JP7877458B2 - Ａｐｏｃ３発現を調節するための組成物及び方法 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１２月１日出願の米国仮出願第６３／２６４，７３０号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の優先権を主張する。

配列表
ＷＩＰＯ標準ＳＴ．２６の規則に準拠した配列表は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。配列表は、ＸＭＬとしてエンコードされたＡＳＣＩＩ形式で、ＥＦＳ－Ｗｅｂ経由で電子文書として提出されている。２０２２年１１月２９日に作成された電子文書のタイトルは「４００９３０－０３２ＷＯ－１９４３４４＿ＳＴ２６．ｘｍｌ」であり、サイズは２，５９９，２７７バイトである。

本開示は、一般的には生物学及び医学に関するものであり、より具体的には、オリゴヌクレオチド組成物、及びアポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）遺伝子発現を阻害又は低減するためのその使用、ならびにＡＰＯＣ３に関連する疾患、障害、及び／又は状態を治療するためのその使用に関するものである。

ＡＰＯＣ３は、ＡＰＯＣ３によってコードされるタンパク質であり、高トリグリセリドリポタンパク質（ＴＲＬ）及び高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）上に存在し、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）及び肝臓リパーゼ（ＨＬ）に対する阻害活性を有し、ＴＲＬの肝臓クリアランスを遅らせるタンパク質である。ヒトＡＰＯＣ３は肝細胞と小腸で多く発現している。

ＡＰＯＣ３遺伝子には、天然に存在する機能獲得型多型がいくつか特定されており、これが高トリグリセリド血症の発症に寄与する要因であると推測されている。これらの多型は、高トリグリセリド血症に起因する非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）、インスリン抵抗性、急性冠状動脈疾患（ＡＣＤ）、冠状動脈性心疾患（ＣＨＤ）など、幅広い疾患と強く関連している。いくつかの機能喪失型多型は、血漿トリグリセリド及び肝臓脂肪の減少、血漿ＨＤＬコレステロール及びＡＰＯＡ１濃度の上昇、虚血性動脈疾患及び心臓疾患及び冠動脈疾患のリスクの減少と関連することが示されている。

ＡＰＯＣ３発現を阻害又は低減することができるＲＮＡベースの治療法がいくつか知られている。例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０８３６１５号、同第ＷＯ２０１２／１７７９４７号、同第ＷＯ２０１６／０１１１２３号、同第ＷＯ２０１６／０８１４４４号、及び同第ＷＯ２０１９／０５１４０２号、ならびにＣＮ特許出願公開第１０８２３９６４４号は、ＡＰＯＣ３発現を阻害又は低減するための二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡｉ構築物、ならびに肥満及び心臓代謝障害などの脂質代謝状態、疾患及び／又は障害を治療又は予防するためにそれを使用する方法を記載している。また、国際特許出願公開第ＷＯ２０１４／２０５４５１号には、ＡＰＯＣ３発現を阻害又は低減するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドが記載されている。

ＡＰＯＣ３を対象としたいくつかの治療薬が存在するにもかかわらず、肝疾患の治療にはＡＰＯＣ３の発現を阻害又は低減する追加の治療薬が必要とされている。

この必要性に対処するために、本開示は、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、及び／又は状態を治療するための組成物及び方法を記載する。本開示は、例えば肝臓におけるＡＰＯＣ３発現を選択的に阻害及び／又は低減するためのｄｓオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の発見及び開発に部分的に基づいている。したがって、ＡＰＯＣ３内の標的配列が同定され、これらの標的配列に結合してＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの発現を阻害するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが生成された。本明細書に示されているように、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは肝臓におけるヒト及び非ヒト霊長類（ＮＨＰ）のＡＰＯＣ３発現を阻害する。理論に縛られることなく、本明細書のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害又は状態（例えば、高トリグリセリド血症又は他の脂質異常症）を治療するのに有用である。一般に、本明細書のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、異常なＡＰＯＣ３発現（例えば、ＡＰＯＣ３機能獲得型多型）に関連する疾患、障害、又は症状の治療に有用である。特に、本発明のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、変異ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は症状の治療に有用である。

したがって、本開示は、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖を含み、センス鎖が表２に記載された配列を有し、アンチセンス鎖が表２に記載された配列を有する、ＡＰＯＣ３発現を低減させるか又は阻害するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを記載する。

いくつかの実施形態では、センス鎖は、表２に記載の配列（例えば、配列番号９～１７０の奇数のいずれか１つ）、特に配列番号３７、４３、４５、８７、８９、９９、１０１、及び１０５のいずれか１つを有する。

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、表２に記載の配列（例えば、配列番号９～１７０の偶数のいずれか１つ）、特に配列番号３８、４４、４６、８８、９０、１００、１０２、及び１０６のいずれか１つを有する。

代替的に、本開示は、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖を含み、センス鎖が表３に記載された配列を有し、アンチセンス鎖が表３に記載された配列を有する、ＡＰＯＣ３発現を低減させるか又は阻害するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを記載する。

いくつかの実施形態では、センス鎖は、表３に記載の配列（例えば、配列番号１７１～３３２の奇数のいずれか１つ）、特に配列番号１９９、２０５、２０７、２４９、２５１、２６１、２６３、及び２６７のいずれか１つを有する。

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、表３に記載の配列（例えば、配列番号１７１～３３２の偶数のいずれか１つ）、特に配列番号２００、２０６、２０８、２５０、２５２、２６２、２６４、及び２６８のいずれか１つを有する。

代替的に、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、センス鎖及びアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、アンチセンス鎖が配列番号３３４～３４１のいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を有する、ＡＰＯＣ３発現を低減又は阻害するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが記載されている。

上記のいずれの実施形態でも、センス鎖は約１５個のヌクレオチド～約５０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖は約２０個のヌクレオチド～約４０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、３６個のヌクレオチドの長さである。

上記のいずれの実施形態でも、アンチセンス鎖は約１５個のヌクレオチド～約３０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は約２０個のヌクレオチド～約２５個のヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２個のヌクレオチドの長さである。

上記のいずれの実施形態でも、二重鎖領域は約１９個のヌクレオチド～約２１個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、二重鎖領域は、２０個のヌクレオチドの長さである。

上記のいずれの実施形態でも、相補性の領域は、少なくとも１５個の連続したヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、相補性の領域は、少なくとも１９個の連続したヌクレオチドの長さ～少なくとも２１個の連続したヌクレオチドの長さである。他の実施形態では、相補性の領域は、１９個の連続したヌクレオチドの長さ、２０個の連続したヌクレオチドの長さ、又は２１個の連続したヌクレオチドの長さである。

上記のいずれの実施形態でも、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、センス鎖上に、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示される３’末端ステムループを含み、Ｓ１はＳ２と相補的であり、ＬはＳ１とＳ２との間に約３個～約５個のヌクレオチドの長さのループを形成する。

上記のいずれの実施形態でも、アンチセンス鎖、センス鎖、又はその両方が突出配列を有する。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１個以上のヌクレオチドの長さの３’突出を含む。他の実施形態では、３’突出配列は、例えばＧＧのように２個のヌクレオチドの長さである。

オリゴヌクレオチドはまた、アンチセンス鎖とセンス鎖とを含むものとして記載され、アンチセンス鎖は、約２１個のヌクレオチド～約２７個のヌクレオチドの長さであり得、ＡＰＯＣ３と相補性の領域を有し、センス鎖は、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループをその３’末端に含み、Ｓ１はＳ２と相補的であり、ＬはＳ１とＳ２との間に約３～約５個のヌクレオチドの長さのループを形成し、アンチセンス鎖とセンス鎖とは少なくとも約１９個のヌクレオチドの長さの二重鎖構造を形成するが共有結合によって連結されていない。

いくつかの実施形態では、ループＬは、トリループ（ｔｒｉＬ）又はテトラループ（Ｌ）である。いくつかの実施形態では、Ｌは、４個のヌクレオチドの長さのテトラループである。他の実施形態では、Ｌは配列５’－ＧＡＡＡ－３’を含む。

いくつかの実施形態では、Ｓ１とＳ２は１～１０個のヌクレオチドの長さであり、同じ長さを有する。他の実施形態では、Ｓ１とＳ２は、１個のヌクレオチド、２個のヌクレオチド、３個のヌクレオチド、４個のヌクレオチド、５個のヌクレオチド、６個のヌクレオチド、７個のヌクレオチド、８個のヌクレオチド、９個のヌクレオチド、又は１０個のヌクレオチドの長さである。他の実施形態では、Ｓ１とＳ２は、６個のヌクレオチドの長さである。特定の実施形態では、ステムループは、配列５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号３３３）を含む。

いくつかの実施形態では、センス鎖は２５個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖は２７個のヌクレオチドの長さである。他の実施形態では、センス鎖は３６個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖は２２個のヌクレオチドの長さである。

上記の実施形態では、二重鎖領域はアンチセンス鎖上の３’突出配列を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖上の３’突出配列は、２個のヌクレオチドの長さである。

上記のいずれの実施形態でも、オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ステムループ（すなわち、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２）内のヌクレオチドを除いて、オリゴヌクレオチド内のすべてのヌクレオチドが修飾されている。他の実施形態では、ループ（すなわち、Ｌ）内のヌクレオチドを除いて、オリゴヌクレオチド内のすべてのヌクレオチドが修飾されている。

いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドとしては、例えば、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－フルオロ（２’－Ｆ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）などの２’－修飾が挙げられる。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド中のすべてのヌクレオチドには、例えば、２’－Ｆ又は２’－ＯＭｅなどの２’－修飾が含まれる。

上記のいずれの実施形態でも、オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドには、修飾ヌクレオシド間結合が含まれる。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。

上記のいずれの実施形態でも、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素には、例えばオキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、又はマロニルホスホネートなどのリン酸（又はホスフェート）(phosphate)類似体(analog)が含まれる。代替的に、又は任意選択で、リン酸類似体は、５’－メトキシホスホネート－４’－オキシを含む４’－リン酸類似体である。

上記のいずれの実施形態でも、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドは、例えばアミノ糖、炭水化物、コレステロール、脂質、又はポリペプチドなどの１つ以上の標的リガンドにコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分である。他の実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分である。

いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、ステムループのＬの１つ以上のヌクレオチドにコンジュゲートされる。特定の実施形態では、ステムループのヌクレオチドの最大４個のヌクレオチドが、一価のＧａｌＮａｃ部分にそれぞれコンジュゲートされる。

特定の実施形態では、センス鎖の位置８、９、１０、又は１１にある１つ以上のヌクレオチドが２’－Ｆで修飾されている。他の実施形態では、センス鎖の位置１～７、１２～２７、及び３１～３６のそれぞれのヌクレオチドの糖部分は、２’－ＯＭｅで修飾されている。特定の実施形態では、センス鎖の位置８～１１のヌクレオチドは２’－Ｆで修飾され、位置１～７、１２～２７、及び３１～３６は２’－ＯＭｅで修飾されている。

他の特定の実施形態では、センス鎖には、位置８～１１に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、位置１～７、１２～２７、及び３１～３６に２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド、位置２８、２９、及び３０にＧａｌＮＡｃコンジュゲートヌクレオチド、及び位置１と２の間にホスホロチオエート結合が含まれる。

他の特定の実施形態では、アンチセンス鎖の位置２～５、７、１０、及び１４の１つ以上のヌクレオチドが２’－Ｆで修飾され、位置１、６、８～９、１１～１３、及び１５～２２の１つ以上のヌクレオチドが２’－ＯＭｅで修飾されている。他の実施形態では、アンチセンス鎖には、位置２～５、７、１０、及び１４に２’－Ｆ修飾ヌクレオチドが含まれ、位置１、６、８～９、１１～１３、及び１５～２２に２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチドが含まれる。

特定の実施形態では、アンチセンス鎖には、位置２～５、７、１０、及び１４に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、位置１、６、８～９、１１～１３、及び１５～２２に２’－ＯＭｅ、及び位置１と２、位置２と３、位置３と４、位置２０と２１、及び位置２１と２２の間にホスホロチオエート結合が含まれる。

特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、図１Ａ、１Ｂ、又は１Ｃに示されるような修飾パターンを有する。

図１Ａは修飾パターン１を示しており、それぞれの鎖の修飾パターンは以下のように示される：
センス鎖： ５’ ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］－［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］－［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］－［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ ３’
以下にハイブリダイズする：
アンチセンス鎖：５’ ［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＸ］－Ｓ－ｆＸ－Ｓ－ｆＸ－Ｓ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ ３’；
又は以下のように表される：
センス鎖： ５’ ［ｍＸｓ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］ ［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］ ３’
以下にハイブリダイズする：
アンチセンス鎖：５’ ［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＸｓ］［ｆＸｓ］［ｆＸｓ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］ ［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸｓ］［ｍＸｓ］［ｍＸ］ ３’．

図１Ｂは修飾パターン２を示しており、それぞれの鎖の修飾パターンは以下のように示される：
センス鎖： ５’ ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］－［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］－［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ ３’
以下にハイブリダイズする：
アンチセンス鎖：５’ ［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＸ］－Ｓ－ｆＸ－Ｓ－ｆＸ－Ｓ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ ３’；
又は以下のように表される：
センス鎖： ５’ ［ｍＸｓ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］ ［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］ ３’
以下にハイブリダイズする：
アンチセンス鎖：５’ ［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＸｓ］［ｆＸｓ］［ｆＸｓ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］ ［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸｓ］［ｍＸｓ］［ｍＸ］ ３’．

図１Ｃは修飾パターン３を示しており、それぞれの鎖の修飾パターンは以下のように示される：
センス鎖： ５’ ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］－［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］－［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］－［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ ３’
以下にハイブリダイズする：
アンチセンス鎖：５’ ［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＸ］－Ｓ－ｆＸ－Ｓ－ｆＸ－Ｓ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ ３’；
又は以下のように表される：
センス鎖： ５’ ［ｍＸｓ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］ ［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］［Ｘ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］ ３’
以下にハイブリダイズする：
アンチセンス鎖：５’ ［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＸｓ］［ｆＸｓ］［ｆＸｓ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］ ［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸｓ］［ｍＸｓ］［ｍＸ］ ３’．
上記修飾パターン１～３の修飾の凡例：

上記のいずれの実施形態でも、オリゴヌクレオチドはＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、表２に示されるヌクレオチド配列、特に配列番号３７、４３、４５、８７、８９、９９、１０１、及び１０５のいずれか１つを有するセンス鎖を含む。特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、表３に示されるヌクレオチド配列、特に配列番号１９９、２０５、２０７、２４９、２５１、２６１、２６３、及び２６７のいずれか１つを有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、表２に示されるヌクレオチド配列、特に配列番号３８、４４、４６、８８、９０、１００、１０２、及び１０６のいずれか１つを有するアンチセンス鎖を含む。特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、表３に示されるヌクレオチド配列、特に配列番号２００、２０６、２０８、２５０、２５２、２６２、２６４、及び２６８のいずれか１つを有するアンチセンス鎖を含む。

特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号３７、４３、４５、８７、８９、９９、１０１、及び１０５のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、配列番号３８、４４、４６、８８、９０、１００、１０２、及び１０６のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖とを含む。

特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号３７、８９、及び１０１のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、配列番号３８、９０、及び１０２のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖とを含む。

他の特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのセンス鎖とアンチセンス鎖は、それぞれ以下から選択される：
（ａ）配列番号３７と３８、
（ｂ）配列番号４３と４４、
（ｃ）配列番号４５と４６、
（ｄ）配列番号８７と８８、
（ｅ）配列番号８９と９０、
（ｆ）配列番号９９と１００、
（ｇ）配列番号１０１と１０２、及び
（ｈ）配列番号１０５と１０６。

特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号１９９、２０５、２０７、２４９、２５１、２６１、２６３、及び２６７のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、配列番号２００、２０６、２０８、２５０、２５２、２６２、２６４、及び２６８のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖とを含む。

特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号１９９、２５１、及び２６３のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、配列番号２００、２５２、及び２６４のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖とを含む。

他の特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのセンス鎖とアンチセンス鎖は、それぞれ以下から選択される：
（ａ’）配列番号１９９と２００、
（ｂ’）配列番号２０５と２０６、
（ｃ’）配列番号２０７と２０８、
（ｄ’）配列番号２４９と２５０、
（ｅ’）配列番号２５１と２５２、
（ｆ’）配列番号２６１と２６２、
（ｇ’）配列番号２６３と２６４、及び
（ｈ’）配列番号２６７と２６８。

ＡＰＯＣ３発現を阻害又は低減するためのオリゴヌクレオチドも記載されており、このオリゴヌクレオチドはセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖は二重鎖領域を形成し、センス鎖とアンチセンス鎖のすべてのヌクレオチドは塩基、糖、及び／又はヌクレオチド間結合の修飾を含み、アンチセンス鎖は配列番号３３４～３４１のいずれかのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に対して相補性の領域を含み、相補性の領域は少なくとも約１５個の連続するヌクレオチドの長さである。

他の態様では、本明細書の少なくとも１つのオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、送達剤、又は賦形剤と、を含む医薬組成物が記載される。いくつかの実施形態では、医薬組成物には、例えば脂質低下剤、抗糖尿病剤、又は抗肥満剤などの追加の治療剤が含まれる。

他の態様では、細胞、細胞の集団、組織、器官、又は個体におけるＡＰＯＣ３発現を低減するための方法であって、該方法は、本明細書のオリゴヌクレオチド又は本明細書の医薬組成物を細胞、細胞の集団、組織、器官、又は個体に投与／接触させるステップを少なくとも含む、方法が記載される。いくつかの実施形態では、ＡＰＯＣ３発現を低減することは、細胞、細胞の集団、組織、器官、又は個体におけるＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量もしくはレベル、ＡＰＯＣ３タンパク質の量もしくはレベル、又はその両方を低減することが含まれる。いくつかの実施形態では、細胞、細胞集団、組織、器官、又は個体は、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する。特定の実施形態では、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態は、高トリグリセリド血症、高非ＨＤＬコレステロール、肝臓脂肪変性、インスリン抵抗性、さらにはアテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＳＣＶＤ）である。

他の態様では、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態を有するか又は有すると疑われる個体を治療するための方法が記載されている。この方法には、本明細書のオリゴヌクレオチド又は本明細書の医薬組成物の有効量を、それを必要とする個体に投与するステップが少なくとも含まれる。いくつかの実施形態では、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態は、高トリグリセリド血症、高非ＨＤＬコレステロール、肝臓脂肪変性、インスリン抵抗性、さらにはＡＳＣＶＤである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド又は医薬組成物は、皮下（ＳＱ）投与により、毎日、毎週、毎月、四半期ごと、毎年、特に毎月又は四半期ごとに投与される。

いくつかの実施形態では、個体は、ＮＡＦＬＤ、脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝炎（ＡＨ）、アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）、胆管癌（ＣＣＡ）、肝硬変、肝線維症、肝炎、肝細胞癌（ＨＣＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、高脂血症、糖尿病、及び／又は肥満を有する。

上記のいずれの実施形態でも、方法は、遺伝子型情報、ＡＰＯＣ３発現、ＡＰＯＣ３タンパク質レベル、個体の体重及び／又は血糖値及び／又はコレステロール及び／又はＬＰＬ及び／又はＴＧを測定又は取得し、次いで、取得した値を１つ以上のベースライン値又は以前に取得した値と比較して、接触すること又は投与することの有効性を評価するなどの追加のステップを含むことができる。いくつかの実施形態では、追加のステップは、個体がＡＰＯＣ３機能獲得型多型を有することを確認することを含む。いくつかの実施形態では、追加のステップは、個体がｒｓ５１２８、ｒｓ２８５４１１６、ｒｓ２８５４１１７、ｒｓ２０７０６６６の一塩基多型（ＳＮＰ）、又は１１００Ｃ＞Ｔ、２８４５Ｔ＞Ｇ、もしくはＧｌｎ３８Ｌｙｓの変異を有することを確認することを含む。

上記のいずれの実施形態でも、方法は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又は医薬組成物を、第２の組成物又は第２の治療剤と同時に、別々に、又は逐次的に投与することを含み得る。いくつかの実施形態では、第２の組成物又は第２の治療剤は、ＡＰＯＣ３抗体又はその断片、脂質低下剤、抗糖尿病剤、又は抗肥満剤である。いくつかの実施形態では、第２の組成物又は第２の治療剤は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと同じ頻度（すなわち、１日おき、週２回、又は毎週）で投与される。他の実施形態では、第２の組成物又は第２の治療剤は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとは異なる頻度で投与される。同様に、他の実施形態では、第２の組成物又は第２の治療剤は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（例えば、ＳＱ）と同じ経路で投与される。さらに他の実施形態では、第２の組成物又は第２の治療剤は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとは異なる経路で投与される。

他の態様では、任意選択で第２の組成物又は第２の治療剤と同時に、別々に、又は逐次的に（すなわち、組み合わせて）投与される、本明細書のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害又は状態を治療するための使用が記載される。

他の態様では、本明細書のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害又は状態を治療するための医薬の製造における使用が記載され、該医薬には、任意選択で第２の組成物又は第２の治療剤がさらに含まれる。

他の態様では、本明細書の少なくとも１つのオリゴヌクレオチドと、任意選択の薬学的に許容される担体と、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する個体にそれを投与するための使用説明書を含む添付文書とを含むキットが記載されている。

本明細書のオリゴヌクレオチド及び組成物の利点は、抑制されたＡＰＯＣ３発現が脂質異常症の全範囲に有益な効果を発揮することである。

上記以外の利点、効果、特徴、目的等については、以下の詳細な説明を考慮すればより明らかとなるであろう。そのような詳細な説明とは、以下の図面（複数可）を指す。

一般的なＧａｌＮＡｃコンジュゲートＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチド（Ｍ１）の構造と化学修飾パターンを示す概略図を示す。 一般的なＧａｌＮＡｃコンジュゲートＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチド（Ｍ２）の構造と化学修飾パターンを示す概略図を示す。 一般的なＧａｌＮＡｃコンジュゲートＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチド（Ｍ３）の構造と化学修飾パターンを示す概略図を示す。

概要
脂質異常症とは、血液中の１種類以上の脂質（脂肪）のレベルが不健康な状態を指す。脂質には主に３つの種類：高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、及びＴＧがある。脂質異常症は原発性タイプと続発性タイプに分けられる。原発性脂質異常症は遺伝性であるが、続発性脂質異常症は後天性状態（すなわち、例えば肥満又は糖尿病など他の原因によって発症する）である。

ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、細胞に外来性ＲＮＡを導入して、標的されたタンパク質をコードするｍＲＮＡを特異的に分解し、結果として標的遺伝子の発現を減少させるプロセスである。

ヒトでは、ＡＰＯＣ３は９９アミノ酸の長さ（しかしながら、残基１～２０はその後切断されるシグナルペプチドである）で、予測分子量は８．８ｋＤａである。ＡＰＯＣ３の例示的な核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ参照配列番号ＮＭ＿００００４０（ヒト）、ＧｅｎＢａｎｋ参照配列番号ＮＭ＿００１２８９７５５（マウス）、ＧｅｎＢａｎｋ 参照配列番号ＮＭ＿００１２７１０５３（ラット）、ＧｅｎＢａｎｋ参照配列番号ＸＭ＿００５５７９７３０（ＮＨＰ）、ＧｅｎＢａｎｋ参照配列番号ＸＭ＿００１０９０３１２（ＮＨＰ）、ＧｅｎＢａｎｋ参照配列番号ＸＭ＿００８０２０９７７（ＮＨＰ）、及びＧｅｎＢａｎｋ参照配列番号ＸＭ＿０３５２６４６４２（ＮＨＰ）に記載されている。しかしながら、当業者であれば、ＡＰＯＣ３核酸配列の追加の例は、例えばＧｅｎＢａｎｋ及びＵｎｉＰｒｏｔなどの公開データベースを使用して容易に入手できることを理解している。

定義
本明細書で使用される場合、「約」は、例えば、規定された濃度、長さ、分子量、ｐＨ、配列類似性、時間枠、温度、容量などの値又は複数の値の統計的に意味のある範囲内を意味する。このような値又は範囲は、典型的に、所定の値又は範囲の２０％以内、より典型的には１０％以内、さらに一般的には５％以内の桁内である。「約」に包含される許容される変動は、研究中のシステムに依存し、当業者であれば容易に理解できる。

本明細書で使用される場合、「投与する」、「投与すること」、「投与」などは、薬理学的に有用な様式で（例えば、個体の疾患、障害、又は状態を治療するために）個体に物質（例えば、本明細書のオリゴヌクレオチド又は本明細書の組成物）を提供することを指す。

本明細書で使用される場合、「アンチセンス鎖」とは、標的配列の領域に相補的である本明細書のオリゴヌクレオチドを意味する。同様に、本明細書で使用される場合、「センス鎖」は、アンチセンス鎖の領域に相補的である本明細書のオリゴヌクレオチドを意味する。

本明細書で使用される場合、「ＡＰＯＣ３」とは、リポタンパク質リパーゼ及び肝臓リパーゼを阻害する超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）タンパク質（ＡＰＯＣ３）をコードするアポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ遺伝子を意味する。

本明細書で使用される場合、「アシアロ糖タンパク質受容体」又は「ＡＳＧＰＲ」とは、４８ｋＤａのメジャーサブユニット（ＡＳＧＰＲ－１）及び４０ｋＤａのマイナーサブユニット（ＡＳＧＰＲ－２）によって形成される二部分Ｃ型レクチンを意味する。ＡＳＧＰＲは、主として肝細胞の類洞表面で発現する、末端ガラクトース又はＧａｌＮＡｃ残基を含む循環糖タンパク質（アシアロ糖タンパク質）の結合、内在化、及びその後の排出に主要な役割を有する。

本明細書で使用される場合、「減弱する」、「減弱する」、「減弱」などは、減少させるか又は効果的に停止させることを指す。非限定的な例として、本明細書の治療の１つ以上は、ＡＨ、ＡＣＤ、ＡＬＤ、ＣＣＡ、ＣＨＤ、ＭｅｔＳ、ＰＳＣ、肝硬変、肝線維症、肝炎、ＨＣＣ、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨ、ならびに例えば高脂血症、糖尿病、及び／又は肥満などの個体における関連する疾患、障害、及び状態の発症又は進行を軽減又は効果的に停止することができる。この減弱は、例えば、ＡＨ、ＡＣＤ、ＡＬＤ、ＣＣＡ、ＣＨＤ、ＭｅｔＳ、ＰＳＣ、肝硬変、肝線維症、肝炎、ＨＣＣ、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨ、ならびに例えば高脂血症、糖尿病、及び／又は肥満などの個体における関連する疾患、障害、及び状態の１つ以上の態様（例えば、症状、組織特性、及び細胞、炎症、又は免疫学的活性など）の減少；ＡＨ、ＡＣＤ、ＡＬＤ、ＣＣＡ、ＣＨＤ、ＭｅｔＳ、ＰＳＣ、肝硬変、肝線維症、肝炎、ＨＣＣ、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨ、ならびに例えば高脂血症、糖尿病、及び／又は肥満などの個体における関連する疾患、障害、及び状態の１つ以上の態様の検出可能な進行（悪化）がないこと；あるいは、ＡＨ、ＡＣＤ、ＡＬＤ 、ＣＣＡ、ＣＨＤ、ＭｅｔＳ、ＰＳＣ、肝硬変、肝線維症、肝炎、ＨＣＣ、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、ならびに例えば高脂血症、糖尿病、及び／又は肥満などの個体における関連する疾患、障害、及び状態が、本来であれば予想される場合に、検出されないことによって例示され得る。

本明細書で使用される場合、「減弱する」、「減弱する」、「減弱」などは、減少させるか又は効果的に停止させることを意味する。非限定的な例として、本明細書の治療の１つ以上は、個体における脂質異常症／高トリグリセリド血症／高脂血症の発症又は進行を軽減又は効果的に停止することができる。この減弱は、例えば、ＡＨ、ＡＣＤ、ＡＬＤ、ＣＣＡ、ＣＨＤ、ＭｅｔＳ、ＰＳＣ、肝硬変、肝線維症、肝炎、ＨＣＣ、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨ、ならびに個体における例えば高脂血症、糖尿病、及び／又は肥満などの関連する疾患、障害、及び状態の１つ以上の態様（例えば、症状、組織特性、及び細胞、炎症、又は免疫学的活動など）が、本来であれば予想される場合に、減少によって例示され得る。

本明細書で使用される場合、「相補的」は、（例えば、２つの対向する核酸上の又は単一の核酸鎖の対向する領域上の）２個のヌクレオチドが互いに塩基対を形成することを可能にする２個のヌクレオチド間の構造的関係を意味する。例えば、対向する核酸のピリミジンヌクレオチドに相補的である１つの核酸のプリンヌクレオチドは、互いに水素結合を形成することにより一緒に塩基対形成し得る。相補的なポリヌクレオチド鎖は、ワトソン・クリック型、又は、安定した二重鎖の形成を可能にする他の任意の形で塩基対を形成することができる。同様に、２本の核酸は、本明細書に記載されるように、互いに相補的であることで相補性の領域を形成する複数のヌクレオチドの領域を有することができる。

本明細書において、「接触」、「接触させること」等は、細胞への取り込み又は吸収を促進又は実行することにより、例えば細胞内にＲＮＡｉを直接的又は間接的に導入又は送達することを意味する。

本明細書で使用される場合、「デオキシリボヌクレオチド」は、リボヌクレオチドと比較する場合、そのペントース糖の２’位のヒドロキシルの代わりに水素を有するヌクレオチドを意味する。修飾デオキシリボヌクレオチドには、核酸塩基、糖、又はリン酸基の修飾又は置換を含む、２’位以外の原子の１つ以上の修飾置換がある。

本明細書で使用される場合、「二本鎖オリゴヌクレオチド」又は「ｄｓオリゴヌクレオチド」とは、実質的に二本鎖形態であるオリゴヌクレオチドを意味する。ｄｓオリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的塩基対形成は、共有結合的に分離した核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成され得る。同様に、ｄｓオリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的塩基対形成は、共有結合した核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成され得る。さらに、ｄｓオリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的塩基対形成は、（例えば、ヘアピンを介して）フォールディングし、一緒に塩基対を形成するヌクレオチドの相補的な逆平行配列を提供する単一の核酸鎖から形成され得る。ｄｓオリゴヌクレオチドは、互いに完全に二本鎖である２つの共有結合的に分離した核酸鎖を含み得る。しかしながら、ｄｓオリゴヌクレオチドは、部分的に二重鎖である（例えば、一方又は両方の末端に突出を有する）２つの共有結合的に分離した核酸鎖を含み得る。ｄｓオリゴヌクレオチドは、部分的に相補的であるヌクレオチドの逆平行配列を含み得、したがって、内部ミスマッチ又は末端ミスマッチを含み得る１つ以上のミスマッチを有し得る。

本明細書で使用される場合、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）に関して「二重鎖」は、ヌクレオチドの２つの逆平行配列の相補的塩基対形成により形成される構造を意味する。

本明細書で使用される場合、「賦形剤」は、例えば、所望の稠度又は安定化効果を与えるか又はこれらに寄与するために本明細書の組成物中に含めることができる非治療剤を意味する。

本明細書で使用される場合、「肝細胞」又は「複数の肝細胞」とは、肝臓の実質組織の細胞を意味する。これらの細胞は肝臓の質量の約７０％～８５％を構成し、血清アルブミン、フィブロネクチン（ＦＢＮ）、及び凝固因子のプロトロンビングループ（因子３及び４を除く）を製造する。肝細胞系列細胞のマーカーとしては、トランスサイレチン（Ｔｔｒ）、グルタミン合成酵素（ＧｌｕＩ）、肝細胞核因子１ａ（Ｈｎｆ１ａ）、及び肝細胞核因子４ａ（Ｈｎｆ４ａ）が挙げられるが、これらに限定されない。成熟肝細胞のマーカーとしては、シトクロムＰ４５０（Ｃｙｐ３ａ１１）、フマリルアセト酢酸ヒドロラーゼ（Ｆａｈ）、グルコース６－リン酸（Ｇ６ｐ）、アルブミン（Ａｌｂ）、及びＯＣ２－２Ｆ８が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｈｕｃｈ ｅｔ ａｌ．（２０１３） Ｎａｔｕｒｅ ４９４：２４７－５０を参照されたい。

本明細書で使用される場合、「肝毒性剤」とは、それ自体が肝臓に対して毒性であるか、又は処理されて肝臓に対して毒性である代謝産物を形成することができる化合物、ウイルス、又は他の物質を意味する。肝毒性物質としては、四塩化炭素（ＣＣｌ₄）、アセトアミノフェン（パラセタモール）、塩化ビニル、ヒ素、クロロホルム、非ステロイド性抗炎症薬（アスピリン及びフェニルブタゾンなど）が挙げられ得るが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「不安定なリンカー」とは、（例えば、酸性ｐＨによって）切断され得るリンカーを意味する。同様に、「かなり安定なリンカー」とは、切断できないリンカーを意味する。

本明細書で使用される場合、「肝臓の炎症」又は「肝炎」は、肝毒性物質への曝露によって引き起こされる可能性があるような、特に損傷もしくは感染のために、肝臓の腫脹、機能不全及び／又は疼痛をもたらす、身体的状態を意味する。症状としては、黄疸、疲労、衰弱、悪心、嘔吐、食欲減退、体重減少などが挙げられ得る。肝臓の炎症は、治療せずに放置すると、線維症、肝硬変、肝不全、又は肝癌に進行する可能性がある。

本明細書で使用される場合、「肝線維症」、「肝線維症」、又は「肝臓の線維症」は、炎症や肝細胞死に起因する、コラーゲン（Ｉ、ＩＩＩ、及びＩＶ）、ＦＢＮ、ウンドゥリン、エラスチン、ラミニン、ヒアルロナン、おい及びプロテオグリカンを含み得る細胞外マトリックスタンパク質の肝臓における過剰な蓄積を指す。肝線維症は、治療せずに放置すると、肝硬変、肝不全、又は肝癌に進行する可能性がある。

本明細書で使用される場合、「ループ」とは、互いに十分に相補的な核酸の２つの逆平行領域によって挟まれている核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）の非対形成領域であって、適切なハイブリダイゼーション条件下（例えば、リン酸（又はホスフェート）(phosphate)緩衝溶液中、細胞内）で、非対形成領域を挟んだ２つの逆平行領域がハイブリダイズして二重鎖（「ステム」と呼ばれる）を形成する、核酸の非対形成領域を意味する。

本明細書で使用される場合、「修飾されたヌクレオチド間結合」とは、ホスホジエステル結合を有する参照ヌクレオチド間結合と比較して１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチド間結合を意味する。修飾ヌクレオチドは、天然に存在しない結合であってよい。典型的には、修飾ヌクレオチド間結合は、修飾ヌクレオチド間結合が存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、可溶性、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低下などを改善することができる。

本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド」とは、アデニンリボヌクレオチド、グアニンリボヌクレオチド、シトシンリボヌクレオチド、ウラシルリボヌクレオチド、アデニンデオキシリボヌクレオチド、グアニンデオキシリボヌクレオチド、シトシンデオキシリボヌクレオチド、及びチミジンデオキシリボヌクレオチドから選択される対応する参照ヌクレオチドと比較する場合、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチドを指す。修飾ヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドであってよい。修飾ヌクレオチドは、例えば、その糖、核酸塩基、及び／又はリン酸基に１つ以上の化学修飾を有し得る。追加的に又は代替的に、修飾ヌクレオチドは、対応する参照ヌクレオチドにコンジュゲートされた１つ以上の化学部分を有し得る。典型的には、修飾ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドが存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、可溶性、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低下などを改善することができる。

本明細書で使用される場合、「ニックテトラループ構造」とは、センス（パッセンジャー）鎖がアンチセンス（ガイド）鎖と相補的な領域を有し、一般にセンス鎖である鎖の少なくとも１つが、少なくとも１つの鎖内に形成された隣接するステム領域を安定化するように構成されたテトラループを有する、別個のセンス及びアンチセンス鎖によって特徴付けられるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの構造を意味する。

本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド」とは、ヌクレオシド（例えば、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、又はウラシルなどの核酸塩基、及び例えば、リボース又は２’－デオキシリボースなどのペントース糖、及びリン酸基を有し、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ）などの核酸ポリマーのモノマー単位として機能し得る）を有する有機分子を意味する。

本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」とは、（例えば、１００個未満のオリゴヌクレオチドの長さの）短い核酸分子を意味する。オリゴヌクレオチドは、一本鎖（ｓｓ）又はｄｓであってよい。オリゴヌクレオチドは二重鎖領域を有していても有していなくてもよい。一連の非限定的な例として、オリゴヌクレオチドは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ダイサー基質干渉ＲＮＡ（ｄｓｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、短いｓｉＲＮＡ、又はｓｓ ｓｉＲＮＡであり得るが、これらに限定されない。典型的には、ｄｓオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。

本明細書で使用される場合、「突出」とは、１つの鎖又は領域が、その１つの鎖又は領域が二重鎖を形成する相補鎖の末端を超えて伸長していることから生じる末端の非塩基対形成ヌクレオチド（複数可）を意味する。突出には、ｄｓオリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端で二重鎖領域から伸長している１つ以上の非対形成ヌクレオチドが含まれてもよい。突出は、ｄｓオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖又はセンス鎖上の３’又は５’の突出であってよい。

本明細書で使用される場合、「リン酸類似体」とは、リン酸基の静電特性及び／又は立体特性を模倣する化学部分を意味する。いくつかの実施形態では、リン酸類似体は、しばしば酵素的除去を受けやすい５’－リン酸の代わりにオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドに配置される。５’リン酸類似体はホスファターゼ耐性結合を含んでもよい。好適なリン酸類似体としては、５’－メチレンホスホネート（５’－ＭＰ）、及び５’－（Ｅ）－ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）などの５’－ホスホナートが挙げられるが、これらに限定されない。オリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドにおいて、糖の４’位の炭素にリン酸類似体（４’－リン酸類似体と呼ぶ）を有し得る。４’－リン酸類似体の例として、オキシメチル基の酸素原子が糖部分（例えば、その４－’炭素）に結合したオキシメチルホスホネート又はその類似体がある。例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０４５３１７号を参照されたい。オリゴヌクレオチドの５’末端に対する他の修飾が開発されている（例えば、国際特許出願第ＷＯ２０１１／１３３８７１号；米国特許第８，９２７，５１３号；及びＰｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４３：２９９３－３０１１を参照されたい）。

本明細書で使用される場合、「ＡＰＯＣ３関連疾患」、「ＡＰＯＣ３関連障害」、又は「ＡＰＯＣ３関連状態」とは、ＡＰＯＣ３発現の増加及び／又は例えばＡＰＯＣ３多型の存在を伴う状態を意味する。例示的なＡＰＯＣ３に関連する状態、疾患、又は障害としては、ＡＨ、ＡＣＤ、ＡＬＤ、ＣＣＡ、ＣＨＤ、ＭｅｔＳ、ＰＳＣ、肝硬変、肝線維症、肝炎、ＨＣＣ、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨ、ならびに例えば高脂血症、糖尿病、及び／又は肥満などの個体における関連する疾患、障害、及び状態が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「減少した発現」及びある遺伝子（例えば、ＡＰＯＣ３）に関する「減少した発現」とは、適切な参照（例えば、参照の細胞、細胞の集団、試料、又は対象）と比較する場合の、細胞、細胞の集団、試料、又は対象におけるその遺伝子によってコードされるＲＮＡ転写産物（例えば、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ）もしくはタンパク質の量もしくはレベルの減少、及び／又はその遺伝子の活性の量もしくはレベルの減少を意味する。例えば、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを含むヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチド）と細胞を接触させる行為は、ｄｓオリゴヌクレオチドで処理されていない細胞と比較する場合、（例えば、ＲＮＡｉ経路によるＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの分解による）ｍＲＮＡ、タンパク質、及び／又は活性の量又はレベルの減少をもたらし得る。同様に、本明細書で使用される場合、「発現を低減すること」とは、遺伝子（例えば、ＡＰＯＣ３）の発現の低下をもたらす行為を意味する。具体的には、本明細書で使用される場合、「ＡＰＯＣ３発現の低減」とは、適切な参照（例えば、参照の細胞、細胞の集団、組織、又は個体）と比較した場合の、細胞、細胞の集団、試料、又は個体におけるＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ、ＡＰＯＣ３のタンパク質、及び／又はＡＰＯＣ３の活性の量又はレベルの減少を意味する。

本明細書で使用される場合、「相補性の領域」とは、ヌクレオチドの逆平行配列と十分に相補的であることにより、（例えば、リン酸緩衝液中、細胞内などの）適切なハイブリダイゼーション条件下で２つのヌクレオチドの配列間のハイブリダイゼーションを可能にするような、核酸のヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）の配列を意味する。本明細書のオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡ標的配列に相補的な領域を有する標的化配列を含む。

本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」とは、そのペントース糖として、２’位にヒドロキシル基を有するリボースを有するヌクレオチドを意味する。修飾リボヌクレオチドは、核酸塩基、糖、又はリン酸基の修飾又は置換を含む、２’位以外の原子の１つ以上の修飾置換を有するリボヌクレオチドである。

本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド」とは、（ａ）センス鎖（パッセンジャー）とアンチセンス鎖（ガイド）を有するｄｓオリゴヌクレオチドであって、アンチセンス鎖又はアンチセンス鎖の一部がアルゴノート２（Ａｇｏ２）エンドヌクレアーゼによって標的ｍＲＮＡの切断に使用されるｄｓオリゴヌクレオチド、又は（ｂ）一本鎖アンチセンス鎖を有するｓｓオリゴヌクレオチドであって、そのアンチセンス鎖（又はそのアンチセンス鎖の一部）が、Ａｇｏ２エンドヌクレアーゼによって標的ｍＲＮＡの切断に使用されるｓｓオリゴヌクレオチドのいずれかを指す。

本明細書で使用される場合、「鎖」は、ヌクレオチド間結合（例えば、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合）を介して互いに連結されたヌクレオチドの単一の連続した配列を指す。鎖は２つの自由端（例えば、５’端と３’端）を有する。

本明細書で使用される場合、「個体」とは、ネコ、イヌ、マウス、ラット、及び霊長類、特にヒトを含むあらゆる哺乳類を意味する。「対象」又は「患者」は、「個体」と交換可能に用いられ得る。

本明細書で使用される場合、「合成」とは、人工的に合成された（例えば、機械、例えば、固相核酸合成装置などを使用して）か、又は核酸又は他の分子を通常生成する天然の供給源（例えば、細胞又は生物）に由来していない核酸又は他の分子を指す。

本明細書で使用される場合、「標的化リガンド」とは、目的の組織又は細胞の同族分子（例えば、受容体）に選択的に結合し、目的の組織又は細胞に別の物質を標的化するために、別の物質にコンジュゲート可能な分子（例えば、アミノ糖、炭水化物、コレステロール、脂質、又はポリペプチド）を意味する。例えば、オリゴヌクレオチドを目的の特定の組織又は細胞に標的化する目的で、標的化リガンドを本明細書のオリゴヌクレオチドにコンジュゲートすることができる。標的リガンドは細胞表面受容体に選択的に結合することができる。したがって、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドにコンジュゲートされると、細胞の表面に発現する受容体への選択的結合及びオリゴヌクレオチド、標的化リガンド、及び受容体を含む複合体の細胞によるエンドソーム内在化を介して、特定の細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進する。さらに、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドが細胞内の標的化リガンドから放出されるように、細胞内部移行後又は細胞内在化中に切断されるリンカーを介してオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされ得る。

本明細書で使用される場合、「テトラループ」とは、ヌクレオチドの隣接配列のハイブリダイゼーションによって形成される隣接二重鎖の安定性を増加させるループを意味する。安定性の増加は、ランダムに選択されたヌクレオチドの配列からなる同等の長さのループのセットからの平均として予想される隣接したステム二重鎖のＴ_mよりも高い、隣接したステム二重鎖の融解温度（Ｔ_m）の上昇として検出可能である。例えば、テトラループは、少なくとも２塩基対の長さの二重鎖を含むヘアピンに、１０ｍＭのＮａＨＰＯ₄中で、少なくとも５０℃、少なくとも５５℃、少なくとも５６℃、少なくとも５８℃、少なくとも６０℃、少なくとも６５℃、又は少なくとも７５℃のＴ_mをもたらし得る。テトラループはまた、スタッキング相互作用によって、隣接したステム二重鎖のｂｐを安定化させることができる。さらに、テトラループ内のヌクレオチド間の相互作用としては、非ワトソン－クリック塩基対形成、スタッキング相互作用、水素結合、及び接触相互作用が挙げられるが、これらに限定されない（Ｃｈｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４６：６８０－８２；Ｈｅｕｓ ＆ Ｐａｒｄｉ（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：１９１－９４）。ここで、テトラループは約３～６個のヌクレオチドを含むか、又は有することができ、典型的には約４～５個のヌクレオチドである。したがって、テトラループは、３、４、５、又は６個のヌクレオチド、特に４個のヌクレオチドを有し得、これらは修飾されてもされなくてもよい（例えば、標的化部分にコンジュゲートされてもされなくてもよい）。テトラループでは任意のヌクレオチドを使用することができ、Ｃｏｒｎｉｓｈ－Ｂｏｗｄｅｎ（１９８５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３０２１－３０に記載されるようにそのようなヌクレオチドの標準的なＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ記号を使用することができる。例えば、「Ｎ」という文字は、任意の塩基がその位置にあり得ることを意味するために使用することができ、「Ｒ」という文字は、Ａ（アデニン）又はＧ（グアニン）がその位置にあり得ることを示すために使用することができ、「Ｂ」は、Ｃ（シトシン）、Ｇ（グアニン）、又はＴ（チミン）がその位置にあり得ることを示すために使用できる。テトラループの例としては、ＵＮＣＧファミリーのテトラループ（例えば、ＵＵＣＧ）、ＧＮＲＡファミリーのテトラループ（例えば、ＧＡＡＡ）、及びＣＵＵＧテトラループ（Ｗｏｅｓｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８７：８４６７－７１；Ａｎｔａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：５９０１－０５）が挙げられる。ＤＮＡテトラループの例としては、ｄ（ＧＮＮＡ）ファミリーのテトラループ（例えば、ｄ（ＧＴＴＡ））、ｄ（ＧＮＲＡ）ファミリーのテトラループ、ｄ（ＧＮＡＢ）ファミリーのテトラループ、ｄ（ＣＮＮＧ）ファミリーのテトラループ、及びｄ（ＴＮＣＧ）ファミリーのテトラループ（例えば、ｄ（ＴＴＣＧ））が挙げられる。例えば、Ｎａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．４１：４２８１－９２；及びＳｈｉｎｊｉ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎｉｐｐｏｎ Ｋａｇａｋｋａｉ Ｋｏｅｎ Ｙｏｋｏｓｈｕ ７８：７３１を参照されたい。ここで、テトラループは、ニックを有するテトラループ構造内に含まれる。

本明細書で使用される場合、「治療する」又は「治療すること」とは、例えば、健康を改善する目的で、及び／又は既存の状態（例えば、疾患、障害）に関して、又は状態の発生の可能性を予防又は減少させるために、個体の健康状態を改善する目的で個体に治療剤（例えば、本明細書のオリゴヌクレオチド）を投与することによって、ケアを必要とする個体にケアを提供する行為を意味する。治療することにはまた、個体が経験する状態（例えば、疾患、障害）の少なくとも１つの兆候、症状、又は寄与要因の頻度又は重症度を軽減することも含まれ得る。

本明細書において使用される場合、「ｉＲＮＡ」、「ｉＲＮＡ剤」、「ＲＮＡｉ」、「ＲＮＡｉ剤」、及び「ＲＮＡ干渉剤」とは、ＲＮＡを含み、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路を介してＲＮＡ含有転写産物の標的化切断を媒介する薬剤を意味する。ＲＮＡｉはＲＮＡ干渉を介してｍＲＮＡの配列特異的な分解を誘導する。ＲＮＡｉは細胞内のＡＰＯＣ３発現を調整、阻害、又は低減する。

組成物
いくつかの態様によれば、本開示は、肝臓におけるＡＰＯＣ３の発現を低減、調節、又は阻害するオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患の治療に使用される。いくつかの態様において、本開示は、肝臓（例えば、肝臓を構成する細胞）におけるＡＰＯＣ３発現を低減、調節、又は阻害することによって、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患を治療する方法を提供する。

ＡＰＯＣ３発現のオリゴヌクレオチド阻害剤

Ｉ．ＡＰＯＣ３標的配列：本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを含む標的配列（すなわち、ＡＰＯＣ３標的配列）を標的とする。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド又はその一部、断片、もしくは鎖（例えば、ｄｓ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖又はガイド鎖）は、ＡＰＯＣ３標的配列に結合又はアニールし、それによってＡＰＯＣ３発現を阻害する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、インビボでのＡＰＯＣ３発現を阻害するためにＡＰＯＣ３標的配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＰＯＣ３標的配列を標的とするオリゴヌクレオチドによるＡＰＯＣ３発現阻害の量又は程度は、オリゴヌクレオチドの効力と相関する。いくつかの実施形態では、ＡＰＯＣ３標的配列を標的とするオリゴヌクレオチドによるＡＰＯＣ３発現の阻害の量又は程度は、オリゴヌクレオチドで治療されたＡＰＯＣ３発現と関連する疾患、障害、又は状態を有するか有することが疑われる個体における治療効果の量又は程度と相関する。

複数の異なる種（例えば、ヒト及びカニクイザル、例えば実施例１を参照されたい）のｍＲＮＡを含むＡＰＯＣ３のｍＲＮＡのヌクレオチド配列を調査及び分析することにより、ならびにインビトロ及びインビボの試験（例えば、実施例２～３を参照されたい）の結果により、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの特定のヌクレオチド配列は他のヌクレオチド配列よりもオリゴヌクレオチドベースのＡＰＯＣ３発現の阻害に適応しやすく、したがって、本明細書のオリゴヌクレオチドの標的配列として有用であることが本明細書で示される。いくつかの実施形態では、本明細書（例えば、表２又は３）に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）のセンス鎖は、ＡＰＯＣ３標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのセンス鎖の一部又は領域（例えば、表２又は３）は、ＡＰＯＣ３標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＰＯＣ３標的配列は、配列番号３３４～３４１のいずれか１つの配列を含むか、又はそれからなる。

ＩＩ． ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的化配列：いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、細胞内のＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを標的とし、ＡＰＯＣ３発現を阻害するために、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ（例えば、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列内）に対する相補性の領域を有する。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、相補的な（ワトソン・クリック）塩基対形成によってＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に結合又はアニールする相補性の領域を有するＡＰＯＣ３標的化配列（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖又はガイド鎖）を含む。相補性の領域は、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの発現を阻害するためにオリゴヌクレオチド（又はその鎖）のＡＰＯＣ３のｍＲＮＡへの結合又はアニーリングを可能にする適切な長さ及び塩基含有量のものである。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補的の領域は、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、又は少なくとも約３０個のヌクレオチドの長さである。代替的に、標的化配列又は相補性の領域は、約１２～３０個（例えば、１２～３０個、１２～２２個、１５～２５個、１７～２１個、１８～２７個、１９～２７個、又は１５～３０個）のヌクレオチドの長さである。代替的に、標的化配列又は相補性の領域は、は、約１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、又は３０個のヌクレオチドの長さである。特定の実施形態では、標的化配列又は相補性の領域は、１８個のヌクレオチドの長さである。特定の実施形態では、標的化配列又は相補性の領域は、１９個のヌクレオチドの長さである。特定の実施形態では、標的化配列又は相補性の領域は、２０個のヌクレオチドの長さである。特定の実施形態では、標的化配列又は相補性の領域は、２１個のヌクレオチドの長さである。特定の実施形態では、標的化配列又は相補性の領域は、２２個のヌクレオチドの長さである。特定の実施形態では、標的化配列又は相補性の領域は、２３個のヌクレオチドの長さである。特定の実施形態では、標的化配列又は相補性の領域は、２４個のヌクレオチドの長さである。

いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ＡＯＣ３標的配列に完全に相補的である標的化配列又は相補性の領域（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖又はガイド鎖）を含む。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性の領域は、ＡＰＯＣ３標的配列に部分的に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号３３４～３４１のいずれか１つの配列に完全に相補的である標的化配列又は相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号３３４～３４１のいずれか１つの配列に部分的に相補的である標的化配列又は相補性の領域を含む。

代替的にいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを含むヌクレオチドの連続配列に相補的である標的化配列又は相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、約１２～約３０個のヌクレオチドの長さ（例えば、１２～３０個、１２～２８個、１２～２６個、１２～２４個、１２～２０個、１２～１８個、１２～１６個、１４～２２個、１６～２０個、１８～２０個、又は１８～１９個のヌクレオチドの長さ）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを含むヌクレオチドの連続配列に相補的である標的化配列又は相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、又は２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを含むヌクレオチドの連続配列に相補的である標的化配列又は相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、１９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを含むヌクレオチドの連続配列に相補的である標的化配列又は相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、２０個のヌクレオチドの長さである。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号３３４～３４１のいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に相補的である標的化配列又は相補性の領域を含み、任意選択で、ヌクレオチドの連続配列は、１９個のヌクレオチドの長さである。

本明細書のオリゴヌクレオチドの標的化配列又は相補性の領域に関して、配列番号３３４～３４１のいずれか１つに示される配列の連続的なヌクレオチドに相補的であり、アンチセンス鎖の全長にわたる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの相補性の領域は、配列番号３３４～３４１のいずれか１つに示される配列の連続的なヌクレオチドに相補的であり、アンチセンス鎖の全長の一部にわたる。いくつかのさらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号３３４～３４１のいずれか１つに示される配列のヌクレオチド１～２０、１～１９、１～１８などにわたるヌクレオチドの連続ストレッチと少なくとも部分的に（例えば、完全に）相補的である相補性の領域を（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上に）含む。

代替的に、本明細書のオリゴヌクレオチドは、対応するＡＰＯＣ３標的配列と１つ以上の塩基対（ｂｐ）ミスマッチを有する標的化配列又は相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性の領域は、対応するＡＰＯＣ３標的配列と、最大約１、最大約２、最大約３、最大約４、最大約５などのミスマッチであるが、但し、適切なハイブリダイゼーション条件下でＡＰＯＣ３のｍＲＮＡに結合又はアニーリングする標的化配列又は相補性の領域の能力、及び／又はＡＰＯＣ３発現を減少させるか又は阻害するオリゴヌクレオチドの能力は維持されるという条件である。言い換えれば、標的化配列又は相補性の領域は、対応するＡＰＯＣ３標的配列との１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、又は５つ以下のミスマッチであるが、但し、適切なハイブリダイゼーション条件下でＡＰＯＣ３のｍＲＮＡに結合又はアニーリングする標的化配列又は相補性の領域の能力、及び／又はＡＰＯＣ３発現を減少させるか又は阻害するオリゴヌクレオチドの能力は維持されるという条件である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と１つのミスマッチを有する標的化配列又は相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と２つのミスマッチを有する標的配列又は相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と３つのミスマッチを有する標的配列又は相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と４つのミスマッチを有する標的配列又は相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と５つのミスマッチを有する標的配列又は相補性の領域を含む。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列との１つを超えるミスマッチ（例えば、２、３、４、５つ又はそれ以上のミスマッチ）の標的配列又は相補性の領域を含み、少なくとも２つ（例えば、すべて）のミスマッチは連続して配置されるか（例えば、連続して２、３、４、５もしくはそれ以上のミスマッチ）、又はミスマッチは標的化配列又は相補性の領域全体の任意の位置に散在する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列との１つを超えるミスマッチ（例えば、２、３、４、５つ又はそれ以上のミスマッチ）の標的配列又は相補性の領域を含み、少なくとも２つ（例えば、すべて）のミスマッチは連続して配置されるか（例えば、連続して２、３、４、５もしくはそれ以上のミスマッチ）、又は少なくとも１つ以上のミスマッチしていないｂｐがミスマッチの間に位置する、又はそれらの組み合わせである。

ＩＩＩ． オリゴヌクレオチドの種類：ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍｉＲＮＡなどを含むがこれらに限定されない、さまざまなオリゴヌクレオチドの種類及び／又は構造がＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを標的とするのに有用である。本明細書又は他の箇所で説明されているオリゴヌクレオチドの種類はいずれも、ＡＰＯＣ３発現を阻害する目的で本明細書に標的化配列を組み込むためのフレームワークとして使用することが意図されている。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ダイサー関与の上流又は下流のＲＮＡｉ経路に関与することにより、ＡＰＯＣ３発現を阻害する。例えば、それぞれの鎖が１９～２５個のヌクレオチドのサイズを有し、少なくとも１つの１～５個のヌクレオチドの３’末端突出を有するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが開発されている（例えば、米国特許第８，３７２，９６８号を参照されたい）。ダイサーによってプロセシングされて活性ＲＮＡｉ産物を生ずるより長いオリゴヌクレオチドも開発されている（例えば、米国特許第８，８８３，９９６を参照されたい）。さらなる研究により、一方の鎖が熱力学的に安定したテトラループ構造を有する構造を含む、少なくとも一方の鎖の少なくとも一方の末端が二重鎖の標的化領域を越えて伸長している伸長ｄｓオリゴヌクレオチドが作製されている（例えば、米国特許第８，５１３，２０７号及び同第８，９２７，７０５号、並びに国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０３３２２５号を参照されたい）。そのような構造は、ｓｓ伸長部（分子の片側又は両側の）及びｄｓ伸長部を含む。

本明細書のオリゴヌクレオチドは、ダイサーの関与（例えば、ダイサー切断）の下流でＲＮＡｉ経路に関与する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の３’末端に突出（例えば、１、２、又は３個のヌクレオチドの長さ）を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ）は、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ）に対してアンチセンスである２１個のヌクレオチドのアンチセンス鎖と、相補的なセンス鎖とを含み、両方の鎖はアニールして１９ｂｐの二重鎖と一方又は両方の３’末端に２個のヌクレオチドの突出を形成する。２３個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖及び２１個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を有し、分子の右側（センス鎖の３’末端／アンチセンス鎖の５’末端）に平滑端及び分子の左側（センス鎖の５’末端／アンチセンス鎖の３’末端）に２個のヌクレオチドの３’アンチセンス鎖突出が存在するオリゴヌクレオチドを含む、より長いオリゴヌクレオチドの設計もまた企図されている。このような分子には、２１ｂｐの二重鎖領域がある。例えば、米国特許第９，０１２，１３８号；同第９，０１２，６２１号、及び同第９，１９３，７５３号を参照されたい。

本明細書のオリゴヌクレオチドは、両方ともが約１７～約２６個（例えば、１７～２６個、２０～２５個、又は２１～２３個）のヌクレオチドの長さの範囲にあるセンス鎖とアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、両方ともが約１９～約２２個のヌクレオチドの長さの範囲にあるセンス鎖とアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖は等しい長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖とアンチセンス鎖を含み、センス鎖もしくはアンチセンス鎖のいずれか、又はセンス鎖とアンチセンス鎖の両方に３’突出が存在する。いくつかの実施形態では、両方ともが約２１～約２３個のヌクレオチドの長さの範囲にあるセンス鎖とアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチドについて、センス鎖、アンチセンス鎖、又はセンス鎖とアンチセンス鎖の両方の３’突出は、１個又は２個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖及び２０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を有し、分子の右側（センス鎖の３’末端／アンチセンス鎖の５’末端）に平滑端及び分子の左側（センス鎖の５’末端／アンチセンス鎖の３’末端）に２個のヌクレオチドの３’アンチセンス鎖突出が存在する。このような分子には、２０ｂｐの二重鎖領域がある。

本明細書での使用のための他のオリゴヌクレオチド設計としては、１６－ｍｅｒのｓｉＲＮＡ（例えば、“Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，”，Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ（ｅｄ．），Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６を参照されたい）、ｓｈＲＮＡ（例えば、１９ｂｐ又はそれより短いステムを有するもの；例えば、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．６２９：１４１－５８を参照されたい）、平滑ｓｉＲＮＡ（例えば、１９ｂｐの長さのもの；例えば、Ｋｒａｙｎａｃｋ ＆ Ｂａｋｅｒ（２００６）ＲＮＡ １２：１６３－７６を参照されたい）、非対称ｓｉＲＮＡ（ａｉＲＮＡ；例えば、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：１３７９－８２を参照されたい）、非対称短い二重鎖ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７：７２５－３２）、フォークｓｉＲＮＡ（例えば、Ｈｏｈｊｏｈ（２００４）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５５７：１９３－９８を参照されたい）、ｓｓ ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｅｌｓｎｅｒ（２０１２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３０：１０６３を参照されたい）、ダンベル型環状ｓｉＲＮＡ（例えば、Ａｂｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２９：１５１０８－０９を参照されたい）、及び低分子内部セグメント化干渉ＲＮＡ（ｓｉｓｉＲＮＡ；例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３５：５８８６－９７を参照されたい）が挙げられる。ＡＰＯＣ３発現を低減又は阻害するために本明細書で使用できるオリゴヌクレオチド構造のさらなる非限定的な例は、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、及び短いｓｉＲＮＡである（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００２） ＥＭＢＯ Ｊ．２１：４６７１－７９を参照されたい；米国特許第７，６５９，３８９号も参照されたい）。

代替的に、本明細書のオリゴヌクレオチドはｓｓである。そのような構造としては、ｓｓ ＲＮＡｉ分子が挙げられるが、これらに限定されない。最近の取り組みにより、ｓｓ ＲＮＡｉ分子の活性が実証されている（例えば、Ｍａｔｓｕｉ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２４：９４６－５５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはＡＳＯである。ＡＳＯは、５’から３’の方向に書くか又は描いた場合に特定の核酸の標的化セグメントの逆方向の相補体を含み、細胞内でその標的ＲＮＡのＲＮａｓｅＨによって媒介される切断を誘導するように、又は（例えば、ミクスマーとして）細胞内の標的ｍＲＮＡの翻訳を阻害するように適切な修飾が行われた（例えば、ギャップマーとして）核酸塩基配列を有するｓｓオリゴヌクレオチドである。本明細書で使用するためのＡＳＯは、例えば、米国特許第９，５６７，５８７号（例えば、核酸塩基の長さ、糖部分（ピリミジン、プリン）、及び核酸塩基の複素環部分の改変を含む）に示されるものを含む、当該技術分野では周知の任意の適切な方法で修飾される。さらに、ＡＳＯは特定の標的遺伝子の発現を減少させるために何十年も使用されてきた（例えば、Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５７：８１－１０５を参照されたい）。

ＩＶ．ｄｓ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド：ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを標的とし、ＡＰＯＣ３発現を阻害する（例えば、ＲＮＡｉ経路を介して）ためのｄｓオリゴヌクレオチドは、センス鎖（すなわち、パッセンジャー鎖）とアンチセンス鎖（すなわち、ガイド鎖）を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖とセンス鎖とは別個の鎖であり、共有結合していない。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖とセンス鎖とは共有結合している。

いくつかの実施形態では、センス鎖は、第１の領域（Ｒ１）及び第２の領域（Ｒ２）を含み、Ｒ２は、第１のサブ領域（Ｓ１）、ｔｒｉＬ又はＬ、及び第２のサブ領域（Ｓ２）を含み、ｔｒｉＬ又はＬはＳ１とＳ２の間に位置し、Ｓ１とＳ２は第２の二重鎖（Ｄ２）を形成する。Ｄ２にはさまざまな長さがある。いくつかの実施形態では、Ｄ２は約１～約６ｂｐの長さである。他の実施形態では、Ｄ２は、２～６、３～６、４～６、５～６、１～５、２～５、３～５、又は４～５ｂｐの長さである。他の実施形態では、Ｄ２は、１、２、３、４、５、又は６ｂｐの長さである。特定の実施形態では、Ｄ２は６ｂｐの長さである。

いくつかの実施形態では、センス鎖のＲ１及びアンチセンス鎖は、第１の二重鎖（Ｄ１）を形成する。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、少なくとも１５個（例えば、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、又は少なくとも２１個）のヌクレオチドの長さである。他の実施形態では、Ｄ１は、約１２～約３０個のヌクレオチドの長さ（例えば、１２～３０個、１２～２７個、１５～２２個、１８～２２個、１８～２５個、１８～２７個、１８～３０個、又は２１～３０個のヌクレオチドの長さ）である。他の実施形態では、Ｄ１は、少なくとも１２個のヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１２個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、又は少なくとも３０個のヌクレオチドの長さ）である。他の実施形態では、Ｄ１は、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、又は３０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の全長にはわたらない。他の実施形態では、Ｄ１はセンス鎖又はアンチセンス鎖のいずれか、あるいはその両方の全長にわたる。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、センス鎖とアンチセンス鎖の両方の全長にわたる。

特定の実施形態では、本開示は、表２に示される配列（例えば、配列番号９～１７０の奇数のいずれか１つ）、特に配列番号３７、４３、４５、８７、８９、９９、１０１、及び１０５を有する（含む又はからなる）センス鎖を含む、ＡＰＯＣ３発現を低減又は阻害するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを記載する。

特定の実施形態では、本開示は、表２に示される配列（例えば、配列番号９～１７０の偶数のいずれか１つ）、特に配列番号３８、４４、４６、８８、９０、１００、１０２、及び１０６を有する（含む又はからなる）アンチセンス鎖を含む、ＡＰＯＣ３発現を低減又は阻害するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを記載する。

特定の他の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号３７、４３、４５、８７、８９、９９、１０１、及び１０５のいずれか１つのヌクレオチド配列を有する（含む又はからなる）センス鎖と、配列番号３８、４４、４６、８８、９０、１００、１０２、及び１０６のいずれか１つのヌクレオチド配列を有する（含む又はからなる）アンチセンス鎖とを含む。

特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号３７、８９、及び１０１のいずれか１つのヌクレオチド配列を有する（含む又はからなる）センス鎖と、配列番号３８、９０、及び１０２のいずれか１つのヌクレオチド配列を有する（含む又はからなる）アンチセンス鎖とを含む。

特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのセンス鎖とアンチセンス鎖は、それぞれ以下から選択される：
（ａ）配列番号３７と３８、
（ｂ）配列番号４３と４４、
（ｃ）配列番号４５と４６、
（ｄ）配列番号８７と８８、
（ｅ）配列番号８９と９０、
（ｆ）配列番号９９と１００、
（ｇ）配列番号１０１と１０２、及び
（ｈ）配列番号１０５と１０６。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、表３に示されるヌクレオチド配列（例えば、配列番号１７１～３３２の奇数のいずれか）、特に配列番号１９９、２０５、２０７、２４９、２５１、２６１、２６３、及び２６７を有する（含む又はからなる）センス鎖を含む。

特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、表３に示されるヌクレオチド配列（例えば、配列番号１７１～３３２の偶数のいずれか）、特に配列番号２００、２０６、２０８、２５０、２５２、２６２、２６４、及び２６８を有する（含む又はからなる）アンチセンス鎖を含む。

特定の他の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号１９９、２０５、２０７、２４９、２５１、２６１、２６３、及び２６７のいずれか１つのヌクレオチド配列を有する（含む又はからなる）センス鎖と、配列番号２００、２０６、２０８、２５０、２５２、２６２、２６４、及び２６８のいずれか１つのヌクレオチド配列を有する（含む又はからなる）アンチセンス鎖とを含む。

特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号１９９、２５１、及び２６３のいずれか１つのヌクレオチド配列を有する（含む又はからなる）センス鎖と、配列番号２００、２５２、及び２６４のいずれか１つのヌクレオチド配列を有する（含む又はからなる）アンチセンス鎖とを含む。

特定の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのセンス鎖とアンチセンス鎖は、それぞれ以下から選択される：
（ａ）配列番号１９９と２００、
（ｂ）配列番号２０５と２０６、
（ｃ）配列番号２０７と２０８、
（ｄ）配列番号２４９と２５０、
（ｅ）配列番号２５１と２５２、
（ｆ）配列番号２６１と２６２、
（ｇ）配列番号２６３と２６４、及び
（ｈ）配列番号２６７と２６８。

当業者は、いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）又は他の核酸の構造を説明する際に配列表に示された配列を参照している点を理解するであろう。そのような実施形態では、実際のオリゴヌクレオチド又は他の核酸は、特定された配列と本質的に同じ又は同様の相補的特性を保持しながら、特定された配列と比較して１つ以上の代替的ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡヌクレオチドのＲＮＡ対応物又はＲＮＡヌクレオチドのＤＮＡ対応物）及び／又は１つ以上の修飾ヌクレオチド及び／又は１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合及び／又は１つ以上の他の修飾を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書のｄｓオリゴヌクレオチドは、２５個のヌクレオチドのセンス鎖と、ダイサー酵素が作用すると、成熟ＲＩＳＣに組み込まれるアンチセンス鎖を生じる２７個のヌクレオチドのアンチセンス鎖とを含む。他の実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドのセンス鎖は、２５個のヌクレオチドよりも長い（例えば、２６個、２７個、２８個、２９個、又は３０個のヌクレオチド）。他の実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドのセンス鎖は、２７個のヌクレオチドよりも長い（例えば、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、又は４０個のヌクレオチド）。

いくつかの実施形態では、本明細書のｄｓオリゴヌクレオチドは、他方の５’末端と比較して熱力学的に不安定である１つの５’末端を有する。いくつかの実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドは非対称であり、センス鎖の３’末端に平滑末端を、アンチセンス鎖の３’末端に３’突出を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖上の３’突出は、約１～約８個のヌクレオチドの長さ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個のヌクレオチドの長さ）である。典型的には、ＲＮＡｉのためのｄｓオリゴヌクレオチドは、アンチセンス（ガイド）鎖の３’末端に２個のヌクレオチドの突出を有する。しかしながら、他の突出も可能である。いくつかの実施形態では、突出は、約１～約６個のヌクレオチド、任意選択で１～５個、１～４個、１～３個、１～２個、２～６個、２～５個、２～４個、２～３個、３～６個、３～５個、３～４個、４～６個、４～５個、５～６個ヌクレオチドの、又は１個、２個、３個、４個、５個、もしくは６個のヌクレオチドの長さを有する３’突出である。しなしながら、他の実施形態では、突出は、約１～約６個のヌクレオチド、任意選択で１～５個、１～４個、１～３個、１～２個、２～６個、２～５個、２～４個、２～３個、３～６個、３～５個、３～４個、４～６個、４～５個、５～６個ヌクレオチドの、又は１個、２個、３個、４個、５個、もしくは６個のヌクレオチドの長さを含む５’突出である。

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端の２個の末端ヌクレオチドが修飾されている。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端の２個の末端ヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ）と相補的である。他の実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端の２個の末端ヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡと相補的ではない。いくつかの実施形態では、ニックの入ったテトラループ構造内のオリゴヌクレオチドのそれぞれの３’末端の２つの末端ヌクレオチドはＧＧである。典型的には、ｄｓオリゴヌクレオチドのそれぞれの３’末端の２個の末端ＧＧヌクレオチドの一方又は両方は、標的ｍＲＮＡと相補的ではない。

いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に、１個以上（例えば、１個、２個、３個、４個、５個）のミスマッチ（複数可）がある。センス鎖とアンチセンス鎖との間に１個を超えるミスマッチが存在する場合、それらは連続して（例えば、２個、３個、又はそれ以上が連続して）配置してもよく、又は相補性の領域全体にわたって散在してもよい。いくつかの実施形態では、センス鎖の３’末端が１個以上のミスマッチを含む。特定の実施形態では、２個のミスマッチがセンス鎖の３’末端に組み込まれる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖の３’末端におけるセグメントの塩基ミスマッチ又は不安定化は、ｄｓオリゴヌクレオチドの効力を改善又は増加させる。

Ａ．センス鎖：ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを標的とし、ＡＰＯＣ３発現を阻害するための本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）には、表２又は表３のセンス鎖に示された配列を含むセンス鎖配列が含まれる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドには、配列番号３７、４３、４５、８７、８９、９９、１０１、及び１０５のいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、又は少なくとも２３個）の連続ヌクレオチドを有するセンス鎖、又は配列番号１９９、２０５、２０７、２４９、２５１、２６１、２６３、及び２６７のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するセンス鎖が含まれる。

さらに、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、約４０個までのヌクレオチドの長さ（例えば、４０個まで、３６個まで、３０個まで、２７個まで、２５個まで、２１個まで、１９個まで、１７個まで、又は１２個までのヌクレオチドの長さ）のセンス鎖（又はパッセンジャー鎖）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１２個のヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１２個、少なくとも１５個、少なくとも１９個、少なくとも２１個、少なくとも２５個、少なくとも２７個、少なくとも３０個、少なくとも３６個、又は少なくとも３８個のヌクレオチドの長さ）のセンス鎖を有することができる。代替的に、オリゴヌクレオチドは、約１２～約４０個（例えば、１２～４０個、１２～３６個、１２～３２個、１２～２８個、１５～４０個、１５～３６個、１５～３２個、１５～２８個、１７～２１個、１７～２５個、１９～２７個、１９～３０個、２０～４０個、２２～４０個、２５～４０個、又は３２～４０個）のヌクレオチドの長さの範囲のセンス鎖を有することができる。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、又は４０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を有することができる。

いくつかの実施形態では、センス鎖は、３’末端にステムループ構造を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、５’末端にステムループ構造を含む。さらなる実施形態では、ステムは、約２ｂｐ、約３ｂｐ、約４ｂｐ、約５ｂｐ、約６ｂｐ、約７ｂｐ、約８ｂｐ、約９ｂｐ、約１０ｂｐ、約１１ｂｐ、約１２ｂｐ、約１３ｂｐ、又は約１４ｂｐの長さの二重鎖である。いくつかの実施形態では、ステムループは、オリゴヌクレオチドを分解（例えば、酵素分解）からより効果的に保護し、標的細胞、組織、もしくは器官（例えば、肝臓）、又はその両方に標的化及び／又は送達することを促進又は向上する。例えば、ステムループのループは、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ）への標的化、標的遺伝子発現（例えば、ＡＰＯＣ３発現）の阻害、及び／又は標的細胞、組織、もしくは器官（例えば、肝臓）への送達、又はそのいずれもを促進、向上、又は増加させる１つ以上の修飾を有するヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、ステムループ自体又はステムループへの修飾（複数可）は、オリゴヌクレオチドの固有の遺伝子発現阻害活性に実質的に影響を及ぼさないが、安定性（例えば、分解に対する保護を提供する）、及び／又はオリゴヌクレオチドの標的細胞、組織、又は器官（例えば、肝臓）への送達を促進、改善、又は増加させる。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、（例えば、その３’末端に） Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１がＳ２と相補的であり、ＬがＳ１とＳ２との間に約１０個までのヌクレオチドの長さ（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、又は１０個のヌクレオチドの長さ）のｓｓループを形成する、センス鎖を含む。特定の実施形態では、ループ（Ｌ）は、４個のヌクレオチドの長さである。図１Ａ～１Ｃは、このようなオリゴヌクレオチドの非限定的な例を示す。いくつかの実施形態では、上述の構造Ｓ１－Ｌ－Ｓ２を有するステムループのループ（Ｌ）は、テトラループ（例えば、ニックを有するテトラループ構造内の）である。いくつかの実施形態では、テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、送達リガンド、及びそれらの組み合わせを含む。

Ｂ． アンチセンス鎖： ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを標的化及びＡＰＯＣ３発現を阻害するための本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、表２又は表３のアンチセンス鎖に示される配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号３８、４４、４６、８８、９０、１００、１０２、及び１０６のいずれか１つに示される配列の少なくとも１２個（例えば、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、又は少なくとも２３個）の連続したヌクレオチドを有するアンチセンス鎖、又は配列番号２００、２０６、２０８、２５０、２５２、２６２、２６４、及び２６８のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖を含む。

さらに、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、約４０個までのヌクレオチドの長さ（例えば、４０個まで、３５個まで、３０個まで、２７個まで、２５個まで、２１個まで、１９個まで、１７個まで、又は１２個までのヌクレオチドの長さ）のアンチセンス鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１２個のヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１２個、少なくとも１５個、少なくとも１９個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２５個、少なくとも２７個、少なくとも３０個、少なくとも３５個、又は少なくとも３８個のヌクレオチドの長さ）のアンチセンス鎖を有することができる。代替的に、オリゴヌクレオチドは、約１２～約４０個（例えば、１２～４０個、１２～３６個、１２～３２個、１２～２８個、１５～４０個、１５～３６個、１５～３２個、１５～２８個、１７～２２個、１７～２５個、１９～２７個、１９～３０個、２０～４０個、２２～４０個、２５～４０個、又は３２～４０個）のヌクレオチドの長さの範囲のアンチセンス鎖を有することができる。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、又は４０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を有することができる。

上述のように、本明細書のオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、「ガイド鎖」と呼ばれることがある。例えば、ＲＩＳＣと係合してＡｇｏ２などのアルゴノートタンパク質に結合するアンチセンス鎖、又は１つ以上の類似の因子と係合するかもしくは結合して標的遺伝子のサイレンシングを指示するアンチセンス鎖は、ガイド鎖（又は「パッセンジャー鎖」）と呼ばれる。

Ｖ． オリゴヌクレオチドの修飾

Ａ． 糖修飾：修飾糖（本明細書では糖類似体とも呼ばれる）は、例えば、１つ以上の修飾が糖の２’、３’、４’、及び／又は５’位の炭素に生じるような、修飾デオキシリボース又はリボース部分を含む。修飾糖としてはまた、ロックド核酸（「ＬＮＡ」、例えば、Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８） Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５４：３６０７－３０）を参照されたい）、アンロックド核酸（「ＵＮＡ」、例えば、Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３） Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ－Ｎｕｃ． Ａｃｉｄｓ ２：ｅ１０３を参照されたい）、及び架橋化核酸（「ＢＮＡ」；例えば、Ｉｍａｎｉｓｈｉ ＆ Ｏｂｉｋａ（２００２） Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６：１６５３－５９を参照されたい）も挙げられる。

いくつかの実施形態では、糖中のヌクレオチド修飾は、例えば、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－Ｆ、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－ＯＭｅ、２’－ＭＯＥ、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、又は２’－ＦＡＮＡなどの２’－修飾である。特定の実施形態では、修飾は、２’－Ｆ、２’－ＯＭｅ、又は２’－ＭＯＥである。いくつかの実施形態では、糖中の修飾は糖環の修飾を含み、糖環の１つ以上の炭素の修飾を含み得る。例えば、糖中の修飾は、糖の１’－炭素もしくは４’－炭素に結合している糖の２’－酸素、又はエチレンもしくはメチレン架橋を介して１’－炭素もしくは４’－炭素に結合している２’－酸素である。いくつかの実施形態では、修飾は、２’炭素と３’炭素との結合を欠く非環式糖である。他の実施形態では、修飾は、例えば糖の４’位などのチオール基である。

本明細書のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１個（例えば、少なくとも１個、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、少なくとも３０個、少なくとも３５個、少なくとも４０個、少なくとも４５個、少なくとも５０個、少なくとも５５個、少なくとも６０個、又はそれ以上）の修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、少なくとも１個（例えば、少なくとも１個、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、少なくとも３０個、少なくとも３５個、又はそれ以上）の修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、少なくとも１個（例えば、少なくとも１個、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、又はそれ以上）の修飾ヌクレオチドを含む。

特定の実施形態では、テトラループを除くセンス鎖のすべてのヌクレオチドが修飾されている。同様に、アンチセンス鎖のすべてのヌクレオチドが修飾されている。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのすべてのｄｓヌクレオチド（すなわち、センス鎖とアンチセンス鎖の対になったヌクレオチド）が修飾されている。上記のように、またいくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－修飾（例えば、２’－Ｆ、２’－ＯＭｅ、２’－ＭＯＥ、及び／又は２’－ＦＡＮＡ）である。特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、例えば、２’－Ｆ又は２’－ＯＭｅなどの２’－修飾である。

さらに、本明細書のオリゴヌクレオチドは、異なる修飾パターンを有する。いくつかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、表３に示された修飾パターンを有するアンチセンス鎖を含み、表３（及び図１Ａ～１Ｃ）に示された修飾パターンを有するセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖の位置８、９、１０、又は１１のうちの１つ以上が２’－Ｆで修飾されている。他の実施形態では、センス鎖の位置１～７、１２～２７、及び３１～３６のそれぞれのヌクレオチドの糖部分は、２’－ＯＭｅで修飾されている。特定の実施形態では、センス鎖の位置８～１１は２’－Ｆで修飾され、位置１～７、１２～２７、及び３１～３６は２’－ＯＭｅで修飾されている。

さらに特定の実施形態では、センス鎖には、位置８～１１に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、位置１～７、１２～２７、及び３１～３６に２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド、位置２８、２９、及び３０にＧａｌＮＡｃコンジュゲートヌクレオチド、及び位置１と２の間にホスホロチオエート結合が含まれる。

いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２’－Ｆで修飾された、位置２～５、７、１０、及び１４の１つ以上のヌクレオチドと、２’－ＯＭｅで修飾された、位置１、６、８～９、１１～１３、及び１５～２２の１個以上のヌクレオチドを含む。特定の実施形態は、位置２～５、７、１０、及び１４に２’－Ｆ修飾ヌクレオチドが含まれ、位置１、６、８～９、１１～１３、及び１５～２２に２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチドが含まれるアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチドを開示する。

特定の実施形態では、アンチセンス鎖には、位置２～５、７、１０、及び１４に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、位置１、６、８～９、１１～１３、及び１５～２２に２’－ＯＭｅ、及び位置１と２、位置２と３、位置３と４、位置２０と２１、及び位置２１と２２の間にホスホロチオエート結合が含まれる。

Ｂ．５’末端リン酸：５’末端リン酸基は、本明細書のオリゴヌクレオチドとＡｇｏ２との相互作用を強化するために使用することができる。しかしながら、５’末端リン酸基を有するオリゴヌクレオチドは、ホスファターゼ又は他の酵素による分解を受けやすくなり得、インビボでのバイオアベイラビリティを制限する可能性がある。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、このような分解に耐性のある５’リン酸の類似体を含む。このようなリン酸類似体の例としては、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、マロニルホスホネート、又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの鎖の３’末端は、天然の５’リン酸基の静電特性及び立体特性を模倣する化学的部分（「リン酸模倣体」）に結合している。

代替的に又は追加的に、オリゴヌクレオチドは、糖の４’位の炭素にリン酸類似体（４’－リン酸類似体と呼ぶ）を有する。例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０４５３１７号を参照されたい。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドに４’－リン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、リン酸類似体は、オキシメチル基の酸素原子が糖部分（例えば、その４’炭素）に結合したオキシメチルホスホネート又はその類似体である。他の実施形態では、４’－ホスファート類似体は、チオメチル基の硫黄原子又はアミノメチル基の窒素原子は、糖部分の４’炭素に結合したチオメチルホスホナートもしくはアミノメチルホスホナート又はそれらの類似体である。特定の実施形態では、４’－ホスファート類似体は、式－Ｏ－ＣＨ₂－ＰＯ（ＯＨ）₂又はＯ－ＣＨ₂－ＰＯ（ＯＲ）₂（式中、Ｒは独立して、Ｈ、ＣＨ₃、アルキル基、ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮ、ＣＨ₂ＯＣＯＣ（ＣＨ₃）₃、ＣＨ₂ＯＣＨ₂ＣＨ₂Ｓｉ（ＣＨ₃）₃、又は保護基から選択される）で表される４’－オキシメチルホスホナートである。特定の実施形態では、アルキル基は、ＣＨ₂ＣＨ₃である。他の特定の実施形態では、Ｒは独立して、Ｈ、ＣＨ₃、又はＣＨ₂ＣＨ₃から選択される。

Ｃ．修飾ヌクレオチド間結合：上記の改変に加えて、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、リン酸の修飾又は置換は、少なくとも１個（例えば、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、又は少なくとも５個）の修飾ヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドを生じ得る。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチ（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、約１～約１０個（例えば、１～１０個、２～８個、４～６個、３～１０個、５～１０個、１～５個、１～３個、又は１～２個）の修飾ヌクレオチド間結合を含む。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、又は１０個の修飾ヌクレオチド間結合を含む。

修飾ヌクレオチド間結合の例としては、ホスホロジチオエート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホトリエステル結合、チオノアルキルホスホネート結合、チオアルキルホスホトリエステル結合、ホスホロアミダイト結合、ホスホネート結合、及び／又はボラノホスファート結合が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つの少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。

いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドには、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の３位と４位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及び／又はアンチセンス鎖の２１位と２２位のうちの１つ以上の間にホスホロチオエート結合が含まれる。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドには、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の３位と４位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及び／又はアンチセンス鎖の２１位と２２位のそれぞれの間にホスホロチオエート結合が含まれる。

特定の実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドには以下が含まれる：
位置８～１１に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、位置１～７、１２～２７、及び３１～３６に２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド、位置２８、２９、及び３０にＧａｌＮＡｃコンジュゲートヌクレオチド、及び位置１と２の間にホスホロチオエート結合を有するセンス鎖；
位置２～５、７、１０、及び１４に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、位置１、６、８～９、１１～１３、及び１５～２２に２’－ＯＭｅ、位置１と２、位置２と３、位置３と４、位置２０と２１、及び位置２１と２２の間にホスホロチオエート結合を有するアンチセンス鎖、位置１に４’－リン酸類似体を含む５’－末端ヌクレオチド（任意選択で５’末端ヌクレオチドは、４－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］を含む）を有するアンチセンス鎖；ここで、アンチセンス鎖の位置１～２０は、センス鎖の位置１～２０と二重鎖領域を形成し、センス鎖の位置２１～３６はステムループを形成し、位置２７～３０はステムループのループを形成し、任意選択で、位置２７～３０はテトラループを含み、アンチセンス鎖の位置２１及び２２は突出を含み、センス鎖とアンチセンス鎖は、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む：
（ａ）配列番号１９９と２００、
（ｂ）配列番号２０５と２０６、
（ｃ）配列番号２０７と２０８、
（ｄ）配列番号２４９と２５０、
（ｅ）配列番号２５１と２５２、
（ｆ）配列番号２６１と２６２、
（ｇ）配列番号２６３と２６４、及び
（ｈ）配列番号２６７と２６８。

Ｄ．塩基の修飾：上記の修飾に加えて、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、１つ以上の修飾核酸塩基も含む。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基（本明細書では塩基類似体とも呼ばれる）は、ヌクレオチド糖部分の１’位に連結されている。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素塩基である。他の実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素原子を含まない。例えば、米国特許出願公開第２００８／０２７４４６２号を参照されたい。他の特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、ユニバーサル塩基である。しかしながら、特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、核酸塩基を含まない（脱塩基）。

ユニバーサル塩基に関して、それらは二重鎖中に存在する場合に二重鎖の構造を実質的に変えることなく１つを超える種類の塩基の反対側に配置される、修飾ヌクレオチドのヌクレオチド糖部分の１’位、又はヌクレオチド糖部分置換の同等の位置に配置された複素環部分を含む。さらに、標的核酸と完全に相補的である参ｓｓ核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）と比較して、ユニバーサル塩基を有するｓｓ核酸は、相補的な核酸と形成される二重鎖よりも低いＴ_mを有する標的核酸と二重鎖を形成する。しかしながら、ユニバーサル塩基が塩基に置き換えられて１個のミスマッチを生じている参照ｓｓ核酸と比較して、ユニバーサル塩基を有するｓｓ核酸は、ミスマッチ塩基を有する核酸と形成される二重鎖よりも高いＴ_mを有する標的核酸と二重鎖を形成する。

ユニバーサル結合ヌクレオチドの例としては、イノシン、１－β－Ｄ－リボフラノシル－５－ニトロインドール、及び／又は１－β－Ｄ－リボフラノシル－３－ニトロピロールが挙げられるが、これらに限定されない（例えば、米国特許出願公開第２００７／０２５４３６２号；Ｖａｎ Ａｅｒｓｃｈｏｔ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：４３６３－７０；Ｌｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：２３６１－６６；及びＬｏａｋｅｓ ＆ Ｂｒｏｗｎ（１９９４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：４０３９－４０３を参照されたい）。

Ｅ．可逆的な修飾：本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）を標的細胞に到達する前にインビボ環境から保護するために特定の修飾を行うことができるが、標的細胞の細胞質に到達した後でオリゴヌクレオチドの効力又は活性を低下させるように修飾を行うこともできる。したがって、オリゴヌクレオチドが細胞外で望ましい特性を保持し、細胞の細胞質環境に入ると除去されるように可逆的な修飾を行うことができる。可逆的修飾は、例えば、細胞内酵素の作用によって、又は細胞内の化学的条件によって（例えば、細胞内グルタチオンによる還元によって）除去することができる。

いくつかの実施形態では、可逆的修飾ヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分を含む。典型的に、オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド間二リン酸結合によって生じる負電荷をマスクし、細胞取り込み及びヌクレアーゼ耐性を改善するために、環状ジスルフィド部分によって化学的に修飾されている。米国特許出願公開第２０１１／０２９４８６９号、国際特許出願公開第ＷＯ２０１４／０８８９２０号、及び同第ＷＯ２０１５／１８８１９７号、ならびにＭｅａｄｅ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２：１２５６－６３を参照されたい。ヌクレオチド間二リン酸結合のこの可逆的修飾は、サイトゾルの還元的環境（例えば、グルタチオン）によって細胞内で切断されるように設計されている。初期の例としては、中和ホスホトリエステル修飾があり、細胞内で切断可能であることが報告されている（例えば、Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２５：９４０－５０を参照されたい）。

いくつかの可逆的修飾は、オリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ及び他の過酷な環境条件（例えば、ｐＨ）に曝露されるインビボ投与（例えば、血液及び／又は細胞のリソソーム／エンドソーム区画を通過する輸送）においてオリゴヌクレオチドを保護する。細胞外空間と比較してグルタチオンのレベルが高い細胞のサイトゾルに放出されると、修飾が逆転し、切断されたオリゴヌクレオチドが得られる。可逆的なグルタチオン感受性部分を使用すると、不可逆的な化学修飾を使用して利用可能な選択肢と比較して、オリゴヌクレオチドに立体的に大きな化学基を導入することが可能である。これは、これらのより大きな化学基がサイトゾルで除去されるためであり、したがって、細胞のサイトゾル内のオリゴヌクレオチドの生物活性を妨げてはいけない。その結果、これらのより大きな化学基を操作して、ヌクレアーゼ耐性、親油性、電荷、熱安定性、特異性、低下した免疫原性など、オリゴヌクレオチドにさまざまな利点を与えることができる。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分の構造を操作して、その放出の動態を改変することができる。

いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、ヌクレオチドの糖に結合している。特定の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、修飾ヌクレオチドの糖の２’－炭素に結合している。追加的に又は代替的に、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドである場合、糖の５’炭素に結合される。追加的に又は代替的に、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオチドである場合、糖の３’炭素に結合される。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、スルホニル基を含む（例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０３９３６４号を参照されたい）。

ＶＩ．標的化リガンド：本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）を１つ以上の細胞又は１つ以上の器官に標的化することが望ましい。そのような戦略は、他の器官における望ましくない影響を回避する、又はオリゴヌクレオチドから恩恵を受けない細胞、組織、又は器官へのオリゴヌクレオチドの必要以上の損失を回避するのに役立ち得る。したがって、オリゴヌクレオチドは、組織、細胞、又は器官の標的化及び／又はそれらへの送達を促進する（例えば、肝臓へのオリゴヌクレオチドの送達を促進する）ように修飾される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、肝臓の肝細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進するように改変される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の標的化リガンド（複数可）にコンジュゲートされた少なくとも１個のヌクレオチド（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、又はそれ以上のヌクレオチド）を含む。

標的化リガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質もしくはタンパク質の一部（例えば、抗体又は抗体断片）、又は脂質を含むがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、アプタマーである。例えば、標的化リガンドは、腫瘍血管系又は神経膠腫細胞を標的化するために使用されるＡｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）ペプチド、腫瘍血管系又は腫瘍間質を標的化するためのＣｙｓ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ａｌａ（ＣＲＥＫＡ）ペプチド、中枢神経系（ＣＮＳ）血管系上で発現するトランスフェリン受容体を標的化するためのトランスフェリン、ラクトフェリン、もしくはアプタマー、又は神経膠腫細胞上の上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）を標的化するための抗ＥＧＦＲ抗体であってよい。特定の実施形態では、標的化リガンドは、１つ以上のＧａｌＮＡｃ部分である。

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの１個以上（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、又は６個）のヌクレオチドが、それぞれ別個の標的化リガンドにコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの２～４個のヌクレオチドが、それぞれ別個の標的化リガンドにコンジュゲートされる。他の実施形態では、標的化リガンドは、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの末端の２～４個のヌクレオチドにコンジュゲートされ得る（例えば、標的化リガンドはセンス鎖又はアンチセンス鎖の５’末端又は３’末端の２～４個のヌクレオチドの突出又は伸長部分にコンジュゲートされる）ため、標的化リガンドが歯ブラシの毛の部分に似ており、オリゴヌクレオチドが歯ブラシに似た格好となっている。例えば、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の５’末端又は３’末端のいずれかにステムループを含み、ステムのループの１個、２個、３個、又は４個のヌクレオチドを標的化リガンドに個別にコンジュゲートさせることができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはセンス鎖の３’末端にステムループを含み、ステムループのループにはｔｒｉＬ又はＬが含まれ、ｔｒｉＬ又はＬの３個又は４個のヌクレオチドはそれぞれ標的化リガンドに個別にコンジュゲートされる。

ＧａｌＮＡｃは、主として肝細胞の類洞表面で発現するＡＳＧＰＲに対する高親和性リガンドであり、末端ガラクトース又はＧａｌＮＡｃ残基を含む循環糖タンパク質（アシアロ糖タンパク質）の結合、内在化、及びその後の排出に主要な役割を有する。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドにＧａｌＮＡｃ部分をコンジュゲート（間接的又は直接的に）させて、細胞で発現するＡＳＧＰＲにオリゴヌクレオチドを標的化するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つ以上のＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされており、ＧａｌＮＡｃ部分はオリゴヌクレオチドをヒト肝臓細胞（例えば、ヒト肝細胞）上に発現するＡＳＧＰＲに標的化する。

オリゴヌクレオチドは、一価のＧａｌＮＡｃに直接的又は間接的にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つを超える一価ＧａｌＮＡｃに直接的又は間接的にコンジュゲートされる（すなわち、２個、３個、又は４個の一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされ、典型的には３個又は４個の一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされる）。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の二価ＧａｌＮＡｃ、三価ＧａｌＮＡｃ、又は四価ＧａｌＮＡｃの部分にコンジュゲートされる。

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの１個以上（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、又は６個）のヌクレオチドが、それぞれＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態では、Ｌの２～４個のヌクレオチドが、それぞれ別個のＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされる。他の実施形態では、ｔｒｉＬの１～３個のヌクレオチドがそれぞれ別個のＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの末端の２～４個のヌクレオチドにコンジュゲートされる（例えば、リガンドはセンス鎖又はアンチセンス鎖の５’末端又は３’末端の２～４個のヌクレオチドの突出又は伸長部分にコンジュゲートされる）ため、ＧａｌＮＡｃ部分が歯ブラシの毛の部分に似ており、オリゴヌクレオチドが歯ブラシに似た格好となっている。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、センス鎖のヌクレオチドにコンジュゲートされる。例えば、４個のＧａｌＮＡｃ部分はセンス鎖のＬ内のヌクレオチドにコンジュゲートされ、それぞれのＧａｌＮＡｃ部分は１個のヌクレオチドにコンジュゲートされる。特定の実施形態では、３個のＧａｌＮＡｃ部分はセンス鎖のＬ内のヌクレオチドにコンジュゲートされ、それぞれのＧａｌＮＡｃ部分は１個のヌクレオチドにコンジュゲートされる。

特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、下記に示されるような［ａｄｅｍＧ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－グアニジン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれる、グアニジンヌクレオチドに結合された一価のＧａｌＮＡｃを含む：

特定の実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、下記に示されるような［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれる、アデニンヌクレオチドに結合された一価のＧａｌＮＡｃを含む：

特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、下記に示されるような［ｐｒｇＧ－ｐｅｇ－ＧａｌＮＡｃ］と呼ばれるグアニンヌクレオチドに結合した一価の２’－ＧａｌＮＡｃを含み、ここでＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）は、ポリエチレングリコール及びプロパルギル（アルキン）リンカーを介してグアニンにコンジュゲートされている：

特定の実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、下記に示されるような［ｐｒｇＡ－ｐｅｇ－ＧａｌＮＡｃ］と呼ばれるアデニンヌクレオチドに結合した一価の２’－ＧａｌＮＡｃを含み、ここでＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）は、ポリエチレングリコール及びプロパルギル（アルキン）リンカーを介してアデニンにコンジュゲートされている：

そのようなコンジュゲーションの例を、５’～３’方向にヌクレオチド配列ＧＡＡＡを有するループについて下記に示す（Ｌ＝リンカー、Ｘ＝ヘテロ原子）。ステム結合点が示されている。このようなループは、例えば、表４に列挙され、図１に示されているセンス鎖の位置２７～３０に存在する。化学式では、
はオリゴヌクレオチド鎖への結合点を表すために使用される：

適当な方法又は化学的手法（例えば、クリックケミストリー）を用いて標的化リガンドをヌクレオチドに連結する。標的化リガンドをヌクレオチドにコンジュゲートする１つの方法は、クリックリンカーを使用することである。いくつかの実施形態では、アセタールベースのリンカーを用いて標的化リガンドを本明細書のオリゴヌクレオチドのいずれか１つのヌクレオチドにコンジュゲートする。アセタールベースのリンカーは、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／１００４０１号に開示されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、不安定なリンカーである。しかしながら、他の実施形態では、リンカーは安定している。ＧａｌＮＡｃ部分がアセタールリンカーを使用してループのヌクレオチドに結合されている、５’～３’方向にヌクレオチドＧＡＡＡを有するループの例を下記に示す。このようなループは、例えば、表２又は３に列挙されたセンス鎖のいずれか１つの位置２７～３０に存在する。化学式において、
はオリゴヌクレオチド鎖への結合点である：

いくつかの実施形態では、二重鎖伸長部分（例えば、３、４、５、又は６ｂｐまでの長さ）が、標的化リガンド（例えば、ＧａｌＮＡｃ部分）と本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）との間に配置される。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、それへとコンジュゲートされたＧａｌＮＡｃを有しない。

製剤及び医薬組成物

本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）、又はその薬学的に許容される塩（例えば、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、又は塩酸塩）は、製剤又は医薬組成物に組み込まれる。オリゴヌクレオチドの使用を促進するために、さまざまな製剤が開発されている。例えば、オリゴヌクレオチドは、分解を最小限に抑え、送達及び／又は取り込みを促進し、又は製剤中のオリゴヌクレオチドに別の有益な特性を与える製剤を使用して個体又は細胞環境に送達することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液、リポソーム、ミセル構造、及びカプシド中に製剤化される。

インビボでの適合性及び有効性を向上させるために、オリゴヌクレオチドは、多数の無機酸及び有機の酸／塩基のいずれかと反応して、薬学的に許容される酸／塩基付加塩を形成することができる。薬学的に許容される塩及びそれらを調製するための一般的な方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｓｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ： Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ，” ２^nd Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２０１１）を参照されたい）。本明細書で使用する薬学的に許容される塩としては、ナトリウム、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩及び酢酸塩が挙げられる。

カチオン性脂質を含むオリゴヌクレオチドの製剤を使用して、細胞内へのオリゴヌクレオチドのトランスフェクションを促進する。例えば、リポフェクチン、カチオン性グリセロール誘導体、及びポリカチオン性分子（例えば、ポリリジン）などのカチオン性脂質を使用することができる。適切な脂質としては、オリゴフェクタミン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、リポフェクタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＮＣ３８８（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ．，Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、又はＦｕＧｅｎｅ６（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられ、これらはいずれも製造者の使用説明書に従って使用することができる。

したがって、いくつかの実施形態では、本明細書の製剤は、リポソーム、脂質、複合脂質、マイクロスフェア、マイクロ粒子、ナノスフェア、又はナノ粒子（脂質ナノ粒子など）を含むか、又は投与を必要とする個体の細胞、組織、器官、もしくは身体に投与するための他の形で製剤化することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，“Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”（Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ Ｊｒ．，ｅｄ．，２２^nd Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１３を参照されたい）。

いくつかの実施形態では、本明細書の製剤は、賦形剤をさらに含み、賦形剤は、活性成分の改善された安定性、改善された吸収性、改善された溶解性、及び／又は治療増強効果を組成物に付与することができる。いくつかの実施形態では、賦形剤は、緩衝剤（例えば、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、トリス塩基、又は水酸化ナトリウム）、又はビヒクル（例えば、緩衝液、ペトロラタム、ジメチルスルホキシド、又は鉱油）である。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、貯蔵寿命を延ばすために凍結乾燥された後、使用（例えば、個体への投与）前に溶液とされる。したがって、１つ以上のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物中の賦形剤は、凍結乾燥保護剤（例えば、マンニトール、ラクトース、ポリエチレングリコール、もしくはポリビニルピロリドン）、又は崩壊温度調節剤（例えば、デキストラン、フィコール（商標）、もしくはゼラチン）である。

医薬組成物は、その意図された投与経路に適合するように製剤化される。投与経路としては、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮内、及び皮下）、経口（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜、ならびに直腸投与が挙げられるが、これらに限定されない。

注射用途に適した医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）、又は分散液、及び滅菌注射溶液又は分散液の即時調製用の滅菌粉末が含まれる。静脈内投与の場合、適切な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられるが、これらに限定されない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにそれらの適当な混合物を含む溶媒又は分散媒であり得る。多くの実施形態では、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、及び／又は塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含むことが好ましい。滅菌されている注射用溶液は、必要な量の本明細書のオリゴヌクレオチドを選択された溶媒に、必要に応じて上記に列挙した成分のうちの１つ又は組み合わせと共に混合し、その後濾過滅菌することによって調製される。

さらに、医薬組成物は、少なくとも約０．１％以上の治療剤（例えば、１つ以上の本明細書のオリゴヌクレオチド）を含むが、治療剤のパーセンテージは、組成物全体の重量又は体積の約１％～約８０％以上であってもよい。溶解度、バイオアベイラビリティー、生物学的半減期、投与経路、製品の貯蔵寿命、及び他の薬理学的考慮事項などの因子は、そのような医薬製剤の調製の分野における当業者によって想到されるものであり、したがって、さまざまな投与量及び治療レジメンが望ましい場合がある。

いくつかの例は、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドの少なくとも１つを肝臓に標的とした送達を対象としているが、他の組織を標的とすることも企図されている。

キット

本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、本明細書のオリゴヌクレオチドの１つ以上と使用説明書とを含むキットに組み込むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、１つ以上のオリゴヌクレオチドと、キット及び／又はその任意の構成要素の使用説明書を含む添付文書とを含む。他の実施形態では、キットは、適切な容器、１つ以上のオリゴヌクレオチド、１つ以上の対照、及び当該技術分野で知られているさまざまな緩衝液、試薬、酵素、及びその他の標準成分を含む。

いくつかの実施形態では、容器は、少なくとも１つのバイアル、ウェル、試験管、フラスコ、ボトル、注射器、又はその他の容器手段であり、その中に１つ以上のオリゴヌクレオチドが入れられ、いくつかの実施形態では、適切に分注される。追加の構構成要素が提供される他の実施形態では、キットは、この構成要素が配置される追加の容器を含む。キットには、１つ以上のオリゴヌクレオチドとその他の試薬を、商業的に販売できるように密閉された状態で収容する手段も含まれている。このような容器としては、所望のバイアルが保持される射出成形又はブロー成形のプラスチック容器が挙げられる。コンテナ及び／又はキットには、使用及び／又は警告のための使用説明書付きのラベルが含まれる。

いくつかの実施形態では、キットは、本明細書の１つ以上のオリゴヌクレオチド及び薬学的に許容される担体、又は１つ以上のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物と、それを必要とする個体におけるＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態を治療するか、又はその進行を遅らせるための使用説明書とを含む。

方法
作製方法

本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、例えば従来の核酸固相合成法など、当業者に既知の方法及び／又は技術を使用して作製される。オリゴヌクレオチドのポリヌクレオチドは、標準的なヌクレオチド又はヌクレオシド前駆体（例えば、ホスホラミダイト）を使用して、適切な核酸合成装置で組み立てられる。ＤＮＡ／ＲＮＡ合成装置を含む自動核酸合成装置は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）、ＢｉｏＡｕｔｏｍａｔｉｏｎ（Ｉｒｖｉｎｇ，ＴＸ）、及びＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）などから市販されている。

当業者には理解されるように、本明細書のオリゴヌクレオチドを合成する他の方法及び／又は技術も使用される。さらに、さまざまな合成ステップが交互の順番又は順序で実行され、目的の化合物が得られる。オリゴヌクレオチドの合成に有用な他の合成化学変換、保護基（例えば、塩基に存在するヒドロキシル、アミノなど）、及び保護基方法論（保護及び脱保護）は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｌａｒｏｃｋ，“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，” ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｇｒｅｅｎｅ ＆ Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２^nd Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９９１）；Ｆｉｅｓｅｒ ＆ Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９９４）；及びＰａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９９５）に記載されている。

使用方法

Ｉ．細胞、組織、器官、及び生物におけるＡＰＯＣ３発現を低減する方法：本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、細胞、組織、器官、又は個体におけるＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを低減するために使用される。本方法は、本明細書に記載されたステップを含み、これらは記載された順序で実行されてもよいが、必ずしもそうである必要はない。しかしながら、他の順序も考えられる。さらに、個別又は複数のステップを並行して、及び／又は時間が重なって、及び／又は個別に、又は複数回繰り返されるステップで実施できる。さらに、本方法は追加の未指定のステップを含む。

本方法は、ＡＰＯＣ３発現を低減するために、有効量の本明細書のオリゴヌクレオチドのいずれかを細胞、細胞の集団、組織、器官、又は個体に接触させること、又は送達することを含む。いくつかの実施形態では、ＡＰＯＣＡ３発現の減少は、細胞におけるＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ、ＡＰＯＣ３タンパク質、又はＡＰＯＣ３活性の量又はレベルの減少を測定することによって判定される。

適切な細胞型について、細胞型は、ｍＲＮＡを発現するあらゆる細胞（例えば、肝細胞、マクロファージ、単球由来細胞、前立腺癌細胞、脳、内分泌組織、骨髄、リンパ節、肺、胆嚢、肝臓、十二指腸、小腸、膵臓、腎臓、胃腸管、膀胱、脂肪及び軟部組織、ならびに皮膚の細胞）である。いくつかの実施形態では、細胞は、個体から得られる初代細胞である。いくつかの実施形態では、初代細胞は、限られた数の継代を行っており、それにより、細胞は天然の表現型特性を実質的に維持している。いくつかの実施形態では、該細胞は、エクスビボ、インビボ、又はインビトロである（すなわち、本明細書の１つ以上のオリゴヌクレオチドは、培養中の細胞又は細胞が存在する生物に送達することができる）。

いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを含む溶液を注入すること、オリゴヌクレオチドでコーティングした粒子による衝突すること、オリゴヌクレオチドを含む溶液に細胞もしくは細胞の集団を曝露すること、又はオリゴヌクレオチドの存在下での細胞膜をエレクトロポレーションすることを含むが、これらに限定されない当該技術分野で公知の核酸送達方法を使用して細胞又は細胞の集団に送達される。例えば、脂質媒介担体輸送、化学媒介輸送、及びリン酸カルシウムなどのカチオン性リポソームトランスフェクションなどの、オリゴヌクレオチドを細胞に送達するための他の当該技術分野で知られている方法が使用される。

ＡＰＯＣ３発現の減少は、ＡＰＯＣ３発現に関連する細胞もしくは細胞の集団の１つ以上の分子、特性、もしくは特性を評価するアッセイもしくは技術によって（例えば、ＡＰＯＣ３発現バイオマーカーを使用して）、又は細胞もしくは細胞の集団におけるＡＰＯＣ３発現を直接的に示す分子（例えば、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡもしくはＡＰＯＣ３タンパク質）を評価するアッセイもしくは技術によって判定される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドがＡＰＯＣ３発現を減少させる程度は、オリゴヌクレオチドと接触させた細胞又は細胞の集団におけるＡＰＯＣ３発現を対照の細胞又は細胞の集団（例えば、オリゴヌクレオチドと接触させていないか、又は対照オリゴヌクレオチドと接触させた細胞又は細胞の集団）と比較することによって評価される。いくつかの実施形態では、対照細胞又は細胞の集団におけるＡＰＯＣ３発現の対照の量又はレベルは、アッセイ又は技術が実施されるすべての場合において対照の量又はレベルを測定する必要がないように、予め決定される。所定のレベル又は値は、中央値や平均値などの単一のカットオフ値を含むがこれに限定されないさまざまな形式をとる。

本明細書のオリゴヌクレオチドを細胞又は細胞の集団に接触又は送達すると、ＡＰＯＣ３発現が減少する。いくつかの実施形態では、ＡＰＯＣ３発現の減少は、オリゴヌクレオチドと接触させていない、又は対照オリゴヌクレオチドと接触させた細胞又は細胞の集団におけるＡＰＯＣ３発現の対照の量又はレベルと比較するものである。いくつかの実施形態では、ＡＰＯＣ３発現の減少は、ＡＰＯＣ３発現の対照の量又はレベルと比較して、約１％以下、約５％以下、約１０％以下、約１５％以下、約２０％以下、約２５％以下、約３０％以下、約３５％以下、約４０％以下、約４５％以下、約５０％以下、約５５％以下、約６０％以下、約７０％以下、約８０％以下、又は約９０％以下である。いくつかの実施形態では、ＡＰＯＣ３発現の対照の量又はレベルは、本明細書のオリゴヌクレオチドと接触させていない細胞又は細胞の集団中のＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ及び／又はＡＰＯＣ３タンパク質の量又はレベルである。いくつかの実施形態では、本明細書の方法による細胞又は細胞の集団へのオリゴヌクレオチドの送達の効果は、任意の有限期間又は一定時間（例えば、分、時間、日、週、及び／又は月）後に評価される。例えば、ＡＰＯＣ３発現は、細胞又は細胞の集団において、少なくとも約４時間、約８時間、約１２時間、約１８時間、又は約２４時間にわたって決定される。代替的に、ＡＰＯＣ３発現は、細胞又は細胞の集団にオリゴヌクレオチドを接触させるか又は送達した後、少なくとも約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約３５日間、約４２日間、約４９日間、約５６日間、約６３日間、約７０日間、約７７日間、又は約８４日間、又はそれ以上で、細胞又は細胞の集団において決定される。いくつかの実施形態では、ＡＰＯＣ３発現は、細胞又は細胞の集団にオリゴヌクレオチドを接触させるか又は送達した後、少なくとも約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、又は約６ヶ月、又はそれ以上で細胞又は細胞の集団において決定される。

いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、細胞内で１つ以上のオリゴヌクレオチド又は鎖（例えば、センス鎖及びアンチセンス鎖）を発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される。例えば、オリゴヌクレオチドは、本明細書の任意のオリゴヌクレオチドを発現するように設計された導入遺伝子を使用して送達される。導入遺伝子は、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、もしくは単純ヘルペスウイルス）、又は非ウイルスベクター（例えば、プラスミドもしくは合成ｍＲＮＡ）を使用して送達され得る。いくつかの実施形態では、導入遺伝子を個体に直接注射する。

ＩＩ． 治療方法： ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は症状を有する、有すると疑われる、又は発症するリスクがある個体を治療する方法は、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）の少なくとも１つ以上を個体に投与することを含む。さらに、個体におけるＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は症状の発症又は進行を治療するか軽減する方法は、本明細書のオリゴヌクレオチドの１つ以上を使用することを含む。さらに、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する個体において１つ以上の治療効果を達成する方法は、本明細書のオリゴヌクレオチドの１つ以上を提供することを含む。いくつかの実施形態では、治療有効量の本明細書のオリゴヌクレオチドのいずれか１つ以上を投与することによって個体を治療することができる。いくつかの実施形態では、治療は、ＡＰＯＣ３発現を低減することを含む。いくつかの実施形態では、個体は治療的に処置される。いくつかの実施形態では、個体は予防的に処置される。これらすべての実施形態では、オリゴヌクレオチドは表３から選択される。

いくつかの実施形態では、１つ以上のオリゴヌクレオチド、又はそれを含む医薬組成物を、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する個体に投与し、個体におけるＡＰＯＣ３ 発現を減少させ、それによって個体を治療する。いくつかの実施形態では、個体におけるＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量又はレベルが減少する。他の実施形態では、個体におけるＡＰＯＣ３タンパク質の量又はレベルが減少する。さらに他の実施形態では、個体におけるＡＰＯＣ３活性の量又はレベルが減少する。さらに他の実施形態では、個体、特に肝臓における肝臓のＴＧ（例えば、肝臓中の１つ以上のＴＧ（複数可）又は総ＴＧ）の量又はレベルが減少する。さらに他の実施形態では、肝臓の炎症の量又はレベルを軽減することができる。さらに他の実施形態では、肝線維症のレベルが低減される。さらに他の実施形態では、血漿アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、血漿アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、サイトケラチン１８（ＣＫ－１８）、又はＮ末端ＩＩＩ型コラーゲンプロペプチド（Ｐｒｏ－Ｃ３）の量又はレベルが減少する。上記開示された実施形態のいずれにおいても、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドは、配列番号１４３、１４９、１５１、１９３、１９５、２０５、２０７、及び２１１のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、配列番号１４４、１５０、１５２、１９４、１９６、２０６、２０８、及び２１２のいずれか１つのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖とを含む。

いくつかの実施形態では、個体におけるＡＰＯＣ３発現は、１つ以上のオリゴヌクレオチド又はその医薬組成物を投与する前のＡＰＯＣ３発現と比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて減少する。他の実施形態では、個体におけるＡＰＯＣ３発現は、１つ以上のオリゴヌクレオチドもしくは医薬組成物を受けていないか、又は対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物もしくは治療を受けた個体（例えば、参照又は対照の個体）におけるＡＰＯＣ３発現と比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて減少する。

特定の実施形態では、個体におけるＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量又はレベルは、１つ以上のオリゴヌクレオチド又はその医薬組成物を投与する前のＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量又はレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて減少する。いくつかの実施形態では、個体におけるＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量又はレベルは、１つ以上のオリゴヌクレオチドもしくは医薬組成物を受けていないか、又は対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物、もしくは治療を受けた個体（例えば、参照又は対照の個体）におけるＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量又はレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて減少する。

特定の実施形態では、個体におけるＡＰＯＣ３タンパク質の量又はレベルは、１つ以上のオリゴヌクレオチド又はその医薬組成物を投与する前のＡＰＯＣ３タンパク質の量又はレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて減少する。他の実施形態では、個体におけるＡＰＯＣ３タンパク質の量又はレベルは、１つ以上のオリゴヌクレオチドもしくは医薬組成物を受けていないか、又は対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物、もしくは治療を受けた個体（例えば、参照又は対照の個体）におけるＡＰＯＣ３タンパク質の量又はレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて減少する。

特定の実施形態では、個体におけるＡＰＯＣ３活性の量又はレベルは、１つ以上のオリゴヌクレオチド又はその医薬組成物を投与する前のＡＰＯＣ３活性の量又はレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて減少する。いくつかの実施形態では、個体におけるＡＰＯＣ３活性の量又はレベルは、１つ以上のオリゴヌクレオチドもしくは医薬組成物を受けていないか、又は対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物、もしくは治療を受けた個体（例えば、参照又は対照の個体）におけるＡＰＯＣ３活性の量又はレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて減少する。

特定の実施形態では、個体におけるＴＧ、特に肝臓のＴＧの量又はレベルは、１つ以上のオリゴヌクレオチド又はその医薬組成物を投与する前のＴＧの量又はレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて減少し得る。いくつかの実施形態では、個体におけるＴＧの量又はレベルは、１つ以上のオリゴヌクレオチドもしくは医薬組成物を受けていないか、又は対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物、もしくは治療を受けた個体（例えば、参照又は対照の個体）におけるＴＧの量又はレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて減少する。

ここで、ＡＰＯＣ３発現、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ、ＡＰＯＣ３タンパク質、ＡＰＯＣ３活性、肝臓のＴＧ、又はそれらの任意の組み合わせの量又はレベルが、個体から取得又は分離された、細胞（例えば、肝細胞）、細胞の集団又は群（例えば、オルガノイド）、組織（例えば、肝臓組織）、試料（例えば、肝生検試料）、器官（例えば、肝臓）、血液又はその画分（例えば、血漿）、又は任意のその他の生物学的材料において減少する。いくつかの実施形態では、ＡＰＯＣ３発現、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ、ＡＰＯＣ３タンパク質、ＡＰＯＣ３活性、ＴＧ、又はそれらの任意の組み合わせの量又はレベルが、個体から採取又は単離された、１種以上の細胞（例えば、肝細胞及び１種以上の他の種類の細胞）、１種以上の細胞の群、１種以上の組織（例えば、肝臓組織及び１種以上の他の種類の組織）、１種以上の試料（例えば、肝生検試料及び１種以上の他の種類の生検試料）、１種以上の器官（例えば、肝臓及び１種以上の他の器官）、１種以上の血液画分（例えば、血漿及び１種以上の他の血液画分）において減少する。

ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は症状の例としては、ＡＣＤ、ＡＨ、ＡＬＤ、ＡＳＣＶＤ、ＨＣＣ、ＣＨＤ、ＣＣＡ、ＰＳＣ、ＭｅｔＳ、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、高非ＨＤＬコレステロール、高脂血症、高トリグリセリド血症、糖尿病、肥満、脂肪肝（脂肪変性症）、肝臓の炎症、インスリン抵抗性、肝線維症、肝硬変、又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書のオリゴヌクレオチドの高い特異性のために、本明細書のオリゴヌクレオチドは、細胞、組織、又は器官（例えば、肝臓）の標的遺伝子のｍＲＮＡを特異的に標的とする。疾患の予防において、標的遺伝子は、疾患の開始又は維持に必要とされるもの、又は疾患に罹患するリスクが高いことに関連すると同定されたものである。疾患の治療においては、１つ以上の本明細書のオリゴヌクレオチドが、疾患を呈しているか、疾患の媒介に関与している細胞、組織、又は器官と接触させられる。例えば、ＡＰＯＣ３発現に関連する障害又は状態に関連する野生型（すなわち、天然型）又は変異型遺伝子の全部又は一部と実質的に同一のオリゴヌクレオチドを、肝細胞やその他の肝臓細胞などの目的の細胞又は組織型と接触させるか、又はそれらに導入する。

いくつかの実施形態では、標的遺伝子は、ヒトなどの任意の哺乳動物由来である。本明細書の方法に従って、任意の遺伝子をサイレンシングすることができる。本明細書の方法は、典型的には、治療有効量、すなわち、望ましい治療結果を生じることができる量の１つ以上の本明細書のオリゴヌクレオチドを個体に投与することを含む。治療上許容される量とは、疾患又は障害又は症状を治療的に処置する量である。任意の１人の個体に対する適切な投与量は、個体のサイズ、体表面積、年齢、投与される組成物、組成物中の活性成分（複数可）、投与の時間及び経路、全体的な健康状態、及び同時に投与されている他の治療剤を含む特定の因子に応じて決められる。

本方法では、個体は、本明細書中のオリゴヌクレオチド又は組成物のいずれか１つを、経腸的に（例えば、経口、胃栄養チューブによって、十二指腸栄養チューブによって、胃瘻造設を介して、もしくは直腸に）、非経口的に（例えば、皮下注射、静脈内注射もしくは注入、動脈内注射もしくは注入、骨内注射、筋肉内注射、脳内注射、脳室内注射、もしくは髄腔内注射）、局所（例えば、経皮、吸入、点眼薬、もしくは粘膜を介して）、又は標的器官（例えば、個体の肝臓）への直接注射によって投与される。典型的には、オリゴヌクレオチド又は組成物は、静脈内又は皮下に投与される。

非限定的の一組の例として、本明細書のオリゴヌクレオチド又は組成物は、典型的には、四半期ごと（３か月ごとに１回）、隔月ごと（２か月ごとに１回）、毎月又は毎週投与される。例えば、オリゴヌクレオチド又は組成物は、毎週、又は２週間もしくは３週間の間隔で投与される。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド又は組成物は毎日投与される。いくつかの実施形態では、個体にオリゴヌクレオチド又は組成物の１回以上の負荷用量が投与され、その後オリゴヌクレオチド又は組成物の１回以上の維持用量が投与される。

いくつかの実施形態では、個体は、ヒト、ＮＨＰ、又は他の哺乳動物個体である。他の実施形態では、個体は、イヌ又はネコなどの飼育動物、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、又はニワトリなどの家畜、及びマウス、ラット、モルモット、又はハムスターなどの動物である。

ＩＩＩ． 医療用途：本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、ＡＰＯＣ３発現を低下させることで利益を得られる個体（例えば、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態を有するヒト）を治療するために使用でき、またそのような使用に適応させることができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する個体を治療に使用するために、又はそのような使用に適応するために提供される。また、オリゴヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態を治療するための医薬又は医薬組成物の製造に使用するために、又はそのような使用に適応可能に提供される。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを標的とし、ＡＰＯＣ３発現を減少さる（例えば、ＲＮＡｉ経路を介して）ために提供されるか、又はそのような使用に適応可能である。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを標的とし、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ、ＡＰＯＣ３タンパク質、及び／又はＡＰＯＣ３活性の量又はレベルを低下させるために用いられるか、又は用いられるように適応可能である。

いくつかの実施形態では、本方法は、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ、ＡＰＯＣ３タンパク質、又はそれらの組み合わせなどであるが、これらに限定されない、ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態のマーカー（例えば、バイオマーカー）を有する個体、又はそれらの素因を持つ個体に基づいて、治療のために個体を選択することを含む。同様に、以下に詳述するように、本方法は、例えば、ＡＰＯＣ３発現マーカー（例えば、ＡＰＯＣ３タンパク質）のベースライン値を測定又は取得し、次いで、得られた値を１つ以上の他のベースライン値又は個体に１つ以上のオリゴヌクレオチドを投与した後に得られた値と比較して、治療の有効性を評価するなどの追加のステップも含む。

以下の非限定的な実施例は例示を目的として含まれており、限定するものではない。

オリゴヌクレオチドの合成

実施例１：ｄｓ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの調製

オリゴヌクレオチドの合成及び精製：実施例のｄｓ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書の方法を使用して化学的に合成される。一般に、ｄｓＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、１９～２３ｍｅｒのｓｉＲＮＡについて記載された固相オリゴヌクレオチド合成法を用いて合成される（例えば、Ｓｃａｒｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：５４３３－４１及びＵｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：７８４５－４５を参照されたい；米国特許第５，８０４，６８３号；同第５，８３１，０７１号；同第５，９９８，２０３号；同第６，００８，４００号；同第６，１１１，０８６号；同第６，１１７，６５７号；同第６，３５３，０９８号；同第６，３６２，３２３号；同第６，４３７，１１７号；及び同第６，４６９，１５８号も参照されたい）。

標準方法（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従って、個々のＲＮＡ鎖を合成してＨＰＬＣ精製した。例えば、固相ホスホラミダイト化学反応を使用してＲＮＡオリゴヌクレオチドを合成し、脱保護し、標準技法（Ｄａｍｈａ ＆ Ｏｌｇｉｖｉｅ（１９９３）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０：８１－１１４；Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：２６７７－８４）を使用してＮＡＰ－５カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）上で脱塩した。１５分間の段階的線形勾配を使用したＡｍｅｒｓｈａｍ Ｓｏｕｒｃｅ １５Ｑカラム（１．０ｃｍ×２５ｃｍ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）上でイオン交換高速液体クロマトグラフィ（ＩＥ－ＨＰＬＣ）を使用して、オリゴマーを精製した。勾配は、９０：１０緩衝液Ａ：Ｂから５２：４８緩衝液Ａ：Ｂへと変動し、緩衝液Ａは、ｐＨ８．５の１００ｍＭのＴｒｉｓであり、緩衝液Ｂは、ｐＨ８．５の１００ｍＭのＴｒｉｓ、１ＭのＮａＣｌである。試料を２６０ｎｍでモニターし、全長オリゴヌクレオチド種に対応するピークを収集し、プールし、ＮＡＰ－５カラム上で脱塩し、凍結乾燥した。

Ｂｅｃｋｍａｎ ＰＡＣＥ ５０００（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．）上のキャピラリ電気泳動（ＣＥ）によって、それぞれのオリゴマーの純度を判定した。ＣＥキャピラリは、１００μｍ内径を有し、ｓｓＤＮＡ １００Ｒ Ｇｅｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ）を含む。典型的には、約０．６ｎｍｏｌｅのオリゴヌクレオチドが、キャピラリに注入され、４４４Ｖ／ｃｍの電場で流され、２６０ｎｍにおけるＵＶ吸光度によって検出された。変性Ｔｒｉｓ－ホウ酸塩－７Ｍ－尿素ランニング緩衝液をＢｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒから購入した。以下で説明される実験で使用するためにＣＥによって評価されるときに少なくとも９０％純粋であるオリゴリボヌクレオチドが得られた。製造者の推奨プロトコールに従って、Ｖｏｙａｇｅｒ ＤＥ（商標） Ｂｉｏｓｐｅｃｔｏｍｅｔｒｙ Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上でのマトリクス支援レーザ脱離イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析法によって、化合物の同一性が検証された。しばしば想定される分子量の０．２％以内で、すべてのオリゴマーの相対分子量が得られた。

二重鎖の調製：１００ｍＭの酢酸カリウム、３０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）を有する二重鎖緩衝液中で（例えば、１００μＭ濃度で）、ｓｓＲＮＡオリゴマーを再懸濁させた。相補的なセンス鎖とアンチセンス鎖を等モル量で混合して、例えば、５０μＭの二重鎖の最終溶液を得る。試料をＲＮＡ緩衝液（ＩＤＴ）中で５分間１００℃まで加熱し、使用前に室温まで冷却する。ｄｓＲＮＡオリゴヌクレオチドは－２０℃で保存される。ｓｓＲＮＡオリゴマーは、凍結乾燥で、又はヌクレアーゼを含まない水中で、－８０℃で保存される。

インビトロ機能

実施例２：インビトロでのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによるＡＰＣＯ３発現の阻害－ＤｓｉＲＮＡベースの化合物

ＡＰＯＣ３標的配列の同定：ＡＰＯＣ３発現のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害剤を同定するために、コンピュータベースのアルゴリズムを使用して、ＲＮＡｉ経路によるＡＰＯＣ３発現阻害をアッセイするのに適したＡＰＯＣ３標的配列を計算的に生成する。このアルゴリズムは、ヒトＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの適切なＡＰＯＣ３標的配列（例えば、配列番号１）に相補的なＲＮＡｉオリゴヌクレオチドアンチセンス（ガイド）鎖配列を提供する。アルゴリズムによって識別されたアンチセンス鎖配列のいくつかは、ＮＨＰのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ（例えば、サル、配列番号５）の対応するＡＰＯＣ３標的配列と相補的でもある。これにより、３８４個のｄｓ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（ＤｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドとしてフォーマット）が生成され、それぞれがアルゴリズムによって同定されたＡＰＯＣ３標的配列に相補性の領域を持つ固有のアンチセンス鎖を有する。

インビトロ細胞ベースのアッセイ：３８４個のＤｓｉＲＮＡのそれぞれがＡＰＯＣ３発現を阻害する能力は、インビトロ細胞ベースのアッセイによって判定される。さらに、本明細書で示されているように、ＤｓｉＲＮＡのパッセンジャー鎖及びガイド鎖のヌクレオチド配列は、修飾ヌクレオチド及びホスホロチオエート結合の明確なパターンを有する。簡潔に述べると、ＡＰＯＣ３を安定的に発現するＨｅｐＧ２細胞に、マルチウェル細胞培養プレートの別々のウェルでそれぞれのＤｓｉＲＮＡ（０．５ｎＭ）をトランスフェクトする。細胞はトランスフェクション後２４時間維持され、次いで、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ベースのｑＰＣＲアッセイを使用して、トランスフェクトされた細胞から残留するＡＰＯＣ３のｍＲＮＡのレベルが決定される。ＨＥＸプローブによって測定されるｍＲＮＡレベルを決定するために、３’アッセイと５’アッセイの２つのｑＰＣＲアッセイが使用される。

３８４個のＤｓｉＲＮＡを使用するＨｅｐＧ２細胞ベースのアッセイの結果を表１に示す。ここで、３８４個のＤｓｉＲＮＡは、ヒト及びＮＨＰのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡに相補的なガイド鎖を有する（「二重共通」）。陰性対照と比較して細胞内に残るＡＰＯＣ３のｍＲＮＡが３０％以下となる二重共通ＤｓｉＲＮＡのトランスフェクションは、候補となるＡＰＯＣ３発現阻害剤（本明細書では「ヒット」と呼ぶ）とみなされる。

これらの結果は、ヒトＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを標的とするように設計されたＤｓｉＲＮＡが細胞内のＡＰＯＣ３発現を阻害すること（ＤｓｉＲＮＡをトランスフェクトした細胞内のＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量が低減したことで判断）、及びＤｓｉＲＮＡヒットを含むヌクレオチド配列がＡＰＯＣ３発現を阻害するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの生成に有用であることを示している。さらに、これらの結果は、複数のＡＰＯＣ３標的配列が、ＲＮＡｉを介したＡＰＯＣ３発現の阻害に適していることを示している。

実施例３： インビトロでのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによるＡＰＯＣ３発現の阻害－ＧａｌＸＣベースの化合物

実施例２に記載したＨｅｐＧ２細胞ベースのアッセイでスクリーニングされた３８４個のＤｓｉＲＮＡのうち、８１個のＤｓｉＲＮＡヒットのヌクレオチド配列がＧａｌＸＣベースの化合物としてインビトロでの評価のために選択される。簡潔に述べると、選択されたＤｓｉＲＮＡのヌクレオチド配列を使用して、３６ｍｅｒのセンス（パッセンジャー）鎖と２２ｍｅｒのアンチセンス（ガイド）鎖を持つ、ニックの入ったテトラループＧａｌＮＡｃコンジュゲート構造（本明細書では「ＧａｌＸＣ ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチド」と呼ぶ）を含む５３個の対応するｄｓ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを生成する。さらに、ＧａｌＸＣ ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖のヌクレオチド配列は、修飾ヌクレオチド及びホスホロチオエート結合の明確なパターンを有する（ＧａｌＸＣ ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドの一般的な構造及び化学修飾パターンの概略図については、例えば、図１Ａ～１Ｃを参照されたい）。テトラループの３つのアデノシンヌクレオチドはそれぞれＧａｌＮＡｃ部分（ＣＡＳ番号：１４１３１－６０－３）にコンジュゲートされている。さらに、ＧａｌＸＣ ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖のヌクレオチド配列は、修飾ヌクレオチド及びホスホロチオエート結合の３つの異なるパターン（例えば、図１Ａ～１Ｃを参照されたい）のうちの１つを有するが、例示的な修飾パターンは表３に示されている。

インビボ機能
実施例４：インビトロでのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによるＡＰＯＣ３発現の阻害

マウス研究：表２（未修飾）及び表３（修飾された）に列挙されているさまざまなＧａｌＸＣ ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドを、ハイドロダイナミックインジェクション（ＨＤＩ）マウスモデルで評価する。追加のＨＤＩ研究は表５～１３に列挙されている。これらのＨＤＩ研究では、マウスは肝細胞でヒトＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを一過性に発現するように設計される。ＧａｌＸＣ ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチド対照がベンチマーク対照として使用される。簡潔に述べると、６～８週齢のメスのＣＤ－１マウスを、１ｍｇ／ｋｇの用量でＧａｌＸＣ ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドを含むＳＱで処置する。３日（７２時間）後、ユビキタスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列の制御下で完全なヒト遺伝子をコードするＤＮＡプラスミドをマウスに流体力学的に注入する。プラスミド導入の１日後に肝臓試料を採取する。これらのマウスから採取した全ＲＮＡを、同量のＰＢＳのみで処置したマウスと比較し、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡについて個別にｑＲＴ－ＰＣＲ分析する。値は、プラスミドに含まれるＮｅｏＲ遺伝子を使用して、トランスフェクション効率について正規化される。

表４～１２に示すように、試験したＧａｌＸＣ ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドの多くは、ＰＢＳで処置したマウスと比較してオリゴヌクレオチドで処理したマウスの肝臓試料中のＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量が減少したことから判断されるように、ＡＰＯＣ３の発現を阻害した。ベンチマークＧａｌＸＣ ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチド対照で処置したマウスの肝臓試料中の残存ＡＰＯＣ３ ｍＲＮＡの平均％を、ＰＢＳで処置したマウスと比較する。表４は、試験した１２個のＧａｌＸＣ ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドのいくつかが、対照として使用した参照ＧａｌＸＣ ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドよりも大幅にＡＰＯＣ３発現を阻害することを示している。これらのオリゴヌクレオチドの配列は、修飾パターン及び配列番号とともに、図１に関連して表２及び３に開示されている。

表５～１２は、同じ参照オリゴヌクレオチドを使用するＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドによるＨＤＩマウス研究の追加セットを示している。

これらの結果に基づいて、ＮＨＰにおけるＡＰＯＣ３発現を阻害する能力を評価するために８個のＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドが選択された。そのうち６つは二重共通として選択され、２つはヒトにのみ固有である。ＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドは、図１、特に図１Ｃに示すようなパターンの化学的に修飾されたヌクレオチドを有する。

ＮＨＰ研究：上記のマウス研究から選択された８個のＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドを、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）で単回投与（６ｍｇ／ｋｇ）、８４日間の研究で評価した。ここでは、ＮＨＰは、平均体重（約５．４ｋｇ）が対照群と実験群間で同等になるようにグループ分けする。それぞれのコホートには５頭の個体（オス２頭、メス３頭）が含まれる。ＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドは、研究０日目にＳＱ投与される。血液試料は、投与前の２つの時点（すなわち、－２１日目と０日目）、次いで投与後毎週採取され、肝酵素パネルと脂質プロファイルの検査が行われる。超音波ガイド下コア針肝生検は、研究日－２１、２８、５６、８３日に採取される。それぞれの時点で、肝生検試料に由来する全ＲＮＡを個別にｑＲＴ－ＰＣＲ分析し、同等量のＰＢＳで処理したサルと比較して、オリゴヌクレオチドで処理したサルのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを測定した。データを正規化するために、２つの参照遺伝子、ＰＰＩＢ及び１８Ｓ ｒＲＮＡの幾何平均に対して測定を行う。表１３に示すように、ＮＨＰをＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドで処理すると、肝臓でのＡＰＯＣ３発現が阻害される。これは、ＰＢＳで処置したＮＨＰと比較して、オリゴヌクレオチドで処置したＮＨＰの肝臓試料中のＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量が減少したことで判定される。評価されたすべての時点で、ＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドは、ベンチマークＰＢＳ及び時間を一致させた対照よりも大幅にＡＰＯＣ３発現を阻害する。同じＮＨＰ研究から、投与前及び毎週の血液試料から調製した血清中のＡＰＯＣ３タンパク質をＥＬＩＳＡで測定することによって、ＡＰＯＣ３発現の阻害も判定される。まとめると、ＮＨＰをＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドで処置すると、肝臓中のＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量が減少し、同時に血清中のＡＰＯＣ３タンパク質の量も減少することが実証される。

上記に加えて、２８日目の肝生検のＲＮＡ－ｓｅｑでは、ＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３－４７がＡＰＯＣ３のｍＲＮＡのノックダウンに最も強力な試験品（２３．４％残存）であり、次いでＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３－４６（２７．３％残存）、ＧａｌＸＣ－１５（Ｂ、３４．４％残存）、ＧａｌＸＣ－４１（３８．４％残存）、ＧａｌＸＣ－１８（４３．０％残存）であることが示されている。表１４に示すように、ＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３－１５、ＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３－１８、ＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３－４６、及びＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３－４７は肝臓トランスクリプトームの全体的な変化がわずかしか見られないが、ＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３－４１ではより多くの遺伝子の発現に変化が見られる。このＲＮＡ－ｓｅｑ研究では、ＡＰＯＣ３－４１を除き、ＧａｌＸＣガイドによるｍＲＮＡへのハイブリダイゼーションに基づくオフターゲット効果は確認されなかった。

まとめると、これらの結果は、ヒトＡＰＯＣ３のｍＲＮＡを標的とするように設計されたＧａｌＸＣ－ＡＰＯＣ３オリゴヌクレオチドが、（処置された動物におけるＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ及びＡＰＯＣ３タンパク質の量の減少によって決定されるとき）インビボでＡＰＯＣ３発現を阻害することを示している。

配列
次の核酸配列及び／又はアミノ酸の配列は、本開示で言及されており、参照のために以下に提供される。

配列番号１－野生型ヒトＡＰＯＣ３（５３５ｂｐ；ＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＭ＿００００４０．３
ｃｔｇｃｔｃａｇｔｔｃａｔｃｃｃｔａｇａｇｇｃａｇｃｔｇｃｔｃｃａｇｇａａｃａｇａｇｇｔｇｃｃａｔｇｃａｇｃｃｃｃｇｇｇｔａｃｔｃｃｔｔｇｔｔｇｔｔｇｃｃｃｔｃｃｔｇｇｃｇｃｔｃｃｔｇｇｃｃｔｃｔｇｃｃｃｇａｇｃｔｔｃａｇａｇｇｃｃｇａｇｇａｔｇｃｃｔｃｃｃｔｔｃｔｃａｇｃｔｔｃａｔｇｃａｇｇｇｔｔａｃａｔｇａａｇｃａｃｇｃｃａｃｃａａｇａｃｃｇｃｃａａｇｇａｔｇｃａｃｔｇａｇｃａｇｃｇｔｇｃａｇｇａｇｔｃｃｃａｇｇｔｇｇｃｃｃａｇｃａｇｇｃｃａｇｇｇｇｃｔｇｇｇｔｇａｃｃｇａｔｇｇｃｔｔｃａｇｔｔｃｃｃｔｇａａａｇａｃｔａｃｔｇｇａｇｃａｃｃｇｔｔａａｇｇａｃａａｇｔｔｃｔｃｔｇａｇｔｔｃｔｇｇｇａｔｔｔｇｇａｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｇａｃｃａａｃｔｔｃａｇｃｃｇｔｇｇｃｔｇｃｃｔｇａｇａｃｃｔｃａａｔａｃｃｃｃａａｇｔｃｃａｃｃｔｇｃｃｔａｔｃｃａｔｃｃｔｇｃｇａｇｃｔｃｃｔｔｇｇｇｔｃｃｔｇｃａａｔｃｔｃｃａｇｇｇｃｔｇｃｃｃｃｔｇｔａｇｇｔｔｇｃｔｔａａａａｇｇｇａｃａｇｔａｔｔｃｔｃａｇｔｇｃｔｃｔｃｃｔａｃｃｃｃａｃｃｔｃａｔｇｃｃｔｇｇｃｃｃｃｃｃｔｃｃａｇｇｃａｔｇｃｔｇｇｃｃｔｃｃｃａａｔａａａｇｃｔｇｇａｃａａｇａａｇｃｔｇｃｔａｔｇａ

配列番号２－野生型ヒトＡＰＯＣ３（９９ａａ；ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０７９５０１．２）
ＭＱＰＲＶＬＬＶＶＡＬＬＡＬＬＡＳＡＲＡＳＥＡＥＤＡＳＬＬＳＦＭＱＧＹＭＫＨＡＴＫＴＡＫＤＡＬＳＳＶＱＥＳＱＶＡＱＱＡＲＧＷＶＴＤＧＦＳＳＬＫＤＹＷＳＴＶＫＤＫＦＳＥＦＷＤＬＤＰＥＶＲＰＴＳＡＶＡＡ

配列番号３－マウスＡＰＯＣ３（６３１ｂｐ；ＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＭ＿００１２８９７５５．１）
ｇｃｃｔｇｃｔｃａｇｔｔｔｔａｔｃｃｃｔａｇａａｇｃａｇｃｔａｇｃｔａｃｔｃｃａｇｇｔａａｔｇｃｃｃｃｔｇｇｇｇａｇｇａｇａｇｇａａｇｇａａｇｇｇａａｇａａａｃａａａｇａｇｃｔｇｇａｇｇｇａｇａａｇｃｔｃｔｃａｃｃａｃｃｃａｇｃｃａｔｃｔａｇｃｃｃａｃａｇａａｇｇｃｔｔｇｇｇａｃｔｃａｔｇｇｔａｃｇｔａｇｇｔｇｃｃａｔｇｃａｇｃｃｃｃｇｇａｃｇｃｔｃｃｔｃａｃｔｇｔｇｇｃｃｃｔｃｔｔｇｇｃｔｃｔｃｃｔｇｇｃａｔｃｔｇｃｃｃｇａｇｃｔｇａａｇａｇｇｔａｇａｇｇｇａｔｃｃｔｔｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｔｃｔｇｔａｃａｇｇｇｃｔａｃａｔｇｇａａｃａａｇｃｃｔｃｃａａｇａｃｇｇｔｃｃａｇｇａｔｇｃｇｃｔａａｇｔａｇｃｇｔｇｃａｇｇａｇｔｃｃｇａｔａｔａｇｃｔｇｔｇｇｔｇｇｃｃａｇｇｇｇｃｔｇｇａｔｇｇａｃａａｔｃａｃｔｔｃａｇａｔｃｃｃｔｇａａａｇｇｃｔａｃｔｇｇａｇｃａａｇｔｔｔａｃｔｇａｃａａｇｔｔｃａｃｃｇｇｃｔｔｃｔｇｇｇａｔｔｃｔａａｃｃｃｔｇａｇｇａｃｃａａｃｃａａｃｔｃｃａｇｃｔａｔｔｇａｇｔｃｇｔｇａｇａｃｔｔｃｔｇｔｇｔｔｇｃａｇａｔｇｔｇｃｃｔｇｔｔｃｃｔｃｃａｔｃｃｔｇｃｔｇｃｃｃｃｃｃｔｃｃａｇｇｃｃｔｇｃｃａｇｇｔｇｇｃｃｃｃｔｇａａｇｇｔｔｇｃｔｔｔａａｇｇｇｇａａａｇｔａｔｇｔｔｃｔｃａｔｇｔｃｔｔｃａｃｃｃｃｔｃｃｃｔａｇａｔｃｔｃａｃｃｔａａａｃａｔｇｃｔｇｔｃｃｃｔａａｔａａａｇｃｔｇｇａｔａａｇａａｇｃｔｇｃｔｇｔｔａ

配列番号４－マウスＡＰＯＣ３（９９ａａ；ＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＰ＿００１２７６６８４．１）
ＭＱＰＲＴＬＬＴＶＡＬＬＡＬＬＡＳＡＲＡＥＥＶＥＧＳＬＬＬＧＳＶＱＧＹＭＥＱＡＳＫＴＶＱＤＡＬＳＳＶＱＥＳＤＩＡＶＶＡＲＧＷＭＤＮＨＦＲＳＬＫＧＹＷＳＫＦＴＤＫＦＴＧＦＷＤＳＮＰＥＤＱＰＴＰＡＩＥＳ

配列番号５－ラットＡＰＯＣ３（５７９ｂｐ；ＮＣＢＩ参照配列番号 ＮＭ＿００１２７１０５３）
ａｔｇｃｃｃｃｔｇｇｇｇａｇｇａｇａｇｇａａｇｇｇａｇｇｇａｇｇａｇａｃａｇａｇａｇａａｇａｃｇｃｔｃｔｇｇｃｃａｃｔｃａｇｃｃａｇｃｔａｇｃｃｔａｃａｇａａｔｇｃｔｔｇｇａａｔｔｃａｔｇｇｃｃｔｃｃａｃｃｃｔｔｇｇｇｔｔｃｃｔｇｇｔｇｃａｃａｇｇｔｇｃｃａｔｇｃａｇｃｃｃｃｇａａｔｇｃｔｃｃｔｃａｔｃｇｔｇｇｃｃｃｔｃｇｔｇｇｃｔｃｔｃｃｔｇｇｃｃｔｃｔｇｃｃｃｇａｇｃｔｇａｔｇａｇｇｇａｇａｇｇｇａｔｃｃｔｔｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｔｃｔａｔｇｃａｇｇｇｃｔａｃａｔｇｇａａｃａａｇｃｃｔｃｃａａｇａｃｇｇｔｃｃａｇｇａｔｇｃａｃｔａａｇｃａｇｃａｔｇｃａｇｇａｇｔｃｔｇａｔａｔａｇｃｔｇｔｇｇｔｇｇｃｃａｇｇｇｇｃｔｇｇａｔｇｇａｃａａｔｃｇｃｔｔｃａａａｔｃｃｃｔｇａａａｇｇｃｔａｃｔｇｇａｇｃａａｇｔｔｃａｃｔｇａｔａａｇｔｔｃａｃｔｇｇｃｃｔｃｔｇｇｇａｇｔｃｔｇｇｃｃｃｔｇａｇｇａｃｃａａｃｔａａｃａａｃａｃｃａａｃｔｃｔｔｇａｇｃｃｇｔｇａｇａｃｃｔｃｃａｔｇｔｔｃｃａｇａｔｇｔｇｔｃｔｇｇｃｃａｔｃｔａｔｃｃｔｇｃｔｇｃｃｔｃｃｇａａｇｇｔｔｇｃｔｃｔａａｇｇｇｇａａａｇｔａｔａｔｔｃｔｃａｔｇｃｃｔｔｔａｔｃｃｃｔｃｃｃｃａｇａｃｃｔｃａｃｃｔａａａｃａｔｇｃｔｇｔｃｃｃｔａａｔａａａｇｃｔｇｇａｃａｃｇａａｇｃｔｇｃｃａｔｇ

配列番号６－ラットＡＰＯＣ３（１００ａａ；ＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＰ＿００１２５７９８２．１）
ＭＱＰＲＭＬＬＩＶＡＬＶＡＬＬＡＳＡＲＡＤＥＧＥＧＳＬＬＬＧＳＭＱＧＹＭＥＱＡＳＫＴＶＱＤＡＬＳＳＭＱＥＳＤＩＡＶＶＡＲＧＷＭＤＮＲＦＫＳＬＫＧＹＷＳＫＦＴＤＫＦＴＧＬＷＥＳＧＰＥＤＱＬＴＴＰＴＬＥＰ

配列番号７－霊長類ＡＰＯＣ３（５６７ｂｐ；ＮＣＢＩ参照配列番号 ＸＭ＿００５５７９７３０．１）
ａａｔａｔａａａａｃａｇｇｔｃａｇａａｃｃｃｔｃｃｔｇｃｃｔｇｃｃｔｇｃｔｃｔｇｔｔｃａｔｃｃｃｔａｇａｇｇｃａｇｃｔｇｃｔｃｃａｇｇａａｃａｇａｇｇｃｇｃｃａｔｇｃａｇｃｃｃｃｇｇｇｔａｃｔｃｃｔｔｇｔｔｇｃｔｇｃｃｃｔｇｃｔｇｔｃａｃｔｃｃｔｇｇｃｃｔｃｔｇｃｃａｇａｇｃｔｔｃａｇａｇｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｃｔｃｃｃｔｔｃｔｔｇｇｃｔｔｃａｔｇｃａｇｇｇｃｔａｃａｔｇｃａｇｃａｔｇｃｃａｃｃａａｇａｃｃｇｃｃａａｇｇａｔｇｃａｃｔｇａｃｃａｇｃｇｔｃｃａｇｇａｇｔｃｃｃａｇｇｔｇｇｃｃｃａｇｃａｇｇｃｃａｇａｇｇｃｔｇｇｇｔｇａｃｃｇａｔｇｇｃｔｔｃａｇｔｔｃｃｃｔｇａａａｇａｃｔａｃｔｇｇａｇｃａｃｃｇｔｔａａｇｇａｃａａｇｔｔａｔｃｔｇｇｇｔｔｃｔｇｇｇａｔｔｔｇａａｃｃｃｔｇａｇｇｃｃａａａｃｃｃａｃｔｃｔｇｇｃｔｇａｇｇｃｔｇｃｃｔｇａｇａｃｃｔｃａａｔａｃｃｃｃａａｇｔｃｃａｃｃｔｇｃｃｔｇｔｃｃａｔｃｃｔｇｃｃａｇｃｔｃｃｔｔｇｇｇｔｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｃｃａｇｇｇｃｔｇｃｃｃｃｔｇｔａｇｇｔｔｇｃｔｔａａａａｇｇｇａｃａｇｔａｔｔｃｔｃａｇｔｇｃｃｃｔｃｃｔａｃｃｇｃａｃｃｔｃａｔｇｃｃｔｇｇｃｃｃｃｃｃｔｃｃａｇｇｃａｇｇｇｔｇｔｃｃｔｃｃｃａａｔａａａｇｃｔｇｇａｃａａｇａａｇｃｔｇｃｔａｔｇａ

配列番号８－霊長類ＡＰＯＣ３（９９ａａ；ＮＣＢＩ参照配列番号 ＸＰ＿００５５７９７８７．１）
ＭＱＰＲＶＬＬＶＡＡＬＬＳＬＬＡＳＡＲＡＳＥＡＥＤＴＳＬＬＧＦＭＱＧＹＭＱＨＡＴＫＴＡＫＤＡＬＴＳＶＱＥＳＱＶＡＱＱＡＲＧＷＶＴＤＧＦＳＳＬＫＤＹＷＳＴＶＫＤＫＬＳＧＦＷＤＬＮＰＥＡＫＰＴＬＡＥＡＡ

配列番号３３３－人工配列
ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ

配列番号３３４－標的配列１
ＴＴＣＡＧＴＴＣＣＣＴＧＡＡＡＧＡＣＴＡ

配列番号３３５－標的配列２
ＴＧＧＡＧＣＡＣＣＧＴＴＡＡＧＧＡＣＡＡ

配列番号３３６－標的配列３
ＡＣＣＧＴＴＡＡＧＧＡＣＡＡＧＴＴＣＴ

配列番号３３７－標的配列４
ＧＣＴＧＣＣＣＣＴＧＴＡＧＧＴＴＧＣＴ

配列番号３３８－標的配列５
ＧＴＡＧＧＴＴＧＣＴＴＡＡＡＡＧＧＧＡ

配列番号３３９－標的配列６
ＣＴＴＡＡＡＡＧＧＧＡＣＡＧＴＡＴＴＣ

配列番号３４０－標的配列７
ＡＡＡＡＧＧＧＡＣＡＧＴＡＴＴＣＴＣＡ

配列番号３４１－標的配列８
ＧＡＣＡＧＴＡＴＴＣＴＣＡＧＴＧＣＴＣ
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２〕前記センス鎖が、１５～５０個のヌクレオチドの長さである、前記〔１〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３〕前記センス鎖が、１８～３６個のヌクレオチドの長さである、前記〔１〕又は〔２〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４〕前記アンチセンス鎖が、１５～３０個のヌクレオチドの長さである、前記〔１〕～〔３〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５〕前記アンチセンス鎖が２２個のヌクレオチドの長さであり、前記アンチセンス鎖と前記センス鎖が、少なくとも１９個のヌクレオチドの長さ、任意選択で少なくとも２０個のヌクレオチドの長さの二重鎖領域を形成する、前記〔１〕～〔４〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６〕前記相補性の領域が、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さがであり、任意選択で少なくとも２０個のヌクレオチドの長さである、前記〔１〕～〔５〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔７〕前記センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１がＳ２と相補的であり、ＬがＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、前記〔１〕～〔６〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが１５～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔９〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが１５～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と１５～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１０〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが１５～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、１９個の連続するヌクレオチドの長さ、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１１〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが１８～３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、１９個の連続するヌクレオチドの長さ、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１２〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが１８～３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、１９個の連続するヌクレオチドの長さ、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１３〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが１８～３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１がＳ２と相補的であり、ＬがＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１４〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１がＳ２と相補的であり、ＬがＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１５〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が少なくとも１９個のヌクレオチドの長さ、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さの二重鎖領域を形成し、前記センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１がＳ２と相補的であり、ＬがＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１６〕Ｌがトリループ又はテトラループである、前記〔７〕及び〔１３〕～〔１５〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１７〕Ｌがテトラループである、前記〔１６〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１８〕前記テトラループが５’－ＧＡＡＡ－３’の配列を含む、前記〔１７〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１９〕Ｓ１とＳ２が１～１０個のヌクレオチドの長さであり、同じ長さを有する、前記〔１３〕～〔１８〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２０〕Ｓ１とＳ２が、１個のヌクレオチド、２個のヌクレオチド、３個のヌクレオチド、４個のヌクレオチド、５個のヌクレオチド、６個のヌクレオチド、７個のヌクレオチド、８個のヌクレオチド、９個のヌクレオチド、又は１０個のヌクレオチドの長さである、前記〔１９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２１〕Ｓ１とＳ２が６個のヌクレオチドの長さである、前記〔２０〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２２〕前記ステムループが配列５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号３３３）を含む、前記〔１３〕～〔２１〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２３〕前記アンチセンス鎖が、１個以上のヌクレオチドの長さの３’突出配列を含む、前記〔１〕～〔２２〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２４〕前記３’突出配列が長さ２個のヌクレオチドの長さであり、任意選択で前記３’突出配列がＧＧである、前記〔２３〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２５〕少なくとも１個の修飾核酸塩基を含む、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２６〕前記オリゴヌクレオチドの前記ステムループの前記ループ内の前記ヌクレオチドを除くすべてのヌクレオチドが修飾されている、前記〔１３〕～〔２５〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２７〕前記修飾ヌクレオチドが、２’修飾を含む、前記〔２５〕又は〔２６〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２８〕前記２’修飾が、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸からなる群から選択される修飾である、前記〔２７〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２９〕前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを含むすべてのヌクレオチドが修飾され、任意選択で、前記修飾が、２’－フルオロ及び２’－Ｏ－メチルからなる群から選択される２’－修飾である、前記〔２５〕～〔２８〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３０〕前記センス鎖の位置８、９、１０、又は１１の１つ以上のヌクレオチドが２’－フルオロで修飾されている、前記〔２９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３１〕前記アンチセンス鎖の位置２、３、４、５、７、１０、又は１４の１つ以上のヌクレオチドが２’－フルオロで修飾されている、前記〔２９〕又は〔３０〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３２〕前記センス鎖の位置１、２、３、４、５、６、７、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５、又は３６の１つ以上のヌクレオチドが２’－Ｏ－メチルで修飾されている、前記〔２９〕又は〔３１〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３３〕前記アンチセンス鎖の位置１、６、８、９、１１、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、又は２２の１つ以上のヌクレオチドが２’－Ｏ－メチルで修飾されている、前記〔２９〕～〔３２〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３４〕少なくとも１個の修飾ヌクレオシド間結合を含む、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３５〕前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、前記〔３４〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３６〕前記センス鎖の位置１及び２のヌクレオチドのヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合で修飾されている、前記〔３５〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３７〕前記アンチセンス鎖の位置１と２、２と３、３と４、２０と２１、又は２１と２２における１つ以上のヌクレオチドのヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合で修飾されている、前記〔３５〕又は〔３６〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３８〕前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、図１Ａ、図１Ｂ、又は図１Ｃに示されるような修飾パターンを有する、前記〔１〕～〔２４〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３９〕前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが図１Ｂに示されるような修飾パターンを有する、前記〔３８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４０〕前記アンチセンス鎖の５’ヌクレオチドの糖の４’炭素が、リン酸類似体を含む、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４１〕前記リン酸類似体が、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、又はマロニルホスホネートであり、任意選択で、前記リン酸類似体が、５’－メトキシホスホネート－４’－オキシを含む４’－リン酸類似体である、前記〔４０〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４２〕前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが、１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされる、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４３〕それぞれの標的化リガンドが、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、又は脂質を含む、前記〔４２〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４４〕それぞれの標的化リガンドがＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む、前記〔４３〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４５〕前記ＧａｌＮＡｃ部分が、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分である、前記〔４３〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４６〕前記ステムループのＬの４個までのヌクレオチドがそれぞれ一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートしている、前記〔１６〕～〔４１〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４７〕前記センス鎖が、配列番号９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、及び１６９のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４８〕前記アンチセンス鎖が、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、及び１７０のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４９〕前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド：
（ａ）配列番号３７と３８、
（ｂ）配列番号４３と４４、
（ｃ）配列番号４５と４６、
（ｄ）配列番号８７と８８、
（ｅ）配列番号８９と９０、
（ｆ）配列番号９９と１００、
（ｇ）配列番号１０１と１０２、及び
（ｈ）配列番号１０５と１０６。
〔５０〕前記センス鎖が配列番号３７であり、前記アンチセンス鎖が配列番号３８である、前記〔４９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５１〕前記センス鎖が配列番号４３であり、前記アンチセンス鎖が配列番号４４である、前記〔４９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５２〕前記センス鎖が配列番号４５であり、前記アンチセンス鎖が配列番号４６である、前記〔４９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５３〕前記センス鎖が配列番号８７であり、前記アンチセンス鎖が配列番号８８である、前記〔４９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５４〕前記センス鎖が配列番号８９であり、前記アンチセンス鎖が配列番号９０である、前記〔４９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５５〕前記センス鎖が配列番号９９であり、前記アンチセンス鎖が配列番号１００である、前記〔４９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５６〕前記センス鎖が配列番号１０１であり、前記アンチセンス鎖が配列番号１０２である、前記〔４９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５７〕前記センス鎖が配列番号１０５であり、前記アンチセンス鎖が配列番号１０６である、前記〔４９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５８〕前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕及び〔８〕～〔１５〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド：
（ａ’）配列番号１９９と２００、
（ｂ’）配列番号２０５と２０６、
（ｃ’）配列番号２０７と２０８、
（ｄ’）配列番号２４９と２５０、
（ｅ’）配列番号２５１と２５２、
（ｆ’）配列番号２６１と２６２、
（ｇ’）配列番号２６３と２６４、及び
（ｈ’）配列番号２６７と２６８。
〔５９〕前記センス鎖が配列番号１９９であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２００である、前記〔５８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６０〕前記センス鎖が配列番号２０５であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２０６である、前記〔５８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６１〕前記センス鎖が配列番号２０７であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２０８である、前記〔５８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６２〕前記センス鎖が配列番号２４９であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２５０である、前記〔５８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６３〕前記センス鎖が配列番号２５１であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２５２である、前記〔５８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６４〕前記センス鎖が配列番号２６１であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２６２である、前記〔５８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６５〕前記センス鎖が配列番号２６３であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２６４である、前記〔５８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６６〕前記センス鎖が配列番号２６７であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２６８である、前記〔５８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６７〕前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが、１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされる、前記〔５８〕～〔６６〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６８〕それぞれの標的化リガンドが、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、又は脂質である、前記〔６７〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６９〕それぞれの標的化リガンドがＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む、前記〔６８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔７０〕前記ＧａｌＮＡｃ部分が、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分である、前記〔６９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔７１〕前記センス鎖中の５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号３３３）の配列がステムループ構造を形成し、前記ループ中の５’－ＧＡＡＡ－３’の配列中のヌクレオチドがそれぞれ一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートしている、前記〔６９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔７２〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖を含むすべてのヌクレオチドが修飾されており、前記アンチセンス鎖が配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔７３〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖を含むすべてのヌクレオチドが修飾されており、前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’炭素リン酸類似体を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔７４〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖を含むすべてのヌクレオチドが修飾されており、前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’炭素リン酸類似体を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔７５〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖を構成するすべてのヌクレオチドが修飾され、前記アンチセンス鎖と前記センス鎖が１つ以上の２’－フルオロ及び２’－Ｏ－メチルで修飾されたヌクレオチドならびに少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含み、前記アンチセンス鎖の５’ヌクレオチドの糖の４’炭素がリン酸類似体を含み、前記アンチセンス鎖が、配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔７６〕前記センス鎖が、配列番号３７、４３、４５、８７、８９、９９、１０１、及び１０５のうちのいずれか１つを含み、前記センス鎖が、１９９、２０５、２０７、２４９、２５１、２６１、２６３、及び２６７のうちのいずれか１つを含む、前記〔７２〕～〔７５〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔７７〕前記アンチセンス鎖が、配列番号３８、４４、４６、８８、９０、１００、１０２、及び１０６のうちのいずれか１つを含み、前記アンチセンス鎖が、２００、２０６、２０８、２５０、２５２、２６２、２６４、及び２６８のうちのいずれか１つを含む、前記〔７２〕～〔７６〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔７８〕前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が、以下からなる群から選択される、前記〔７２〕～〔７７〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド：
（ａ）配列番号３７と３８、
（ｂ）配列番号４３と４４、
（ｃ）配列番号４５と４６、
（ｄ）配列番号８７と８８、
（ｅ）配列番号８９と９０、
（ｆ）配列番号９９と１００、
（ｇ）配列番号１０１と１０２、及び
（ｈ）配列番号１０５と１０６；又は
（ａ’）配列番号１９９と２００、
（ｂ’）配列番号２０５と２０６、
（ｃ’）配列番号２０７と２０８、
（ｄ’）配列番号２４９と２５０、
（ｅ’）配列番号２５１と２５２、
（ｆ’）配列番号２６１と２６２、
（ｇ’）配列番号２６３と２６４、及び
（ｈ’）配列番号２６７と２６８。
〔７９〕前記センス鎖が配列番号１９９であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２００である、前記〔７８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８０〕前記センス鎖が配列番号２０５であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２０６である、前記〔７８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８１〕前記センス鎖が配列番号２０７であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２０８である、前記〔７８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８２〕前記センス鎖が配列番号２４９であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２５０である、前記〔７８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８３〕前記センス鎖が配列番号２５１であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２５２である、前記〔７８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８４〕前記センス鎖が配列番号２６１であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２６２である、前記〔７８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８５〕前記センス鎖が配列番号２６３であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２６４である、前記〔７８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８６〕前記センス鎖が配列番号２６７であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２８６である、前記〔７８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８７〕前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが、１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされる、前記〔７２〕～〔８６〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８８〕それぞれの標的化リガンドが、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、又は脂質である、前記〔８７〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８９〕それぞれの標的化リガンドがＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む、前記〔８８〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔９０〕前記ＧａｌＮＡｃ部分が、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分である、前記〔８９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔９１〕前記センス鎖中の５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号３３３）の配列がステムループ構造を形成し、前記ループ中の５’－ＧＡＡＡ－３’の配列中のヌクレオチドがそれぞれ一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートしている、前記〔８９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔９２〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）の発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドはセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖は二重鎖領域を形成し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖は以下からなる群から選択される配列からなる、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド：
（ａ’）配列番号１９９と２００、
（ｂ’）配列番号２０５と２０６、
（ｃ’）配列番号２０７と２０８、
（ｄ’）配列番号２４９と２５０、
（ｅ’）配列番号２５１と２５２、
（ｆ’）配列番号２６１と２６２、
（ｇ’）配列番号２６３と２６４、及び
（ｈ’）配列番号２６７と２６８。
〔９３〕前記センス鎖中の５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号３３３）の配列がステムループ構造を形成し、前記ループ中の５’－ＧＡＡＡ－３’の配列中のヌクレオチドがそれぞれ一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートしている、前記〔９２〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔９４〕医薬組成物であって、
前記〔１〕～〔９３〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩と、
薬学的に許容される担体、送達剤又は賦形剤と、を含む、前記医薬組成物。
〔９５〕個体にオリゴヌクレオチドを送達する方法であって、前記方法は、
前記〔９４〕に記載の医薬組成物を前記個体に投与するステップを含む、前記方法。
〔９６〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する個体を治療する方法であって、前記方法は、
前記〔１〕～〔９３〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又は前記〔９４〕に記載の医薬組成物の治療有効量を前記個体に投与し、それによって前記個体を治療するステップを含む、前記方法。
〔９７〕細胞、細胞の集団又は個体におけるアポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）の発現を低減する方法であって、前記方法は、
前記細胞又は前記細胞の集団を、前記〔１〕～〔９３〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又は前記〔９４〕に記載の医薬組成物と接触させるステップ；又は
前記〔１〕～〔９３〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又は前記〔９４〕に記載の医薬組成物を前記個体に投与するステップを含む、前記方法。
〔９８〕ＡＰＯＣ３発現を低減することが、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量もしくはレベル、ＡＰＯＣ３タンパク質の量もしくはレベル、又はその両方を低減することを含む、前記〔９７〕に記載の方法。
〔９９〕前記個体がＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する、前記〔９７〕又は〔９８〕に記載の方法。
〔１００〕前記ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態が、急性冠動脈疾患（ＡＣＤ）、アテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＳＣＶＤ）、アルコール性肝炎（ＡＨ）、アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）、心血管代謝疾患、胆管癌（ＣＣＡ）、肝硬変、冠状動脈性心疾患（ＣＨＤ）、糖尿病、肝線維症、肝炎、肝細胞癌（ＨＣＣ）、高脂血症、高トリグリセリド血症、高非ＨＤＬコレステロール、インスリン抵抗性、肝脂肪変性症、メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肥満、又は原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）である、前記〔９９〕に記載の方法。
〔１０１〕前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又は医薬組成物が、第２の組成物又は治療剤と組み合わせて投与される、前記〔９６〕～〔１００〕のいずれか１項に記載の方法。
〔１０２〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する個体を治療する方法であって、前記方法は、
センス鎖とアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを前記個体に投与するステップを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号３３４～３４１のうちのいずれか１つのＡＰＯＣ３のｍＲＮＡ標的配列に相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記方法。
〔１０３〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する個体を治療する方法であって、前記方法は、
表２又は表３に示される行から選択されるセンス鎖とアンチセンス鎖を含む治療有効量のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその医薬組成物を前記個体に投与し、それによって前記個体を治療するステップを含む、前記方法。
〔１０４〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する個体を治療する方法であって、前記方法は、
センス鎖とアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの治療有効量を前記個体に投与するステップを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、前記方法：
（ａ）配列番号３７と３８、
（ｂ）配列番号４３と４４、
（ｃ）配列番号４５と４６、
（ｄ）配列番号８７と８８、
（ｅ）配列番号８９と９０、
（ｆ）配列番号９９と１００、
（ｇ）配列番号１０１と１０２、及び
（ｈ）配列番号１０５と１０６；又は
（ａ’）配列番号１９９と２００、
（ｂ’）配列番号２０５と２６０、
（ｃ’）配列番号２０７と２０８、
（ｄ’）配列番号２４９と２５０、
（ｅ’）配列番号２５１と２５２、
（ｆ’）配列番号２６１と２６２、
（ｇ’）配列番号２６３と２６４、及び
（ｈ’）配列番号２６７と２６８。
〔１０５〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する個体を治療する方法であって、前記方法は、
センス鎖とアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの治療有効量を前記個体に投与するステップを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が以下からなる群から選択される、前記方法：
（ａ）配列番号３７と３８、
（ｂ）配列番号４３と４４、
（ｃ）配列番号４５と４６、
（ｄ）配列番号８７と８８、
（ｅ）配列番号８９と９０、
（ｆ）配列番号９９と１００、
（ｇ）配列番号１０１と１０２、及び
（ｈ）配列番号１０５と１０６；又は
（ａ’）配列番号１９９と２００、
（ｂ’）配列番号２０５と２６０、
（ｃ’）配列番号２０７と２０８、
（ｄ’）配列番号２４９と２５０、
（ｅ’）配列番号２５１と２５２、
（ｆ’）配列番号２６１と２６２、
（ｇ’）配列番号２６３と２６４、及び
（ｈ’）配列番号２６７と２６８。
〔１０６〕前記センス鎖が配列番号１９９であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２００である、前記〔１０５〕に記載の方法。
〔１０７〕前記センス鎖が配列番号２０５であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２０６である、前記〔１０５〕に記載の方法。
〔１０８〕前記センス鎖が配列番号２０７であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２０８である、前記〔１０５〕に記載の方法。
〔１０９〕前記センス鎖が配列番号２４９であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２５０である、前記〔１５〕に記載の方法。
〔１１０〕前記センス鎖が配列番号２５１であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２５２である、前記〔１０５〕に記載の方法。
〔１１１〕前記センス鎖が配列番号２６１であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２６２である、前記〔１０５〕に記載の方法。
〔１１２〕前記センス鎖が配列番号２６３であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２６４である、前記〔７５〕に記載の方法。
〔１１３〕前記センス鎖が配列番号２６７であり、前記アンチセンス鎖が配列番号２６８である、前記〔７５〕に記載の方法。
〔１１４〕前記ＡＰＯＣ３発現に関連する疾患、障害、又は状態が、急性冠動脈疾患（ＡＣＤ）、アテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＳＣＶＤ）、アルコール性肝炎（ＡＨ）、アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）、心血管代謝疾患、胆管癌（ＣＣＡ）、肝硬変、冠状動脈性心疾患（ＣＨＤ）、糖尿病、肝線維症、肝炎、肝細胞癌（ＨＣＣ）、高脂血症、高トリグリセリド血症、高非ＨＤＬコレステロール、インスリン抵抗性、肝脂肪変性症、メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肥満、又は原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）からなる群から選択される、前記〔１０５〕～〔１１３〕のいずれか１項に記載の方法。
〔１１５〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療、任意選択で、急性冠動脈疾患（ＡＣＤ）、アテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＳＣＶＤ）、アルコール性肝炎（ＡＨ）、アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）、心血管代謝疾患、胆管癌（ＣＣＡ）、肝硬変、冠状動脈性心疾患（ＣＨＤ）、糖尿病、肝線維症、肝炎、肝細胞癌（ＨＣＣ）、高脂血症、高トリグリセリド血症、高非ＨＤＬコレステロール、インスリン抵抗性、肝脂肪変性症、メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肥満、又は原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）の治療のための医薬の製造における、前記〔１〕～〔９３〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又は前記〔９４〕に記載の医薬組成物の使用。
〔１１６〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療、任意選択で、急性冠動脈疾患（ＡＣＤ）、アテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＳＣＶＤ）、アルコール性肝炎（ＡＨ）、アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）、心血管代謝疾患、胆管癌（ＣＣＡ）、肝硬変、冠状動脈性心疾患（ＣＨＤ）、糖尿病、肝線維症、肝炎、肝細胞癌（ＨＣＣ）、高脂血症、高トリグリセリド血症、高非ＨＤＬコレステロール、インスリン抵抗性、肝脂肪変性症、メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肥満、又は原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）の治療における使用のための、又はその使用に適用可能である、前記〔１〕～〔９３〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又は前記〔９４〕に記載の医薬組成物。
〔１１７〕前記〔１〕～〔９３〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと、任意選択の薬学的に許容される担体と、アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する個体への投与のための使用説明書を含む添付文書と、を含むキット。
〔１１８〕前記アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療が、急性冠動脈疾患（ＡＣＤ）、アテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＳＣＶＤ）、アルコール性肝炎（ＡＨ）、アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）、心血管代謝疾患、胆管癌（ＣＣＡ）、肝硬変、冠状動脈性心疾患（ＣＨＤ）、糖尿病、肝線維症、肝炎、肝細胞癌（ＨＣＣ）、高脂血症、高トリグリセリド血症、高非ＨＤＬコレステロール、インスリン抵抗性、肝脂肪変性症、メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肥満、又は原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）である、前記〔１１５〕に記載の使用、前記〔１１６〕に記載の使用のための、又はその使用に適用可能である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又は医薬組成物、又は前記〔１１７〕に記載のキット。
〔１１９〕アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）の発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドは、任意選択で修飾されているセンス鎖とアンチセンス鎖を有し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖は二重鎖領域を形成し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖は以下からなる群から選択される対であり：
それぞれ、（ａ）配列番号３７と３８、
（ｂ）配列番号４３と４４、
（ｃ）配列番号４５と４６、
（ｄ）配列番号８７と８８、
（ｅ）配列番号８９と９０、
（ｆ）配列番号９９と１００、
（ｇ）配列番号１０１と１０２、及び
（ｈ）配列番号１０５と１０６；
前記センス鎖中の５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号３３３）の配列がステムループ構造を形成し、前記ループ中の５’－ＧＡＡＡ－３’の配列中のヌクレオチドがそれぞれ一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートしている、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１２０〕前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が任意選択で修飾されており、以下からなる群から選択される対である前記〔１１９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド：
それぞれ、
（ａ’）配列番号１９９と２００、
（ｂ’）配列番号２０５と２６０、
（ｃ’）配列番号２０７と２０８、
（ｄ’）配列番号２４９と２５０、
（ｅ’）配列番号２５１と２５２、
（ｆ’）配列番号２６１と２６２、
（ｇ’）配列番号２６３と２６４、及び
（ｈ’）配列番号２６７と２６８。

Claims (11)

1. アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、
   前記センス鎖が、
   [mGs][mU][mA][mG][mG][mU][mU][fG][fC][fU][fU][mA][mA][mA][mA][mG][mG][mG][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC]（配列番号２５１）
   であり、かつ
   前記アンチセンス鎖が、
   [MePhosphonate-4O-mUs][fUs][fCs][fC][fC][mU][fU][mU][mU][fA][mA][mG][mC][fA][mA][mC][mC][mU][mA][mCs][mGs][mG]（配列番号２５２）
   であり、
   mGsが、３’－ホスホロチオエート結合を有する２’－Ｏ－メチルグアノシンを表し、
   mUが、３’－ホスホジエステル結合を有する２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、
   mAが、３’－ホスホジエステル結合を有する２’－Ｏ－メチルアデノシンを表し、
   mGが、３’－ホスホジエステル結合を有する２’－Ｏ－メチルグアノシンを表し、
   fGが、３’－ホスホジエステル結合を有する２’－フルオログアノシンを表し、
   fCが、３’－ホスホジエステル結合を有する２’－フルオロシチジンを表し、
   fUが、３’－ホスホジエステル結合を有する２’－フルオロウリジンを表し、
   mCが、３’－ホスホジエステル結合を有する２’－Ｏ－メチルシチジンを表し、
   ademA-GalNAcが、３’－ホスホジエステル結合を有する２’－アミノジエトキシメタノール－アデノシン－ＧａｌＮＡｃを表し、
   MePhosphonate-4O-mUsが、３’－ホスホロチオエート結合を有する５’－メトキシホスホネート－４’－オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、
   fUsが、３’－ホスホロチオエート結合を有する２’－フルオロウリジンを表し、
   fCsが、３’－ホスホロチオエート結合を有する２’－フルオロシチジンを表し、
   fAが、３’－ホスホジエステル結合を有する２’－フルオロアデノシンを表し、
   mCsが、３’－ホスホロチオエート結合を有する２’－Ｏ－メチルシチジンを表す、
   前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
2. 請求項１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩と、
   薬学的に許容される担体、送達剤又は賦形剤と
   を含む、医薬組成物。
3. 前記薬学的に許容される担体が、静脈内投与に適した担体である、請求項２に記載の医薬組成物。
4. 前記担体が、水を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
5. 前記担体が、リン酸緩衝生理食塩水を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
6. 細胞、細胞の集団又は個体におけるアポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）遺伝子発現の低減に使用するための、請求項２に記載の医薬組成物。
7. ＡＰＯＣ３遺伝子発現の低減が、ＡＰＯＣ３のｍＲＮＡの量、ＡＰＯＣ３タンパク質の量、又はその両方を低減することを含む、請求項６に記載の使用のための医薬組成物。
8. 前記個体がＡＰＯＣ３遺伝子発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する、請求項６に記載の使用のための医薬組成物。
9. アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）遺伝子発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する個体の治療に使用するための、請求項２に記載の医薬組成物。
10. 前記ＡＰＯＣ３遺伝子発現に関連する疾患、障害、又は状態が、急性冠動脈疾患（ＡＣＤ）、アテローム性動脈硬化性心血管疾患（ＡＳＣＶＤ）、アルコール性肝炎（ＡＨ）、アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）、心血管代謝疾患、胆管癌（ＣＣＡ）、肝硬変、冠状動脈性心疾患（ＣＨＤ）、糖尿病、肝線維症、肝炎、肝細胞癌（ＨＣＣ）、高脂血症、高トリグリセリド血症、高非ＨＤＬコレステロール、インスリン抵抗性、肝脂肪変性症、メタボリックシンドローム（ＭｅｔＳ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肥満、又は原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）である、請求項８又は９に記載の使用のための医薬組成物。
11. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又は医薬組成物が、第２の組成物又は治療剤と組み合わせて投与される、請求項６～９のいずれか１項に記載の使用のための医薬組成物。