JPH01104163A - 動物細胞の凍結保存容器 - Google Patents
動物細胞の凍結保存容器Info
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- JPH01104163A JPH01104163A JP62263507A JP26350787A JPH01104163A JP H01104163 A JPH01104163 A JP H01104163A JP 62263507 A JP62263507 A JP 62263507A JP 26350787 A JP26350787 A JP 26350787A JP H01104163 A JPH01104163 A JP H01104163A
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Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、動物細胞の凍結保存容器に関するものである
。
。
［従来の技術］
最近、動物細胞を利用して、種々の物質を生産したり、
病気の治療薬を開発する事が盛んに行なわれているため
、利用する細胞の保存が必要となっている。ところで、
細胞の寿命は極めて短いため、培地で培養しながら、細
胞を縫代維持しなければならない。
病気の治療薬を開発する事が盛んに行なわれているため
、利用する細胞の保存が必要となっている。ところで、
細胞の寿命は極めて短いため、培地で培養しながら、細
胞を縫代維持しなければならない。
し°かしながら、培養条件は細胞の種類によりて相違す
るため、培養には非常に手間がかかり、また、細胞相互
に置換や侵入が生じたり、細胞が微生物に汚染されたり
する恐れがある。また継代有限性の細胞は若い継代層の
時期に保存する必要があるし、特に、物質生産を目的と
する遺伝子組換え型の動物細胞や抗体等を産生ずるハイ
ブリドーマなどは培養中に性質変化を来すこともあり、
貴重な資源を損なうだけでなく性質変化の有無をヂエッ
クしなくては使用できないという問題がある。
るため、培養には非常に手間がかかり、また、細胞相互
に置換や侵入が生じたり、細胞が微生物に汚染されたり
する恐れがある。また継代有限性の細胞は若い継代層の
時期に保存する必要があるし、特に、物質生産を目的と
する遺伝子組換え型の動物細胞や抗体等を産生ずるハイ
ブリドーマなどは培養中に性質変化を来すこともあり、
貴重な資源を損なうだけでなく性質変化の有無をヂエッ
クしなくては使用できないという問題がある。
そこで、細胞を凍結用の培地とともにアンプルやチュー
ブ中に封入しこれを凍結して保存する方法が考えられて
いる。この場合の凍結手段としては、事業所や実験室で
広く使用されている一８０℃程度の超低温槽が用いられ
ることもあるが、−１００℃以下の温度で低ければ低い
ほど良好な′結果が得られるので最近は液体窒素が用い
られるようになっている。この方法によれば細胞を培養
する必要がないため、細胞の縫代変化を来さない等の長
所がある。
ブ中に封入しこれを凍結して保存する方法が考えられて
いる。この場合の凍結手段としては、事業所や実験室で
広く使用されている一８０℃程度の超低温槽が用いられ
ることもあるが、−１００℃以下の温度で低ければ低い
ほど良好な′結果が得られるので最近は液体窒素が用い
られるようになっている。この方法によれば細胞を培養
する必要がないため、細胞の縫代変化を来さない等の長
所がある。
［発明が解決しようとする問題点］
しかしながら、細胞凍結には、急速凍結ではなく緩徐な
凍結が必要とされており、アンプル等を超低温槽や液体
窒素中にそのまま入れると冷却速度が速すぎて細胞の死
滅や失活を来すという問題があった。このように死滅や
失活を来たした細胞は利用不能になり凍結保存の意味が
なくなってしまう。
凍結が必要とされており、アンプル等を超低温槽や液体
窒素中にそのまま入れると冷却速度が速すぎて細胞の死
滅や失活を来すという問題があった。このように死滅や
失活を来たした細胞は利用不能になり凍結保存の意味が
なくなってしまう。
本発明は、従来用いられている超低温槽をそのまま用い
て細胞の緩徐な凍結を行える動物細胞凍結容器を提供す
ることを目的とする。
て細胞の緩徐な凍結を行える動物細胞凍結容器を提供す
ることを目的とする。
［問題点を解決するための手段］
本発明は、その目的を達成させるために、次のような溝
底としている。すなわち、本発明に係る凍結保存容器は
、有底の外筒と、この外筒の内部に互いに離間した状態
で配置された有底の内筒とを１丁している。内筒と外筒
との間の開口部には蓋を設け、これら内筒と外筒との間
の中空部に水で希釈して２０〜４０容爪％としたアセト
ン水を封入している。内筒内には凍結保存液とともに動
物細胞を封入した封入容器を収納し、前記内筒の上部開
口面にはこの開口面を密閉する断熱性の蓋を設けたもの
としている。
底としている。すなわち、本発明に係る凍結保存容器は
、有底の外筒と、この外筒の内部に互いに離間した状態
で配置された有底の内筒とを１丁している。内筒と外筒
との間の開口部には蓋を設け、これら内筒と外筒との間
の中空部に水で希釈して２０〜４０容爪％としたアセト
ン水を封入している。内筒内には凍結保存液とともに動
物細胞を封入した封入容器を収納し、前記内筒の上部開
口面にはこの開口面を密閉する断熱性の蓋を設けたもの
としている。
［実施例コ
以下、本発明の凍結保存容器の一実施例を第１図を参照
しながら説明する。この図において１は本実施例の凍結
保存容器である。この凍結保存容器１は、有底円筒状の
外筒２と、この外筒２の内部に互いに離間した状態で配
置されたやはり有底円筒状の内筒３とを有している。こ
れら外筒２と内筒３とは、ともに断熱性の高い材料から
なっており、本実施例ではポリエヂレン製である。
しながら説明する。この図において１は本実施例の凍結
保存容器である。この凍結保存容器１は、有底円筒状の
外筒２と、この外筒２の内部に互いに離間した状態で配
置されたやはり有底円筒状の内筒３とを有している。こ
れら外筒２と内筒３とは、ともに断熱性の高い材料から
なっており、本実施例ではポリエヂレン製である。
前記内１’１７１３と外筒２との間の開口部には、この
開口部を塞ぐＭ４が設けられている。この蓋４は、内筒
３・外筒２と一体に形成されているとともに、内筒３と
外筒２との間の中空部５と外部とを連通ずる孔６が対向
する位置に２箇所設けられている。
開口部を塞ぐＭ４が設けられている。この蓋４は、内筒
３・外筒２と一体に形成されているとともに、内筒３と
外筒２との間の中空部５と外部とを連通ずる孔６が対向
する位置に２箇所設けられている。
前記中空部５には蒸留水で希釈して２０〜４０容１％、
好ましくは３０容量％としたアセトン水７が前記Ｍ４近
傍まで封入されている。
好ましくは３０容量％としたアセトン水７が前記Ｍ４近
傍まで封入されている。
前記内筒３内には、凍結保存液８とともに動物細胞（図
示せず）を封入しかつ中空角柱状のアルミニウム製のチ
ューブから形成された封入容器９が収納されている。前
記凍結保存液８としては、本実施例では、ジメヂルスル
フォキサイド（Ｄ ｉｍｅｔｈｙｌ ５ｕｌｆｏｘｉｄ
ａ） Ｉ Ｏ容量％、カーフ フェータルボビン セル
ム（Ｃａｌｒ、 Ｆ ｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒ
ｕｍ）１５容量％、イーグルズ エム、イー、エム；ア
ールズベース（Ｅａｇｌｅ’ ｓ Ｍ 、Ｅ 、 Ｍ
；Ｅ ａｒｌｅ’ ５−ｂａｓｅ）７５容量％、（但し
、炭酸ガスおよび炭酸水素ナトリウムを使用して凍結保
存液８のｐｉ−１値をｐｉ−１６。
示せず）を封入しかつ中空角柱状のアルミニウム製のチ
ューブから形成された封入容器９が収納されている。前
記凍結保存液８としては、本実施例では、ジメヂルスル
フォキサイド（Ｄ ｉｍｅｔｈｙｌ ５ｕｌｆｏｘｉｄ
ａ） Ｉ Ｏ容量％、カーフ フェータルボビン セル
ム（Ｃａｌｒ、 Ｆ ｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒ
ｕｍ）１５容量％、イーグルズ エム、イー、エム；ア
ールズベース（Ｅａｇｌｅ’ ｓ Ｍ 、Ｅ 、 Ｍ
；Ｅ ａｒｌｅ’ ５−ｂａｓｅ）７５容量％、（但し
、炭酸ガスおよび炭酸水素ナトリウムを使用して凍結保
存液８のｐｉ−１値をｐｉ−１６。
８〜７．０に調整した）の組成のものが用いられている
。そして、この凍結保存液８に対する細胞の密度はｌＸ
ｌ０’〜５ｘｔｏ”個／ＩＩＱ程度とするのが好ましい
。また前記封入容器９としては、本実施例では中空角柱
状のアルミニウム製のチューブを用いたが、これに限ら
ず中空円柱状でも良く、また、ガラス・メタル・スラグ
等でできたアンプルでも良い。
。そして、この凍結保存液８に対する細胞の密度はｌＸ
ｌ０’〜５ｘｔｏ”個／ＩＩＱ程度とするのが好ましい
。また前記封入容器９としては、本実施例では中空角柱
状のアルミニウム製のチューブを用いたが、これに限ら
ず中空円柱状でも良く、また、ガラス・メタル・スラグ
等でできたアンプルでも良い。
前記内筒３の上部開口面３ａには、この開口面３ａを密
閉する断熱性の蓋１０が載置されている。
閉する断熱性の蓋１０が載置されている。
このＺｔ １０は、外Ｉｍ２と等しい径の円形板状に形
成されたもので、その下側面１０ａに、前記内筒３の内
径と同じかどくわ゛ずかに小さい径の円柱状の嵌合部１
１が設けられている。この嵌合部１１は、前記内Ｆ’Ｊ
３の内側に嵌合して内筒３内部を気密に保つものである
。また、このとき蓋１０の下側面１０ａによって蓋４の
孔６が塞がれることになる。
成されたもので、その下側面１０ａに、前記内筒３の内
径と同じかどくわ゛ずかに小さい径の円柱状の嵌合部１
１が設けられている。この嵌合部１１は、前記内Ｆ’Ｊ
３の内側に嵌合して内筒３内部を気密に保つものである
。また、このとき蓋１０の下側面１０ａによって蓋４の
孔６が塞がれることになる。
つぎに、本実施例の凍結保存容器１の使用方法を説明す
る。
る。
まず、保存の対象となる動物細胞を凍結保存液８に浮遊
させ、封入容器９に充填したのち封入容器９の開口部を
溶封する。つぎに封入容器９を内筒３の底面上に載置し
て収納してから、蓋１０の嵌合部１１を内筒３に嵌合さ
せて内筒３の開口面３ａを密閉する。
させ、封入容器９に充填したのち封入容器９の開口部を
溶封する。つぎに封入容器９を内筒３の底面上に載置し
て収納してから、蓋１０の嵌合部１１を内筒３に嵌合さ
せて内筒３の開口面３ａを密閉する。
ついで、凍結保存容器ｌを一８０℃の超低温槽に収納す
る。すると凍結保存容器ｌ内の動物細胞は、緩徐な冷却
速度で冷却され凍結されて、その温度が一８０℃に到達
し、この温度で保存される。
る。すると凍結保存容器ｌ内の動物細胞は、緩徐な冷却
速度で冷却され凍結されて、その温度が一８０℃に到達
し、この温度で保存される。
なお、さらに低温で保存する必要のあるときは、細胞を
凍結保存容器ｌに収納してから約２〜４時間後に液体窒
素タンクに移入する。
凍結保存容器ｌに収納してから約２〜４時間後に液体窒
素タンクに移入する。
また、上記のように凍結された細胞を解凍して再培養す
るには、次のようにする。まず超低温槽中の凍結保存容
器ｌから封入容器９を取り出し、温水のなかで激しくゆ
すりながら凍結保存液８を解凍し、その後直ちに氷水中
にいれて冷却する。
るには、次のようにする。まず超低温槽中の凍結保存容
器ｌから封入容器９を取り出し、温水のなかで激しくゆ
すりながら凍結保存液８を解凍し、その後直ちに氷水中
にいれて冷却する。
ついで、封入容器９中の細胞を取り出した後、遠心分離
機で洗浄し、冷却してない増殖用培養液を細胞に加え、
適当な細胞数に調整した後培養する。
機で洗浄し、冷却してない増殖用培養液を細胞に加え、
適当な細胞数に調整した後培養する。
前記の冷却速度としては、−１’ｃ、／ｍｉｎ程度が望
ましいことが実験的に確かめられており、本実施例の保
存容器１では、第２図に示すようにこの冷却速度にきわ
めて近い値が得られる。第２図のデータは次のような条
件下で得られた。
ましいことが実験的に確かめられており、本実施例の保
存容器１では、第２図に示すようにこの冷却速度にきわ
めて近い値が得られる。第２図のデータは次のような条
件下で得られた。
［条件］
外筒の高さ ７２ｍｍ
外筒の幅 ６２ｍｍ
内筒の高さ ６２ｍｍ
内筒の幅 ４７ｍｍ
内筒と外筒の素材 ポリエヂレン内筒と外筒の
中空部の容ｆｆｋｌｏＯ＋１２アセトン水の容量
１００ｍＱ超低温槽の温度 −８０℃
（一定）凍結保存液（エフ、ニス、培地）の組成ジメチ
ルスルフォキサイド１（ｌｆｆｆｆ１％カーフ フェー
タル ボビン セルム１５容量％ イーグルズ エム、イー、エム（アールズベース）７５
容量％ １）！−１６．８〜７．０（炭酸ガスおよび炭酸水素ナ
トリウムの添加によりｐｔ−を値を調整した）つぎに、
上記実験例の凍結保存容器１を使用して保存した動物細
胞の生存率を第１表〜第３表に示す。
中空部の容ｆｆｋｌｏＯ＋１２アセトン水の容量
１００ｍＱ超低温槽の温度 −８０℃
（一定）凍結保存液（エフ、ニス、培地）の組成ジメチ
ルスルフォキサイド１（ｌｆｆｆｆ１％カーフ フェー
タル ボビン セルム１５容量％ イーグルズ エム、イー、エム（アールズベース）７５
容量％ １）！−１６．８〜７．０（炭酸ガスおよび炭酸水素ナ
トリウムの添加によりｐｔ−を値を調整した）つぎに、
上記実験例の凍結保存容器１を使用して保存した動物細
胞の生存率を第１表〜第３表に示す。
第１表゛
［以下余白］
第２表
［以下余白］
第３表
［以下余白コ
以上説明したように、本実施例の凍結保存容器１によれ
ば、従来から事業所や研究室等で広く用いられている超
低温槽を用いて、動物細胞の緩徐な凍結を好ましい冷却
速度下において行うことができるという利点がある。特
に本実施例の凍結保存容器°１によれば、なんら機械的
あるいは電気的な制御手段を用いずに簡易な手段で好ま
しい冷却速度を得ることができる。
ば、従来から事業所や研究室等で広く用いられている超
低温槽を用いて、動物細胞の緩徐な凍結を好ましい冷却
速度下において行うことができるという利点がある。特
に本実施例の凍結保存容器°１によれば、なんら機械的
あるいは電気的な制御手段を用いずに簡易な手段で好ま
しい冷却速度を得ることができる。
［発明の効果コ
本発明は、それぞれ有底の外筒と内筒との間の開口部に
蓋を設け、これら内筒と外筒との間の中空部に水で希釈
して２０〜４０容量％としたアセトン水を封入し、内筒
内に動物細胞を封入した封入容器を収納し、前記内筒の
上部開口面に断熱性の蓋を設けた動物細胞の凍結保存容
器に構成されるので、簡単な構造でありながら超低温槽
に容器を収納するだけで動物細胞の理想的に緩徐な凍結
を行うことができ、凍結後の動物細胞の生存率を高める
ことができるだけでなく、加えて凍結年数や移植性等に
も好ましい結果が得られるというすぐれた効果を奏する
。
蓋を設け、これら内筒と外筒との間の中空部に水で希釈
して２０〜４０容量％としたアセトン水を封入し、内筒
内に動物細胞を封入した封入容器を収納し、前記内筒の
上部開口面に断熱性の蓋を設けた動物細胞の凍結保存容
器に構成されるので、簡単な構造でありながら超低温槽
に容器を収納するだけで動物細胞の理想的に緩徐な凍結
を行うことができ、凍結後の動物細胞の生存率を高める
ことができるだけでなく、加えて凍結年数や移植性等に
も好ましい結果が得られるというすぐれた効果を奏する
。
第１図は、本発明の凍結保存容器の一実施例を示す断面
図、第２図は本実施例の凍結保存容器を使用したときの
冷却速度を示すグラフである。 ！・・・凍結保存容器、２・・・外筒、３・・・内筒、
４・・・開口部に設けられた蓋、５・・・中空部、７・
・・アセトン水、８・・・凍結保存液、９・・・封入容
器、！０・・・開口面を密閉する蓋。
図、第２図は本実施例の凍結保存容器を使用したときの
冷却速度を示すグラフである。 ！・・・凍結保存容器、２・・・外筒、３・・・内筒、
４・・・開口部に設けられた蓋、５・・・中空部、７・
・・アセトン水、８・・・凍結保存液、９・・・封入容
器、！０・・・開口面を密閉する蓋。
Claims (1)
- 有底の外筒と、この外筒の内部に互いに離間した状態で
配置された有底の内筒とを有し、内筒と外筒との間の開
口部に蓋を設け、これら内筒と外筒との間の中空部に水
で希釈して２０〜４０容量％としたアセトン水を封入し
、内筒内に凍結保存液とともに動物細胞を封入した封入
容器を収納し、前記内筒の上部開口面にこの開口面を密
閉する断熱性の蓋を設けたことを特徴とする動物細胞の
凍結保存容器。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62263507A JPH01104163A (ja) | 1987-10-19 | 1987-10-19 | 動物細胞の凍結保存容器 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62263507A JPH01104163A (ja) | 1987-10-19 | 1987-10-19 | 動物細胞の凍結保存容器 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01104163A true JPH01104163A (ja) | 1989-04-21 |
| JPH058676B2 JPH058676B2 (ja) | 1993-02-02 |
Family
ID=17390488
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62263507A Granted JPH01104163A (ja) | 1987-10-19 | 1987-10-19 | 動物細胞の凍結保存容器 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01104163A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006059626A1 (ja) * | 2004-12-03 | 2006-06-08 | Nipro Corporation | 生物学的試料保存用デバイス |
| JP2010263801A (ja) * | 2009-05-12 | 2010-11-25 | Hitachi Plant Technologies Ltd | 凍結保存方法、凍結デバイス、凍結保存システム |
| JP2023535177A (ja) * | 2020-07-23 | 2023-08-16 | クーパーサージカル・インコーポレイテッド | 凍結保存用途のためのキャニスターキャップ |
-
1987
- 1987-10-19 JP JP62263507A patent/JPH01104163A/ja active Granted
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH058676B2 (ja) | 1993-02-02 |
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