JPH01199915A - ウイルス性疾患処置剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ この発明は、ウィルスによる疾患の予防、治療等を含め
た処置に有用な医薬（動物薬を含む）に関するものであ
る。

［要約］ この発明は、ウィルス感染細胞から非感染細胞への細胞
融合による細胞間感染に対する阻害作用および／または
ウィルスの標的細胞への結合に対する阻害作用をもたな
い抗ウィルス剤と、細胞融合阻害作用および／またはウ
ィルス結合阻害作用をもつ化合物との組合わせを有効成
分として含有する医薬を提供するものである。上記組合
わせにより相乗作用が得られ、その結果抗ウイルス効果
の増大あるいは抗ウィルス剤の用量の低減及び副作用の
軽減が可能となる。

［背景技術および発明の経緯］ ウィルス性疾患に対する化学療法剤としては、細菌性疾
患に対する化学療法剤に比べ奏効するものがほとんどな
かった。インビトロでウィルスに対して有効なものでも
、生体に投与した場合に副作用が大きなことが多く、実
用可能な水準に達したものでも副作用のために使用が制
限を受けることが多い。例えば、近年アラビノジルアデ
ニン（アラＡ）やアシクロビルがヘルペスウィルス群に
有効なことが知られ、最近アジドデミジン（ＡＺＴ）が
エイズ（後天性免疫不全症候群）関連ウィルス（すなわ
ち、ひと免疫不全ウィルスＨＩＶ）に効果を有すること
が報告されているが、これらの薬剤も、例えば悪心、お
う吐、下痢、発疹、貧血、投与場所における静脈炎等の
副作用を有するため、投与を中断せざるを得ないことが
ある。そこで、副作用の少ない抗ウィルス剤の開発が望
まれると同時に、より成功の可能性が高いものとして、
既存の抗ウィルス剤の副作用を何らかの手段で低減させ
ることも、重要な研究主題となっている。

ウィルスの増殖は、宿主細胞に対する付着、侵入、アン
コーティング、転写、複製、粒子の組立て、発芽または
細胞融解による放出の過程をとることが知られており、
抗ウィルス剤は上記過程の何れかを阻害するとされてい
る。この発明者は、先に多糖類の硫酸エステルまたはム
コ多糖類もしくはその硫酸化物（以下、これらを硫酸多
糖と総称することがある）がレトロウィルスに対して単
独でレトロウィルス由来の逆転写酵素活性を阻害するこ
と及び細胞へのこのウィルスの感染及び増殖を抑制する
ことを見出した（特願昭６２−１５５７４号）。

レトロウィルスの１つであるエイズウィルスの増殖経路
の１つとして、エイズ感染細胞が非感染細胞と融合を起
し、これによってエイズウィルスが直接非感染細胞に侵
入することが知られているが、この発明者らは上記硫酸
多糖の作用機序を研究中、上記硫酸多糖がＨＩＶの標的
細胞への結合を阻止すること、）ＩＩＶ感染細胞と非感
染細胞の融合によるＩＩ　Ｉ　Ｖの細胞間直接感染を阻
止することによってエイズウィルスの増殖を抑制する能
力を有することを見出した。そして、この硫酸多糖が有
するウィルスの標的細胞への結合阻止、感染細胞と非感
染細胞の融合阻止等のエイズウィルス増殖抑制機序は、
従来の抗ウィルス剤が有する逆転写酵素活性の阻害作用
と異なるものであることから、この併用により２０−５
０倍という大きな相乗的抗ウイルス効果が得られること
を見出した。

さらに、従来の、ウィルス感染細胞から非感染細胞への
細胞融合による細胞間感染に対する阻害作用および／ま
たはウィルスの標的細胞への結合に対する阻害作用をも
たない抗ウィルス剤と、細胞融合阻害作用および／また
はウィルス結合阻害作用を有する物質の組合わせである
限り、種々の抗ウィルス剤と物質を用いても普遍的に相
乗的抗ウィルス作用が得られること、すなわちこの組合
せが相乗的抗ウィルス作用を生み出す機序となっている
ことを見出した。

この発明は、上記のような知見に基づいてなされたもの
である。

［先行技術］ 抗ウィルス剤については、カーク・オスマー・エンサイ
クロペディア・オブ・ケミカル・テクノロジー（Ｋ　ｉ
ｒｋ　−Ｏｔｈｍｅｒ　　Ｅ　Ｎ　ＣＹ　ＣＬ　ＯＰ　
Ｅ　ＤＩＡ　　ＯＦ　　ＣＨＥＭＩＣＡＬ　　ＴＥ（、
ＨＮＯＬＯＧＹ）５巻５４２−５５２頁に総合的な記載
がある。

多糖類の硫酸エステルのうち、低分子量のデキストラン
硫酸は、抗高脂血剤または抗動脈硬化剤として市販され
ている。また、比較的高分子量のデキストラン硫酸はヘ
ルペスウィルスに対して抑制作用を有することが知られ
ている（ヨーロッパ特許公開第００６６３７９号）。し
かし、ヘルペスウィルスはＤＮＡウィルスであるから、
ＤＮＡの合成を全面的に逆転写酵素に頼るレトロウィル
スとは増殖機序が全く異なっている。したがって、ヘル
ペスウィルスに対して効果があることはレトロウィルス
に対しても有効であることを意味するものではない。さ
らに、低分子量のデキストラン硫酸（分子ｆｆ１ｌｏ０
００以下）はヘルペスウィルスにほとんど無効であるこ
とが知られている。

ムコ多糖類もしくはその硫酸化物のうち、コンドロイチ
ン硫酸は、感音性難聴、神経痛、腰痛、慢性腎炎などに
対する治療及び点眼薬として市販されている。また、ケ
ラタン硫酸は軟骨から、ティクロン酸はバヂルス・ズブ
チリス（ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂＬｉｌｉｓ）の細胞壁
から、ヒアルロン酸はさめの皮、くじらの軟骨またはひ
との血清から、ヘパラン硫酸はうしの肝臓または肺臓か
ら、キチンは節足動物または真菌、酵母からそれぞれ得
られることが知られ、コンドロイチン硫酸の硫酸化物の
製造法は特公昭４６−９５７０号に記載されている。

ヘパリンは、インビトロで種々の酵素、例えばフィトヘ
マグルヂニン刺激ひとリンパ球のＤＮＡポリメラーゼお
よびさる肉腫ウィルス（ｓｉｍｉａｎ　　ｓａｒｃｏｍ
ａ　　ｖｉｒｕｓ）の逆転写酵素を阻止することが知ら
れている［カンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　　Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ）　３８巻２４０１−２４０７頁コが、細
胞レベルでレトロウィルス感染を阻害するか否かは知ら
れていない。

［発明の構成］ この発明は、（Ａ）ウィルス感染細胞から非感染細胞へ
の細胞融合による細胞間感染に対する阻害作用および／
またはウィルスへの標的細胞への結合に対する阻害作用
をもたない抗ウィルス剤と、（Ｂ）細胞融合阻害作用お
よび／またはウィルス結゛　合阻害作用をもつ化合物と
を組合わせてなる、ウィルス性疾患処置剤を提供するも
のである。

ここにいう処置には、予防（すなわち感染阻止）、維持
（すなわちキャリアの発病の阻止および症状の悪化防止
）、軽減（すなわち症状の改善）および治療を含めたあ
らゆる管理が含まれるものとする。

この発明はまた、処置を必要とする対象（動物またはひ
と）にこの発明の処置剤の有効量を投与することからな
る、ウィルス性疾患の処置法を提供するものである。

この発明の処置剤が対象とするウィルス性疾患には、ポ
ックスウィルス科（Ｐ　ｏｘｖｉｒｉｄａｅ）（例えば
痘そう、うさぎ痘、うし痘、ぶた痘、うま痘、にわとり
痘）、ヘルペスウィルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａ
ｅ）（例えばヘルペス・シンプレックス（ｈｅｒｐｅｓ
　　ｓｙｍｐｌｅｘ）ウィルス１または２型、ヘルペス
・シスター（ｈｅｒｐｅｓ　　ｚｏｓｔｅｒ）ウィルス
、サイトメガロウィルス（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒ
ｕｓ））、アデノウィルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａ
ｅ）、オルソミクソウィルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘ。

ｖｉｒｉｄａｅ）（例えばインフルエンザウィルス（ｉ
ｎ「１ｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ））、パラミクソウィルス
科（Ｐ　ａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばパラ
インフルエンザウィルス（ｐａｒａｉｎＮｕｅｎｚａ　
　ｖｉｒｕｓ）、ムンプスウィルス（ｍｕｍｐｓ　　ｖ
ｉｒｕｓ）、ＲＳウィルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　
　５ｙｎｃｙｔｉａｌｖｉｒｕｓ）、麻疹ウィルス（＋
＋＋ｅａｓｌｅｓ　　ｖｉｒｕｓ））、ラブドウィルス
科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば狂犬病ウィ
ルス（ｒｈａｖｄｏ　　ｖｉｒｕｓ））、　ピコルナウ
ィルス科（Ｐ　１ｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば
ポリオウィルス（ｐ。

１ｉｏ　　ｖｉｒｕｓ）、コクサラキーウィルス（ｃｏ
ｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ）、エコーウィルス（ｅｃｈ
ｏｖｉｒｕｓ）、肝炎ウィルス（ｂｅｐａｔｉｔｉｓ　
　ｖｉｒｕｓ）、ライノウィルス（ｒｈｉｎｏｖｉｒｕ
ｓ））、コロナウィルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａ
ｅ）、パルボウイルス科（Ｐ　ａｒｖｏｖｌｒｉｄａｅ
）、レオウィルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅまたはデイ
プロルウイルス科）、トガウィルス科（Ｔ　ｏｇａｖｉ
ｒｉｄａｅＸ例えば日本脳炎（ＪＥ）ウィルス）、風疹
ウィルス（ｒｕｂｅｌｌａ　　ｖｉｒｕｓ））、および
レトロウィルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）（例え
ば、ＨＩＶ類（ＨＴＩ、ｖ−ｍ、ＨＴＬＶ−ＩＶ、ＬＡ
Ｖ、　ＡＲＶ等）、ひつじ脱髄性神経炎ウィルス、うま
伝染性貧血症ウィルス、とり白血病ウィルス、とり肉腫
ウィルス、とり細網肉皮腫症ウィルス、マウス乳がんウ
ィルス、マウス白血病ウィルス、マウス肉腫ウィルス、
モルモットタイプＣウィルス、ハムスタータイプＣウィ
ルス、ラット白血病ウィルス、ねこ白血病ウィルス、ね
こ肉腫ウィルス、ねこタイプＣウィルス、ひつじ白血病
ウィルス、うし白血病ウィルス、ぶたタイプＣウィルス
、さる白血病ウィルス、メイソン・フイツアーウイルス
（Ｍａｓｏｎ　−Ｐ　ｒ　１ｚｅｒｖｉｒｕｓ）、さる
肉腫ウィルス、さるＴ６リンパ球し好性ウィルス、ひひ
タイプＣウィルス、ひと成人Ｔ細胞白血病ウィルＸ（Ｈ
ＴＬＶ−１、ＨＴ　Ｌ　Ｖ−ＩＩ）、ひと川崎病ウィル
ス等によって起こる疾患が含まれるが、重要なのはレト
ロウィルスによるものであり、最も重要なのはエイズ、
持続性−般リンパ腺症（ＰＧＬ）、エイズ関連コンプレ
ックス（ＡＲＣ）、リンホアデノパシー症候群（ＬＡＳ
）、及びひと成人Ｔ細胞白血病である。

この発明で使用するウィルス感染細胞から非感染細胞へ
の細胞融合による細胞間感染に対する阻害作用および／
またはウィルスの標的細胞への結合に対する阻害作用を
もたない抗ウィルス剤としては、上記細胞間感染に対し
て阻害作用をもたないかあるいはウィルス結合に対して
阻害作用をもたない抗ウィルス剤であれば何れも用いら
れるが、核酸系抗ウィルス剤「例えば３°−アジド−３
°−デオキシチミジン（アジドチミジンまたはＡＺＴ）
、２′，３′−ジデオキシヌクレオチド類（２′，３′
−ジデオキシ−アデノシン、−グアノシン、−イノシン
、−シチジンまたはチミジン）、リバビリン、イソプリ
ノシン、アシクロビル、アラＡ１アラＴ。

アラＣ１ヨードデオキシウリジン（ＩＤＵ）、ブロモビ
ニルデオキシウリジン］、フルオロヨードアラシトシン
、２゛−アミノ−２゛−デオキシリボフラノシルアデニ
ン、トリフルリジン、アシクロビル誘導体（デオキシ−
、グリシル−またはヨード−アシクロビル、ジヒドロキ
シプロポキシメチルグアニン、ジヒドロキシブチルグア
ニン）、クロエチルデオキシウリジン、トヨカマイシン
、ピュロマイシン等］、ペプチド系抗ウィルス剤［例え
ばスラミン、ジスタマイシンＡ１アクチノマイシンＤ等
］、アンサマイシン系ウィルス剤［例えばアンサマイシ
ン、リファマイシン、リファンピシン、ジメチルベンジ
ルリファンピシン、ストレプトバリシンＳ等コ、ポリア
ニオン系抗ウィルス剤［例えばＨＰＡ−２３（ＮａＳｂ
ｔ、Ｗ！、０．）等］、チオセミカルバチド系抗ウィル
ス剤（イムチオール、イサチンーベーターチオセミカル
バゾン（ＩＢＴ）、マルボラン等］、りん酸系抗ウィル
ス剤［例えばホスカルネット等］。アマンタジン系抗ウ
ィルス剤［例えばアマンタジン、リマンタジン、Ｎｏ−
メチルアダマンタン−スピロ−３°−ピロリジン塩酸塩
等］、内因性抗ウィルス剤［例えばインターフェロン類
、インターロイキン類、ノイロトロビン等］、配糖体系
抗ウィルス剤［例えばグリチルリチン等］および脂質系
抗ウィルス剤［例えばＡ　Ｌ　７２１等コが含まれる。

上記抗ウィルス剤のうち、逆転写酵素阻害作用と抗ＨＩ
　Ｖ作用を有する抗ウィルス剤（ＡＺＴ。

２′，３′−ジデオキシヌクレオチド、スラミン、アン
サマイシン、ＨＰＡ−２３、ホスカルネット）および上
記阻害作用はないが抗ＨＩＶ作用を有するその他のウィ
ルス剤（リバビリン、α−１β−１γ−インターフェロ
ン、ＡＬ７２１、アンプリゲン）が好ましい。

この発明で使用する細胞融合阻害作用および／またはウ
ィルス結合阻害作用をもつ化合物には、天然または合成
の少糖類もしくは多糖類であって、糖構成炭素原子上に
低分子量の連結基を介して少なくとも１個のＳ−オキソ
酸基が結合しているものが含まれる。これには、天然品
と合成品が含まれる。天然の語は、少糖類または多糖類
が、植物、微生物または動物のような天然資源から抽出
等の手段により得られることを意味する。合成の語は少
糖類または多糖類が、例えばＳ−オキソ酸基を有するか
または有しない天然もしくは非天然（合成）少糖類また
は多糖類にＳ−オキソ酸基を導入することにより合成的
に得られることを意味する。

少糖類の語は、互いに結合する２〜約９個の単糖類を含
む炭水化物を意味する。例えば少糖類が３個の単糖類か
らなる場合、そのうち！、２または３個が少なくとも１
個のＳ−オキソ酸基を有し得る。

多糖類の語は、互いに結合する約１０個以上の単糖類を
含む炭水化物を意味する。構成単糖類の少なくとも１個
、小部分、大部分または全部が、少なくとも１個で通常
４個以下のＳ−オキソ酸基を存し得る。

上記少糖類または多糖類は一部のＯＨのＨが低級アルキ
ル（例えば、メチル）、低級アシル（例えば、アセチル
）等の簡単な基で置換されていてもよい。また、これら
の基を介してさらにＳ−オキソ酸基を有していてもよい
。

Ｓ−オキソ酸基には、スルホ基（−９ＯａＨ）およびヒ
ドロキシスルフィニル基（−ＳＯ・０Ｉ−ｒ）が含まれ
る。好ましいのはスルホ基である。

糖構成炭素原子の語は、小糖類または多糖類に含まれる
単糖類のテトラヒドロフラン環またはテトラヒドロピラ
ン環を構成する炭素原子を意味する。

低分子量の連結基の語は、オキシ（−０−）、イミノ（
−ＮＨ−）、チオ（−Ｓ−）、メチレン＜−ＣＨ２−）
、エチリデン（−ＣＨ（ＣＩｆ３）−）等を含む。

低分子量の語は、その基が約１４〜約３２の分子量を有
することを意味する。好ましい連結基はオキシおよびイ
ミノである。

この発明で用いる少糖類または多糖類には、植物もしく
は微生物から得られた少なくとも１個の硫酸水素エステ
ル基（−０−ＳＯ，Ｈ）を有する天然多糖類、または植
物もしくは微生物から得られた多糖類を硫酸エステル化
して生じた少なくとも１個の硫酸水素エステル基（Ｏ５
０３Ｈ）を有する合成多糖類が含まれる。

そのうち好ましいものは、非アミノ単ｖｉ（酸を含む）
をくり返し単位とする多糖類の硫酸エステルであるが、
微量の窒素を含有する場合も含まれる。くり返し単位の
非アミノ糖としては、キシロース、アラビノース、ラム
ノース、フコース、グルコース、ガラクトース、グルク
ロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸等が含まれる。

天然に産生される多糖類としては、カラゲニン（すぎの
り、やはずつのまた等から得られたガラクタン硫酸エス
テル）およびフコイジン（こんぶ属の褐藻から得られる
ポリフコース硫酸エステル）が含まれる。

カラゲニンには、に−カラゲニン、λ−カラゲニン、ｌ
−カラゲニン等硫酸基含量の異なるものが含まれる。合
成的に得られるものとしては、多糖類、例えばでんぷん
およびその部分加水分解物、ロイコノストック属（Ｌ　
ｅｕｃｏｎｓ　ｔｏｃ）が生産するデキストランおよび
その部分加水分解物（通常分子ｆｌｔ５００−２００万
、普通２０００−３０万、好ましくは２０００−１万、
最適には３０００−８０００）、ペント−サン、グリコ
ゲン、ペクチン、セルロース、植物粘液質（アラビアゴ
ム、トラガカントゴム等）、植物粘質物（おくら、アロ
エ、じゅんさい等から得られるもの）、海藻および淡水
産藻類の粘液質（アルギン酸、ラミナリン等）、微生物
由来多糖類（レンチアン、プルラン、マンナン、キシラ
ンなど）または合成多糖を硫酸化して得られるものが含
まれる。これらの中には公知のもの（デキストラン硫酸
、ヨーロッパ特許公開第００６６３７９号参照）および
新規なものがある。新規なものは、公知のものと同様に
して製造される。

製造法の一例を示すと次の通りである。

クロルスルホン酸を８−ＩＯ倍８の乾燥ピリジンに冷却
しながら滴下する。これに少量のポルムアミドとデキス
トラン（クロルスルホン酸の約４分の１重量）を加え、
撹拌しなから５５−６５℃に加熱する。数時間撹拌後、
溶媒を留去し、残留物を例えば再沈澱、透析等により精
製する。合成多糖中、硫酸エステル基を有する多糖類を
さらに硫酸化して得られたものは、ポリ硫酸の語で表わ
す。

また、この発明で用いる少糖類または多糖類には、動物
から得られた少なくとも１個のスルホ基（−９Ｏ，Ｈ）
を有する天然多糖類、または動物から得られた多糖類を
硫酸エステル化して生じた少なくとも１個のスルホ基、
（５ＯａＨ）を有する合成多糖類が含まれる。

そのうち好ましいものは、アミノ単糖（Ｎ−アシル化さ
れたものおよび硫酸化物（−０−ＳＯ，Ｈ又は−ＮＨＳ
ＯｆｆＨ）を含む）を基本的くり返し単位とするムコ多
糖類であって、さらに単糖類またはそれから誘導される
酸を別の基本的くり返し単位として含有し得るものであ
る。くり返し単位のアミノ酸またはそのＮ−アシル化物
（好ましくはＮ−アセデル化物）としては、グルコサミ
ン、ガラクトサミン、これらのＮ−アセデル化物および
上記化合物の硫酸化物または部分加水分解物が含まれる
。また、単糖類または酸（好ましくはへキスロン酸）と
しては、グルコース、ガラクトース、グルクロン酸、イ
ズロン酸等が含まれる。このようなくり返し単位を含む
ムコ多糖類には、ヘパリン、ケラタン硫酸、コンドロイ
チン−４−硫酸、コンドロイチン−６−硫酸、デルマタ
ン硫酸、ティクロン酸、ヒアルロン酸、ヘパリチン硫酸
、キチン、キトサンおよびこれらの部分加水分解物、修
飾（例えば部分アシル化）物、並びに上記のようなくり
返し単位を含む合成多糖類が含まれる。

また、ムコ多糖類ポリ硫酸は、上記ムコ多糖類をさらに
硫酸化したものである。硫酸化は、例えば特公昭４Ｂ−
９５７０号公報記載の方法によって行うことができるが
、一般的にはムコ多糖類に濃硫酸またはクロルスルポン
酸のような反応性誘導体を反応させることによって行な
われる。

この反応は、通常無溶媒下または溶媒中、低温で行なわ
れる。反応生成物は、常法、例えば中和、濃縮、沈澱、
再沈澱、クロマトグラフィー等によって単離される。

ムコリピドおよびムコ蛋白質は、ムコ多糖類と脂質また
は蛋白質との複合多糖類である。またこれらの硫酸化物
も上記に準じて合成される。

医薬的に許容される塩の語は、元の化合物の生物活性を
有し、投与濃度において不都合な毒性を示さない塩を意
味する。このような塩としては、ナトリウム塩、カリウ
ム塩、アルミニウム塩等の無機塩基との塩、およびジェ
タノールアミン塩、アミノ酸塩基との有機塩基との塩が
含まれる。これらの塩は、常法により対応する遊離酸か
ら製造される。これらのムコ多糖類もしくはその硫酸化
物およびその塩は、単独で使用されるほか、亜鉛、アル
ミニウムなどの金属塩との混合物としても使用できる。

抗ウイルス抗体は、ウィルス抗原（例えば表面抗原）ま
たは抗原決定基を有するフラクションをを椎動物（好ま
しくは哺乳類）に投与して免疫反応を起こさせた後、動
物の体液から得られるかあるいは、動物細胞を用いてモ
ノクロナール抗体として得られる。

上記抗ウィルス剤と細胞融合阻害作用およｑ／またはウ
ィルス結合阻害作用をもつ化合物は、必ずしも完全に同
時に投与する必要はない。しかし、これらは原則として
同日に投与するものとし、できるだけ近接した時間に投
与するのが望ましい。

勿論、両者を組み合わせ製剤の形で同時投与するか、ま
たは同一の製剤に含ませてもよい。

この発明において、用いる上記抗ウィルス剤と細胞融合
阻害作用および／またはウィルス結合阻害作用をもつ化
合物の組合せについては特に限定されるものではなく、
患者の状態、疾患の種類等により組合せる上記抗ウィル
ス剤の種類と細胞融合阻害作用および／またはウィルス
結合阻害作用をもつ化合物の種類を考慮すればよい。例
えば、上記抗ウィルス剤として３゛−アジド−３°−デ
オキシチミジンとアシクロビルを用い、細胞融合阻害作
用および／またはウィルス結合阻害作用をもつ化合物と
してデキストラン硫酸ナトリウムを用いる、組合せ等。

抗ウィルス剤の投与量は、単独で投与したとき体内にお
いて抗ウィルス活性を示す濃度を生ずるに充分な量であ
ってよいが、この発明によると相乗効果がもたらされる
ので、上記濃度を生ずる量より少ない量、例えば２分の
１〜２００分の１１１０分の１〜１００分の１１または
２０分の１〜５０分の１でよい場合がある。具体的な投
与量は、個々の製剤により大きく変わり、また患者の状
態、疾患の種類、組合わせる相手の細胞融合阻害作用お
よび／またはウィルス結合阻害作用をもつ化合物の種類
と量により異なる。例えばアマンタジンで１５〜１５０
ｍｇ（１日総量）、メチサゾンで２０〜４００ｍｇ／ｋ
ｇである。

細胞融合阻害作用および／またはウィルス結合阻害作用
をもつ化合物は、抗ウィルス活性を有するものと有しな
いものを包含する。抗ウィルス活性を有する細胞融合阻
害作用および／またはウィルス結合阻害作用をもつ化合
物（前に例示したものの大部分）の投与量は、単独で投
与したとき体内において抗ウィルス活性を示す濃度を生
ずるに充分な量であってよいが、この発明によると相乗
効果がもたらされるので、上記濃度を生ずる量より少な
い量、例えば２分の１〜５００分の１．５分の１〜２０
０分の１または２０分の１〜５０分の１でよい場合があ
る。具体的な投与量は、個々の薬剤、患者の状態、疾患
の種類、組合わせる抗ウィルス剤の種類と量等により異
なる。しかし、一般に０．０２〜２００　ｍｇ／ｋｇ、
好ましくは０゜１〜ｌｏｏｍｇ／ｋｇであり、ひとの場
合１口約１ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは約５ｎ＋ｇ〜５ｇ
を投与する。

上記薬剤は、１日１回または２〜６回に分割投与するか
、または持効性製剤として投与することができる。

投与方法は、経口、局所、注射等任意の方法をとり得る
。

投与に際しては、有効成分を経口投与、注射等の投与方
法に適した有機または無機の固体または液体賦形剤のよ
うな医薬用担体と混合して、常用の医薬製剤の形で投与
することができる。このような製剤には、錠剤、顆粒剤
、散剤、カプセル剤等の固体、および液剤、乳剤、懸濁
剤等の液体が含まれる。上記担体としては、でんぷん、
乳糖、ぶとう糖、しょ糖、デキストリン、セルロース、
パラフィン、脂肪酸グリセリド、水、アルコール、アラ
ビアゴム等が含まれる。また必要に応じて、補佐薬、安
定剤、乳化剤、滑沢剤、結合剤、ｐＨ調節剤、等張化剤
および池の常用添加剤を加えることができる。

この発明で使用する抗ウィルス剤の急性毒性は一般に公
知である。また細胞融合阻害作用および／またはウィル
ス結合阻害作用をもつ化合物の急性毒性も公知のものが
多いが、−例を示すと、デキストラン硫酸ナトリウム（
分子量７０００−８０００、硫黄含量１７−２０％）の
急性毒性（ＬＤ、。）は、マウスに経口投与した場合２
１０００ｒｒＩｇ／ｋｇ、静脈注射した場合４５００ｍ
ｇ／ｋｇである。

コンドロイチン硫酸ナトリウムの急性毒性（ＬＤａ。）
は、マウスに経口投与した場合７５００　ｆｆ１ｇ／　
ｋｇ。

腹腔的投与した場合４０００　ｍｇ／ｋｇ以上で中毒例
および致死例がみられない、ヘパリンナトリウムおよび
ヘパリンカルシウムの急性毒性（ＬＤｓｏ）は、マウス
に静脈注射した場合、いずれも１５００〜２０００ｍｇ
／ｋｇである。

［実施例］ 以下、実施例によりこの発明をさらに詳細に説明する。

なお、以下の記載において、特にことわらない限り、下
記の培地および培養条件を使用した。

（イ）ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−Ｉ　Ｉ　Ｅ　／Ｍｏ１ｔ　−４
細胞（ひとリンパ球）の細胞培養は、１０％仔うし血清
添加ＲＰＭｌ−１６４０培地を用い、５％ＣＯを中３７
℃で行なった。

（ロ）ｉ（ＳＶ／ベロ細胞（ざるの腎細胞）の細胞培養
は、５％仔うし血清添加イーグル最少必須培地を用い、
５％Ｃ０２中３７℃で行なった。

（ハ）インフルエンザ／ＭＤＣＫ細胞（いぬの腎細胞）
の細胞培養は、１０％仔うし血清添加イーグル最少必須
培地を用い、５％ＧＯ！中３７℃で行なった。

製造例１ コンドロイチン硫酸の硫酸化物（コンドロイチンポリ硫
酸）の製造。

コンドロイチン硫酸（５ｇ）を−２５℃以下に冷却した
９５％濃硫酸１０ｉｆｆに撹拌しながら加える。

反応混合物を同温度で９０分撹拌後、氷（１２０ｇ）上
に反応液を撹拌しながら注ぎ炭酸カルシウムと混和する
。減圧濾過し、沈澱を洗い、この濾液を洗液に２０％（
ｖ／のになるようにエタノールを加え、−夜５℃に放置
し生成した硫酸カルシウムを除く。この濾液に炭酸ナト
リウムを撹拌しながら加えてｐＨ］０にする。次いで酢
酸の微酸性にしたのち２０ｚ（ｌまで濃縮し１００３＋
１２のエタノールを加えて一夜５℃に保存後、沈澱を遠
心分離して、エタノール、次いでエーテルで洗い、減圧
乾燥し、白色粉末の標記化合物（硫黄含量！３％）を得
る。

製造例２ ケラタン硫酸の硫酸化物（ケラタンポリ硫酸）の製造。

ケラタン硫酸（ｌｏｏｍｇ）を出発原料とし濃硫酸Ｌｘ
Ｑを使用するほかは、製造例Ｉと同様に操作して標記化
合物（硫黄含量１０％）を得る。

実施例Ｉ （Ａ） デキストラン硫酸ナトリウム（分子量７０００−８００
０、Ｓ−含有１７−２０％） ００ｍｇ コーンスターチ　　　　　　　　　　　４５ｚｇ乳糖　
　　　　　　　　　　　　　　３００ｎｇステアリン酸
マグネシウム　　　　　　　５ｍｇ上記を常法により混
合、造粒、打錠して錠剤とする。

（［３） ３゛−アジド−３°−デオキシチミジン　２５ｍｇコー
ンスターチ　　　　　　　　　　　１２０ｍｇ乳糖　　
　　　　　　　　　　　　　　３００＋＋＋ｇステアリ
ン酸マグネシウム　　　　　　　５ｍｇ」１記を常法に
より混合しゼラチン硬カプセルに充填する。

（Ａ）および（Ｂ）を組合わせて１回投与用形態とする
。

実施例２ デキストラン硫酸ナトリウム（分子ｆｉ７０００−８０
００、Ｓ含有１７−２０％） ２０ｍｇ ３°−アジド−３″−デオキシチミジン００ｍｇ ０．９％食塩水　　適量加えて全１０ｍ１とする。

上記を常法により混合溶解し注射剤とする。

同様にして、分子量５０００、Ｓ含有１３−１４％のデ
キストラン硫酸ナトリウムを用いて注射剤を得る。

実施例３ ヘパリンナトリウム　　　　　　　　２００単位３゛−
アジドー３゛−デオキシチミノン　　５０ｍｇ０．９％
食塩水　　　適量加えて全１０ｍ１とする。

実施例４ ヘパリンカルシウム　　　　　　　　５００単位アラＣ
１０ｍｇ 塩酸ブロカイン　　　　　　　　　　　ｌ０ｍｇ水　　
　　　　　　　適量加えて全１０ｍ１とする。

実施例５ （Ａ） ケラタンポリ硫酸ナトリウム　　　　１００ｍｇ乳糖　
　　　　　　　　　　　　　　　１９５Ｂステアリン酸
マグネシウム　　　　　　　５ＩＩＩｇ上記を常法によ
り混合してゼラチン硬カプセルに充填する。

（Ｂ） アマンタジン　　　　　　　　　　　１００ｍｇコーン
スターチ　　　　　　　　　　　１９５ｍｇ乳糖　　　
　　　　　　　　　　　　３００ｍｇ上記を常法により
混合、造粒、打錠して錠剤とする。

実施例６ ３“−アジド−３゛−デオキシチミジン００ｍｇ 抗ｔＩＴＬＶ−Ｉ　Ｉ　Ｉウィルス抗体（ＩｇＧとして
）０ｍｇ ０．９％食塩水　　適量加えて全１０ｍ１とする。

上記を常法により混合溶解し注射剤とする。

実施例７ デキストラン硫酸ナトリウム （分子量７，０００〜８，０００、Ｓ含量１７〜２０％
）　　３００ｍｇ３°−アジド−３°−デオキシチミジ
ン　　３０Ｂコーンスターチ　　　　　　　　　　　　
　４５ｍｇ乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　２７
０ｍｇステアリン酸マグネシウム　　　　　　　　５ｍ
ｇ上記を常法により混合、造粒、打錠して錠剤とする。

実施例８ デキストラン硫酸ナトリウム （分子ｆｆ１７，０００〜８，０００、Ｓ含ｆｆ１１７
〜２０％）　　２５０ｍｇ２′，３′−ジデオキシアデ
ニン　　　　　　５ｍｇコーンスターチ　　　　　　　
　　　　　　５０ｍｇ乳糖　　　　　　　　　　　　　
　　　　１００ｍｇステアリン酸マグネシウム　　　　
　　　　５ｍｇ上記を常法により顆粒化し、ゼラチン硬
カプセルに充填する。

実施例９ デキストラン硫酸ナトリウム （分子量７，０００〜８，０００、Ｓ含ｆｆ１１７〜２
０％）　　４００ｍｇ２’、３’−ジデオキシアデニン
　　　　　　５０ｍｇ０ｍｇコーンスターチ　　　　　
　　　　　５０＋ｎｇ乳糖　　　　　　　　　　　　　
　　　　１００ｍｇ上記を常法により混合、造粒、打錠
して錠剤とする。

実施例ＩＯ デキストラン硫酸ナトリウム （分子量７，０００〜８，０００、Ｓ含量１７〜２Ｂ）
　　２００ｍｇ３°−アジド−３°−デオキシチミジン
　　２０ｍｇアシクロビル　　　　　　　　　　　　　
３０ｍｇ乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　　５０
ｍｇステアリン酸マグネシウム　　　　　　　ｌ０ｍｇ
上記を常法により顆粒化し、ゼラチン硬カプセルに充填
する。

試験例１（ＨＴＬＶ−Ｉｎウィルス感染の阻害）ひとＴ
−リンパ球系培養細胞ＭＴ−４にエイズウィルスＨＴＬ
Ｖ−［１／ＬＡＶを加え、３７℃で１時間保温した。こ
の細胞をりん酸緩衝食塩水で一度洗浄したのち、種々の
濃度の各薬剤を含むＲＰＭ１１６４０培地または薬剤を
含まないＲＰＭ１１６４０培地を加え、３７℃、５％Ｃ
Ｏを培養器中で培養した。ＭＴ−４細胞はＨＴＬＶ−Ｉ
ＩＩ／ＬＡＶに感染すると、ウィルス増殖に伴って細胞
破壊をおこし、生細胞が減少する。それに先行して、Ｈ
ＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶに感染した細胞が出現する。■
２日目に生細胞数を計数し、感染の程度を知ると共に感
染細胞の出現率を、ウィルス特異抗原に特異的な抗体を
用いる蛍光抗体法で検出した。薬剤としては、３°−ア
ジド−３゛−デオキシチミジン（ＡＺＴと略記）とデキ
ストラン硫酸ナトリウム（分子量７，０００〜８，００
０、Ｓ含量１７〜２０％ＸＤＳと略記）を用いた。結果
を第１−４図に示す。

これらの図から、上記２つの薬剤の併用により、各薬剤
単独では効果のない濃度でも生存細胞数の増加または感
染細胞数の減少すなわち、エイズウィルスの感染・増殖
を抑制することがわかった。

試験例２（ヘルペスウィルス感染の阻害）［方法］ 培養試験管に１．０ｍｌのベロ細胞懸濁液を分注し、傾
斜試験管立てに立て、３７℃で一夜培養した。１本の試
験管をとり、細胞数を算定した。細胞数から、接種する
ウィルス液の濃度（Ｐ　Ｆ　Ｕ／ｍイブＩＩ（ＳＡＶ）
ウィルスストック液を目的のウィルス濃度となるように
培養液［最少必須培地（イーグル最少必須培地（Ｎｏ、
Ｉ）９．４ｇを再蒸留水！００ｏ２１．：溶解）４５０
ｍ（７，２，６６％グルタミン溶液５Ｒｉ２、子うし血
清２５ｉ（７および７，０％ＮａＨＣ０，７，５＋＆］
で希釈し、培養試験管内の細胞に０．１ｍｌずつ接種し
た。３７℃で１時間感染後、培養液　０．９ｍ！を加え
た。３７°Ｃで２０時間培養後、ＣＰＥ（細胞変性効果
）を判定した。

種々の抗つイスル剤と化合物（硫酸多糖）を用い下記３
つの方法で試験を行なった。

（＋）対照試験として、ＳＡＶストック液希釈用第１培
養液およびインキュベーソヨン用第２培養液を、試験物
質を加えずに使用。

（２）ライスル結合阻害試験（方法１）のため、第１お
よび第２培養液に試験物質を加えて使用。

（３）細胞融合阻害試験（方法２）のため、試験物質を
第１′培養液には加えず、第２培養液には加えて使用。

ＣＰＥの評価結果は下記の記号で表わした。

＋＋：非感染対照とほぼ同じ ＋：　１０〜４０％ＣＰＥ ｍ：４０％以上ＣＰＥ （プラークアッセイ） ＣＰＥを観察してから、ドライアイス・アセトンで凍結
融解を３回行った。各試料をハンクス液で１０〜ｌＯ万
倍に段階希釈し、■検体につき２枚ずつ、２．５１のベ
ロ細胞懸濁液を入れたベトリ皿（直径３５ｍｍ）に同量
分注し、培養した。単層になったことを確認してから、
培養液をほとんど吸引し、前記の希釈したＳＡＶストッ
ク液を０゜１ｍｌずつ上記皿に接種した。３７℃で１時
間感染後、２％メチルセルロース含有培養液を約２．５
ｍ１重層した。３７℃で３日間培養後、０．０１５％ニ
ュートラルレッド液を１　、５　ｍｌずつ分注した。

３７℃で一夜培養後、プラーク数を計数した。計数した
プラーク数からウィルス収量（Ｐ　Ｆ　Ｕ／ｍｌ）を求
め、処理試料が対照（非処理）の何倍ウィルスを抑えて
いるかを表にした。

計算法 多糖類としては、以下のものを使用した。

アルギン酸の硫酸化物、５〜１４％ コンドａイｆンー４−硫酸の硫酸化物（Ａ）、Ｓ＝６％
］ンドＩイｆン−４−硫酸の硫酸化物（Ｂ）、５〜１６
％］ンドＵイｆンー６−硫酸の硫酸化物（Ａ）、Ｓ＝８
％］ンドロイｆン−６−硫酸の硫酸化物（１３）、５〜
１５％キチンの硫酸化物、Ｓ＝９％ キトサンの硫酸化物、５−１８％ テキストラン硫酸、分子’ｆｆｔ５０００、Ｓ＝　１４
％デキストラン硫酸、分子量５０万、５〜１４％（注）
Ｓ（％）：（硫黄含量） ［結果］ それぞれの物質の組合わせについて阻害価をＦ表に示す
。

（方法目） （方法１） （方法ｌ） （方法１） （方法Ｉ） （方法２） （方法２） （方法１） （方法１） （方法り ウィルス収量（非処理／処理） 上記の結果から、細胞融合による細胞間感染の阻害作用
およびウィルスの標的細胞への結合の阻害作用をもたな
い抗ウィルス剤であるアマンタジン、アシクロビル、ア
ラＡ１アラＣ１アラＴまたはＩＤＵに細胞融合阻害作用
およびウィルス結合阻害作用をもつ薬剤であるアルギン
酸の硫酸化合物、コンドロイチン硫酸の硫酸化物、キチ
ンの硫酸化合物、キトサンの硫酸化合物またはデキスト
ラン硫酸を加えると抗ウイルス効果が増強されることが
わかった。

試験例３（インフルエンザウィルス感染の阻害）（方法
） いぬの腎臓由来のＭＤＣＫ細胞を培養試験管中で充分に
増殖させ（単層状態）、−度りん酸緩衝食塩水［Ｐ　Ｂ
　Ｓ　（−）］で洗った。次いでＡ型のインフルエンザ
ウィルスを培地で１　、　ＯＸ　Ｉ　ＯｅＰＦＵ／ｍｌ
に希釈し、その０．２ｍｌを細胞に接種することによっ
て感染させた。デキストラン硫酸（分子量５０００、Ｓ
含量１４％または５０万、Ｓ含量１４％）とアマンタジ
ンの併用試験では、感染させる直前にウィルス液中に物
質を以下の濃度で加えた。

３０分間室温で放置し、ウィルスを感染させた後に薬剤
を以下の濃度で添加した培地をｆｍｌ加えた。

３７℃で２４時間培養し、生じたＣＰＥの割合が０〜ｌ
Ｏ％なら＋＋、１０〜４０％なら＋、４０％〉なら−と
して判定した（この際、薬剤を添加していない培養試験
管は８０％以上ＣＰＥが生じていた。） （結果） 結果を下表に示す。

テ′キストラン硫酸　　　Ｑ−−＋＋＋＋＋（分子ｙｉ
５０００）　　Ｉ　　　−−十＋＋　　　＋＋１０−　
　　　　−　　　　　　　　＋　　　　　　＋＋　　　
　　　＋＋１００　　　−　　　　　　＋　　　　　　
＋＋　　　　　　＋＋　　　　　　＋＋１．０００　　
　−　　　　　　＋　　　　　　＋＋　　　　　　＋＋
　　　　　　＋＋テ゛卑スストラン硫酸　　０−−　　
　　　　　　−＋＋（分子量５０万）０．１−−　　　
　−＋＋１−−＋＋＋＋ 上記の結果から、アマンタジンとデキストラン硫酸の併
用により抗ウイルス効果の相乗的な向上が得られること
がわかった。

試験例４（ウィルス感染の阻害） （方法） いぬの腎臓由来のＭＤＣＫ細胞を９６穴マイクロプレー
ト中で充分に増殖させ（単層状態）、−度ＰＢＳ（−）
で洗った。次いでＡ型のインフルエンザウィルスを培地
で１．ＯＸ　Ｉ　Ｏ’ＰＦＵ／ｍｌに希釈し、その０．
０２５ｍ１を細胞に接種することによって感染させた。

このウィルス液には、感染直前に薬剤を各々以下の濃度
で加えた。３０分間室温で放置し、ウィルスを感染させ
た後に薬剤を以下の濃度で添加した培地を１００μｌ加
えた。３７℃、５％ＣＯｔ下で４４時間培養し、生じた
ＣＰＥの割合が０−１０％なら＋＋、１０〜４０％なら
＋、４０％〈なら−として判定した（この際、薬剤を添
加していない処理区では８０％以上ＣＰＥが生じていた
。） （結果） 結果を下表に示す。

上記の結果から、アマンタジンとアルギン酸の硫酸化合
物またはコンドロイチン硫酸の硫酸化合物の併用により
抗ウイルス効果の相乗的な向上が得られることがわかっ
た。

試験例５（細胞融合阻害） ひと株化Ｔ細胞Ｍｏ１ｔ　−４（ＯＫＴ　４　”　）と
そのエイズウィルス産生株化細胞Ｍｏ１ｔ　−４／　Ｈ
Ｔ　Ｌｖ−ｍで用いた細胞−細胞（ｃｅｌｌ　　ｔｏ　
　ｃｅｌｉ）感染系により、デキストラン硫酸分子量７
，０００〜ｓ、ｏ　ｏ　ｏ、Ｓ含量１７〜２０％ＸＤＳ
）のＨＴＬＶ−Ｉ［１ウイルスの細胞−細胞感染に対す
る作用を調べた。培養法は、以下のようである。

Ｍｏ１ｔ−４細胞（非感染）とＭｏ１ｔ　−４／　ｔＩ
　Ｔ　Ｌ　Ｖ−ｍ細胞（ウィルス産生）を細胞数比９：
１で混合し、デキストラン硫酸を含む、または含まない
ＲＰ　ｔＩ　Ｉ培地中で培養した。その系においては、
Ｍｏ１ｔ−４／ＨＴＬＶ−ＩＩＩ細胞はＭｏ１ｔ　　４
細胞と次々と融合し、巨大細胞となったのち、死滅する
。

デキストラン硫酸を添加せずにＭｏ１ｔ−４細胞とＭｏ
１ｔ−４／Ｉ−ＩＴＬＶ−ＩＩＩ細胞を同時培養を行う
と、第５図に示すように、細胞融合により感染した巨大
細胞（ｌ視野に約３０個）の出現が見られた。

デキストラン硫酸１０μｇ／ｍｌを添加して同時培養を
行なうと、第６図に示すように、巨大細胞の出現は全く
見られなかった。これは、デキストラン硫酸がウィルス
感染細胞と非感染細胞の融合を阻害したこと、すなわち
デキストラン硫酸がエイズウィルスの細胞間直接感染を
阻止したことを示す。

試験例６（ウィルス放出量の減少） （方法） ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−Ｉ［１産生株化細胞Ｍｏ１ｔ　−４／
　ＨＴ　Ｌｖ−ｍ細胞（すべてウィルス特異性抗原陽性
）と非感染Ｍｏ１ｔ−４細胞を、！：９の割合で混合し
デキストラン硫酸（分子量７０００〜８，０００、Ｓ含
量１７〜２０％ＸＤＳ）１０，５０および１００μｇ／
ｎ＋１を含む培地で培養した。培地は３日毎に交換した
。９日目に、生細胞数を計数し、逆転写酵素（ＲＴ）活
性によりウィルス放出量を測定（培地中に放出されたウ
ィルスを遠心して分離し、希釈して残存培地中のＤＳに
よる阻害を除く）シた。

また、免疫蛍光法によるウィルス抗原陽性細胞（感染細
胞）率を測定した。

（結果） 結果を下表に示す。

上記の結果から、ウィルス放出ｍが減少し、非感染細胞
が出現したこと、すなわちデキストラン硫酸がウィルス
感染を阻害することがわかった。

試験例７（ウィルス除去作用） （方法） ＨＴＬＶ−１のウィルス粒子をＩＯμｇ／肩Ｑの試験物
質を含む培養液に加え、直ちに、ＭＴ−４細胞に添加し
た。３７℃、６０分間、保温したのち、遠心し、上清を
除いた。更に、リン酸生食緩衝液で２回洗浄し、細胞に
未吸着のウィルスを除いたのち、新たに培養液を加え、
３日間３７℃、５％ＣＯｔの条件下に培養した。３日目
に間接蛍光抗体法で感染細胞出現率（％）を測定し、効
力を比較した。

（結果） 下表に示す通りである。

＊　ここでいうＳ含有は糖鎖に結合した硫酸基またはス
ルホン酸基に起因するしのである。

＊＊感染細胞出現率−蛍光細胞Ｘ　１００／総細胞以上
の結果より、デキストラン硫酸をはじめとする硫酸多糖
類は感染成立の第一ステップであるＩＩ　Ｉ　Ｖの標的
細胞レセプターへの結合過程を強く阻害することが確認
される。

従って、デキストラン硫酸をはじめとする硫酸多糖類の
Ｙ了する細胞融合阻止作用は、恐らく感染した細胞の表
面に出現するＨＩＶ抗原か非感染細胞レセプターへ結合
することを阻害する結果生ずるしのと考えられる。

試験例８（ウィルス感染の阻害） （方法） 試験例１と同じ方法で、Ｉ−Ｉ　Ｔ　Ｌ　Ｖ　−ＩＩＩ
感染処理したＭＴ−４細胞を以下の培地で培養し、生細
胞数と感染細胞率の変化を経時的に観察した。培地の種
類は無添加、１０ｎＭ−ＡＺＴ添加、５μｇ／ｍｌデキ
ストラン硫酸ナトリウム（分子最７゜０００〜８，００
０、Ｓ含量１７〜２０％）添加及びＩＯｎＭ−ＡＺＴと
５μｇ／ｆｆ１ｌデキストラン硫酸の同時添加の４種類
である。

（結果）第７図（生細胞数）および第８図（感染細胞数
）に示すように、１０ｎＭ−ＡＺＴ及び５μｓ／ｍｌデ
キストラン硫酸単独では、無添加に比べやや感染成立が
遅れるものの９日目には無添加の場合と同様に１００％
感染が成立した。しかし、■ＯｎＭ−ＡＺＴと５μｇ／
ｍｌデキストラン硫酸の併用で、効果が飛躍的に増強し
、■２２日目で非感染に比べ生細胞数に変化がなく、感
染細胞率も低い値を示した。

試験例９（ウィルス感染の阻害） （方法） 試験例（１）と同様の方法でＨＴ　Ｌ　Ｖ　−Ｉ［１感
染処理したＭＴ−４細胞を以下、表に示す濃度のデキス
トラン硫酸ナトリウム（分子［７，０００〜８゜０００
、Ｓ含量１７〜２０％ＸＤＳ）及び各抗ウィルス剤（２
″、３゛−ジデオキシチミジン、２’、３″−ジデオキ
シアデノシン、スラミン、）−［’Ａ−２３）を含む培
地で培養し、１２日後感染細胞の出現率（％）を試験例
（１）と同様に蛍光抗体法により算出した。

（結果） 表の数値は感染細胞の割合（％）を示す■２°、３′−
ジデオキシチミジンとＤＳの併用 ■スラミンとＤＳの併用 ■１−Ｔ　Ｐ　Ａ　−２３とＤＳの併用以上の結果より
、デキストラン硫酸の相乗的抗エイズウイルス作用は、
３°−アシド−３゛−デオキシチミジン（ＡＺＴ）のみ
ならず他の抗エイズウィルス剤との併用においても発現
されることが明らかとなった。

試験例１０　　（細胞融合阻害） ヘルペスウィルスＩＩ型は、アフリカミドリザル腎細胞
ベロ（Ｖｅｒｏ）（第９図）の単層培養細胞に感染する
と、細胞融合をひきおこす。（第１Ｏ図）この感染系を
利用して、ヘルペスウィルス感染による細胞融合に対す
る、デキストラン硫酸（分子量５０００、Ｓ含量１４％
）の作用を調べた。

ベロ細胞へのウィルス吸着と同時にデキストラン硫酸も
添加して培養した系では、デキストラン硫酸ｌμｇ／ｍ
ｌを添加した場合、第１１図１ご示すように、ウィルス
の感染による細胞変性効果が現れ、なおかつ細胞融合の
発現が見られた。デキストラン１０μｇ／ｍｌを添加し
た場合は、第１２図に示すように、細胞感染は全く見ら
れなかった。

ベロ細胞へのウィルス吸着１時間後にデキストラン硫酸
を添加して培養した系では、デキストラン硫酸ｌμｇ／
ｎ＋１を添加した場合、第１３図に示すように、細胞変
性効果が現れ、なおかつ細胞融合の発現がみられた。デ
キストラン硫酸ｌＯμｇ／ｉｔを添加した場合は、ウィ
ルスの感染による細胞変性効果が現れるが、細胞融合の
発現は見られなかった。（第１４図） これらの結果は、デキストラン硫酸のヘルペスウィルス
細胞感染に対する効果には、条件によって、十分な効果
を現す段階と全く効果を示さない段階の２者間に、細胞
融合のみを阻害する段階があることを示す。

すなわち、デキストラン硫酸は、ヘルペスウィルスの細
胞感染における細胞融合を阻止する作用があることがわ
かった。

試験例ＩＩ（ウィルス感染の阻害） （方法）試験例（１）と同様の方法でＨＴＬＶ−ＩＩＩ
感染処理したＭＴ−４細胞を以下、表に示す濃度の細胞
融合阻止作用およびウィルス結合阻止作用を有する化合
物（コンドロイチン−４−硫酸の硫酸化物（Ｓ含量１６
％）、キトサン硫酸（Ｓ含ｉｔ８％）及び抗つイスル剤
（３°−アジド−３′−デオキシチミジン、２゛３°−
ジデオキシシチジン）を含む培地で培養し１２日後、感
染細胞の出現率（％）を試験例（１）と同様に蛍光抗体
法により算出した。

（結果） 表の数値は感染細胞の割合（％）を示す。

■３゛−アジドー３°−デオキシチミジンとコンドロイ
チン−４−硫酸の硫酸化物併用 ■２′，３′−ジデオキシシチジンとコンドロイチン−
４＝硫酸の硫酸化物の併用 ■３′−アジドー３°−デオキシチミジンとキトサン硫
酸の併用 ■２°３′−ジデオキシシヂジンとキトサン硫酸の併用
試験例１２ （方法） 試験例（１）と同様の方法でＨＴ　Ｌ　Ｖ　−ＩＩＩ感
染処理したＭＴ−４細胞を以下、表に示す濃度のデキス
トラン硫酸ナトリウム（分子量７０００−８０００、Ｓ
含ｆｆｔ＋　７−２０％）及び抗つイスル剤（アシクロ
ビル、グリチルリチン、ノイロトビン）を含む培地で培
養し１２日後、感染細胞の出現率（％）を試験例（１）
と同様に蛍光抗体法により算出した。

（結果） 表の数値は感染細胞の割合（％）を示す。

試験例Ｉ３ （方法） 試験例（１）と同様の方法でＨＴＬＶ−ＩＩＩ感染処理
したＭＴ−４細胞を以下、表に示す濃度の各細胞融合阻
害作用およびウィルス結合阻害作用をもつ化合物及び各
抗つイスル剤を含む培地で培養し１２日後、感染細胞の
出現率（％）を試験例（１）と同様に蛍光抗体法により
算出した。

（結果） 表の数値は感染細胞の割合（％）を示す。

すなわち、デキストラン硫酸をはじめとする硫酸化多糖
類は、高濃度で逆転写酵素活性を阻害するが、逆転写酵
素阻害活性を示さないような低濃度においても、ウィル
ス感染細胞と非感染細胞の融合阻害作用並びにウィルス
の標的細胞への結合阻害作用を有する。このことから、
これら硫酸化多糖類は、レトロウィルスにおいては、逆
転写酵素阻害活性を有する抗レトロウィルス剤、例えば
３°−アジド−３°−デオキシチミジン、２′、３゜−
ジデオキシシヂジン、２’、３’−ジデオキンアデノシ
ン、スラミン、Ｐ　Ｉ−Ｉ　Ａ　２３等とすぐれた相乗
的抗ウィルス作用をもたらすと考えられる。さらにデキ
ストラン硫酸をはじめとする硫酸化多糖類は、逆転写酵
素をもたないウィルス、例えばヘルペスウィルス、イン
フルエンザウィルスなどに対しても細胞融合阻害作用ま
たはウィルス結合阻害作用を発現することにより、アシ
クロビル、アラＴ１アラＣ１アラＡ１アマンタジン、Ｉ
ＤＵなどの抗ウィルス剤との間にも極めて強い相乗的抗
ウィルス作用を示す。また、従来抗ウィルス作用を有さ
ないとされてきた分子量カ月ｏ、ｏ　ｏ　ｏ以下である
ような低分子量デキストラン硫酸においても、従来公知
の抗ウィルス剤と併用した場合ウィルスの種類にかかわ
らず、同様に優れた相乗的抗ウィルス作用を示した。従
って、本発明に係る硫酸化多糖類は、レトロウィルスに
対しては逆転写酵素阻害活性の有無とは無関係に細胞融
合阻害作用または、ウィルス結合阻害作用を発現するこ
とにより他の抗ウィルス剤との併用によって、浸れた相
乗的抗ウィルス作用を発現するものと結論づけられる。

【図面の簡単な説明】

第１および２図は、何れも、試験例１において、培養細
胞ＭＴ−４＋：１−ＩＴＬＶ−１１１／ＬＡＶウイルス
を加え、ＡＺＴまたはＤＳを種々の濃度で添加して培養
したときの生細胞数と濃度の関係を示すグラフ、第３お
よび４図は、上記の試験において感染細胞率と濃度の関
係を示すグラフである。 第５および６図は、それぞれ、試験例５において、デキ
ストラン硫酸０またはＩＯμｇ／ｍｌの存在下にＭｏ１
ｔ−４細胞とＭｏ１ｔ　−４／　ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−■細
胞を同時培養した結果の顕微鏡写真であり、生物の形態
を示す写真である。 第７図および第８図は、それぞれ、試験例８において、
ＡＺＴとデキストラン硫酸を単独でまたは同時に添加し
てＭｏ１ｔ　−４／　ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−ＩＩＩ細胞を培
養したときの生細胞数および感染細胞率を示すグラフで
ある。 であり、生物の形態を示す写真である。 第９図は試験例！０において、正常なベロ細胞の顕微鏡
写真であり、生物の形態を示す写真である。 第１Ｏ図は試験例ＩＯにおいて、ヘルペスウィルスに感
染して細胞融合を起したベロ細胞の顕微鏡写真であり、
生物の形態を示す写真である。 第１１図は試験Ｎ１０において、ウィルス吸着と同時に
デキストラン硫酸ｌμｇ／ｍｌを添加したベロ細胞の顕
微鏡写真であり、生物の形態を示す写真である。 第１２図は試験例ＩＯにおいて、ウィルス吸着と同時に
デキストラン硫酸ｌＯμｇ／ｍｌを添加したベロ細胞の
顕微鏡写真であり、生物の形態を示す写真である。 第１３図は試験例１０において、ウィルス吸着１時間後
にデキストラン硫酸１μｇ／ｍｌを添加したベロ細胞の
顕微鏡写真であり、生物の形態を示す写真である。 第１４図は試験例１０において、ウィルス吸着１時間後
にデキストラン硫酸ｌＯμｇ／ｍｌを添加したベロ細胞
の顕微鏡写真であり、生物の形態を示す写襄である。 特許出願人　株式会社　上野製薬応用研究所代理人弁理
士　青　山　葆　ほか１名 ３田月１　　　（ｘｌＯ４；＠日月２．ｚｍｌ）細胞数
　（ｘ１０４茗田Ｊ＠／ｍｌ） 徳染相龍季　　　（９石） 第５］゛４ 第６図 川と染細ハせ率　（ヲ≦） 第９Ｉλ１ 第１−月４ 第ｘ：ｒ＜ ７７ｊじ己４ １力１３１．ご

Claims (63)

【特許請求の範囲】
1. （１）（Ａ）ウィルス感染細胞から非感染細胞への細胞
   融合による細胞間感染に対する阻害作用および／または
   ウィルスの標的細胞への結合に対する阻害作用をもたな
   い抗ウィルス剤と、（Ｂ）細胞融合阻害作用および／ま
   たはウィルス結合阻害作用をもつ化合物とを組合わせて
   なる、ウィルス性疾患処置剤。
2. （２）抗ウィルス剤がウィルス感染細胞から非感染細胞
   への細胞融合による細胞間感染に対して阻害作用をもた
   ない抗ウィルス剤である特許請求の範囲第１項記載の処
   置剤。
3. （３）抗ウィルス剤を細胞融合阻害剤と組合わせる特許
   請求の範囲第２項記載の処置剤。
4. （４）抗ウィルス剤を細胞融合阻害剤であってウィルス
   結合阻害剤である化合物と組合わせる特許請求の範囲第
   ２項記載の処置剤。
5. （５）抗ウィルス剤がウィルスの標的細胞への結合阻害
   作用をもたない抗ウィルス剤である特許請求の範囲第１
   項記載の処置剤。
6. （６）抗ウィルス剤をウィルス結合阻害剤と組合わせる
   特許請求の範囲第５項記載の処置剤。
7. （７）抗ウィルス剤をウィルス結合阻害剤であって細胞
   融合阻害剤である化合物と組合わせる特許請求の範囲第
   ５項記載の処置剤。
8. （８）抗ウィルス剤がウィルス感染細胞から非感染細胞
   への細胞融合による細胞間感染に対するおよびウィルス
   の標的細胞への結合に対する阻害作用をもたない抗ウィ
   ルス剤である特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
9. （９）抗ウィルス剤を細胞融合阻害剤またはウィルス結
   合阻害剤と組合わせる特許請求の範囲第８項記載の処置
   剤。
10. （１０）抗ウィルス剤を細胞融合阻害剤であってウィル
    ス結合阻害剤である化合物と組合わせる特許請求の範囲
    第８項記載の処置剤。
11. （１１）抗ウィルス剤および化合物の量がそれぞれ単独
    で用いる場合の抗ウィルス有効量である、特許請求の範
    囲第１項記載の処置剤。
12. （１２）抗ウィルス剤および化合物のうち一方の量が単
    独で用いる場合の抗ウィルス有効量より少ない量である
    、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
13. （１３）抗ウィルス剤および化合物の量が相乗作用をも
    たらす量である、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
14. （１４）抗ウィルス剤の量が抗ウィルス有効量より少な
    い量である、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
15. （１５）細胞融合および／またはウィルス結合阻害剤が
    抗ウィルス作用をもたないものである、特許請求の範囲
    第１項記載の処置剤。
16. （１６）細胞融合および／またはウィルス結合阻害剤が
    抗ウィルス作用をもち、その量が抗ウィルス有効量より
    少ない量である、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
17. （１７）抗ウィルス剤がアマンタジン系抗ウィルス剤で
    ある、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
18. （１８）抗ウィルス剤が核酸系抗ウィルス剤である、特
    許請求の範囲第１項記載の処置剤。
19. （１９）抗ウィルス剤がペプチド系抗ウィルス剤である
    、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
20. （２０）抗ウィルス剤がポリアニオン系抗ウィルス剤で
    ある、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
21. （２１）抗ウィルス剤がリン酸系抗ウィルス剤である、
    特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
22. （２２）抗ウィルス剤が内因性抗ウィルス剤である、特
    許請求の範囲第１項記載の処置剤。
23. （２３）抗ウィルス剤が配糖体系抗ウィルス剤である、
    特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
24. （２４）抗ウィルス剤が脂質系抗ウィルス剤である、特
    許請求の範囲第１項記載の処置剤。
25. （２５）抗ウィルス剤がアンサマイシン系抗ウィルス剤
    である、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
26. （２６）抗ウィルス剤がチオセミカルバチド系抗ウィル
    ス剤である、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
27. （２７）核酸系抗ウィルス剤が３′−アジド−３′−デ
    オキシチミジン（ＡＺＴ）、２′，３′−ジデオキシチ
    ミジン、２′，３′−ジデオキシアデノシン、２′，３
    ′−ジデオキシグアノシン、２′，３′−ジデオキシイ
    ノシン、２′，３′−ジデオキシシチジン、アラＡ、ア
    ラＣ、アラＴ、ヨードデオキシウリジンまたはアシクロ
    ビルである、特許請求の範囲第１８項記載の処置剤。
28. （２８）細胞融合阻害作用および／またはウィルス結合
    阻害作用をもつ化合物が糖構成炭素原子を有する化合物
    であって、 ａ）天然少糖類 ｂ）合成少糖類 ｃ）天然多糖類 ｄ）合成多糖類 ｅ）上記ａ）、ｂ）、ｃ）またはｄ）の医薬的に許容さ
    れる塩 から選ばれたものであり、かつ、糖構成炭素原子上に低
    分子量の連結基を介して少なくとも１個のＳ−オキソ酸
    基が結合している化合物である、特許請求の範囲第１項
    記載の処置剤。
29. （２９）Ｓ−オキソ酸基がスルホ基（−ＳＯ＿３Ｈ）で
    ある、特許請求の範囲第２８項記載の処置剤。
30. （３０）連結基がオキシ基（−Ｏ−）またはイミノ基（
    −ＮＨ−）である、特許請求の範囲第２８項記載の処置
    剤。
31. （３１）化合物が ａ）天然多糖類硫酸エステル ｂ）合成多糖類硫酸エステル ｃ）上記ａ）またはｂ）の医薬的に許容される塩から選
    ばれたものである、特許請求の範囲第２８項記載の処置
    剤。
32. （３２）化合物が ａ）植物または微生物から得られ、硫酸水素基（−Ｏ−
    ＳＯ＿３Ｈ）を少なくとも１個有する天然多糖類、 ｂ）植物または微生物から得られた多糖類を硫酸化剤で
    エステル化して得られ、硫酸水素基（−Ｏ−ＳＯ＿３Ｈ
    ）を少なくとも１個有する合成多糖類、 ｃ）上記ａ）またはｂ）の医薬的に許容される塩から選
    ばれたものである、特許請求の範囲第３１項記載の処置
    剤。
33. （３３）化合物が、デキストラン硫酸、アルギン酸硫酸
    、レンチアン硫酸およびプルラン硫酸から選ばれた合成
    多糖類である、特許請求の範囲第３２項記載の処置剤。
34. （３４）デキストラン硫酸が分子量５００〜２００万の
    ものである、特許請求の範囲第３３項記載の処置剤。
35. （３５）デキストラン硫酸が分子量２０００〜２０万の
    ものである、特許請求の範囲第３４項記載の処置剤。
36. （３６）デキストラン硫酸が分子量２０００〜１万のも
    のである、特許請求の範囲第３５項記載の処置剤。
37. （３７）デキストラン硫酸が分子量３０００〜８０００
    のものである、特許請求の範囲第３６項記載の処置剤。
38. （３８）デキストラン硫酸が硫黄含量約５〜２３％のも
    のである、特許請求の範囲第３３項記載の処置剤。
39. （３９）天然多糖類がカラゲニンまたはフコイジンであ
    る、特許請求の範囲第３２項記載の処置剤。
40. （４０）化合物が ａ）動物から得られ、スルホ基（−ＳＯ＿３Ｈ）を少な
    くとも１個有する天然多糖類、 ｂ）動物から得られた多糖類を硫酸化剤でエステル化し
    て得られ、スルホ基（−ＳＯ＿３Ｈ）を少なくとも１個
    有する合成多糖類、 ｃ）上記ａ）またはｂ）の医薬的に許容される塩から選
    ばれたものである、特許請求の範囲第３１項記載の処置
    剤。
41. （４１）化合物がムコ多糖類である、特許請求の範囲第
    ４０項記載の処置剤。
42. （４２）化合物が天然ムコ多糖類を硫酸化剤でエステル
    化して得られた合成ムコ多糖類硫酸エステルである、特
    許請求の範囲第４０項記載の処置剤。
43. （４３）化合物がヘパリン、コンドロイチン硫酸、デル
    マタン硫酸、ヘパリチン硫酸、ケラタン硫酸、ヒアルロ
    ン酸、テイクロン酸、キチン、キトサン、ムコ脂質およ
    びムコ蛋白質から選ばれた天然多糖類またはそれらの医
    薬的に許容される塩である、特許請求の範囲第４０項記
    載の処置剤。
44. （４４）化合物がコンドロイチンポリ硫酸、デルマタン
    ポリ硫酸、ヘパリチンポリ硫酸、ケラタンポリ硫酸、ヒ
    アルロン酸硫酸、テイクロン酸硫酸、キチン硫酸および
    キトサン硫酸から選ばれた合成多糖類またはそれらの医
    薬的に許容される塩である、特許請求の範囲第４０項記
    載の処置剤。
45. （４５）細胞融合阻害作用および／またはウィルス結合
    阻害作用をもつ薬剤が抗ウィルス抗体である、特許請求
    の範囲第１項記載の処置剤。
46. （４６）抗ウィルス剤が３′−アジド−３′−デオキシ
    チミジンであり、細胞融合阻害作用および／またはウィ
    ルス結合阻害作用をもつ化合物がデキストラン硫酸であ
    る特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
47. （４７）抗ウィルス剤が２′，３′−デオキシシチジン
    であり、細胞融合阻害作用および／またはウィルス結合
    阻害作用をもつ化合物がデキストラン硫酸である特許請
    求の範囲第１項記載の処置剤。
48. （４８）抗ウィルス剤が２′，３′−ジデオキシアデノ
    シンであり、細胞融合阻害作用および／またはウィルス
    結合阻害作用をもつ化合物がデキストラン硫酸である特
    許請求の範囲第１項記載の処置剤。
49. （４９）ウィルス性疾患がレトロウイルス、ヘルペスウ
    ィルスまたはインフルエンザウイルスによるものである
    、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
50. （５０）レトロウイルスがひとまたは動物レトロウイル
    スである、特許請求の範囲第４９項記載の処置剤。
51. （５１）ひとレトロウイルスがＨＴＬＶ− I 、ＨＴＬ
    Ｖ−II、ＨＩＶ（ＨＴＬＶ−III、ＨＴＬＶ−IV、ＬＡ
    Ｖ、ＡＲＶ）および川崎病原因ウィルスから選ばれたも
    のである、特許請求の範囲第５０項記載の処置剤。
52. （５２）疾患がＨＩＶによって起るものである、特許請
    求の範囲第５０項記載の処置剤。
53. （５３）疾患がヘルペスウィルスによって起るものであ
    る、特許請求の範囲第５０項記載の処置剤。
54. （５４）疾患がインフルエンザウイルスによって起るも
    のである、特許請求の範囲第５０項記載の処置剤。
55. （５５）動物レトロウイルスがとり骨髄芽球症ウィルス
    またはフレンド・マウス白血病ウィルスである、特許請
    求の範囲第５０項記載の処置剤。
56. （５６）ウィルス性疾患がリンホアデノパシー症候群（
    ＬＡＳ）、持続性一般リンパ腺症（ＰＧＬ）、エイズ、
    エイズ関連コンプレックス（ＡＲＣ）、成人Ｔ細胞白血
    病（ＡＴＬ）、川崎病、ヘルペスまたはインフルエンザ
    である、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
57. （５７）ウィルス感染細胞から非感染細胞への細胞融合
    による細胞間感染に対する阻害作用および／またはウィ
    ルスの標的細胞への結合に対する阻害作用をもたない抗
    ウィルス剤と組合わせて最低有効濃度を低下させるため
    の細胞融合阻害作用および／またはウィルス結合阻害作
    用をもつ化合物からなるシネルギスト。
58. （５８）抗ウィルス剤が３′−アジド−３′−デオキシ
    チミジンであり、細胞融合阻害作用および／またはウィ
    ルス結合阻害作用をもつ化合物がデキストラン硫酸であ
    る特許請求の範囲第５７項記載のシネルギスト。
59. （５９）抗ウィルス剤が２′，３′−デオキシシチジン
    であり、細胞融合阻害作用および／またはウィルス結合
    阻害作用をもつ化合物がデキストラン硫酸である特許請
    求の範囲第５７項記載のシネルギスト。
60. （６０）抗ウィルス剤が２′，３′−ジデオキシアデノ
    シンであり、細胞融合阻害作用および／またはウィルス
    結合阻害作用をもつ化合物がデキストラン硫酸である特
    許請求の範囲第５７項記載のシネルギスト。
61. （６１）抗ウィルス剤がアラＡ、アラＣまたはアラＴで
    あり、細胞融合阻害作用および／またはウィルス結合阻
    害作用をもつ化合物がデキストラン硫酸である特許請求
    の範囲第５７項記載のシネルギスト。
62. （６２）抗ウィルス剤がヨードデオキシウリジンであり
    、細胞融合阻害作用および／またはウィルス結合阻害作
    用をもつ化合物がデキストラン硫酸である特許請求の範
    囲第５７項記載のシネルギスト。
63. （６３）抗ウィルス剤がアシクロビルであり、細胞融合
    阻害作用および／またはウィルス結合阻害作用をもつ化
    合物がデキストラン硫酸である特許請求の範囲第５７項
    記載のシネルギスト。