JP7471373B2 - 血中で安定なmRNA内包ミセル - Google Patents
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Description
(1)親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、カチオン性ブロックとの三元共重合体と、
RNAと
を含む、ミセルであって、
温度応答性ブロックは、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性であり、
(a)前記三元共重合体とRNAとを前記下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で混合し、(b)その後、水溶液の温度を前記下限臨界共溶温度以上に上昇させることにより得られる、
ミセル。
(2)前記RNAは、疎水性に変化した温度応答性ブロックで形成される外殻によって覆われている、上記(1)に記載のミセル。
(3)前記(a)において、前記三元共重合体とRNAとを前記下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で球形状のミセルを形成するように混合させる、上記(2)に記載のミセル。
(4)前記(b)において、水溶液の温度を前記下限臨界共溶温度以上に上昇させることによりミセルの中間層として疎水性部が形成され、RNAが疎水性部の内部に封入された、上記(2)または(3)に記載のミセル。
(5)温度応答性重合体をさらに含む、上記(1)~(4)のいずれかに記載のミセル。
(6)温度応答性重合体が1mg/mL以下である、上記(5)に記載のミセル。
(7)上記(5)または(6)に記載のミセルであって、
前記三元共重合体とRNAとを前記下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で混合し、ミセルを形成させ、その後、温度応答性重合体を添加し、さらに、水溶液の温度を前記下限臨界共溶温度以上に上昇させることにより形成される、ミセル。
(8)他のブロック共重合体を構成成分として含まない、上記(1)~(7)のいずれかに記載のミセル。
(9)三元共重合体とRNAの電荷比が、4以下である、上記(1)~(8)のいずれかに記載のミセル。
(10)三元共重合体とRNAの電荷比が、1.5~2.5である、上記(1)~(9)のいずれかに記載のミセル。
(11)RNAがmRNAである、上記(1)~(10)のいずれかに記載のミセル。
(12)静脈内投与用の、上記(1)~(11)のいずれかに記載のミセルを含む、医薬組成物。
(13)mRNAの血中残存量が、mRNAの投与2.5分後に10%以上である、上記(12)に記載の医薬組成物。
(14)mRNAの血中残存量が、mRNAの投与2.5分後に20%以上である、上記(13)に記載の医薬組成物。
このようなミセルは、以下の手順で調製することができる。すなわち、親水性ブロックと温度応答性ブロックとカチオン性ブロックを含む三元共重合体と、RNAとをミセルを形成できるようにLCST未満の温度の水溶液中で混合する。ミセルが得られたら、水溶液の温度をLCST以上に上昇させ、温度応答性ブロックを親水性から疎水性に変化させる。
親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、カチオン性ブロックとの三元共重合体と、
RNAと
を含む、ミセルであって、
温度応答性ブロックは、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性である、
ミセル
が提供される。このミセルは、以下の工程によって調製され得る:
(a)前記三元共重合体とRNAとを前記下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で混合する。
親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、カチオン性ブロックとの三元共重合体と、
RNAと
を含む、ミセルであって、
温度応答性ブロックは、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性であり、
(a)前記三元共重合体とRNAとを前記下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で混合し、(b)その後、水溶液の温度を前記下限臨界共溶温度以上に上昇させることにより得られる、
ミセル
が提供される。このようにして得られたミセルは、LCST以上の温度条件下では温度応答性ブロックが疎水性であるため、水溶液中では疎水性の層を形成し、この層の内部にRNAが封入され、RNAを分解から保護する役割を果たすと考えられる。
親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、カチオン性ブロックとの三元共重合体と、
RNAと
を含む、ミセルであって、
温度応答性ブロックは、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性であり、
RNAは、疎水性に変化した温度応答性ブロックで形成される外殻によって覆われている、ミセル
が提供される。このミセルは、例えば、上記工程(a)および(b)により調製することができる。また、調製後は使用時までミセルを下限臨界共溶温度以上で維持することができる。
[1]親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、カチオン性ブロックとの三元共重合体と、
RNAと
を含む、ミセルであって、
温度応答性ブロックは、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性であり、
RNAは、疎水性に変化した温度応答性ブロックで形成される外殻によって覆われている、ミセル;または
[2]親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、カチオン性ブロックとの三元共重合体と、
RNAとを含む、ミセルであって、
温度応答性ブロックは、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満以下で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性であり、
(a)前記三元共重合体とRNAとを前記下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で混合し、(b)その後、水溶液の温度を前記下限臨界共溶温度以上に上昇させることにより得られる、
ミセル。
したがって、本発明によれば、親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、カチオン性ブロックとの三元共重合体と、RNAとを含むミセルは、温度応答性重合体(例えば、温度応答性重合体)をさらに含んでいてもよい。この態様において、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは同一分子でも異なる分子であり得る。ある態様では、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは異なる分子である。ある態様では、温度応答性重合体は、カチオン性ブロックを有しない。温度応答性重合体は、温度応答性ブロックからなる重合体とすることもできる。
ここで、血液の温度がヒトの場合、36℃~37℃程度であることを考慮すると、温度応答性重合体のLCSTは、35℃以下であることが好ましい。このようにすることで投与後に血中でミセルの状態が維持される。また、mRNAの調製を0~4℃程度で行うことを考慮すると、温度応答性重合体のLCSTは、5℃以上であることが好ましい。このようにすることで調製中に三元共重合体を親水性に保つことが容易となる。なお、温度応答性重合体のLCSTは、その他の様々な状況を考慮して適切なLCSTを設定することが好ましい。例えば、LCSTは、5℃~35℃とすることができ、10℃~32℃とすることができ、または25℃~32℃とすることができる。一般に水溶性ポリマーは、LCSTを有する。本発明では、上記の温度範囲内にLCSTを有する高分子ポリマーであれば適宜温度応答性ブロックとして用いることができる。
親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、カチオン性ブロックとの三元共重合体と、
温度応答性重合体と、
RNAと
を含む、ミセルであって、
温度応答性ブロックは、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性であり、
(i)(a)前記三元共重合体とRNAと温度応答性重合体とを前記下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で混合し、(b)その後、水溶液の温度を前記下限臨界共溶温度以上に上昇させることにより得られる、
ミセル
が提供される。この態様において、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは同一の分子でも異なる分子であり得る。ある態様では、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは異なる分子である。ある態様では、温度応答性重合体は、カチオン性ブロックを有しない。温度応答性重合体は、温度応答性ブロックからなる重合体とすることもできる。
親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、カチオン性ブロックとの三元共重合体と、
温度応答性重合体と、
RNAと
を含む、ミセルであって、
温度応答性ブロックは、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性であり、
RNAは、疎水性に変化した三元共重合体の温度応答性ブロックと温度応答性重合体とで形成される外殻によって覆われている、ミセルが提供される。この態様において、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは同一の分子でも異なる分子であり得る。ある態様では、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは異なる分子である。ある態様では、温度応答性重合体は、カチオン性ブロックを有しない。温度応答性重合体は、温度応答性ブロックからなる重合体とすることもできる。
[3]親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、カチオン性ブロックとの三元共重合体と、
温度応答性重合体と、
タンパク質発現用のmRNAと
を含む、ミセルであって、
温度応答性ブロックは、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性であり、
(a)前記三元共重合体とRNAと温度応答性重合体とを前記下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で混合し、(b)その後、水溶液の温度を前記下限臨界共溶温度以上に上昇させることにより得られる、
ミセル;または
[4]親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、カチオン性ブロックとの三元共重合体と、
温度応答性重合体と、
RNAと
を含む、ミセルであって、
温度応答性ブロックは、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性であり、
RNAは、疎水性に変化した三元共重合体の温度応答性ブロックと温度応答性重合体とで形成される外殻によって覆われている、ミセル。この態様において、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは同一の分子でも異なる分子でもあり得る。ある態様では、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは異なる分子である。ある態様では、温度応答性重合体は、カチオン性ブロックを有しない。温度応答性重合体は、温度応答性ブロックからなる重合体とすることもできる。
(a)親水ブロックと5~35℃の下限臨界共溶温度を有する温度応答性ブロックとカチオン性ブロックとを含む三元共重合体とRNAとを、前記下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で混合することと、
(b)その後、水溶液の温度を前記下限臨界共溶温度以上に上昇させること
を含む方法が提供される。この方法において、三元共重合体とRNAには、温度応答性重合体(例えば、温度応答性ブロックからなる重合体)とさらに混合してもよい。この態様において、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは同一の分子でも異なる分子でもあり得る。ある態様では、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは異なる分子である。ある態様では、温度応答性重合体は、カチオン性ブロックを有しない。
(a)親水ブロックと5~35℃の下限臨界共溶温度を有する温度応答性ブロックとカチオン性ブロックとを含む三元共重合体とRNAとを、前記下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で混合することと、
(b)その後、水溶液の温度を前記下限臨界共溶温度以上に上昇させること
を含む方法が提供される。上記(a)では、混合する材料は全て薬学的に許容されるものとしてもよく、水溶液は賦形剤を含んでいてもよい。この方法において、三元共重合体とRNAには、温度応答性ブロックを含んでなる重合体(例えば、温度応答性ブロックからなる重合体)とさらに混合してもよい。この態様において、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とはある態様では、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは異なる分子である。異なる分子でもあり得る。ある態様では、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは異なる分子である。ある態様では、温度応答性重合体は、カチオン性ブロックを有しない。
(a)親水ブロックと5~35℃の下限臨界共溶温度を有する温度応答性ブロックとカチオン性ブロックとを含む三元共重合体とRNAとを、前記下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で混合することと、
(b)その後、水溶液の温度を前記下限臨界共溶温度以上に上昇させることと、
(c)得られたミセルを対象に投与することと
を含む、方法が提供される。この方法において、三元共重合体とRNAには、温度応答性重合体(例えば、温度応答性ブロックからなる重合体)とさらに混合してもよい。この態様において、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは同一の分子でも異なる分子でもあり得る。ある態様では、温度応答性重合体は、前記三元共重合体とは異なる分子である。ある態様では、温度応答性重合体は、カチオン性ブロックを有しない。
mRNAは、テンプレートのDNAをmMESSAGE mMACHINE T7 Ultra Kit (Ambion社) を用いてin vitroトランスクリプションする、またpoly(A) tailkit(Ambion社)を用いてpoly(A)修飾を施すことで調製した。またテンプレートのDNA作成には、New England Biolabs社より購入したpCMV-Gluc control plasmidを用いた。
ウシアルブミン血清(FBS)は大日本住友製薬から購入した。
pDNAは理研バイオリソースセンターより提供されたルシフェラーゼがコードされCAGプロモーターを持つpCAG-Luc2を用いた。
トリブロック共重合体は、親水性連鎖ポリ(2-エチル-2-オキサゾリン)(PEtOx)と温度応答性連鎖ポリ(2-n-プロピル-2-オキサゾリン)からなるブロックセグメントと、カチオン性連鎖ポリリジン(PLys)を合成し、これらを結合することで作成した。トリブロック共重合体の合成スキームは以下スキーム1~3に示される通りであった。
別途、アジド末端を持つポリリジン(PLys-N3)を合成した。これは、シグマアルドリッチ社より購入した11-azido-3,6,9-trioxaundecan-1-amineを開始剤として用い、非特許文献(J. Polym. Sci. Part A Polym. Chem. 2003, 41 1167-1187)に則りFuchs-Farthing法により合成したLys(TFA)-NCAを重合、その後塩基で処理することで得られる。開始剤(22 mg, 0.10 mmol)を1Mの濃度のチオウレアを溶かしたDMF (DMF (1M TU))2 mLに溶解させた。別途Arバック中でLys(TFA)-NCA(1.35 g, 5.0 mmol)をフラスコに測りとり、15mLのDMF(1M TU)に溶解させた。調製したLys(TFA)-NCA溶液を、Ar雰囲気下で開始剤溶液に加え、25 ℃で2日間撹拌して重合反応を行った。反応溶液を水に対して5回透析したのち、凍結乾燥することでPoly(L-Lysine)(TFA) (PLys(TFA))を得た。 得られたPLys(TFA)を500 mg測りとり、25 mLのメタノールに溶解させた。反応後は、0.01 M HClに対して3回透析を行った後、水に対して3回透析を行い、凍結乾燥によりアジド末端を持つポリリジン、PLys-N3を回収した。得られたポリマーは、1H-NMR(ESC400,JEOL)による解析から、重合度が51であることが分かった。
続いて、Alkyne-PnPrOx-PEtOxとPLys-N3をClick Chemistryによりカップリングした。Alkyne-PnPrOx-PEtOx(210 mg, 0.01 mmol)を水2 mLに溶解し、1MのCuSO4溶液と1Mのアスコルビン酸ナトリウム溶液を20 μLずつ加え、撹拌した。別途、PLys-N3(35mg, 0.0044 mmol)を水1 mLに溶解し、Alkyne-PnPrOx-PEtOx溶液に加え、-20 ℃で一晩静置し、4 ℃で2時間かけて融解させた。生成物は、反応溶液を水に対して5回透析し、凍結乾燥することで回収した。ここでの回収物はトリブロック共重合体の他に、PLys-N3を全て反応させるために過剰に加えたAlkyne-PnPrOx-PEtOxも含まれている。これら二つのジオキサンへの溶解性の違いに着目し、精製作業を行った。回収物をwako社より購入した脱水ジオキサンに分散させて遠心分離により上澄みを取り除く工程を3回行い、ジオキサンへの溶解性が高いAlkyne-PnPrOx-PEtOxのみを取り除き、溶解性の低いトリブロック共重合体のみを沈殿物として回収した。
カップリングの進行や、精製作業後の回収物はGEヘルスケア社のカラムSuperdex 200を用いたSEC(AKTAexplorer,GE Helthcere)によって分析した。
本トリブロック共重合体の下限臨界共溶温度(LCST)は約30℃であった。
50 ng/μLの濃度に調製したpDNA溶液、またはmRNA溶液100 μLに対して、ポリカチオン/核酸の電荷比が2となるよう濃度を調製したトリブロック共重合体水溶液50 μLを4 ℃で混合し、その後37 ℃で10分間静置することでミセル溶液とした。これらのミセル溶液15 μLとFBS15 μLをそれぞれ混合し、37 ℃で15分間静置した。pDNAミセル溶液に対してはDNeasy kit (Qiagen社)を、mRNAミセル溶液に対してはRNeasykit (Qiagen社)を用いて核酸を抽出し、回収した。回収したDNAはそのままqRT-PCR( ,Biorad社)を用いて残存量を定量し、RNAについてはReverse Transfection kit (TOYOBO社)を用いてcDNAに逆転写した後、qRT-PCR(Biorad社)により定量した。
33.3 ng/μLの濃度に調製したpDNA溶液、mRNA溶液に対しても、FBSとの静置や抽出等、ミセル溶液と同様の操作をそれぞれ行った。結果は、図1に示される通りであった。
トリブロック共重合体、mRNAについては実施例1と同様のものを用いた。動物実験に用いるマウス(Balb/c, ♀)は、チャールズリバー社より購入した。また今回の実験では対照として、温度応答性を持たず、カチオン鎖であるPLysの重合度はトリブロック共重合体と同じ51で、親水性鎖として分子量23kのPEtOxを持つジブロック共重合体を用意した。
300 ng/μLの濃度に調整したmRNA溶液と、ポリカチオン/核酸の電荷比が2となるよう濃度を調製したトリブロック共重合体を4 ℃で混合し、核酸の濃度が200 ng/μLのミセル溶液となるよう調節した。ミセル溶液を37 ℃で10分間静置した後、マウス尾静脈より投与した。投与後2.5、5、10分後に尾の静脈より2.0 μLの血液を採取し、1%のメルカプトエタノールを含んだRLTバッファー350 μLに加えた。その後、RNeasy kit(Qiagen社)のプロトコールに則りRNAを抽出した。抽出したRNAはReverseTransfection kit (TOYOBO社)を用いてcDNAに逆転写した後、qRT-PCR(Biorad社)により定量した。同様に、ジブロック共重合体も用いて高分子ミセルを作成し、評価した。結果は、図2に示される通りであった。
実施例1、2で用いたものと同様のトリブロック共重合体とmRNA、また実施例2で用いたものと同様のジブロック共重合体を用意した。
ミセルに添加する刺激応答性ポリマーとして、分子量が20kのPnPrOxを用意した。開始剤p-トルエンスルホン酸プロパルギル(61 mg, 0.29 mmol)をアセトニトリル9 mL、クロロベンゼン9 mLに加えた。ここに2-n-プロピル-2-オキサゾリン(7.2g, 64 mmol)を加え、42 ℃で10日間反応させた。ここで用いたp-トルエンスルホン酸プロパルギルは東京化成より購入し、Wako社より購入した五酸化ニリンを脱水剤として用いて蒸留精製して使用した。オキサゾリンモノマーは東京化成より購入し、シグマアルドリッチ社より購入したカルシウムハイドライドを脱水材として用いて蒸留精製して使用した。反応溶媒のアセトニトリル、クロロベンゼンはwako社より購入し、それぞれカルシウムハイドライド、五酸化二リンを脱水剤として用いて蒸留精製して使用した。
50 ng/μLの濃度に調製したmRNA溶液100 μLに対して、ポリカチオン/核酸の電荷比が2となるよう濃度を調製したトリブロック共重合体溶液50 μLを4 ℃で混合した。続いて37 ℃で10分間静置し、これに対して37 ℃で動的光散乱測定(Zetasizer, Malvern)を行い、粒径、粒径分布を見た。また別途、4 ℃においてミセル溶液50 μLと0.5 mg/mLに調整したPnPrOx溶液25 μLを混合した溶液を調整し、37 ℃で10分間静置後、動的光散乱測定により形態を評価した。同様の測定を、ジブロック共重合体から形成されたミセルに対しても行った。結果は図3-1および3-2に示される通りであった。
実施例1、2、3で用いたものと同様のトリブロック共重合体とmRNA、また実施例3で用いたものと同様である分子量20kのPnPrOxを用意した。
RNase Aはタカラバイオ株式会社より購入したものを用いた。
50 ng/μLの濃度に調製したmRNA溶液200 μLに対して、ポリカチオン/核酸の電荷比が2となるよう濃度を調製したトリブロック共重合体溶液100 μLを4 ℃で混合した。ミセル溶液60 μLを測りとり、4 ℃において5,2.5, 0.5, 0 mg/mL濃度に調整したPnPrOx水溶液30 μLのいずれかと混合し、37 ℃で10分間静置した。これら調整したミセル溶液 15 μLに対してそれぞれ 6 μg/mLのRNase A溶液15 μLを加え、37 ℃で1時間静置した。その後、RNeasykit(Qiagen社)のプロトコールに則りRNAを抽出した。抽出したRNAはReverse Transfection kit (TOYOBO社)を用いてcDNAに逆転写した後、qRT-PCR(Biorad社)により定量した。結果は、図4に示される通りであった。
実施例1、2、3で用いたものと同様のトリブロック共重合体とmRNA、また実施例3で用いたものと同様である分子量20kのPnPrOxを用意した。動物実験に用いるマウスはBalb/c ♀をチャールズリバー社より購入した。
300 ng/μLの濃度に調整したmRNA溶液と、ポリカチオン/核酸の電荷比が2となるよう濃度を調製したトリブロック共重合体を4 ℃で混合し、核酸の濃度を200 ng/μLになるよう調節した。4 ℃においてミセル溶液200 μLに対して0.5 mg/mLに調節したPnPrOx溶液100 μLを混合し、37 ℃で10分間静置した。このように調整したミセル溶液300 μLをマウス尾静脈より投与し、投与後2.5分後に尾の静脈より2.0 μLの血液を採取、1%のメルカプトエタノールを含んだRLTバッファー350 μLに加えた。その後、RNeasykit(Qiagen社)のプロトコールに則りRNAを抽出した。抽出したRNAはReverse Transfection kit (TOYOBO社)を用いてcDNAに逆転写した後、qRT-PCR(Biorad社)により定量した。結果は、図5に示される通りであった。
Claims (14)
- 親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、ポリカチオン性ブロックとをこの順番で含む三元共重合体と、
温度応答性ブロックからなる更なる温度応答性重合体と、
mRNAとを含む、ミセルであって、
温度応答性ブロックは、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性であり、
更なる温度応答性重合体は、5℃~35℃の下限臨界共溶温度を有し、下限臨界共溶温度未満で親水性であり、下限臨界共溶温度以上で疎水性であり、
mRNAは、37℃の水溶液中で、疎水性である前記温度応答性ブロックと前記更なる温度応答性重合体によりミセル内部を包むように形成されている疎水性部の内部に内包され、前記疎水性部により保護されている、
ミセルを含む、組成物。 - マウス尾静脈投与2.5分後のmRNAの血中残存量が、10%以上である、請求項1に記載の組成物。
- 前記更なる温度応答性重合体が、ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)、ポリ(2-n-プロピル-2-オキサゾリン)、またはポリ(2-イソプロピル-2-オキサゾリン)からなる、請求項1または2に記載の組成物。
- 請求項1~3のいずれか一項に記載の組成物であって、
温度応答性重合体が、ポリ(2-n-プロピル-2-オキサゾリン)である、組成物。 - 請求項1~4のいずれか一項に記載の組成物であって、
三元重合体に含まれる温度応答性ブロックが、ポリ(2-n-プロピル-2-オキサゾリン)である、組成物。 - 前記更なる温度応答性重合体が1mg/mL以下である、請求項1~4のいずれか一項に記載の組成物。
- 他のブロック共重合体を構成成分として含まない、請求項1~6のいずれか一項に記載の組成物。
- 三元共重合体とmRNAの電荷比が、4以下である、請求項1~7のいずれか一項に記載の組成物。
- 三元共重合体とmRNAの電荷比が、1.5~2.5である、請求項1~8のいずれか一項に記載の組成物。
- 静脈内投与用の医薬組成物である、請求項1~9のいずれか一項に記載の組成物を含む医薬組成物。
- 請求項1~9のいずれか一項に記載の組成物または請求項10に記載の医薬組成物の製造方法における、
(i) 親水性ブロックと、温度応答性ブロックと、ポリカチオン性ブロックとをこの順番で含む三元共重合体;
(ii) 温度応答性ブロックからなる更なる温度応答性重合体;および
(iii) mRNA
の使用。 - 請求項1~9のいずれか一項に記載の組成物または請求項10に記載の医薬組成物の製造方法であって、
前記三元共重合体と前記更なる温度応答性重合体と前記mRNAとを、(a)下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で混合することと、(b)その後、水溶液の温度を下限臨界共溶温度以上に上昇させること
を含む、方法。 - 前記(a)において、前記三元共重合体と前記更なる温度応答性重合体と前記mRNAとを下限臨界共溶温度未満の温度の水溶液中で球形状のミセルを形成するように混合させる、請求項12に記載の方法。
- 前記(b)において、水溶液の温度を前記下限臨界共溶温度以上に上昇させることによりミセルの中間層として前記三元共重合体と前記更なる温度応答性重合体とによる疎水性部が形成され、mRNAが疎水性部の内部に封入された、請求項12または13に記載の方法。
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