JPH01110633A - 肝細胞刺激因子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は炎症を和らげる因子に関する。

炎症は組織の損傷または感染に反応して発生する。急性
炎症反応は発熱、血管透過性の増加、血漿金属およびス
テロイド濃度の変化および白血球増多を特徴とする。感
染した組織や微生物の侵入を退行させるいろんな特性を
もつ多量の蛋白質分解酵素の放出は白血球症と損傷を受
けたまたは感染を受けた組織への白血球の局在と関連し
ている。

急性炎症の制御は炎症原因物質の過剰蓄積を防止し、従
って健康な組織の退行を避けるために身体によって調節
されなければならない。制御の１つの経路は肝臓細胞、
すなわち肝細胞、を刺激して、急性用蛋白質として１ま
とめにして知られているｌ連の血漿蛋白質を産生ずる。

急性用蛋白質は、他の未知の機能と一緒に損傷部位で放
出される蛋白質分解酵素、凝固および補体成分、オプソ
ニンおよび担体蛋白質を不活性化する抗プロテアーゼを
含む。急性用蛋白質は、八におけるＣ−反応性蛋白質、
Ｃ３およびＦａｃｔｏｒ　Ｂ補体成分および血清アミロ
イドＡ蛋白質と一緒に多くの種におけるα１酸性糖蛋白
質、α１プロテイナーゼ阻害剤（αｌ抗トリプシン）、
α１抗キモトリプシン、ハプトグロビン、ヘモベキシン
およびフィブリノーゲンを、またさらに、ラット忙おけ
るα２マクログロブリンおよびα１システインプロテイ
ナーゼ阻害剤（主要急性用蛋白質）を含む。

ある医学的症状は多くの炎症性メデイエータおよび蛋白
質による。例えば、敗血症または急性膵炎は放出される
蛋白質分解酵素を過剰圧し、顕著な組織破壊をもたらす
ことがある。このような症状は炎症を制限する急性用蛋
白質の不適切な放出によるものと考えられる。他方、あ
る患者における術後回復は不適功な炎症反応または過剰
の抗炎症反応だよると考えられる感染症および乏しい創
傷治癒と関連している。従りて、肝臓刺激物質の同定が
知られたら、その不在または機能不全を補うよう考えら
れた療法は敗血症のような症状や関連した症状を治療す
ることができる。

可溶性因子インターロイキン−１（ＩＬ−１）および腫
瘍壊死因子（ＴＮＦ　）はｉｎ　ｖｉｔｒｏで限られた
急性相反応を誘導することができるのに（Ｏａｕｌｄｊ
ｅ他（１９８７）　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　６０．２０
３−２０７を見よ）、主な肝臓急性相蛋白質反応は本来
フィブリノーゲン刺激因子として述べられ、肝細胞刺激
因子（Ｈ３Ｐ）として比較的最近知られた別個の因子に
よって制御されろことは最近証明された（　Ｒｆｔｃｈ
ｉｅと几１１ｅｒ（１９８３）　Ｎ、Ｙ、　Ａｃａｄ、
　Ｓｃｉ、　４０８．４９９０−５，０００　；Ｋｏｊ
他（１９８４）　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｊ、　２２４．５０
５−５１４およびＩ３ａｕｍａｎｎ他（１９８３）　Ｊ
、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２５８．５６３−５７０
を見よ）。可溶性因子ＩＬ−１およびＴＮＦ’は人゛と
ネズミにおける多くの急性用蛋白質をコード化する遺伝
子の部分集合のみを制御するが、ケラチン細胞あるいは
末梢血液単核細胞由来のＨ３Ｐは急性用蛋白質の残りの
およびある点までは全ての遺伝子表現を制限する。

仔細Ｈ３刺蹴因子の特性および同定姥はなお完全なもの
にしなければならない。治療的意味でその特性の利点を
利用するためにはこの因子の生化学的性質を明らかにす
るための研究がもつと必要である。

急性用蛋白質を産生ずるよう肝細胞を刺激する因子を同
定しようとして、本発明者達は驚くべき発見をした。肝
細胞刺激因子は既知の因子インターフェロンβ２と生化
学的、免疫学的および泗能的に同じである。これらの２
つの因子の通常の同一性には、インターフェロンβ、が
これまで肝臓および炎症反応の調整に関与していると考
えられていなかったという点で特に驚（べきである。既
知のインターフェロン、インターフェロンβ２は弱い抗
ウィルス作用な刀き出すことは−、役に記められている
けれども、その１次的機能は抗ウイルス性としてである
と考えられる。さらに、文献中に述べられている肝細胞
刺激因子がもっばら活性化されたマクロファージや単核
釧胞起因のものと考えられていたのに対して、インター
フェロンβ２はウィルス刺激（ポリＩ：Ｃ）砿維芽ｉＩ
Ｈ膣によって産生されることが知られて込る。インター
フェロンβ、に対する機能と標的赤血球または標的組織
は抗ウイルス性かもつと最近ではＢ−リンパ球細見に的
をしぼって述べられている。人手できる文献に述べられ
ているインターフェロンβ、の活性は何れも肝臓あるい
は急性相蛋白質遺伝子調整に関連していない。

従って、本発明は、肝細胞刺激因子が特性的にも生化学
的にもインターフェロンβ２と同一物質であるという条
件付きの知識の応用に基く。

１つの見地忙おいては、本発明は、インターフェロンβ
２の新しい用途として、インターフェロンβ２の肝細胞
刺激量で生体内で（ｉｎ　ｖｉｖｏ　）で肝細胞を処理
することからなる急性相蛋白質を産生ずるよう肝細胞を
刺激する方法からなる、処理は、例えば、非経口的また
は静脈内に投与される注射可能な投薬量な形で使用実施
できる。

発明のその上の見地はインターフェロンβ２と生理学的
に耐容性のある担体からズる物質の組成物からなる。発
明の実施例によると、このような組成物はインターフェ
ロンβ、の緩衝塩類溶液のような水性用量型におけるイ
ンターフェロンβ２からなる。注射できるように水で戻
すのに適した粉末状インターフェロンβ、を含むアンプ
ルモ発明の範囲内にある。

急性相蛋白質の肝細胞産生を刺激するのに有用な方法と
組成物を提供することに加えて、本発明は、他の見地に
おいては、傷害を受けたか感染を受けた者あるいはその
組織が羅患していると疑われる者から得られた血清のよ
うな液体サンプル中の肝Ｉｆｍ飽刺激因子、インターフ
ェロンβ２の存在または濃度を決定するために考えられ
た免疫検定法からなる。

物質インターフェロンβ２はＷｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ他
（１９８０）ＰＮＡ８７７．７１５２−７１５６により
報告されているようＫ　ＣＤＮＡ配列によってコード化
されると報告されている。実質的には、同じＤＮＡ配列
がＨｉ　ｒ　ａｎ。

他（１９８６）　Ｎａｔｕｒｅ　３２４．７３−７６に
より報告されているようにＢ−細胞刺激因子（ＢＳＦ−
２）として知られている可溶性因子に遺伝情報を指定し
、２５　ｋＤ蛋白質に遺伝情報を指定し、ハイプリドー
マ形質細胞腫成長因子（ＨＧＦ　）に遺伝情報を指定す
ることが報告されている。これらの関係は、例えば、５
ｃｉｅｎｃｅ　３２５、Ｉ）、　５８２−５８３　；お
よび５ｃｉｅｎｃｅ　Ｖｏｌ、　２３５、ｐ、　７３１
−７３２に要約されている。従って、ここで使われてい
るように、′インターフェロンβ２　′は定義によって
ＢＳＦ−２、ＨＧＦおよび２６　ｋＤ蛋白質として文献
中で現在知られているこれらの物質を含む。

インターフェロンβ２のポリモルフ型およびそのグリフ
シル化型は自然に産生され、現在までインターフェロン
β２コード化配列（あるいはＢＳＦ−２または２６　ｋ
Ｄ蛋白質フード化配列）であるとして報告されているＤ
ＮＡ配列の対立形質変異により表現されることはその分
野の専門家によって理解されるだろう。しかしながら、
インターフェロンβ２のこれらのポリモルフ型が現在イ
ンターフェロンβ、ＩＣついて知られている生物学的機
能を共有し、また重要であるが急性相蛋白質を産生ずる
よう肝細胞を刺激するここで述べられている機能を共有
するポリペプチド成分をもつならば、インターフェロン
β２のこのようなポリモルフ型が本発明では有用であり
、ここでは１インターフェロンβ、と実質的に同じ生物
学的機能を生化学的特性をもつ化合物１という用語によ
ってここでは包含されている。

ここで有用な肝細胞刺激性インターフェロンβ２を調製
する方法は文献に述べられており、ここでは詳細には繰
返さない。インターフェロンβ２は、例えば、リボポリ
サツカリド誘導単核細胞またはポｊＪＩ：Ｃ−誘導線維
芽細胞から化合物を抽出することｋよってつくることが
できるが、組換えインターフェロンβ、を製造する方法
はもつと便利により大量を製造することができ、従って
望ましい。組換えインターフェロンβ２を製造する１つ
の方法はＮａｔｕｒｅ　、　Ｖｏｌｕｍｅ　２３４．１
１月６日、１９８６でＨｉｒａｎｏ他によって述べられ
、ここでは参照の中に人っている。この方法によって製
造された組換えインターフェロンβ２は２３と３０　ｋ
Ｄの間の明らかな分子量をもち、大体５．０の等電点を
もち、Ｈｉｒａｎｏ他、同上により述べられている部分
的アミノ酸配列をもつであろ５゜ 肝細胞が急性相蛋白質を産生ずるよ５に刺激される本発
明の方法は適当な担体と混合されたインターフェロンβ
、で肝細胞を処理することによつて行われる。非経口的
あるいは静脈内投与がインターフェロンβ２を肝細胞に
導入するためくは望ましい。従って、インターフェロン
β２の注入できる溶液がここでは望捷しく、製薬工業に
よって十分に確立されたプロトコルを用いて処方される
。

例えば、インターフェロンβ２と塩類またはりん酸塩暖
衝塩類のような生理学的に耐容性のある賦形薬は、マニ
トールのような活性成分に対する可溶化剤ｆ任意に組み
合わせて、投与に適している。

インターフェロンβ２の肝細胞刺激量は処置を受ける者
の約１から約５００μ９Ａｃｙ体重の範囲にある。従っ
て、本発明の方法で用いるのに適した組成′吻はこの範
囲を反訣する量のインターフェロンβ２からなる。単位
投与ｆは、必要なインターフェロンβ２の単一注入につ
いて、より適切には、インターフェロンβ２の望ましい
ｉｎ　ｖｉｖｏレベルを達成し、毒性副作用の危険を減
少するために反復注入あるいは静脈内１滴注１によりつ
くられる。

生理学的に耐容できる担体はわずかでも炎症を引きおし
やすいこれらの担体を除外して選ばなければならないこ
とに注目すべきである。

急性相蛋白質の肝細胞産生を刺激するためのインターフ
ェロンβ２の投与は、組織損傷または侵入に反応してイ
ンターフェロンβ２を産生できない身体を補うかあるい
は十分な機能的インターフェロンβ２が自然に産生され
ない場合には息性相蛋白質反応を増大させる。

これらの症状について診断するために、本発明に従って
、患者から抽出された液体試料中の抗インターフェロン
β２−結合物質の存在またはジ度を検出するために考え
られた診断方法が提供される。一般原則として、このよ
うな検定法は他の症状または疾病を表わす他の生物学的
物質を検定する、例えば＠娠などを診断するためにＨＣ
Ｇについて検定するため釦方法の中に述べられている濱
準免疫検定と大きな違いはない。インターフェロンβ２
に対する抗体は、ウサギ、ヤギ、ヒツジなどで増大され
、回収され、その結合相手、インターフェロンβ２の存
在を検出し、あるいはその濃度を測定するために用いら
れる。インターフェロンβ２に対する抗体はラブツクス
ビーズ、ポリスチレン筒また（′よビーズ、ポリマー膜
またはフィルターのような固形支持体土庄交叉結合によ
り共有的に固定され、次に結合を可能にするために血清
とインキュベートされる。結合されたインターフェロン
β、の検出は利用できるいくつかの技法の１つを用いる
が、望ましいのは捕獲されたインターフェロンβ２に対
する標識されたサンドウィッチ抗体を用い、次いで検定
において結合された同位体を検出して行われる。インタ
ーフェロンβ２のバックグラウンドレベルは健康な者で
持続すると考えられる。従って、機能的なインターフェ
ロンβ２の不適切な血清レベルによって引き起される症
状の診断は患者の血清中のインターフェロンβ２の健Ｂ
Ｔな者に詔められろインターフェロンβ２血清レベルと
の相対的有効性の評価を必要とするであろう。インター
フェロンβ２の参照血清レベルは対照母集団からの血清
サンプルの代表的な数を検定することによって容易に測
定することができる。

血清分析でインターフェロンβ２レベルが陰性の可視的
な組織損傷／炎症のある者はインターフェロンβ、投与
の対象となれる人である。

ここで述べられている検定法は組織損傷を検出するため
にも用いられる。急性相蛋白質は一般に損傷後約２４時
間で血清中に現われる。従って、急性相蛋白質を産生ず
るよう肝臓を刺激する血清中のインターフェロンβ２の
存在が血清中になければならず、そこで損傷から２４時
間以内に検定される。このような検定法は血清中の急性
相蛋白質の存在または濃度を測定する既知の検定法と目
的は同じである。しかしながら、工ＦＮＢ２に対する検
定はその刺激の結果よりむしろ肝臓刺激の原因となる薬
物を検出するために考えられているので、ＩＦＮＢ　、
検定は既知の方法で考えられるよりずっと早期に組織損
傷を検出するのに使用することができる。これは特に組
織損傷が内部的、すなわち観察によって診断できないよ
うな状況においては重要である。ＩＦＮＢ２に対する迅
速な検定法を提供することによって、医者は急性相蛋白
質産生の前に内的損害を評価する方法が外科的診査によ
らないで提供される。

肝細胞刺激因子の機能をつくり出し、同定し、評価する
ために用いられる実験的プロトコルが次に述ぺられ、実
験において出てきたデータが示される。

確立された判定基準によって定義される肝細胞刺激因子
をつくるために、人末梢血液単棲細胞条件付培地がＫｏ
　ｊ他によりＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９８７）　６０
．２０３−２０７で前に述べられたようにしてつくられ
た。簡単に言うと、浮揚密度遠心法忙より分離され、さ
らに付着によって精製される単核細胞はｌＯμｇ／−の
りポボリサツカリドを用いて、３７℃で７４時間刺激さ
れた（　Ｅ、　ｃｏｌ：　０６５　：　８５　、ＴＣＡ
抽出、シグマ、セントルイス）。

上清はリン酸緩衝液塩類と滅菌フィルターに対して透析
された。（５ｐｅｃｔｒｏｐｏｒｅ　６−８０００　）
確立された判定基準によって定義されるインターフェロ
ンβ２を得るために１人の線維芽細胞条件付培地（Ｆｉ
ｂ　−ＣＭ　）が正常な肺体外移植組織から確認された
１次的へＨ１ｍ維芽細胞ラインから得られた（印刷中の
Ｊｏｒｄａｎａ他、Ｊ、　ＬｅｕｋｏｃｙｔｅＢｉｏｌ
、を見よ）。１０％のウシ胎児血清を用いてＯＭＢＭ培
地中で培養された線維芽細胞からの上澄液あるいは血小
板誘導成長因子（ＰＤＧＦ　）　（協同研究）の各種の
濃度を含む無血清培地中で２４時間培壓された細胞から
の上演液が透析され、フィルター滅菌された。

選ばれた可溶性因子による血漿蛋白質産生の調整はＩ３
ａｕｍａｎｎ　（１９８７）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈ
ｅｍ、およびＫｏｊ他（１９８５）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　７６．３１７−３２７により
以前に述べられているように人の肝癌細胞（Ｈｅｐ　Ｇ
２）およびラット肝ｗＪｍの１次的培養を用いて分析さ
れた。Ｈｅｐ　Ｇ２＠　ｊｉはｌＯ％熱不活性化ＰＣ８
を含むＤｕｂｅｌｃｃｏの修正イーグル培地（ＤＭＥＭ
　）中に保持され、実験的検定法で処理される前に１０
〜１４日毎に濾過された。ラット肝細胞の１次培地は前
記のＫｏ　ｊ他（１９８５）　Ｋより述べられているよ
うにフラゲナーゼ温流および付着分離により大人Ｓｐｒ
ａｇｕｅ　−Ｄａｗｌ　ｅｙラットからつくられた。

肝細胞刺激活性および急性相蛋白質合成の誘導はＨｅｐ
Ｇ２細胞に対して前記のＢａｕｍａｎｎ　（１９８９）
　Ｉｃより述べられているように、またラット肝細胞に
対しては前記のＫｏｊ他（１９８５）により述べられて
いるように実施された。Ｈ８Ｆ活性の１ユニツトはＨｅ
ｐ　Ｇ、細胞において代表的な急性相蛋白質として有用
であるα１抗キモトリプシンの最大刺激の３分の１およ
びラット肝細胞におけるα−２マクログロブリンの最大
刺激の２分の１を引き出すのに必要な濃度である。その
検定法は以前には４％の検定変異係数Ｃｖおよび１０％
の検定間Ｃｖをもち再現できることが示された。各々の
場合において、畑抱は新鮮な培地中和反復添加すること
Ｋよっているいろな時間で可溶性因子含有培地Ｋ１１ｌ
ｌ出された。培地中で露出のＲＨ：期間の間規定の時間
ＶＣ培地中に分泌される急性相蛋白質の量は、Ｋｏ　ｊ
他（１９８４）　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、　２２４．５
０５−５１４およびＢａｕｍａｎｎ他Ｊ、　Ｂｉｏｌ、
　Ｃｈｅｍ、　２５８．５６３−５７０　Ｋより述べら
れているように、各種の蛋白質に対する単一特異性抗血
清を用いてロケット免疫電気法肩によって測定された。

インターロイキン−１（ＩＬ−１）製品のリンパ球活性
化因子活性に対する検定はＫｏｊ他１９８４、同上によ
り述べられているようにＰＨＡ共刺激物質検定とＣ３）
（／ｌ−１ｓ　ｊ胸腺細胞を用いて実施された。

ここで用いられている抗体調製と中和はウサギ抗腫瘍組
換え腫Ｓ５Ｍ死因子、ウサギ抗ヒト組換えインターロイ
キン−１β、ウサギ抗ヒト組換えｌα、ウサギ抗インタ
ーフェロンβ（１−がＩ　ＦＮβ２活性の１０００ユニ
ツトを中和する）、ヒツジ抗ＩＦＮβ（Ｎ、１．Ｉ−１
，研究用基準試薬、Ｃａｔ、　ｎｏ、　Ｇ　−０２８−
５０１＝　５６８　）および対照ヒツジ抗血清、フウシ
抗ＩＦＮβ、およびβ２とモノクロナル抗−ヒトＩＦＮ
β（ペーリンガーＴ　７　／’イム、ｃａｔ、　ｎｏ、
　８５３５７７　）。

様々な抗血清を用いた吸収は各抗体やコントロール血清
の量を増加してＰＢＭ−ＣＭの標準プール試料をインキ
ュベートすることにより実行される。

上澄液は３７℃で１時間インキュベートし、フィルター
滅菌し、残りの活性について肝細胞検定とＬＡＦ検定で
試験した。組換えシトキンも用いられたが、これは組換
え精製ヒトＴＮＦ　（５Ｘ　１０’Ｕ／’ｆ　＞ｐ組換
え精製ヒトＩＬ−１ａ（６Ｘ１０’−ｓ−ニット／ｍ９
）およびＩＬ−１β（２Ｘ　１０’　Ｕ／■）、組換え
精製ヒトＢＳＦ−２（ＩＦＮβ２）（２Ｘ１０’Ｕ／ｄ
）を含む。

肝細胞刺激因子の本質を試験するために、これらの各種
の活性のコンプレックス混合物を含む末梢血液単核細胞
培養培地のＨ８Ｆ活性に対する各種の抗体標品とのブレ
インキュベーションの影響を研究した。ＰＢＭ−ＣＭの
標準刺激を用いて、抗−ＩＬ−１αおよび抗−ＩＬ−１
βによる前吸収はリンパ球活性化因子（ＬＡＦ　）活性
の全て、α１酸性糖蛋白質誘導の８０％およびアルブミ
ン還元の２０−２５グーを除去した。同様の傾向は抗−
ＴＮＦによるＰＢＭ−ＣＭの吸収により認められた。こ
れらの抗体は多分枝系で、組換え物質に対して増大され
るので、Ｈ８ＰＫよる再活性の欠如はこれらのシトキン
の間の血清学的関係を妨げるであろう。α２マクログロ
ブリン誘導に変化はなかったが、フィブリノーゲンおよ
びシステインプロテイナーゼに害剤の誘導には明らかな
増加があり、これはＩＬ−１の除去は１４８Ｆを除去せ
ず、ＩＬ−１は実際にこれらの２つの分子の産生を阻害
することを示す。

ヒツジか子ウシの抗インターフェロンβ（ＩＦＮβ。

およびＩＦＮβ２に対して活性）による吸収は全体的に
Ｈ８Ｆ活性（α２マクログロブリン、フィブリノーゲン
など）を除去したが、上澄液のＬＡＦ含量を変えなかっ
た。抗ＩＦＮβ２と抗ＩＬＩａ、βの組み合わせによる
吸収はＰＢＭ−ＣＭからの急住相蛋白質誘継を引き起す
全ての活性を除去した。特異的抗ＩＦＮβ、による吸収
は、多分枝系であろうと単分校系であろうと、反応の何
れをも変えなかった。

全ての対照吸収（正常なウサギ、ヒツジ、子ウシ血清）
は活性の何れにも重大な効果をもっていなかった。

上記のよ５に、単核細１Ｈ８Ｆと抗線維芽細ＭＭｉＩＦ
Ｎβにより認められる活性の間に免疫学的−致がみられ
るので、１次的ヒト肺線維芽細胞ラインがＨ８Ｆ活性を
示すかどうかが次に決定された。

１表は構成要素的かあるいはＰＤＧＦによる刺激条件下
でのヒト肺線維芽細胞からの上澄液がヒト（１λ表）お
よびラット（ＩＢ表）仔細ＵＫよる急性相蛋白質の同一
スペクトルの重大な刺激を引き起すことを示してしる。

ＩＡ表 ＨｅｐＧ、細胞 対　　照　　　　　　　　　　　　　０．Ｉ　　　Ｌ３
　　　０．３　　　．４ｒＩＬｒ−１７９（２５０ｓ＝
シト／ｍ）　　　　　　　　＜、０１　　３．１　　　
　１．８　　　　１．２ＰＢＭ−ＣＭ（１：２０）　　
　　　　　０．４　１１．６　　５．８　　２．２Ｈ８
Ｆ（２０−ｗツ）／Ｗ）　　　　　　　　　　　　　　
１．０　　　８．０　　　　　１．１　　　　１．２線
維芽細飽−〇何Ｃｌ０）　　　　　１．４　　　＆、１
　　０．９　　１．５１Ｂ表 対　　照　　　　　　　　　　　　　　　　　７　　　
２５　　　　４０ｒ　ＩＩ、−１β（２５０ｓ−−シト
／ｗｊ）　　　　　　　　　　　　　８　　　　　２３
　　　　　３３ＰＢＭ−ＣＭ（１：　２０　）　　　　
　　　　５０　　３０　　１３Ｈ８Ｆ　（２０；Ｉ−Ｓ
ット／ａｔ）　　　　　　　　　　　　　　４５　　　
　　３５　　　　　１４線維芽細胞−ＣＭ（１：１０）
　　　　　　　４２　　　３３　　　２９同じ上澄液が
ＬＡＦ検定においてＩＬ−１活性を示さなかった。綜維
芽細Ｊ１３ＣＭにおけるＨ８Ｆ活性の量は細胞毎により
ＰＢＭ−ＣＭで認められる量と大体同じであった。

同一性を示唆する抗体および線維芽細ＩＪ−ＣＭ研究に
より、次に、精製したＥ、　ｃｏｌｉ−誘導ヒト組換え
ＢＳＦ−２がＰＢＭ−誘導Ｈ８Ｆの効果を２倍にするか
どうかが決定された。精製されたヒ）　ｒＢｓＦ−２（
Ｉハエβ２）はＰＢＭ誘導Ｈ８Ｆおよび線維芽細胞Ｈ８
Ｆで見られるような急性相蛋白質遺伝子表現の同一スペ
クトルをもったヒ）ＨｅｐＧ２細胞と一次的ラット肝細
胞の用量依存刺激を示した。各種の蛋白質が誘導される
だけでなく、アルブミンはＩＦＮβ２／ＢＳＦ−２によ
る合成において同時に減少した。ラット肝細胞によるα
２マクログロブリン合成あるいはＨｅｐＧ２細胞による
フィブリノーゲン合成の最大刺激はＢＳＦ−２の６０ユ
ニツトおよびＰ　ＢＭ　誘導Ｈ８Ｆの４０ユニツトによ
り達成された。ヒツジか子クシの抗ＩＦＮ−βによる精
製ｒＢ８Ｆ−２のｒＩｋ収は組換え分子により引き起さ
れるＨ８Ｆ活性を全体的に阻害した。

このように、主な急性相蛋白質誘導の原因となる分子活
性を精製する試みは、ＬＰＳ−活性化単核細胞は主に抗
プロテイナーゼの全て（システインプロテイナーゼ阻害
剤、α２マクログロブリン、コントラブシン、α１抗ト
リプシン）、ヘモベキシンおよびフィブリノーゲンの産
生を刺激する肝細胞刺激因子を放出するが、一方ではα
１酸性糖蛋白質、ハプトグロビンおよびＣ３の合成に対
するより小さいが重要な刺激効果をもつことを示した。

このように、この活性は最大スペクトルＨ８Ｆを表わす
。グルココルチコイドの許容できるレベルと一緒のＨ３
ＰとＩＩ、−１βはＰＢＭ条件付き培地における肝細胞
特異活性の全ての内容を表わしていると考えられる。

単核細胞誘導Ｈ８Ｆとハイプリドーマ成長因子（最近イ
ンターフェロンβ２と同じであることが示されている）
の間で最初に認められた同じ分子特性は前記のようにＰ
ＢＭ条件付き培地の抗体吸収によって確証された。ヒト
線維芽細胞誘導のインターフェロンβに対して増大する
抗体は、インターフェロンβ、とβ２に対して活性をも
ち、ＩＬ−１仲介肝細胞活性とＬＡＦ活性のみを残して
Ｈ８Ｆ活性を中和することができた。

Ｈ８Ｆ活性を中和せず、Ｈ３ＰとＩＩ、−１の間に血清
学的同一性がないことを示している抗ＩＬ−１によるそ
の上の吸収は残余の肝細胞特異活性を効果的に除去した
。インターフェロンβ、に特異的な抗体はＨ３Ｐまたは
ＬＡＦ活性に対して効果がなかった。このように、ヒト
の単核細胞における肝細胞刺激活性の全てではないとし
ても殆んどが抗インターフェロンβ２により認められる
分子の存在とＩＬ−１βの存在による。さらに、抗イン
ターフェロンーβ２抗血清の両源は３５８−メチオニン
標誠単核細胞上澄液から２３−２６ｋＤ蛋白質を免疫沈
澱することが認められ、これは１．３　ｋＤ　ＩＦＮ／
。

ｍＩＬＮＡがヒト単核細胞で表現されるという報告を確
証している（　Ｖａｑｕｅｒｏ　（１９８６）　Ｊ、Ｉ
ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ几ｅｓ、５、１６１−１６７　　）
。

線維芽細胞は単核細胞Ｈ８Ｆの場合のよ５に仔細泡の同
一の刺激を引き起す分子を放出しく１表）ｆ（ＳＦを中
和する同じ抗ＩＦＮβ２によりこの活性を全体的に吸収
することができることがここでも示されている。１ｉｌ
ｆ［芽細胞条件付培地がＩＬ−ＩｔたはＴＮＦを含まな
い場合には、この中和は全ての肝Ｊｕｔ　ｆＪ刺激活性
を除去した。このよ５に、単鎖細胞Ｈ８Ｆは血清学的に
は１腺維芽細胞Ｈ８Ｆおよび引き胱いて線維芽細胞ＩＦ
Ｎβ、に関連している。

代理人　三　宅　正　夫　他１名 手続（甫正書（自発） 昭和６３年ｌθ月１ｇ日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）インターフエロンβ＿２と実質的に同じ生物学的機
   能と生化学的本質をもつ化合物の肝細胞刺激量で肝細胞
   を処理することからなる急性相蛋白質を産生するよう肝
   細胞を刺激する方法。 ２）前記化合物がインターフエロンβ＿２である請求項
   １に記載の方法。 ３）インターフエロンβ＿２と実質的に同じ生物学的機
   能と生化学的本質をもつ化合物の肝細胞刺激量をそれに
   投与することからなる哺乳動物において急性相蛋白質産
   生を刺激する方法。 ４）前記化合物がインターフエロンβ＿２である請求項
   ３に記載の方法。 ５）前記肝細胞刺激量が前記哺乳動物の体重１Ｋｇ当り
   １μｇから５００μｇの範囲にある請求項４に記載の方
   法。 ６）インターフエロンβ＿２および生理学的に耐容でき
   るその担体と実質的に同じ生物学的機能と生化学的同一
   性をもつ化合物からなる物質の組成物。 ７）前記化合物がインターフエロンβ＿２である請求項
   ５に記載の組成物。 ８）水性注入型における請求項６に記載の組成物。 ９）インターフエロンβ＿２に対する抗体が結合されて
   いる固形支持物からなる免疫検定装置。 １０）抗インターフエロンβ＿２結合物質の存在または
   濃度について前記哺乳動物から抽出された血清を検定す
   ることからなる哺乳動物において組織損傷を診断する方
   法。 １１）抗インターフエロンβ＿２結合物質の存在または
   濃度について哺乳動物身体から抽出された血清を検定す
   ることからなる急性相蛋白質の肝細胞産生を刺激する因
   子の哺乳動物身体における有効性を決定する方法。