JPH01238600A - 抗癌性糖蛋白質の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、抗癌性糖蛋白質の製造法に関し、更に詳しく
は、癌の特異免疫療法を可能とする抗癌性糖蛋白質の製
造法に関する。

〔従来の技術およびその課題〕

本発明者は、かねてより癌（悪性腫瘍全般あるいはそれ
による疾病状態を指す語として広義に使用する）に対す
る宿主の免疫応答ならびに癌治僚への応用について種々
研究を重ねてきたが、その過程で宿主に免疫原として作
用し、癌に特異的な免疫応答を成立させる、免疫原性が
極めて高い糖鎖関連抗原を癌細胞膜成分から分離し、該
抗原が癌の治療及び予防に優れた効果を奏することを先
に見い出した〔特開昭５９−１４２０号、同５９−６７
２２４号、同５９−２２５１９号、同８０−７８９１８
号、同６０−２１４７３７号〕。

〔課題を解決するための手段〕

かかる背景技術において、本発明者は引き続き研究を重
ねた結果、癌細胞の膜成分に一定の処理を施せば、癌に
特異的な免疫応答を成立させる、免疫原性の極めて高い
糖蛋白質が得られることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、癌細胞の膜成分を還元処理し、次
いでメルカプト基修飾試薬を作用させることを特徴とす
る抗癌性糖蛋白質の製造法である。

本発明方法において、出発原料として用いられる癌細胞
の膜成分はいずれであっても良いが、その例としては、
癌細胞膜由来の糖鎖関連抗原ＴＣＡが挙げられる。この
ＴＣへのより具体的な例としては、■癌細胞膜成分から
単離され、かつ末端ガラクトース又は末端Ｎ−アセチル
ガラクトサミンと特異的に結合するレクチンと結合する
性質を有する糖鎖関連抗原（特開昭５９−１４２０号）
、■癌細胞膜成分から単離され、かつレクチンレセプタ
ー結合性抗体に対して結合性を有するｍ娘関連抗原（特
開昭５９−６７２２４号）、■癌細胞膜成分から単離さ
れ、かつ末端フコース糖鎖構造を有する糖鎖関連抗原（
特開昭６０−２１４７３７号）、およびこれらの熱変性
体（特開昭５９−２２５１１９号、同８０−７８９１８
号、同６０−２１４７３７号）等が挙げられる。

本発明方法における還元処理手段としては、蛋白質のジ
スルフィド結合の切断を目的とする通常の処理手段をい
ずれも採用できるが、還元剤を用いる方法、特にジチオ
トレイトール（以下、ｒＤＴＴＪと略す）、ジチオエリ
トリトール等を用いる方法が好ましい。

この還元処理は、癌細胞の膜成分を、これを変性させな
いような溶媒、例えば種々の緩衝液中に溶解ないし懸濁
させ、４〜４０ｔの温度、好ましくは室温で１〜２４時
間反応させることによりおこなわれる。還元剤を用いる
場合、その量は蛋白質中のジスルフィド結合に対し、２
当量以上、通常は過剰量とすることが好ましい。

上記工程により還元された癌細胞の膜成分はメルカプト
基修飾試薬（以下ｒＳＨ試薬」と略称する）によりその
メルカプト基が修飾される。

ＳＨ試薬としては、還元により切断されたジスルフィド
結合の再形成が起こらないように５１（基を修飾できれ
ば通常のＳＨ試薬をいずれも採用できるが、ヨード酢酸
、ヨードアセトアミド（以下、ｒＩＡＡＪと略す）、Ｎ
−エチルマレイミド等のアルキル化剤が特に好ましい。

この修飾反応は、癌細胞の膜成分が変性しない条件下、
例えば４〜４０℃、種々の緩衝液中で行なわれ、ＳＨ試
薬の使用量は、還元により生成したメルカプト基に対し
当量以上、通常は過剰量とすることが好ましい。また、
反応は、３０分〜１２時間程度おこなえば良い。

以上の如くして調製される抗癌性糖蛋白質は、更に必要
に応じて各種の物理化学的もしくは生化学的精製手段に
より採取することができる。このような精製手段として
は、例えば塩析法、ゲル濾過、限外濾過、液体クロマト
グラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、イオ
ン交換クロマトグラフィー等の各種のクロマトグラフィ
ー法、電気泳動法、クロマトフオーカシング法、抽出法
、遠心分離法、透析法、之等の組合せ等を例示すること
ができ、就中、ＰＮＡへの親和性を利用したアフィニテ
ィークロマトグラフィーを好ましいものとして挙げるこ
とができる。

本発明方法により製造される抗癌性糖蛋白質の一例とし
ては、以下の■〜■の性質を有するＪＩ−３６を挙げる
ことができる。

■　Ｇａ１ｌβ１−３ＧａＪＺＮＡｃ構造及びＧａ１ｌ
β１→４ＧＩ１．　ｃＮＡｃβ１−６（Ｇａ１ｌβ１−
３）　Ｇａｆｌ　ＮＡｃ構造の１鎖を有する ■　フェノール−硫酸法による中性糖含量、モルガンー
エルラン法によるアミノ糖含量及びローリ−法による蛋
白質含量から求めた糖蛋白比〔（中性糖量＋アミノ糖量
）／蛋白質量〕が、　１．３±０．３である ■　構成糖 ＧａＪＺ及びＧｆｌ　ｃＮＡｃを主成分とし、Ｆｕｃ　
。

Ｍａｎ　、　ＧａＪ：ｌ　ＮＡｃ及びＳｉａを含む■　
紫外線吸収スペクトル ２７０〜２８０　ｎｍに極大吸収を示す■　作用 癌に特異的な免疫応答を惹起する。

本明細書において採用する各種の略号による表示は、Ｉ
ＵＰＡＣ−１１１Ｂの推奨する乃至当該技術分野におい
て慣用される表示記号又は本明細書中において定義する
略号により表示するものとし、その例を下記に示す。

ＧａｆＬ　ニガラクトース ＧａｕＮＡｃ　：　Ｎ−アセチルガラクトサミンＧｆＬ
ｃＮＡｃ　：　Ｎ−アセチルグルコサミンＦｕｃ　　：
フコース Ｍａｎ　　：マンノース Ｓｉａ　　ニジアル酸 Ｆ）Ｉ−２：　Ｇａ１ｔβ１　→４（Ｆｕｃａ　１４３
）ＧｌｃＮＡｃ糖鎖をエピトープとするモノクロナル抗 体（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　（：ｈｅｍ、、　２５９．４８
８１−４６８５（１９８５））。

ＡＣＦＨ１８：　Ｇａｉβｌ−＋４（Ｆｕｃａ　１−＋
３）ＧＪ：ｔｃＮＡｃβ１→３Ｇａｎβ１−＋　４　（
Ｆｕｃ　ａ　１−＋　３）ＧｕｃＮＡｃβ１−＋３Ｇａ
ｆｌβ１−＋　４　（Ｆｕｃ　ａ　１→３）　Ｇｆｌ　
ｃＮＡｃｍ釦をエピトープとするモノクロナ ル抗体（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　２５９．４
８８１−４６８５　（１９８５１）。

ＦＨ−６：　５ｉａａ　２−３Ｇａｌβ１→４　（Ｆｕ
ｃ　ａ　１−＝　３）Ｇｆｔ　ｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌ
Ｌβ１−＋　４　（Ｆｕｃ　ａ　１−＋　３）ＧＪ２　
ｃＮＡｃ　′ｌｆＩ鎖をエピトープとするモノクロナル
抗体（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈａｍ、、２５９゜１０５
１１−１０５１７　（１９８４）　　）。

ＡＨ−６：　Ｆｕｃａ　１−２ＧａＪＺβ１−＋　４　
（Ｆｕｃ　ａ　１−＋　３）Ｇ　Ｉｔ　ｃＮＡｃｌｌ　
鎗をエピトープとするモノクロナル抗体（Ｊ、　Ｂｉｏ
ｌ、　Ｃｈｅｍ、、２５８゜１１７９３−１１７９７（
１９８３）　　）。

ＰＮＡ　　：ピーナツレクチン（ＡＲＡＣＨＩＳ　ＨＹ
ＰＯＧＡＥＡＡＧＧＬＩＩＴＩＮＩＮ）。

上記ＪＩ−３８を始め、本発明方法により調製される抗
癌性糖蛋白質は、糖鎖関連抗原ＴＣＡの場合と同様にし
て（例えば特開昭ｓ＋−１４２０号記載の方法）リンパ
球に感作せしめることにより、癌細胞に特異的な細胞障
害性リンパ球（キラーセル）を製造することができる。

〔発明の効果〕

本発明方法によれば、簡単な操作により安定性及び安全
性の高い抗癌性糖蛋白を得ることができる。

（実施例） 次に参考例、実施例及び試験例を挙げて本発明を説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。

参考例１　糖鎖関連抗原ＴＣＡの製造 −８０℃で凍結保存しであるヒト胃癌由来の癌細胞１０
０〜１２０ｇに０．ＯＩＭリン酸Ｍｉ衝生理食塩液ｐＨ
７，２（ＰＢＳ）約４８０ｍＪ２を加えて、氷水中ホモ
ジナイズする。この溶液をアングル型超遠心用遠沈管６
木に移し、１０００００ｇ　（ＲＰ−４２アングル型ロ
一ター３７０００ｒｐｍ４℃）１時間超遠心後、上清（
１ｓｔ、５ｕｐ）を傾斜法で別の容器に取り、−８０℃
で凍結保存する。沈澱（１ｓｔ、ｐｐｔ）を回収し重１
を量る。１　ｓｔ、ｐｐｔ約２０ｇに２％Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００を含む０．ＯＩＭ　トリス塩酸緩衝液ｐＨ７
，６（Ｅ−Ｂｕｆｆｅｒ）　１８０　　ｍｌＬを加えス
ターラーで５分間攪拌した後、氷水中ホモジナイズする
。この溶液をスイング型超遠心用遠沈管６本に穆し、８
００００ｇ　（ＲＰＳ　２７−２スイング型ロ一ター２
６０００ｒｐｍ　４℃）１時間３０分超遠心し、最上層
の脂肪をアスピレータ−で吸引除去した後、上滑（２ｎ
ｄ、５ｕｐ）を得る。別の１　ｓｔ、ｐｐｔ２０　ｇに
ついて同様の操作後２　ｎｄ、ｓｕｐを得る。沈澱（２
ｎｄ、ｐｐｔ）はまとめて−８０℃凍結保存しておく。

４℃コールドチャンバー内で、２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１
００を含むＥ−Ｂｕｆｆｅｒで平衡化したＰＮＡ−セフ
ァロースカラムに２回分の２　ｎｄ、ｓｕｐをペリスタ
ポンプを用いて約２４〜３６時間かけて添加する。その
後、２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含むＥ−Ｂｕｆｆｅ
ｒで１２〜２４時間かけて洗浄し、　０．５％Ｔｒｉｔ
ｏｎＸ−１００を含むＥ−Ｂｕｆｆｅｒて１２〜２４時
間かけて洗浄後、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含
むＥ−Ｂｕｆｆｅｒで１２〜２４時間かけて洗浄する。

０．２Ｍラクトース及び０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１０
０を含むＥ−Ｂｕｆｆｅｒ約７０ｍλ約７恥間かけて溶
出し、フラクションコレクターで１００滴ずつ分取する
。各フラクションの波長２８０ｎｍにおける吸光度を測
定し、蛋白のピークをまとめて、膜ン月過除菌し透析用
セロファンチューブに入れ、４℃コールドチャンバー内
で生理食塩水５ｆ１１２回４日間透析する。得られたｍ
釦関連抗原ＴＣＡは一８０℃で凍結保存する。

実施例１　抗癌性糖蛋白質の製造 蛋白量として３０ｍｇを含む上記で得たＩ！鏡関連抗原
ＴＣＡ約７５＋ｎｆＬに２．５Ｍ　トリス塩酸緩衝液２
０ｍｆｌを加え、更にドテシル硫酸ナトリウム（ＳＯ３
）を１ｇ加え溶解し、２５℃、１５分間超音波処理後、
これにＤＴＴ２００ｍｇを溶解した０、５Ｍ　トリス塩
酸緩衝液５　　ｍｆＬを加え、窒素置換し密閉して２５
℃で１２時間放置する。これにＩＡＡ　３００ｍｇを溶
解した０、５Ｍ　トリス塩酸緩衝液５　ｍｆｌを加え２
５℃で１〜２時間放置後、１０％ＴｒｉｔｏｎＸ−１０
０溶液を１　　ｍｆｌ加え、膜濾過除菌し室温で０．１
％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含むＰＢＳ　５℃に対して
３回３日間透析する。４℃コールドチャンバー内におい
て０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含むＰＢＳで平衡
化したＰＮ八−セファロースカラムにペリスタポンプを
用いて約１６〜２４時間かけて添加する。その後０．１
％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含むＰＢＳ約１ｆＬで４８
時間かけて洗浄し、更に０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０を含
むＰＢＳ約５００ｍｆｔで２４時間かけて洗浄する。そ
の後０，２Ｍラクトース及び０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０
を含むＰ、ＢＳ約７０ｍＪ２を用い８時間かけて溶出し
、フラクションコレクターで２００滴ずつ分取する。各
フラクションの波長２８０　ｎｍにおける吸光度を測定
し蛋白のピークをまとめ、膜濾過除菌し、透析用セロフ
ァンチューブにいれ、４℃コールドチャンバー内で０．
０１％Ｔｗｅｅｎ８０を含む生理食塩水５Ｉｌに対して
１２回４日間透析し、膜濾過除菌して抗癌性糖蛋白質を
得た。このものは、ＪＩ−３８と命名し、４℃に保存し
た。

試験例ｉｇＳ鎖構造解析 ＪＩ−３６を３Ｈ標識（ガラクトースオキシダーゼ−Ｎ
ａＢ３Ｈ４法）し、そのＳ鎖構造を、糖組成分析、メチ
ル化分析、過ヨウ素酸酸化、グリコシダーゼ消化及び還
元末端糖の同定により解析した結果、下記２つの’ｆｌ
ｔｍＢ構造を有することを確認した。

−Ｇａ１ｌ−β１−３ＧａＪｌＮＡｃ−−Ｇａ、Ｑβ１
−４ＧＪＺＣＮＡＣβ１−６（Ｇａ、Ｑβ１→３）Ｇａ
立　ＮＡｃ− 試験例２　糖蛋白比 実施例１と同様にして計４３０ットのＪＩ−３６を製造
し、その糖蛋白比を測定した。

中性糖含量はグルコースを標準物質としてフェノール−
硫酸法により、アミノ糖含量はＮ−アセチルグルコサミ
ンを標準物質としてモルガン一二ルソン（Ｍｏｒｇａｎ
−Ｅｌｓｏｎ）法によりそれぞれ測定した。蛋白質含量
はヒト血清アルブミンを標準物質としてローリ−（Ｌｏ
ｗｒｙ　）法により求めた。

４３０ツト・につき求めた糖蛋白比： 蛋白買置 は、　１．３±０．３（平均士櫃準偏差）であった。

試験例３Ｉ！組成 ４３０ツトのＪＩ−３６を用いて、クランプ（ｃｌａｍ
ｐ）　　らの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ
、＾ｃｔａ、。

２２２．３３９−３４７（１９７０）　）に準じて試料
をメタツリシス後、再びＮ−アセチル化を行い、トリメ
チルシリル誘導体とし、ガスクロマトグラフィー〔高率
社製ガスクロマトグラフ：　Ｇに−２Ｄ（ＰＦ）、高率
社製カラム：Ｉ＋ｉＣａｐ−ＣＢＰ−Ｍ−２５−０，２
５φ０．２ｍｍｘ　２５ｃｍ）により分析した。Ｆｕｃ
　、　Ｍａｎ　。

Ｇａｕ　、　Ｇａｕ　ＮＡｃ　１ＧＪＩ　ｃＮＡｃ及び
Ｓｉａにつき、分析した４３０ツトの結果を下記第１表
に示す。

第１表 試験例４　紫外吸収スペクトル ３０ツトのＪｌ−３８を用いて、２００　ｎｍから６０
０ｎｍの吸収スペクトルを測定（日立製作新製、分光光
度計２２０Ａ）Ｌ／た。

その結果、３０ツトとも２７０〜２８０　ｎｍに極大吸
収を示した。

試験例５　ディスクポリアクリルアミド電気泳動（Ｄｉ
ｓｃ−ＰＡＧＥ） ２０ツトのＪｌ−３６を用いて、デービス（Ｂ、Ｊ。

Ｄａｖｉｓ）らの方法（Ａｎｎ、Ｎ、Ｙ、Ａｃａｄ、Ｓ
ｃｉ、、　１２１，４０４（１９６４））に準じてＤｉ
ｓｃ−ＰＡＧＥを行った。即ち、試料（蛋白染色の場合
４０ｕｇ蛋白量、糖染色の場合４０μｇ糖量）３．５％
ポリアクリルアミドゲルにかけ、１２５ｖ定電圧で追跡
色素がゲル下端にくるまで泳動した。蛋白染色はクマシ
ブリリアントブル（ＣＢＢ）　、糖染色は過ヨウ素酸シ
ッフ（ＰへＳ）によった。両染色及び再ロフトにおいて
、ＪＩ’−３６は、Ｒｆｏ、３以下に泳動された。

試験例６　ポリアクリルアミド電気泳動（ＰＡＧＥ）３
０ツトのＪＩ−３６を用いて、ラスキイ（Ｍ。

Ｌａ５ｋｙ）らの方法（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉ
ｓ、１９５−２１０＜１９７８）　）に準じてＰＡＧＥ
を行フた。

即ち、試料（蛋白染色の場合は４０μｇ蛋白量、糖染色
の場合は４０μｇ糖量）を、２〜１６％ポリアミルアミ
ドグラジェントゲル（ファルマシア社）にかけ、１５０
■定電圧で１６時間（２４００Ｖｈ）泳動した。蛋白及
び糖染色は、上記試験例５に準じた。各ロットとも両染
色において、既存の高分子量標準蛋白質では測定不可能
な領域に泳動された（チログロブリン：６６９０００、
以上の領域）。

試験例７　溶解性 ３０ツトのＪＩ−３６を用いて溶解性を試験した。即ち
、試料を生食及びＴｗａｅｎ８０１００μｇ／ｒｎｌを
含む生食で２０倍希釈して、Ｔｗｅｅｎ８０の最終濃度
を５　μｇ　７ｍｆＬ及び１００μｇ／ａｎの２種類に
調整した。それらの一部を対照溶液とし、残りを２８０
００ｒｐｍ　（１０万Ｇ）にて２時間超遠心に処した。

遠心後、各々の上清の力価測定を行った。

尚、力価は、ＰＮＡを被覆（固相化）したマイクロプレ
ートを調製し、試料溶液を加えてインキュベート後、ペ
ルオキシダーゼ標識ＰＮＡと反応させる、エンザイムー
レクチンーアッセイ法により測定した、試料のＰＮＡ結
合活性に基づいて決定した。

１μｇ　／ｍｊ２のアシアログリコホリン溶液を標準品
として、そのＰＮＡ結合活性を３０００単位／ｍａｌと
設定し、試料の力価（単位／ｍ１）を算出した。結果を
第２表に示す。

第２表より各ロットとも高い溶解性が確認された。

試験例８　抗体との反応性 ４３０ツトのＪｌ−３６を用いて、これをＥＩＡプレー
ト（Ｇｒｅｉロｅｒ社９６ウエル平底タイタープレート
、Ｎｏ、６５５１Ｑｉ　）の各ウェルに固相化し、モノ
クロナル抗体を反応させた後、結合した抗体を、パーオ
キシダーゼ標識抗−マウスＩ＆Ｍ抗体（ＣＡＰＤＥＬ社
）を用いて測定し、ＪＩ−３８と各モノクロナル抗体と
の反応性を試験した。

その結果、４３０ツト全てにおいて、ＪＩ−３６はモノ
クロナル抗体ＦＨ−２、ＡｃＦｏ−ｘａ　、ＦＨ−ａ、
八）！−６と反応性を有することが確認された。

試験例９　凝集性 ＪＩ−３６を用いて、これを凍結融解処理に５回付した
後、ゲル濾過（ＴＳＫ　Ｇ５０００　ＰＷＸＬ、東洋曹
達工業製）に付し、蛋白吸収及び前記力価により、溶出
パターンを検出したが、上記処理前後の溶出パターンに
変化は認められなかった。

また、上記処理前後におけるＪｌ−３６の生物活性（特
開昭５９−１４２０号の試験例７に準じて行ったキラー
セルの誘導及び細胞障害活性の測定による）においても
低下は認めなかった。更に、上記処理前後に招けるＪＩ
−３６の粒子径を光散乱光度計分析（ＤＬＳ−７００、
大塚電子■製〕により測定した場合も、平均粒子径の変
化に有意差はなかった。

試験例１０　　Ｊｌ−３８による癌細胞障害性リンパ球
（キラーセル）の誘導 リンパ球は常法（免疫実験操作法、Ｘ巻、Ｐ、３３０５
−３３１６　、日本免疫学会編、等〕に従い調製した。

即ち、健常人の末梢血にシリカ（にＡＣ−２ｎ　ＪＩＭ
ＲＯ製）を加え童女させた後、密度勾配遠心法により非
負食性リンパ球画分を得、カイ。ロンウールカラムを通
して付着性細胞を除去した後、ラージグラニュラーリン
ホサイト（Ｌａｒｇｅ　Ｇｒａｎｕｌａｒ　Ｌｙｍｐｈ
ｏｃｙｔｅｓ：　ＬＧＬ　）が濃縮された両分（密度勾
配遠心法による低比重画分）を得た。

このＬＧＬ画分に、ＪＩ−３６を終濃度が０単位／ｍ１
（コントロール）、２単位／ｍＩＬ、２０単位／ｍ℃又
は２００車位／ｒｎ　１１となる様に加えて、６０分間
常法により培養してキラーセル（エフェクター細胞：Ｅ
）を誘導した。

誘導されたＥの癌細胞障害活性（キラー活性）は、特開
昭５９−１４２０号に記載の方法に準じて求めた。

尚、標的細胞（Ｔ）はＰＮＡ結合糖鎖陽性細胞としてバ
ーキットリンフオーマ由来細胞柱ＢＴ−１、及びＰＮＡ
結合結合糖鎖性陽性細胞てＴＮｉ胞白血病由来細胞柱Ｍ
ＯＬＴ−４を用い、Ｅ／Ｔ比を１０：１、Ｅ／Ｔ反応時
間を１４〜１８時間と設定して行った。

キラー活性は、フローサイトメトリーによるサイトグラ
ム画分（ＥＰＩＣ５Ｃ：　Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｃｏｒｐ、
。

Ｘ軸：側方散乱光、Ｙ軸：前方散乱光）により計測した
Ｔの消失率（％）により表示した〔第１９回日本臨床検
査自動化学会合誌、第１２巻、Ｐ、５７５　　ｒフロー
サイトメトリーにょるＮＫ活、性測定Ｊ　１９８７年〕
。

結果を下記第３表に示す。

第３表 キラー活性（％）：平均±Ｓ、Ｄ、（ｎ・７）第３表よ
り、本発明のＪＩ−３６によりキラーセルが良好に誘導
されることが判る。

尚、ＢＴ−１における２０−！ＩＬ位１ｍＡ群及びＭＯ
ＬＴ−４における２単位１ｍ１１群ならびに２０４位／
１１１４２群は、ウィルコクラン符号付順位検定により
有意差（いずれもＰ＜０．０５）を認めた。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、癌細胞の膜成分を還元処理し、次いでメルカプト基
   修飾試薬を作用させることを特徴とする抗癌性糖蛋白質
   の製造法。 ２、癌細胞の膜成分が糖鎖関連抗原ＴＣＡである請求項
   第１項記載の抗癌性糖蛋白質の製造法。 ３、還元処理を還元剤によりおこなう請求項第１項記載
   の抗癌性糖蛋白質の製造法。 ４、メルカプト基修飾試薬がヨード酢酸、ヨードアセト
   アミド及びＮ−エチルマレイミドから選ばれたものであ
   る請求項第１項記載の抗癌性糖蛋白質の製造法。 ５、抗癌性糖蛋白質がその構成糖としてＧａｌ及びＧｌ
   ｃＮＡｃを主成分とし、Ｆｕｃ、Ｍａｎ、ＧａｌＮＡｃ
   及びＳｉａを含むものである請求項第１項記載の抗癌性
   糖蛋白質の製造法。