JPH01308273A - 新規エーテル置換フルオレセイン化合物の複合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 けい光発生性化合物（ｆｌｕｏｒｅｓｃｉｎｇ　ｃｏｍ
７ｙｏｔｔｎｄｓ）は、成るエネルギー範囲内のエネル
ギーにより励起されると光を放出することができる能力
の故に広範な用途を有する。この能力のためけい光発生
剤（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｒｓ、　）は新規な品物の広告
において及び化学又は生物学的プロセス、たとえばアッ
セイにおける標識としての使用が見出された。即ち種々
の化合物をけい光発生化合物に複合する（　ｃｏｎｊｒ
ｂｇａｔｅ　）ことができ、複合体（ｃｏｎｊｒｔｇａ
ｔｅ）はいくつかのタイプの分配に付され、そしてＡ４
体のゆくえは試料に光を照射しそして該複合体が存在す
るゾーンを検出することによって決定される。

この方法は抗原と抗体の如き特異的結合対を含むイムノ
アッセイに使用することができる。特異的結合対の構成
員の一つにけい光発生剤を複合し−７〜 そして種々の工程成績表（ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　）　　
を使用することによって未知の試料の抗原の量に関して
固相と液相間にけい光発生化合物を分５６させることが
できる。該相の何れかのけい光を測定することによって
試料中の抗原の濃度に対して観測されたけい光のレベル
を関連させることができる。

別に、液体媒体中の標識環境に依存して標識のけい光を
変える機構を設けることによってけい光−つにけい光発
生体を標識することに加えて、他の構成員に消光剤（ｑ
ｗｅｎｃｅγ）即ち、光子の放出を防止するけい光発生
化合物の励起エネルギーを吸収することができる分子を
標識することができる。次いで特異的結合対の二つの構
成員がけい光発生剤及び消光剤〆消光のための必要な祭
間的近接を有するように一緒になるとき（αｓｓ　ｏｃ
　ｉａｔ、　ｅｄ　］にのみ消光は起こる。

けい光発生剤を製造することにおいて多くの切実な要求
がある。けい光発生剤として、高い消光係数、好ましく
は１に近い又は１に等しい高い量子効率、化学的安定性
、大きなストークスシフト（５ｔａｋｅｓ　５ｈｉｆｔ
　）　７５：所望され、そしてけい光が他の試薬によっ
て影響される場合は、かかる試薬に対する有効な応答が
所望される。ｙ（＜、それ自体けい光発生性である血清
又は仲の絆成の存在下にけい光発生剤を使用するべき場
合には、けい光発生剤は媒体中の仙化合物によシ吸収さ
れたエネルギーとは実質的に異なる範囲：のエネルギー
を吸収することが望ましい。血清の場合には、４５０７
１ｍを実質的に越える好ましくは５００ｎｍを越える光
を吸収するけい光発生化合物することが望ましい。

消光剤分子に対しては、消光剤はけい光憧生剤分子をイ
１効に消光すること、ＩＡ（Ｊち、けいガ１発生剤の放
出の波長範囲と消光剤によるじ、収の波長範囲間での実
質重重々りがあることが望」シい。更に、消光剤は化学
的に安定であり、好賛しくけ非けい光性であるべきであ
り、そしてけい光発生剤−消光剤対に高い消光効率を与
えるべきである。

更に、有利な化合物は実質的に純粋々形態の所望の生成
物を与えるように合庭の合胛的な様式に鋭敏であるべき
である。

米国特許第３．９９８．９４３号は、けい光発生剤に対
する抗体が実質的にけい光を消光する場合に、リガンド
（ｌｉｇａｎｔｌ　）に対する抗体とけい光発生剤に対
する抗体の同時的結合の光体障害ンー４Ｆｊｌ用してリ
ガンド−けい光発生剤互存づ木士六−畦力゛関布するイ
ムノアッセイを開示する。米国１特許第３，９９６、３
４５号は、けい光光牛剤／朔セ異的結合対の一つの栴成
員に結合しそして消光剤が特Ｊく的結合凡 対の同じ又は異なった折縁しに結合する３３５合りい光
弄生剤−消光剤対が開局１°るイｌ、ノアソセイを記載
している。アツセ・ｒに一消光剤及びけい光発生剤が媒
体中のアナライｌ−（ａｎａｌｙｔｅ　）の量に基づき
消光範囲内に近接ぜ１．められている程度に依存する。

けい光発生剤の誘導体を含む化合物の広範なリストがあ
る。既知の化合物は４Ｊ　　、　ｓ　′　−ジヒドロギ
シフルオレセイン及ヒ４．７　　、　ｓ　７　−ジヒド
ロキシ２′　、７′　−ジブロモフルオレセイン（Ｃ１
Ａ、６１．７４０７ｄ）を含む。フルオレセインのイン
チオシアネーｌ−誘導体は商業的に入手可肯ｖであり、
一方インシアネ−１・誘導体げＣ，Ａ。

Σ９　、　ｓ　６３　ｂＫＱｒ１３され、そしてスルホ
ン基を含む誘導体は（、”、Ａ’、５８，９０１２ａに
記載されている。

少々くとも一個のアニオン基及び他の分子に糺合する／
こめの一つの官能性ンー有するジ（カルコケンエーテル
）　’７ｄ称置４６フルオレセイン〔Ｄｉ（ｃｈａｌｃ
ｏｇｃｎ　ｅｔｈｅｒ　）　　ｓｙｍｅｔｒｉｃａｌｌ
ｙｓｒｔｂｓｔｉｔｕｔａｄ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ
ｓ　）が提供される。該化合物１ｄイムノアノ十イ、特
に抑清試料を含むイムノアッセイにかける試薬のための
他の物質に結合される。フルオレセイン化合物はノ・ロ
ゲン化されていてもよい。

けい光発生剤は大きい消光係数、高い一子収率を有し、
５０ＣＪｎｍより高いが大関・収を有し、普通１０ｎｍ
を赫えるストークスシフト してそれ自体安定であり又他の化合物に結合したときに
安定で舌）る。消光剤は５　０　０　ｎｍより上の最大
吸収を有（〜、抄測できるけい光を殆んど又は全然持た
ずセしてけい光性化合物の広いスペクトルを有効に消光
する。

本発明（θ、イムノアッセイにおける試薬として使用す
るだめの他の化合物、特にポリペプチド又は可溶性もし
くは不溶性支持体に袂合する（　ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ
　）場合ｖｒｃ％定的に使用される、電子エネルギーを
受取り又（はゼ・：与することができる発色性（　ｃｈ
ｒｏ常ｏｇｅｎマ，Ｃ）ジ（カルコゲンエーテル）対称
置拗フルオレセイン化合物に関する。

フルオレセイン化合物は１’，８’が置換されておらず
そして４　Ｌ　　、　ｓ　ｌ　−又（ｄ２′　、７′−
位置の何れかにおいてギザンデン環が対称的に二置換さ
れている。該化合物は通常は２，７ージ（脂肪族エーテ
ル置換された）又（ｒ−；１　４．　、　ｓ−ジ（脂肪
族エーテル置換された）−９−フェニル−６−ヒドロキ
シ−３Ｂ−ギザンテンー′３ーオン類である。

この分子は少なくとも１５個の屍素戻子、通常少々くと
も１６個の炭素原子を月つ約４５個以下、通常約３５個
以下の炭素原子を有する。少なくとも５個のカルコゲン
原子（８乃至１６の原子４号、酸素及び硫黄）が存在し
、その少なくとも３個は酵素である。カルコゲン原子に
加えて、０乃至８個、通常Ｏ乃至６個のヘゲ０原７、た
とえばｇ素、原子番号９乃至５３、特に１７乃至５３の
ハロゲン、即ち、フッ素、塩累、臭素及びヨウ素或いは
特異的効果を与えるように存在し得る他のへテロ官能性
（ｈｅｔｅｒｏ　ｆｖ、ｎｃｔｉｏｎＸＸａｌｉｔｉｅ
ｓ　）が存在し得る。通常少なくとも一個のアニオン性
基、通常カルボキシレート及びスルホネート並びに−個
の結合基、中でもインチオシアネート及びインシアネー
トを包含する非才かソカルボニル（ｎｏｎ−ｏｘｏ−ｃ
ａｒｂｏｎｙｌ　）　；　　スルホンアミド、メルカプ
ト及びアミンが存在し、これは猿の炭素原子に直接結合
していてもい々くてもよい。多くは、結合基はギサンテ
ンの９位置で置換された基、通常はフェニル基上にある
が帛台基はエーテル基土の置換基として存在していても
よい。これらの化合物はハブテン及び抗原に複合して、
けい光発生することができ又は消光剤がけい光発生剤に
密接な空間距離にあるときけい光発生剤を消光すること
ができる複合体を与える。

本発明の組成物は５００　ｎｍより上の、通常５１０ｎ
ｍよυ上の比較的狭いバンドの最大ｐ７７、収を有し、
通常は最も長い波長吸収の面積の少なくとも５０％は約
５０？Ｌｍの波長節円ヨを甥える。該けい光発生性化合
物は、良好な化学安定性、大きなストークスシフト及び
６５，０００を越える、通常は７５．０００を越える消
光係数を有することを特徴とする。ストークスシフトは
少なくとも１０ｎｍ好ましくは少なくとも約２０ｎｍで
ある。消光性化合物は、最大吸収の光で照射されるとき
０．０５モルホスフェート中で１０光よシ小さい、好ま
しくは５％より小さい量子効率でけい光発生する。

本発明の化合物は、重要な分光学的及び物理的特性を有
する新規な化合物を与える。該化合物は５００？Ｌｍよ
り上の最大吸収を有する。オキシ置換基に対する位置を
選ぶととによって、高度にけい光性化合物又は実質的に
非けい光性でｅｓ　Ｉ）且つ消光剤として使用すること
ができる化合物を与えることができる。２′　、　７７
−位置（フルオレセイン位置番号）にエーテル置換基を
有する化合物は高い量子効率を有するけい光性化合物を
与える。

４′　、５′−位置にエーテル置換基を有する化合物は
けい光を発せず有効な消光剤として作用するように長い
波長で吸収する化合物を与える。

大抵は、本発明の化合物は、下記式 式中、αの各々及びδの各々は同−又は相異っていても
よく、α又はδのいずれかはカルコゲン（原子番号８〜
１６、酸素及び硫黄）を介して環の炭素原子に結合して
おり、カルコゲン結合対でない場合にはαはカルコゲン
以外の置換基であることができそしてδはカルコゲンを
含む都合の良い官能性であることができ； エーテルを介して結合したα又はδの一つ或いはωはＡ
と一緒になって結合のための活性な官能性を与えること
ができ、又はΔと一緒にならない場合にはＡに対する結
合官能性であることができ；Ａと一緒にならない場合に
ωは非妨害性官能性（ｎｏｎ−ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ
　）又は水素であることができ； Ａは一緒にならないで結合のための活性官能性を形成し
ない場合はリガンド又は受容体でめり、γは話合又は約
１〜２０個原子、通常１〜１６個の炭素庶子のスペーザ
ーアーム、普通は、６〜１６個、通常６〜１０個の環原
子の環状１ｊ％肪族又は芳香族基の場合に４個より多く
の環炭素原子を有する１〜７個の炭素原子の脂肪族（環
状肪肪族を含む）基であり、 Δ／じリガンド又は受容体である場合Δに結合したかっ
こ内の１個又はそれより多くの基が存在する、 を有する水又は塩基に可溶性化合物である。

消光剤分子、４，５−ジエーテル−６−ヒトロキシー３
Ｈ−ギザンテンー３−オンに関しては、２及び７位置に
置換基のある外しは消光に影響々いが分子の吸収特性を
修正するのに使用することができる。故に、αがエーテ
ルである場合には、δは水素又は１〜６個の炭素原子の
アルキルの如き精舎の良い置換基、オキシ（ヒト［ｊキ
シ及び１〜６個の炭素ル子のアルコキシ）、チオ（メル
カｑ ブト、］・−〇個の炭素原子のアルギルチ刊及びスルホ
ン酸、エステル及びアミド）、１〜６個の炭素原子の非
オキソカルボニル（酸、エステル及ヒアミドを含む）、
シ゛アノ、二ｌ・口、ハロ、１〜６個の炭素原子のオギ
ソカルボニノベ又はその組合せであることができる。置
換の選択は得られる最大吸収、合成の便宜及び分子の物
理的及び化学的１り一質、たとえば水溶性、化学反応性
、酸化感受性行に対する効果により支配される。

けい光発生側分子に関して、４，５−位置の置換基はけ
い光効率が十分に不利に影響されない限り広く変わるこ
とができる。故に、広く変わることにできるが、４，５
−位置はカルコゲンによって置換されるべきではなく、
これは分子のけい光を実質的に滲じるという効果を有す
る。故に、けい光発生剤の４，５−位置に対する置換部
の帥囲は消光剤の２，７−位に対する置換基の範囲よシ
更に制限される。

芳香族としてγを有する本発明の化合物は、主として、
下記式： 式甲、二つのＡは同−又は相異々す、通常は結合のため
の官能性以外は同一であり、 二つのＤは同−又（弓、相異なり、通常は結合のための
官郁件Ｊ２，１外は同一であり、 Ａ又にｍ：ＪＪ）のいずれかはカルコゲンエーテル（原
子番月８へ−↑Ｇのカルコゲン）、通常は式−ＪＭＸ。

ここでＪは酸素又は硫黄である、のオキシエーテルで、
；、Ｉ）、 −ＪＭＸ以夕１のものであるときは、Ａは水素又は原子
番号９−５３のハロゲン、即ちフッ素、塩素、臭素、又
はヨウ素、特に塩素及びヨウ素であり、−力りは水素又
は、特に炭素と水素及びヘテロ原子として酸素、硫黄、
窒素及びノ・ロゲンを有し、通報は使用の条件下に化学
的に不活性である任意の置換基であることができ、 Ｍは二価の炭化水素基、普通、１〜８個、う…常（ｌ−
ｔｌ−６個、好オしくけ１−３個の炭素原子の通常は直
針の１トー和脂肪族であり、 Ｘの一つはリガンド、受容体又は支持体に結合するだめ
の活性官能□性（ａｃｔｉｖｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ
ｉｔ、ｙ）でを）るか又は該リガンド又は支持体に結合
した官缶性であり、 Ｘは１１／と一緒になって結合のだめの活性官能性を与
え、Ｘ　’ｉ／ｌ／はその硫黄及び触累類似体を含む非
オキソカルボニル官能、性、たとえばカルボン酸、カル
ボン酸エステノベたとえば低級アルキル（１−３炭素原
子〕又は水性媒体中でアミド結合を形成することができ
る活性エステル、たとえばＮ−オキシスクシンイミド及
びｐ−ニトロフェニル、インシアネート、インチオシア
ネート、イミデート低級アルキルエステル、活性化され
たオレフィン、たとえは、マレイミド、メルカプタン（
−８Ｈ）、ホルＳル（−ＣＩＩＯ）、スルホニルクロラ
イドアミン、活性・・口、たとえばノ・ロアセチル又は
・・ロト１ノアジンであることができ、但しＸＷけＭに
綜合している場合には非オキソカルボニル又はスルホニ
ルであるものとし、 ＸがＷと一緒になっていないとき、Ｘの一つはＷに糾合
した結合官能性でろシそして特定の活性官能性に依存し
て、炭素に対する−の原子価を有する非オキソカルボニ
ル（その窒素及び信負類似Ｈ−２含む）、カルバミル、
チオカルバミル、活性化されたオレフィンからの置換さ
れたエチレン、チオ、メチレン（ホルミルから還元アミ
ノ化による）、アミド窒素又は第二級アミン、スルホニ
ノへ又は活性ハロからのオキソカルボニルメチル、であ
シ、ＸがＭに結合した結合官能性である場合にはＸけ非
オキソカルボニルであシ、結合基で々い場合にはＸは水
素又は非オキソカルボニルペたとえばカルボン酸、エス
テル又はアミド、スルホンアミド、スルホン酸又は特に
環炭素原子に結合している場合にはハロであり、 ｐＨＳｌ′ＷがＸと一緒になっている場合にけ１であわ
、そうでなければ平均して１乃至Ｗの分子量゛を５００
、通常１０００、よシ普通には１５００、最も普通には
２０００で除した値であり、一般にｐは約１乃至２００
、通常は１乃至１００の範囲に夕）す、 ＷがＸと一緒になっていない場合には、Ｗは少なくとも
約１２５の分子量のノ・ブテン性（ｈａｐｔｅｎｉｃ）
又は抗原性の（　ａｎｔｉｇｅｎｉｃ　）受容体を包含
するりガントであシ、一般にノ・ブテン性である場合に
は約１２５乃至２０００の分子量であシ、そして抗原性
である場合には約５　０　０　０　Ｘ　Ｉ　Ｘ　１　０
７の分子量であるが、抗原と他の物質との組合せははる
かに高い複合分子量（　ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ　）を有することができ、リガ
ンドは他の結合を使用することができるが通常アミン、
ヒドロキシ、メルカプト又は活性エチレンを介してＸに
結合せしめられてアミド、アミジン、チオアミド、エー
テル又はチオエーテルを形成し、又はＷは、天然に存在
する又は合成の、変性したもしくは変性されていない多
糖、天然に存在する又は合成重合体、ガラス、無機固体
、リボゾーム等であることができる可溶性又は不溶性支
持体であり、Ｑは結合又はスペーサーアーム（結合鎖）
でるシ、通常は、脂肪族、芳香族、複素環式又はその組
合せであシ、一般に脂肪族的に飽和されており（　ａｌ
ｉｐｈａｔｉｃａｌｌｙ　ｓａｔｕｒａｔｅｄ　）、こ
コテ該アームは１〜１６個、よシ普通には１〜１２個好
ましくは１〜８個の原子を鎖中に有し、該原子は炭素、
窒素、酸素及び硫黄であシ、ことで窒素はアミドである
か又は炭素と水素とにのみ結合しておシ、たとえば第三
級アミノであシ、酸素はオキシであシ、そして硫黄はチ
オエーテルであシ、カルコゲンは炭素にのみ結合してお
シ、そしてヘテロ原子は飽和炭素原子に結合していると
きは少なくとも二つの炭素原子によって隔離され；炭素
原子の総数は一般［１〜２０、通常１〜１２であり、ヘ
テロ原子の総数は０〜１０、通常はＯ〜８であシ、酸素
は非オキソカルボニル又はオキシとして存在してもよく
、θ〜９、通常はＯ〜４のへテロ官能性が存在［７、Ｘ
が結合官能性又は基でない場合にばＱは普通は結合であ
り、 Ｙは原子番号９〜５３の・・ロゲン、特に塩素であシ、 ７１は０〜４の整数であり、ここでｍ十″ｎ、は４よシ
大きくなく、 Ｚは酸性のアニオン性基、たとえばカルボン酸又はスル
ホン酸であり、そして ｍは０〜３、通常は１〜３の整数である、を有する。

極め明らかに、本発明の化合物は該化合物の性質に有意
に影響を与えることなく、上式の範囲内に庁いように変
性することができる。たとえば、−個又はそれより多く
の酸性アニオン性基はエステル化又はアミド化すること
ができ、又はアルキル基及び他の基、たとえばシアン、
ニトロ等はフェニル基」二に置換することができる。し
かしながら、これらの変化は大抵の場合に追加の合成段
階を必要とし、これは得られる生成物の分光学的又は化
学的特性においても１〜あれば強化の程度により是認さ
れない。

本発明の化合物は多くの望ま１〜い性質を有する。

生成物はポリペプチドの水溶解性に有意に不利に影響す
ることなく又ポリペプチドが本発明の化合物の分光学的
性質に不利に影響されることなく広範な種類のポリペプ
チドに複合されることを許容する相昌な水溶解性を有す
る。

本発明の化合物の分光学的性質に関して、該化合物は一
般に５００ｎｍを越え、もつと普通には５］、Ｏｎｍを
越える比較的長い波長で吸収する。

かくして、生理学的流体で作業するとき遭遇し得る自然
に起こるけい光は天然に存在するけい光発生剤を有意に
励起しない波長範囲の励起光を使用することによって実
質的に回避される。更に、該化合物（は比較的鋭い吸収
ピークを有し、けい先発生剤は比較的鋭い発光ピークを
有する。この故に、けい光発生剤と消光剤との間で有効
な重なり合いが得られ、これは約７ＯＡの距離１での有
効な消光を許容する。けい光発生性化合物は、吸収バン
ド及び発光パントピークが少なくとも１０？？、ｍ、し
ばしば少なくとも１５ｎｍ離れるように大きなストーク
スシフトも有する。大きなストークスシフトは観測され
／ζけい光によるバックグラウンド干渉（ｂａｃｋ　ｇ
ｒｏｕｎｄ　１ｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ　）を最小にす
る。

消光剤は、それらが観測された信号によるバックグラウ
ンド干渉に寄与しないようにけい光を殆んど又は全然持
たない。消光剤の吸収バンドがけい光発生剤の発光バン
ドに実質的に重なる場合に、けい光発生剤−消光剤カッ
プルを与えることによって、消光剤が免疫学的に関連し
た物質の結合によりけい光発生剤に密接に近接ぜしめら
れる場合に、けい光の消光に頼るイムノアッセイを遂行
するだめの有効な系が寿えられる。

本発明を説明するにあたり、複合した使用される簡単ガ
分光学的に活性なモノマー化合物を先ず考察し、続いて
種々の複合体について考察する。

該化合物は、それらが使用中それらの分光学的性質を保
持するように塩基性ｐｌＩにおいてすら化学的に安定で
ある。

他の化合物に複合するために使用される化合物は他の化
合物との安定な共有結合、通常はアミド結合又はチオエ
ーテル結合を形成する活性な官能性を有することを特徴
とする。大抵は、結合官能性は、その窒素及び硫黄類似
体を包含する非オキソカルボニルヲ含み、そしてフルオ
レセインのフェニル基の稜の炭素原子に直接結合するか
、又は結合基を介して結合するか、或いはオギシーもし
くはチオニーデル官能性に直接結合するか又は結合基を
介して結合することができる。分子中の他の官能性と比
較し得る種々の官能性を使用することができる。官能性
はカルボン酸を含み、これはカルボジイミド又は活性化
アルコールによシ活性化されて活性エステル基、インシ
アネート、インチオシアネー　ト、イミデート等を与え
ることができ、該基はアミン官能性と反応してアミド、
チオアミド又はアミジンを形成する。別態として、官能
性としてアミノ基を有することができ、これはカルボン
酸又は誘導体と組合わせてアミド結合を与えることがで
きる。最後にメルカプト官能性を使用することができ、
これはエチレン系基、特に活性化されたエチレン系基、
たとえばマレイン酸誘導体と組合わせ又は逆に組合わせ
てチオエーテルを与えることができる。

好捷しい群の化合物は主として下記式 式中、二つのＡ１は同−又は相異なり、通常は一つが結
合のための官能性である場合以外には同一であり、 二つのＤｌは同−又は相異なシ、通常は一つが結合のた
めの官能性である場合以外は同一であシ、Ａ“又はＤ゛
の何れかは式−０Ｍ“ｘｂのオキシエーテルであシ、こ
こでＭｌは１〜６個、通常は１〜３個の炭素原子の飽和
脂肪族ハイドロカルビレン基好ましくは直鎖の且つ１〜
２個の炭素原子の飽和脂肪族ハイドロカルビレン基、即
ち、メチレン又はエチレン（ハイドロカルビレンハ炭素
ト水素とのみから成る二価の有機基を意図する）であり
、オキシエーテルではない場合にはＡ１は好址しくけ水
素又Ｉｉ特に原子番号９〜５３のハロ、更に特定的には
クロロ又はヨードであり、Ｄｌは好１しくは水素、−・
口又は６個までの炭素原子のアルキルであり、 Ｘａ又はｘｂの一つ、通常ｘ（ＬはＷｌと一緒になって
活性官能性を形成し、該官能性は−ＸＷと同じ定義を有
していてもよいが、通常Ｆｉたとえばブチルクロロホル
メート、カルボン酸、活性化エステノペイソシアネート
又はイソチオシアネートと共に、混合無水物の如き官能
性（その硫黄−チオノーＭ似体）を含有する非オキソカ
ルボニルであシ、但しｘｂはＷ゛　と−緒になる場合は
カルボン酸又はその誘導体であシ、 Ｗｌ　と−緒にならない場合は、Ｘ　又けｘｂの一つは
Ｗｌとアミド又はエステルを形成するカルボニノペＷ１
と尿素を形成するカルバミル又はＷｌとチオウレアを形
成するチオカルバミルであるＷ１９あ結合基であシ、 活性官能性又は結合官能性でガい場合Ｘ　は水素又は非
オキソカルボニル、たとえばカルボキシであり、ｘｂは
水素又はカルボキシル、通常は水　　・素であシ、 Ｑ’はＱと同じであってもよく、結合又はスペーサーア
ームであることができるが通常は釧中に１〜１２個、通
常は２〜１２個の原子を有する結合又はスペーサーアー
ムであシ、該原子は炭素、窒素及び酸素であり、一般に
１〜１０個、通常は１〜８個の炭素原子及び０〜８個の
へテロ原子を有し、該ヘテロ原子は窒素、酸素及び硫黄
であシ、酸素は炭素にのみ結合して存在し、たとえば非
オキソカルボニル又はオキシエーテルであり、硫黄は酸
素に類似し、望累はアミドであるか又は炭素にのみ糾合
しており、たとえば第三級アミンであり、Ｑ”は通常は
ｘ（Ｌが反応性官能性又は結合官能性以夕）である場合
には結合であり、ＴＶ“がＸ　又はｘｂと一緒に力らな
い場合には、Ｗｌは通常はアミン又はヒドロキシル、特
に結合のためのアミン官能性を有するリガンド、受容体
又は支持体であり、 ｐ”ｄ、ｐと同じであってもよく、Ｘ　又はｘｂの一つ
がｌ／ｌ　と−緒になっている場合は１であり、そうで
なければ、１乃至Ｗｌの分子量を５００、通常は】５０
０で除した値であり、一般に１〜２００の範囲、通常は
１〜１００の範囲、もつと普通には１〜５０の範囲であ
り、 Ｚｌはカルボン酸又はスルホン酸の如き酸性アニオン性
基であり、 ｍｌは１〜３の整数であり、 Ｙｌは原子番号９〜５３の７・ロゲン、特にクロＩコで
あり、 ｎｌは０〜３の整数であり、ここでｍ’＋ｎ’は４より
大きくはない、 を有する。

該化合物は０〜６個、通常は０〜５個の原子番号９〜５
３のノ・ロゲン、好ましくは塩素又はヨウ素を有し、通
常は０〜４個の塩素、しばしば２〜４個の塩素を有する
。該化合物は普通は、少なくとも２個の且つ５個までの
カルボン酸基を有し、好寸しくに２〜３個のカルボン酸
基を有する。非オキソカルボニル結合官能性は炭素原子
に結合していてもいなくてもよいが、好ましくは炭素原
子に結合している。

活性官能性を有する好ましい化合物は主として下記式 式中、Ａ１又はＤｌのいずれかは１〜３個、通常は１〜
２個の炭素原子のアルコキシであり、アルコキシでない
場合はそれらはＡ及びＤに対して前記した通りであり、 Ｙ′′、Ｚ′′、ｍ１′及びｎ　ｌ　／はダッシュのな
い記号と同じ範囲を有し、 Ｗｌ／は非オギソカルボニル基又は硫黄類似体（チオノ
）を有する活性官能性であり、そしてノ・ロゲン化アシ
ル、混合無水物及び活性化エステル、並びにイソシアネ
ート及びイノチオシアネートを含み、 Ｑ　ＩＶは１〜１２個、通常は１〜１０個の原子の結合
又はスペーザーアームであシ、該原子は炭素、窒素及び
酸素であり、通常は炭素及び窒素であわ、そして約１〜
１２個通常は１〜１０個の炭素原子と、０〜８個、通常
は０〜６個のへテロ原子であり、該原子は窒素、酸素及
び硫黄、特に窒素及び酸素であり、窒素はアミドとして
存在するか又は炭素にのみ結合しており、カルコゲン（
酸素及び硫黄）は炭素にのみ結合し、二重結合（オキソ
及びチオノ）しているか又は単結合しており（オキシ又
はチオ）、スペーザーアームとしてＱＩ／は１〜８個、
通常】〜４個の炭素原子のアルキレン、グリシル又は１
〜４個のグリシル単位のポリグリシルであシ、ここで最
終のカルボキシはＷ１′等である、 を有する。

下記のものは複合のために使用される本発明の化合物の
リストである。

表　　　Ｉ 該化合物は置換された９−フェニル−６−ヒドロキシ−
３Ｈ−キサンテン−３−オンであシ、又は該化合物が２
−カルボキシ基を有するフルオレセインである場合には
、該化合物は３′　、６′−ジヒドロキシスピロ〔イン
ベンゾフラン−（３Ｈ）　。

９’　　−［９Ｈ］キサンチン〕−３−オンである。

このリストの番号は前者の呼名に基いている。

２．７−ジメトキンー９−　（、、ｘ’　　、４’　−
ジカルボキシフェニル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ〜キサ
ンチン−３−オン） ２．７−ジニトキシー９−（２’　　、３’　　、４／
−トリカルボキシフェニル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−
キサンチン−３−オン、 ２．７−ジニトキシー９−（２’　　、４’　　、ｓ’
−トリカルボキシ−３Ｌ　　、　６７　−ジクロロフェ
ニル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンテン−３−オン
、 ２．７−ジプロボキシー４，５−ジクロロ−９−（２’
、４．’　　−ジカルボキシ−６−スルキホナトフエニ
ル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン、 ２．７−シメトキシー４，５−ジブロモ−９−（２’　
　、４．’　　、ｓ’　　−）リカルボキシ−フェニル
ン−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン、２
．７−シメトキシー４，５−ジクロロ−９−（２’　　
、４’　　、５’　　−トリカッυ朱キシフェニ列−６
−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン、２．７−
シメトキシー９−（３’　　、４’　　−ジカルボキシ
フェニル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンテン−３−
オン、 ２．７−シメトキシー９．（３’、４’　〜ジカルボキ
シー２Ｌ　　、５／　　、６／　−トリクロロフェニル
）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン、 ２．７−（２”−カルボキシエトキシン−９−（２′−
カルボキシフェニル）−６−ヒドロキシ−３Ｉｆ−キサ
ンチン−３−オン、 ２．７−ジェトキシ−４，５−ジブロモ−９−（２’　
　、４’　　、５’　−）ジカルボキシフェニル）−６
−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン、２．７−
シメトキシー９−　Ｃ２’　−力ルボキシ−４′−フル
オロ−ｓ’−（Ｎ−カルボキシメチルカルボキサミド）
フェニルヨー６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−
゛オン、 ２．７−シメトキシー９−（２’、４’　−ジカルボキ
シ−５′−アミノフェニルシン−６−ヒドロキシ−３Ｈ
−キサンチン−３−オン、 ２．７−シメトキシー９−（２’　−力ルボキシ−４′
−インチオシアナトフェニルシン−６−ヒドロキシー３
Ｈ−キサンチン−３−オン、２．７−ジニトキシー９−
（２’　−カルボキシ−４′−メルカプトフェニル）−
６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン、 ２．７−シメトキシー４，５−ジブロモ−９−（２′　
−力ルボキシ−４′−メルカプトメチルフェニル）−６
−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン、 ２．７−シメトキシー４．５−ジクロロ−９−（２′　
−力ルボキシ−４′−シアノフェニル）−６−ヒドロキ
シ−３Ｈ−キサンチン−３−オン、４．５−ジメトキシ
−９−（２’　　、４’　　、５’−トリカルボキシフ
ェニル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オ
ン、 ４．５−ジメトキシ−９−（２’、５’　　−ジカルボ
キシフェニル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンチン−
３−オン、 ４．５−ジメトキシ−２，７−ジヨードー９−（２’　
　、４’　　、５’−１−リカルボキシフェニル）−６
−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンテン−３−オン、４．５−
ジメトキシ−２，７−ジクロロ−９−（２’　　、４．
’　　、５’　　−トリカルボキシフェニル）−６−ヒ
ドロキシ−３Ｈ−キサンチン−３−オン、４．５−ジメ
トキシ−２，フージクロロ−９−（２′　、４′　、５
′　−トリカルボキシ−３Ｊ　　、　６Ｊ−ジクロロフ
ェニル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−ギザンテン−３−オ
ン、 ４．５−ジ（２“−カルポキシエトギシ）−２゜７−ジ
ヨードー９−’　（２’　　−カルボキシ−４′−スル
ホナトフェニル）−６〜ヒドロキシ−３Ｉｆ　−ギザン
テンー３−オン、 ４．５−ジプロポキシ−２，７−ジナロモー９−（２′
　、４′−ジカルボキシ−３，５’、６’−トリクロロ
フェニル）−６−ヒドロキシ−３Ｂ１ｉ３ 一キザンテンー３−オン、 ４．５−ジェトキシ−２，７−ジクロロ−９−（２′−
カルボキシ−４′−アミノ−５′−スルホナトフェニル
）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンテン−３−オン、 ４．５−ジメトキシ−２，７−ジヨードー９−（２′　
−カルボキシ−４′−インチオシアナトフェニル）−６
−ヒドロキシ−ａ　Ｈ−ギザンテンー３−オン、 ４．５−ジェトキシ−２，７−ジヨードー９−〔２′　
、４′−ジカルボキシ−ｓ’−（＃−カルボギシメチル
ホルムアミド）フェニルツー６−ヒドロキシ−３Ｈ−キ
サンテン−３−オン、４．５−ジメトキシ−２，７−ジ
クロロ−９−（２’　　、４’　−ジカルボキシ−３７
，５／　　、　６′−トリクロロフエニル）−６−ヒド
ロキシ−３ＩＩ−キザンテンζ３−オン、 ４．５−ジェトキシ−２，フージクロロ−９−（４Ｊ　
　、　ｓ　／　−ジカルボキシ−２７、３Ｌ　　、６フ
ートリクロロフエニル）−６−ヒドロキシ−３Ｈ−キサ
ンテン−３−オン、 ４．５−ジメ］・キシ−２，７−ジヨードー９−（２′
−力ルボキシ−４７−メルカブトメチルフエニル）−６
−ヒドロキシ−３Ｈ−キサンテン−３−オン。

上記リストは単に例示することを意図するものであシ、
本発明の範囲内に含まれた化合物のすべてを示すもので
はない。

活性官能性を有する本発明の化合物は、補助的へテロ官
能性（ｃａｍｐｌｅｔｎｅｎｔｃｔｒｙ　Ｉｒ、ｅｔｅ
ｒｏ　ｆｕｎｃ−１ｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ　）を有する
リガンド又は支荷体に複合することができる。下記衣は
例示的リガンド官能性、本発明の化合物をリガンドと結
合するだめの活性官能性及び得られる結合単位を示す。

０ＣＯ２Ｔ −ＮＣＯＮＨ２−Ｎｆ−１ｃＯＮノノ−−ＮＣ８Ｎｆ１
２−ＮＩＪＣ８ＮＩｉ　−−Ｃ＝Ｃ−ＣＯ−Ｓｌｉ　　
　　　　　　　５−Ｃ−Ｃ−ＣＯ−−ＣＨＯＮＢ２　　
　　　　−ＣＩ−１２ＮＩ４−〜５Ｏ２ＣＩ　　　　　
　　　　　　ＮＢ２　　　　　　　　　−　ＳＯ２八ｒ
へ　−＊Ｔはアルキルであり、Ｔ１はアルキル又は電気
陰性エステル活性化基である。

大抵の場合に、リガンド官能性及び分光学的化合物官能
性は切替えることができる。

主としてリガンド複合体は下記式を有する二式中、Ａ２
は同−又は相異シ、普通は結４部位を除いて同じであり
、 Ｂ２は同−又は相異り、普通は結合部位を除いて′同じ
であシ、 Ａ２又Ｄ２のいずれかはエーテルであシ、通常式−ＨＭ
２ＸここでＨは酸素又は硫黄であシ、Ｂ２はＭと同じで
あってもよいが通常は１〜６個、通常１〜３個の炭素原
子のアルキレン基であシ、Ｘｄはカルボキシ又は水素、
通常水素％６る、のオキシエーテルであり、そしてエー
テルでない場合にはＡ及びＤに対して前記した通シでｌ
、Ｔ２　、Ｚ２　、ｍ２及びＡ２はそれぞれＹ。

Ｚ、ｍ及びｎと同じであり、 Ｑ２はＱと同じであってもよいが通常はＱｌと同じであ
シ、 Ｘ′はＶＶ２をＷとみなしてＸと同じ定義内に入ること
ができるが通常は窒累及び竺黄類似体を包含する官能性
を含む非オキソカルボニル、たとえばカルボニル、イミ
ド、それぞれアミドを形成するカルバミル及びチオカル
バミル、アミジン、リガンドのアミンと組合さっている
場合原票及びチオ尿素であシ、 Ｔ２は１乃至Ｗ２の分子量を５００、通常は１０００で
除した値であシ、Ｉ／Ｊ１２５乃至２０００分子量のハ
プテン性リガンドの場合、Ｔ２は通常は１であシ、２０
００の分子量よシ大きい、通常５０００の分子量よシ大
きい抗原性リガンドの場合、Ｔ２は一般に平均して約１
乃至２００、通常１乃至１００、更に普通には２乃至５
０であり、Ｗ２はリガンド、受容体又は支持体であり、
リガンドとしてのＷ２はノ・ブテン性又は抗原性であシ
、ハプテン性リガンドは一般に約１２５乃至２０００の
分子量であシ、そして少なくとも一つの極性官能性を有
し、該官能性は結合の部位であってもなくてもよく、抗
原性リガンドはポリエピトビツク（ｐｏｌｙｅｐｉｔｏ
ｐｉｃ）であシ、普通はポリ（アミンｋ）、核酸、多糖
及びその組合せであシ、一般に少ガくとも２０００、通
常は少なくとも５００００分子量でｓｂ、そして１００
０万以上の分子量であることができ、支持体は不明確な
分子量、通常は少なくとも１０．０００、もつと普通に
は少なくとも２０，０００の分子量であシ、そして１０
００万以上であることができ、可溶性支持体は一般に１
０００万の分子量以下であり、支持体は天然に存在する
ものでも合成のものでもよく、粒状であってもよく又は
有形形態であってもよく、水性媒体により壓潤可能でア
シ又は非膨潤性であってもよく、支持体は架橋していて
もいなくてもよく、単二物賀でも混合物質であってもよ
く、天然に存在する支持体は多糖、核酸、ポリ（アミノ
酸）、たとえは、ポリペプチド及びインバク質、ゴム、
リグニン、小胞（ｖｅｓｉｃｌｅｓ　）、その組合−ａ
−等孕包含し、合奴叉待体は付加及び縮合重合体、／こ
とえはボリスヂレン、ポリアクリル低脂、ビュル化音物
、ポリエステル、ポリエーテル及びポリアミド、チャー
コール、金鳥カルコゲニド、ガラス、リホゾーム等ケ包
含する。

リガンド複合体の好けしい群は下記式 式中、ｒＰｈＰｈ分剤分子しては、Ａ３は１〜２個の炭
素原子のアルコキシであシ、Ｄ３は水素又はハロ、特に
クロロ、ブロモ又はヨード或いば１〜６１１・」の炭％
　原子のアルキルであり、けい光シＣ７生剤分子に対し
ては、Ｄ３ば１〜２′１回の炭素原子のアルコキシであ
り、Ａ３は水素又はハロ、特にクロロ又はブロモであり
、Ａ３はカルホキシルであシ、 εＩ Ｙ３はハロ、！（１−にクロロであり、Ｑ３は結合又は
鎖中に１〜９個、通常は２〜９個の原子のスペーザーア
ームであり、該原子―炭素及び窒素、アミド屋素であシ
、スペーザーアームは炭素、酸累、窒素及び水素のみか
ら成シ、ｊ菰巣は炭素にの不結合Ｌ７ておシ、そしてオ
キソ又はオキソ、特に非才キンカルボニルであり、有用
なスペーザーアームは１〜６個、通笥２〜４個の炭素原
子のアルキレン、モノ−又はポリ−アミドメチレン（−
ＣＯＮＨＣＤ２−）アＳ　、／モノー又はアミノポリ−
アミトメ−ｙ−ｖ　ン（−ＮＩＩ　（Ｃ０ＮＩ−ＩＣｆ
ｊ２−　）、　）、又の、アミノチオノモノ−又はポリ
（アミノメチレンカルボニル）アミノ−メチレン−（−
＃／−／Ｃ，Ｓ’（Ｎｌｉ　ＣＪｉ、ＣＯ）、、ＮＨＣ
Ｈ２−）、ここでＸは１乃至３でりる、オ包含し７、 Ｘ′３は非才キンカルボニル、カルバミル又はチク−カ
ルバミルでるｆｉ、ＶＶ／３のアミンに結合してアミ　
ト糺ｉ骨を形成し、 Ｉ４・３６逼常１づ二約］２５〜１０００の分子量のハ
シテン性の受容体又は１ノカント、或いは約２ｏｏ。

乃主１．０　Ｆ］　０　、／３、通常５０００乃至２０
０万、もつと上越にば５０００乃至１００万分子量の抗
原でりり、Ｔ＆２は特にポリ（アミノ酸）又は多糖抗原
であり、そしてハプテンであってもよく、Ｉ３はＪ乃至
ｌ／３の分子量ｆ　５００、通常は約２００　（］で除
した１１亘であり、一般に約１乃至２００の戟囲、史に
普通には約２乃至１５０の範囲に、そしてしばしばＰＪ
ｌ乃至７５の範囲にあり、ｓ　ｏ　ｏ、　ｏ　ｏ　ｏ以
下の分子量のりガントに対してはＩ３に一般に約２乃至
５０の範囲にあシ、７７１″は１乃至２の整数であり、 ？１　Ｉ（ｒｌ　Ｏ乃至３の整数であり、ｍ３＋ｎ３は
４よシルとくない、 孕４］する。

成る例においては、リガンド及びけい光発生剤の複合体
が支持体に共有結合により又は非共准結合によシ箱合せ
しめられていることが望ま１〜い。

支持体への複合体の結合はりガント又−１本発明のけい
光発生削土の官能性への共有結合によってもよく又は通
常ポリエピトビツクなリガンドと支持体に共有結合によ
り又は非共有結合により結合していてもよい受容体、通
常抗体との間の非共有結合Ｖこよってもよい。支持体に
結合したりガント−けい光発生剤佐合体ｄ：主として下
記式を有する二式中、二つのＡ４は同−又は相異なり、
普通は一つが結合官能性である場合を除いて同じであり
、二つのＤ４は同−又は相異なり、普通は一つがＡ４又
（はり、　４のいずれかは式−ＪＭ’４Ｘ４、ここでＪ
は酸素又は伝り５、通常は酸素である、のエーテＭ４は
二価の炭化７１（素基、普通は１〜８個、通常１〜６個
、好ましくは１〜３個の炭素原子を有し、通常直鎖の飽
オＤ月旨肋族であシ、Ｘ４の一つはりカントへの結合官
能性でめり、炭素に対して一つの原子価を有する非オキ
ソカルボニル（釜素及びその嶺黄≧４１１体を含む）、
カルバミル、チオカルバミル、イミド、チオエーテル、
アルギルアミノ、チオ−又はオキシアセチルであり、但
し祠合基としてのＸ４はＭ４に結合している場合には非
オキソカルボニルであり、Ｘ４が結合官能性でないｂ合
には、Ｍ４に結合したＸ４は水素又は非オキソカルボニ
ルであり、そしてＱ４に結合したＸ４は水素、非オキソ
カルボニル、又はハロでアリ、ここでＱ４は結合でりシ
、Ｑ４は粘合スｊｉＡ常は、約１〜１６個、通常１〜１
２個、更に普通には１〜８個の原子を鎖中に有する脂Ｆ
ｉ／１族、芳香族、複素環又はその組合せのスペーサー
アームであシ、該原子は炭素、窒素、酸素及び硫黄であ
り、窒素はアミド又はアミンであり、アミンとしては通
常第三級アミノであシ、欧紮はオキシであシ、硫黄はチ
オエーテルであシ、カルコゲンは戻光にのみ結合してお
シ、ヘテロ原子は、飽面炭素原子に結付している場合に
は少なくとも二つの炭素原子によシ隔離されておシ、炭
素原子の総数は約１乃至２０、通常約１乃至１２でロシ
、ヘテロ原子の総数はオキシ又は非オキソカルボニルと
しての酸素と共に０乃至１０、通常１ｌ−ｉｏ乃至８で
りり、０乃至９個、通常は０乃至４個のへテロ官能性、
たとえばアミド、アミノ及びオキシが存佳し、 Ｚ４はアニオン性基、たとえばカルシボン肢又はスルホ
ン級であシ、 Ｙ４は原子笹”ｊ’　”乃至５３のノ・ロゲン、通常は
クロロであシ、 ？？！４は０乃至３０位数、通常はｌ乃至３であり、ｎ
４は０乃至４の整数であり、ｒｎ’＋ｎ’の和は４より
太きくなく、 ｐ４ばＷ４の分子量を５００、通常は１０００、更に普
通には１．５　ｏ　ｏで除した値に等しく、一般には１
乃至２００のＵｌａｉにあり、通常は１乃至１００、更
に普通には１乃至５０の範囲にあシ、′ｈ／４は一般に
少なくとも約１２５の分子量を有し、ハプテン性又は抗
原性であってもよい受容体又はリガンドでりり、ノ・ブ
テン性リガンドは通常は約１２５乃主２０００の分子量
でめシ、そして抗原性リガンド及び受容体は約５０００
乃至１×１０７０分子訳でめり、結合は一般に、リガン
ドのアミノ、チオ又（２オキシ基により、Ｅの一つは結
＠新であり、そして結合基でない場合には、意味を弔さ
ず、Ｗ４が）・ブテンである場合には、フェニルに結合
したＥは普通は結合基でりシ、一方Ｗ４が抗原性である
場合には、Ｗ４に結合したＥは通′帛紹合基であり、Ｅ
はＸ４と同じ制限を弔°するが、打首しくけ非オキソカ
ルボニル、アミン又はチオエーテルであり、 Ｔは可溶性又は不溶性支持体であシ、そしてＷに関して
百σ記されており、そして ｒ４は少なくとも１乃至７°の分子量を５００、通常は
１０００、支に普通には１５００で除した値である。

キサンチン環の９　（１ａの位置が脂肪族置換基を有す
る場合には、主として該化合物は下記式を有する； 式中、Ａ′及びＤ　’　ｔｒｙ　７Ｊ’ＩＪ記されてお
り、ことで−ＯＭ　Ｘ　ｉは−Ｇ１１ｉＸ′と同じであ
り、ＧはＯ又は５〜７１固の環員を有する２〜７個の飽
和炭化水素基であり、 Ｘ′はＸｔｙ）定廐内に入る〃）、通常は非オキソカル
ボニルであり、てしてＴＶと一緒になる場合には特にカ
ルボキシであり、 Ｗ及びｐは前記したと同じ定義を有する。

イムノアッセイメは仙の診断状況に使用するため、本発
明の分光学的に活性な化合物は、アナライト又はリガン
ドに対する受容体を包含する有利な化侶自勿に複合され
る。（受容体とは、特定の空間的及び椀件の分子構成に
特定的に結合する化合物を意メし、（−シてリガンドは
かかる構成を有する有（双力子である）。アナライトは
普通はノ・ブテン件又は抗原性である。これらの化合物
が結合のため１更用できる官能性を持たない場合には、
それら（電、借られる生成物における受容体認知特性を
依然どして保持しながらかかる官能性を導入するように
変性婆れる。リガンドと称することもできるアナライト
の類似体であるこれらの化合物はりガント類似体と呼ぶ
。

前記した通り、本発明の化合物は、公知のイムノアッセ
イ法により測定することができる化合物に複合さゼるこ
とができる。得られる複合体は、試料中の問題の化合物
又はアナライトとアッセイ殊体ｆイコで肌合する試薬で
ある。故に、複合体は受容体、通常は抗体に対する問題
の化合物と競合することができるのに十分な問題の化合
物の構造の割合をセぐ持する。

２１Ｓ：発明の分光学的に活性な化合物に複合されるア
ナライト又はその仏似体、受容体又はリガンド娃、モノ
エピトビツク（ｒｎｏｎｏｅｐｉｔｏｐｉｃ　）又はポ
リエビトビツク（５几１ｙｅｐｉｔｏｐｉｃ　）である
ことを特徴とする。

＼、 アナライト（Ａｎａ、　ｉ　ｙ　ｔ　ｅ　）本尤明のｊ
ｃ位子のアナライトハ、モノエピトビツク（ｍｏｔｂｏ
ｅｐｉｔｏｐｉｃ）またはポリエビトビツク（ｐｏｌｙ
ｇｐｉｔｏｐｉｃ）であることにより特命づけられる。

ポリニブトビツク配位子のアナライトは通常ポリ（アミ
ノ汐）すなわちポリペプチドおよびたんば〈貞、多楯頌
、核酸、およびそれらの組み合ゎぜでめる。このような
群の７阻み合わせは、バクテリア、ウィルス、染色体、
遺伝子、糸粒体、核、細胞膜などを包召−する。

はとんどの部分７こ対して、本発明ｖＣ２いて・訣用ス
ルポリエピトビツク配位子のアナライトは分子量が少ン
よくとも約５，０００、いっそう通常少なくとも約１０
．０００である。ポリ（アミツボ）カテゴリーにをいて
、興味あるポリ（アミノ１７２）は−＃：ｒ（約５．　
ＯＯＯ〜５，０００．０００の分子量、より通猟約２０
．０００〜１，０００，０００の分子）１であろう。シ
４体めるホルモンのうちで、分子量は通ｎ′約５．００
０〜６０．００’Ｏの分子量範囲であろう。

広ですなたんばく質に、同様外、構造的特徴をもつたん
ぼ〈省の族、特定の生物学的法能を有するたん、）、ｖ
　＜　、九、肴別の微生物、とくに疾患を生ずる微生、
：すに関係するたんばく質々どとして考えることができ
る。

次は、構造によって関係づけられるクラスである：プロ
タミン ヒストン アルブミン グロブリン スクレロプロテイン ホスホプロティン ムコプロティン クロモプロティン リボプロティン ヌクレγプロテイン グリコプロティン グロテオグリカンス 未分類のたんばく質、たとえば、ソマトトロピン、プロ
ラクチン、インシュリン、ペプシン 人間の血漿中に存在するある数のたんばく質は、臨床的
に重要でるり、次のものを包含する：プレアルブミン アルブミン α１−リボプロティン α１−にグリコプロティン α、−アンチトリプシン α、−グリコプロティン トランスコルチン ４．６Ｓ−ボストアルブミン トリブトファンープーア（ｐｏｏｒ） α１−グリコプロティン α、Ｚ−グリコプロテイン チロチシ結合グロブリン インター−α−トリプシン−抑ｌ６１１因子Ｇｃ−グロ
ブリン （ＧＣｔ−１） （ＧＣ２−１） （ＧＣ２−２） ハプトグロビン （Ｈｐｌ−１） （Ｈｐ２−１） （Ｈｐ２−２） セルロプラスミン コリネステラーゼ α２−リポプロティン（頌） ミオグロビン Ｃ−７ダ、５性たんばく恨 α２−マクログロブリン α２−Ｍ５−グリコプロティン Ｚｎ−α２−グリコプロティン α２−ネウラミノーグリコプロテイン エリスロポイエチン β−リポプロティン トランスフェリン ヘモベキシン フイブリノゲン プラスミノゲン β２−グリコプロティンＩ β２−グリコプロティン■ イミュノグロブリンＧ （ＩｒｔＧ）またはγＧ−グロブリン 分子式： ％式％ イミュノグロブリンＡ（ＩｇＧ）−４たはγＡ−グロブ
リン 分子式： ％式％） （ＩｇＧ）　　剪たけγｉ’ｖｆ−グロブリン分子式： ％式％） 才たばγＤ−グロブリン（γＤ） 分子式： ％式％） 分子式： （６２に２）または（ε２λ２） 遊離のにおよびλの；）豆かい蛸 補体因子ニ ア Ｃ′Ｉ Ｃ’１．ｑ Ｃ’　１　ｒ Ｃ′ＩＳ Ｃ’２ Ｃ’３ β１Ａ α　Ｄ Ｃ’　４ Ｃ’ｓ Ｃ’６ Ｃ′７ Ｃ’　８ Ｃ’９ 塵要な凝−自重・′低、次のもの全包含する：重要なた
ん；・ずく質ホルモンは、次のものを包含する：（ｐａ
ｒａｔｈｒｏｍｏｎｅ） グルカゴン　　　　　　（Ｇ　ｌｕ　ｃａｇｏｎ　）レ
ラキシン　　　　　　（Ｒｅｌａｘｉｎ　）エリスロポ
イエチン　　（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ　１ザイ
ロトロピン　　　　　（Ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎ　＋υ
１胞刺激ホルモン　　　（Ｆｏｌｌｉｃｌｅ−ｓｔｉｍ
ｕｌａｔｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅｌ黄体形成ホ″モン　
　　（Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅ）（ｉ
Ｅｉ１傭霞弛しｊｌｌ　４．ホルモン）ルメジン） セクレチン ガストリン アンギオスチン　　　　（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ　）
■および■エブラジキ：７（Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ　）
ヒトの胎盤ラクトジエン （ｐｌａｃｅｎｔａｌ　ｌａｃｔｏｇｅｎ）下垂体後葉
からのペプチドホルモン オキシ）　’／　７　　　　　　（Ｏｘｙｔｏｃｉｎｌ
パップレシン　　　　　　（Ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ　
）解放因子　　　　　　　（Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆａ
ｃｔｏｒｓｌ　（ＲＦＩＣＲＦ、　ＬＲＦ、　ＴＲＦ、
　　ソマトＧＲＦ、　ＦＳＨ−ＲＦ、　ＰＩＦ、　ＭＩ
Ｆンン トロピン−ＲＦ。

ヘモフィルス・ペルッシ　　　　　（Ｈａｅｍｏｐｈｉ
ｌｕｓ　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））゛レボネ７°レイテリ
　　　　　　（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｒｅｊ−ｔ、ｅｒ
ｉ、）ベイロネラ　　　　　　　　　　　（Ｖｅｉｌｌ
ｏｎｅｌコ、ａ）エリシペロトリクス　　　　　　　　
（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ）リステリア°モノシ
トゲネス　　　（Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔｏ
ｇｅｎｅｓ）り０モ′９クテリウＬ（Ｃｈｒｏｍｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ　）ミコバクテリウム・ラベルクロシス
（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓ
ｉｓ）クレブシェラ・アエロゲネス　　　（Ｋｌｅｂｓ
ｉｅｌｌａ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）クレブシェラ・クロ
アカニ　　　　（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｃｌｏａｃａ
ｅ）す７５モネラ゛チ”’　　　　　　　、　　（Ｓａ
ｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｏｓａ）ナルモネラ・チフ
イームリウム　　（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉ
−ｍｕｒｉｕｍ）ザルモネラ°チルビイ　　　　　　　
　（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｄｅｒｂｙ）ザルモネラ・
プロルム　　　　　　　　　（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　
’ｐｕユニｏｒｕｍ）ンゲラ°ジセンテリアエ　　　　
　（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｄｙｓｅｒ＋ｔｃｒｊａｅ）粗
製物質　　　（Ｃｒｕｄｅ） 多糖類 リポ多糖類 多糖類 〃 リポ多糖類 〃 リポ多糖類 多糖類 〃 スタフイロコノキ　　　　　　　（Ｓｔａ　ｈ　１ｏｃ
ｏｃｃｉ）スタンイロコックス°アウレウス　（Ｓｔａ
ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）スタフイロコ
ックス・アルプス　　（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
　ａｌｂｕｓ）ネイセリ７　工（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｅ
）ネイセリ７−メニンジチジス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　
ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓｌネイセリア°ゴノルヘアエ
　　　　（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ
）エンテロバクテリアシアエ　　　　（Ｅｎｔｅｒｏｂ
ａｃｔｅｒｉａｃｉａｅｌニスケリシア・コリ　　　　
　　　（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉｌアエロバ
クチル・アエロゲネス　　（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅ
ｒｏｇｅｎｅｓ）クレブシェラ・ネウモニアエ　　　（
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）す″モ
ネラ°チホサ　　　　　　　　（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ
　ｔｙｐｈｏｓａ）°１″モネラ°７レラ１フイ”　　
　　　（Ｓａ１ｍｏｒ＋ｅｌｌａ　ｃｈｏｌｅｒａｅｓ
ｕｉ’；）ナルモネラ・チフイムリウム　　　（Ｓａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ンゲラ・シ
センテリアエ　　　　　　（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｄｙｓ
ｅｎｔｅｒｉａｅ）シゲラ・シュミツシイ　　　　　　
　（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｓＣｈｍｉｔｚｉｉ）シゲラ・
アラビノタルダ　　　　　ｆｓｈｉｇｅｌｌａ　ａｒａ
ｂｉ’ｎ６ｔａｒｄａ’）ンゲラ・フレクスネリ　　　
　　　　（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｆｌｅｘｎｅｒｉｌンゲ
ラ°ボイジイ　　　　　　　　　（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　
ｂｏｙｄｉｉｌシゲラ・ソンネイ　　　　　　　　　（
Ｓｈｉｇｅｌｌａ　５ｏｎｎｅｉ）崩の１．オらの菌 プロテラ２．ブルガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｖｕｌｇａ
ｒｉｓ）プロテウス、ミラヒリス（ＰｒｏＬｅｕｓ　ｍ
ｊ、ｒａｂｉｌｉｓ）ブ０デウス゛モルガニ（Ｐｒｏｔ
ｅｕｓ　ｍｏｒｇａｎｉ）ブノイドモナス・アコニルギ
ノザ　　　　　（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇ
ｉｎｏｓａ）−アル刀すゲネス・フェカリス　　　　　
　（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ）ヒブ
ロ・コレラエ　　　　　　　　　　　　（Ｖｉｂｒｉｏ
　ｃｈｏｌｅｒａｅ）ヘモフィルス−ポルテラ　にｈｉ
ｌｕｓ−Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）群へモフイルス°イン
フル１ンザ”　　　　　（Ｈｅｍｏｐｂｉｌｕｓ　１ｎ
ｆｌｕｅｎｚａｅ）。

ボルデテラ゛ペルツシス　　　　　　　　（Ｂｏｒｃｌ
ｅｔｅｌｌａ　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）′ζ７デウレラ”
　　　　　　　　　　　（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｅ）
パステウレラ・ベスチス　　　　　　　［Ｐａ５ｔｅｕ
ｒｅｌｌａ　ｐｅｓｔｉｓ）パステワレラ゛ソラレウシ
ス　　　　　（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ　ｔｕ］、ａｒ
ｅｕｓ］、ｓ）Ｈ，ドクレイ　（ｄｕｃｒｅｙｉ　） Ｈ，″Ｘモフイル”　　　（ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓン＋
１エジブチクス　　（ａｅｇｙｐｔ、１ｃｕｓ　）Ｉ−
１，ハライアフルエアＶ工（ｐａｒａ’ｉｌ〕ｆｌｕｅ
ｎＺａｅ）ブルセラアエ　　　　　　　　（Ｂｒｕｃｅ
ｌｌａｅ　）プルセラ・メリデンシス　　　（Ｂｒｕｃ
ｅｌｌａ　ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）グルセラ・アルシン
　　　　　　（Ｂｒｕｃｅｌｌａ　ａｂｏｒｔｕｓ）プ
ルセラ、　スイ、　　　　　　　（Ｂｒｕｃｅｌｌａ　
ｓｕ：ｉ、ｓ）ベシルス・アントラシス　　　（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ　ａｎｔｈｒａｃｉｓ）バシルス・スブナリ
ス　　　　（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）バ
シ″′″メ７ｙ゛テリウ’　　　　　（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ　ｍｅｇａｔｅｒｉｕｒｎｌバシルス゛セレワス　　
　　　　（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ）クロスＩ
・リジウム・ボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｂ
ｏｔｕ’ｌｉｎｕｍ）りｏスｌ−リジウム・テナ＝　　
　（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｔｅｔａｎｉ）クロス１
゛リジウム−ノヒイ　　　（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　
ｎｏｖｙｉ）クロストリジウム・セブチクム（Ｃｌｏｓ
ｔｒｉｄｉｕｍ　ｓｅｐｔｉｃｕｍ）クロストリジウム
、・）ニストリチクム　（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｈ
ｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍクロースｌ−リジワム・チルチ
ウム　　　（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｔｅｒｔｉｕｔ
ｎ）クロス１リジウム゛ピノ」ニルメンクン（Ｃｌｏｓ
ｔｒｉｄｉｕｍ　ｂｊ、ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓス クｏｙ＜Ｘ）シウム弓：ホｏケネス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄ
ｉｕｍｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓｌ８７６一 スボロトリクム舎ジエンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｕ
ｍ　５ｃｈｅｎｋｉｉ、）７オンセカエアーペドロソイ
　　　（Ｆｏｎｓｅｃａｅａ　ｐｅｄｒｏｓｏｉ）フォ
ンセカエア・コンパクタ　　　（Ｆｏｎｓｅｃａｅａ　
ｃｏｍｐａｃｔａ）７　オフ　セカｘ７．デルマチジス
（Ｆｏｎｓｅｃａｅａ　ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ）クラド
スポリウム・カリオニイ　　（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕ
ｍ　ｃａｒｒｉｏｎｉｉ）フイアロホラ会ベルコサ　　
　　　（Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ　ｖｅｒｒｕｃｏｓａ
）アスペルギルス奉ニズランス　　　　（Ａｓｐａｒｇ
ｉｌｌｕｓ　ｎ１ｄｕｌａｎｓ）マズレラ・ミセトミ　
　　　　　　　（Ｍａｄｕｒｅｌｌａ　ｒｎｙｃｅｔｏ
ｍｉ）マズレラ・グリセア　　　　　　　　（Ｍａｄｕ
ｒｅｌｌａ　ｇｒｉｓｅａ）アレスケリア・ボイジイ　
　　　　　（Ａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ　ｂｏｙｄｉ土）
フイアロスホラ・ジエアンセルメイ（Ｐｈｉａｌｏｓｐ
ｈｏｒａ　ｊｅａｎｓｅｌｍｅｉ）ンクロスボルム番ジ
ブセウム　　　　Ｄ４ｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ　ｇｙβｓ
ｅｕｍ　）トリコフィトン・メンタグロフイテろＴｒｉ
ｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓク
ラチノミセ、Ｘ　−７ジロイ　　　　　（Ｋｅｒａｔｉ
ｎｏｍｙｃｅｓ　ａｊｅｌｌｏｉ）ミクロスボルム−カ
＝ス（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ　ｃａｎｉｓ）トリコフ
ィトン・ルブルム　　　　　（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏ
ｎ　ｒｕｂｒｕｎｎ）ミクｅ＋スボルム自アンドゥイ　
　　　（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ　ａｎｄｏｕｉｎｉ）
ウィルス（Ｖｉｒｕｓｅｓ　） ヘルペス・シンプレックス　　　　　（Ｈｅｒｐｅｓ　
ｓｉｍｐｌｅｘｌバリセラ　　　　　　　　　　　　　
　（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ）　　（Ｃｈｉｃｋｅｎ　ｐｏ
ｘ）ヘルペス°ソステル　　　　　　　　（Ｈｅｒｐｅ
ｓ　Ｚｏｓｔｅｒｌ　（Ｓｈｉｎｇｌｅｓ）ウィルス　
　　　　　　　　　　　　　（Ｖｉｒｕｓ）　Ｂシトメ
ガロウイ／ｌ／　　　　　　　　　　（Ｃｙｔｏｍｅｇ
ａｌｏｖｉｒｕｓ　）バリオシ　　　　　　　　　　　
　　　（Ｖａｒｉｏｌａ）　　（ｓｍａｌｌｐｏｘ）バ
シ土ア　　　　　　　　　　　　　（Ｖａｃｃｉｎｉａ
）ポク、（ウィル、＜　、　ホヒ、＜　　　　　　　（
Ｐｏｘｖｉｒｕｓ　ｂｏｖｉｓ　）パラバシニア　　　
　　　　　　　　（Ｐａｒａｖａｃｃｉｎｉａ　）モル
スクム・コンタジーｒスム（Ｍｏｌｌｕｓｃｕｍ　ｃｏ
ｎｔａｇｉｏｓｕｍ）ピコルナウィルス　　　　　　　
（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｕｓｅｓｌポリオウィルス　　
　　　　　　　　　（Ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ　）コクス
サツキエウイルス　　　　　　（Ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖ
ｉｒｕｓ　）エコウィルス　　　　　　　　　　　　（
Ｅｃｈｏｖｉｒｕｓｅｓｌリノウイルス　　　　　　　
　　　　　（Ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓｅｓ）モノエピトビ
ツク配位子アナライト、り、分子檜が一般に約１００〜
２，０００、いっそう通常］２５〜１．　ＯＯＯである
。興味あるアナライｌ−ｆは、朶□勿、代謝−吻、殺虫
剤、汚染１５などを包含する。興味ろる楽物（で（づ：
アルカロイドが含才灼、る。アルカロイドの例は次の１
食りでめる：モルヒネアルカロイド、たとえば、モルヒ
ネ、コデイン、ヘロイン、デキストロメトルファン、そ
ね、らのユ秀’＝％％　２よび代謝物：コカインアルカ
ロイド、たとえ１ワ：、コカインおよびペンゾイルエク
ゴニン、−ｔｉ□！、らの＝−Ａｓアミド；ステロイド
アルカロイド；イミナゾイルアルカロイド；キナゾリン
アルカロイド、インキノリンアルカロイド；そノリンア
ルカロイド、たとえ１ば、−１１・二ンおよび千ニシン
；ジテルペンアルカロイド：ぞハらの透″、￥体およ・
′ノー代栃蛎。

薬物の次の詳は、以−「のものを３言するニステロイド
、たとえ（ず、エストロゲン、ゲストゲン、アンドロゲ
ン、アンドレノコルう−カル（ａｎｄｒａ−ｎｏｃｏｒ
ｔｉｃａｌ）　　ｘテロイド、バイルｌ’ｉ、　（ｂｉ
ｌｇａｃ　ｉｄｓ　）、強心性グリコンド升よびアグリ
コン、たとえば、ジゴ・ｅシン（ｄｉｇｏｘｉｎ）　ａ
よびジゴキシゲニン（ｄｉｇｏ：ｒ、ｉ　ｇｐｎ翻）、
ザボニン嘔よびザボゲニン、それらの、：、ｉ；　ｉ赫
、本ユ゛子よ（、ノー↑ａ射′τ勿。匠た・ステロイド
ミメチック（ファ１１ｍｇ　ｔ　ｉ　ｃ　）吻嶺、たと
え（ｄ１ジエチルスチルベストロール 薬物の次の群（グ、５〜６隈員のラクタム、たとえば、
パルピッレート、例、フェノバルビタール♂よびセコバ
ルビタール、ジフェニルヒダンＩ・二ン、ブリミドン、
エトスキジイミド、および代謝物である。

、各々の次の群りこ、２〜３炭菜原子のアルキルをンＨ
するアミノアルキルベンゼン フェタミン、カテコールアミン、Ｊｌ」、エフェドリン
、Ｌ−ドーパ、エピネフリン、ナルセイン、パパベリン
、それらの代−射・ｉ勿である。

薬〈勿の次の群は、２〜３．炙紫原子のアル千ル〒、・
ぼするアミノアル千ルベンセン、ｆｃ　トエ；、ｘ、エ
フェドリン、Ｌ−ドーパ、エピネフリン、ナルセイン、
パプベリン１．（−れらの代謝物２よひ「方蓄・体での
る。

薬物の群は、ベンズ・１渓素澄式吻・４、たとえば、オ
キナゼパム、クロルプロマジン、テクレトール、イミプ
ラミン、それらの＠得体；、−よ１１代；６ｊ゛辺であ
り・値姐１はアゼピン、ジアゼピンおよびフェノチアジ
ンである。

薬−勿の次の４祥Ｉ、鍵、プリン、たとえは１、テオフ
ィリン、カフェイン、それらの代謝、・ｙＪ：ｂ−よ（
、’ｊ’　銹ｉ、＊、４体でめる。

薬−：勿の次の群は、マリシュアナ（ｍαγ１ｊｕａｎ
ａ）から誘導されたもの、たとえ、ゴ、カンナビノール
およびテトラヒドロカンナビノールを包含する。

薬物の次の群に・　ビタミン・たとえば・Ａ＼Ｂ＼例、
Ｂ１□、Ｃ，Ｄ、Ｅおよびに１葉酸、チアミンである。

薬物の次の群（了・ヒトロイシル化および不飽和の程度
および部位がＡなるプロスタグランジンズである。

薬物の次の群は、仇王勿ｔ、たとえば、ペニシリン、タ
ロロマイセチン、アク−・２ノマイーヒチン、テトラサ
イクリン、テラマイシン、そｈらの代謝物および誘導体
である。

薬物の次の群はヌクレオシド；っ・よびヌクレオチド、
たとえば、ＡＴＰ、ＮＡｌ）、Ｆ　ｒｎ’　Ｎ、アゾ／
シン、クアノシン、チミジン、：ＩＬ−よひシチジン、
それらの適当な糖お上、Ｊホスフェート置喚基をもつも
のである。

薬物の次の群は種々の耐々の戻・；勿、淀とえば、メタ
トン、メプロバメート、−ｆｆｌロトニン、メペリジン
、アミトリフチリン、ノルトリブチリン、リドカイン、
プロ力インアミド、アごヂルプロ力インアミド、プロパ
ノロール、クリセオフルビン、バルプロン酸（ｖａｌｐ
ｒｏｉ　ａｃｉｄ）、ブチロフェノン、抗ヒスタミン、
７九コリン剤、たとえば、アトロピン、それらの代謝物
および、号、、、庵で・わる。

化合物の次の群はアミ７′夕２よび小袋いベン°チド、
たとえは、ポリョードチロニン、ケキシトシン、ＡＣＴ
Ｈ，アンギオテンンン、メトエンケファリン、レウエン
ケファリン、そ′Ｉ″ｌらの代謝物および誘導体で必る
。

病％の状頭に関係する代謝物には、スペルミン、カラク
トース、フェニルピルビン１収およびポリフィリン型ｌ
が′きまねる。

薬の次の〕−千：’Ｘアミノグリコシド、ンｒとえは、
ゲメタマイシン、カナマイシン、トブラマイシンおよび
アミカシンである。

具味する殺虫剤の□、’；３　（’ｒ５：、ポリン・ロ
ゲン比ビフェニル、ホスフェートエステル、チオホスフ
ェート、カルバメート、ポリハロゲン化スルフェンアミ
ド、それらの代謝物および誘導１本でりろ。

受容体は分子の空間的および・属性の肩７．虜化ＶＣ后
合できる化合！吻でめる。はとんどの部分ケこ対して、
受容体は抗生物質、とくにＩｇＧ、Ｉ　ｇＡＸＩｇＥお
よびｉｃｌＭである。受・ｒ＃坏リンエアナライトるる
か、あるいは免疫倹足において試薬として成用できる。

いずれの場合ｉ／Ｃおいても、受答１本：α本鈍明の分
光学胃に活性な化合物（・６箱ばてきる。

受容体のアナライトについて、分子二個ｉ弓二ｒ’・い
で１０．０００〜２Ｘ１０’　、より巳常１０，０００
〜１０６の範囲でろろう。イミュノグロプリン・Ｉ　ｇ
Ａ、Ｉ　ｇＧ、Ｉ　ｇＥおよびＩｇＭについて、分子量
は−；股（Ｃ約１６０．０００〜，１勺１０６で貧化す
るであろう。４．祠；〔分子量が゛弘７１．約１０．０
００〜６００．０００−て；ろろう。天隙の父容体・は
、分子）チが広く変化し、−ぐＩ／Ｃ少７　＜　、Ｌ−
も、１勺２５．０００であり、］０６以上て、１ろるこ
と：６；２ｆ）９、このような受容体の列（つ、アビジ
ン、シロ；Ａ′シン′Ｂ合グロブリン、シロギシン、結
合グレアルブミン、トランスコルチンなとてΦる。

本発明の化合吻は広己な亡＋Ｍｌ子、）・ブテン２よび
尻原、および受８１：Ｚ　：・こ−１ゴして、板・１キ
’、＞４Ｚ　）と彫哩することができ、これらのｑ・片
：本・、・−コーハ１々の・、射しとくに免疫倹別にλ
ノもされる。−１−１−ニー：巳の弓己合１不ケフ込ア
ナライｌ−にど・いて、７とと、ｔ　（’ｘ−栄ヅとし
て大きい重要性をもち、本−、舌すＪの、ヒＢ吻゛１、
二・、」いる足１．□が容易である・などの理由でシｋ
ｉ′、！ｌ：がある。次はｌ彫に１要な被合体の式てり
る。

一蒐要な−・シ］の一介不〕：、次−丈のラクタム−発
色１リ−１，複合体である： 式中 ａは１であり、ただしＲおよ０：　ｊ？　”がフェニル
であるとき、α（は０またｊづこ１でりり、Ｚはカルコ
ーゲン、Ｌ最索寸たｌグイオウでめり、通當；′４１累
であり、 ｌ？およびＲａ［１〜７炭紫煩子１．・、、４　’ｌ’
ａ’　］〜６　ｌｅｔ累原子の炭化水ノもであり、カー
、ｊ改頃外のとぎエチレン性不倫和の０〜１都［ｑを有
し、たとえ、・了、ａが１であるとさ、メチル、エチル
、５ａｃ−ブチル、η−ブチル、α−メチルブチル、イ
ソアミル、ヘキシル、△１−シクロへキセニル弁よひフ
ェニル、とくにアルキル せまたはエチルとフェニルとの且みＳわせ、そ］〜てａ
がＯで，りるとき、２つのフェニルで捗す、Ｌの一方ｉ
ｄ：単結合、Ｃ　ｈへし舒する官［シ牝？与また・弓：
基であり、通濱オキシ、アミノ、耳オキシカルボニルオ
たはメルカプトにおいて，企り、そしてＯ〜６、通常Ｏ
〜４の炭紫子の″５．丁ｔ：羽−し、７．、）合部位外
のとき、Ｌは水系でめり、 Ｃｌム（グ、次式をもち、 γ−ＣＯ′ 式中、 α，δνよびγは前に足−岨した．ユリで捗り、そして
Ｃｏ’　Ｉづ：Ｌへぞ合してアミド、アミジン、原木、
チオ尿累、エステル、オキシエーテル苔たはチオエーテ
ルを形成する０−５当な′酊餡肴、のるい泪：配位子お
」二び発色げに百合する一７二ーアミノ官能基であり、
上の式１１（？Ｊ．−【い、・ジ囲の削′式のずべてが
包含さ力，、ここてＸ（θ：、１ゴ合′ビ１足基で・つ
る。

次の重要な発色１団工１ｉ　、：ｒＬ子１ｄ合体１Ｊ：
・次−Ｃ％−＠丁もっであろうテオフィリン、、Ｃｏつ
いてのものでりる：式中 りおよびＬｌの一方ｉ１す亀，箭合めるい（グＣ　ｈへ
話合する′ｇ能壜またば（・で・りり、Ｅ．’（Ａ宮オ
キシ、アミノ、非オキソカルボニルでり・ケメルカブト
で終り、そしてＯ〜６、ｇｉｆｆｑ　’＋；ｇ　Ｏ〜４
の炭素原子のイ≧υ酩」し、１′百合部位以外で）ると
き、Ｌｌ，７水水で９うり、そしてＬｌ　Ｈ，エステル
で・クリ、そしてｃｈｄ上に定−（した−：ｉ４りであ
る。

次の重要な発色ｌ”１Ｊ．記立子の複合体は、元とんど
の部分（′Ｃついて次式′、：・汀する、アミノグルコ
キシド、とくに洸ニー９４．Ｅ　（力・ｊコ三アミノグ
ルコシドヴこついてのものてめる： 式中 りはＲ基のいずれの１つｔｒｃも７話合することができ
・ そうでない、動台、 Ｒ２はアミノ（＝Ｎｉブ、）で捗り、ただしカナマイシ
ンおよびアミカシンｔＣついて（グ、それ（はヒドロキ
シルで１うり、 Ｒｓ、Ｒ７ミ夕よびＪン９　・工こドロキシルでめり、
Ｒ４およびＪン５１つニアミノで；りり、たンζしアミ
カシンについてｉ’ｊ　、ｋ　’　・１４２−ヒドロヤ
シ−４−アミノブチルアミド−Ｃ，／）す、 Ｒ６は水菜またエメチルで・うり、ゲンタミシンである
ときメチルでうり、そしてトブラマイシン、カナマイシ
ン繁た１はアミカシンであるとき、水素であり、 Ｒ８７７、ｊアミノ捷たはメチルアミノであり、ゲンタ
ミシンでめるときメチルアミノでめり、他の場合はアミ
ノで）す、 Ｒ’Ｏは水−１：：−＊たけヒドロキシメチルであす、
ゲンタミシンのとき水系であり・他の場合はヒドロキシ
メチルでしり１ １１　”−、′；−よびｌτ１２は水系またはヒドロキ
シルであり、ゲンタミシンについて水素であり、カナマ
イシン２よびアミカシン６１こついてヒドロキシルであ
り、そしてトブラマイシンについてｉ”ｆ、　ＩＩ　ｌ
’ｌ：ヒドロキシルであり、セしてＲ１２は水素であり
、そしてＬおよびｃｈｈ上に定こ宛した通りである。

次の電装な発色１力配位子複合体１は、次の式をもつで
あろうミ薫式→ノＬ抑うつ剤ｒ（ついてのものでありＧ る： 代印 Ｌｌ・の一方・・シ房Ｊ′ＶＱ咀−２褒したような結合
基であり、そうでｌい、：も合、水ｆで、うり、 Ｇ　’　ｉ＋ゴＮ−１Ｃ−またはＣＨ−でろり、残りの
２つの原子・１ｌｌｌは隣接する。嬢炭素原子に向かい
、Ｒ′は単慴合瞥た（グニ虞皓合でありＬ−をＧに汚合
じ−ろか、めるいぼ着紫へ粘合する０〜２メチル基”ｓ
＝　有−３−ろアミノプロピルまた１は−イリデンであ
る。

式中 Ｌ：ひよびＣｈ＋、ｊ二上に定義した通りであり、Ｒ“
ばＬが水素でめるとぎ単結合またはメチレンで／−りす
＼ ｌ？、′は単紹合瞥たはオキシでめり、そしてンは０〜
１・！伺のオルトの原子番号９〜１７の〕・ロゲンであ
る。

Ｌで衣わさ、！する゛τイ台基は、Ｌが結合するＲの性
−２Ｌが両会する基に炊浮して変化するであろう。

前だ示したように、Ｌ（は単結合、官能基または結合基
でめることができ・この結合基はｃｈ上に存吐する頁能
否と共；・鮨話合全形成できる官能基にお・ハて愁ろ。

Ｌ館羊、１台でつるとき、それは炭素原子を１４秤原子
、とくに窒素原子お。１：び酸素原子に通常結合するで
あろう。Ｌが官能基であるとき、そＦｌ−一通常炭素に
結合し、通常オキシ、チオ、アミノ脣たけ非オキソカル
ボニルである。Ｌが結合基であるとき、それは通常１〜
８、とくに１〜６、ことに１〜４の原子の鎖を有し、そ
れらの原子のうち０〜２、通常０〜１は異種原子、すな
わち、酸素、イオウおよび窒素であり、カルコーゲンは
主として炭素へ結合し、窒素は主として炭素および水素
へ結合し、鎖ｄメチレンとして才だは異種官能基（Ｌに
ついて上に定義したよう々）で終り、Ｌは合計１〜１０
、通常１〜６個の炭素原子と０〜４、通常１〜３個の異
種原子、すなわち、酸素、イオウおよび窒素を有し、カ
ルコーゲンは通常エーテル寸たは非オキソカルボニルで
あり、そして窒素はアミノオたけアミド゛である。

主題の複合体口、試料中の問題の化合物の存在を定は的
に、半定量的に、丑／こは定量的に決定する種々な方法
で使用できる。化合物を生理学的流体中で検出する場合
、流体は血清、尿、唾液、リンパ液々どを包含できる。

問題の化合物が化学的処理捷たは環境衛生に関係するも
のであるとき、試料は水性媒質、有機媒質、土壌、無機
混合物などを含むことがある。

検定は、通常、分光学的に活性な化合物の１わりの環境
が変化するための分光学的変化、あるいは螢光発生剤−
消光剤の対を消光剤が螢光発生剤と相互作用するのに十
分な近い範囲内に接近させることを含む。

第１の検定において、立体的排除を含み、とこで配位子
および螢光発生剤のための受容体またけ抗体を用い、配
位子の受容体と螢光発生剤の受容体の同時結合は阻止さ
れる。さらに、螢光体の受容体（抗螢光発生剤）を螢光
発生剤へ結合するとき、螢光発生剤の螢光は実質的に減
少する。ぞれ以−にの減少は、螢光の抑制が完結され々
い場合、消光剤を抗螢光発生剤に結合することによって
達成できる。この検定は、１．９７６年１２月２１日発
行の米国特許筒３．９９８．９４．３号に詳しく説、明
されている。そこで使用する螢光の代わりに、本発明の
螢光化合物を代わ９に使用する。検定は前記特許の欄３
〜５に記載されており、その記載を引用によってここに
加える。

一般に、この方法はアナライトを含有すると思われる試
料、配位子と螢光発生剤、抗螢光発生剤、および配位子
がアナライトであるとき、配位子の受容体すなわち抗配
位子を合わせることからなる。

これらの物質を５〜１０、通常６〜９の範囲のｐ　Ｉｉ
および約１０〜４５′ｃの範囲の温度において水１住媒
質中で合わせ、そして螢光を速度棟たけ平衡のモードで
決定し、すべての物質を速度のモードで合わせた後読み
は約Ｉ秒〜１時間以内に取り、−力平衡のモードにおい
て、読みは約２４時間以上までの長い時間にわたって取
ることができる。

次の免疫検定技術において、螢光発生剤−消光剤の対を
用い、ここで対の構成員の一方が特定の結合する対、す
なわち配位子および抗配位子の一構成員へ結合し、そし
て他方の発色団の構成員は特定の結合する対の同一また
は異なる構成員へ結合する。たとえば、螢光発生剤は抗
配位子へ結合し、そして消光剤は抗配位子の異なる分子
へ結合できるので、２つの複合した抗配位子が抗原と一
緒にされるとき、螢光発生剤と消光剤に消光距離内に接
近させられる。別法として、発色団の一方を配位子へ結
合し、他方の発色団を抗配位子へ結合することができる
。この検定は米国特許筒３．９９６、３４．５号に詳し
く記載されている。この検定技術は欄１７から欄２３に
かけて説明されておシ、その記載を引用によってここに
加える。発色団対配位子および受容体の比ｕ二個４〜６
に説明されておシ、その記載を引用によってここに加え
る。

この検定は上と実質的に同じ方法で実施するが、ただし
この検定において、螢光複合体と消光複合体を試料と一
緒に加え、そして螢光を既知量のアノライトを有する検
定媒質と比較して決定する。

他の技術を主題化合物とともに使用することができ、こ
のような技術は１９７７年８月１３日付は米国特許出願
第８２４．５７６号に記載されるように重い原子の消光
を含み、あるいは分析すべき生理学的流体または他の試
料中に天然に存在する螢光化合物が発する光よシも実質
的に上の波長の光を発する螢光化合物を望む場合、他の
検定を使用できる。

実験 下記の実施例は限定のためではなく、例示のため示す。

（とくにことわらないかぎり温度はすべてせっ氏である
。とくにことわらないかぎり部及び百分率はすべて重量
によるが、リガンドの混合物については容量による。下
記の省略語を使用する。Ｔ１１Ｆ−テトラヒドロフラン
；ＮＨ３−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド；ＤＭＦ−Ｎ
、Ｎ−ジメチルホルムアミド；ＤＣＣ−ジシクロへキシ
ルカルボジイミド、　ＰＥＧ−ポリエチレングリコール
６０００、） 実施例１ ２−クロロ−４−メトキシレゾルシノールの製造反応フ
ラスコの中に５０ゴのメチレンジクロシイド中の２２の
２−クロロ−３−ヒドロキシ−４〜メトキシベンズアル
デヒドを過剰のｍ−クロロ過安息香酸と共に入れ、２５
時間還流させた。溶媒を除去した後、固体の残渣を１０
７のメタノール中に溶解し、約ｌＯＭ量パーセントの水
酸化ナトリウム水溶液（１０ｍｐ、）とともに１時間攪
拌した。希１１Ｃ１でｐＨ１のｅ姓にした後、この溶液
を濾過し、沈殿を１０ｍ１の冷水で洗浄した。炉液を合
わせ、洗浄物をエーテルで抽出し、このエーテル溶液を
５チＮａＨＣＯ３，（２ｘ　１０　ｍｌ　）及び飽和Ｎ
αＣｌ溶液（１ｘｚＯｒｒｄりで洗浄し、次いで蒸発さ
せて固体を残し、この固体を酢酸エチル−ヘキサン混合
物から結晶化させ、生成物を白色絹様針状物として得た
（　１．３５　ｆ　）。融点６９−７０°。

実施例２ 実施例１の生成物（２００７’ｌｌｉ’）及び１００■
の１．２．４−ベンゼントリカルボン酸無水物の混合物
を１８０−８５°で３０分間１５Ｔｎｇの塩化亜鉛と加
熱した。生成した赤色混合物を５俸水酸化ナトリウム水
溶液中に溶解し希１−１ｃｌで７＋Ｙｌにして沈殿させ
た。次いで沈殿物をＣＨ，、Ｃ１２：　Ｍｅ　ＯＨ：Ａ
ｃ０Ｈ−９二１：、０．５を使用してクロマトグラフ処
理した。

実施例３ ピロガロール−２−メチルエーテル（４ｆ）及び１，２
，４−ベンゼントリカルボン酸無水物（２３り）の混合
物を、１９０〜１９５°　（外部油浴温度）に予じめ加
熱した油浴中の開口した試験管中で３時間加熱した。暗
赤色の物体が得られた。それを冷却し、５グＮ’ａＯＩ
ｉ’　（３５ｍｌ　）に溶解し、濃１１Ｃ１で７ｒＨ１
の酸（生にした。暗赤色の油が分離した。この溶液を固
体Ｎ　ａ、　ＣＩで飽和し、玲だい部屋で一晩攪拌した
。濃厚な黒色クール状物質を分離し、とのタールを飽和
Ｎ’ａＣ１溶液で溶かした（ｍａｃｅｒａｔｅｄ）　（
２Ｘ　１５　ｍｅ　）。このタールのＴＬＣ（Ｃ１ｉ、
Ｃ１２：　ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ８５：１５：１）試験ｄ
赤色スポノ）・及びより低いＲｒをもついくつかの他の
スポットの存在を示した。

このタールを５７のＲＰ−２シリカゲル６０シラン化物
（Ｅ、　ＭｅｒＣｋ　Ｃ（１ｔ、　Ａ　７７　］−９）
に吸収させ、ＣＨ２Ｃｌ２：メタノール（１−００：　
０．２５　）中に調製したＲＰ−２シリカゲル（３５！
ｉ’）を使用する通常の重力カラムにより精製した。溶
離は同じ溶媒ＣＨ２Ｃｌ、：メタノール（１００：０．
２５）を用いて行った。溶離につづきＴＬＣを行った。

同じ赤色スポットを含有する両分を合わせ、溶媒を除去
して赤色の残渣を得、これを２０彪のＣＣｌ、　：　　
ＣＨ２Ｃｌ、、　ｔ　９５　：　５　）の混合物で溶か
した。生成しプ’ｃ赤色固体（］、、　］１？　）を濾
過しだ。これはＴＬＣ上の唯一のスポットであった。そ
れは０、０５　Ｍ　ＰＯ＋３＠　衝液ｐ　Ｈ８，０中２
　ａｂｓ０ｒｐ′’　”ａｘ ５１２ｎｍ、　　Ｃ７８，２００を有する。それは発光
を有しない。

実施例４ ４′、５′−ジメｉ・キシ−６−カルポギシフルオレセ
イン（実施例３）（１，０５ｆ）を無水エチルアルコー
ル（１，５ｍＡ）中に溶解し、これに１□粉末（１９）
及び固体炭酸水素すトリウム（ｏ、　ｓ　ｙ　）を加え
た。内容物を１時間窒素下で還流した（外部浴温度８０
−８５°　）。還流混合物のＴＬＣ試験（ＣＨ，Ｃ１２
：メタノール：酢酸８５：１４：１）はモノ沃素化誘導
体及び少量のジ沃素化誘導体の生成々らびに出発物質を
示した。

さらにｌ２（５００７１１Ｆ）及びＮａｌ−１ｃｏ３１
２５０′Ｉｎｇ）を加え、さらに１時間加熱を続けた。

ＴＬＣはモノ−及びジー沃素化生成物がさらに生成した
ことを示した。さらにＩ　２　　（５００ｍｑ　）及び
Ｎａ１ｉＣＯ３［２５０ｒｎＹ　）を加え、続いて１時
間加熱することをちと２回繰り返した。最終混合物のＴ
ＬＣは多量のジ沃素化誘導体並びにごく少量のモノ沃素
化誘導体の存在を示した。

エチルアルコールを口＋−バッフ（Ｒｏｔｏｖａｐ）上
で除去した。残渣に対し２０ｍ１の水を加え、溶液を希
ＨＣＩでｐＨ１の酸性にした。かつ色の油が分離した。

これをエーテル（ａ　ｘｓ　Ｏｍｇ）で抽出した。暗赤
色のエーテル層を５チチオ硫酸ナトリラム溶液（２Ｘ　
２０．１２　）、水（］−Ｘ　２０　ｍｌ　）及び塩水
（１ｘ２０ｍＪ）で洗浄した。エーテルをロトバッグ上
で除去し、残渣を４ヂＮａ０Ｈ（２０ｐＨ１２）中に溶
解し濾過しだ。Ｐ液を希１１Ｃ１で酸性にして暗赤色の
固体（２，１？　）を得た。

この赤色の固体［２，１？　）をアセトンを用いて４７
のＲＰ−２シリカゲルシラン化物（Ｅ、　ＭｅｒＣｋＣ
ａｔ、　Ａ　９９　］、　］７）上に吸着させ、次いで
（ＣＨ２Ｃ１２を用いて３０２のＲＰ−２シリカゲルか
ら調製した）ＲＰ−２シリカゲルの重力カラム上に注ぎ
、Ｃ１１２Ｃ１，、で溶離した。溶離につづきＴＬＣを
行った。同じＲｆを有する両分を合わせ、溶媒を除去し
た。この残渣（］、、　］、　！２　）を１０ゴのＣ１
１２Ｃ１２：Ｍｅｏｌｌ　（９９：　１．　）に溶解し
、ｎ　−ヘギサン（７ｍｌ　）を加えた。厚い沈殿が分
離した。

これを濾過し、母液を濃縮した。これにさらにヘギザン
を加え、さらに固体を得た。固体を合わせ（０，９４Ｍ
’）、非常に淡く着色した長い針状物として２　／　、
　７／−シイオド−４−／　、　５　／−ジメトキシ−
６−カルポギシフルオレセインを得た。このものは放置
すると橙赤色になった。

この生成物はｏ、　Ｏｓ　Ｍ　Ｐｏ、３−緩衝液ｐ　Ｈ
８，０中テ２　”””””ｎ５３３　ｎｍ、及びε８１
，７８０ａｘ を有する。

実施例５ ノン Ａ、、２５ｍ１の２０チ発煙硫酸中に１０２の４−メチ
ルフタル酸無水物及び０５２の粉末沃素を溶解した。こ
の混合物を９０〜１００°に加熱し、塩素ガスを連続的
にこの溶液にバブルさせた。

２４時間加熱後１、さらに０５２の沃素を加え、さらに
２４時間加熱を続けた。白色固体が沈殿した後この溶液
を冷却し、１００−の氷冷水中で希釈し、白色固体を濾
過しだ。この固体を２０−の冷水で洗浄し真空中で乾燥
した。この生成物は３゜５．６−ドリクロロー４−メチ
ルフタル酸及び無水物の混合物であると考えられた。

Ｂ１反応フラスコ中に２（１’（０，０７５モル）の上
記生成物及び４００ｄの１０チ炭酸カリウム水溶液を導
入した。約１時間１２０°で還流した後、２０ゴのｔ−
ブタノールを加え、つづいて３３　ｒ　（０，２モル）
の粉末過マンガン酸カリウムを一部ずつ加え過マンガン
酸塩の蓄積を防止した。

さらに１００ｄの１０係炭酸カリウム水溶液を使用して
過マンガン酸塩中で洗浄した。反応コースをＴ　Ｌ　’
Ｃで追跡し、出発物質の実質的不存在を観察したときに
、蒸留によりｔ−ブタノールを除去し、生成したスラリ
ーを６　Ｍ　Ｈ２ＳＯ，でｐＨ１の酸性にした。過剰の
過マンガン酸塩を、硫酸を加えてｐｌｉを１に維持しつ
つ、固体しゆう酸を用いて分解させた。真空中での濃縮
後、白色沈殿が生成し、６ＭＨｃｌを加えて最終容量を
３００−とした。３０分間室温で攪拌した後、細かい白
色沈殿が生成した。このスラリーをエーテル（３×４０
０ｍ６）で抽出し、エーテル溶液を分離し、そのエーテ
ルを真空中で蒸発させた。ベンゼンを用いる共沸乾燥後
、２０ｇの白色粉末を単離し、これを酢酸エチル−ＣＣ
ｔ、から再結晶し、１９．４ＭＦの生成物を得だ。融点
、２３８−２４０°０Ｃ０上記生成物（１０Ｙ）を３０
ｒｎＩ！の無水酢酸に溶解し、１４０−１４５°で窒素
下で４５分間加熱した。この無水酢酸を真空中で約３５
−’４０゜の温度で除去した。白色一体の重量は９．５
２であった。この生成物け１，２−ジカルボン酸の基の
酢酸との混合無水物及び分子内無水物である。

この生成物（９，５ｒ　）は１２２の２−クロロ−４−
メトキシレゾルシノール及び１９の無水塩化亜鉛と混合
し、１８５〜１９０°に約１５時間加熱することができ
る。次いでこの生成物を前記のように処理する。

実施例６ １づの乾燥ＴＨＦ中の２５ｒｎｇの実施例３の生成物の
溶液を、ジシクロへキシルカルボジイミド（１０ｍｇ）
と１０■のＮ’Ｈ８と一晩攪拌した。この溶液を濾過し
だ後、溶媒を除去し、残渣を１０−のｎ−ヘキサンで２
０分間溶した。生成した固体を濾過しこの固体を５−の
ｎ−へキサンで洗浄した後、生成したエステルをさらに
精製するとと々く使用した。１ｆｎｌのｏ、ｏｓＶりん
酸塩緩衝液、ｐＩｉＳ中の１チ抗（人Ｉ（７Ｇ）（１０
■蛋白質）の溶液に、２　ｓ　ｐＡ　ノＤＭＦ　中（７
）　０．７　Ｉｎ’ｉ（Ｄ上記ＮＨＳエステルをゆっく
り加え、この混合物を１時間０〜５°で攪拌し、次いで
さらに１時間室温で攪拌した。この生成物は、００５Ｍ
りん酸塩緩衝液、ｐｌｉ８を使用してＧ　２５セフアデ
ツクス（Ｓａｐｈａｄｅｘ）カラムをとおしてクロマト
グラフ処理することにより精製した。全生成容量は２−
２ｒｎｌであった。５１９　ｎ、ｍでのＵ’Ｖ吸収に基
づき、染料／蛋白質比は約５と評価された。

実施例７ 新Ｌ＜蒸留した乾燥ＴＩｉＦ（３ｍｌ）中の４７，５／
−ジメトキシ−２′＋７フージイオドー６−カルポギシ
フルオレセイン（実施例４）（２５０’Ｗ）、ジシクロ
へギシル力ルポジイミド（８０■）及びＮ−ヒドロギシ
スクシｙイミＭ　（５０ｒＩｖ）の溶液を６時間室温で
攪拌した。この間に白色固体が少し分離したので、これ
を炉別しだ。Ｐ液を口ｌ・パップ上で濃縮し、残渣を５
分間真空中で乾燥し、溶媒の最後の痕跡を除去し／こ。

生成した深赤色の固体を１２ｍ１のベンゼン−ヘキサン
混合物＋１：］）を用い２０分間攪拌し、生成した深紫
色固体を濾過した。この固体はＣ１ｆ２Ｃ１２：　Ｍｅ
　Ｏｆｆ　：　、Ａ　ｃ　０１１（８５：１５：１）中
のＴＬＣにより殆んどすべ−（Ｎ　Ｉｆ　、Ｓ’エステ
ル（Ｎ　Ｉｉ　、Ｓ’エステルＩｄメタ／−ルと反応し
対応するメチルエステルを与えるので、出発物質と比較
してより高いＲｆにより示される）であることがわかっ
た。この紫色の固体はそのま１で蛋白質に対する複合の
ために使われた。この固体は約９０重量係の純度である
と考えられる。

Ｂ、水浴中でＯ〜５°に冷却した人−ｆｇＧ（１係コー
ル酸を含有する０、　５　ｍｌのｏ、　ｏ　ｓ　ＭＰｏ
、３−緩衝液ｐ　Ｉｆ　８．０中の５り）の溶液に、２
５μｔの乾燥ＤＭＦ中の上で製造したＮｌ１Ｓエステル
＋　０．４　ｍ？　）の溶液を２０分間でゆつくシ加え
た。

冷室で一晩攪拌を続けた。次の日、との溶液を２分間遠
心分離にかけ、この深赤色溶液を、１係コール酸を含有
する０、　０５　Ａ／　ＰＯ４”−緩衝液ｐｌｉ８０を
使用してセファデックスＧ−２５カラム（１，Ｘ　３０
　ｃｍ　）上で精製した。より速く移動する複合体は容
易に分離された。

ハブテン数（すなわち、染料／蛋白質比）の計算は次の
ように行った。特定の希釈のＵＶスペクトルから染料の
量は、５３９におけるＯＤを吸光係数（ｅｘｔｉｎｃｔ
ｉｏｎ　　ｃｏｆｆｉｃｉｅｎｔ）８１．７８０で除す
ることにより決定される。蛋白質の量は複合の前に出発
する蛋白質の濃度を知って（蛋白質が複合及びセファデ
ックスクロマトグラフ処理の間に失われないと仮定して
最終複合体について適当々希釈較正を行った）その濃度
数を使用することにより決定する。

上記方法に従ってラベルする場合、本消光剤のＮＩｆＳ
エステルのラベリング効率は約８０〜９０％であること
が見出される。

実施例８ ンの製造 反応フラスコの中に０２−メチルピロガロール（３０１
Ｗ）、無水コハク酸（１００Ｔｎｇ）及びＺｎＣｌ２　
（２０ｍ？）を導入し、混合物を１８０−８５°に１５
分間加熱した。この生成物をプレパラティブＴ　Ｌ　Ｃ
（Ｃ１ｉ２Ｃ１２：　ＭｅＯＩｉ　：　Ａｃ０１−１゜
９０：１０：０．５）により精製した。精製した生成物
は０．０５　Ｍ　Ｐ　０４３−緩衝液、ｐｌｉ８．０中
２　ａｂ８””０ｎ５０６−７　ｎｍを有しけい光発光
ａｘ は有しなかった。

無水コハク酸を他の酸無水物、たとえば無水ダ１Ｂ ルタル酸、２，３−ジメチルコハク酸無水物、１，２−
シクロペンクンジカルボン酸無水物及び無水アジピン酸
で置きかえて上記方法に従うと、適当に置換された４、
５−ジメトキシ−６−ヒドロキシ−９−置換キサンテン
−３Ｈ−３−オンが得られる。

実施例９ 丸 Ａ、２−クロロ−４−メトキシレゾルシノール（０，４
ｆ　）及び３，６−ジクロロトリメリット酸無水物（０
，２７ｙ　）をＺｎＣ１２（１０ｍ）と１８５°で１５
分間加熱し、生成物をＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：　Ａｃ
０Ｉｉ、　９０　：　１０　：　１を使用してＴＬＣに
より精製した。この生成物ばｏ、　ｏ　５Ｍ　Ｐｏ、３
−緩衝液、ｐＨ８，０中テλａｂｓ”ｂａｎ”　５３３
　ｎｍησαＸ 及び２“″””。ｎ５４９−５０　ｎｍを有した。

ａｘ Ｂ、３．６−ジクロロトリメリット酸無水物は次の如く
製造した。

機械的攪拌器を備えた三つロフラスコ中で００に維持さ
れた、希１１Ｃｌ　（４Ｎ、３０ｍ）中の２．５−ジク
ロロ−３，６−シメチルアニリン（５２）の溶液に、亜
硝酸ナトリウムの溶液（５０−の水中１．８５９　）を
滴下して加えた。添加が完了した後、このジアゾ溶液を
Ｎα２ＣＯ３を用いてｐＨ７に中和し、ベンゼン（ｔｏ
ｏ、ｉ）を加えた。次いでこれに激しく攪拌しながら〔
塩化第１銅とシアン化ナトリウムの溶液から製造した〕
シアン化第１銅の新しく製造した溶液を加えた。

この混合物を放置して室温にし、次いで一晩攪拌した。

次の日、ベンゼン層を分離濃縮して、ニトリルとして約
４５２の粗かっ色画体を得た。これは精製せず、直接加
水分解してアミドにした。ジオキサン（３０ｄ）及び４
％Ｎ　ａ　ＯＨ水溶液（７０ｍｌ　）の混合物中のニト
リル（４，５５’　）の溶液を８時間還流した。この溶
液を冷却し、エーテルで抽出し、このエーテル溶液を濃
縮してかつ色の油を得、これをクロロホルムを用いて浸
しかつ色の固体を得た。これをクロロホルム−石油エー
テルから結晶化しアミド（Ｚ３グ）を得た。

濃Ｈ２Ｓｏ、　ｔ　４　ｒｎ！、）中の上記アミド［０
，９ｒ　）の溶液に亜硝酸ナトリウムの溶液［１ｍの水
中０、３７９　）をゆっくりと加え、その間溶液の温度
を３０°以下に維持した。添加が完了した後、この混合
物を氷で希釈し、白色沈殿を得、これを濾過し、さらに
１０％に２ＣＯ３溶液中に溶解し、濾過し及びＩＮＨｃ
ｌで酸性にすることにより精製し、２．５−ジクロロ−
３，６−ジメチル安息香酸を得た。

上で製造した酸（０，５６５’　）にアルカリ性ＫＭｎ
Ｏ，（１０ｍｌの１０６１ｒＫ２Ｃｏ、中１．８１　Ｓ
’　）を加え、この混合物を１１０°で３時間加熱した
。生成した混合物を６ＮＨ２ＳＯ４でｐＨ１の酸性とし
、過剰のＫＭｎ　Ｏ，はしゆう酸を用いる処理によシ除
去した。エーテルで抽出し、所望の三酸生成物、融点２
３２−３３°を得た。

実施例１０ 反応フラスコの中へ４−チオメチルレゾルシノール（２
００■）、無水フタル酸（１０４■）及び塩化亜鉛（１
０ｆｎｇ）を入れ、この混合物を１８００で５分間加熱
した。この生成物をＣＨ３０Ｈ：ＣＨ２Ｃｌ２：　ＨＯ
Ａｃ　（９：　１　：　０．１　）を使用するプレバラ
ブイブＴＬＣにより精製した。得られ／ζ生成物は０．
０５　Ａ／　Ｐｏ、３−緩衝液、ｐ　Ｉｉ　８．０中で
λａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　５１２？、、−及ヒλｅｍｃ
ｓｓｖｏｎｍＣＬＺ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　ｍａｘ５４０７１、ｔｎ分有
しテイタ。

本化合物の有用）住を示すため、米国特許第３，９９６
、３４５号に記載の」：うにこの蛋白質複合体を免疫評
価において使用した。第１の評価では、約７のフルオレ
セイン／蛋白質モル比を有スるフルオレセインインチオ
シアネ−１・及び人１ｑＧの複合体を０．０３　ｍｆ　
／　ｍｌの濃度で使用した。実施例６の生成物を００５
Ｍりん酸塩緩衝液、ｐＩｉ８中４．９ｍＱ／ｍｌの濃度
で使用した。実施例６の生成物の種々の希釈物を一定量
のフルオレセイン複合体に加え、評価緩衝液として０．
ＯＩＡ／Ｊん酸塩、０、１５　Ａ／　＃　ａＣｌ　　及
び２％ＰＥＧ、、ｐＩｉ８．０を使用し１０分間保温し
た。下記の成績表では２５０μｔの緩衝液中の２５μｔ
のフルオレセイン複台０Ｇ 体を２５０μｌの緩衝液中の２５１１１−の実施例６の
適当に希釈した生成物と合わせ、この混合物を１０分間
保温し、２ｍ１２の緩衝液を加え、次いでけい光信号を
決定した。実施例６の生成物からのバックグラウンドを
得るため、フルオレセイン−１、ｑＧ複合体を緩衝液で
置きかえた場合、実施例６の生成物の種々の希釈物につ
いてけい光信号−〇から６へ変化したが、とのことばけ
い光がなかったことを示しており、観察されたけい光は
装置の誤差内に入ってめだ。

下表はその結果、すなわち種々の希釈物と観察さｆ′１
−たけい洸を示す。

第■表 １　：４０　　　　　　　７２２ １：２０　　　　　　　５９８ １　：　］　０　　　　　　　３８２ １：５　　　　　　　　１９ｓ １：Ｚ５　　　　　　　１２２ ω　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　９２８
上記の結果は、媒体中に存在するフルオレセインに関し
て消光剤複合体の濃度に依存して本発明の複合体がけい
光の変化における犬き々動的範囲（ｄｙｎａｍｉｃ　ｒ
ａ７１ｇｅ　）を与えることを示す。本データはガンマ
−グロブリンに対する鋭敏々評価が得られることを示す
。なぜならばガンマ−グロブリンをふの媒体に加えるこ
とによりけい党則複合体に結合させるために利用できる
消光剤複合体の量は評価媒体中に存在する抗原の量に比
例して減少するからである。さらに、本発明の複合体を
使用することにより、本消光剤複合体からのバンクグラ
ウンド放射は本質的に存在しない。

実施例６の消光剤複合体を実施例７の消光剤複合体で置
き換えて、第２の評価を行った。消光剤対蛋白質のモル
比は約１５であり、消光剤溶液の濃度は約４■／　ｍｌ
であった。フルオレセインの代りに使用したけい覚剤は
２，７−シメチルー９（２’、５’、６’−１□リクロ
ロー３７　、４　／−ジカルボギシフェニル）−６−ヒ
ドロキシ−３−イソキザンテノンであった。この化合物
はカルボキシル基の１つによｐＩｇＧ　にグリシン結合
基を介して結合した。けい覚剤／蛋白質のモル比は約７
．５であり、この溶液は約０．０３　ｍｆ／　／　ｍａ
ｌの濃度を有した。前に記載した評価は、本発明、実施
例７の消光剤及び抗１’ｑＧ　　に複合した市販のロー
ダミンインチオシアネートの両方について行った。下の
表はこれら二つの消光剤について観察された結果の比較
を示す。

２発光（ａｂｓ）、ｎｍ　　”　５５０　　　５５０消
光剤／蛋白質　　　　　　〜１．５　　　〜７（モル比
） Ｍａｘ、消光 ｗ／１：５抗体希釈物、係　６５−７０　９４２Ｇ 消光斉」によるバック　６−１０　　　６０Ｌ−９０け
い先側信号の％ （上記のけい先側化合物は１．フルオレセイン誘導体の
製造のために前に記載した方法で、４−メチルレゾルシ
ノール及び２，５．．６−ドリクロロー１．３．４−フ
ェニルトリカルボン酸無水ｉから製造した。ン 行われた次の評価はハプテン、モルフインに対するもの
であった。６−カルボキシフルオレセインＮＪｉＳエス
テルＩｒ１Ｏ３−１２’−アミノエチル）モルフインに
複合され、実施例３の化合物は抗モルフインに、実施例
６に記載のように染料／抗体比を変えて複合された。

モルフイン複合体からのけい光信号を抗モルフイン複合
体の濃度に対してプロットした。この評価混合物は８．
７５　ｎｇ７２．５５−のけい先側−モルフィン複合体
を含有した。抗モルフイン複合体を、Ｏ〜１２５μ７の
量で変化させ、消光剤対抗モルフインの比を変えて加え
た。評価混合物に対して緩衝液０．０１　Ｍ　ＰＯ，！
　　　０．１５　Ｍ　ＮａＣｌ　　及び２％ＰＥＧ６０
００を使用した。このフルオレセインは５０μ？　／Ｚ
５５ｍ／！の（蛋白質をベースとした）抗モルフインー
消光剤複合体の濃度でパーキｙ　＝エルーｖ−４，００
０（Ｐｅｒｋｉｎ＝Ｅ１ｍｅｒ１０００　）で測定した
。

Ｄ／Ｐ比１　　　　けい光信号２ ７．８　　　　　　、　　１１０ Ｉ　　Ｄ／Ｐ−消光剤／蛋白質モル比。

２　抗モルフインー消光剤複合体が存在しない場合の１
０００に基づく信号。

評価混合物にモルフインを加えることによシ、けい光が
強められたが、このことは消光効果の特異性を示してい
る。

消光剤として一般に使用されているローダミンと比較し
て、本消光剤は、消光剤として使用されるローダミン及
び同等の染料の欠点の多くを有しない。ローダミンは、
蛋白質と複合させた場合、２個の吸収極太を有し、この
２個の極太の比はラベリングの程度とともに変わる。効
果的な消光のためには、高いローダミン／抗体比が要求
され、これは不溶化をひきおこす。このことは望ましか
らざる可溶化剤、たとえばコール酸又はグリセリンの添
加を必要とする。

上記の結果から、本発明に従かう複合体を用いてローダ
ミンよりもはるかにかるいラベリングで、高い効率の消
光が達成されることは明らかである。

さらに、バックグラウンドへの寄与はローダミンについ
て観察されるそれよシもはるかに小さい。

従って、高い消光度及び消光剤によシ放出される光から
の最小量の干渉でもって効率的な評価を行なうことがで
きる。

この消光剤複合体は、フルオレセインに対する消光剤と
して従来教示され普通使用されているローダミンと比較
して、効率よく複合され評価媒体中に完全に溶解すると
いう点で、更に利点を有する。さらに、けい先側の放出
及び消光剤の吸収の間の優れた重なりのために、高効率
の転移が達成される。同時に、この化合物は容易に合成
され、蛋白質及びその他のりガントに簡単に複合する。

最後に、使用するラベリングの水準においては沈殿は観
察されず、ローダミンについて観察されるこの問題は排
除される。

上記の結果から、本発明の組成物、親のフルオレセイン
誘導体消光剤及び蛋白質とのそれらの複合体の両方は、
評価における使用に対してきわめて有利であることは明
らかである。該化合物は水溶性であり、容易に蛋白質と
複合させることができる。蛋白質、例えば抗体と複合さ
せ／（場合、それらけけい党則の消光が必要である免疫
評価における有用な試薬を提供する。本発明の消光剤（
住けい党則の高度に効率的な消光を提供し、一方、評価
媒体から観察される光の量にはほんのわずかの又は無視
しうる富力をするだけである。

本発明のけい元化合物はより長波長で吸収するので、評
価試料、例えば血清中でであう天然に存在するけい光物
質に対し、たとえあたえるとしても、はんの少しの励起
作用をあたえるにすぎない光で励起することができる。

該化合物は水溶Ｉ牛であり、蛋白質と複合させた場合、
関心のある分光的性質における重要な変化を受けない。

更に、該化合物は、大きなストークスシフト（Ｓｔｏｋ
ｅｓｓｈｒ：ｆｔ５）、鋭い吸収及び放出ピーク及び良
好な化学的及び熱的安定（律を有する。

１千Ｊ記の発明は明瞭な理解の目的で例示及び実施例に
よりかなり詳細に記載されているけれとも、特許請求の
範囲内である程度の変化及び修正を行ってもよいことは
明らかであろう。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 Ａは同一又は異っており、 Ｄは同一又は異っており、 Ａ又はＤのいずれかは、式−ＪＭＸ （ここでＪは原子番号８〜１６のカルコーゲンでありそ
   してＸは水素原子である）のエーテルであり、 ＪＭＸでない場合は、それらは水素、又は原子番号９〜
   ５３のハロゲンであり； Ｍは１〜８個の炭素原子の二価の炭化水素基であり； ＱＸＷはカルボン酸基に結合したリガンド、受容体又は
   支持体であり； Ｙは原子番号９〜５３のハロゲンであり、 Ｚは酸性アニオン基であり、 ｍは０〜３の整数であり、 ｎは０〜４の整数であり、 ここで、ｍ＋ｎは４よりも大きくない、 で表わされる化合物からなる複合体。 ２、−ＪＭＸが１〜３個の炭素原子のアルコキシである
   特許請求の範囲第１項に記載の複合体。 ３、Ａがアルコキシである特許請求の範囲第１項記載の
   複合体。 ４、Ｄがアルコキシである特許請求の範囲第２項記載の
   複合体。 ５、Ｗがポリ（アミノ酸）リガンドである特許請求の範
   囲第３又は４項記載の複合体。 ６、上記式の化合物が下記式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる特許請求の範囲第１項に記載の複合体。 ７、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 Ｗはポリ（アミノ酸）であり、ｎは１〜Ｗの分子量を５
   ００で除した数である、 で表わされる特許請求の範囲第１項に記載の複合体。 ８　▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 Ｗはポリ（アミノ酸）であり、ｎは１〜Ｗの分子量を５
   ００で除した数である、 で表わされる特許請求の範囲第１項に記載の複合体。 ９、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 Ｗはポリ（アミノ酸）であり、ｎは１〜Ｗの分子量を５
   ００で除した数である、 で表わされる特許請求の範囲第１項に記載の複合体。 １０、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 Ｗはポリ（アミノ酸）であり、ｎは１〜Ｗの分子量を５
   ００で除した数である、 で表わされる特許請求の範囲第１項に記載の複合体。 １１、化合物が下記式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる特許請求の範囲第１項に記載の複合体。 １２、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 Ｗはポリ（アミノ酸）であり、ｎは１〜Ｗの分子量を５
   ００で除した数である、 で表わされる特許請求の範囲第１項に記載の複合体。 １３、該ポリ（アミノ酸）が抗原である特許請求の範囲
   第７、８、９、１０及び１２項のいずれかに記載の複合
   体。 １４、該ポリ（アミノ酸）が抗体である特許請求の範囲
   第７、８、９、１０及び１２項のいずれかに記載の複合
   体。 １５、Ｗが少くとも１０，０００の分子量の巨大分子四
   支持体に結合したリガンドである特許請求の範囲第１項
   記載の複合体。 １６、アナライトの存在を決定するため検出しうる信号
   の発生において発けい光団又は電子エネルギー受容体を
   使用する競争的蛋白質結合評価を行なう方法において、
   特許請求の範囲第１項記載のＷがリガンド又は受容体で
   ある、特許請求の範囲第１、７、８、９、１０又は１２
   項のいずれかに記載の化合物を使用することを特徴とす
   る方法。