【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
本発明は新規なアスコクロリン誘導体に関す
る。アスコクロリンは本発明者らによつて糸状菌
As―cochyta viciaeの生産物より見出された抗
生物質である（特許第585252号明細書参照）。
アスコクロリンは優れた抗ウイルス作用及び抗
腫瘍作用を有するが、哺乳動物の循環器系に対す
る毒性が強い為、オルシルアルデヒドの４位の水
酸基をメチル化して医薬としての適用が検討され
た（Agr.Biol.Chem.，45，531）。しかしながら
この化合物は水溶性に乏しく、全身的ないし経口
的に投与しても血中濃度が上昇しにくいという欠
点を有している。
本発明者らは、アスコクロリンの有する優れた
薬理作用を保持しつつ、欠点を消去した誘導体の
創製を検討したところ、意外にもアスコクロリン
とハロゲン原子を有する直鎖又は分岐鎖低級脂肪
酸又はそのエステルとを反応させて得られる誘導
体がインスリンの作用を増強し、又、脂質代謝改
善作用、種種の実験腫瘍の発育阻止作用をも有す
ることを見出した。
本発明はこのように優れた化合物にかかるもの
で一般式
（式中Ｒは水素原子又は低級アルキル基を意味
し、ｎは１〜５の整数を意味する）
で表わされるアスコクロリン誘導体の発明であ
る。
本発明の化合物は例えばアスコクロリンのモノ
金属塩、例えばナトリウム塩又はカリウム塩とハ
ロゲノ脂肪酸エステルとを反応させ、次いで必要
に応じ加水分解することにより容易に製造され
る。
反応に用いられる溶媒としては通常の有機溶
媒、例えばメタノール、エタノールなどのアルコ
ール類、アセトンなどのケトン類、ジエチルエー
テル、テトラヒドロフランなどのエーテル類、ベ
ンゼン、トルエンなどの芳香族炭化水素、クロロ
ホルムなどのハロゲン化炭化水素、ジメチルホル
ムアミドなどの酸アミド類、その他にジメチルス
ルホキシドなど種々の溶媒が用いられる。反応
性、操作性（安全性）、経済性の観点からアルコ
ール類、ジメチルホルムアミド、アセトンが通常
使用される。反応の温度範囲は実施例にみられる
ように室温から溶媒の沸点に至るまで巾広く使用
できる。反応の結果得られるアスコクロリンのア
ルコキシカルボニルアルキルエーテルを加水分解
して遊離カルボン酸型の誘導体を製造するには、
緩和なアルカリ条件下、例えば、炭酸カルウム、
炭酸ナトリウム等の塩基を存在させて行なうのが
よい。酸性条件下での加水分解は副生成物を生じ
易いので得索ではない。このようにして得られる
本発明の化合物は次のような優れた薬理作用を有
し医薬として有用である。
１ 本発明の化合物は脂肪組織のインキユベーシ
ヨン倍地に添加するとインスリン依存性にぶど
う糖とり込みを10-5Mの生理的に到達できる濃
度で顕著に促進する。この作用はインスリン依
存性にぶどう糖をとり込む組織に特異的で、肝
臓ならびに腎臓のように濃度依存性に糖をとり
込む組織ではこの作用な認められない。しかし
肝臓ならびに腎臓切片においても糖代謝の亢進
が起る。これらの事実は本発明の化合物がイン
スリンの作用を増強することを示唆する。
本発明の化合物の糖代謝に対する作用は実験動
物に経口投与した際にも認められる。すなわち、
健常ラツト及びマウスに１週間経口投与すると血
糖及び血中脂質が有意に低下する。この事実は糖
尿病ならびに動脈硬化症に随伴する高カロリー血
症の改善に好適である。事実本発明の化合物を糖
尿病々態モデル動物に投与すると著明な改善作用
が認められた。例えば遺伝性肥満糖尿病マウス
C57BL／Ksj（db+／db+）は高血糖、肥満、イン
スリン抵抗性、多飲多尿、尿糖排泄など成人性糖
尿病に近似した病態モデルと言われる。この病態
動物に対しては従来の抗糖尿病薬、たとえばスル
ホニル尿素系及びビグアナイド系化合物は完全に
無効である。しかし本発明の化合物は食欲を減退
させることなく、多飲多尿の抑制、血糖及び血中
脂質の低下など糖尿病に特有の異常を著しく改善
した。とりわけ注目に価するのは24時間における
尿糖排泄が90％程度減少することである。またア
ロキサン及びストレプトゾトシンにつよつて誘発
された糖尿病動物にたいしても同様の効果を認め
た。したがつて本発明の化合物が抗糖尿病作用及
び脂質代謝改善作用を有することは明らかであ
る。
２ 本発明化合物のいま一つの顕著な作用は悪性
腫瘍にたいするものである。
DBA／２系マウスに原発した移植性白血病
Ｌ―1210は制癌剤のスクリーニングに頻用され
る悪性腫瘍である。この腫瘍は悪性度が高く、
細胞100個を腹腔内に移植するだけで２週間以
内にすべてのマウスが腫瘍死する。本発明の化
合物の或るものは、Ｌ―1210移植の１週間前に
１回投与しただけでマウスを有意に腫瘍死から
救い完全に治瘉させることができる。このよう
な作用は従来の制癌剤及び免疫亢進剤には認め
られない。さらに通常の制癌剤評価に用いられ
る条件下においても本発明の化合物はマウスの
Ehrlich，Ｓ―180，MethA，Ｌ―1210及びｐ
―388などの同系ないし同種実験腫瘍にたいし
て有意な延命効果を示す。
本発明の化合物は単独で用いてもよいが通常は
アルカリで中和して水に溶解したり、懸濁剤、賦
形剤又はその他の補助剤と混合して非径口投与及
び経口投与に適する剤形として製剤化することが
好ましい。好ましい製剤としては、たとえば注射
剤、粉剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠、丸剤、カプセ
ル剤、坐剤などがあげられる。これらの製剤は常
法により、たとえば賦形剤又は補助剤として、乳
糖、蔗糖、種々の澱粉、ぶどう糖、セルローズ、
メチルセルローズ、カルボキシメチルセルロー
ズ、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸
塩、タルク、植物油、オクチルデシルトリグリセ
ライド、重炭酸ソーダ、種々のポリソルベート、
ポリエチレングリコール、レシチンならびにこれ
らの２種以上の混合物等を用いて製造される。
経口投与用製剤は活性成分を10〜55％（重量
比）、注射剤は１〜20℃（重量比）の量で含有す
ることが好ましい。
本発明の化合物の毒性はかなり弱く、ラツト及
びマウスにたいする急性毒性LD50は経口投与で
0.5〜10ｇ／Kg以上、腹腔内投与で150〜500mg／
Kgである。
本発明の医薬の用量は病態の種類、症状などに
よつて異なるが例えば注射の場合は成人１人１日
当り５〜1000mg、経口投与の場合には30〜3000
mg、坐薬の場合には50〜1000mgで目的を達するこ
とができる。つぎに製剤例を示す。
１ 本発明の化合物の無菌粉末92.5mgをジエチル
アミノアタノール158mgを溶解した無菌蒸留水
10mlに加え、80℃に５分間加温して溶解する。
この液を直接静脈内に投与するか或いは静脈点
滴用輸液ないし糖液に混合して点滴静注する。
２ 本発明の化合物の微粉末（粒径約2μ）100部
に乳糖88部、トウモロコシ澱粉100部、HPC―
SL2部、Ｌ―HPC（PC―30）50部、結晶セルロ
ーズ33部、ステアリン酸カルシウム５部、タル
ク10部を加えてよく混合し打錠機を用いて直径
８mm重量250mgの錠剤に打錠する。
実施例 １
アスコクロリン81ｇ（0.2モル）をジメチルホ
ルムアミド600mlにとかす。これに60％水素化ナ
トリウム（油性）7.5ｇを少しずつ加える。得ら
れたナトリウム塩の溶液にブロム酢酸エチルエス
テル33.4ｇ（0.2モル）を加える。室温に一夜放
置したのちさらに60％水素化ナトリウム0.8ｇお
よびブロム酢酸エチルエステル3.34ｇを加える。
一夜放置したのち、減圧濃縮する。残つた油状物
に１％塩酸１及びクロロホルム１を加えてよ
くかきまぜて分液ロートに移し激しく振盪したの
ち静置する。下層のクロロホルム層を分取し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥したのち、濃縮、乾固す
る。残つた油状物にメタノール１を加えて一夜
放置し析出した結晶を分取して乾燥する。融点
114℃の目的生成物の帯黄色結晶61.3ｇが得られ
る。母液を濃縮したのち放置してさらに目的生成
物13.7ｇを得る。
メタノールから再結晶して得た融点114℃の結
晶についての元素分析値はC27H35ClO6として
理論値（％） Ｃ，66.05；H7.18
測定値（％） Ｃ，66.21；H7.06
プロトン核磁気共鳴スペクトル（100MHz，
CDCl3，TMS内部標準）は
δ；0.69（3H，ｓ），0.80（3H，ｄ），0.83（3H，
ｄ），1.32（3H，ｔ），1.90（3H，ｓ），1.6〜
2.0（3H，ｍ），2.3〜2.5（3H，ｍ），2.63（3H，
ｓ），3.61（2H，ｄ），4.30（2H，ｑ），4.59
（2H，ｓ），5.37（1H，ｄ），5.45（1H，ｔ），
5.90（1H，ｄ），10.26（1H，ｓ），12.54（1H，
ｓ）
目的生成物の構造式
実施例 ２
アスコクロリン20.25ｇをジメチルホルムアミ
ド350mlにとかす。これに60％水素化ナトリウム
（油性）2.0ｇを少しずつ加える。得られたナトリ
ウム塩の溶液にブロム酢酸エチルエステル7.65ｇ
を加える。室温に一夜放置したのち、さらに60％
水素化ナトリウム0.2ｇ及びブロム酢酸エチルエ
ステル0.77ｇを加える。数日放置したのち減圧下
に濃縮する。残つた油状物を１％塩酸400ml及び
クロロホルム400mlで分液する。クロロホルム層
を分取し、無水硫酸ナトリウムで乾燥したのち濃
縮乾固する。残つた油状物にメタノール150mlを
加え加温して溶解したのち室温に一夜放置する。
析出した結晶を取し風乾する。融点128℃の淡
黄色結晶として目的生成物15.76ｇ（収率66％）
を得る。結晶化母液中に残存する目的生成物はシ
リカゲルカラムクロマトグラフイーによつて分離
精製できる。
融点129℃（メタノールより再結晶）、元素分析
値分子式C26H33ClO6として
理論値（％） Ｃ，65.47；Ｈ，6.97
測定値（％） Ｃ，65.60；Ｈ，6.96
プロトン核磁気共鳴スペクトル（100MHz，
CDCl3，TMS内部標準）
δ：0.69（3H，ｓ），0.80（3H，ｄ），0.83（3H，
ｄ），1.89（3H，ｓ），1.6〜2.0（3H，ｍ），2.3
〜2.5（3H，ｍ），2.63（3H，ｓ），3.60（2H，
ｄ），3.83（3H，ｔ），4.60（2H，ｄ），5.36
（1H，ｄ），5.45（1H，ｔ），5.89（1H，ｄ），
10.26（1H，ｓ），12.54（1H，ｓ）
目的生成物の構造
実施例 ３
エタノール50mlに金属ナトリウム0.23ｇをとか
す。得られた溶液にアスコクロリン4.05ｇ、ブロ
ム酢酸エチルエステル1.84ｇ及びエタノール40ml
を加える。湯浴上10時間加熱還流したのち減圧濃
縮乾固し、残渣を１％塩酸50ml及びクロロホルム
50mlで分液する。クロロホルム層を分取し無水硫
酸ナトリウムで乾燥したのち減圧濃縮乾固する。
油状残渣をメタノールから再結晶して実施例１で
得られる目的生成物と同一の目的物結晶2.5ｇを
得た。
実施例 ４
実施例１で合成したアスコクロリンの４―０―
エトキシカルボニルメチル体20ｇをメタノール
600mlに加温溶解させる。35℃まで冷却したなら
ば水80mlに溶かした無水炭酸カリウム20ｇを加え
撹拌する。２時間後に吸引過し、液に水100
mlに加える。ついで10％塩酸でPH６に中和する。
液量が約200mlとなるまで減圧濃縮し、ついで水
100mlを加えたのち10％塩酸でPH２に修正する。
この液にクロロホルム200mlを加えて激しく振盪
したのち静置する。下層のクロロホルム層を分取
し無水硫酸ナトリウムで乾燥したのち減圧濃縮す
る。油状の残渣をメタノール約50mlに溶かしつい
で白濁が始まるまで水を加える。目的生成物の結
晶種を加えて一夜放置すると結晶が析出する。結
晶を取し乾燥すると融点147℃の目的生成物
13.8ｇを得る。
含水メタノールから再結晶して得た融点147℃
の結晶についての元素分析値はC25H31Cl6として
理論値（％） C64.86；H6.75
測定値（％） C64.65；H6.71
プロトン核磁気共鳴スペクトル（100MHz，
CDCl3，内部標準TMS）
δ：0.70（3H，ｓ），0.80（3H，ｄ），0.83（3H，
ｄ），1.91（3H，ｓ），1.6〜2.0（3H，ｍ），2.3
〜2.5（3H，ｍ），2.64（3H，ｓ），3.61（2H，
ｄ），4.66（2H，ｓ），5.39（1H，ｄ），5.46
（1H，ｔ），5.91（1H，ｄ），10.26（1H，ｓ），
10.55（1H，ｓ），12.53（1H，ｓ）
目的生成物の構造
実施例 ５
実施例１と同様にしてアスコクロリン20.25ｇ
に２―ブロムプロピオン酸エチルエステル10.41
ｇを反応させる。実施例１と同様に処理したのち
得られる油状混合物をシリカゲルカラムクロマト
グラフイーにより分離精製した。目的生成物は３
％酢酸エチルエステルを含むジクロロメタンでカ
ラムから溶出単離することができる。粘稠な油状
物である目的生成物8.2ｇを得る。
プロトン核磁気共鳴スペクトル（100MHz，
CDCl3、内部標準TMS）
δ：0.69（3H，ｓ），0.80（3H，ｄ），0.83（3H，
ｄ），1.27（3H，ｔ），1.60（3H，ｄ），1.90
（3H，ｓ），1.6〜2.0（3H，ｍ），2.3〜2.5
（3H，ｍ），2.62（3H，ｓ），3.62（2H，ｄ），
4.21（2H，ｑ），4.98（1H，ｑ），5.37（1H，
ｄ），5.45（1H，ｔ），5.90（1H，ｄ），10.26
（1H，ｓ），12.54（1H，ｓ）
目的生成物の構造
実施例 ６
アスコクロリン12.15ｇをジメチルホルムアミ
ド150mlに溶かす。これに60％水素化ナトリウム
（油性）1.2ｇを少しずつ加える。得られたナトリ
ウム塩溶液に２―ブロムプロピオン酸ノルマルブ
チルエステル6.27ｇを加える。室温に数日放置し
たのちさらに60％水素化ナトリウム0.3ｇ及びブ
ロムプロピオン酸ノルマルブチルエステル2.2ｇ
を加えて数日放置する。反応溶液を減圧濃縮乾固
し残渣を１％塩酸250ml及びクロロホルム250mlで
分液する。クロロホルム層を分取し無水硫酸ナト
リウムで乾燥したのち濃縮乾固する。残つた油状
物をシリカゲルカラムクロマトグラフイーで分離
精製し目的精製物を得る。このものは室温に長時
間放置すると徐々に結晶化する。融点50〜65℃、
収量9.23ｇ。メタノールから再結晶したものの元
素分析値はC30H41ClO6として
理論値（％） Ｃ，67.59；Ｈ，7.75
測定値（％） Ｃ，67.68；Ｈ，7.73
プロトン核磁気共鳴スペクトル（100MHz，
CDCl3，TMS内部標準）
δ：0.69（3H，ｓ），0.81（3H，ｄ），0.83（3H，
ｄ），0.91（3H，ｔ），1.2〜2.0（7H，ｍ），
1.61（3H，ｄ），1.91（3H，ｓ），2.3〜2.5
（3H，ｍ），2.62（3H，ｓ），3.4〜3.8（2H，
ｍ），4.16（2H，ｔ），4.99（1H，ｑ），5.37
（1H，ｄ），5.49（1H，ｔ），5.91（1H，ｄ），
10.24（1H，ｓ），12.56（1H，ｓ）
目的生成物の構造式
実施例 ７
アスコクロリン12.15ｇをジメチルホルムアミ
ド150mlに溶かす。これに60％水素化ナトリウム
（油性）1.1ｇを徐々に加える。得られたナトリウ
ム塩の溶液に２―ブロム酪酸エチルエステル5.85
ｇを加え90℃で４時間加熱する。ついで60％水素
化ナトリウム340mg及び２―ブロム酢酸エチルエ
ステル1.64ｇを加え４時間90℃に加熱する。反応
溶液を減圧濃縮乾固し、残渣を１％塩酸300ml及
びクロロホルム300mlで分液する。クロロホルム
層を分取し、無水硫酸ナトリウムで乾燥したのち
濃縮乾固する。残渣する油状物をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーにより分離精製する。３％
酢酸エチルエステルを含むジクロロメタンで溶出
する目的物の分画を採取し濃縮乾固する。粘稠な
油状物である目的生成物6.8ｇを得る。
プロトン核磁気共鳴スペクトル（100MHz，
CDCl3、内部標準TMS）
δ：0.70（3H，ｓ），0.81（3H，ｄ），0.83（3H，
ｄ），1.05（3H，ｔ），1.25（3H，ｔ），1.92
（3H，ｓ），1.4〜2.2（5H，ｍ），2.3〜2.5
（3H，ｍ），2.61（3H，ｓ），3.4〜3.9（2H，
ｍ），4.19（2H，ｔ），4.93（1H，ｔ），5.36
（1H，ｄ），5.48（1H，ｔ），5.91（1H，ｄ）
10.23（1H，ｓ），12.55（1H，ｓ）
目的物の構造式
実施例 ８
アスコクロリン12.15ｇをジメチルホルムアミ
ド200mlにとかす。これに60％水素化ナトリウム
（油性）1.2ｇを少しづつ加える。得られたナトリ
ウム塩の溶液に４―ブロム酪酸エチルエステル
5.9ｇを加え、90〜100℃に３時間加熱する。つぎ
に60％水素化ナトリウム0.3ｇ及び４―ブロム酪
酸エチルエステル２ｇを追加しさらに10時間加熱
する。反応溶液を減圧濃縮乾固し、残留物を１％
塩酸200ml及びクロロホルム200mlで分液する。ク
ロロホルム層を分取し無水硫酸ナトリウムで乾燥
後、減圧濃縮乾固する。残留する油状物をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフイーにより分離精製す
る。粘稠な油状物である目的生成物8.6ｇを得る。
プロトン核磁気共鳴スペクトル（100MHz，
CDCl3、内部標準TMS）
δ：0.69（3H，ｓ），0.80（3H，ｄ），0.83（3H，
ｄ），1.26（3H，ｔ），1.92（3H，ｓ），1.6〜
2.8（7H，ｍ），2.62（3H，ｓ），3.50（2H，
ｄ），3.98（2H，ｔ），4.16（2H，ｑ），5.37
（1H，ｄ），5.45（1H，ｔ），5.90（1H，ｄ），
10.22（1H，ｓ），12.52（1H，ｓ）
目的生成物の構造
実施例 ９
実施例５で得られたエステル、４―０―（１―
エトキシカルボニルエチル）アスコクロリン4.0
ｇを実施例４の方法と同様にして加水分解を行
い、後処理をして得られる目的物の油状の残渣を
シリカゲルカラムクロマトグラフイー（メタノー
ル：クロロホルム〕１：20）で精製する。得られ
た目的生成物（3.4ｇ）は、非結晶性の固体であ
り、融点は明瞭でない。
このもののプロトン核磁気共鳴スペクトル
（100MHz，CDCl3、内部標準TMS）
δ：0.70（3H，ｓ），0.80（3H，ｄ），0.83（3H，
ｄ），1.60（3H，ｄ），1.90（3H，ｓ），1.60〜
2.0（3H，ｍ），2.3〜2.5（3H，ｍ），2.63（3H，
ｓ），3.62（2H，ｄ），4.98（1H，ｑ），5.37
（1H，ｄ），5.45（1H，ｔ），5.90（1H，ｄ），
10.20（1H，ｓ），10.25（1H，ｓ），12.5（1H，
ｓ）
であり、目的生成物の構造は、
である。
実施例 10
実施例８で得たエステル体、４―０―（３―エ
トキシカルボニル）プロピルアスコクロリン5.0
ｇを実施例４と同様の方法で加水分解処理をして
得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフイー（酢酸エチルエステル：クロロホルム
１：10）で精製すると、油状の目的物が得られ
る。
このもののプロトン核磁気共鳴スペクトル
（100MHz，CDCl3、内部標準TMS）は
δ：0.69（3H，ｓ），0.80（3H，ｄ），0.80（3H，
ｄ），1.92（3H，ｓ），1.6〜2.8（7H，ｍ），
2.62（3H，ｓ），3.50（2H，ｄ），3.98（2H，
ｔ），5.37（1H，ｄ），5.45（1H，ｔ），5.90
（1H，ｄ），10.22（1H，ｓ），10.50（1H，
ｓ），12.52（1H，ｓ）
である
目的生成物の構造は、
で表わされる。
実施例 11
５週令のddY系雄性マウス（ｎ＝10）に0.1％
の本発明の化合物含むを飼料（日本クレア、CE
―２）を１週間与えた。１週間後に心臓から採血
した血糖及び血清コレステロールを測定した結果
は表１のとおりである。
The present invention relates to novel ascochlorin derivatives. Ascochlorin was discovered by the present inventors in filamentous fungi.
It is an antibiotic discovered from the product of As-cochyta viciae (see Patent No. 585252). Although ascochlorin has excellent antiviral and antitumor effects, it is highly toxic to the circulatory system of mammals, so methylation of the hydroxyl group at the 4-position of orcylaldehyde was investigated for use as a medicine (Agr. .Biol.Chem., 45 , 531). However, this compound has poor water solubility and has the disadvantage that its blood concentration is difficult to increase even when administered systemically or orally. The present inventors investigated the creation of a derivative that eliminates the drawbacks of ascochlorin while retaining its excellent pharmacological action, and found that ascochlorin and a straight or branched lower fatty acid having a halogen atom or a derivative thereof It has been found that a derivative obtained by reacting with an ester enhances the action of insulin, and also has the action of improving lipid metabolism and inhibiting the growth of various experimental tumors. The present invention relates to such an excellent compound, which has the general formula (In the formula, R means a hydrogen atom or a lower alkyl group, and n means an integer of 1 to 5.) This invention is an ascochlorin derivative represented by the following. The compound of the present invention can be easily produced, for example, by reacting a monometallic salt of ascochlorin, such as a sodium salt or a potassium salt, with a halogeno fatty acid ester, followed by hydrolysis if necessary. Solvents used in the reaction include common organic solvents, such as alcohols such as methanol and ethanol, ketones such as acetone, ethers such as diethyl ether and tetrahydrofuran, aromatic hydrocarbons such as benzene and toluene, and halogens such as chloroform. Various solvents such as hydrogenated hydrocarbons, acid amides such as dimethylformamide, and dimethyl sulfoxide are used. Alcohols, dimethylformamide, and acetone are usually used from the viewpoints of reactivity, operability (safety), and economy. As shown in the Examples, the temperature range for the reaction can be wide ranging from room temperature to the boiling point of the solvent. To produce the free carboxylic acid type derivative by hydrolyzing the alkoxycarbonyl alkyl ether of ascochlorin obtained as a result of the reaction,
Under mild alkaline conditions, e.g. potassium carbonate,
This is preferably carried out in the presence of a base such as sodium carbonate. Hydrolysis under acidic conditions is not advantageous as it tends to produce by-products. The compound of the present invention thus obtained has the following excellent pharmacological effects and is useful as a medicine. 1. When added to the incubation medium of adipose tissue, the compounds of the present invention significantly promote glucose uptake in an insulin-dependent manner at physiologically attainable concentrations of 10 -5 M. This effect is specific to tissues that take up glucose in an insulin-dependent manner, and is not observed in tissues that take up glucose in a concentration-dependent manner, such as the liver and kidneys. However, increased glucose metabolism also occurs in liver and kidney sections. These facts suggest that the compounds of the present invention potentiate the action of insulin. The effects of the compounds of the present invention on glucose metabolism are also observed when administered orally to experimental animals. That is,
Oral administration to healthy rats and mice for one week significantly lowers blood sugar and blood lipids. This fact is suitable for improving hypercaloremia associated with diabetes and arteriosclerosis. In fact, when the compound of the present invention was administered to diabetic model animals, a marked improving effect was observed. For example, genetically obese diabetic mice
C57BL/Ksj (db + /db + ) is said to be a pathological model similar to adult diabetes, including hyperglycemia, obesity, insulin resistance, polydipsia, polyuria, and urinary sugar excretion. Conventional antidiabetic drugs, such as sulfonylurea and biguanide compounds, are completely ineffective against this diseased animal. However, the compound of the present invention did not reduce appetite and significantly improved abnormalities specific to diabetes, such as suppressing polydipsia and polyuria and lowering blood sugar and blood lipids. What is especially noteworthy is that urinary sugar excretion in 24 hours is reduced by about 90%. Similar effects were also observed in diabetic animals induced by alloxan and streptozotocin. Therefore, it is clear that the compounds of the present invention have antidiabetic effects and lipid metabolism improving effects. 2. Another remarkable action of the compounds of the present invention is against malignant tumors. Transplantable leukemia L-1210, which originated in DBA/2 mice, is a malignant tumor that is frequently used in screening for anticancer drugs. This tumor is highly malignant;
Intraperitoneal implantation of 100 cells causes all mice to die from the tumor within two weeks. Some of the compounds of the present invention can significantly rescue mice from tumor death and completely cure them after a single administration one week before L-1210 transplantation. Such effects are not observed in conventional anticancer agents and immunostimulants. Furthermore, even under the conditions used for the evaluation of anticancer drugs, the compound of the present invention was effective in mice.
Ehrlich, S-180, MethA, L-1210 and p.
Shows a significant survival effect on syngeneic or allogeneic experimental tumors such as -388. Although the compounds of the present invention may be used alone, they are usually dissolved in water after neutralization with an alkali, or mixed with suspending agents, excipients, or other adjuvants for parenteral and oral administration. Preferably, it is formulated in a suitable dosage form. Preferred formulations include, for example, injections, powders, granules, tablets, sugar-coated tablets, pills, capsules, and suppositories. These preparations are prepared in a conventional manner by adding, for example, lactose, sucrose, various starches, glucose, cellulose, etc. as excipients or adjuvants.
Methylcellulose, carboxymethylcellulose, magnesium stearate, lauryl sulfate, talc, vegetable oil, octyldecyl triglyceride, bicarbonate of soda, various polysorbates,
It is manufactured using polyethylene glycol, lecithin, a mixture of two or more of these, and the like. Preparations for oral administration preferably contain the active ingredient in an amount of 10 to 55% (by weight), and injections preferably contain the active ingredient in an amount of 1 to 20°C (by weight). The toxicity of the compounds of the present invention is quite low, and the acute toxicity LD 50 for rats and mice is
0.5-10g/Kg or more, 150-500mg/intraperitoneal administration
Kg. The dosage of the drug of the present invention varies depending on the type of pathology, symptoms, etc., but for example, in the case of injection, it is 5 to 1000 mg per adult per day, and in the case of oral administration, it is 30 to 3000 mg per day.
mg, or in the case of suppositories, 50 to 1000 mg can achieve the purpose. Next, formulation examples are shown. 1 92.5 mg of sterile powder of the compound of the present invention was dissolved in 158 mg of diethylaminoathanol in sterile distilled water.
Add to 10ml and warm to 80℃ for 5 minutes to dissolve.
This solution is directly administered intravenously, or mixed with an intravenous infusion solution or sugar solution and injected intravenously. 2 100 parts of fine powder of the compound of the present invention (particle size: about 2μ), 88 parts of lactose, 100 parts of corn starch, HPC-
Add 2 parts of SL, 50 parts of L-HPC (PC-30), 33 parts of crystalline cellulose, 5 parts of calcium stearate, and 10 parts of talc, mix well, and use a tablet machine to form tablets with a diameter of 8 mm and a weight of 250 mg. Example 1 81 g (0.2 mol) of ascochlorin are dissolved in 600 ml of dimethylformamide. Add 7.5 g of 60% sodium hydride (oil-based) little by little to this. 33.4 g (0.2 mol) of ethyl bromoacetate are added to the solution of the sodium salt obtained. After standing overnight at room temperature, an additional 0.8 g of 60% sodium hydride and 3.34 g of bromoacetic acid ethyl ester are added.
After standing overnight, concentrate under reduced pressure. Add 1 part of 1% hydrochloric acid and 1 part of chloroform to the remaining oil, stir well, transfer to a separating funnel, shake vigorously, and let stand. The lower chloroform layer is separated, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated to dryness. Add 1 part of methanol to the remaining oil, leave it overnight, collect the precipitated crystals, and dry. melting point
61.3 g of yellowish crystals of the desired product are obtained at 114°C. The mother liquor was concentrated and allowed to stand to obtain an additional 13.7 g of the desired product. The elemental analysis values for crystals with a melting point of 114°C obtained by recrystallization from methanol are C 27 H 35 ClO 6 Theoretical value (%) C, 66.05; H7.18 Measured value (%) C, 66.21; H7.06 Proton nuclear magnetic resonance spectrum (100MHz,
CDCl 3 , TMS internal standard) is δ; 0.69 (3H, s), 0.80 (3H, d), 0.83 (3H,
d), 1.32 (3H, t), 1.90 (3H, s), 1.6~
2.0 (3H, m), 2.3~2.5 (3H, m), 2.63 (3H,
s), 3.61 (2H, d), 4.30 (2H, q), 4.59
(2H, s), 5.37 (1H, d), 5.45 (1H, t),
5.90 (1H, d), 10.26 (1H, s), 12.54 (1H,
s) Structural formula of the desired product Example 2 20.25 g of ascochlorin is dissolved in 350 ml of dimethylformamide. Add 2.0g of 60% sodium hydride (oil-based) little by little to this. Add 7.65 g of bromoacetic acid ethyl ester to the resulting sodium salt solution.
Add. After leaving it at room temperature overnight, the temperature increases by an additional 60%.
Add 0.2 g of sodium hydride and 0.77 g of ethyl bromoacetate. After standing for several days, concentrate under reduced pressure. The remaining oil is separated between 400 ml of 1% hydrochloric acid and 400 ml of chloroform. The chloroform layer is separated, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated to dryness. Add 150 ml of methanol to the remaining oil and dissolve by heating, then leave at room temperature overnight.
The precipitated crystals are taken and air-dried. 15.76 g (yield 66%) of the desired product as pale yellow crystals with a melting point of 128°C.
get. The desired product remaining in the crystallization mother liquor can be separated and purified by silica gel column chromatography. Melting point 129℃ (recrystallized from methanol), elemental analysis molecular formula C 26 H 33 ClO 6 Theoretical value (%) C, 65.47; H, 6.97 Measured value (%) C, 65.60; H, 6.96 Proton nuclear magnetic resonance spectrum (100MHz,
CDCl 3 , TMS internal standard) δ: 0.69 (3H, s), 0.80 (3H, d), 0.83 (3H,
d), 1.89 (3H, s), 1.6-2.0 (3H, m), 2.3
~2.5 (3H, m), 2.63 (3H, s), 3.60 (2H,
d), 3.83 (3H, t), 4.60 (2H, d), 5.36
(1H, d), 5.45 (1H, t), 5.89 (1H, d),
10.26 (1H, s), 12.54 (1H, s) Structure of desired product Example 3 Dissolve 0.23 g of metallic sodium in 50 ml of ethanol. 4.05 g of ascochlorin, 1.84 g of bromoacetic acid ethyl ester and 40 ml of ethanol were added to the resulting solution.
Add. After heating under reflux on a hot water bath for 10 hours, it was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was dissolved in 50 ml of 1% hydrochloric acid and chloroform.
Separate into 50 ml. The chloroform layer is separated, dried over anhydrous sodium sulfate, and then concentrated to dryness under reduced pressure.
The oily residue was recrystallized from methanol to obtain 2.5 g of crystals of the desired product, which was the same as the desired product obtained in Example 1. Example 4 4-0- of ascochlorin synthesized in Example 1
20g of ethoxycarbonylmethyl compound in methanol
Heat and dissolve in 600ml. Once cooled to 35°C, add 20 g of anhydrous potassium carbonate dissolved in 80 ml of water and stir. After 2 hours, aspirate and add 100% water to the solution.
Add to ml. Then, neutralize to pH 6 with 10% hydrochloric acid.
Concentrate under reduced pressure until the liquid volume is about 200ml, then add water.
After adding 100ml, adjust the pH to 2 with 10% hydrochloric acid.
Add 200 ml of chloroform to this solution, shake vigorously, and then let stand. The lower chloroform layer is separated, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure. Dissolve the oily residue in about 50 ml of methanol and add water until it becomes cloudy. When crystal seeds of the desired product are added and left overnight, crystals precipitate. When the crystals are taken and dried, the desired product with a melting point of 147℃ is obtained.
Obtain 13.8g. Melting point: 147℃ obtained by recrystallization from aqueous methanol
The elemental analysis values for the crystal are C 25 H 31 Cl 6 , theoretical value (%) C64.86; H6.75 Measured value (%) C64.65; H6.71 Proton nuclear magnetic resonance spectrum (100MHz,
CDCl 3 , internal standard TMS) δ: 0.70 (3H, s), 0.80 (3H, d), 0.83 (3H,
d), 1.91 (3H, s), 1.6-2.0 (3H, m), 2.3
~2.5 (3H, m), 2.64 (3H, s), 3.61 (2H,
d), 4.66 (2H, s), 5.39 (1H, d), 5.46
(1H, t), 5.91 (1H, d), 10.26 (1H, s),
10.55 (1H, s), 12.53 (1H, s) Structure of desired product Example 5 Ascochlorin 20.25g in the same manner as in Example 1
2-bromopropionic acid ethyl ester 10.41
React g. After treatment in the same manner as in Example 1, the resulting oily mixture was separated and purified by silica gel column chromatography. The target product is 3
It can be isolated by elution from the column with dichloromethane containing % acetic acid ethyl ester. 8.2 g of the desired product are obtained as a viscous oil. Proton nuclear magnetic resonance spectrum (100MHz,
CDCl 3 , internal standard TMS) δ: 0.69 (3H, s), 0.80 (3H, d), 0.83 (3H,
d), 1.27 (3H, t), 1.60 (3H, d), 1.90
(3H, s), 1.6~2.0 (3H, m), 2.3~2.5
(3H, m), 2.62 (3H, s), 3.62 (2H, d),
4.21 (2H, q), 4.98 (1H, q), 5.37 (1H,
d), 5.45 (1H, t), 5.90 (1H, d), 10.26
(1H, s), 12.54 (1H, s) Structure of desired product Example 6 12.15 g of ascochlorin is dissolved in 150 ml of dimethylformamide. Add 1.2 g of 60% sodium hydride (oil-based) little by little to this. 6.27 g of 2-bromopropionic acid n-butyl ester is added to the obtained sodium salt solution. After leaving it at room temperature for several days, add 0.3 g of 60% sodium hydride and 2.2 g of n-butyl bromopropionate.
Add and leave for a few days. The reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was separated between 250 ml of 1% hydrochloric acid and 250 ml of chloroform. The chloroform layer is separated, dried over anhydrous sodium sulfate, and then concentrated to dryness. The remaining oily substance is separated and purified by silica gel column chromatography to obtain the desired purified product. This substance gradually crystallizes when left at room temperature for a long time. Melting point 50~65℃,
Yield: 9.23g. The elemental analysis value of the product recrystallized from methanol is C 30 H 41 ClO 6 Theoretical value (%) C, 67.59; H, 7.75 Measured value (%) C, 67.68; H, 7.73 Proton nuclear magnetic resonance spectrum (100MHz,
CDCl 3 , TMS internal standard) δ: 0.69 (3H, s), 0.81 (3H, d), 0.83 (3H,
d), 0.91 (3H, t), 1.2~2.0 (7H, m),
1.61 (3H, d), 1.91 (3H, s), 2.3-2.5
(3H, m), 2.62 (3H, s), 3.4~3.8 (2H,
m), 4.16 (2H, t), 4.99 (1H, q), 5.37
(1H, d), 5.49 (1H, t), 5.91 (1H, d),
10.24 (1H, s), 12.56 (1H, s) Structural formula of desired product Example 7 12.15 g of ascochlorin is dissolved in 150 ml of dimethylformamide. Gradually add 1.1 g of 60% sodium hydride (oil-based) to this. Add 5.85 2-bromobutyric acid ethyl ester to the resulting sodium salt solution.
Add g and heat at 90℃ for 4 hours. Next, 340 mg of 60% sodium hydride and 1.64 g of 2-bromoacetic acid ethyl ester were added and heated to 90°C for 4 hours. The reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was separated between 300 ml of 1% hydrochloric acid and 300 ml of chloroform. The chloroform layer is separated, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated to dryness. The residual oil is separated and purified by silica gel column chromatography. 3%
A fraction of the target product eluted with dichloromethane containing ethyl acetate is collected and concentrated to dryness. 6.8 g of the desired product are obtained as a viscous oil. Proton nuclear magnetic resonance spectrum (100MHz,
CDCl 3 , internal standard TMS) δ: 0.70 (3H, s), 0.81 (3H, d), 0.83 (3H,
d), 1.05 (3H, t), 1.25 (3H, t), 1.92
(3H, s), 1.4~2.2 (5H, m), 2.3~2.5
(3H, m), 2.61 (3H, s), 3.4~3.9 (2H,
m), 4.19 (2H, t), 4.93 (1H, t), 5.36
(1H, d), 5.48 (1H, t), 5.91 (1H, d)
10.23 (1H, s), 12.55 (1H, s) Structural formula of target object Example 8 12.15 g of ascochlorin is dissolved in 200 ml of dimethylformamide. Add 1.2 g of 60% sodium hydride (oil-based) little by little to this. Add 4-bromobutyric acid ethyl ester to the resulting sodium salt solution.
Add 5.9g and heat to 90-100°C for 3 hours. Next, 0.3 g of 60% sodium hydride and 2 g of 4-bromobutyric acid ethyl ester were added, and the mixture was further heated for 10 hours. The reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was reduced to 1%.
Separate the solution with 200 ml of hydrochloric acid and 200 ml of chloroform. The chloroform layer is separated, dried over anhydrous sodium sulfate, and then concentrated to dryness under reduced pressure. The remaining oil is separated and purified by silica gel column chromatography. 8.6 g of the desired product are obtained as a viscous oil. Proton nuclear magnetic resonance spectrum (100MHz,
CDCl 3 , internal standard TMS) δ: 0.69 (3H, s), 0.80 (3H, d), 0.83 (3H,
d), 1.26 (3H, t), 1.92 (3H, s), 1.6~
2.8 (7H, m), 2.62 (3H, s), 3.50 (2H,
d), 3.98 (2H, t), 4.16 (2H, q), 5.37
(1H, d), 5.45 (1H, t), 5.90 (1H, d),
10.22 (1H, s), 12.52 (1H, s) Structure of desired product Example 9 The ester obtained in Example 5, 4-0-(1-
ethoxycarbonylethyl) ascochlorin 4.0
g is hydrolyzed in the same manner as in Example 4, and the resulting oily residue of the desired product is purified by silica gel column chromatography (methanol:chloroform] 1:20). The desired product (3.4 g) was an amorphous solid with an unclear melting point. Proton nuclear magnetic resonance spectrum of this product (100MHz, CDCl 3 , internal standard TMS) δ: 0.70 (3H, s), 0.80 (3H, d), 0.83 (3H,
d), 1.60 (3H, d), 1.90 (3H, s), 1.60~
2.0 (3H, m), 2.3~2.5 (3H, m), 2.63 (3H,
s), 3.62 (2H, d), 4.98 (1H, q), 5.37
(1H, d), 5.45 (1H, t), 5.90 (1H, d),
10.20 (1H, s), 10.25 (1H, s), 12.5 (1H,
s), and the structure of the desired product is: It is. Example 10 Ester obtained in Example 8, 4-0-(3-ethoxycarbonyl)propylascochlorin 5.0
The oily substance obtained by hydrolyzing g in the same manner as in Example 4 is purified by silica gel column chromatography (acetic acid ethyl ester:chloroform 1:10) to obtain the desired oily substance. The proton nuclear magnetic resonance spectrum (100MHz, CDCl 3 , internal standard TMS) of this product is δ: 0.69 (3H, s), 0.80 (3H, d), 0.80 (3H,
d), 1.92 (3H, s), 1.6-2.8 (7H, m),
2.62 (3H, s), 3.50 (2H, d), 3.98 (2H,
t), 5.37 (1H, d), 5.45 (1H, t), 5.90
(1H, d), 10.22 (1H, s), 10.50 (1H,
s), 12.52(1H, s) The structure of the desired product is: It is expressed as Example 11 0.1% to 5-week-old ddY male mice (n=10)
Feed containing the compound of the present invention (Japan Clea, CE
-2) was given for one week. Table 1 shows the results of measuring blood sugar and serum cholesterol taken from the heart one week later.
【表】
実施例 12
遺伝性肥満糖尿マウスC57BL／Ksj（db+／db+）
に４―０―ヒドロキシカルボニルメチルアスコク
ロリン0.1％を含む飼料を１週間与えた。この間
に飼料摂取量、飲水量、尿量及び尿糖排泄量は毎
日測定した。結果は平均値±標準誤差で示す。[Table] Example 12 Genetic obese diabetic mouse C57BL/Ksj (db + /db + )
were fed a diet containing 0.1% 4-0-hydroxycarbonylmethylascochlorin for one week. During this period, feed intake, water drinking, urine output, and urinary sugar excretion were measured every day. Results are expressed as mean ± standard error.
【表】
実施例 13
５週令のddY系雄性マウスの腹腔内にストレプ
トゾトシン130mg／Kgを注射し、１週間後に尿糖
排泄が強陽性（テステープ
、イライ、リリー
社）の個体20頭を選抜し無作為に２群に分け１群
（ｎ＝10）に４―０―エトキシカルボニルメチル
アスコクロリン0.1％を含む飼料（日本クレア、
CE―２）与え、他の１群（ｎ＝10）にCE―２を
与え１週間飼育した。この間飼料及び飲料水は自
由摂取とした。１週間後に血糖、血中インスリ
ン、同遊離脂肪酸及び肝臓クリコーゲン量を測定
した。[Table] Example 13 130 mg/Kg of streptozotocin was intraperitoneally injected into 5-week-old ddY male mice, and 1 week later, 20 mice with strongly positive urinary sugar excretion (Testape, Eli, Lilly) were selected. Randomly divided into two groups, one group (n = 10) was fed a feed containing 0.1% of 4-0-ethoxycarbonylmethylascochlorin (Clea Nippon Co., Ltd.).
CE-2), and another group (n=10) was given CE-2 and raised for one week. During this period, feed and drinking water were available ad libitum. One week later, blood sugar, blood insulin, free fatty acids, and liver clicogen levels were measured.
【表】【table】
【表】
実施例 14
５週令のddY系雄性マウスにエーリツヒ腹水癌
細胞106個を腹腔内に移植し、24時間後から１日
１回連続７回、本発明の化合物を１回２mgづつ腹
腔内に投与した。薬効は生存期間で評価した。[Table] Example 14 106 Ehritzch ascites carcinoma cells were intraperitoneally transplanted into 5-week-old ddY male mice, and 24 hours later, 2 mg of the compound of the present invention was administered once a day for 7 consecutive times. It was administered intraperitoneally. Drug efficacy was evaluated based on survival time.
【表】
実施例 15
４週令のBDF1雌性マウスの腹腔内に４―０―
ヒドロキシカルボニルメチルアスコクロリン２mg
を１％トラガカントゴム液に懸濁して注射した。
対照群には１％トラガカントゴム液のみを与え
た。１週間後にＬ―1210白血病細胞102個をマウ
ス腹腔内に移植した。結果は表に示すとおりであ
る。[Table] Example 15 4-0- intraperitoneally administered to 4-week-old BDF 1 female mice.
Hydroxycarbonylmethylascochlorin 2mg
was suspended in 1% gum tragacanth solution and injected.
The control group received only 1% tragacanth solution. One week later, 102 L-1210 leukemia cells were intraperitoneally transplanted into the mouse. The results are shown in the table.
【表】【table】