JPH01140064A - Fixing liquid - Google Patents

Fixing liquid

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JPH01140064A
JPH01140064A JP62297394A JP29739487A JPH01140064A JP H01140064 A JPH01140064 A JP H01140064A JP 62297394 A JP62297394 A JP 62297394A JP 29739487 A JP29739487 A JP 29739487A JP H01140064 A JPH01140064 A JP H01140064A
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Abstract

PURPOSE:To obtain a fixing liquid making rapid fixing possible and excellent in fixing effect, by containing formaldehyde, methanol, citric acid, an alkali metal salt and water as a solvent. CONSTITUTION:A fixing liquid contains formaldehyde, methanol, citric acid, an alkali metal salt and water as a solvent. In the pref. form of the mixing liquid, as an alkali metal salt of citric acid, sodium citrate can be used. In a further pref. form, formaldehyde can be mixed as deodorized formalin containing a masking agent or neutral formalin. The penetration force of methanol added to formalin is added to that of formalin to increase the penetration and fixing speeds of the fixing liquid as a whole, and citric acid and the alkali metal salt improve the fixing effect of the cell membrane.

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は生体組織の検査に関し、より詳細には、標本
固定液、標本保存液として利用できる固定液に関する。
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial Field of Application] The present invention relates to the examination of biological tissue, and more particularly to a fixative that can be used as a specimen fixative or specimen preservation solution.

〔従来の技術〕[Conventional technology]

生体から採取した検体は、固定などの処理を受けて標本
として種々の組織検査に供される。この固定は、組織、
細胞の諸成分、諸形態をできる限り採取前と同じ状態に
保つために、適当な固定液で検体を処理して行われてい
る。
A specimen collected from a living body undergoes processing such as fixation and is used as a specimen for various histological examinations. This fixation is performed by tissue,
In order to keep the various components and morphology of the cells as much as possible in the same state as before collection, the specimen is treated with an appropriate fixative.

従来、固定液として、ホルムアルデヒド水溶液である局
方ホルマリン1容量部と水4〜9容量部の組成の10〜
20%ホルマリン液、上記ホルマリン液に炭酸カルシウ
ムまたは炭酸、マグネシウムを処理させた中性ホルマリ
ン液、局方ホルマリン100IIllと水9001とリ
ン酸1ナトリウムとリン酸2ナトリウムとの組成の10
%中性緩衝ホルマリン液、エタノールなどがある(「臨
床検査法提要」、第26版、XX■−6)。
Conventionally, as a fixative, 10 to 10 parts by volume of formalin, which is an aqueous formaldehyde solution, and 4 to 9 parts by volume of water are used.
20% formalin solution, a neutral formalin solution obtained by treating the above formalin solution with calcium carbonate or carbonic acid, magnesium, pharmacopoeia 10% formalin solution, composition of 100IIll of formalin, 9001 of water, monosodium phosphate, and disodium phosphate
% neutral buffered formalin solution, ethanol, etc. (``Clinical Test Methods Compendium'', 26th edition, XX■-6).

〔発明が解決しようとする問題点〕[Problem that the invention seeks to solve]

しかしながら、従来の固定液のうち、ホルマリンを主成
分とするホルマリン液では、組織の厚さ3〜5龍で1〜
20の固定完了時間がかかり、固定に時間を要する。ま
た、エタノールなどを主成分とする固定液では、2〜3
時間で固定できるものもあるが、適用範囲が狭く細胞収
縮、赤血球溶解などの固定目的を逸脱する変性を起こす
However, among conventional fixatives, formalin solution whose main component is formalin,
It takes 20 hours to complete fixing, and it takes time to fix. In addition, with a fixative whose main component is ethanol etc., 2 to 3
Some methods can be fixed over time, but their applicability is limited and they cause degeneration that deviates from the purpose of fixation, such as cell shrinkage and red blood cell lysis.

この発明は上述の背景に基づきなされたものであり、そ
の目的とするところは、迅速に固定することができると
共に、固定効果に優れた固定液を提供することである。
This invention was made based on the above-mentioned background, and its purpose is to provide a fixative that can be fixed quickly and has an excellent fixing effect.

〔問題点を解決するための手段〕[Means for solving problems]

本発明者は、上記の課題解決のために種々の研究試験を
行った結果、組織検査処理に際して用いる固定液として
、ホルマリン、メタノールおよびクエン酸またはその塩
を含む液を用いれば、この発明の目的達成に有効である
ことを見出し、この発明を完成するに至った。
As a result of conducting various research tests to solve the above-mentioned problems, the present inventor has found that if a solution containing formalin, methanol, and citric acid or a salt thereof is used as a fixative for tissue examination processing, the object of the present invention can be achieved. They have found that this is effective in achieving this goal, and have completed this invention.

すなわち、この発明の固定液は、ホルムアルデヒド、メ
タノール、クエン酸またはそのアルカリ金属塩、および
溶媒としての水を含むことを特徴とするものである。
That is, the fixative of the present invention is characterized by containing formaldehyde, methanol, citric acid or an alkali metal salt thereof, and water as a solvent.

この発明による固定液の好ましい態様において、クエン
酸のアルカリ金属塩として、クエン酸ナトリウムを用い
ることができる。
In a preferred embodiment of the fixative according to the invention, sodium citrate can be used as the alkali metal salt of citric acid.

この発明による固定液の好ましい一態様において、ホル
ムアルデヒドを、マスク剤を含む脱臭ホルマリンまたは
中性ホルマリンとして混和することができる。
In a preferred embodiment of the fixative according to the invention, formaldehyde can be incorporated as deodorized formalin or neutral formalin containing a masking agent.

〔作 用〕[For production]

上述の構成からなるこの発明では、理論的に明らかでは
ないが、ホルマリンに加えられるメタノールの浸透力が
、ホルマリンの浸透力に加算されて全体の固定液の浸透
、および固定の速度を増強し、クエン酸およびそのアル
カリ金属塩が細胞膜の固定効果を良好にならしめる。
In this invention having the above configuration, although it is not theoretically clear, the permeation power of methanol added to formalin is added to the permeation power of formalin to enhance the permeation of the entire fixative and the speed of fixation, Citric acid and its alkali metal salts have a good fixing effect on cell membranes.

なお、上述の記載は、この発明のより良い理解のためで
あり、この発明の範囲を限定するものではない。
Note that the above description is for a better understanding of the present invention, and does not limit the scope of the present invention.

〔発明の効果〕〔Effect of the invention〕

この発明によって次の効果を得ることができる。 The following effects can be obtained by this invention.

(イ) 迅速に固定することができると共に、固定効果
に優れた固定液を提供することができる。
(a) It is possible to provide a fixative solution that can be fixed quickly and has an excellent fixation effect.

(ロ) 安価なホルマリン、メタノールなどを原料とす
るので、製造コストを低減することができる。
(b) Since inexpensive formalin, methanol, etc. are used as raw materials, manufacturing costs can be reduced.

(ハ) 迅速に固定することができるので、検体採取後
短時間で標本ができ、病理診断確定までの時間を著しく
短縮することができる。
(c) Since the specimen can be fixed quickly, a specimen can be prepared in a short period of time after specimen collection, and the time required to establish a pathological diagnosis can be significantly shortened.

(ニ) 固定効果に優れているので、組織、細胞の諸成
分、諸形態をできる限り採取前と同じ状態に保つことが
できる。
(d) Since it has an excellent fixation effect, it is possible to maintain the various components and forms of tissues and cells as much as possible in the same state as before collection.

(ホ) この固定液は、脳組織を含む全ての材料に使用
でき、しかも、生検および9す検両方に適用できる。
(e) This fixative can be used for all materials including brain tissue, and can be applied to both biopsies and autopsies.

以下、この発明をより詳細に具体的に説明する。Hereinafter, this invention will be specifically explained in more detail.

この発明の固定液は、ホルムアルデヒド、メタノールお
よび、クエン酸またはそのアルカリ金属塩を含むことを
特徴とするものである。
The fixative of the present invention is characterized by containing formaldehyde, methanol, and citric acid or an alkali metal salt thereof.

ホルムアルデヒドは、通常、ホルムアルデヒドの水溶液
であるホルマリンとして用いる。この発明において用い
られるホルマリンは、特に、その濃度に制限はない。通
常用いることができるホルマリンは、37%以上、例え
ば、37〜40%のホルムアルデヒドを含有する局方ホ
ルマリンである。
Formaldehyde is usually used as formalin, which is an aqueous solution of formaldehyde. There are no particular limitations on the concentration of formalin used in this invention. Formalin that can usually be used is pharmacopoeial formalin containing 37% or more formaldehyde, for example 37-40%.

この発明で用いることができる好ましいホルマリンは、
ホルマリン原液に炭酸カルシウムまたは炭酸マグネシウ
ムを処理させた中性ホルマリン液、または、マスク剤を
含む脱臭ホルマリンである。
Preferred formalin that can be used in this invention is:
Neutral formalin solution obtained by treating formalin stock solution with calcium carbonate or magnesium carbonate, or deodorized formalin containing a masking agent.

ここで用いることができるマスク剤として、サリチル酸
メチル、メントールなどの付番剤がある。
Masking agents that can be used here include numbering agents such as methyl salicylate and menthol.

この中性ホルマリンを用いることにより、副生物である
ギ酸を中和・除去して良好な固定を確保し、脱臭ホルマ
リンを使用することにより、ホルムアルデヒドの臭いを
隠蔽することができる。
By using this neutral formalin, the by-product formic acid can be neutralized and removed to ensure good fixation, and by using deodorized formalin, the odor of formaldehyde can be hidden.

なお、この発明においては、ホルマリンとして使用する
ことが必須ではなく、最終製品である固定液中にホルム
アルデヒドを所定量含めれば良い。
In this invention, it is not essential to use formaldehyde as formalin, but it is sufficient to include a predetermined amount of formaldehyde in the final product, the fixative.

したがって、ホルムアルデヒドと他の成分とを混合した
後、水で希釈しても、またホルムアルデヒドと他の成分
と水とを同時混合しても、さらに、ホルムアルデヒドと
他の成分の水溶液とを混合して、目的の固定液を調製す
ることができる。
Therefore, whether formaldehyde and other components are mixed and then diluted with water, formaldehyde, other components, and water are simultaneously mixed, or formaldehyde and an aqueous solution of other components are mixed together. , the desired fixative solution can be prepared.

この発明において用いることができるクエン酸は、ヒド
ロキシトリカルボン酸であり、その塩として、クエン酸
ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸カルシウム、
クエン酸アンモニウムなどがある。好ましいクエン酸塩
は、ナトリウム塩などのアルカリ金属塩である。
Citric acid that can be used in this invention is hydroxytricarboxylic acid, and its salts include sodium citrate, potassium citrate, calcium citrate,
Examples include ammonium citrate. Preferred citrates are alkali metal salts such as sodium salts.

この発明の固定液の組成は、検体の稲類、迅速性の程度
などに応じて適宜選択することができる。
The composition of the fixative of the present invention can be appropriately selected depending on the rice species to be tested, the degree of rapidity, etc.

下記にその例を示す。An example is shown below.

なお、この組成例では、ホルムアルデヒドはホルムアル
デヒド37966有するホルマリンとして、また、クエ
ン酸塩は10%水溶液として用いる。
In this composition example, formaldehyde is used as formalin containing 37966 formaldehyde, and citrate is used as a 10% aqueous solution.

この発明の固定液の組成は、例えば、ホルマリン10〜
80容量部、メタノール10〜80容量部(但し、ホル
マリンの容量と同じまたはそれより少ないことが好まし
い)、クエン酸塩液1〜30容二部であり、好ましくは
、ホルマリン25〜75容量部、メタノール25〜75
容量部(但し、ホルマリンの容量と同じまたはそれより
少ないことが好ましい)、クエン酸塩液5〜20容量部
であり、より好ましくは、ホルマリン30〜70容量部
、メタノール25〜70容量部(但し、ホルマリンの容
量と同じまたはそれより少ないことが好ましい)、クエ
ン酸塩液8〜17容量部である。
The composition of the fixative of this invention is, for example, formalin 10 to
80 parts by volume, 10 to 80 parts by volume of methanol (preferably the same as or less than the volume of formalin), 1 to 30 parts of citrate solution, preferably 25 to 75 parts by volume of formalin, Methanol 25-75
parts by volume (preferably the same as or less than the volume of formalin), 5 to 20 parts by volume of citrate solution, more preferably 30 to 70 parts by volume of formalin, and 25 to 70 parts by volume of methanol (however, , preferably the same as or less than the volume of formalin), 8 to 17 parts by volume of citrate solution.

上記した成分の他に、目的に応じて種々の添加剤を含め
ることができる。
In addition to the above-mentioned components, various additives can be included depending on the purpose.

次いで、この発明の固定液の使い方の一例を説明する。Next, an example of how to use the fixative of the present invention will be explained.

採取した組織片をこの固定液またはこの固定液を水で希
釈した液に入れ、振盪しなが−ら固定する。例えば、厚
さ5IIImの組織片では2〜3時間で固定される。次
いで、固定が完了した組織片は直ちに包埋器に装入して
パラフィンで包埋する。
The collected tissue piece is placed in this fixative or a solution diluted with water and fixed while shaking. For example, a tissue piece with a thickness of 5IIIm is fixed in 2 to 3 hours. Next, the fixed tissue piece is immediately placed in an embedding device and embedded in paraffin.

パラフィン包埋が完成して後、直ちに薄切り、染色して
染色標本を作製することができる。
After paraffin embedding is completed, a stained specimen can be prepared by immediately slicing and staining.

〔実施例〕〔Example〕

この発明を、以下の例によって具体的に説明する。 This invention will be specifically explained by the following examples.

製造例 下記組成の固定液1〜5を調製した。Manufacturing example Fixative solutions 1 to 5 having the following compositions were prepared.

第1表 組成 No、1      固定液1 中性ホルマリン       50.0容量%メタノー
ル         37.5容量%10%クエン酸ナ
トリウム液  12.5容量%NO12固定液2 ホルマリン         45.0容量%メタノー
ル         45.0容量%10%クエン酸ナ
トリウム液  10,0容量%No、  3     
 固定液3 ホルマリン         65,0容量%メタノー
ル         25,0容量%10%クエン酸ナ
トリウム液  10,0容量%No、4     固定
液4 脱臭ホルマリン       65.0容量%メタノー
ル         25,0容量%lO%クエン酸ナ
トリウム液  10.0容量%No、  5     
 固定液5 脱臭中性ホルマリン     55.0容量%メタノー
ル         35.0容量%10%クエン酸ナ
トリウム液  20.0容量%使用例1 前記製造例で示した固定液を用いて、剖検例の肝を材料
として固定した。その結果、1時間で約1.75m+s
、’)時間で約2.75m+*の速さで浸透し固定が完
了した。なお、24時間後には、約7.5關にも達した
。その結果を第1図に示す。
Table 1 Composition No. 1 Fixative solution 1 Neutral formalin 50.0% by volume Methanol 37.5% by volume 10% sodium citrate solution 12.5% by volume NO12 Fixative solution 2 Formalin 45.0% by volume Methanol 45.0 volume %10% Sodium Citrate Solution 10.0 Volume% No. 3
Fixative solution 3 Formalin 65.0% by volume Methanol 25.0% by volume 10% Sodium citrate solution 10.0% by volume No. 4 Fixative solution 4 Deodorized formalin 65.0% by volume Methanol 25.0% by volume 10% Sodium citrate Liquid 10.0% by volume No. 5
Fixative solution 5 Deodorized neutral formalin 55.0% by volume Methanol 35.0% by volume 10% sodium citrate solution 20.0% by volume Usage example 1 Using the fixative shown in the above production example, the liver of an autopsy sample was prepared. It was fixed as As a result, approximately 1.75m+s in 1 hour
It penetrated at a speed of about 2.75 m+* in ,') hours and the fixation was completed. In addition, after 24 hours, it reached about 7.5 degrees. The results are shown in FIG.

比較のために、50%ホルマリン、20%ホルマリン、
10%ホルマリンについて同様に試験した。従来の固定
液に比べると著しく固定速度が改善されているを示して
いる。
For comparison, 50% formalin, 20% formalin,
A similar test was conducted for 10% formalin. This shows that the fixation speed is significantly improved compared to conventional fixatives.

使用例2 本発明の固定液を、核や細胞質の固定性について、単純
なホルマリン・メタノール混合液、20%ホルマリン液
、50%ホルマリン液の場合と比較した。その結果、ホ
ルマリン・メタノール混合液に比べて極めて優れており
、その他のホルマリン液に勝るとも劣らない固定性を示
した。
Use Example 2 The fixative of the present invention was compared with a simple formalin/methanol mixture, a 20% formalin solution, and a 50% formalin solution in terms of fixation of nuclei and cytoplasm. As a result, the fixation properties were extremely superior to that of a formalin/methanol mixture, and were comparable to other formalin solutions.

特に、中性ホルマリンを使用した場合、いわゆるホルマ
リン色素(沈若物)の沈着が殆ど無く、しかも固定液中
に組織片を長時間浸しておいても過固定による染色性の
劣化は最少銀にすることができた。
In particular, when using neutral formalin, there is almost no deposition of so-called formalin pigment (sediments), and even if the tissue piece is immersed in the fixative for a long time, there is minimal deterioration of staining properties due to overfixation. We were able to.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

第1図は、使用例1の固定結果を示す線図である。 出願人代理人  佐  藤  −雄 第1図 FIG. 1 is a diagram showing the fixation results of usage example 1. Applicant's representative: Mr. Sato Figure 1

Claims (1)

【特許請求の範囲】 1、ホルムアルデヒド、メタノール、クエン酸またはそ
のアルカリ金属塩、および溶媒としての水を含むことを
特徴とする固定液。 2、クエン酸のアルカリ金属塩が、クエン酸ナトリウム
である特許請求の範囲第1項記載の固定液。 3、ホルムアルデヒトが中性ホルマリンとして混和され
る特許請求の範囲第1項または第2項記載の固定液。 4、ホルムアルデヒトが、マスク剤を含む脱臭ホルマリ
ンとして混和される特許請求の範囲第1項乃至第2項の
いずれかに記載の固定液。
[Claims] 1. A fixative containing formaldehyde, methanol, citric acid or an alkali metal salt thereof, and water as a solvent. 2. The fixative according to claim 1, wherein the alkali metal salt of citric acid is sodium citrate. 3. The fixative according to claim 1 or 2, in which formaldehyde is mixed as neutral formalin. 4. The fixative according to any one of claims 1 to 2, wherein formaldehyde is mixed as deodorized formalin containing a masking agent.
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