JPH01199165A - 検体分析用試験装置およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は分析物質の検定に有益な試験装置とかかる検定
におけるその使用方法に関する。殊に、本発明は分析物
質の固相検定で使用される固定支持体上の分析物質のた
めにバインダを提供する方法に関する。

〔従来の技術〕

固相技術により分析物質を判定するための検定はその分
析物質を含むと疑われる試料と固体支持体上に支持され
た分析物質に特有の接着剤を有する試験装置間の接触を
伴う。固体支持体ｉｌｉ／′１扱着剤に接着する分析物
質の１文その後トレーサにより試験中の分析、物質の（
定量もしくは定性的尺度として検出される。

例えば米国特許第４，６３２，９０１号に記載されたよ
うな若干の固相検定の場合、分析物質用のバインダーは
試験領域とその試験領域を包囲するバインダーから自由
な領域を提供するために固体支持体の限られた部分上に
支持される。バインダーから自由な領域は適当なトレー
サを使用することにより分析物質の判定を補助するため
の背景領域として使用することができる。試験装置が多
重層を備える場合、それらは装置の他の構成部分に対し
て正確に向いた試験領域をもって組立てる必要がある。

バインダを有する添加剤中にマーカを使用するとその上
部にバインダを有する固体支持体の試験領域が試験領域
を包囲する背景領域から識別可能な試験装置を構成する
ことができる。本発明の試験装置は分析物質用検定に使
用するためのものである。それは試験領域と背景領域と
を有する固体支持体を有する。分析物質用バインダとマ
ーカの混合物は試験領域上に支持される。本発明の試験
キッ〜トは試験装置とマーカから識別可能な札を有する
トレーサを備える。

本発明の検定は試験領域と背景領域を有する固体支持体
を有する試験装置を使用する。試験装置は分析装置用バ
インダと試験領域上に支持されるマーカの混合物を有す
る。試験装置は流体サンプルとトレーサと接触する。ト
レーサはマーカと識別可能なタグを有する。

本発明の製造方法において試験領域と背景領域を備える
固体支持体が提供される。バインダとマーカの混合物が
試験領域に加えられることによってそれはそこに支持さ
れることになる。か（してマーカはバインダが事実試験
領域に加えられたことを判定する上で有益である。上記
方法は検定条件下でのバインダの性質を犠牲にすること
なく固体支持体をその他の試験装置の構成部品と組立て
やすくする。

バインダを有する添加剤中に使用されるマーカはバイン
ダの結合性に干渉せず、バインダに類似した方法で固体
支持体上に支持されることができ試験領域中のトレーサ
を検出する能力に干渉しないものである。

実施例によるとバインダは吸着により固体支持体上に支
持される。従ってバインダを有する添加剤中に使用され
るマーカは同様に固体支持体により吸着されることの可
能なものである。

望ましいマーカは適当な条件下で肉眼により検出可能な
材料である。マーカは可視スペクトル内の特性帯の光を
吸収する着色材料でよい。その代わりにマーカは励起す
るとスペクトルの可視領域内に特徴的な螢光信号を発す
る螢光材料であることが望ましい。着色螢光材料は以下
「色原体」と称することにする。これらの色原体により
バインダとマーカの混合物が固定支持体の試験領域に塗
布されていることは色の存在もしくは励起後試験領域内
に螢光信号が存在することＫより容易に判定することが
できる。

色原体のマーカはバインダを有する添加剤中の固体支持
体にバインダの結合性に不利の影響を与えず試験領域内
のマーカの検出を可能にするに十分な量だけ塗布される
。マーカは大ていの場合結合剤が水をベースとした溶液
中の固体支持体に塗布されるために水溶性であることが
望ましい。

か（してバインダがマーカを有する添加剤中の固体支持
体の試験領域に塗布される本発明の製造方法に従って進
むことによってそれに確実に付着したバインダを有する
支持体の試験領域は背景領域から識別することができる
。

このようにしてもし固体支持体がサンプルとその他の材
料を試験装置に塗布するための進入ポートを備える容器
内に配置される場合には、バインダが支持できる試験領
域はサンプル進入ポートに対して適当に配置することが
できる。

成る場合には、対照（例えば分析物賀正対照）を固体支
持体へ塗布することが望ましい。本発明のもう一つの面
によれば対照（特に周知の分析物質量を含む溶液）がマ
ーカから識別可能なラベルを有する添加剤中の固体支持
体の対照領域に塗布されることによって対照領域はラベ
ルを検出することによりて判定することができる。本発
明のこの面により対照領域は試験領域と完全もしくは部
分的にオーバラップするか支持体の完全に別個の領域と
することができる。大ていの場合、対照は正の対照であ
る。然しなから負の対照も使用することができる。

かくして、本発明によれば対照を有する添加剤中の固体
支持体に塗布されるラベルは検定中に使用されるトレー
サ中に使用されるタグとバインダを有する添加剤中に塗
布されるマーカの双方から識別することができる。対照
を有する添加剤内に１１Ｊされるラベルはマーカに対し
て上記特性を有する。すなわち、材料は対照の結合能力
に干渉せず、対照に類似した形で固体支持体により支持
されることが可能で検定条件の下で生ずる相互作用と干
渉せず、検定条件下でトレーサから識別可能なものであ
る。対照を有する添加剤中に使用されるラベルもまた色
原体であることが望ましく螢光材料であることが最も望
ましい。

本発明はバインダが固体支持体上に支持されるようなど
んな検定にも有益である。バインダの選択は検定フォー
マットとプロトニルによる。適当なバインダの選択は当
業者の範囲内にあると考えられる。

固体支持体は例えばシートもしくは膜、試験ストリップ
、デイツプスティック、カード等の如き広範囲の形をと
ることができる。適当な形の選択は当業者の範囲内にあ
ると考えることができる。同様にして、固体支持体は広
範囲の材料より作ることができる。支持体は細孔性であ
ることが望ましい。

本発明によれば水溶液もしくは懸濁液として固体支持体
の試験領域に塗布されるバインダは色原体特に螢光材料
であるマーカと混合される。その後バインダと色原体の
混合物は例えば斑点、正方形、円、三角形もしくはその
他の任意の形の固体支持体の規定試験領域に対して試験
領域にバインダと検出可能なラベルの双方を支持するよ
うに塗布される。当業者はバインダを固体支持体へ確実
に付着させるための連結技術を種々知悉しているが、吸
着が望ましい。バインダを吸着する手順はグラビア印刷
、シルクスクリーニングその他の従来印刷方法を含めて
材料の模様コーチングに普通使用されるものであれば何
でもよい。マーカとして使用される望ましい材料はバイ
ンダの結合能力に不利な影響を及ぼさず支持体により吸
着可能な螢光材料である。適当な螢光材料の代表例とし
てアクリジンオレンジ、ビロニンＹ、テキサスレッド、
ローダミン６をあげるこ−とができる。かかる材料はバ
インダの結合能力に不利な影響を及ぼさず紫外線光にさ
らされるときに発見可能で肉眼で検出できない量使用す
ることができる。もしマーカとして使用される材料がバ
インダや対照と共に反応する基を含むばあいには、かか
る基は材料を添加する前にブロッキングすることができ
る。例えばそれらはマーカの反応部位と反応することに
よりバインダの生物学的活動に影響を及ぼしたり検定条
件下での非特定結合用部位を提供する虚れのあるそれ以
上の反応性を妨げるアミノ基源（例えばグリシン）を含
む緩衝液中に配置することができる。

バインダが固定支持体上に支持され終ると、マーカを検
出することＫより試験領域は背景領域から識別すること
ができる。かくして、例えば、うペルが螢光材料である
場合、支持体は適当な波長（例えば従来の紫外線灯から
出る紫外線光）の励起エネルギーにさらすことができる
。マーカは肉眼で検出可能な特性螢光信号を発すること
になろう。

対照を開いた実施例の場合、対照の溶液もしくは懸濁液
と使用マーカから識別可能なラベルが作成される。ラベ
ルは色原体、殊に螢光材料であることが望ましい。対照
の溶液もしくは憑濁液とラベルはその目的対照領域の固
体支持体に塗布される。その一部は試験領域とオーバラ
ップすることもできるしあるいは全（オーバラップしな
いようにすることもできる。対照が固体支持体に塗布さ
れたという事実とそれが塗布された領域とはラベルを検
出することにより、例えば螢光材料の場合材料を適当な
波長の励起エネルギーにさらすことＫより判定すること
ができる。

か（して、バインダは可視スペクトル内に特徴的な発光
帯を有し第１のカラー（例えば黄色）として観察できる
螢光材料を有する添加剤中の固体支持体に塗布すること
ができ、対照は可視スペクトル内に特徴的な発光帯を有
し第１のカラーと識別可能な第２のカラー（例えば赤）
として観察することのできる螢光材料を有する添加剤中
に塗布することができる。対照とバインダを塗布した後
、固体支持体は適当な波長の励起エネルギーにさらすこ
とによって両カラーの存在を検出しそれらの各領域にバ
インダと対照の双方が存在することを判定することがで
きる。マーカとラベルの励起波長はスペクトルの紫外線
範囲にあり、紫外線輻射がない場合には、それらは無色
であるか比較的弱い強さで着色される。

分析液は分析液とトレーサを含むと疑われるサンプルを
試験領域に塗布することにより（定性的かつ定量的に）
判定することができる。サンプルはバインダが支持され
る試験領域より小さいか、等しいか、あるいはそれより
大きな領域に塗布することができる。検定の化学により
反応が生じトレーサから検出可能な信号の存在もしくは
欠如は分析液の存在を示す。

検定化学は本発明とは無関係であるが、検定化学は特定
の結合対間の相互作用を使用して分析液の存在を判定す
ることが望ましい。望ましい種類の特殊結合対は抗原／
抗体の対である。

望ましい検定化学の場合、トレーサはタグがそれに連結
された特殊結合対の一員である。例えば、もし検定が競
合的なフォーマットであるばあい、トレーサの特殊結合
部分は固体支持体上に支持されるバインダにより結合さ
れるものとなろう。もし検定がサンドインチフォーマッ
トであるならばトレーサの特殊結合部分は分析物質によ
り結合されることになろう。

かかる検定フォーマットと増幅手続は当該技術において
は一般的に知られていて本発明の完全な理解にとってそ
れ以上の説明は不要である。

トレーサのタグ部分は例えば酵素や色原体を含め広範囲
の材料のうち何れでもよい。もしタグが（比色酵素タグ
や着色材料如よる直接検出における如く）色により検出
可能な場合には、その色はマーカとラベルが存在すると
ころで観察可能であるべきである。現在望ましいのは色
原体を含むリポソームの如き着色粒子ラベルである。適
当なタグの選択は当業者の範囲内にあると考えられる。

検定技法においてトレーサは少なくとも固体支持体の試
験領域に塗布され、対照が使用される場合にはトレーサ
は少なくとも対照領域に対しても塗布される。トレーサ
は試験領域と対照領域よりも大きな領域に塗布するとと
ができる。

正対照が使用される場合にはトレーサの特殊結合部分は
正対照により結合されることによってトレーサのタグは
対照領域内で検出さるべきである。

更Ｋ、もし分析物質がサンプル内に存在する場合には、
トレーサのタグは試験領域内で検出さるべきである。

本発明の特に望ましい実施例によれば、マーカを有する
添加剤中のバインダは一定濃度の固体支持体の表面に位
置する試験領域上に支持されることによってそのタグ部
分として可視粒子ラベルを含むトレーサは検定条件下で
それ以上の処理なしに支持体上に見ることができる。

試験領域上に支持されたバインダはｄあたり少なくとも
１マイクログラム、ごく普通にはｄあたり少なくとも１
０マイクログラム、特にｄあたり４０マイクログラム存
在することが望ましい。試験領域と背景領域の残留結合
容量は検定中に使用される材料を特に結合しない一つも
しくはそれ以上の種類のプロティンと共に固体支持体を
処理することＫより飽和もしくはブロッキングすること
ができる。かくして、例えば、残留結合容量は牛の血清
アルブミンを使用することによりブロッキングすること
ができる。湿潤剤を試験領域に塗布することもできる。

成る場合にはバインダ（特に抗体）を試験領域に塗布す
るさいポリヒドロキシ化合物（例えばグリセロール、エ
リスリトール、ソルビトール）ヤ砂糖（例えばグルコー
ゼやスフローゼ）が抗体溶液内に含まれ検定中に非特定
結合（偽ポジ）を防止する。

使用される固体支持体はバインダが一定濃度（重量／単
位面積）で支持体上に支持できるような表面積（材料の
面積／単位重量）を有することによってトレーサが検定
条件下で見えるようになっている。本文中に使用される
ような「可視的」という語は計器を用いずに材料を肉眼
で検出できることを意味する。

試験領域は例外的に良好な結果を与えるニトロセルロー
ズ紙有するセルローズエステルより形成することが望ま
しい。「ニトロセルローズ」という語はセルローズの硝
酸エステルヲ指シ、ニトロセルローズだけ、あるいは硝
酸その他の酸類の混合エステル、殊に脂肪族カルボキシ
ル酸で１〜７の炭素原子を有するものがあるが酢酸が望
ましい。

硝酸のみ、もしくは硝酸と酢酸の如き別の酸の混合物に
よりエステル化したセルローズから形成されるシートは
しばしばニトロセルローズ紙と呼ばれる。

ニトロセルローズは試験領域（と固体支持体全体）にと
って望ましい材料であるが、バインダを上記の如き濃度
で支持するために十分な表面積を有するその他の材料も
また使用することができる。

上記の如く、望ましいトレーサをつくりだすさい特殊結
合対の一員は可視的な粒子ラベルをつけられる。望まし
い粒子ラベルはのうで色物質を備えることにより検定中
に使用したときトレーサは着色物質を除去するために０
５を破壊せずに見ることができる。

トレーサの特殊結合部分をラベル付けするために使用さ
れるのうはリポソーム（−壁もしくは多数層）やポリマ
マイクロカプセル（例工ばコアサペーション（ｃｏａｓ
ｃｅｒｖａｔｉｏｎ　）や界面ポリマ化により作られた
もの）を含む広範囲のの５のうちの何れでもよい。

ポリママイクロカプセルはマイクロカプセルが形成され
る溶液がタグを備えることによってポリママイクロカプ
セルの内部がタグも備える点を除き当業者に公知の手続
きにより作ることもできる。

かかるマイクロカプセルの作成は「マイクロカプセル化
方法と用途ｊ（ジャン、Ｅ、グアンデガー編、１９７４
年プレナムプレス出版）中の例に開示されている。

当該技術において公知の如く、リポソームはホスホリピ
ド、グリンリピド、ステロイド、比較的長鎖のアルキル
エステル、例えばアルキルホスフェート、脂肪酸エステ
ル、例えばレシチン、脂肪アミン等を含む広範囲のリピ
ドより作成することができる。脂肪性材料の混合物は中
性ステロイド、帯電両親媒性物質およびホスホリピドの
如き脂肪性材料の組合せの如きものを使用することがで
きる。ホスホリピドの例示としては、レシチン、スフィ
ンゴメリン、ジパルミトイル等をあげることができる。

代表的ステロイドとしてはコレステロール、コレスタノ
ール、ラネステロール等があげられる。帯電両親媒性化
合物としては普通１２〜３０の炭素原子を含むが、モノ
−もしくはジアルキルホスフェートエステルもしくはア
ルキルアミン、例ｔばジセチルホスフェート、ステアリ
ルアミン、ヘキサデシルアミン、ジラウリルホスフェー
ト等をあげることができる。

リポソームのうはタグを含めて水溶液中で作成されるこ
とによりのうはその内部にタグを含むことになろう。リ
ポソームのうはタグをのうの外部から除去することに続
いて溶液中を精力的に攪拌することによりて作成するこ
とができる。

リポソームの作成に関する詳細は米国特許第４．３４２
．８２６号およびＰＣＴ国際公開第ＷＯ３０１０１５１
５号に説明されているが本文中に参考用に組込んである
。

トレーサは疎水性染料もしくは顔料の水性分散液もしく
はかかる染料や顔料によりコーテングしたポリマ核によ
り特殊結合棟をラベリングすることＫよっつ（ることも
できる。かかるラベルは米国特許第４，３７３．９３２
号中により詳しく説明されているがここに参考用に組込
んである。その特許により作られるトレーサは本発明の
トレーサとしても使用することができる。

可視粒子ラベルは特に球形の着色ポリスチレン粒子の如
き可視ポリマ粒子とすることができる。

その他の適当な粒子ラベルの代表例はフェリチン、フィ
コエリスリンその他のフィコビリープロティン、析出性
もしくは不溶性金属もしくは合金、かび、藻類もしくは
細菌性の顔料もしくはその誘導体（例えばバクテリアク
ロロフィル）、植物材料や誘導体等の如きものを含む。

トレーサの特殊結合部分は特殊結合種と粒子ラベルの選
択に応じて当該技術において全体として仰られている手
続によって本発明に使用されるトレーサをつくりだすべ
（粒子ラベルをつけることができる。かかる技法は共有
結合、誘導化もしくは活性化等を含む。バインダかのう
をラベル付けされるトレーサをつくりだす際、のうは特
殊結合種により誘導された成分よりつくりだされるため
、つ（りだされた時のりは特殊結合部分に結合される。

か（してトレーサは特殊結合部分と粒子ラベル（同位元
素、酵素および種々の螢光材料の如き非固体ラベルに対
する固体および固体状の）から成ることが望ましく、粒
子ラベルは分析物質の存在もしくは量がそれ以上処理さ
れず、また計器を使用しなくとも例えば粒子ラベルとし
て着色材料を含むリポソームを使用することによって判
定できるように検定条件の下で可視的なタグを提供する
。

実施例に従い試験装置は共同附与された米国特許第０１
６，８４６号と−（弁護士ドケット番号Ｐ−１３２６）
中に述べられているように構成される。装置は一定＃に
度の試験領域内にバインダを支持するための細孔性固体
支持体を含むことにより検定内に使用されるトレーサが
試験領域に結合されたとき検定条件の下でそれ以上処理
せずとも可視的となるようＫすることが望ましい。それ
はまた試験領域を流れる検定試薬を制御するために一定
の細孔サイズを有する細孔性材料により形成される細孔
性固体支持体下方にフロー制御層を備えている。また試
験装置は吸収性材料から形成された吸収層をフロー制御
層から隔てるための細孔性スペーサ層を備えることが望
ましい。

吸収層は検定中に試験層に加えられた反応液を吸収する
に十分な吸収層を有する。更に、吸収材料は試験層内の
流れに備える働きを行う。

細孔性固体支持体全体は試験領域内に使用される材料よ
り形成することができる。その代わり、試験領域だけを
かかる材料より形成することもできる。

更に試験装置は検定試薬がその層内な流れるように使用
されるため、固体支持体は検定中に使用される粒子ラベ
ルの大きさよりも大きな細孔サイズを有することにより
て検定条件下で結合しないトレーサの部分が吸収層内に
流れ込み試験領域では見えないようになる。−船釣にい
って、固体支持体は少なくとも２μｍ、殊に少なくとも
５μｍの細孔サイズを有すべきである。−船釣にいって
、細孔サイズは１２μｍを超えない。しかしながら、先
に述べた細孔のサイズが望ましいとしても検定中に使用
される材料に応じて他の細孔サイズを使用することもで
きることを理解されたい。

試験装置のフロー制御層は試験層内を流れ吸収層内へ至
る検定試薬の流量を制御するために使用される細孔性材
料より形成される。フロー制御層を形成するさいに使用
される細孔材料は固体支持体を形成するために使用され
ｍ科の細孔サイズより小さい縦孔サイズを有することが
望ましい。か（して事実上、フロ−制御層はより大きな
細孔試験領域内を流れる検定試薬の流量を少な（する働
きをする。

フロー制御層の厚さと共にフロー制御層の細孔の大きさ
は試験領域内を流れる検定試薬の流れが迅速かつ正確な
検定と共に必要な感度を与えるような形で制御されるこ
とが望ましい。

一つの特に望ましい実施例によれば試験装置内を流れる
流量を制御するための層は試験領域内を流れる材料の流
量が少なくとも３．５ｍｌ／ｍｉｎのオーダにあり全体
として２ｍｌ／ｍｉｎより大きくないような具合に寸法
をとっている。

フロー制御層は非繊維性材料のポリカーボネートより形
成され試験層からフロー制御層下方の層へ単一方向の流
れを可能にする均一な大きさの細孔もしくはチャネルを
有している。

試験装置のフロー制御層の直下にはスペーサ層が設けら
れる。フロー制御層と吸収層との間でスペーサとして機
能するのは細孔材料である。細孔性スペーサ層が試験装
置内を流れる流れを制限する働きを行わないようにフロ
ー制御層の細孔サイズを有する。

試験装置は検定中に試験装置内へ流入する液を吸収する
に十分な吸収能力を有する細孔性材料である吸収層を備
える。吸収層はまた試験領域に加えられる試薬を吸収層
内へ流入させる駆動力（例えば濃度差）を提供する働き
も行う。

かくして、本発明の実施例によれば検定はトレーサのタ
グ部分が可視的な粒子の５であって検定が上記の如（異
なる特性を有する複数の材料層から形成された試験装置
で行われ、検定試薬が試験装置の試験領域内を流れるよ
うなトレーサを使用する。

試験装置の種々の層を形成する際に使用される材料は上
記の如き特性を有するように選択される。

更に、かかる材料は分析物質もしくはトレーサの特定さ
れない結合をつくりだすべきではない。材料は本質的Ｋ
かかる特性を有するか、あるいはその代わり材料は非特
定結合を、例えば適当なプロティン（牛の血清アルブミ
ンの如き）による処理を防ぐために処理することができ
る。試験装置の固体支持体はまた試験層内を流れ吸収層
内へ流入する検定試薬の流れを適切にするために湿潤剤
により処理することも望ましい。湿潤剤の代表例はスフ
ローゼ、グリセロール、グルローゼ、およびンルビトー
ルより成る。固体支持体はプロティンと湿潤剤、例えば
牛の血清アルブミンとスフローゼの水溶液により同時に
処理することができる。

全体として試験装置はカードや容器の如き適当なホルダ
上もしくはその内部に取付けられる。テスト装置用に対
して適当なホルダを選択することは当業者の範囲内にあ
ると考えられる。

更に、試験装置は検定試薬を試験領域に向けるアパーチ
ャを有するカバーを備える。か（して、例えばテスト装
置は試験領域をおおうアパーチャを含むカードで被覆す
ることによって液体サンプルと種々の試薬が直接試験領
斌に加えられるようにすることができる。その代わり、
試験装置をサンプルと検定試薬を試験領域へ向けるため
の適当なアパーチャを備えた容器内に配置することがで
きる。バインダを有する添加剤中にマーカを使用するこ
とによりて試験領域を識別することができるためそれは
アパーチャに対して適当に位置決めすることができる。

さて図面について述べると全体を１０で示した試験装置
はバインダを支持する試験領域を有する全体を１１で示
した固体支持体から成る。材料はニトロセルローズで２
ミクロンを超え全体として１２ミクロン未満の細孔サイ
ズを有することが望ましい。層１１の直下には０．６ミ
クロンの細孔サイズを有する単一方向フロー制御ポリカ
ーボネート膜から形成されたフロー制御層１２がある。

フロー制御層１２の直下にはスペーサ層１３が設けられ
る。スペーサ層１６は細孔性材料より形成され全体とし
てフロー制御層１２の細孔サイズより大きな細孔サイズ
を有する。層１３は例えば不織ポリアセテートから作る
ことができる。スペーサ層１３の直下にそれと接触して
吸収層１４がある。吸収層１４はセルローズ材料、例え
ば吸収性セルローズ紙より形成することが望ましい。

かくして、試験装置は層１１．１２．１６．１４より成
り、それらは組合わされて一体の装置１０をつ（りだす
ことが望ましい。層は例えば層どうしを互いに縫うこと
によって互いに取付けることができる。然しなから、そ
の他の取付方法も可能である。

特別に示されている如く、試験装置１０はペース１５と
カバー１６から成る試験容器内にある。

ペース１５は装置が容器内に入るような深さを有する。

実施例では容器は丸り隅を有する全体として３角形の３
辺を有することが望ましい。

カバー１６は固体支持体１１の試験領域１８上に位置す
る適当なアパーチャを有する上昇部分を備える。試験領
域を包囲する支持体１１の背景領域の一部はまたアパー
チャ１７により形成される開口内にある。

カバー１６はペース１５の側部から上部方向に延びる突
起１９により層１１上に支持される。突起１９は装置１
０の側部の通気を受けもつエアスペース２０を与えるよ
うな十分な高さを有する。

エアスペース２０は突起１９、カバー１６、およびペー
ス１５により仕切られている。

アパーチャ１７を包囲するカバー１６の上昇部分は着色
領域２１を備え、その色はカバー１６のそれと試験領域
１８内に発生する色と対照的にすることによって色によ
り全体として決定される試験結果をより読み取ることが
できるようになってイル。ペース１５、カバー１６、お
よび着色領域２１はプラスチック材料により作ることが
望ましい。

試験装置１０をサンドインチ検定に使用する場合、バイ
ンダは分析物質が判定されるようにした抗体とすること
ができる。もしサンドインチ検定を７−ケンスモードで
作動する場合には分析物質を含む疑いのあるサンプルは
アパーチャ１７を流れる試験領域に加えられることによ
ってサンプルは試験装置内を吸収層１４へ流れるときに
試験領域１８内でバインダと接触する。サンプル内に存
在する分析物質は領域１８内でバインダと特別に結合す
るようになろう。

その後、トレーサはアパーチャ１７を流れる試験装置に
附与される。トレーサは分析物質と結合し何れの非結合
部分も試験装置内を吸収層１４へ流れる。

もし望むならば、トレーサの添加前に水溶液を試験装置
１０に加えることができる。同様に、トレーサを加えた
後、水溶液を試験装置に加えることによって領域１８内
の錯体へ特別に結合しないトレーサを吸収層１４内へ洗
出することができる。

領域１８における色の存在は分析物質の存在を表わし、
もし検定が定量的検定である場合にはかかる色の強さは
サンプル内に存在する分析物質の量を表わす。

さて第４Ａ図を見ると固体基板１１が試験領域１０１と
対照領域１０２を備える。試験領域１０１は検定中に使
用されるバインダと螢光材料の如きマーカの混合物を備
える。対照領域１０２はラベル、殊に第２の螢光材料を
有する添加剤中の分析物質対照を有する。上記第２の螢
光材料は紫外線エネルギーにさらされた螢光信号を発す
る。

試験製品を製造する際、固定支持体１１は最初バインダ
と第１の螢光材料となるマーカとの混合物により処理さ
れ混合物を試験領域１０１に加える６その後、対照と第
２の螢光材料となるラベルの混合物が対照領域１０２に
加えられる。図の如（、対照領域１０２の方が小さ（領
域１０１内罠ある。分析物質とバインダがその各々の領
域内に堆積したとい５．１！実はその後固体支持体１１
を紫外線光にさらし適当な領域内の各々の螢光発光色の
存在を判定することによって判定される。

その後、固体支持体１１はその他の層と試験容器内に位
置決めされた装置１０と試験領域１０１がアパーチャ１
７下部にあるように組合されることにより検定試薬はバ
インダと対照とが支持される領域に向けられる。

第４Ｂ図には対照領域１０２′が対照が堆積し試験領域
１０１′かバインダが堆積する位置にあるような代替例
が示されている。明らかな如く、その各々の領域におけ
る対照とバインダの存在は第４Ａ図について上述したよ
うに判定される。

第４Ｂ図の実施例でもし分析　が存在しなげれば領域１
０２′だけがトレーサにより着色されることにより層１
１上に負の符号を示す。もし分析物質がサンプル内に存
在するならば、両方の領域１０１′、１０２′が着色さ
れることによってプラスの符号が表示されサンプル内に
分析物質が存在することを示す。

以上本発明を図面に示す実施例について説明してきたが
本発明は堆積するバインダ、選択に応じて特に示したも
の以外の固体支持体上の対照にも等しく適用することが
できる。かくして、例えば、試験装置は一層もしくは二
層でもよい。同様にして試験装置は図面のような膜以外
のものでもよい。

以上のまたそ、の他の変形も当業者にとって明らかであ
ろう。

例 スルホル・ホダミン１０１のスルホニルクロライド誘導
体（テキサスレッドダイとしてモレキュラープローブキ
ャット、Ｔ６５６かも入手可能）は０６１Ｍグリシン緩
衝液ｐＨ８，０内で２時間装置された後うさぎの反群Ａ
ストレプトコッカス抗体（ｎ−アセチルグルコサミン親
和性純化）と０．５〜２０μｐ／ｍｌにわたる濃度中で
組合わされる。別個にＡ群ストレプトコッカス抗原が亜
硝酸（６０゜μｌ　ＨＣｌ　（０，０１Ｍ）で４０μｌ
　Ｎ　ａ　Ｎ　０２（４Ｍ）と４０ｐｌ　トリス緩衝液
（ＩＭ、トリズマＴＭ塩基（シグマ）と４　Ｍ　Ｎ　ａ
　Ｃｌを有したもの）と共に抽出される。抽出された抗
原にはグリセリン緩衝液（９０，１Ｍ　　ｐＨ８，０）
中のローダミン６Ｇ染料（アライドキャット、６６６）
が加えられ４μ９／ｒｎｌより小さな濃度を提供する。

上記溶液はそれぞれニトロセルローズ膜（シュライヒヤ
ー＆シーエル、細孔サイズ３ミクロン）に加えられ長波
（２９０−３５０ｎｍ）の紫外線励起の下、赤を螢光さ
せるテキサスレッドが明るい黄を螢光するローダミン６
Ｇから識別できる。

２つの色の存在は抗体バインダと抗原の正対照の配置を
識別し区別する。抗原正対熱と螢光材料の混合物と共に
抗体と螢光材料の混合物を含むニトロセルローズがトレ
ーサかスルホ−ローダミンＢダイを含むリポソームに共
有結合された親和性純化した抗原（うさぎＡ反群ストレ
プ）であるＡ群ストップ抗体を検出するためにサンドイ
ッチ検定内で使用される。（このトレーサを作る手続は
本文中に参考用に組込んだ許可済米国第５７９．６６７
に相当する南アフリカ特許第８４／９３９７号中に記述
されている。

ニトロセルローズ支持体上に抗原バインダと抗体正対熱
を有する螢光材料の存在は５×１０″生体／　ｍｌの感
度に不利な影響を与えない。

本発明は広範囲の分析物質を判定するための手順や製品
に適用することができる。分析物質の種類の代表例とし
て治療薬と乱用系を含む薬、ホルモン、ビタミン、プロ
ティン、（全ての級の抗原を含む）、ペプチド、ステロ
イド、バクテリア、かび、ビールス、寄生生物、バクテ
リアの成分や産物、かび、ビールス、寄生生物、あらゆ
るタイプのアレルギン、正常もしくは悪性の細胞の産物
もしくは成分をあげることができよう。特殊の例として
はＴ、；Ｔ、；ジゴキン、ｈＣＧ、インシュリンテオフ
ィリン、ルティンホルモン、ストレプトコー　スビオジ
ーンズ（Ａ群）、ヘルペスシンプレクス１１１１、シト
メガロビールス（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏ　−ｖｉｒｕｓ
）　、ルベラ、クラミジア、カンジダアルビ力と１．の
如き種々の病状を惹起もしくはそれらと関連する生物を
あげることができよう。分析物質は例えば唾液、尿、血
清、大脳髄液、例えばのどからのスワブサンプルを含め
て種々のサンプルで判定することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明を組込んだ試験装置の上面図、第２図は
第１図の試験装置の側面図、 第６図は第１図の線３−６に溢って描いた断面図、 第４Ａ図と、第４Ｂ図はバインダと対照を含む第（外４
名） ＦＩＧ、４Ａ ＦＩＧ、４Ｂ 手続補正書助力 昭和６３年特許願第２５４６９４号 ２、発明の名称 検体分析用試験装置およびその製造方法３、補正をする
者 事件との関係　　　特許出願人 住所 名　称　　ベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパ
ニー４、代理人 住　所　　東京都千代田区大手町二丁目２番１号新大手
町ビル　２０６区

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、テスト領域およびバックグラウンド領域を有する多
   孔質の固体支持体と、該固体支持体のテスト領域上に支
   持された検体用バインダ及びマーカの混合体と、を備え
   て成る検体用分析試験装置。 ２、請求項１に記載の検体用分析試験装置において、前
   記固体支持体が対照領域を有しており、更に該試験装置
   が、前記固体支持体の制御領域上に支持された分析対照
   体および前記マーカとは識別し得るラベルの混合体を備
   えていることを特徴とする検体用分析試験装置。 ３、請求項１に記載の検体用分析試験装置において、前
   記対照体は正の検体対照体であることを特徴とする検体
   用分析試験装置。 ４、請求項１に記載の検体用分析試験装置において、前
   記固体支持体は孔を有するケーシングの中に設けられ、
   また前記試験領域は前記孔と整合して設けられているこ
   とを特徴とする検体用分析試験装置。 ５、対照領域の少なくとも一部がテスト領域とオーバー
   ラップすることを特徴とする請求項３記載の検体用分析
   試験装置。 ６、検出可能なマーカが色原体であることを特徴とする
   請求項１乃至５のいずれかに記載の検体用分析試験装置
   。 ７、色原体が蛍光材料であることを特徴とする請求項６
   の検体用分析試験装置。 ８、バインダが抗体である請求項１乃至７のいずれかに
   記載の検体用分析試験装置。 ９、バインダが抗原である請求項１乃至７のいずれかに
   記載の検体用分析試験装置。 １０、検体分析に使用する試験装置を製造する方法にお
   いて、 多孔質の固体支持体を設け、 該固体支持体のテスト領域をバインダとマーカの混合物
   と接触させ、バインダとラベルを試験領域に支持するこ
   とからなる方法。 １１、支持体をマーカと識別可能な対照とラベルの混合
   物と接触させることから成る請求項１０に記載の方法。