在するカルボニル基配位の錯体を主成分とするニ ュータイプの低温バイオプローブを提供することを目的とする。これは、適量の 生理活性物質上にアルキン−カルボニル金属の小さなりラスターを導入すること によって可能となる。さらに、有機金属の誘導体は、カルボニル金属（一つまた は複数）の錯体１つにつき複数のアルキン錯体のカルボニウムイオンを用いた領 域選択的なアルキル化によっても得られる。

アルキン−カルボニル金属のクラスターで得られる錯体は、アルキル化しない直 接のキレート化で得られたものより安定であって、特に、エストローゲン錯体以 外の物質（実際には、このような有機金属化学に適合した構造を有するいかなる 物質）にも適用できる。

その大きな安定性によって、以降で明らかとなるように、マーカー成分としての アルキン−カルボニル金属が存在する抗原運搬担体の合成が実際に可能となる。

さらに、本発明に基づいて、特に抗体または抗原の免疫学的検出法および一定量 を用いた、このような有機金属誘導体の新しい領域が開かれる。

例えば、本発明でのニュータイプの低温バイオプローブが、一定量のホルモンレ セプタに関する特許出願第８２１６０２４号のように、エストローゲンの化合物 に適用される。さらに、毒素および同化物質の検出法および免疫学的用量にも適 用される。もちろん、合成エストロゲンも、免疫学的用量の範囲で抗原として使 用できる。

有機金属化学に適用できる構造を有する物質の中には、食餌性マイコトキシン、 特に、ゼラノール、ゼラロン、ゼアラレノール、ゼアラレノール統のものがある 。実際には、検出の閾値が極めて高いため、または放射活性物質の使用法に関連 した法的規制があるため、これら物質の分析法には限界がある。

ゼラノールは、動物の成長に利用される同化物質であって、動物に関するＣＥＥ は、今回の制限を予想している。その規制策が現実に適用されるか確認するため の処理が可能な対象物質があって、そういった物質の測定法の有効性は、対象物 質の力価に依存している。ＩＲ−ＦＴの利用は、抗開化物質抗体によって認識さ れるような抗原調製の可能性を調べる、簡便かつ効果的で最初の方法といえよう 。

これらの用量を決定するには、有機金属カチオンを用いた選択的アルキル化によ って、これら基質から判断できるマーカーが必要である。

同様に、ゼアラレノンおよびその誘導体によっても、上記の考察すべてが明らか にされる。この生成物は、急性毒性が低く、エストロゲン効果および同化作用た め、その誘導体トともに動物の飼育に用いらる０体内保持および筋肉への移行が 生じるので、ゼアラレノンおよびその誘導体の使用は、憂慮の種となっている。

さらに、用量と同様に検出法にも、感度の低さに問題があり（トウモロコシおよ びコムギで２．０００ｎｇ／ｋｇ、コンデンスミルク中で１０．０００ｎｇ／　 ｋｇ　）　、そのために制御が困難である。

ゼアラレノン（ａ）およびゼアラレノール（ｂ）は、それぞれ以下の構造式で示 される。

ゼアラレノン（ａ）には湿った穀物を自然に汚染する作用があり、代表的なエス トロゲンを同化するゼアラレノール（ｂ）は、このマイコトキシン（ａ）の触媒 的還元によって得られる。子牛、子羊、および雛鶏に対するゼアラレノールの使 用は、フランスおよびＣＥＥで規制されねばならず、その委員会の目的は、この 生成物の毒性およびホルモン様作用の閾値を決定すること、および対象物質の分 析法を提供することである。そして、究極の目的は、消費者の健康を維持するこ とである。

汚染した食餌によって発生する早発生性的成熟Ｇこ罹患した小児において、血清 中ゼアラレノール濃度を測定するための放射線免疫学的用量の予想が可能である 。検出における実際の閾値は０．５■／−であるが、２５ｐｇまで下げること力 （望ましい、しかし、免疫学的方法では、痕跡量を検出するために、比活性が極 めて高い抗体および放射線活性のトレーサーを用いることが必要である。

従って、本発明によれば、上記の感度が得られ、種々の欠点がある高い放射線活 性を伴わない、生物学的に興味のある微量物質（例えば、ゼアラレノール）の新 しし１用量カベ提（共される。カルボニル金属化学から、こういった未解明の問 題に対する回答が得られる。

本発明の目的は、より低コストでより感度および再現性が高い投与量、例えば、 血清中、動物組織中および食餌中へのゼアラレノールの一回投与量を決定するこ とである。この方法は、他の抗原および特に他の食餌性マイコトキシンにも直接 適用可能である。

アルキン−カルボニル金属のクラスターの導入によって、赤外線「イムノアッセ イＪ　（ＩＲ−ＩＡ）での抗体およびホルモン投与でのレセプタに対して、優れ た安定性と同様、特異的認識能ならびに選択的アルキル化による強度のＣＯ振動 性を示す有機金属生理活性物質の合成が可能となる。

こういったクラスターによって、例えば、電子供与置換基による活性芳香環に対 して、エノールのエーテル基土で選択的アルキル化の起きる可能性が生じ、また 、ヘキサメチルジシランの存在下における有機金属カチオンを利用して、フェノ ール基を末端で保護する可能性が生まれる。

さらに、そのクラスターによって、アルキン−カルボニルコバルトの前駆体で脱 キレート化の可能性が提示され、遊離アセチレン誘導体に従って周期律表の第■ 、第■、第■ならびに第■族の他のカルボニル金属錯体が利用できるか、および 分析に低温バイオプローブを利用できるか、といった問題が生じる。

−Ｍに本発明は、発明の本質的特徴に基づいて、カルボニル金属のアルキンクラ スターを有する有機金属化合物による、アルキル基がキレート化した生理活性物 質の錯体を提供することを目的とする。

アルキンは、プロパルギル誘導体、特にアルキル化して安定なカチオンを与える ものから成ることが好ましい。

本明細書における「生理活性物質」とは、生物学的に興味のあるすべての物質を 指す。

特には、少なくともフェノール性芳香環、および／または少なくとも脂肪族炭素 上での遊離ケトンもしくは水酸基、および／または少なくともアミン、チオール もしくはカルボキシル基を有する生体物質の生理活性物質などが挙げられる。

実際に例えば、 ・保護された水酸基のα位に対応したフェノール環上で・ケトン基もしくは水酸 基のα位に対応した脂肪族炭素上で・水酸基もしくはケトン基を有する脂肪族炭 素上で、または・アミン、チオールもしくはカルボキシル基上で特に、アルキル 化／キレート化が起きる可能性のあることが示される。

さらに、エストロゲンおよびその誘導体は、以下の一般式で示されるエストラジ オール、エストロンおよびそれらの誘導体から選ばれる。

さらに、本発明に適した生理活性物質の例として、特に、それぞれ以下の一般式 ｔ、ｎ、ｍ、および■で示されるゼラノール、ゼラロン、ゼアラレノン、ゼアラ レノール、およびそれらの誘導体を挙げることができる。

式中、ＲおよびＲ′は、水素またはヒドロキシアルコキシ基などの保護基を示す 。

従来から指摘されているように、これら化合物の誘導体を使用することが可能で ある。特に必要に応じて、化合物の安定性を改善するために、いくつかの水酸基 を保護することが可能である。それは、例えば、シラン型の誘導体にょるエーテ ル化、またはＣＩないしＣ，、特に、エストラジオール誘導体ではＣＩ、ゼラノ ールならびにゼアラレノール誘導体にはＣＩ４ならびに０１にのアルキル基もし くはアルコキシ基によって行うことができる。

Ｒがシリロキシ基またはＨＯ（ＣＨＩ）、１基（ｎは１ないし７）である場合、 こういった化合物は、特に興味深いことが分かる。

一般的定義には限界があるが、本発明の化合物中で、周期律表の第■、第■、第 ■ならびに第■族の金属、特に、クロム、モリブデン、タングステン、マンガン 、コバルト、ニッケル、テクネシウム、レニウム、オスミウム、ルテニウムの有 機金属化合物を使用することができる。

これら有機金属化合物の配位子には様々なもの、特に、ＣＯ。

ＣＳ、　ＣＳｅ、　ＣＮＲ＋、　Ｐ（Ｒｚ、　Ｒ３１Ｒ４）、シクロペンタジェ ニルが挙げられる。ここで、Ｒ，はアルキル基もしくは−ＣＯＲＳ基、およびＲ ｓ　、Ｒｓ　、Ｒ−ならびにＲｓは置換基の有無にかがゎらないフェニル基もし くはフェノキシ基、置換基の有無にかかわらないＣ１ないしＣ７のアルキル基も しくはアルコキシ基、またはハロゲン原子を示し、Ｒｓは−Ｎ（ＣＨｔＣＨｚＣ ｌ）ｚを取り得る。

これらの化合物は、数個の金属および１２個までの配位子を含むこともある。

さらに、本発明の目的は、キレート化したアルキンカチオンを有する生理活性物 質を四フルオロホウ酸の存在下でカルボニル金属化合物と反応させることを特徴 とする、生理活性物質錯体の調製法を提供することである。

極めて興味深い方法によって、アルキル化−キレート化が、芳香環に対してα面 のケトン基または遊離水酸基で選択的に起こる。これは、立体特異的方法によっ ても生じる。

二のために、ケトン基をエノールのエーテル型に転化させる。エノールのエーテ ル基を、ヘキサメチルジシラン（ＨＭＤＳ）の存在下でアルキン−カルボニル金 属のカチオン上で反応させることが有利である。

こういった方法での溶媒としては、塩化メチレンが好ましい。

−ｉに、本発明のキレート化カルボニウムイオンを基の一部位で選択的にアルキ ル化／キレート化するために、ヘテロ原子を有する溶媒（ピリジン、硫化物など ）と一過的に二度キレートを形成し得る。このカルボニウムイオンは、すでにカ ルボニル金属とキレート化しているものである。

特に、硫化物の存在下で反応が生じるならば、水酸基に対して一級および二級ア ミン基を選択的にアルキル化／キレート化することも可能である。その際、保護 された溶媒を使用することができる。

同様に、ピリジンの存在下で反応を行わせると、チオール基の選択的アルキル化 ／キレート化が生じる（チオレート）。

一部位または基を選択的にアルキル化／キレート化するため、特に、カルボニル 金属錯体中に拘束された金属の性質を利用し得る。

また、以下のような特異的カチオンを利用して、水酸基の存在下で選択的にアミ ンを直接アルキル化することも可能である。

本発明に基づくと、Ｃ−Ｃ三重結合上でカルボニル金属による最初の化合物を脱 キレート化することができ、その三重結合上でカルボニル金属による第二の化合 物を有する第二の錯体の再キレート化が可能である。

遊離α水酸基をキレート化するために、αケトン基によってカルボニル金属化合 物の第一の錯体におけるｃ−Ｃ三重結合の脱キレート化を行うことができ、繕い てケトン基のアルコールへの還元、さらに遊離α水酸基に対してｃ−Ｃ三重結合 の再キレート化が可能である。

錯体の三重結合の脱キレート化は、エタノール中で第二鉄塩の作用によって生じ る。

本発明のアルキル化／キレート化は、例えば、７位のゼラノールおよびゼアラレ ノール誘導体の場合、水酸基またはケトン基を有する脂肪族炭素上で生じる。

従って７位においてエチニルゼラノールまたはゼアラレノールを得るためには、 アセチレン有機マグネシウムの化合物上で、例えば、ゼラロンまたはゼアラレノ ンのような化合物を反応させると、フェノール基が遊離し、カルボニル金属によ ってＣ−Ｃ三重結合のレベルでキレート化が生じる。

例えば、７位のゼラロンまたはゼアラレノンの場合では、ケトン基から数個の原 子を隔てた三重結合を固定することもできる。その際、ケトン基の酸オキシム（ 特に、分岐カルボキシ−メチルオキシム（ＣＭＯ）を用いて）への転化、および アミン−アルキン（例えば、プロパルギルアミン）のアミンを用いたアミド型の カップリングが生じる。続いて、カルボニル金属によるキレート化が三重結合上 で生じる。

特に、抗体を、ハプテン化合物とベクタータンパク質問のカップリングが分岐Ｃ ＭＯによって生じるような免疫原から調製することが、化合物とマーカー成分の 間（すなわち、アルキン−カルボニル金属のクラスター）での、分岐ＣＭＯと称 する分岐カルボキシ−メチルオキシムの利点である。

さらに、本発明の目的は、ＩＲ−ＩＡによる一定量の抗原および抗体、および特 許出願第８２１６０２４号に記載された方法による一定量の生物学的レセプタの ために得られた錯体の応用にある。

なお、本発明は、以下の実施例、および実施例５における生成物２８ｂのＩＲス ペクトルを示す第１図によって説明されよう。

裏庭貫１ プロパルギル「　による、２．４立でのエストラジオールのカルボニル金　２　 の゛・人この実験では、生物学的試験条件下での利用にとって十分に安定な生成 物を得るためにフェノール基の保護が必要であることを示す、以下のような誘導 体を得るため、保護基プロパノ−ルー１を選択した。

これは、鍵と鍵穴の関係でエストラジオールのレセプタに対して高い認識能を有 する（ＲＢＡ＝　３５％）。

（２）から、ｉｎ　５ｉｔｕでカチオンのプロパルギルを付加することによって 、高い収率でそれの２および４位の生成物が得られた。ヘキサカルボニルジコバ ルトのプロパルギルカチオンを使用した。プロパルギル化によれば、有機金属の 誘導体（３）および（４）が得られた。

前以て乾燥しアルゴンでパージして置いた５ｃｈｌｅｎｃｋ管中に、四フルオロ ホウ酸のエーテル錯体１．６−およびジアルキルエーテル３−（前以て、ナトリ ウムおよびベンゾフェノン上で蒸留）を加えた。その際、エチルエーテル３＠！ 中にヘキサカルボニルジコバルトのプロパルギルアルコール０．２２　ｇを含む 溶液を徐々に添加した。不溶性の赤色油が生じた。そして、０．２ｇの（２）（ ０，６Ｘ　１０−”ｍｏｌ）を含むこの溶液を５ｄの塩化メチレン（前以て、水 素化カルシウム上で蒸留）に加えた。

２ないし３時間後、全体として赤煉瓦色の溶液が得られ、カチオンのすべてが反 応したことを示していた。これを、重炭酸ナトリウムの飽和溶液で、続いて中性 になるまで水で洗浄した。硫酸マグネシウム上での乾燥および溶媒の蒸発後、赤 色油０．４ｇが得られた。生成物（３）および（４）（Ｒ’　＝Ｈ）は、シリカ プレート上でのクロマトグラフィーによって分離した（溶出液ＣＢＩＣＨ！／Ｍ ｅＯＨ：　９８　：　２　）　、生成物（３）および（４）は、等しい割合で得 られ、全体の収率が５０％であった。

ＩＲ（３）および（４）　ＣＨｔＣｌｚ　ＣＯ２０Ｂ０．２０２０．２００５． １９９１ＣＩ−’ＮＭＲＣＤＣ１ｇ　（３）　ＩＩ（ｓ）　７．０８　；　ＩＨ （ｓ）　６．６０　；　１１（ｓ）　６．００　：２Ｂ（ｓ）　４．０７ｐｐ■ （４）　１Ｂ（ｄ）　？、２７：７．１７；　１１（（ｄ）　６．８０：６．７ ０；１１１（ｓ）　６．００　；　２Ｈ（ｓ）　４．２０ｐｐｍ質量分析　脱キ レート化産物において　（３）Ｍ”３６８（４）Ｍ”３６８ 反応スキームを以下に示す。

第二鉄塩のエタノール溶液を用いた、（３）および（４）脱キレート化によって 、生成物（３′）および（４′）が生じた。

こういったアセチレン誘導体から、その他のカルボニル金属化合物、例えば、モ リブデンの誘導体ＭＯ□Ｃｐｚ　（Ｃｏ）　ｂまたはオスミウムの誘導体Ｏｓ　 ｓ　（ＣＯ）　ｓ　！が得られた。

本特許出願において、α位は隣接炭素に対する部位特異性を表し、α′またはβ ′は同−炭素上の異なった立体特異性、すなわち模式図での各面を示す。

エストロンに保護基の付いた誘導体（５）においてケイ酸エノールのエーテルを 、塩化メチレンの！！濁液として反応させると、 ＣＢｚＯＣＨｓ　（５Ｃ） ’！！１５（６）、（７）、（８）が得られた。

（５ａ）、（５ｂ）からは、生成物（６）、（７）、（８）が等量ずつ得られた 。（５ｃ）の場合では、生成物（６）が得られた。しかし、クラスターに接近で きないような酸性条件下でフェノール基が容易に見いだせるかぎり、メチルメト キシエーテル基は特に興味深い、そこで、エストロンのフェノール基に対する保 護基の存在下で、１６位を選択的にアルキル化する方法を探求した。カルボニウ ムイオン（９）は、−級および二級アミン、およびピリジンなどの芳香族アミン と容易に反応して保護された。

なお、エノールとエーテルの選択的プロパルギル化試薬として、カチオン（１０ ）の使用を試みた。この実験は、四級ブチルアミン、ジイソプロピルアミン、ピ リジンでは失敗した。

しかし、ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）を用いると、エノールとエーテル に対する非常に高い選択的反応が生じ、単離生成物（５）に関して５０％を越え る収率が得られた。

主に１６α′位が攻撃されるため、反応は部位特異的および立体特異的である。

１６α　におけるプロパルギル化−７）　Ｒ−ＣＨｚＯＣＴｏの合Ｎａ（ＳｉＭ ｅｓ）ｚ　０．３ｇ　（１，６５ａ＋ｍｏｌ）を、室温でＴＨＦ５ａｆ（前辺て 、ナトリウム、ベンゾフヱノン上で蒸留）に溶解した。メチルメトキシエーテル −エストロン０．２４　ｇ　（０，７５■ｍｏｌ）を３−のＴＨＦ溶液に加えた 。この混合物を２０分間撹拌してから、クロロトリメチルシラン０．４−を添加 した。２５分後、溶媒は蒸発するが、ジメチルエーテルによって回収し、水の中 に注いだ、このエーテル溶液を、中性になるまでＮａＨＣＯ３飽和溶液で、続い て水で洗浄した。硫酸マグネシウム上で乾燥させて溶媒が蒸発すると、黄色油が 得られた。ＮＭＲによれば、エノールエーテルへの転化はほぼ定量的であること 、および二の油は２当量のへキサメチルジシラザンを含むことが示された。従っ て、この物質は、そのままプロパルギル化に使用された。

そのエーテル中で、キレート化したプロパルギルアルコール０．２４　ｇ　（０ ，７５ａ＋＋＋＋ｏｌ）および四フルオロホウ酸のエーテル錯体から、カチオン （９）が生成した。（９）はエーテルで十分に洗浄してから、真空下で乾燥させ 、塩化メチレン５−に加えて懸濁させた。中性になるまで水で洗浄した。このエ ーテルを、２当量のＨＭＯＳとともに、０℃にて塩化メチレン３Ｗｉに加えて溶 解した。１５分後、赤煉瓦色の溶液が得られ、これを水に注ぎ、ＮａＨＣＯ３で 洗浄してから、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒が蒸発した。これをシリ カの薄層クロマトグラフィーにかけたところ、主要な赤いスポットが認められた （エーテル１／ペンタン４に対して、Ｒｆ　−０，５０）　。

生成物を、そのままのシリカ上（２２０Ｘ　３５ｍｍ０カラム）に吸着させ、ペ ンタン／エーテル（５：１）の混合液で溶出させた０色が付いた最初の分画が通 過した後、溶出液の混合比を変えた（ペンタン／エーテル、２：ｌ）ところ、純 粋な生成物（０，３８ｇ　、　８０％）が得られた。これは、薄層クロマトグラ フィーによって確かめられた。

ＩＲＣＨｚＣｌｚ　Ｃｏ　２０９０．２０５０．２０２０．２０００．１７６０ Ｃ１１−’ＮＭＲ２５０ＭＨ２ＣＤＣｌ３　：　１Ｂ　７．２１ｐｐａ＋　（ｄ ）　；　ＩＨ６，８１（ｄ、ｄ）　；　ＩＨ６，７９（ｄ）　；　ＩＨ６，０？ （ｓ）　；　２Ｂ　５．０７（ｓ）　；　３Ｈ３，３８（ｓ）　；　１Ｂ　３． ３１（ｄ、ｄ）　：　２Ｂ　２．８Ｈｄ、ｄ）　：　ＩＨ２，６Ｈｄ、ｄ）　； 　１８２．４７（＋ａ）　：Ｉｌｌ　２，３（＋ａ）；　１）１　２．１２（ｍ ）　；　４８　１，８５（醜）　：　５Ｂ　１．４３（麟）　；３ＨＯ，８９（ ｓ）。

質量分析　Ｍ＋　ＮＨａ’　６５６　（脱キレート化産物）Ｍ”３５２ −Ｍ十Ｈ’″３５３　Ｍ＋　ＮＨ４”　３７０裏施■主 ７　の　キレートヒ 誘導体（７）はケトン基をアルコールに還元する前に脱キレート化され（以下参 照）、得られた生成物（１１）はアルコール存在下でＮａＢＨ４によって還元さ れ、この反応では、恐らくα′およびβ′で水素化物の拮抗的攻撃の結果として ２つの生成物が等量得られた。

両生酸物のうち１方、１６α−プロバルギＪし、１７β−オール（１２）だけが 、アセチレン基を保持しており、様々な力ｌレボニル金属、例えば、Ｃｏｔ（Ｃ ｏ）ｓ＋　ＭｏｚＣＰｔ（ＣＯ）ａ、０ｓ３（Ｃｏ）ｔｚによって再キレート化 が可能であって、それぞれ（１６）　、（１７）　。

（１８）が得られた。

Ｒ＝　−ＣＨ３（ｂ　）　Ｍｘ（ＣＯ）ｙ　−−Ｃｏｔ（ＣＯ）＆　（１６）Ｃ ＨｚＯＣＨｓ　（Ｃ）　ＭｏｚＣＰｚ（ＣＯ）ａ　（１７）０１（ＣＯ）＋＊　 （１８） （１６ｃ）、（１７ｃ）および（１８ｃ）では、１６α′で置換されたエストラ ジオールが容易に得られた。酸性条件下（ＨＢＦ、エタノール、水）での処理に よって、それぞれ（１９）　、（１８）および（２１）が得られた。

Ｍｘ（ＣＯ）ｙ　＝　Ｃｏｔ（Ｃｏ）ｉ　’（１９）ＭｏｚＣｐｚ（ＣＯ）、（ ２０） −Ｏ３ｓ（Ｃｏ）＋ｅ　（２１） ７　為゛１１　への　キレート カルボニル金属アルキン誘導体の脱キレート化は、すべて同一条件下で行った０ 例えば、（７）から（１１）への脱キレート化が挙げられる。

（７）　０．１９ｇ　（０，３０ｇｍｏｌ）をエーテル３−に溶解し、これに硝 酸第二鉄ｌＨｏ１（エタノール１０−中）を添加して一晩冷蔵庫で反応させた。

この溶液を水で薄めてエーテルで抽出し、その後エーテル溶液を乾燥して溶媒を 蒸発させた。生成物は、シリカの薄層クロマトグラフィーによって精製した（溶 出液、エーテル２／ペンタン３）、その隙の収率は８０％であった。

質量分析　Ｍ＋Ｈ”　３５３　Ｍ十ＮＨ４”　３７０　Ｍ”　３５２ＮＭＲ２５ ０ＭＨｚ　ＣＤＣｈ　：　１８７．１９ｐｐｍ　（ｄ）　；　１Ｂ　６，８２（ ｄ、ｄ）　；　１Ｂ　６．８（ｄ）　：　２１５．１５（ｄ）　；　３Ｈ３，４ ７（ｄ）　：　２ＥＩ　２，９０（ｄ、ｄ）　：　ＩＩ（２，７２（ｍ）；　１ １　２．６（ｍ）；　３Ｈ２＋２ａ　２．４５（ａ）　；　４Ｈ２，００（＋＊ ）；ＩＨ１，９４（ｔ）；　５Ｈ１，５２ｐｐｍ　（ｍ）；　ＩＨＯ，９６ｐｐ ｍ　（ｓ）。

叉１皿ｌ １６α′−プロパルギルジコバルトー ヘキサカルボニルエストージオール　１６　のム（１１）　０．０８ｇを無水ｘ ｌ）−ル５ｄに溶解し、ＮａＢＨａ　０．０７ｇを添加した。この混合物を一晩 撹拌して１６時間後、水を加えて２時間放置したところ、白色沈殿が生じた。そ のすべてを塩化メチレンで抽出し、塩酸溶液で洗浄してから、中和および乾燥を 行って、溶媒を蒸発させた。初めの生成物を、シリカの薄層クロマトグラフィー にかけた（溶出液、エーテル１／ペンタンｌ）ところ、２つの生成物が分離した 。一方には、ＮＭＲでアセチレン基のプロトンは現れなかったが、スペクトル中 に複数のビニル基のプロトンが認められた。他方には、常に１つのアセチレン基 のプロトンが認められたが、赤外スペクトルではケトン基のバンドは消失してい た。５日後、アセチレン生成物が結晶化（質量分析　Ｍ”　３５８．Ｍ”３５５ 　、　Ｍ＋　ＮＨ４゜３７２）　Ｌ、その０．０３５　ｇを１−のＣＨｔＣｌｔ に溶解し、さらにオクタカルボニルコバルト０．０４５ｇを添加した。

２時間後、溶媒は蒸発し、残渣をペンタン中にとって、そこへエーテルを数滴添 加した。その溶液をフロリジルの短いカラム上で濾過した。溶媒を蒸発させ、生 成物をシリカの薄層クロマトグラフィーにかけた（溶出液、エーテル）、赤外吸 収バンドの回復が認められた（１６ｃ）。

約０．０７　ｇの（１６ｃ）を、エタノール／Ｔ）ＩＦの１：１混合物３ｄに溶 解した。室温にてＨＢＦ４ＥｔｔＯを５滴加え、１０分後、より極性の赤色生成 物がシリカ層上に現れた（溶出液、エーテル１／ペンタン１）、２０時間後、反 応はほぼ完了した。

この混合物を水に取り、塩化メチレンで抽出してから、シリカの１層クロマトグ ラフィー（エーテル溶出液）上で乾燥させた。主要な赤色バンドが現れ、それは 徐々に結晶化して赤色の油が得られた。収率は８０％であった。

ＮＭＲ２５０ＭＨｚ　（ＣＤＣＩｓ）　：　ＩＨ７，０？（ｄ）　；　ＩＨ６， ８１（ｄ、ｄ）　；　１Ｂ　６．５４（ｄ）　：　１８６．０３（ｔ）　；　１ ■４．５４（ｓ）　；　ＩＨ３，４０（ｄ）　；　１Ｂ　３．２９（ｄ、ｄ）　 ：　ＩＨ２，８４（ｄ、ｄ）　：　ＩＨ２，８２（ｑ）　：　２Ｈ２，２６（ｍ ）　：３８１．９３（＋ａ）　；　７Ｈ（１，７〜１．２）　；　３Ｈ０，８０ （ｔ）。

質量分析　脱キレート化後　Ｍ”　３１０スｍ α−ゼーノール　２２、ゼーロン　２３　、およびゼア−レノン　２３′、での 　のムー見したところ、トリカルボニルコバルト基による環のキレート化は、最 も確かな試みのようにみえる。しかし、その利用は、得られた有機金属生成物の 安定性が余りよくないという事実のため限界がある（従って、フェノール基を保 護しの選択的アルキル化に関する研究、およびα′　、β′エチニル−ゼラノー ルのキレート化に関する研究に関心が向けられている。

１）　の１３１および１５　でのプロパルギルヒエストラジオールのときと同様 に、安定な生成物を得るために、前取て遊離フェノール基を保護しなければなら ない。

反応スキームを以下に示す。

例えば、Ｒ＝　ＣＨｓ、　Ｒ’　＝ＣＨ５（ａ）Ｒ＝Ｈ、Ｒ’　＝（Ｃｕｔ）ユ ＯＨ（ｂ）（２２ａ）では、１３位にキレート化したプロパルギル基の導入によ って（２４ａ）が得られた。（２２ｂ）では、１３および１５位において、芳香 環の電子置換が起きた。

２）６立および８立のブロバルギルヒ （２３）　［Ｒ＝ＣＨｓ　、　Ｒ’　＝（１，］から得られたエノールのエーテ ル上のカチオン（９）の反応によって、通常の条件下で芳香環の１３位における 置換が起きた。同一条件下で、エストロン誘導体から得られたエノールのエーテ ルを用いると、環とエノールのエーテルとに対して拮抗的攻撃が生じた０反応は 、エノールのエーテルに対する部位選択的であって、ヘキサメチルジシランゼン の存在下でカチオン（９）が利用された。

反応図式を以下に示すが、操作手順は同じであった。

Ｒ−Ｒ’　−ＣＨ。

例えば、Ｒ＝Ｒ’　＝ｔ−ブチルージメチルシリル基を有する（２３）からは、 アセチレンマグネシウムの作用によって、保護されたα′およびβ′エチニル− ゼラノールの２種類が容易に得られた。

（２６）α′　、β′ これら異性体α′およびβ′の２つは、シリカの薄層クロマトグラフィーによっ て分離した。フェノール基は、カルシウムの塩化物の作用によって反応しやす（ なった。

そのため、α′およびβ’　（２６）は、カルボニル金属によってキレート化し た。　Ｃｏｚ（ＣＯ）＊９Ｍ０ｚＣｐｚ（ＣＯ）ｈ、０５ｓ（Ｃｏ）＋ｚによれ ば、それぞれα′およびβ’（２７Ｌα′およびβ′（２Ｂ）　、α′およびβ ’　（２９）が得られた。

同様に、化合物（２４）および（２５）は、第二鉄塩の作用によって脱キレート した後、モリブデンおよびオスミウムのカルボニル金属によって再キレート化す ることができた。

ＭｏＣｐｘ　（ＣＯ）　ａによってキレート化したαおよびβ（２６）誘導体か ら、酸触媒を用いた、キレート化アセチレンアルコールの脱水の結果、誘導体（ ２７ａおよびｂ）が得られた。

ＴＨＦ　２−にゼラロン（２３）　０．３２ｇ　（ｌｓｍｏｌ）を含む溶液を、 ＴＨＦ　３−にＮａＨ１００■を含む懸濁液に加えた。これを激しく撹拌すると 、白色の沈殿が生じた。さらに、２時間撹拌してから、ＴＨＦ２ｍｌに塩化ｔ− ブチル−ジメチルシラン０．６ｇ（４ａｎｏｌ　）を含む溶液を加えた。激しい 反応が生じて、沈殿が溶解し、乳白色の懸濁液が得られた。水を添加したのち、 生成物をエーテルで抽出した。その溶液を洗浄して乾燥し、溶媒を蒸発させた。

何時間か経過すると、生成物は結晶化した。２つのフェノール基が保護されたこ とがＮ　Ｍ　Ｒで確認され、１００％の収率が得られた。

ＴＨＦ５ａｔｆにＴＢＭＳゼラロンのエーテルｌ　ｍ５ａｏｌを溶解し、その溶 液に過剰量のアセチレングリニヤール試薬を加え、１２時間反応させた０反応混 合物は、塩酸の希釈溶液に加え、エーテル抽出し、洗浄および乾燥を行った。黄 色油が約０．７　ｇ得られ、ＣＤＣｈ中のＮＭＲでは、２．４　ｐｐｍにアセチ レンのプロトンによる２本のピークが示された。シリカの薄層（エーテル１／ペ ンタン１）上には、２つのスポット（Ｒｆ−０，５および０．６）が認められた 。２つの生成物は、６枚のシリカプレート（エーテル１／ペンタン１）上で分離 した。α′およびβ′の分離生成物の収率は６６％であった。

ＴＨＦのＢａａＮＦ溶液の作用、その後の加水分解によってフェノール基が遊離 した。

□質量分析　Ｍ”　３４６　、　Ｍ十Ｈ”　３４７　、　Ｍ＋　ＮＨ４゜３６４ ５）　ＣＭｏを　いて、ゼーロン　２３ａ　およびゼア−レノン　２３ｂ　か− したカルボニル　、２８ａおよび益ｎ立握製 キレート化していない誘導体（２８ａおよび２８ｂ）は、ピリジン中のカルボキ シメチルアミンの作用によって、ゼラロン（２３ａ）およびゼア−レノン（２３ ｂ）から容易に得られ、生じた酸オキシムは、古典的手法（ＴＨＦ中での水酸化 スクシンアミドおよびカルボジイミド、続いてトリエチルアミンの存在下でのプ ロパルギルアミンの添加）によって、プロパルギルアミンにカップリングする。

その後の常法によってキレート化が生じ、シリカの薄層クロマトグラフィー（溶 出液ＣＩｈＣ１□）で精製された生成物は、Ｎ？’ｌＲ，ＩＲおよび質量分析に よって同定された。

ピリジン２０−に溶解した２ｏｏ■ノゼラロ７２　（０，６２ｍｎ＋ｏｌ　）を 含む溶液に、カルボメトキシルアミン４００■（１，８ｍｍｏｌ　）を加えた。

２４時間撹拌すると、不透明な溶液が得られた。

ピリジンを蒸発させたのち、酢酸エチルで残渣を回収した。

水で十分に洗浄した。溶液を、硫酸マグネシウム上で乾燥させてから、蒸発され たところ、白色固体２２０　ｇが得られた。

Ｎ　Ｍ　Ｒによって、２つのオキシムの異性体ＺおよびＥの存在が示された。２ つの異性体の差異をシリカ調製物のプレート上で調べたが、確認できなかった（ 試験溶出液　エーテル；メタノールを数滴加えたエーテル／ペンタン混合物；ク ロロホルム２／プロパツール１）。

融点　１２５°Ｃ Ｈ’ＮＭＲ（２５０Ｍｚ、重水素化アセトン）δｐｐｍ　：主要異性体のスペク トル、 １．３９（３Ｂ、ｄ、”Ｊ−６Ｈｚ、１９−Ｃ）Ｉｓ）２．３２　ｅｔ　３．１ ９（ＩＨ，ｔｄ、’Ｊ＝１２Ｈｚ、”Ｊ＝４．５Ｈｚ、１２−ＣＩ−Ｈ）４．５ ８（２Ｈ，ｓ、ｃＨｚｃＯＯＨ）　ｓ、　１７（１Ｂ、＋ｌｌ、３−ＣＨ）６． ２４（ＩＨ，ｄ、’Ｊ＝２．５Ｈｚ、１５−ＣＨ）　６．２９（ＩＨ，ｄ、’Ｊ ＝２．５Ｈｚ、１３−ＣＨ）９．１４（ＩＨ，ｓ、１４−ＣＯＢ）　１２．０８ （ＩＨ，ｓ、１６−ＣＯＢ）主要異性体のスペクトルに加えて、副次的異性体に 相当して重要性が低い他のスペクトル： １１．７８（１６ＣＯＨ）　；　５．３５（３−ＣＩ）　；　４．５８（ＣＨＩ ＣＯＯＨ）　；　１，４０（１９−ＣＢりＩＲＣ１１−’： ３３３７（Ｆ　＆　ｉ、νｃＯＯＨ）　２９６４（ｅ、　ＶａＣＬ）２９４５（ ｍ、νｃＨｚ）　２９２８（＋ｍ、　ｖ、　Ｃｔｌｓ）２８７０（ｗ＋、　Ｖｓ 　ＣＨり　’　１７３２．１６４３．１６２８（Ｆ、νｃｏ）１５８５（ｓ、芳 香性ｃ＝ｃ） 質量分析（反応性ＮＨ，ガスなどを用いた化学的脱離によって）質量のピーク− 主成分のピーク　ＭＨ”　＝３９４　：　ｍ／　ｚ　＝４１１（Ｍ＋ＮＨ，。） ユーニ）ｆヱルソク３す９ヒ臼ヒ−Ｅ九ｍ乙二土（スキーム１参照） ７′−カルボキシメチロキシムーゼラロン（化合物：３）２００１１ｇ　（０， ５ｇｕ＋ｏｌ　）をＴＨＦ　２３−に溶解し、１５分間４°Ｃにて撹拌した。そ れに、Ｎ−ヒドロスクシンイミド６７■（０，５９園−ｏｌ）、およびＴＨＦ　 ４−に溶解したＮ−Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド１６０■（０，７５ ＋ｗ＋ｏｌ）を含む溶液を加えた。

さらに、この溶液を４°Ｃで４時間、続いて室温で２０時間撹拌したところ、白 色沈殿が生じた。

濾過後、溶液の温度を４°Ｃに戻し、それにプロパルギルアミン６５１１１（１ ｍｓｏｌ）およびトリエチルアミン５２０Ｊ１１（３，５４）を添加した。４℃ で４時間撹拌してから、室温に２０時間放置した。

ロータリーエバポレータでＴＨＦを蒸発させ、残渣をジクロロメタン２０ｍ１に 取った。有機相を水で３回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、溶媒を蒸 発させた。黄色固体１９０■が得られた（収率９０％）。

生成物は、シリカ調製物のプレート上で精製したところ、２つの異性体が分離し た（溶出液：エーテル）。

２つのの異性体に関して、Ｒｆ　＝０．４２および０．４９未反応のオキシムに 関して、Ｒｆ＝０．１融点　１６０”Ｃ Ｈ’　ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、重水素化アセトン）δｐｐｍ＋　：主要異性体に 関して、 １　、３５　（３Ｈ，ｄ、　”Ｊ＝６Ｈｚ、　１９−ＣＨｚ）　２．６８　（１ ８，ｔ、　’Ｊ＝２．５８Ｚ、　Ｃ＝ＣＨ）３、１９　（ＩＨ，ｔｄ、　’Ｊ＝ １２Ｈｚ、　”Ｊ＝４．５Ｈｚ、　１２−ＣＢ−Ｈ）４．０４　（２Ｈ，１６ラ イ）ｌ　ＡＢシスｆｆＡｌ　’Ｊ＝２１５Ｈｚ、’Ｊ＝５１９Ｈｚ、ＮＨ−ＣＢ ｉ−Ｃ：：　Ｃ）４．４５（２Ｈ，ｓ、Ｎｏ−ＣＨｚ−ＣＯ）　５，１７（ＩＨ ，＋ａ、３−ＣＨ）６．２３（ＩＩ、ｄ、’Ｊ＝２．５）１ｚ、１５−Ｃ）ｌ） 　６．２９（ＩＨ，ｄ、’Ｊ＝２．５Ｈｚ、１３−ＣＨ）７．２２（１Ｂ、幅広 ５ＩＮＨ）　９１１５（１８，幅広ｓ、　１４−Ｃｏｎ）１２．０（ＩＨ，ｓ、 １６−ＣＯＨ） 副次的異性体に関して、 １　、３６　（３８，ｄ、　”Ｊ＝６Ｈｚ、　１９−ＣＢ５）　２．６７　（Ｉ Ｈ，ｔ、　’Ｊ＝２．５Ｈｚ、　Ｃ＝ＣＨ’。

Ｌ　０２（２Ｈｔ　４ライン、’Ｊ＝２．４５Ｈｚ、　３Ｊ＝ｓ１７Ｈｚ、ＮＨ −ＣＨｚ−Ｃ＝　ＣＨ）４．４２（２Ｈ，ｓ、Ｎｏ−ＣＢｉ−ＣＯ）　５．２５ （ＩＨ，ｍ、３−ＣＢ）６．２３（ＩＨ，ｄ、’Ｊ＝２．５Ｈｚ、１５−ＣＨ） 　６．２９（ＩＨ，ｄ、’Ｊ＝２．５Ｈｚ、１３−ＣＨ）７．１５（ＩＨ，ｓ、 ＮＨ）　９．１４（ＩＨ，幅広ｓ、　１４−ＣＯＨ）１１、７０（ＩＨ，ｓ、　 １６−ＣＯＨ）Ｉ　Ｒ（ｃｍ−’） ３２７５（Ｆ　ｅｔ　１．　ｖ会合性ＯＨ）　２９６４（ｅ、　Ｖ、　ＣＴｏ） ２９４５（ｍ、　νｃＨｔ）　２８２Ｂ（ｍ、ｖ、Ｃｕｔ）２８５３（ｍ、　ｖ 、　ＣＨｘ）　２１２０（ｆ、ｖＣＣミツ１６９７＆１６３９（Ｆ、νＣｏ）　 １５８０（園、ν芳香性ｅｓｃ）質量分析（反応性ＮＨｓガスなどを用いた化学 的脱離による）質量のピーク：　ＭＨ’″＝４３１．主成分のピーク：　ｍ／　 Ｚ　＝２０７（Ｍ＋　ＮＨ４゜＞　ｍ／ｚ　＝４４８元素分析 ｃｚｓｎコ。Ｎ、Ｏ。

理論値（％）　Ｃ６４，１９Ｈ６，９７Ｎ　６．５１　０２２．３２実測値（％ ）　６４，３７　７．５８　６，８０　２０．７５７′−ヘキサカルボニルジコ バルトープロパルギルアミドメチロキシムーゼラロン：５（スキーム１参照）す べての操作をアルゴン雰囲気下で行った。１９０■の化合物４　（０，４８ｍｍ ｏｌ）をＴＨＦ　１０−中に溶解したのち、ＴＨＦ３ｆｎｌに溶かしたジコバル トヘキサカルボニル１７０■（０，５ｗ＋＋＋＋ｏｌ　）を加えた。ガスが発生 し、赤色に発色しているようであった。

反応は、シリカの薄層クロマトグラフィーで追跡したところ、１５分後に終了し た。

その際、この溶液は、アルゴン存在下で溶出液としてエーテルを用いてシリカの カラム上でクロマトグラフィーにかけた。蒸発させたのち、赤色固体の生成物が 低い収率（約１０％）で得られた。シリカ調製物のプレート上（溶出液、エーテ ル２／ペンタン１）で、２つの異性体、ＺおよびＥが分離シタ（Ｒｆ　＝０．２ および０．２５）　。

融点：生成物は５５℃から分解し始めた。

Ｈ’ＮＭＲ（２５０ＭＨ２，重水素化アセトン）δｐｐｍ　：主要異性体に対し て、 １．３５（３Ｈ，ｄ、３Ｊ＝６Ｈｚ、１９−ＣＢ５）３、１７　（１Ｂ、　ｔｄ 、　’Ｊ＝１２Ｈｚ、　”Ｊ＝４．５Ｈｚ、　１２−ＣＨ）４．４７（２８，Ａ ＢシＸ？Ａ（４５（））、Ｎｏ−ＣＨｚ−ＣＯ）１２．００（１Ｂ、ｓ、１６− ＣＯＨ）４．７０（２）１．１６ライン、ＡＢシｘｔム、’Ｊ＝２＋　５Ｈｚ、 ’Ｊ＝５＋９Ｈｚ＋　ＮＨ−ＣＨ，−Ｃ＝　ＣＢ）５、１７（１Ｂ、ｅａ、　３ −ＣＨ）　６．２２（１１，ｄ、　’Ｊ＝２．５Ｈｚ、　１５−ＣＢ）６．２９ （ＩＨ，ｄ、’Ｊ＝２．５Ｈｚ、１３−ＣＢ）　６．４０（ＩＨ，ｓ、Ｃ：ＥＣ Ｈ）７．７２（１Ｂ、　ｔ、Ｃｏ−Ｎｕ）　９．１４（ＩＨ，ｓ、１４−ＣＯＨ ）ＩＲ（ｃｌ”） ３２３８（Ｆ　ｅｔ　１．　ｖＯＨａｓｓｏｃｉｅ”　）　２９２８（Ｆ、　ｖ 、　ＣＨｚ）２８５Ｂ（ｓ＋、　Ｖ、　ＣＬ）　２０９５　；　２０５２　；　 ２０１４（Ｆ、ｖ金属上でのｃｏ）１６３７（Ｆ、ｖ　ＣＯ）　１５８５（ｍ、 Ｊ／芳香性ｃ＝ｃ）・Ｍｏ２Ｃｐ２　（ＣＯ）　ａからＭＯｚＣｐｚ（Ｃｏ）、 の合成−中に溶解した。アルゴンを流しながら、１６０”Ｃで３時間還流した。

濾過したのち、ＭｏｚＣｐｚ　（ＣＯ）　ａの赤褐色溶液が得られた。

・化合物６の合成 １６０１１１ｇ　（０，３８ｍｍｏｌ　）の化合物４はＴＨＦ　１０ｄに溶かし て、この溶液を前取て調製した（２当量のＭｏｚＣｐｚ　（Ｃｏ）　６から）、 ジモリブデンジシクロペンタジェニルテトラカルボニルＭｏｂ（ｐｇ　（ＣＯ） 　ａのための混合物とした。直ちに赤色溶液が得られ、これをアルミナのカラム クロマトグラフィー（溶出液：エーテル）にかけ、アルゴンで還流した。同様に 、最初のモリブデン錯体から合成された生成物が分離した。エーテル２／ペンタ ン１の混合溶出液を用いて、オキシムの２つの異性体ＺおよびＥをシリカ調製物 のプレート上で分離した（Ｒｆ＝０．１８、および０．２３）　。

融点：生成物は１１０℃から分解し始めた。

Ｈ’　ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、重水素化アセトン）δｐｐａ＋　：主要異性体の スペクトル、 １、３５（３１，ｄ、　”Ｊ＝６Ｈｚ、　１９−Ｃ１ｈ）３、１７　（ＩＨ，ｔ ｄ、　３Ｊ＝１２Ｈｚ、　”Ｊ＝４．５Ｈｚ、　ｌ２−Ｃ）り４．３５（２Ｈ， ｍ、’Ｊ＝６Ｈ２，ＣＨｚ−ＣＥＥＣ）　４ｔ４２（２Ｈ，ｓ、Ｎｏ−Ｃ）Ｉｔ −ＣＯ）５、１８（１）１．ｍ、３−ＣＨ）　５．４２（ＩＯＨ，ｓ、２Ｃｐ） ６．０９（ＩＨ，ｓ、ＣＥＣＨ）　６．２３（ＩＨ，ｄ、’Ｊ＝２．５Ｈｚ　１ ５−ＣＨ）６．２９（ＩＨ，ｄ、’Ｊ＝２．５Ｈｚ、１３−ＣＢ）　６．９１（ １８，ｓ、ＮＨ）９、１１　（１Ｂ、　ｓ、　１４＝ＣＯＨ）　１２．００　（ １Ｂ、　ｓ、　１６−ＣＯＨ）ＩＲ（ロー１） ３４２２（Ｆ　ｅｔ　１．　ｙ会合性ＯＨ）　２９２２（Ｆ、　ｖ−ＣＨｚ）２ ８５１（ｍ、　ｖ−ＣＨｚ） １９９０、１９０７．１８３４（Ｐ、ν金属上でのＣｏ）　１６４１（ｆ、νＣ Ｏ）１５８３（ｍ、Ｊ／芳香性ｃ＝ｃ） ゼアラレノン：７（以下のスキーム２参照）融点：１６４℃ Ｈ’ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、重水素化アセトン）δｐｐｍ　：すべての水素は、 プロトン−プロトンの相対スペクトル（遮蔽）に起因する。

１．３６（３Ｂ、ｄ、　３Ｊ＝６Ｈｚ、　１９−ＣＨｚ）　１．６８（２Ｈ，ｄ 、４−ＣＨｚ）２、α６（５１，＋＋、５−ＣＨｚ、９−Ｃｕｔ、６−ＣＢ−Ｈ ）　２．１３（２Ｈ，ｓ＋、１Ｏ−ＣＨｚ）２．２６（１１，−，８−ＣＩ−） １）　２．３３（２Ｈ，ｍ、１Ｏ−Ｃ１ｌｚ）２、６８　（ＩＨ，ｔａ、　６− ＣＨ−Ｈ）　２．８８　（ＩＨ，ｔａ、　８−ＣＩ−Ｈ）５．００（ＩＨ，ｓ＋ 、３−ＣＨ）　５．７５（ＩＨ，ｍ、Ｃ＝ＣＨ）６．３０（１Ｂ、ｄ、’Ｊ＝２ ．５Ｈｚ、１５−ＣＨ）　９．１９（ＩＨ，ｓ、１４−ＣＯＩ（）６．４４（Ｉ Ｈ，ｄ、’Ｊ＝２．５Ｈｚ、１３−ＣＢ）　１１．９４（ＩＨ，ｓ、１６−ＣＯ Ｂ）７．０５（１８，ｄ、　’Ｊ＝１５Ｈｚ、　１２−ＣＩ＝Ｃ）１３ＣＮＭＲ （２５０ＭＨｚ、重水素化７セ）７）　６ｐｐｅａ　：ＣＨ！の位置は、ＤＥＰ Ｔ実験によって定まった。

２６（１９−Ｃ）　（２７，２８，３Ｂ、４０．４１．４９）＝（４−Ｃ，５− Ｃ，６−Ｃ，８−Ｃ，９，Ｃ，１Ｏ−Ｃ）７９（３−Ｃ）　（１０８，１１５） ＝（１３−Ｃ，ｌ５−Ｃ）　（１３９，１４０）＝（１１−Ｃ，１２−Ｃ）（１ ５０，１５９，１６１，１７８）　＝　（１４−Ｃ，１６−Ｃ，１７−Ｃ，１Ｂ −Ｃ）（２０７，２１５）＝（１−Ｃ０，７−Ｃｏ）ＩＲ（Ｃ１ｌ−’） ３３１４（Ｆ　ｅｔ　１．　ｖ会合性ＯＨ）　２９７６（ｍ、　ｖ−ＣＨｓ）２ ９３５（ｅ、　ｖ−ＣＬ）　２９６Ｂ（ｆ、ｖ−ＣＨｚ）１６９１．１６４９． １６１８（Ｆ、ｙｃｏ）　１５８０（＠、ｖ芳香性ｃｍｃ）質量分析（反応性ガ スとしてＮＨｌを用いた化学的脱離による）質量のピーク−主成分のピーク　Ｍ 　Ｈ”　＝３１９　ｍ／　ｚ　＝３３６（Ｍ＋　Ｎ）１４゜） ′−カルボキシメチロキシムーゼア−レノン：８（スキーム２参照） 化合物３を合成するために、同様の操作法を用いた０反応は、４００■（１，２ ５ａ＋ｍｏｌ）のゼアラレノン７から開始した。粘稠な生成物４３５１１ｇ　（ １，１ｍｍｏｌ、　Ｒｄｔ＝８８％）が得られた。生成物の希薄溶液を用いて、 オキシムの２つの異性体ＺおよびＥの分離を試みた。その際、溶出液として、ク ロロホルム２／プロパツール１の混合物を使用した（Ｒｆ　＝０．３５．０．４ ８）。

Ｈ’　ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、重水素化７（！）：／）　６ｐｐｖｇ　：主要異 性体に対して、 １．３５（３Ｂ、ｄ、”Ｊ＝６Ｈｚ、ｌ９−ＣＩ、ｌ）　２．８５（２Ｂ、ｏ＋ 、８−ＣＨｚ）４．５９（２Ｂ、ｓ、Ｎｏ−ＣＴｏ−ＣＯＯＨ）　４．９５（Ｉ Ｈ，ｍ、３−ＣＨ）５．７４（ＩＨ，ｍ、１ｌ−ＣＨ＝Ｃ）　６．２８（ＩＨ， ｄ、’Ｊ＝２．５Ｈｚ、１５−ＣＨ）６．４２（ＩＨ，ｄ、’Ｊ＝２．５Ｈｚ、 １３−ＣＨ）　７．０５（ＩＨ，ｄ、’Ｊ＝１５Ｈｚ、１２−ＣＨ＝Ｃ）１２． ０（ＩＨ，ｓ、１６−Ｃｏｎ） 分析対象の生成物は、オキシムの２つの異性体ＺおよびＥであった。副次的生成 物のスペクトルは、主要異性体のそれと少し異なっていた。

１．３６（１９−ＣＨ３）　、　４．５５（ＮＯ−ＣＨｔ−ＣＯＯ）ｌ）　、　 ５．１３（３−ＣＨ）　、　６．０（１１−ＣＨ＝Ｃ）また、２つの異性体の比 率は、８５％＝１５％と評価することが３４１２（Ｔ、νｃＯＯ）１）　２９３ ２（Ｆ、　Ｖ、　ＣＨｚ）　２８７０（ｅ、　Ｖ、　ＣＨｚ）１７１７　；　１ ６６９（ｆ、νＣＯ）　１６４７　；　１６６９（Ｆ、νＣＯ）質量分析（反応 性ガスとしてＮＨ３を用いた化学的脱離による）質量のピーク−主成分のピーク 　Ｍ　Ｈ”　＝３９２　ｍ／　ｚ　＝３９２（スキーム２参照） 操作法は、化合物４の合成法と同じであって、２００■の８（０，５ａ＋＋＋ｏ ｌ　）を用いた。薄く着色した非晶質固体１８３■が得られた（ｒｄｔ＝９０％ ）、２つの異性体の分離は、シリカ調製物のプレート上で行った（溶出液：エー テル）　、Ｒｆ　＝０．４６　。

０．６゜ Ｈ’　ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、重水素化アセトン）δｐｐｔａ１．３９（３Ｈ， ｄ、　’Ｊ＝６）１ｚ、　１９−ＣＨｆｆ）　１，３８２、６７　（１Ｂ、　ｔ 、　３Ｊ＝２．５Ｈｚ、　ＣＥ　ＣＨ）　２．６４４．０３（２Ｂ、８ライ：／ 、’Ｊ＝２＋４Ｈ２ｌ’Ｊ＝１１２Ｈ２ＩＮＨ−Ｃ１，−ＣＥＣＨ）　４＋０２ ４．４７（２Ｂ、ｓ、Ｎｏ−ＣＨｔ−Ｃ０）　４，４２５．００（ＩＨ，餉、３ −ＣＩ）　５，１５５．７７（ＩＨ，＋ｎ、１ｌ−ＣＨ＝Ｃ）　５，９４６、２ ８（１８，６，’Ｊ＝２．５８２．１５−ＣＨ）　６．２８６、４４　（ＩＨ， ｄ、　’Ｊ＝２．５Ｈｚ、　１３−Ｃ）ｌ）　６．４６７、０８（１Ｂ、　ｄ、 　”Ｊ＝１５Ｈｚ、　１２−ＣＨ＝Ｃ）　７．１０７．２１（ＩＨ，幅広ｓ、Ｎ Ｈ）　７．２３水素の位置は、主要異性体が左、副次的異性体が右と定ま３２８ ８（１，ｖ会合性ＯＨ）　２９３０（ｆ、　ｖ、　ＣＨｚ）　２８５３（＋ａ、 　ｖ、　Ｃ１ｈ）２１２５（ｆ、ν（、：Ｃ８）　１７３４（ｆ、νｃｏ）　１ ６５１（Ｆ、νｃＯ）１５８０（ｓ＋、シ芳香性ｃ−ｃ） 元素分析 Ｃｚ３ＨｚｓＮｚＯａ 理論値　％　Ｃ６４，４８Ｈ６，５４Ｎ　６，５４　０２２．４３実測値　％　 ６１．５７　６，９５　６，０９　２２．２６７′−ジコバルトヘキサカルボニ ルプロパルギルアミドメチ操作法は、化合物５のときと同じ合成法を利用し、赤 色の生成物が得られた。

融点：生成物は８０℃から分解し始めた。

Ｈ’　ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ　、重水素化７セ）　７）　６ｐｐｍ　：主要異性 体に関して、 １＋３９（３Ｈ１ｄ＋’ＪＪＨｚ、１９−ＣＨｓ）４．５３（２Ｈ，ＡＢシス？ Ａ、４ライン、Ｎｏ−ＣＨｚ−ＣＯ）５．００（ＩＨ，＋ｓ、３−ＣＢ） ４＊　７２（２Ｈ，１６ライン、　３Ｊ＝６．３Ｈｚ、’Ｊ、ＩＨｚ、ＮＨ−Ｃ Ｈｚ−Ｃ＝　ＣＨ）。

５．７７（１１，Ｊ　１ｌ−ＣＨ＝Ｃ）　６．２９（ＩＨ，ｄ、’Ｊ＝２．５Ｈ ｚ、１５−ＣＨ）６．４３（ＩＨ，ｄ、’Ｊ−２．５Ｈｚ、１３−ＣＨ）　７． ０７（１８，ｄ、Ｊ＝１５）１ｚ、１２−ＣＨ＝Ｃ）Ｉ　Ｒ（ＣＨｚＣｈ中で溶 液として） ２９５５（Ｐ、ｖ、ｃＨ，）　２０９７（（νｃｏ）　２０２９；２０５８（Ｆ 、　νｃＯ）ゼラロンの誘導体（図式１） ゼアラレノンの誘導体（図式２） ス１１１ｉ 免韮１澤友狡 ゼラノールの抗体に対する抗原であうで、ゼラノールから誘導した有機金属抗原 の挙動を調べた［その際の免疫化は、ＢＳＡへのカップリングのために、７位に 分岐ＣＭＯを有する免疫原によって行った（Ｄ、Ｔｈｏｕｖｅｎｏｔ　ｅｔ　Ｒ ，Ｍｏｒｆｉｎ＋　Ａｐｐｌｉｅｄａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｒｎｍｅｎｔａｌ　Ｍ ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、　１９８３＋　４５＋　１６−２３）　］　＊このた めに、有機金属誘導体のモル濃度を増加させながら、それと３Ｈ−ゼラノール間 で生じる拮抗作用の反応曲線を作成した。ゼラノール抗体に対する、結合の相対 的親和性（ＡＰＬ）を以下の表に示す。

ゼラノール抗体に対する、結合の相対的親和性（ＡＲＬ）生成物　ＡＲＬ ２８ａ（金属＝モリブデン）　３１％ ２８ａ（金属＝コバルト）、　３９％ ２８ｂ（金属＝コバルト）　５７％ この結果によって、これらの錯体は、抗体上に固定化した３Ｈ−ゼラノールの拮 抗体であることが示された。数種の錯体から得られるパーセントの増大は、ゼラ ノールの免疫学的用量としてこれら抗原が使用できる可能性を明示している。

一方、ＫＢｒ法による化合物２８ｂの赤外スペクトルを第１図に示す、有機金属 の分岐を特徴ずけるバンドは、２０９４　、２０５１および２０２４Ｃ１１−’ に見られる。このタイプの錯体にも見む１出されるこれらのバンドの強度は、他 のいかなるスペクトルレノ〈ンドの強度より明らかに強く、タンパク質が吸収し なし）ゾーンに位置していた。

ど　の　法および エストラジオールレセプタのために修飾したホルモンの親和性は、これらホルモ ンと３Ｈ工ストラジオール間の拮抗反応の試験によって測定した。従って、細胞 質分画を、一定濃度の３Ｈ−エストラジオール（２Ｘ１０−’）および様々な濃 度の被検ホルモン（１０−”から１０−７までの９点）の存在下でインキュベー ションした。さらに、ＲＢＡ（ｒ相対結合親和性」）の値も決定した。これは、 エストラジオールの結合の５０％を置換するモル濃度の修飾ホルモンにおし）で 、レセプタに対するエストラジオールの特異的結合の５０％を置換する非放射活 性エストラジオールの濃度比×１００で示される。

ＲＢＡが高いほど、エストラジオールのレセプタに対する親和性を調べるための ホルモンの活性が高いとし）える。

生成物　ＲＢＡ ３’　−（２−アセチレン）２．５％ ４’　−（４−アセチレン）２．５％ ３−（２−キレート化）　０．００１ ４−（４−キレート化）１．９％ １９−（１６−アセチレン）１．２％ カチオン（９）も、（９）から定量的に単離されるスルフオニウムイオン（９′ ）を得るために、塩化メチレン中でジメチル硫酸などの硫化物と容易に反応した 。

（９）がアセトンおよびアセトニトリル上で反応するとき、これらスルフオニウ ムイオンは、ＣＨ２Ｃｌ□、アセトン、アセトニトリル中で溶解性および安定性 が高い、こういった溶媒中では、その加水分解が徐々に進行してキレート化した プロパルギルアルコールが生じた。メタノールおよびメタノール中では、修飾さ れたカルボニウムイオン（９′）は可溶性を示し、アルコールの分解反応が生じ た。（９）がアルコール上でほとんど瞬間的に反応するとき、上記の反応が完了 するまでには１０分以上かかる。

その条件下で、（９′）の利用は、保護溶媒中に認められる、−級および二級ア ミンのプロパルギル化反応にとって好都合である。

アミンをプロパルギル化する他の方法には、金属の変更に関与するカチオン（９ ”）の利用が挙げられる。

塩化メチレン中でのアミンに関する反応は極めて速いが、アセトンならびにアセ トニトリル、およびエタノールまたは塩化メチレン／水のような二相溶媒中など の他の溶媒においても、この反応を理解できる。特に方法は、水溶性の誘導体、 およびカテコールアミンなどの有機溶媒に難溶な誘導体について様々に変えられ る。　２ 他のへテロ原子を使用して、カチオン（９）（例えば、ピリジンおよびその誘導 体）の一時的キレート化が可能である。

そして、ピリジンの場合、チオレートのアルキル化にともなった、保護溶媒に対 する反応性の変更も可能である。（９）から、アルキル化剤および核試薬を新た に生成させることもできる。

以下に、アミンまたはチオール基へのアルキル化／キレート化にかかわる操作の ための手順を説明する。

エーテル５−中でキレート化したプロパルギルアルコール０．３４ｇに、ＨＢＦ ４エーテル１−を添加した。カチオンが形成されたのち、エーテルで洗浄し、真 空下で乾燥した。その次に、ＣＨ２Ｃｌ□１０−およびＣＨｓＳＣＨｓ　Ｏ，５ −を添加した。数分後、鮮やかな赤色沈澱が生成し、これをデカンチーシランし て、沈澱をエーテルで洗浄した。真空下で乾燥すると、鮮やかな薄赤色（煉瓦色 ）の粉末が得られ、これをアルゴンで冷却しである容器中に入れた。

これに、アセトン２ｍｌに溶解したカチオン１０■を添加した。０°Ｃに保って 、このアセトン溶液にイソプロピルアミン０．２−を滴下した。直ちに反応が生 じ、赤褐色の生成物が得られた。収率は７５％であった。

この反応は、他の溶媒、特にエタノールまたはメタノール中でも可能である。従 って、反応は、−１５℃ないし一２０℃の低い温度を維持しなければならない０ 例えば、エタノール１−にカチオン１０■を添加し、この溶液を一１５°Ｃで調 製した。カチオンが溶解したのち、エタノール０．５−に溶けたイソプロピルア ミン０．２−を滴下した。直ちに反応が起きたので、室温に戻して、溶媒を蒸発 させた。

メタノール８−にカチオン０．１６ｇを添加し、メタノール１ｄに対してジイソ プロピルアミン０．２　ｄを滴下した。溶液の色は、最初のオレンジから赤に変 化した。そして、溶媒を蒸カチオンは、以下のように調製した。

ＭＯｔＣｐｚ（ＣＯ）ａの調製 ＭｏｚＣｐｚ　（ＣＯ）　ａ ５ｇのＭｏ２Ｃｐｚ　（ＣＯ）　ｂをコパージグリン（Ｎａ＋ベンゾフェノン） ４０ｄに加え、アルゴン下で３時間還流した。濾過してから、ジグリンを蒸発さ せた。続いて、プロパルギルアルコールを添加した。エーテル５ｏ−に対してア ルコール４ｇの溶液を添加してから、エーテル１５０艷に対してＨＢＦ４３ｗｌ の溶液を加えた（滴下）、生じたオレンジ色の沈澱を濾過、および洗浄すると、 黄色の粉末が得られた。

このカルボニウムイオンによって、特にチオレート型で、チオール基のアルキル 化が生じた。

プロパルギルアルコール０．３ｇに対してカチオンが得られ、これを洗浄および 乾燥してから、ＣＨｚＣｈに約１１ｎｌのピリジンを含む溶液を過剰に添加した 。溶媒を蒸発させ、残渣をエーテルで洗浄すると、ピンク色の残渣が得られた。

手続補正書（方式） 平成１年６月　８日 特許庁長官　吉　１）文　毅　殿 １、事件の表示 ＰＣＴ／ＦＲ８８１０００４５ ２、発明の名称 アルキン−カルボニル金属のクラスターを含む新型の低温バイオプローブ ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 ４、代理人 住所　〒１０５東京都港区虎ノ門−丁目８番１ｏ号６、補正の対象 （１）　特許法第１８４条の５第１項の規定による書面の「特許出願人の代表者 」の欄 （２）委任状 （３）　明細書の翻訳文 （４）　請求の範囲の翻訳文 ７、補正の内容 （１１（２１別紙の通り （３）明細書の翻訳文の浄書（内容に変更なし）（４）　請求の範囲の翻訳文の 浄書゛ （内容に変更なし） ８、゛　添付書類の目録 （１）　訂正した特許法第１８４条の ５第１項の規定による書面　１通 （２）　委任状及びその翻訳文　各１通国際調査報告 国際調査報告

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. １．有機金属化合物によってアルキル化／キレート化した生理活性物質から成る 錯体であって、前記有機金属化合物がアルキン−カルボニル金属のクラスターを 含むことを特徴とする錯体。
2. ２．前記アルキンがプロバルギル誘導体であることを特徴とする、請求項１記載 の錯体。
3. ３．前記生理活性物質が、少なくともフェノール性芳香環、および／または少な くとも脂肪族炭素上での遊離ケトンもしくは水酸基、および／または少なくとも アミン、チオールもしくはカルボキシル基を含み、アルキル化／キレート化が、 ・保護された水酸基のα位に対応したフェノール環上で・ケトン基もしくは水酸 基のα位に対応した脂肪族炭素上で・水酸基もしくはケトン基を有する脂肪族炭 素上で、または・アミン、チオールもしくはカルボキシル基上で、生じることを 特徴とする、前記請求項のいずれか１項に記載の化合物
4. ４．前記生理活性物質が、エストロゲンもしくはエストロゲン誘導体、特に以下 の一般式で示されるエストロゲン▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化 学式、表等があります▼［式中、Ｒは、水素、またはヒドロキシアルコキシ基な どの保護基を示す］であることを特徴とする、前記請求項のいずれか１項に記載 の錯体。
5. ５．前記生理活性物質が、食餌性マイコトキシン、特に、以下の一般式で示され るゼラロン、ゼアラレノール、ゼアラレノン、およびそれらの誘導体 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）ｅｔ▲数式、化学式、表等があります ▼（ＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩＩ）ｅｔ▲数式、化学式、 表等があります▼（ＩＶ）［式中、ＲおよびＲ′は、水素、またはヒドロキシア ルコキシ基などの保護基を示す］であることを特徴とする請求項１に記載の錯体 。
6. ６．ＲおよびＲ′がシラン型の誘導体、まなはＣ１ないしＣｌ６のアルキル、ア ルコキシもしくはヒドロキシアルコキシ基であることを特徴とする、請求項４ま たは５記載の錯体。
7. ７．ＲおよびＲ′が、Ｃ１のアルキル、アルコキシもしくはヒドロキシアルコキ シ基であることを特徴とする、請求項４記載の錯体。
8. ８．ＲおよびＲ′がＣ１４ないしＣ１６のアルキル、アルコキシもしくはヒドロ キシアルコキシ基であることを特徴とする、請求項５記載の錯体。
9. ９．前記有機金属化合物が、周期律表の第ＩＶ、第ＶＩＩ、第ＶにＩＩ、第ＩＸ 族の金属の化合物であることを特徴とする、前記請求項のいずれか１項に記載の 錯体。
10. １０．前記有機金属化合物が、クロム、モリブデン、タングステン、マンガン、 コバルト、ニッケル、テクネシウム、レニウム、オスミウム、ルテニウムの中か ら選ばれた１個または数個の有機金属化合物であることを特徴とする、前記請求 項のいずれか１項に記載の錯体。
11. １１．前記有機金属化合物の金属配位子が、ＣＯ，ＣＳ，ＣＳｅ，ＣＮＲ１，Ｐ （Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４）、シクロンベンタジニエル［Ｒ１はアルキル基もしくは− ＣＯＲ５基であって、Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４ならびにＲ５は置換基の有無にかかわら ないフェニル基もしくはフェノキシ基、置換基の有無にかかわらないアルキル基 もしくはアルコキシ基、およびハロゲン原子を示し、Ｒ５は−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ Ｃ１）２を取り得る］の中から選ばれることを特徴とする、前記請求項のいずれ か１項に記載の錯体。
12. １２．前記生理活性物質が、芳香環上で、またはケトン基もしくは遊離水酸基の α位でキレート化されることを特徴とする、請求項４または５記載の錯体。
13. １３．前記生理活性物質が、芳香環に対して、脂肪族炭素のケトン基または水酸 基のα位で選択的および立体特異的にアルキル化／キレート化されることを特徴 とする、請求項４または５記載の錯体。
14. １４．前記ゼラノールまたはぜアラレノールのα位がアルキル化／キレート化さ れることを特徴とする、請求項５ないし１３記載の錯体。
15. １５．ゼアラレノンおよびゼラロンのケト基が酸オキシム基に転化され、後者が 、三重結合上でカルボニル金属によってキレート化されたプロパルギルアミンで 確実にカップリングされ、前記ゼアラレノンおよびゼラロンの７位にアルキル化 ／キレート化されることを特徴とする、請求項５ないし１３項のいずれか１項に 記載の錯体。
16. １６．前記生理活性物質を、カルボニル金属化合物でキレート化したアルキンカ チオンによってアルキル化することを特徴とする、前記請求項のいずれか１項に 記載の錯体の調製法。
17. １７．カルボニル金属化合物によってキレート化された前記アルキンカチオンが 、四フルオロホウ酸の存在下でアルキンアルコールをカルボニル金属化合物と反 応させて得られることを特徴とする、請求項１６記載の方法。
18. １８．前記生理活性物質がエノールのエーテル型に転化されるケトン基を有し、 カルボニル金属化合物でキレート化したアルキンカチオンによる生理活性物質の アルキル化／キレート化反応が四フルオロホウ酸の存在下で生じることを特徴と する、請求項１６または１７項に記載の方法。
19. １９．前記溶媒が塩化メチレンであることを特徴とする、請求項１６ないし１８ 記載の方法。
20. ２０．前記ケトン基をアセチレン有機金属化合物に反応させて、ケトン基を有す る炭素にエチニル基および水酸基を導入し、前記エチニル基が三重結合上でカル ボニル金属化合物によって確実にキレート化されることを特徴とする、請求項１ ６または１７記載の錯体の調製法。
21. ２１．分岐カルボニル金属オキシムの介在によってケトン基を酸オキシムに転化 し、前記酸基がアミド結合によってプロパルギルアミン化合物のアミン基に確実 にカップリングし、カルボニル金属によるキレート化がプロパルギルアミンの三 重結合上で生じることを特徴とする、請求項１６または１７記載の錯体の調製法 。
22. ２２．前記Ｃ−Ｃ三重結合上での最初のカルボニル金属化合物の脱キレート化、 続いて同じく三重結合上での二番目のカルボニル金属化合物の再キレート化を行 うことを特徴とする、請求項１６ないし２１項のいずれか１項に記載の方法。
23. ２３．ケトン基のα位における最初のカルボニル金属化合物錯体のＣ−Ｃ三重結 合の脱キレート化、次にケトン基のアルコール基への還元、続いて遊離水酸基の α位の再キレート化を行うことを特徴とする、請求項１６ないし１９項のいずれ か１項に記載の方法。
24. ２４．前記三重結合上でのカルボニル金属の脱キレート化が、エタノール中の第 二鉄塩の作用によって起きることを特徴とする、請求項２２および２３項記載の 方法。
25. ２５．前記生理活性物質が、アルキル化／キレート化されるアミン基を有し、硫 化物の存在下で反応することを特徴とする、請求項１６または１７項記載の方法 。
26. ２６．前記生理活性物質が、アルキル化／キレート化されるアミン基を有し、カ ルボニウムイオン▲数式、化学式、表等があります▼（Ｒ１＝ＨまたはＣＨ３） を直接利用することを特徴とする、請求項１６または１７項記載の方法。
27. ２７．前記生理活性物質が、アルキル化／キレート化されるチオール基を有し、 ピリジンの存在下で反応が生じることを特徴とする、請求項１６または１７項記 載の方法。
28. ２８．前記生理活性物質を、ＩＲ−ＦＴの使用によって一定量の生物学的レセプ タまたは免疫学的用量の抗原もしくは抗体のためトレーサーとして利用すること を特徴とする、前記請求項のいずれか１項に記載の生理活性物質錯体の利用法。