JPH01124767A - Method and apparatus for agglutinating, immobilizing and dyeing bacteria - Google Patents
Method and apparatus for agglutinating, immobilizing and dyeing bacteriaInfo
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
この発明は概ね人体の分泌液等の分泌液リンプル中の細
菌検査手順に関し、さらに詳しくは分泌液サンプルにお
けるグラム陽性及びグラム陰性の細菌種の有無及び濃度
を確認するための迅速かつ能率的な、しから費用が少な
くてすむ検査方法と装置に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION (Field of Industrial Application) This invention relates generally to procedures for testing bacteria in liquid secretions such as human body secretions, and more particularly to the detection of Gram-positive and Gram-negative bacterial species in secretion samples. TECHNICAL FIELD This invention relates to a rapid, efficient and inexpensive testing method and device for determining presence and concentration.
(従来の技術)
尿や各種分泌′a、勺ンアンブルいて、細菌を迅速に検
出する方法の必要性が存在する。BACKGROUND OF THE INVENTION There is a need for a method for rapidly detecting bacteria in urine and various secretions.
尿見本を準備することは診断試験室の主たる仕事を占め
る。最も一般的な泌尿:5科の病気は、小児、妊婦、糖
尿病や名人病の患者における泌尿器系感染(細菌尿症)
である。病院においては、細菌尿症は病院生活によって
引き起される感染のうちでも主たるものである。頻繁に
発生する自覚症状のない泌尿器系感染を考慮すると、細
菌検査は定型的な検査を可能にするため十分に簡単で経
済的でなければならない。従って、診断が容易に行なえ
細菌尿症の患者の治療を迅速化する簡単で迅速かつ費用
の少なくてすむ鑑別検査の必要性が存在する。Preparing urine specimens constitutes a major task in diagnostic laboratories. The most common urinary diseases: 5 diseases are urinary system infections (bacteriuria) in children, pregnant women, and patients with diabetes and Meijin disease.
It is. In hospitals, bacteriuria is the main infection caused by hospital life. Considering the frequent occurrence of asymptomatic urinary tract infections, bacterial testing must be simple and economical enough to allow routine testing. Accordingly, there is a need for a simple, rapid, and inexpensive differential test that facilitates diagnosis and expedites treatment of patients with bacteriuria.
従来からある泌尿器系感染の検出方法は寒天培養プレー
トに尿を接種してこのプレートを24〜48時間適当な
温度(通常は37℃)で培養させる方法によっている。A conventional method for detecting urinary tract infections is to inoculate an agar culture plate with urine and incubate the plate at an appropriate temperature (usually 37°C) for 24 to 48 hours.
この場合、細菌は寒天の表面に群体が形成されることに
よって検出される。In this case, bacteria are detected by the formation of colonies on the surface of the agar.
培養しにくい細菌は従来からある培養体では成長しない
ので、各種の寒天媒体がこれらの細菌を検出するために
必要とされる。この手順は時間と費用がかかる。Since difficult-to-cultivate bacteria do not grow in conventional cultures, various agar media are required to detect these bacteria. This procedure is time consuming and expensive.
ダラム染色法(Gram 5tain Method)
等の染色技法が臨床細菌学の分野で知られているが、光
学顕微鏡法が必要であり、手順は時間がかかり熟練した
細菌学者が必要である。他の従来方式には細菌を染色し
たあと遠心分離するかもしくは濾過することによって凝
縮させる方法がある。この方法はキレート剤や正に帯電
させた小孔濾過器が必要であり、尿に存在づるアニオン
色素、血その伯の物質による目詰りや干渉の問題がある
。Durham staining method (Gram 5tain Method)
Although such staining techniques are known in the field of clinical bacteriology, they require light microscopy and the procedure is time-consuming and requires a skilled bacteriologist. Other conventional methods include dyeing the bacteria and then concentrating it by centrifugation or filtration. This method requires a chelating agent and a positively charged small-pore filter, and suffers from clogging and interference with substances such as anionic pigments and blood present in urine.
今回、グラム陰性及びグラム陽性の細菌がこの発明によ
る組成物によって簡単にかつ迅速に検出できることが思
いがけなく発見された。この明細内に開示された組成物
によって染色された凝縮細菌は容易に目視づることがで
きるので、特別に訓練された職員によって光学顕微鏡検
査を行なうことなく、あるいは高価な腐敗しやすい寒天
培養を使用することなく検出が可能である。この発明に
より細菌の検出を効率的に行なうことができ、従来の方
法によくある目詰りや色素干渉を少なくすることができ
る。さらに試験の結果、この発明の染色組成物を使用す
ると、費用が低廉で簡単かつ迅速な細菌の定ω分析が可
能であることが分った。It has now been unexpectedly discovered that Gram-negative and Gram-positive bacteria can be easily and quickly detected by the composition according to the invention. The condensed bacteria stained by the compositions disclosed within this specification can be easily visualized without the need for light microscopy by specially trained personnel or the use of expensive perishable agar cultures. Detection is possible without This invention allows efficient detection of bacteria and reduces clogging and dye interference that are common in conventional methods. Further tests have shown that the use of the staining composition of the present invention allows constant omega analysis of bacteria at low cost, simple and rapid.
(発明の概要)
グラム陰性及びグラム陽性の両細菌を染色する組成物が
提供されている。当該組成物は無機酸希釈液と、pHQ
〜12で溶解し細菌を優先して染色する染料と、有橢酸
から成る洗浄試薬と、正味負に帯電させた濾紙もしくは
ガラスフィルタとから成る。細菌は静電気によりフィル
タ上において固定凝縮され、染料溶液によって染色され
る。ついで、!離した染料は洗浄試薬によって除かれる
。SUMMARY OF THE INVENTION Compositions are provided that stain both Gram-negative and Gram-positive bacteria. The composition includes a diluted inorganic acid solution and a pH-Q
It consists of a dye that dissolves in ~12% and preferentially stains bacteria, a washing reagent consisting of an oxalic acid, and a filter paper or glass filter with a net negative charge. Bacteria are electrostatically fixed and condensed on the filter and stained with a dye solution. Next,! The released dye is removed by a washing reagent.
染料を帯びた細菌は目視できる状態になるので、フィル
タ而の色の強度(これは染色された細菌による)と、細
菌の既知硝を使用して得た色の強度に基づいたノモグラ
7等の目盛りをつけた原器とを比較することによって検
出計量が可能である。Since the dye-bearing bacteria become visible, the color intensity of the filter (which is due to the dyed bacteria) and the intensity of the color obtained using known bacterial nitrates, such as Nomogram 7, are determined. Detection and weighing is possible by comparing with a scaled prototype.
この検査にかかる時間は通常1分以内である。This test usually takes less than 1 minute.
従って、この発明の主たる特徴は細菌感染の患者の治療
を迅速に開始することを可能にする迅速な細菌検出計量
方法及び装置を提供することである。Accordingly, the main feature of this invention is to provide a rapid bacterial detection and metering method and apparatus that allows rapid initiation of treatment of patients with bacterial infections.
この発明の別の特徴は細菌を検出別置するため多数の検
査を同時に行なうことにより人体分泌液サンプルに存在
するかも知れない装置l閑の検出時間を少なくすること
のできる新規な細菌検出方法及び装置を提供することで
ある。Another feature of the present invention is a novel method and method for detecting bacteria that can reduce the time required for detection of equipment that may be present in a human secretion sample by simultaneously conducting multiple tests to detect and isolate bacteria. The purpose is to provide equipment.
この発明のさらに別の特徴は分泌液→ノンプルにおける
グラム陽性及びグラム陰性の細菌種の有無及び濃度を!
it認するための新規な方法と装置を配供することであ
る。Another feature of this invention is to detect the presence and concentration of Gram-positive and Gram-negative bacterial species in the secreted fluid → nonpure!
and to provide novel methods and apparatus for certifying IT.
この発明のさらに別の特徴は細菌を染色するだめの染料
を、細菌を染色する前に静電気的に固定凝縮させる正味
負に帯電させた紙、ガラスその他の適当な材料で形成さ
れたフィルタとともに使用することによって細菌検出を
行なう新規な方法と装置を提供することである。A further feature of the invention is the use of a dye for staining bacteria in conjunction with a filter made of paper, glass, or other suitable material having a net negative charge, which electrostatically fixes and condenses the bacteria prior to staining them. The object of the present invention is to provide a novel method and device for bacterial detection.
この発明の特徴はフィルタ表面の染色細菌の色の強度と
a菌の既知濃度を使用して得た色の強度に基づいたノモ
グラフ等の目盛り4jき原器とを目視的に比較り°るこ
とによって、分泌液勺ンブルにおける細菌lN1aをi
l聞する新規な方法と装置を提供することである。The feature of this invention is to visually compare the color intensity of the dyed bacteria on the filter surface with a prototype scale such as a nomograph based on the color intensity obtained using a known concentration of bacteria A. By i
The object of the present invention is to provide a novel method and apparatus for listening to music.
(実施例)
本発明はダラム陰性細菌及びグラム陽性細菌双方を染色
するのに有用な組成物に関し、更に試験液中で細菌を検
出し、定量する種々の方法に関する。概していえば、本
発明の染色装δ及びその組成物は、正味負の電荷を有す
るフィルタマトリックスと、塩基性pl+において細菌
を染色しうる染料と、細菌からではなくフィルタ繊維か
ら自由染料を除去する洗浄試薬とからなる。フィルタに
静電的に吸着された固定細菌は容易に視認することがで
き、洗浄試薬によって染色細菌から拡散した自由染料と
容易に識別できる。EXAMPLES The present invention relates to compositions useful for staining both Durham-negative and Gram-positive bacteria, as well as various methods for detecting and quantifying bacteria in test fluids. Broadly speaking, the dyeing devices δ and compositions thereof of the present invention have a filter matrix with a net negative charge, a dye capable of staining bacteria in basic pl+, and a free dye removed from the filter fibers but not from the bacteria. It consists of a cleaning reagent. Fixed bacteria that are electrostatically adsorbed to the filter are easily visible and easily distinguishable from the free dye diffused from the stained bacteria by the washing reagent.
フィルタの色強度は試験液中の細菌数に比例するので、
細菌の定量分析はフィルタ表面上の染色細菌の色強度を
公知の標準値と比較することにより行なうことができる
。Since the color intensity of the filter is proportional to the number of bacteria in the test solution,
Quantitative analysis of bacteria can be performed by comparing the color intensity of the stained bacteria on the filter surface with known standard values.
本発明の組成物及び方法は、尿中の細菌の検出及び定量
に特に適用される。即ち、本発明によれば、尿道感染の
検出を迅速かつ経済的に行なうことが可能となる。The compositions and methods of the invention are particularly applicable to the detection and quantification of bacteria in urine. That is, according to the present invention, it is possible to detect urinary tract infection quickly and economically.
特に、細菌を染色するpH約8〜12において可溶な染
料はキレート剤の不存在下で作用づることか発見された
。細菌は、負に帯電したフィルタ表面に静電的に吸着さ
れたこれら有機物をpl+約8〜12の蛋白質染色染料
と接触させることにより染色される。pl+約8〜12
で可溶な細菌染色染料ならば、いずれでも使用可能であ
る。しかしながら、好ましい染料としてはサフラニン・
0もしくは塩基性フクシンが使用できる。In particular, it has been discovered that dyes soluble at pH about 8-12 that stain bacteria work well in the absence of chelating agents. Bacteria are stained by contacting these organic matter electrostatically adsorbed to the negatively charged filter surface with a protein staining dye having a pl+ of about 8 to 12. pl+about 8-12
Any bacterial staining dye that is soluble in can be used. However, the preferred dye is safranin.
0 or basic fuchsin can be used.
本発明により染色された細菌は、それが存在した場合5
0.000個/−1又はそれ以上の濃度、もしくは濃縮
すればそれ以下の闇で容易に検出できる。Bacteria stained according to the invention, if present,
If the concentration is 0.000/-1 or more, or if it is concentrated, it can be easily detected in the darkness.
溶液中に分散した染色細菌は濃縮時、容易に視認される
。十分な濃度に濃縮された細菌は分散せfに染色されて
もIO菌の存在はただちに明白となる。The dyed bacteria dispersed in the solution are easily visible upon concentration. Even if the bacteria concentrated to a sufficient concentration are dispersed and stained with f, the presence of IO bacteria becomes obvious immediately.
濾過による細菌の沈澱及びトラップは、細菌を濃縮する
有効な方法の一例である。本発明においては、尿中の細
菌(これらの等電位電荷はl!ll希釈液によって変化
している)は負に帯電したフィルタ表面に吸着される。Precipitation and trapping of bacteria by filtration is an example of an effective method of concentrating bacteria. In the present invention, bacteria in the urine (whose equipotential charge has been altered by the l!ll diluent) are adsorbed to the negatively charged filter surface.
この尿希釈溶液は広い領域に亘り、拡散するので、溶液
中の細菌は細菌の有効な濃縮方法を適用することで、尿
が付着した箇所においてフィルタに静電的に吸着される
。本発明方法によれば、フィルタのボアの大きさは試験
において細菌より小さくする必要はない。Since this diluted urine solution is spread over a wide area, the bacteria in the solution are electrostatically adsorbed to the filter at the locations where the urine has adhered by applying an effective bacteria concentration method. According to the method of the invention, the bore size of the filter need not be smaller than the bacteria in the test.
フィルタ表面は正味正電荷ではな(、正味負電荷を有す
るものを使用することが必要である。本願に示された希
釈液は負に帯電した細菌の等電位電荷を逆転して細菌を
正に帯電させる。従って、尿希釈溶液中の細菌はフィル
タマトリックスに吸着されて静電的に固定され、一方、
自由染料、尿顔料及びその他の尿化合物は吸着された細
菌の存在する限定された場所から拡散し、もって染色有
機物の検出を許容する。The filter surface does not have a net positive charge (it is necessary to use one with a net negative charge. The diluent presented herein reverses the equipotential charge of negatively charged bacteria, making them Therefore, the bacteria in the urine dilute solution are adsorbed to the filter matrix and fixed electrostatically, while
Free dyes, urine pigments, and other urinary compounds diffuse from the confined locations of adsorbed bacteria, thereby allowing detection of dyed organic matter.
尿希釈混合液の付着箇所において細菌を染色するのに用
いる染料はフィルタに吸着された固定染色細菌から拡散
でる。尿希釈溶液が付着した箇所に洗浄試薬を付加する
ことにより固定11Ilii1の染色を除去することな
く、この付着箇所から自由染料が拡散することを促准さ
せることができる。The dye used to stain the bacteria at the site of attachment of the diluted urine mixture diffuses out from the fixed, stained bacteria adsorbed on the filter. By adding a washing reagent to the site where the diluted urine solution has adhered, it is possible to promote the diffusion of the free dye from this site without removing the staining of the immobilized 11Ilii1.
図中、第1図は本発明の一実施例を示し、この装置は、
平坦で丸形又は角形で、剛性又は半剛性のディスク1か
らなる。このディスクは種々の材料、例えばポリスチレ
ンを機械加r1又は成形加工もしくは熱成形される。こ
のディスクの寸法は好ましくは仔又は幅が約1〜4イン
チであって、その中心又はその近傍に円相状又は丸形の
凹部からなるリザーバすなわち溜部2が形成されている
。In the drawings, FIG. 1 shows an embodiment of the present invention, and this device includes:
It consists of a flat, round or square, rigid or semi-rigid disc 1. The disc may be machined or molded or thermoformed from various materials, such as polystyrene. The disk preferably has dimensions of about 1 to 4 inches in width and has a reservoir 2 formed at or near its center consisting of a concave or rounded recess.
この溜部2の底部には小径で短長のオリフィス3が形成
され、ディスクの全厚にわたり延出している。このオリ
フィスの径は約0.06〜約0.25インチの範囲であ
る。A small diameter and short orifice 3 is formed at the bottom of the reservoir 2 and extends over the entire thickness of the disk. The orifice diameter ranges from about 0.06 to about 0.25 inches.
本実施例による操作をするのに、必ずしも必要とはしな
いが、ディスクにはオリフィスの周囲の下面から一突出
したオリフィスリップ4を設けることができる。このオ
リフィスリップ4により、液がフィルタバンド上の正確
な位置に更に効率的に流出することができ、またフィル
タパッドの上面に液が広がることを抑止する作用を果す
。フィルタバッド5はこれがオリフィス又はオリフイス
リツブと接触するようにディスクの1・面に近接して設
けられる。フィルタパッドはセロルース、ガラス繊維又
は伯の適宜なフィルタ材料からなり、正味負電荷を示す
。Although not necessary for operation in accordance with this embodiment, the disk can be provided with an orifice lip 4 projecting from the lower surface around the orifice. This orifice lip 4 allows the liquid to flow out more efficiently to a precise position on the filter band, and also serves to prevent the liquid from spreading on the upper surface of the filter pad. A filter pad 5 is placed close to one side of the disk so that it is in contact with the orifice or orifice rib. The filter pad is made of cellulose, fiberglass or black suitable filter material and exhibits a net negative charge.
フィルタパッドの位置は、このパッドをディスクと下部
フィルタ保持板6との間にを“挟持”することにより保
持されている。この保持板は機械加工、成形加工又は熱
成形され、フィルタパッドより若干大きい寸法の角形又
は丸形の四部を有する。保持板は、フィルタパッドを所
定位置に固定するためにディスクに貼着される。貼着の
方法としては、接着、溶剤溶接、超音波溶接等、適宜手
段が用いられる。他の方法としては、ディスクと保持板
をヒンジ、スナップ又はネジ簀で互いに接合し、フィル
タパッドをその内に収容することもできる。The position of the filter pad is maintained by "sandwiching" the pad between the disk and the lower filter holding plate 6. The retaining plate is machined, molded or thermoformed and has four rectangular or rounded sections of slightly larger dimensions than the filter pad. A retaining plate is affixed to the disc to secure the filter pad in place. As a method of attachment, appropriate means such as adhesion, solvent welding, and ultrasonic welding are used. Alternatively, the disk and retaining plate can be joined together by hinges, snaps or threads, and the filter pad can be housed therein.
第4図〜第6図は本発明の他の実施例を示すもので、接
着ラベル又はテープ8をディスク10の下面9に貼着し
てフィルタパッドを固定している。4-6 illustrate another embodiment of the invention in which an adhesive label or tape 8 is applied to the underside 9 of the disk 10 to secure the filter pad.
これによれば、上記第1実施例の如く下部フィルタ保持
板を設ける必要はない。According to this, there is no need to provide a lower filter holding plate as in the first embodiment.
上記各実流例は細菌を検出するための単一使用で使い捨
ての可搬ユニットとして有用であり、特に、従来細菌の
検出方法が煩わしくかつ実施しにくい状況、例えば消費
者向は家庭用の店頭販売、医院又はスクリーンクリニッ
ク等において、例えば尿等の液中における細菌の検出に
適用される。Each of the above practical examples is useful as a single-use, disposable, portable unit for detecting bacteria, especially in situations where conventional bacteria detection methods are cumbersome and difficult to implement, for example, for consumer use at home stores. It is applied to the detection of bacteria in liquids such as urine in sales, clinics, screening clinics, etc.
ディスク10は第4図に示すように円錐状の四部から幅
方向に延出する反応穴11が形成されている。第5図に
示すように、5A置が垂直位置に置かれ、その底部12
が平坦な水平面子にあるとき、反応穴11には、試験液
が貯溜された状態にある。As shown in FIG. 4, the disk 10 is formed with reaction holes 11 extending in the width direction from four conical parts. As shown in FIG.
When the test liquid is on a flat horizontal surface, the test liquid is stored in the reaction hole 11.
次に、装置を第5図に示す位置から90’+[f方向に
回転させることによって、第6図に示すようにほぼ水平
位置又は、それに近い位置に置かれると、液は反応穴か
ら流出して、円錐状四部に流入する。次いで、液はオリ
フィスを通過して、フィルタパッドに接触し、それに吸
収される。Next, by rotating the device from the position shown in Fig. 5 in the direction 90' + Then, it flows into the four conical parts. The liquid then passes through the orifice and contacts the filter pad where it is absorbed.
本実施例のこの特徴は、細菌の定量試験を行なう前に細
菌懸濁液を化学物質で培養又はそれと反応させることを
必要とづる試験において特に有益となる。特に、抗性物
質に対する感応B−を検定する試験を行なう場合、もし
有機物が抗性物質に対して抵抗性を有するとすれば有機
物の成長が起こるであろう期間、適当な抗性物質で細菌
懸濁液を培養することにより、行なうことができる。そ
の培養期0間後に、装置を水平位置に回転させ、抗性物
質で処理した細菌!1濁液を円錐状凹部及びフィルタパ
ッドに流出させることにより、本発明の染色組成物でも
って定退試験を行なうことができる。This feature of the present embodiment is particularly useful in tests that require incubating or reacting a bacterial suspension with a chemical before performing a quantitative test of the bacteria. In particular, when conducting a test to determine the sensitivity B- to antibiotics, if the organic matter is resistant to the antibiotic, bacteria should be exposed to the appropriate antibiotic for a period during which growth of the organic matter would occur. This can be done by culturing a suspension. After 0 hours of incubation, the device was rotated to a horizontal position and the bacteria treated with antibiotics! Settlement tests can be carried out with the dyeing compositions of the invention by draining the 1 suspension into a conical recess and a filter pad.
第4図に示す使い捨ての多重試験装置は本実施例の2個
以上のユニットを用いた装置を成型加工又は熱成形する
ことによって形成される。この多重試験装置は抗性物質
に対する感応性を検定するための試験に特に適用される
。適当な抗性物質を予め反応穴中に没入して、簡易な試
験準備と抗性物質に対する感応性の多重検定を行なうこ
とができる。The disposable multiple testing device shown in FIG. 4 is formed by molding or thermoforming a device using two or more units of this embodiment. This multiplex test device is particularly applicable to tests for determining sensitivity to antibiotics. By pre-immersing an appropriate antibiotic into the reaction hole, simple test preparation and multiple assay of sensitivity to the antibiotic can be performed.
本発明の上記各実施例は、単に例示的なものにすぎず、
本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、他の実施
例及び変形例が可能なことはいうまでもない。)なわら
、本発明の組成物及び方法は、伯の液体、例えば培1L
血液、ずい液、食物洗液、牛乳及び水等において細菌を
染色検出することもでき、また、フィルタ表面に付着し
たこれら液体からの細菌を染色することにも適用されう
るちのである。The above embodiments of the present invention are merely illustrative;
It will be appreciated that other embodiments and modifications are possible without departing from the spirit and scope of the invention. ), the compositions and methods of the present invention can be applied to liquids such as 1L of culture medium.
Bacteria can be dyed and detected in blood, saliva, food washing liquid, milk, water, etc., and can also be applied to stain bacteria from these liquids adhering to the filter surface.
この染色操作により検出されうる細菌の最少帛は、細菌
培地の状態及び成長相に応じていくらか変化するもので
あり、一般に生育力の強い細菌は約100.000個/
In1のレベルで検出される。これに対し、生育力のな
い有機物又は成長の遅い有機物の場合は、染色され難い
ため、より高いレベルの装置I菌濃度が検出のためには
必要とされる。The minimum number of bacteria that can be detected by this staining procedure varies somewhat depending on the condition of the bacterial culture medium and the growth phase, and generally, for highly viable bacteria, it is approximately 100,000 pieces/
It is detected at the level of In1. On the other hand, non-viable or slow-growing organic matter is difficult to stain, and therefore a higher level of Apparatus I bacterial concentration is required for detection.
以下に述べる実施例は、本発明の例示的なものにすぎず
、本発明を限定するものではない。The examples described below are merely illustrative of the invention and are not intended to limit the invention.
例 1
従来型のピペットを用いて、細菌尿症の患者から2wI
4の尿を試験管に採取し、これに8F4の酸性希釈液(
pH1,5のHC!J)を添加した。こうして得られた
混合溶液を4滴とり、これを負に帯電さVたフィルタの
中心部に滴下した。次にサフラニン・O色素溶液3滴を
上記フィルタ上の尿/希釈液混合液滴下部分に滴下した
。なお、ここで使用したサフラニン・0色素溶液は、p
H1oのカーボネート・ボラート・ヒドロキシル!1!
衝液に1:1000の割合でサフラニン・O色素を添加
して調製した溶液である。次に、3滴の洗浄液(pl+
2.5のHCjl)を同部分に滴下し、フリーの色素を
同部分から拡散させた。さらに、3滴の洗浄液を滴下し
、二次洗浄を行なった。そうすると、同部分に直径3〜
4mの顕著な染色部(染色された細菌の存在する部分)
が発現した。このとき、その染色部を中心として直径的
25#Wのフリー色木リングが形成された。これは、細
菌尿検査の結束が陽性であることを示している。そして
、染色部の色の濃さを細菌数■知の試料から得られた染
色部の色と比較した結果、検体の細菌数は尿11d当り
、1.000,000であった。なお、この検体の寒天
による平板培養の結果、同一の測定値が得られ、この発
明の方法による測定結果が正しいことが立証されている
。Example 1 Using a conventional pipette, 2wI from a patient with bacteriuria
4 urine was collected in a test tube, and an acidic diluted solution of 8F4 (
HC with pH 1.5! J) was added. Four drops of the mixed solution thus obtained were dropped onto the center of the negatively charged filter. Next, three drops of Safranin O dye solution were dropped onto the urine/diluent mixture droplet area on the filter. The Safranin 0 dye solution used here was p
H1o carbonate borate hydroxyl! 1!
This is a solution prepared by adding Safranin O dye to a buffer solution at a ratio of 1:1000. Next, add 3 drops of cleaning solution (pl+
2.5 HCjl) was dropped onto the same area, and the free dye was diffused from the same area. Furthermore, three drops of cleaning liquid were dropped to perform secondary cleaning. Then, the same part has a diameter of 3~
4m prominently stained area (area where stained bacteria exist)
was expressed. At this time, a free colored wood ring with a diameter of 25#W was formed around the dyed area. This indicates that the bacteriuria test is positive. The density of the color of the stained area was compared with the color of the stained area obtained from a sample with a known number of bacteria, and as a result, the number of bacteria in the sample was 1.000,000 per 11 d of urine. Incidentally, as a result of plate culture of this specimen on agar, the same measurement value was obtained, proving that the measurement result by the method of the present invention is correct.
例 2
同様に、健庫な人(従来式の検査によっては、尿路感染
が認められない人)から2W4の尿を採取し、これに8
滴の希釈液(pH1,5のHll )を添加した。この
混合溶液を4W4とり、これを負に帯電させたフィルタ
の中心部に滴下した。以下、例1の場合と同様な操作を
行なった。その結果、尿/希釈液混合液を滴下した部分
に染色部は全く発現せず、同部分を中心とする直径的2
5mのフリー色素リングのみが形成された。これは、細
菌尿検査結果は陰性であることを示している。なお、こ
の結果は、この検出体の寒天による平板培養によって立
証されている。Example 2 Similarly, 2W4 urine is collected from a healthy person (who does not have a urinary tract infection according to conventional tests), and 8
A drop of dilute solution (Hll of pH 1.5) was added. This mixed solution was taken as 4W4 and dropped onto the center of the negatively charged filter. Hereinafter, the same operations as in Example 1 were performed. As a result, no stained area appeared at all in the area where the urine/diluent mixture was dropped, and two diameter areas centered around the same area were found.
Only a 5 m free dye ring was formed. This indicates that the bacteriuria test result is negative. Note that this result has been verified by plate culture of this detection substance on agar.
例 3
例1及び例2に記載した手順及び第1図に示した装置を
用いて杆々の細菌について検査を行なった。測定結果を
第1表に示す1゜
第 1 表
細菌の種類 。Example 3 A test was carried out for common bacteria using the procedure described in Examples 1 and 2 and the apparatus shown in FIG. The measurement results are shown in Table 1. Table 1 Types of bacteria.
正常な尿(細菌なし) 0大腸菌
++ニス・オーレアス(s、aur
cus) + +尋常変形菌
++ブソイドモプス ++A群連
鎖球菌 +十B群連鎖球菌
++肺炎桿菌 +
+*フィルタ面上の尿/希釈液混合液
の滴下部分における測定結果
〇−白色 +=淡桃色 →−+=桃色+十ト=赤色
++−1−+ =濃赤色例 4
例1及び例2に記載した手順及び第1図に示した装置を
用いて、種々の濃度の細菌試料(正常尿に種々の濃度で
大腸菌を加えたもの)について検査を行なった。その結
果を第2表に示す。なお、染色強麿の判定は例3に準す
る。Normal urine (no bacteria) 0 E. coli
++ Nis Aureas (s, aur)
cus) + +
++Busoidmopus ++Group A Streptococcus +Group 10B Streptococcus
++Klebsiella pneumoniae +
+*Measurement results at the dripping area of the urine/diluent mixture on the filter surface 〇-White +=Pale pink →-+=Pink + Juto=Red ++-1-+ = Dark red example 4 Example 1 and Example 2 Bacterial samples of various concentrations (normal urine with various concentrations of E. coli) were tested using the procedure described in 1. and the apparatus shown in FIG. The results are shown in Table 2. In addition, the determination of dyeing strength is based on Example 3.
第 2 表 大腸菌濃度 染色部Ifi (Id当りの数) io、ooo 。Table 2 E. coli concentration Stained area Ifi (Number per Id) io, ooo.
50.000 +
100.000 + +1□ooo
、ooo + 十+10.00.0.
000 + + + +例 5
抗性物質感受性は次のようにして測定した。まず、第4
図に示した複数の検査装置を垂直に配置した。そして、
反応穴Nα1−8のそれぞれに抗性物質溶液を一滴ずつ
滴下し、反応穴NQ 9及びNo、 10にそれぞれ一
滴のポルマリン溶液及び蒸溜水を滴下した。次に、細菌
懸濁液を希釈し、細菌濃度が17!当り 100.00
0の細菌含有液を調製し、その−滴をすべての反応穴N
n1−10に滴下した。次に、この装d全体を37℃で
3時間ないし4時間定温放置した。この定温放置の後、
希釈液としてp旧、5のHCJI溶液を4滴ずつ各反応
穴内に滴下した。次に、この装置を水平に配置し、混合
溶液を反応穴からリザーバ内へ移動さビた。溶液がフィ
ルターパッドに吸収された後、色素溶液及び洗浄液を上
記例1及び例2の手順に従って各フィルタ上に滴下した
。この染色][程が終了した後、フィルタ上の染色部の
染色強度を目視によって検定した。フォルマリン処理し
たもの(反応穴随9)は桃色(++)をvし、これをゼ
ロ・アワー(zero−hour)コントロールとした
。また、反応穴随10のものは暗赤色(++++)を呈
し、これを非抑制生長コントロールとした。反応穴11
Q1−8のものの染色強度を上記2つのコントロールと
比較し、抗性物質感受性の検定を行なった。そして、染
色強度が生長コントロールに等しいかそれよりも強い場
合には、その細菌は抗性物質に対して抵抗力を有するこ
とを示す。一方、染色強度がゼロ・アワーコントロール
に等しいかそれよりも弱い場合には、その細菌は抗性物
質に対して感受性があることを示す。50.000 + 100.000 + +1□ooo
, ooo + ten + 10.00.0.
000 + + + +Example 5 Antibiotic sensitivity was measured as follows. First, the fourth
The multiple inspection devices shown in the figure were arranged vertically. and,
One drop of the antimicrobial solution was added to each of reaction holes Nα1-8, and one drop of Polmarin solution and distilled water were added to reaction holes NQ9, No. 10, respectively. Next, the bacterial suspension was diluted to a bacterial concentration of 17! Hit 100.00
Prepare a bacteria-containing solution of
It was dropped onto n1-10. Next, the entire device was incubated at 37° C. for 3 to 4 hours. After this incubation,
As a diluent, 4 drops of p-old, 5 HCJI solution were dropped into each reaction hole. Next, the apparatus was placed horizontally and the mixed solution was moved from the reaction hole into the reservoir. After the solution was absorbed into the filter pad, the dye solution and wash solution were dripped onto each filter according to the procedures of Examples 1 and 2 above. After this staining process was completed, the staining intensity of the stained area on the filter was visually inspected. The formalin-treated sample (reaction hole 9) was pink (++) and served as a zero-hour control. In addition, reaction well 10 exhibited a dark red color (++++) and was used as a non-inhibited growth control. Reaction hole 11
Antibiotic sensitivity was tested by comparing the staining intensity of Q1-8 with the above two controls. If the staining intensity is equal to or stronger than that of the growth control, this indicates that the bacterium has resistance to the antibiotic. On the other hand, if the staining intensity is equal to or weaker than the zero hour control, it indicates that the bacteria are susceptible to the antibiotic.
第1図はこの発明に従って抗性された一過装置の平面図
、第2図は濾過装置の各構成部分を分解して示す第1図
の2−2線に沿った断面図、第3図は第1図及び第2図
に示す濾過装置を組立てた状態で示す断面図、第4図は
この発明の別実流側で、人体の分泌液サンプルを同時に
多数試験する濾過装置を示す平面図、第5図は第4図に
示す濾過v装置の一姿勢を示す第4図の5−5線に沿っ
た断面図、第6図は第5図と類似の図で一過装置の別の
姿勢を示す断面図である。
1.10・・・ディスク
2・・・溜 部
3・・・オリフィス
4・・・オリフィスリップ
5・・・フィルタパッド
6・・・フィルタ保持板
8・・・テ − プ
9・・・下 面
11・・・反 応 穴
12・・・底 部
出願人 アプライド・ポリテクノロジー・インコーホ
レーテッド
代理人 弁理士 岡田英彦(外2名)〜コ
ー 〜−
≧FIG. 1 is a plan view of a filtering device made according to the present invention, FIG. 2 is a sectional view taken along line 2-2 in FIG. 1 is a cross-sectional view showing the filtration device shown in FIGS. 1 and 2 in an assembled state, and FIG. 4 is a plan view showing a filtration device for simultaneously testing a large number of human body secretion samples on the separate actual flow side of the present invention. , FIG. 5 is a sectional view taken along line 5-5 in FIG. 4 showing one position of the filtration device shown in FIG. 4, and FIG. 6 is a view similar to FIG. It is a sectional view showing a posture. 1.10... Disc 2... Reservoir 3... Orifice 4... Orifice lip 5... Filter pad 6... Filter holding plate 8... Tape 9... Bottom surface 11...Reaction Hole 12...Bottom Applicant Applied Polytechnology, Inc. Representative Patent Attorney Hidehiko Okada (2 others) ~Co ~- ≧
Claims (11)
色方法であつて、 a)液体試料中の細菌を正味負に帯電させたフィルタの
指定領域に静電的に吸着させる段階と、 b)前記吸着させた細菌を酸性域で機能する色素で染色
する段階と、 c)前記フィルタ上において前記指定領域からフリーの
色素を拡散させ、この指定領域に比較定量用の前記染色
された細菌のみを取り残す段階と、 から成ることを特徴とする細菌の凝集、固定および染色
方法。(1) A method for aggregating, fixing, and staining bacteria contained in a liquid sample, comprising: a) electrostatically adsorbing the bacteria in the liquid sample to a designated area of a filter that has a net negative charge; b) ) staining the adsorbed bacteria with a dye that functions in an acidic region; c) diffusing free dye from the specified area on the filter, and applying only the stained bacteria to this specified area for comparative quantification; A method for agglutinating, fixing and staining bacteria, comprising: a step of leaving behind;
料溶液を希釈する段階を有することを特徴とする特許請
求の範囲第1項記載の細菌の凝集、固定および染色方法
。(2) The method for aggregating, fixing, and staining bacteria according to claim 1, which comprises the step of diluting the sample solution with dilute hydrochloric acid, dilute nitric acid, or dilute sulfuric acid having a pH of 1 to 3.
可溶であるとともにこのpH域において機能するサフラ
ニン・Oまたは塩基性フクシンであり、この色素はpH
8から12のホウ酸カリウム溶液、炭酸カリウム溶液及
び水酸化カリウム溶液より成る群から選択された緩衝溶
液に溶解され、その濃度が0.1%から0.001%で
あることを特徴とする特許請求の範囲第1項記載の細菌
の凝集、固定および染色方法。(3) The dye is safranin O or basic fuchsin, which is soluble in a buffer solution at pH 8 to 12 and functions in this pH range;
Patent characterized in that it is dissolved in a buffer solution selected from the group consisting of 8 to 12 potassium borate solutions, potassium carbonate solutions and potassium hydroxide solutions, the concentration of which is from 0.1% to 0.001%. A method for aggregating, fixing and staining bacteria according to claim 1.
とによって達成され、前記洗浄液がpH2から4の希塩
酸、希硝酸または希硫酸であることを特徴とする特許請
求の範囲第1項記載の細菌の凝集、固定および染色方法
。(4) The diffusion is achieved by washing the stained bacteria with a washing liquid, and the washing liquid is dilute hydrochloric acid, dilute nitric acid or dilute sulfuric acid with a pH of 2 to 4. Bacterial agglutination, fixation and staining methods.
尿中の沈澱物を溶解させ、尿約1部に対して希釈液約4
部の尿/希釈液混合液を生成させる段階と、 b)前記尿/希釈液混合液を前記フィルタの表面に滴下
する段階と、 c)前記尿/希釈液混合液を前記フィルタに吸着させる
段階と、 を有し、前記拡散はpH2から4の希塩酸、希硝酸及び
希硫酸より成る群から選択された無機酸の洗浄液を前記
尿/希釈液混合液の滴下領域に滴下することによって行
なわれ、これによって凝集かつ染色された細菌はその領
域に発現し、一方染色された細菌とともにその領域に沈
着したフリーの色素はその領域から拡散され、その領域
を中心として直径約10mmから30mmの沈降リング
を形成することを特徴とする特許請求の範囲第1項記載
の細菌の凝集、固定および染色方法。(5) the sample is urine, and a) the urine is diluted with a diluent of an inorganic acid having a pH of 1 to 3 to dissolve the precipitate in the urine;
b) Dropping the urine/diluent mixture onto the surface of the filter; c) Adsorbing the urine/diluent mixture onto the filter. and the diffusion is carried out by dropping a cleaning solution of an inorganic acid selected from the group consisting of dilute hydrochloric acid, dilute nitric acid and dilute sulfuric acid with a pH of 2 to 4 onto the drip area of the urine/diluent mixture, As a result, the aggregated and stained bacteria are expressed in that area, while the free dye deposited in that area along with the stained bacteria is diffused out of the area, forming a sedimentation ring with a diameter of about 10 mm to 30 mm centered on that area. A method for aggregating, fixing and staining bacteria according to claim 1, characterized in that the method comprises:
料から得られた染色強度と比較することによって、試料
中の細菌数が定量されることを特徴とする特許請求の範
囲第1項記載の細菌の凝集、固定および染色方法。(6) The number of bacteria in a sample is quantified by comparing the staining intensity of the bacteria with the staining intensity obtained from a sample containing a known number of bacteria. Bacterial agglutination, fixation and staining methods described.
装置であって、 a)下面、この下面と交差する試料用のリザーバ装置及
びオリフィスを有するディスク装置と、 b)フィルタ装置と、 c)前記フィルタ装置を前記下面に保持するための保持
装置と、 から成り、前記フィルタ装置の特定領域が前記オリフィ
スによつて前記リザーバ装置へ連通され、前記フィルタ
装置が前記オリフィスを中心に半径方向へ十分広く延び
、前記特定領域からフリーの色素の半径方向への拡散が
許容され、これによつて凝集かつ染色された細菌が前記
特定領域に残され、染色強度の比較による細菌の定量が
可能となることを特徴とする細菌の凝集、固定および染
色装置。(7) A device for flocculation, fixation and staining of bacteria contained in a liquid sample, comprising: a) a disk device having a lower surface, a reservoir device for the sample and an orifice intersecting this lower surface; b) a filter device; c) ) a retaining device for retaining the filter device on the lower surface, a specific area of the filter device communicating with the reservoir device by the orifice, and the filter device radially extending about the orifice. sufficiently wide to allow radial diffusion of free dye from said specific area, thereby leaving aggregated and stained bacteria in said specific area, allowing quantification of bacteria by comparison of staining intensity. A bacterial agglutination, fixation and staining device characterized by:
試料を受容しうる十分な容積を有し、前記ディスク装置
は前記オリフィスと前記下面との交差点に環状のリップ
を有し、この環状のリップは前記フィルタ装置と係合し
、前記保持装置がプレートであり、さらに前記プレート
および前記フィルタ装置は固定装置によつて前記ディス
ク装置に固定されることを特徴とする特許請求の範囲第
7項記載の細菌の凝集、固定および染色装置。(8) The reservoir device is mortar-shaped and has a sufficient volume to receive the sample, and the disk device has an annular lip at the intersection of the orifice and the lower surface, and the annular lip is 8. The disk device according to claim 7, wherein the retaining device is a plate, and the plate and the filter device are fixed to the disk device by means of a fixing device. Bacterial agglutination, fixation and staining equipment.
よって前記試料が前記リザーバ装置に導入される前に試
料の反応が行なわれ、続いて、前記ディスク装置が水平
位置に移動されると、前記試料が前記反応穴から前記リ
ザーバ装置へ流し込まれることを特徴とする特許請求の
範囲第7項記載の細菌の凝集、固定および染色装置。(9) The disk device has a reaction hole through which a reaction of the sample is performed before the sample is introduced into the reservoir device, and then the disk device is moved to a horizontal position. 8. The bacterial aggregation, fixation and staining device according to claim 7, wherein the sample is poured into the reservoir device from the reaction hole.
リザーバ装置及び前記各リザーバ装置と連通する複数の
反応穴を有し、かつ前記ディスク装置が底部部材を有し
、この底部部材によって、前記複数の反応穴内の試料が
前記リザーバ装置内に入らないように、前記ディスク装
置の向きが設定され、続いて、前記ディスク装置が水平
に移動されると、前記試料が前記反応穴から前記各リザ
ーバ装置へ流し込まれることを特徴とする特許請求の範
囲第9項記載の細菌の凝集、固定および染色装置。(10) The disk device has a plurality of separately arranged reservoir devices and a plurality of reaction holes communicating with each of the reservoir devices, and the disk device has a bottom member, and the bottom member allows the The orientation of the disk device is set so that the samples in the plurality of reaction holes do not enter the reservoir device, and then, when the disk device is moved horizontally, the sample is transferred from the reaction holes to each of the reservoir devices. 10. The apparatus for aggregating, fixing and staining bacteria according to claim 9, wherein the apparatus is poured into the apparatus.
であり、その周縁部には前記ディスク装置の下面に接着
させて前記フィルタ装置を前記ディスク装置に保持する
ための接着剤が塗布されていることをを特徴とする特許
請求の範囲第7項記載の細菌の凝集、固定および染色装
置。(11) The holding device is a layered material that covers the filter device, and an adhesive is applied to the peripheral edge of the holding device for adhering to the lower surface of the disk device to hold the filter device to the disk device. The apparatus for aggregating, fixing and staining bacteria according to claim 7, characterized in that:
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62109630A JPH01124767A (en) | 1987-05-01 | 1987-05-01 | Method and apparatus for agglutinating, immobilizing and dyeing bacteria |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62109630A JPH01124767A (en) | 1987-05-01 | 1987-05-01 | Method and apparatus for agglutinating, immobilizing and dyeing bacteria |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH01124767A true JPH01124767A (en) | 1989-05-17 |
Family
ID=14515149
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP62109630A Pending JPH01124767A (en) | 1987-05-01 | 1987-05-01 | Method and apparatus for agglutinating, immobilizing and dyeing bacteria |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH01124767A (en) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH041433U (en) * | 1990-04-19 | 1992-01-08 | ||
US5403720A (en) * | 1990-07-11 | 1995-04-04 | Idemitsu Kosan Company Limited | Method for rapid measurement of living microorganisms and measuring kit |
US5897993A (en) * | 1995-03-28 | 1999-04-27 | Idemitsu Kosan Company Limited | Method of determining the number of bacteria quickly and a device for determining the number of bacteria |
-
1987
- 1987-05-01 JP JP62109630A patent/JPH01124767A/en active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH041433U (en) * | 1990-04-19 | 1992-01-08 | ||
US5403720A (en) * | 1990-07-11 | 1995-04-04 | Idemitsu Kosan Company Limited | Method for rapid measurement of living microorganisms and measuring kit |
US5897993A (en) * | 1995-03-28 | 1999-04-27 | Idemitsu Kosan Company Limited | Method of determining the number of bacteria quickly and a device for determining the number of bacteria |
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