JPS6140568A - 酵素免疫測定法 - Google Patents
酵素免疫測定法Info
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- JPS6140568A JPS6140568A JP16237884A JP16237884A JPS6140568A JP S6140568 A JPS6140568 A JP S6140568A JP 16237884 A JP16237884 A JP 16237884A JP 16237884 A JP16237884 A JP 16237884A JP S6140568 A JPS6140568 A JP S6140568A
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- JP
- Japan
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- antigen
- enzyme
- composite
- separated
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
- G01N33/6866—Interferon
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は遺伝子組み換えヒトインターフェロンβ（以下
ｒｌＦＮ−βと略す）の酵素免疫測定法（ｔＥｎｚｙｍ
ｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ以下ＥＩＡと略す）に関す
るものである。
ｒｌＦＮ−βと略す）の酵素免疫測定法（ｔＥｎｚｙｍ
ｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ以下ＥＩＡと略す）に関す
るものである。
ヒトインターフェロンβは、抗ウィルス、抗腫傷薬とし
て有効であることが知られており、現在では組み換えＤ
ＮＡ技術により大量に生産されている。インターフェロ
ンの定量法としては、国立予防衛生研究所の方法すなわ
ちインターフェロンがウィルスによる細胞変性効果（ｃ
ｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｅｆｆｅｃｔ。
て有効であることが知られており、現在では組み換えＤ
ＮＡ技術により大量に生産されている。インターフェロ
ンの定量法としては、国立予防衛生研究所の方法すなわ
ちインターフェロンがウィルスによる細胞変性効果（ｃ
ｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｅｆｆｅｃｔ。
以下ＣＰＥと略す）を阻止することを利用したＣ Ｐ
Ｅ −ｄｙｅ −ｕｐｔａｋｅ法が広く用いられティる
。
Ｅ −ｄｙｅ −ｕｐｔａｋｅ法が広く用いられティる
。
しかしながらこの方法は細胞、ウィルス、血清等の影響
因子が多いこと、時間がかかること（４日間）専用の設
備（クリーンベンチ、安全キャビネット等）が必要なこ
と、労力、費用が多くかかることさらには精度管理が困
難であることといった多くの問題点を有している。ヒト
インターフェロンβを大量生産し、薬剤として開発して
いくためには、より簡便で精度の高い定量性が望まれる
。
因子が多いこと、時間がかかること（４日間）専用の設
備（クリーンベンチ、安全キャビネット等）が必要なこ
と、労力、費用が多くかかることさらには精度管理が困
難であることといった多くの問題点を有している。ヒト
インターフェロンβを大量生産し、薬剤として開発して
いくためには、より簡便で精度の高い定量性が望まれる
。
例えば、培養・精製工程での力価のチェックや工程改善
とか製剤化工程における力価のチェック。
とか製剤化工程における力価のチェック。
工程改善、或いは臨床サンプルの大量処理といった場合
にはＣＰ Ｅ −ｄｙｅ −ｕｐｔａｋｅ法は必ずしも
適当な定量法とは言い難い。しかしながらＣＰＥ−ｄｙ
ｅ−ｕｐｔａｋｅ法は非常に高感度であるため、これ◆
に代わる定量法は同様に高い感度を要求される。
にはＣＰ Ｅ −ｄｙｅ −ｕｐｔａｋｅ法は必ずしも
適当な定量法とは言い難い。しかしながらＣＰＥ−ｄｙ
ｅ−ｕｐｔａｋｅ法は非常に高感度であるため、これ◆
に代わる定量法は同様に高い感度を要求される。
従来より生体内微量成分等の定量には、特異的で鋭敏な
抗原抗体反応を利用する方法が数多く開発され、非常に
多くの利用例が知られている。中でも放射免疫測定法（
Ｒａｄｉｏ ｉ＋ｎ＋ｎｕｎｏａｓｓａｙ 、以下ＲＩ
Ａと略す）とＥＩＡ法は測定感度が非常に高く、定量性
に優れており、多くの物質例えばペプチド。
抗原抗体反応を利用する方法が数多く開発され、非常に
多くの利用例が知られている。中でも放射免疫測定法（
Ｒａｄｉｏ ｉ＋ｎ＋ｎｕｎｏａｓｓａｙ 、以下ＲＩ
Ａと略す）とＥＩＡ法は測定感度が非常に高く、定量性
に優れており、多くの物質例えばペプチド。
ホルモン、免疫グロブリンといった高分子物質から、ス
テロイドホルモン、ロイコトリエン、プロスタグランデ
ィン等の低分子物質まで幅広く応用されている。しかし
ながらＲＩＡ法は、”＋＋、”’１等のラジオアイソト
ープを使用するため専用の設備が必要であり、また被爆
、取り扱い管理、廃棄。
テロイドホルモン、ロイコトリエン、プロスタグランデ
ィン等の低分子物質まで幅広く応用されている。しかし
ながらＲＩＡ法は、”＋＋、”’１等のラジオアイソト
ープを使用するため専用の設備が必要であり、また被爆
、取り扱い管理、廃棄。
汚染等多くの問題をかかえている。そこで近年、ＲＴＡ
法に代わってアイソトープ標識の代わりに酵素標識を用
いるＥＩＡ法が注目されるようになった。
法に代わってアイソトープ標識の代わりに酵素標識を用
いるＥＩＡ法が注目されるようになった。
以下にダブルザンドイッチＥＴＡ法について、その測定
原理の概要を図面によって説明する。
原理の概要を図面によって説明する。
第一図に示すように抗原Ａ（ｉＦＮ−β）と抗原に対す
るポリクローナル抗体（この場合家兎で作成）を不溶化
した不溶化抗体Ｂを反応させる。
るポリクローナル抗体（この場合家兎で作成）を不溶化
した不溶化抗体Ｂを反応させる。
Ａ七Ｂは抗原抗体反応を生じ抗原抗体複合体Ｃを生ずる
（第一反応）。この複合体Ｃを反応溶液より分離し、抗
原Ａに対するモノクローナル抗体りの一定指と反応させ
る（第二反応）。ＣとＤはさらに抗原抗体反応を生じ抗
原抗体複合体Ｅを生ずる。この複合体Ｅを反応溶液より
分離しマウスの免疫グロブリンに対する抗体の酵素標識
体Ｆと反応させる。酵素標識抗体Ｆは複合体Ｅに結合し
、結合能を越えた量の酵素標識Ｆは遊離状態で存在する
。次いでさきの複合体Ｅに結合した酵素標識抗体Ｆと遊
離状態の酵素標識抗体Ｆを分離し、不溶化された（同相
に結合した）酵素活性を測定する。同時に既知濃度の標
準物質を用いて同様な操作を行い標準曲線を作成し、こ
れによって未知の抗原量を求める。サンドイツチ法は測
定しうる抗原量の変化が酵素標識抗体の活性の変化量に
比例するので広い範囲にわたる抗原の測定が可能である
。本発明は第一抗体として家兎の抗体、第二抗体として
モノクローナル抗体、第三抗体として市販の酵素標識抗
体を用いるが、第一抗体と第二抗体の組み合わせは任意
に選択できるので、ある特定の抗原に対して異なる２つ
の種の抗体を入手すればその抗体を特別に精製すること
なく、また酵素標識抗体を自分で作成することなく、そ
の抗原の定量が可能よなるものである。従って本発明に
より種々の多価抗原、例えばインターフェロンｔ−Ｐ△
、ＴＮＦ等々の簡便で高感度な定量が可能となる。
（第一反応）。この複合体Ｃを反応溶液より分離し、抗
原Ａに対するモノクローナル抗体りの一定指と反応させ
る（第二反応）。ＣとＤはさらに抗原抗体反応を生じ抗
原抗体複合体Ｅを生ずる。この複合体Ｅを反応溶液より
分離しマウスの免疫グロブリンに対する抗体の酵素標識
体Ｆと反応させる。酵素標識抗体Ｆは複合体Ｅに結合し
、結合能を越えた量の酵素標識Ｆは遊離状態で存在する
。次いでさきの複合体Ｅに結合した酵素標識抗体Ｆと遊
離状態の酵素標識抗体Ｆを分離し、不溶化された（同相
に結合した）酵素活性を測定する。同時に既知濃度の標
準物質を用いて同様な操作を行い標準曲線を作成し、こ
れによって未知の抗原量を求める。サンドイツチ法は測
定しうる抗原量の変化が酵素標識抗体の活性の変化量に
比例するので広い範囲にわたる抗原の測定が可能である
。本発明は第一抗体として家兎の抗体、第二抗体として
モノクローナル抗体、第三抗体として市販の酵素標識抗
体を用いるが、第一抗体と第二抗体の組み合わせは任意
に選択できるので、ある特定の抗原に対して異なる２つ
の種の抗体を入手すればその抗体を特別に精製すること
なく、また酵素標識抗体を自分で作成することなく、そ
の抗原の定量が可能よなるものである。従って本発明に
より種々の多価抗原、例えばインターフェロンｔ−Ｐ△
、ＴＮＦ等々の簡便で高感度な定量が可能となる。
次に本発明の詳細を実施例によって説明する。
実施例Ｊ
９６穴のＥＴΔ用プレート［Ｉｎｔｅｒ Ｍｅｄ社（デ
ンマーク）製〕に、第一抗体としてｒｒＦＮ−βに対す
る家兎中和抗血清より精製したＩｇＧ画分〔１μｇ’蛋
白／ｍ＋となるように０．０２ Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣ１
１０，０２８Ｍ ＮａＣＩ！ １０．０５％ＮａＮ、
（ｐＨ８，０）で希釈した溶液〕を１００μｍ／穴ず
つ分注し、４℃で一晩放置して抗体をプレート穴底面に
コートさせた。
ンマーク）製〕に、第一抗体としてｒｒＦＮ−βに対す
る家兎中和抗血清より精製したＩｇＧ画分〔１μｇ’蛋
白／ｍ＋となるように０．０２ Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣ１
１０，０２８Ｍ ＮａＣＩ！ １０．０５％ＮａＮ、
（ｐＨ８，０）で希釈した溶液〕を１００μｍ／穴ず
つ分注し、４℃で一晩放置して抗体をプレート穴底面に
コートさせた。
抗体溶液を捨てた後にブロッキングバッファー〔１％牛
血清アルブミン（ＢＳＡ）／フォスフェートバッファー
・セーライン（ＰＢＳ）（リン酸２ナトリウム１２水塩
２．９ ｇ 、 リン酸１カリウム０．２ｇ、塩化ナ
トリウム８．０ ｇ 、塩化カリウム０、２ ｇ 、蒸
留水１−Ａ、ｐＨ７，４＞） ２００μｍ／穴を分注し
、室温で３０分間静置し、プレート底面上の蛋白結合性
残基をＢＳＡでコートした。上記プレートをＰＢＳ−Ｔ
ｗｅｅｎ ［０，１％Ｔｗｅｅｎ８０（花王アトラス社
製）／ＰＢＳ）で３回洗滌した後、５−５０００ ｒＵ
／ｍｌのｒＩＦＮ−β（特開昭５７−７７６５４記載の
方法で製造）を５０μｍ／、穴ずつ分注し室温で２時間
インキュベートした。
血清アルブミン（ＢＳＡ）／フォスフェートバッファー
・セーライン（ＰＢＳ）（リン酸２ナトリウム１２水塩
２．９ ｇ 、 リン酸１カリウム０．２ｇ、塩化ナ
トリウム８．０ ｇ 、塩化カリウム０、２ ｇ 、蒸
留水１−Ａ、ｐＨ７，４＞） ２００μｍ／穴を分注し
、室温で３０分間静置し、プレート底面上の蛋白結合性
残基をＢＳＡでコートした。上記プレートをＰＢＳ−Ｔ
ｗｅｅｎ ［０，１％Ｔｗｅｅｎ８０（花王アトラス社
製）／ＰＢＳ）で３回洗滌した後、５−５０００ ｒＵ
／ｍｌのｒＩＦＮ−β（特開昭５７−７７６５４記載の
方法で製造）を５０μｍ／、穴ずつ分注し室温で２時間
インキュベートした。
ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗滌後、第二抗体としてｒＩ
ＦＮ−βに対するモノクローナル抗体（特開昭５７−７
７６５４記載の方法で製造したｒＩＦＮ−βを用いＮａ
ｔｕｒｅ ２５６ ４９５ （１９７５） 記載の方
法に従って製造した。製造法の詳細は特願昭５８−４５
６６８にある。）〔ＰＢＳで５μｇ／ｍｌに希釈した溶
液〕を５０μｌ／穴分注し室温で２時間インキュベート
した。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗滌後、第三抗体とし
てヤギ抗マウスイムノグロブリンＰ（ａｂ’）２−β−
Ｄ−ガラクトシダーゼ結合物〔＾ｍｅｒｓｈａｍ （英
）社製〕の１０００倍希釈液を５０μｌ／穴ずつ分注し
４℃で一晩インキユベートした。ＰＩ’３Ｓ−Ｔｗｅｅ
ｎで３回洗滌後、オルソニトロフェニルガラクトピラノ
シド溶液［０，９ｍｇ ／ｍｌとなるように］ Ｏｍ
Ｍ Ｍ ｇ ＣＲ２１０，１Ｍ２−メルカプトエタノ
ール／ＰＢＳで希釈した溶液］を１００μ、ｉ２／穴ず
つ分注し３７℃で１時間放置後、１Ｍ炭酸す） ＩＪウ
ム溶液を５０μｌ／穴ずつ分注し反応を停止させた。マ
イクロプレートリーダーにより、４０５ｎｍでの吸光度
を測定した。その結果第２図に示すとおり、ｒ ＩＦＮ
−βの添加量と４０５ｎｍの吸光度に比例関係があるこ
とがわかった。
ＦＮ−βに対するモノクローナル抗体（特開昭５７−７
７６５４記載の方法で製造したｒＩＦＮ−βを用いＮａ
ｔｕｒｅ ２５６ ４９５ （１９７５） 記載の方
法に従って製造した。製造法の詳細は特願昭５８−４５
６６８にある。）〔ＰＢＳで５μｇ／ｍｌに希釈した溶
液〕を５０μｌ／穴分注し室温で２時間インキュベート
した。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗滌後、第三抗体とし
てヤギ抗マウスイムノグロブリンＰ（ａｂ’）２−β−
Ｄ−ガラクトシダーゼ結合物〔＾ｍｅｒｓｈａｍ （英
）社製〕の１０００倍希釈液を５０μｌ／穴ずつ分注し
４℃で一晩インキユベートした。ＰＩ’３Ｓ−Ｔｗｅｅ
ｎで３回洗滌後、オルソニトロフェニルガラクトピラノ
シド溶液［０，９ｍｇ ／ｍｌとなるように］ Ｏｍ
Ｍ Ｍ ｇ ＣＲ２１０，１Ｍ２−メルカプトエタノ
ール／ＰＢＳで希釈した溶液］を１００μ、ｉ２／穴ず
つ分注し３７℃で１時間放置後、１Ｍ炭酸す） ＩＪウ
ム溶液を５０μｌ／穴ずつ分注し反応を停止させた。マ
イクロプレートリーダーにより、４０５ｎｍでの吸光度
を測定した。その結果第２図に示すとおり、ｒ ＩＦＮ
−βの添加量と４０５ｎｍの吸光度に比例関係があるこ
とがわかった。
次にモノクローナル抗体の活性認識について述べる。
９６穴のＰＶＣプレート〔三晃純薬社製〕に抗ウィルス
活性を有するｒｌＦＮ−β［：４Ｘ１０６［１／ｍ１に
調製］と熱失活させたｒ ＴＦＮ−β〔９０℃で３０分
間処理〕を５０μｌ／穴ずつ分注し、４℃で一晩放置し
て抗原をプレート底面にコートさせた。抗原溶液を捨て
た後ブロッキングバッファー［１％ＢＳΔ−ＰＢＳ］１
００μｌ／穴を分注し室温で３０分間静置し、プレート
底面上の蛋白結合性残基をＢＳＡでコートした。上記プ
レートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗滌後、（＋２５１
１うペルヤギ抗マウスイムノグ口７−リ７Ｆ （ａ ｂ
’ ） ２ＣＡｍｅｒｓｈａｍ社（英）製〕を３３．
（１００ｃＰＭ ／穴ずつ分注し室温で２時間インキュ
ベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗滌後、各穴に
結合した放射能をオートウェルガンマカウンターで測定
した。
活性を有するｒｌＦＮ−β［：４Ｘ１０６［１／ｍ１に
調製］と熱失活させたｒ ＴＦＮ−β〔９０℃で３０分
間処理〕を５０μｌ／穴ずつ分注し、４℃で一晩放置し
て抗原をプレート底面にコートさせた。抗原溶液を捨て
た後ブロッキングバッファー［１％ＢＳΔ−ＰＢＳ］１
００μｌ／穴を分注し室温で３０分間静置し、プレート
底面上の蛋白結合性残基をＢＳＡでコートした。上記プ
レートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗滌後、（＋２５１
１うペルヤギ抗マウスイムノグ口７−リ７Ｆ （ａ ｂ
’ ） ２ＣＡｍｅｒｓｈａｍ社（英）製〕を３３．
（１００ｃＰＭ ／穴ずつ分注し室温で２時間インキュ
ベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗滌後、各穴に
結合した放射能をオートウェルガンマカウンターで測定
した。
結果を第１表に示す。
第１表
は、明らかに不活化されたｒＩＦＮ−βへの結合が活性
なｒｌＦＮ−βへの結合よりも低く、抗ウィルス活性の
活性部位を認識していることが示唆される。
なｒｌＦＮ−βへの結合よりも低く、抗ウィルス活性の
活性部位を認識していることが示唆される。
実施例２
ヒトＩＦＮ−α、ヒトＩＦＮ−ｒ、ナチュラルヒトＪＰ
Ｎ−βとの交差反応性 上記ＥＩＡ法により、ヒトＩＦＮ−α（白血球細胞由来
）ヒトＩＦＮ−Ｔ（遺伝子組み換え）およびナチュラル
ヒト■ＦＮ−β（線維芽細胞由来）との交差反応性につ
いて検討した。結果を第３図に示した。ヒトＩＦＮ−α
およびヒトＩＦＮ−ｒは１０’ ＩＩ／ｍｌまで全く交
差反応性は認められなかった。またナチュラルヒ）ＴＦ
Ｎ−βとは一定の割合で交差反応することが示された。
Ｎ−βとの交差反応性 上記ＥＩＡ法により、ヒトＩＦＮ−α（白血球細胞由来
）ヒトＩＦＮ−Ｔ（遺伝子組み換え）およびナチュラル
ヒト■ＦＮ−β（線維芽細胞由来）との交差反応性につ
いて検討した。結果を第３図に示した。ヒトＩＦＮ−α
およびヒトＩＦＮ−ｒは１０’ ＩＩ／ｍｌまで全く交
差反応性は認められなかった。またナチュラルヒ）ＴＦ
Ｎ−βとは一定の割合で交差反応することが示された。
従って本状はヒ）ＩＦＮ−βに特異的な定量法であるこ
とが示された。
とが示された。
実施例３
ｒｌＦＮ−β化学失活サンプルでのＥＩＡ法とＣＰＥ−
ｄｙｅ−ｕｐｔａｋｅ法の比較ｒＩＦＮ−βＩ：４ Ｘ
１０７ｕ／ｍ＋に調製〕溶液１ｍ１を以下の条件で反
応させた後、ＥＩＡ法とＣＰＢ−ｄｙｅ−ｕｐｔａｋｅ
法で同時に定量した。
ｄｙｅ−ｕｐｔａｋｅ法の比較ｒＩＦＮ−βＩ：４ Ｘ
１０７ｕ／ｍ＋に調製〕溶液１ｍ１を以下の条件で反
応させた後、ＥＩＡ法とＣＰＢ−ｄｙｅ−ｕｐｔａｋｅ
法で同時に定量した。
（１）３７℃２時間静置、 （２） ９５℃５分間静置
。
。
（３）５％β−メルカプトエタノール（ＭＥ）下３７℃
２時間静置、（４）５％β−メルカプトエタノール下４
℃２時間静置・（５）０．１％だつｉ″′′デ′ル
２１硫酸（ＳＤＳ）下４℃２時間静置、（６）
ＩＮＨ（１下４℃２時間静置、（７）ＩＮ ＮａＯＨ
下４℃２時間静置、（８）４℃下スターラーで２時間攪
拌、対照としては４℃２時間静置したものを用いた。結
果を第２表に示した。第２表中の値はすべて残存活性％
で示した。第２表のように本状はＣＰＥ−ｄｙｅ−ｕｐ
ｔａｋｅ法と相関が見られ、抗ウィルス活性を認識して
いることが示唆された。
２時間静置、（４）５％β−メルカプトエタノール下４
℃２時間静置・（５）０．１％だつｉ″′′デ′ル
２１硫酸（ＳＤＳ）下４℃２時間静置、（６）
ＩＮＨ（１下４℃２時間静置、（７）ＩＮ ＮａＯＨ
下４℃２時間静置、（８）４℃下スターラーで２時間攪
拌、対照としては４℃２時間静置したものを用いた。結
果を第２表に示した。第２表中の値はすべて残存活性％
で示した。第２表のように本状はＣＰＥ−ｄｙｅ−ｕｐ
ｔａｋｅ法と相関が見られ、抗ウィルス活性を認識して
いることが示唆された。
第 ２ 表
第１図は、本発明ダブルサンドイッチＥＩＡ法の原理を
示す。 第２図は、ヒ）ｒＩＦＮ−βの本発明方法による測定で
得られる標準曲線を示す。 第３図は、ヒ）ｒｌＦＮ−α、β、Ｔの交差反応性を本
発明方法で測定した結果を示す。図中、丸印はヒトｒｌ
ＦＮ−β、黒丸印はヒトＩＦＮ−β、三角印はヒ）ＩＦ
Ｎ−αまたはヒ）ｒＩＦＮ−αを示す。 特許出願人 （１０２）協和醗酵工業株式会社代表者
加 藤 幹 夫
示す。 第２図は、ヒ）ｒＩＦＮ−βの本発明方法による測定で
得られる標準曲線を示す。 第３図は、ヒ）ｒｌＦＮ−α、β、Ｔの交差反応性を本
発明方法で測定した結果を示す。図中、丸印はヒトｒｌ
ＦＮ−β、黒丸印はヒトＩＦＮ−β、三角印はヒ）ＩＦ
Ｎ−αまたはヒ）ｒＩＦＮ−αを示す。 特許出願人 （１０２）協和醗酵工業株式会社代表者
加 藤 幹 夫
Claims (1)
- 遺伝子組み換えヒトインターフェロンβに対するポリク
ローナル抗体とモノクローナル抗体及び酵素標識抗体を
用い、固相ダブルサンドイッチ法による酵素免疫測定法
により遺伝子組み換えヒトインターフェロンβを定量す
る方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16237884A JPS6140568A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | 酵素免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16237884A JPS6140568A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | 酵素免疫測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6140568A true JPS6140568A (ja) | 1986-02-26 |
Family
ID=15753436
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16237884A Pending JPS6140568A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | 酵素免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6140568A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63118656A (ja) * | 1986-05-13 | 1988-05-23 | Sanyo Chem Ind Ltd | 酵素免疫測定法 |
| JPS63206657A (ja) * | 1987-02-23 | 1988-08-25 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 蛋白の定量方法 |
| EP0317050A2 (en) * | 1987-07-20 | 1989-05-24 | McMASTER UNIVERSITY | Hepatocyte stimulating factor |
-
1984
- 1984-07-31 JP JP16237884A patent/JPS6140568A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63118656A (ja) * | 1986-05-13 | 1988-05-23 | Sanyo Chem Ind Ltd | 酵素免疫測定法 |
| JPS63206657A (ja) * | 1987-02-23 | 1988-08-25 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 蛋白の定量方法 |
| EP0317050A2 (en) * | 1987-07-20 | 1989-05-24 | McMASTER UNIVERSITY | Hepatocyte stimulating factor |
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