JPH01197445A

JPH01197445A - 乳癌診断剤

Info

Publication number: JPH01197445A
Application number: JP63020379A
Authority: JP
Inventors: Akiko Kubodera; 久保寺　昭子; Toichi Tanaka; 田中　東一; Yukimichi Komori; 小森　幸道
Original assignee: NIPPON MEJIFUIJITSUKUSU KK; Nihon Medi Physics Co Ltd
Current assignee: NIPPON MEJIFUIJITSUKUSU KK; Nihon Medi Physics Co Ltd
Priority date: 1988-01-29
Filing date: 1988-01-29
Publication date: 1989-08-09
Also published as: US4888163A; AU2891389A; AU613698B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、免疫学並びに癌の診断分野に属する。

さらに詳しくは、ラジオアイソトープで標識した抗体を
用いて乳癌をイメージングし１診断する方法に関する。

〔従来の技術〕

従来、癌の非侵聾的核医学検査を目的としてクエン酸ガ
リウム（６？　に　ａ　）が常用されている。しかし。

クエン酸ガリウム（６７にａ）は、癌に集積する性質を
有するものの、以下に列記するような欠点を有している
。すなわち。

（１）癌部位への特異性が低く、かつガリウム−６７の
持つエネルギー特性から鮮明なシンチグラムが得に（い
こと。

（２）全身からの放射能消失が遅いため、投与から撮像
まで相当の日数を必要とすること。

（３）比較的長半減期核種（半減期　７８．１時間）で
あるため、患者への被曝線量が無視し得ないこと。

そのため、核医学分野においてはより特異性が高く、よ
り早期の診断が可能なイメージング剤の研究開発に力が
注がれてきた。

その一つが癌関連マーカーに対して特異性の高い抗体に
放射能標識をし、癌イメージングを行う技術である。さ
らに、特異性の高い抗体を大量に得る方法として、抗体
産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、ハイプリドーマ（融合
細胞）を作成し、これを培養することによりモノクロー
ナル抗体を産生ずる方法をミルシュタインらが発表（Ｎ
ａｔｕｒｅ。

Ｖｏｌ、２５６．ｐ、４９５　（１９７５））　して以
来１種、ＭＤ癌関連抗原に対する抗体が作製され、その
モノクローナル抗体による癌イメージングが盛んに試み
られた。

このようなアイソトープ標識抗体によるイメージングを
総称するため「ラジオイムノシンチグラフィーｊという
言葉も作られた。

し゛かし、未だ種々の問題（当該標識抗体の癌への集積
に時間がかかり、バックグラウンドの消失が遅い、集積
率が低い、癌組織以外への集積）のため実用化されてい
ないのが現状である。

一方、乳癌診断に関する研究は、前記のようなラジオイ
ムノシンチグラフィーよりもむしろ、ステロイドホルモ
ンリセプターに特異的な物質９例えば、エストラジオー
ル誘導体の放射性ヨウ素標識体の研究が活発になされて
きた（Ｒ，Ｎ、Ｈａｎｓｏｎ等。

Ａｍｅｒｉｃａｎ　　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　　　５ｏｃ
ｉｅｔｙ　　　Ｍｅｅｔｉｎｇ　　　Ａｕｇｕｓｔ３−
２８　＋１９８１＋ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　Ｎ、Ｕ、Ｃ，
Ｌ、５６；　Ｋａｂａｌｋａ。

！。

Ａｐｐｐｔｃａｔｉｏｎｓ　　ｏｆ　　Ｎｕｃｌｅａｒ
　　ａｎｄ　　Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　　。

Ｌａｍｂｒｅｃｈｔ、Ｒ，Ｍ、Ｍｏｒｃｏｓｎ、Ｅｄｓ
、Ｎｅ１ｎａｒｋ、Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓ’ｙ。

Ｐｅｒｇａｍｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、１９８１．　Ｃｈａｐ
、　１７　；特開昭６０−７８９９５号公報）。

このようなりセブターに特異的な放射性診断剤を用いて
、生体内のりセプターの変化（癌）を測定すること、あ
るいは、このような変化を描出し診断を行うには、該診
断剤が以下のような条件を満足することが必要といわれ
ている。すなわち。

ｌ）リセブターに対して高い親和力及び特異性があるこ
と。

２）比放射能が高いこと。

３）標識核種が生体内で遊離しないこと。

しかし、未だこれらを満足するような放射性診断剤は開
発されていない。

〔発明が解決しようとする課題〕

ラジオイムノシンチグラフィーにおいては、未だ特定の
癌細胞にのみ反応する抗体は見つかっていないのが現状
であり、すなわち、癌組織だけでなく正常組織とも反応
するため、癌組織のイメージングができないのである。

一方、乳癌組織のエストロゲンリセプターの有無は、再
発進行乳癌のホルモン療法の効果と相関し、その効果予
測に役立つことが認められ、現在すでに一部臨床に応用
されている。このように、ステロイドホルモンリセプタ
ーの有無と乳癌の生物学的性格が関連することが報告さ
れ、乳癌の増殖、転移、予後の判定をする手段として、
リセプターのイメージングは有用となる可能性があり、
現在放射性ヨウ素標識エストラジオール誘導体が、さか
んに研究されている。しかし、安定でしかも比放射能の
高い標識体を高収率で得ることができず、普及するに至
っていない。

そこで２本発明者らは前述のごとく、乳癌とステロイド
ホルモンとの間には非常に密接な関係があることに着目
し、抗エストロゲン抗体の乳癌に対する集積性を検討し
た。すなわち、エストロゲンの代謝物であるエストリオ
ール−３−サルフェート（以下、ｒＥ３　３ＳＪと略す
）に注目し。

ハプテン−ＢＳＡ複合体を調製し、動物に感作し。

抗Ｅ３−３３抗体を得た。この抗体のｌ−１２５標識体
の乳癌への集積性を調べたところ、驚くことに癌ｍ織対
正常組織が非常に高いことを見出した。

しかも、放射性ヨウ素標識エストラジオール誘導体のよ
うに高比放射能のものが必要でなく、製造が容易である
特徴を有する。

〔課題を解決するための手段〕

本発明によって提供される新規な乳癌イメージング剤は
、ニス１−ロゲンの代謝産物であるＥ’ｌ　−３８に対
する抗体に、核医学的診断に適した放射性ヨウ素（１−
１３１、Ｌ１２３　）＋　ガリウム−６７、ガリウム−
６８，タリウム−２０１，インジウシム−１１１および
テクネチウム−９９ｍなどを標識することにより得られ
る。

〔作用〕

従来から研究されている。抗体を用いた癌イメージング
は、癌組織内に産生された癌関連抗原の有無だけを見て
いることになるが１本発明によるイメージング剤は、ス
テロイドホルモンリセプターイメージング剤と同様に、
乳癌の機能あるいは増殖能を把握しうる可能性がある。

本発明に使用されているＥ３−３３抗体は、先に本発明
者らが発明したもの（特開昭６１−９７３００号及び特
開昭６１〜１３２８６７号）であり、その製造法は、当
該明細書に詳しく記述されている。なお。

その概略を示すと次のとおりである。

本発明者らが、初めて合成した新規物質（前記明細書に
合成法の詳細が記載されている）である下式で表される
エストリオール−３−サルフェートの６位における蛋白
質複合体く以下、ｒＥｓＰ複合体」と略す）を用いるこ
とにより、Ｅ３−３８に特異的な抗体が産生じ得る。

ＨＡ　　（ＣＨｇ）　ｎ−Ｃ０ＮＩＩ　　Ｐ〔式中、Ａは
　−Ｎ−０−または−〇−ＣＯ−。

ｎは１〜４の整数、−ＮＨ−Ｐは蛋白質からアミノ態水
素原子１個を除去した残基を表す。〕すなわち、このＥ
ＳＰ複合体をを椎動物（ウシ。

ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、マウスなど）の
生体に非経口投与し、該生体内に抗体を産生せしめる。

その後、該生体から体液（例えば血液）を採取し、必要
に応じ不純物を除去することにより得られる。また、零
ＥＳＰ複合体を用いて。

ミルシュタインらのモノクローナル抗体を作る方法（Ｎ
ａｔｕｒｅ　２５６．４９５〜４９７　（１９７５））
により製造されるＥ３−３３に対するモノクローナル抗
体も本発明に好適に用いられる。さらに、それら抗体の
キメラ化した抗体、さらにはヒト型の抗体についても本
発明をより好適に実施し得る。

次に、前述の放射性同位元素の当該抗体への標識化法に
ついてであるが、それぞれの放射性同位元素の種類に応
じて公知の方法を選択することができる。例えば、放射
性ヨウ素については、クロラミンＴ法、塩化ヨウ素法、
ラクトペルオキシターゼ法、ヨードケン法などが挙げら
れる（例えば昭和５６年１月３０日、丸善株式会社発行
［ラジオアイソトープ薬物代謝実験法」９５〜１０１頁
参照）。

その他の放射性同位元素については、二官能性配位子化
合物を抗体に共有結合させ、この縮合体に対して標識す
る方法が適用される。このような二官能性配位子化合物
の具体例としては、ジエチレントリアミン五酢酸サイク
リック酸無水物、エチレンジアミン四酢酸サクシイミド
エステル、デスフェリオキサミン（特開昭５６−１２５
３１７号）、１−（Ｐ−アミノアルキル）フェニルプロ
パン−１，２〜ジオン−ビス（チオセミカルバゾン）誘
導体（特開昭５９−４６２６４号）、２−プロピオンア
ルデヒド−ビス（チオセミカルバゾン）誘導体（特開昭
５９−１９３８７０号）などが挙げられる。抗体と二官
能性配位子化合物とのカンプリング法は２通常のカルボ
ジイミド法、酸無水物法、グルタルアルデヒド法などの
方法によれば良い。テクネチウム−９９ｍの標識に際し
ては、安定なキレート錯体を形成せしめるために、過テ
クネチウム酸塩を適当な還元剤（例えば塩化第−スズ、
フッ化第−スズ、ショウ酸第−スズ）により低原子価状
態（例えば、３，４．５価）変化させてやる必要がある
。

本発明の診断剤は１通常静脈内投与されるが。

核医学的適用目的に充分な放射能量と放射能濃度を有す
ることが必要である。例えば、放射性元素としてテクネ
チウム−９９ｍを使用した場合、投与時に約０．５〜５
．０ｍｌ　当り、０．１〜５０ｍＣ１の放射能濃度を有
することが望ましい。また、このような診断剤は、調製
後直ちに投与されてもよいが、好ましくは調製後適当時
間保存に耐えろる程度の安定性を有することが望ましい
。なおまた９診断剤には、必要に応じｐＨ調製剤（例え
ば酸、アルカリ。

緩衝剤）、安定剤（アスコルビン酸）３等張化剤（例え
ば塩化ナトリウム）などが配合されてもよい。

〔実施例〕

以下に実施例を示し１本発明を更に具体的に説明する。

参考例１゜エストリオール−３−サルフェートに対する抗体（Ｅｉ
　　ａｓ抗体）の作製ニーＥＳＰ複合体の１つである６−オキソエストリオール−
３−サルフェート〇−カルボキシメチルオキシムＢＳＡ
複合体　０．５ｍｇを殺菌した等張の塩類溶液０．２５
ｍ１に溶解し、フロイド完全アジュバント０．２５ｍ１
で乳化する。このエマルジョンをモルモットの各肩甲骨
の下および各大腿部に皮下注射する。皮下注射は、最初
の注射後の１４日目および２８日目に繰り返し、その後
３０日白目に行う。動物からブースター注射後１０白目
に採血する。血清を３５０Ｏｒｐｍで２０分間遠心分離
し。

−２５℃で貯蔵する。

参考例２゜抗体の精製（５０％硫酸アンモニウム分画）ニー前記抗
血清３００μｌにリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ：Ｏ，
ＯＩＭ、ｐＨ＝７．５）３００μｌを加え、さらに５０
％硫酸アンモニウム液（ｐＦｌ−７，５）６００μｌを
加え、４℃で１時間放置した。８０００ｒｐｍで２０分
間遠心分離を行い。

上清を除き沈殿物を得た。沈殿物に５０％硫酸アンモニ
ウム液６００μｌを加え、４°Ｃで１時間放置した後、
前記と同様の条件で遠心分離を行った。

この操作を２回繰り返した後、沈殿物にＰＢＳｌｍｌを
加え、ＰＢＳに対し４℃で１夜透析を行った後、凍結乾
燥を行うことにより精製Ｅ３−３３抗体を得た。

実施例１゜１２５１標識抗エストリオール−３−サルフェート抗体
（”Ｊ　　Ｅ３　３Ｓ抗体）の製造ニー参考例２で得ら
れたＥ３−３３抗体５μｇを０．０５ＭＩＪン酸緩衝液
２５μｌに溶解し。

Ｎａ”’Ｉ　（２００μＣｉ）および酸化剤としてクロ
ラミンＴ２０μｇを加え、０℃、１５秒間攪拌反応をさ
せた後、メタ重亜硫酸ナトリウム２００μｇおよびヨウ
化カリウム２ｍｇを加え２反応を停止させた。生成した
１２’ｔ−Ｅ３−３　Ｓ抗体をセファデックスＧ−２５
を用いてゲル濾過し、放射活性の溶出画分を集めて目的
とする”Ｊ−Ｅ３−３３抗体を得た。

実施例２゜富３■■標識Ｅ、−３３抗体の製造ニーＥ３−３３抗体
が２５　μｇ、　Ｎａ”’Ｉが１ｍＣ１゜クロラミンＴ
が１００μｇ、メタ重亜塊成ナトリウム１ｍｇ、　　ヨ
ウ化カリウム１０ｍｇである以外は実施例１と同様の方
法により目的とする＋１１１−Ｅｌ−３３抗体を得た。

実施例３゜＋１１１０標識Ｅｉ　　３Ｓ抗体の製造ニー参考例２の
ようにして得られたＥ３−３３抗体５ｍｇを０．０５Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ＝７．５）に溶解し、その液にモル
量で１０倍量のドータイト製ジエチレントリアミン五酢
酸サイクリック酸無水物（以下、ＤＴＰＡと略す）を加
え、室温にて一夜攪拌反応させた。この液を１Ｍ食塩液
と０．９％生理食塩液に対して透析を行い、さらに生理
食塩液で平衡化した。セファデックスＧ−２５で精製し
た。かくして得られたＥ、−３３抗体−ＤＴＰＡに塩化
インジウム（”　’　ＩｎＣ１ｚ）　　１　ｍＣｉを加
え１５分間反応させることにより目的とするＩ＋１１ｎ
標識Ｅ３−３３抗体を得た。

実施例４゜ ”’Ｉ−Ｅ３−３３抗体の乳癌ラットにおける体内分布
ニー乳癌ラットは、ＳＤ系雌ラットに１０ｍｇの７゜１２−
ジメチルベンズアントラセン（以下、　　ＤＭＢＡと略
す）の１０ｍｇ／ｍｌゴマ油を経口投与し、さらに１週
間後に同量を投与することにより誘導した。なお、ＤＭ
ＢＡ投与後約６０〜９０日後に乳癌誘導を確認した後、
以下の実験に供した。

実施例１で得た”ＳＩ−Ｅｌ　−３Ｓ抗体を前記方法に
より誘導した乳癌ラット（体重約１５０ｇ）に１．５μ
Ｃｉを尾静脈投与し、４８時間後に臓器を摘出して、各
臓器中の放射能および各臓器の重量を測定し、単位重量
当りの％（％Ｉ　Ｄ／ｇ）を求めた。一部の乳癌ラット
には１２５■−Ｅ３−３Ｓ抗体投与２４時間後にＥｅｌ
　　３５抗体に対する第２抗体（抗モルモットＩｇＧに
対するヤギ血清のＩｇＧ分画）を２５μｇ／２００μｌ
生理食塩液を静脈投与し、さらに２４時間後に解剖した
。

結果を表１に示す。

表１　　”５Ｉ−Ｅ３　３Ｓ抗体の乳癌ラットにおける
体内分布　　　（ＸＩＤ／ｇ　Ｘ　１０−’）平均±標
準偏差（ｎ＝３）以上のごと＜、”’Ｉ　−Ｅ３−３Ｓ抗体は他臓器に比
べ乳癌への集積性が充分高く、核医学診断目的に極めて
有用であることが確かめられた。

さらに、第２抗体を投与した場合、他臓器への集積性が
減少し、乳癌部位への集積性が増すという現象が認めら
れた。すなわち、乳癌対血液比が約４倍に上昇し、また
、乳癌対血液比も有意に上昇を示した。”’Ｉ　−Ｅ３
−３Ｓ抗体投与後に第２抗体を投与することにより癌組
織対他臓器比が上昇し、より鮮明なイメージが得られる
ことが示唆された。

実施例５゜、”’Ｉ−Ｅｆｆ　−３５抗体の乳癌ラットにおけるシ
ンチグラフィーニー実施例２で得た１３Ｊ−Ｅ、−３Ｓ抗体１２０μＣ４を
実施例３に示したごとく乳癌を誘導したラットおよび正
常ラットに静注し、投与後４８時間後および７２時間後
にガンマカメラ（品性製作所製ＬＦＯＶ）によりシンチ
グラムを得た。なお。

乳癌ラットに対しては、＋３°Ｉ−Ｅ３−３３抗体投与
２４時間後に、実施例３と同様に第２抗体（１，５ｍｇ
／２００ｍ１生理食塩液）を投与した。また、甲状腺へ
の遊離１　ｆｆ　＋　１−イオンの集積をブロックする
ために、”’Ｉ−Ｅ、−３３抗体投与２４時抗体投与２
比口投与した。

これによると、乳癌の描出は投与後４８時間においても
認められ，７２時間後においては乳癌部位のみがホット
スポットとして描出され．非常に明瞭なシンチグラムが
得られた。このことから本則は乳癌診断剤として非常に
有用であることが確かめられた（図１及至４参照）。

【図面の簡単な説明】

第１図は，正常ラットの投与後４８時間の全身シンチグ
ラム、第２図は，乳癌ラットの投与後４８時間の全身シ
ンチグラム、第３図は，正常ラットの投与後７２時間の
全身シンチグラム、第４図は，乳癌ラットの投与後７２
時間の全身シンチグラムであり，いずれも、生物の形態
を表す図面に代わる写真である。なお１図３，４の下部
の黒化は９尾静脈投与における投与ミスによる放射能残
留のためのものであり，特異的な”’Ｉ　　Ｅ：＋　　
３３抗体の集積ではない。また１図面の矢印は各々乳癌
の存在位置を示す。特許出願人　　日本メジフィジンクス株式会社実−回ｌ・昼シ」 −ゆ虻

Claims

【特許請求の範囲】

（１）放射性同位元素で標識されたエストリオール−３
−サルフェートに対する抗体からなる乳癌診断剤。
（２）エストリオール−３−サルフェートに対する抗体
がモノクローナル抗体である特許請求の範囲第（１）項
記載の診断薬。
（３）放射性同位元素がヨウ素−１３１、ヨウ素−１２
３、ガリウム−６７、ガリウム−６８、タリウム−２０
１、インジウム−１１１及びテクネチウム−９９ｍから
なる群から選ばれる、特許請求の範囲第（１）項記載の
診断剤。
（４）放射性同位元素がヨウ素−１３１、ヨウ素−１２
３、ガリウム−６７、ガリウム−６８、タリウム−２０
１、インジウム−１１１及びテクネチウム−９９ｍから
なる群から選ばれる、特許請求の範囲第（２）項記載の
診断剤。