JP7458990B2 - Method for improving the solubility of polymethoxyflavonoids - Google Patents
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Description
本技術は、ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法に関し、特には乳蛋白質を用いたポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法に関する。 The present technology relates to a method for improving the solubility of polymethoxyflavonoids, and particularly relates to a method for improving the solubility of polymethoxyflavonoids using milk protein.
ポリメトキシフラボノイドは、生体に対する種々の作用を有することが示されている。これら作用に着目し、例えば、飲食品にポリメトキシフラボノイドが添加される。しかしながら、ポリメトキシフラボノイドは難溶性であるため、飲食品として利用することが困難である場合がある。Polymethoxyflavonoids have been shown to have various effects on the living body. In light of these effects, polymethoxyflavonoids are added to foods and beverages, for example. However, because polymethoxyflavonoids are poorly soluble, it can be difficult to use them in foods and beverages.
これまでに、ポリメトキシフラボノイドの溶解性を向上させるための手法がいくつか提案されている。特許文献１には、ノビレチンまたはノビレチン含有物を、水とサイクロデキストリンの存在下で有機溶媒を用いることなく包接化処理することを特徴とする可溶化ノビレチン組成物の製造方法が記載されている。当該製造方法に関して、特許文献１には、有機溶媒を含有しない水溶液中において、サイクロデキストリンとノビレチンの包接体を形成させることにより、その包接体が水への溶解性に優れ、ノビレチンに固有の苦味も低減できると記載されている。 To date, several methods have been proposed for improving the solubility of polymethoxyflavonoids. Patent Document 1 describes a method for producing a solubilized nobiletin composition, characterized by subjecting nobiletin or a nobiletin-containing substance to an inclusion treatment in the presence of water and cyclodextrin without using an organic solvent. With regard to this production method, Patent Document 1 describes that by forming an inclusion complex between cyclodextrin and nobiletin in an aqueous solution that does not contain an organic solvent, the inclusion complex has excellent solubility in water and can also reduce the bitterness inherent to nobiletin.
特許文献１に記載の製造方法において、ノビレチンの包接化処理が行われる。当該包接化処理の一例として、シクロデキストリン水溶液にノビレチンを添加し、そして、５℃において４８時間で攪拌することが記載されている。しかしながら、当該撹拌は長時間に及ぶものであり、より簡便な方法があれば、ポリメトキシフラボノイドの利用価値をさらに高めることができる。 In the production method described in Patent Document 1, nobiletin is subjected to inclusion treatment. As an example of the inclusion treatment, it is described that nobiletin is added to an aqueous cyclodextrin solution and stirred at 5° C. for 48 hours. However, the stirring takes a long time, and if there is a simpler method, the utility value of polymethoxyflavonoids can be further increased.
本技術は、ポリメトキシフラボノイドの溶解性を向上させるための技術を提供することを目的とする。 The present technology aims to provide a technology for improving the solubility of polymethoxyflavonoids.
本発明者らは、乳蛋白質がポリメトキシフラボノイドの溶解性を向上させることを見出した。 The inventors have found that milk protein improves the solubility of polymethoxyflavonoids.
すなわち、本技術は以下を提供する。
［１］水性媒体中にポリメトキシフラボノイド及び乳蛋白質を存在させて、ポリメトキシフラボノイドの溶解性を向上させる方法。
［２］前記乳蛋白質が、ラクトフェリン、カゼイン、及びαラクトアルブミンから選択される１つ以上の蛋白質である、［１］に記載の方法。
［３］前記ポリメトキシフラボノイドが、ノビレチン又はタンゲレチンである、［１］又は［２］に記載の方法。
［４］前記ポリメトキシフラボノイドが、柑橘類エキス、黒ウコンエキス、ヨモギエキス、又はクミスクチンエキスによって前記水性媒体に加えられる、［１］～［３］のいずれか一つに記載の方法。
That is, the present technology provides the following.
[1] A method for improving the solubility of polymethoxyflavonoids by making polymethoxyflavonoids and milk protein exist in an aqueous medium.
[2] The method according to [1], wherein the milk protein is one or more proteins selected from lactoferrin, casein, and alpha-lactalbumin.
[3] The method according to [1] or [2], wherein the polymethoxyflavonoid is nobiletin or tangeretin.
[4] The method according to any one of [1] to [3], wherein the polymethoxyflavonoid is added to the aqueous medium by means of a citrus extract, black turmeric extract, mugwort extract, or kumis cutin extract.
また、本技術は以下も提供する。
［５］乳蛋白質を有効成分として含む、ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上用組成物。
［６］前記乳蛋白質が、ラクトフェリン、カゼイン、及びαラクトアルブミンから選択される１つ以上の蛋白質である、［５］に記載の組成物。
［７］前記ポリメトキシフラボノイドが、ノビレチン又はタンゲレチンである、［５］又は［６］に記載の組成物。
［８］前記ポリメトキシフラボノイドが、柑橘類、黒ウコン、ヨモギ、又はクミスクチンに由来するものである、［５］～［７］のいずれか一つに記載の組成物。
This technology also provides the following:
[5] A composition for improving the solubility of polymethoxyflavonoids containing milk protein as an active ingredient.
[6] The composition according to [5], wherein the milk protein is one or more proteins selected from lactoferrin, casein, and α-lactalbumin.
[7] The composition according to [5] or [6], wherein the polymethoxyflavonoid is nobiletin or tangeretin.
[8] The composition according to any one of [5] to [7], wherein the polymethoxyflavonoid is derived from citrus fruits, black turmeric, mugwort, or cumis cutin.
また、本技術は以下も提供する。
［９］ポリメトキシフラボノイド又はポリメトキシフラボノイドを含有する柑橘類エキス、黒ウコンエキス、ヨモギエキス、若しくはクミスクチンエキスと乳蛋白質とを含む水溶液。
［１０］前記水溶液が、飲食品添加用材料又は飲食品である、［９］に記載の水溶液。
This technology also provides the following:
[9] An aqueous solution containing a polymethoxyflavonoid or a citrus extract containing a polymethoxyflavonoid, a black turmeric extract, a mugwort extract, or a kumis cutin extract and milk protein.
[10] The aqueous solution according to [9], wherein the aqueous solution is a material for adding food or drink or a food or drink.
また、本技術は以下も提供する。
［１１］ポリメトキシフラボノイド又はポリメトキシフラボノイドを含有する柑橘類エキス、黒ウコンエキス、ヨモギエキス、若しくはクミスクチンエキスと乳蛋白質とを含む、ポリメトキシフラボノイド含有水溶液調製用組成物。
This technology also provides the following:
[11] A composition for preparing a polymethoxyflavonoid-containing aqueous solution, which contains a polymethoxyflavonoid or a citrus extract containing the polymethoxyflavonoid, a black turmeric extract, a mugwort extract, or a kumis cutin extract, and milk protein.
また、本技術は以下も提供する。
［１２］細胞膜に接触する水性媒体中にポリメトキシフラボノイド及び乳蛋白質を存在させて、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性を向上させる方法。
This technology also provides the following:
[12] A method for improving cell membrane permeability of polymethoxyflavonoids by making polymethoxyflavonoids and milk protein exist in an aqueous medium that contacts cell membranes.
また、本技術は以下も提供する。
［１３］乳蛋白質を有効成分として含む、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性向上用組成物。
This technology also provides the following:
[13] A composition for improving cell membrane permeability of polymethoxyflavonoid, which contains milk protein as an active ingredient.
本技術により、ポリメトキシフラボノイドの溶解性を向上させることができる。また、本技術により、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性も向上させることができる。
なお、本技術の効果は、ここに記載された効果に限定されず、本明細書内に記載されたいずれかの効果であってもよい。
With this technology, the solubility of polymethoxyflavonoids can be improved. Furthermore, the present technology can also improve the cell membrane permeability of polymethoxyflavonoids.
Note that the effects of the present technology are not limited to the effects described herein, and may be any of the effects described in this specification.
以下に本技術の好ましい実施形態について説明する。ただし、本技術は以下の好ましい実施形態に限定されず、本技術の範囲内で自由に変更することができる。 Preferred embodiments of the present technology will be described below. However, the present technology is not limited to the following preferred embodiments, and can be freely modified within the scope of the present technology.
１．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法
本技術に従う方法は、水性媒体中にポリメトキシフラボノイド及び乳蛋白質を存在させる工程を含む。水性媒体中に乳蛋白質を存在させることによって、ポリメトキシフラボノイドの水性媒体への溶解性を向上させることができる。以下で、当該方法の詳細を説明する。
1. Method for Improving Solubility of Polymethoxyflavonoids A method according to the present technology includes the step of providing polymethoxyflavonoids and milk protein in an aqueous medium. The presence of milk protein in the aqueous medium can improve the solubility of polymethoxyflavonoids in the aqueous medium. The details of the method will be explained below.
（１）ポリメトキシフラボノイド
本技術において用いられるポリメトキシフラボノイドは、例えばポリメトキシフラボンであり、好ましくは４～７のメトキシ基を有するフラボンあってよい。本技術において用いられるポリメトキシフラボンは、好ましくは以下の式により表される化合物である。
(1) Polymethoxyflavonoid The polymethoxyflavonoid used in the present technology is, for example, polymethoxyflavone, and may preferably be a flavone having 4 to 7 methoxy groups. The polymethoxyflavone used in the present technology is preferably a compound represented by the following formula.
上記式において、Ｒは水素原子又はメトキシ基を表し、Ｒ１は水素原子、メトキシ基、又は水酸基を表し、Ｒ２は水素原子又はメトキシ基を表し、且つ、Ｒ３はメチル基又は水素原子を表す。Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、互いに独立に選択されてよい。 In the above formula, R represents a hydrogen atom or a methoxy group, R 1 represents a hydrogen atom, a methoxy group, or a hydroxyl group, R 2 represents a hydrogen atom or a methoxy group, and R 3 represents a methyl group or a hydrogen atom. represent. R, R 1 , R 2 and R 3 may be selected independently of each other.
好ましくは、本技術において用いられるポリメトキシフラボンは、以下の化合物から選ばれる１つ又は複数の組み合わせであってよい。以下の化合物は、乳蛋白質（特にはラクトフェリン、カゼイン、又はαラクトアルブミン）によって、溶解性が向上されやすい。
ノビレチン（Ｎｏｂｉｌｅｔｉｎ、メトキシ基６個、上記式においてＲ＝Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝ＣＨ３）、
タンゲレチン（Ｔａｎｇｅｒｅｔｉｎ、メトキシ基５個、上記式においてＲ＝ＯＭｅ、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝ＣＨ３）、
シネンセチン（Ｓｉｎｅｎｓｅｔｉｎ、メトキシ基５個、上記式においてＲ＝Ｈ、Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ３＝ＣＨ３）、
ヘプタメトキシフラボン（Ｈｅｐｔａｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ、メトキシ基７個、上記式においてＲ＝Ｒ１＝Ｒ２＝ＯＭｅ、Ｒ３＝ＣＨ３）、
カスチシン（Ｃａｓｔｉｃｉｎ、メトキシ基４個、上記式においてＲ＝Ｈ、Ｒ１＝ＯＨ、Ｒ２＝ＯＭｅ、Ｒ３＝Ｈ）、及び
アルテメチン（Ａｒｔｅｍｅｔｉｎ、メトキシ基５個、上記式においてＲ＝Ｈ、Ｒ１＝ＯＭｅ、Ｒ２＝ＯＭｅ、Ｒ３＝Ｈ）
Preferably, the polymethoxyflavones used in the present technology may be one or a combination of a plurality of compounds selected from the following compounds, the solubility of which is easily increased by milk proteins (particularly lactoferrin, casein, or α-lactalbumin):
Nobiletin (6 methoxy groups, in the above formula R=R 1 =OMe, R 2 =H, R 3 =CH 3 ),
Tangeretin (5 methoxy groups, in the above formula R=OMe, R1 = R2 =H, R3 = CH3 ),
Sinensetin (5 methoxy groups, in the above formula R=H, R 1 =OMe, R 2 =H, R 3 =CH 3 ),
Heptamethoxyflavone (7 methoxy groups, in the above formula R=R 1 =R 2 =OMe, R 3 =CH 3 ),
Casticin (four methoxy groups, in the above formula R=H, R 1 =OH, R 2 =OMe, R 3 =H), and Artemetin (five methoxy groups, in the above formula R=H, R 1 =OMe, R 2 =OMe, R 3 =H)
より好ましくは、本技術において用いられるポリメトキシフラボノイドは、ノビレチン若しくはタンゲレチン又はこれらの組み合わせである。乳蛋白質（特にはラクトフェリン、カゼイン、又はαラクトアルブミン）による溶解性向上作用は、ノビレチン及びタンゲレチンに対して特に顕著に表れる。 More preferably, the polymethoxyflavonoid used in the present technology is nobiletin or tangeretin, or a combination thereof. The solubility-enhancing effect of milk proteins (particularly lactoferrin, casein, or α-lactalbumin) is particularly pronounced for nobiletin and tangeretin.
本技術において用いられるポリメトキシフラボノイドは、例えば柑橘類、黒ウコン（黒ショウガとも呼ばれる）、ヨモギ、又はクミスクチンに由来するものであってよい。本技術の方法において、前記ポリメトキシフラボノイドは、例えば柑橘類エキス、黒ウコンエキス、ヨモギエキス、又はクミスクチンエキスによって前記水性媒体に加えられてよい。これらのエキスを用いることによって、効率的にポリメトキシフラボノイドを水性媒体に添加することができる。また、これらのエキスは、特にはノビレチン及びタンゲレチンを効率的に水性媒体に加えるために適している。これらのエキスとして、市販入手可能なエキスが用いられてよい。 The polymethoxyflavonoids used in the present technology may be derived from, for example, citrus fruits, black turmeric (also called black ginger), mugwort, or cumis cutin. In the method of the present technology, the polymethoxyflavonoids may be added to the aqueous medium, for example by citrus extract, black turmeric extract, mugwort extract, or cumis cutin extract. By using these extracts, polymethoxyflavonoids can be efficiently added to an aqueous medium. These extracts are also particularly suitable for efficiently adding nobiletin and tangeretin to aqueous media. Commercially available extracts may be used as these extracts.
これらのエキスの抽出方法として、例えば含水エタノールによる抽出を挙げることができるが、これに限定されない。当該抽出方法として、例えば熱水抽出及び超臨界二酸化炭素抽出法を挙げることができる。 Examples of methods for extracting these extracts include, but are not limited to, extraction with aqueous ethanol. Examples of the extraction method include hot water extraction and supercritical carbon dioxide extraction.
本技術において用いられるポリメトキシフラボノイドは、好ましくは柑橘類に由来するものであり、より好ましくは柑橘類の果皮（例えばフラベド及び／又はアルベド）に由来するものである。ポリメトキシフラボノイドは、特に果皮に多く含まれる。
柑橘類として、好ましくは田中による分類手法（Tanaka, T. 1969. Bull. Univ. Osaka Pref. Ser. B, 21：139－145）におけるミカン区（Acrumen）の植物が好ましい。当該ミカン区は、さらに真正ミカン亜区（Euacrumen）及びコミカン亜区（Microacrumen）に分けることができる。
真正ミカン亜区に属する植物として、例えばキング（Citrus nobilis又はCitrus nobilis var Knep、クネンボを含む）、ウンシュウミカン（Citrus unshiu）、及びヤツシロミカン（Citrus yatsushiro、ヤツシロともいう）を挙げることができる。
コミカン亜区に属する植物として、ケラジ（Citrus keraji、カブチともいう）、オートー（Citrus oto）、マンダリン（Citrus reticulata、ポンカンともいう）、ダンシータンゼリン（Citrus tangerina）、クレメンタイン（Citrus clementina）、ジミカン（Citrus succosa）、シカイカン（Citrus suhuiensis）、タチバナ（Citrus tachibana）、コベニミカン（Citrus erythrosa）、キシュウ（Citrus kinokuni）、スンキー（Citrus sunki）、シークワーシャー（Citrus depressa）、及びコウジ（Citrus leiocarpa）を挙げることができる。
The polymethoxyflavonoids used in the present technology are preferably derived from citrus fruits, more preferably from citrus peels (eg, flavedo and/or albedo). Polymethoxyflavonoids are particularly abundant in the pericarp.
As the citrus fruit, Acrumen plants according to Tanaka's classification method (Tanaka, T. 1969. Bull. Univ. Osaka Pref. Ser. B, 21:139-145) are preferred. The tangerine area can be further divided into a true tangerine subarea (Euacrumen) and a comican subarea (Microacrumen).
Examples of plants belonging to the true Citrus subdivision include Citrus nobilis or Citrus nobilis var Knep (including Kunembo), Citrus unshiu, and Citrus yatsushiro (also called Citrus yatsushiro).
Plants belonging to the Comican subdistrict include Citrus keraji (also called turnip), oto (Citrus oto), mandarin (Citrus reticulata, also called ponkan), dancy tangerina (Citrus tangerina), clementine (Citrus clementina), and mandarin (Citrus reticulata, also called ponkan). Citrus succosa), Citrus suhuiensis, Citrus tachibana, Citrus erythrosa, Citrus kinokuni, Citrus sunki, Citrus depressa, and Citrus leiocarpa. be able to.
本技術において、ポリメトキシフラボノイド、特にはポリメトキシフラボンの含有量の高さの観点から、前記柑橘類として、ミカン区に属する植物が用いられることが好ましく、コミカン亜区に属する植物がより好ましい。コミカン亜区に属する植物として、例えばシークワーシャーが用いられてよい。本技術において、例えばシークワーシャーエキス、特にはシークワーシャー果皮由来エキスが、ポリメトキシフラボノイド（特にはノビレチン及び／又はタンゲレチン）を水性媒体に加えるために用いられうる。 In the present technology, from the viewpoint of high content of polymethoxyflavonoids, particularly polymethoxyflavones, it is preferable that plants belonging to the Mandarin orange group are used as the citrus fruits, and plants belonging to the Comican subgroup are more preferable. For example, Shikuwasha may be used as a plant belonging to the Comican subdistrict. In the present technology, for example, Shikwasha extract, especially extract derived from Shikwasha pericarp, can be used to add polymethoxyflavonoids (especially nobiletin and/or tangeretin) to an aqueous medium.
本技術の方法において、水性媒体中のポリメトキシフラボノイド量（特には上記式に包含される化合物の合計量）は、水性媒体の量に対して好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは５ｍｇ／ｍＬ以下、さらにより好ましくは３ｍｇ／ｍＬ以下、特に好ましくは１ｍｇ／ｍＬ以下であってよい。これにより、ポリメトキシフラボノイドが凝集又は析出することを防ぐことができる。
水性媒体中のポリメトキシフラボノイド量（特には上記式に包含される化合物の合計量）は０ｍｇ／ｍＬ超であればよく、例えば０．０００１ｍｇ／ｍＬ以上、好ましくは０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、さらにより好ましくは０．１ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。これにより、ポリメトキシフラボノイドによる生体への効果がより発揮されやすくなる。
水性媒体中のポリメトキシフラボノイド量の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよく、例えば０ｍｇ／ｍＬ超～１０ｍｇ／ｍＬ、０．０００１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬ、又は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬ以下であってよい。
In the method of the present technology, the amount of polymethoxyflavonoids in the aqueous medium (particularly the total amount of compounds included in the above formula) is preferably 10 mg/mL or less, more preferably 5 mg/mL based on the amount of the aqueous medium. Below, it may be even more preferably 3 mg/mL or less, particularly preferably 1 mg/mL or less. This can prevent polymethoxyflavonoids from aggregating or precipitating.
The amount of polymethoxyflavonoids (particularly the total amount of compounds included in the above formula) in the aqueous medium may be more than 0 mg/mL, for example 0.0001 mg/mL or more, preferably 0.001 mg/mL or more, or more. Preferably it is 0.01 mg/mL or more, and even more preferably 0.1 mg/mL or more. This makes it easier for the polymethoxyflavonoid to exert its effects on the living body.
The numerical range of the amount of polymethoxyflavonoids in the aqueous medium may be defined by a combination of any one of the above upper limits and any one of the above lower limits, for example, more than 0 mg/mL to 10 mg/mL, 0.0001 mg. /mL to 5 mg/mL, 0.001 mg/mL to 3 mg/mL, or 0.01 mg/mL to 1 mg/mL.
本技術の方法において用いられるポリメトキシフラボノイドがノビレチン若しくはタンゲレチン又はこれらの組み合わせである場合において、ノビレチン及びタンゲレチンは、水性媒体の量に対して、合計で好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは５ｍｇ／ｍＬ以下、さらにより好ましくは３ｍｇ／ｍＬ以下、特に好ましくは２ｍｇ／ｍＬ以下の量で水性媒体中に存在させられる。これにより、ノビレチン及び／又はタンゲレチンが凝集又は析出することをより効果的に防ぐことができる。
水性媒体中のノビレチン及びタンゲレチンの合計量は０ｍｇ／ｍＬ超であればよく、例えば０．０００１ｍｇ／ｍＬ以上、好ましくは０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、さらにより好ましくは０．１ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。これにより、ノビレチン及びタンゲレチンによる生体への効果がより発揮されやすくなる。
水性媒体中のノビレチン及びタンゲレチンの合計量の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよく、例えば０ｍｇ／ｍＬ超～１０ｍｇ／ｍＬ、０．０００１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬ、又は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬであってよい。
When the polymethoxyflavonoid used in the method of the present technology is nobiletin or tangeretin or a combination thereof, the total amount of nobiletin and tangeretin is preferably 10 mg/mL or less, more preferably 5 mg/mL, based on the amount of the aqueous medium. It is present in the aqueous medium in an amount of no more than 3 mg/mL, even more preferably no more than 3 mg/mL, particularly preferably no more than 2 mg/mL. Thereby, aggregation or precipitation of nobiletin and/or tangeretin can be more effectively prevented.
The total amount of nobiletin and tangeretin in the aqueous medium may be more than 0 mg/mL, for example, 0.0001 mg/mL or more, preferably 0.001 mg/mL or more, more preferably 0.01 mg/mL or more, and even more preferably may be 0.1 mg/mL or more. This makes it easier for nobiletin and tangeretin to exert their effects on the living body.
The numerical range of the total amount of nobiletin and tangeretin in the aqueous medium may be defined by a combination of any one of the above upper limits and any one of the above lower limits, for example, more than 0 mg/mL to 10 mg/mL, 0 It may be .0001 mg/mL to 5 mg/mL, 0.001 mg/mL to 3 mg/mL, or 0.01 mg/mL to 2 mg/mL.
（２）乳蛋白質
本技術において用いられる乳蛋白質は、哺乳動物の乳由来のものであってよい。含有量及び入手容易性の観点から、本技術において用いられる乳蛋白質は、例えばウシ又はヒトの乳に由来するものであってよく、特にはウシ乳に由来するものであってよい。乳は、初乳、移行乳、常乳、及び末期乳のいずれでもよい。本技術において、市販入手可能な乳蛋白質が用いられてもよい。乳蛋白質を水性媒体中に存在させることで、ポリメトキシフラボノイドの当該水性媒体への溶解性を向上させることができる。
(2) Milk protein The milk protein used in the present technology may be derived from mammalian milk. From the viewpoint of content and availability, the milk protein used in the present technology may be derived from, for example, bovine or human milk, and in particular may be derived from bovine milk. The milk may be colostrum, transitional milk, standing milk, or terminal milk. Commercially available milk proteins may be used in this technique. By making milk protein exist in an aqueous medium, the solubility of polymethoxyflavonoids in the aqueous medium can be improved.
本技術において用いられる乳蛋白質は、乳蛋白質の加熱物であってもよい。当該加熱物を得る為の加熱処理は、例えば滅菌又は殺菌のための加熱処理であってよい。滅菌処理として、例えば１２１℃で１０分間の加熱処理を挙げることができる。当該加熱処理は、例えば５０℃～１５０℃、好ましくは７０℃～１３０℃で行われてよい。加熱処理が行われる時間は、加熱処理における温度に応じて当業者により適宜変更されてよい。当該時間は、例えば１５秒間～２０分間、好ましくは３分間～１５分間でありうる。このような加熱処理に付されたとしても、乳蛋白質、特にはラクトフェリン及びカゼインナトリウムはポリメトキシフラボノイドの溶解性向上作用を発揮することができる。
前記加熱処理は、乳蛋白質及びポリメトキシフラボノイドの両方が水性媒体中に存在する状態で行われてもよい。ポリメトキシフラボノイド単独で水性媒体中に存在する状態で加熱処理を行うとポリメトキシフラボノイドの沈殿物が生じやすいが、上記の両方が水性媒体中に存在する状態で加熱処理を行うことで、当該沈殿物が生じることを防ぐことができる。
The milk protein used in the present technology may be a heated product of milk protein. The heat treatment for obtaining the heated product may be, for example, a heat treatment for sterilization or disinfection. An example of the sterilization treatment is a heat treatment at 121°C for 10 minutes. The heat treatment may be performed at, for example, 50°C to 150°C, preferably 70°C to 130°C. The time for which the heat treatment is performed may be appropriately changed by those skilled in the art depending on the temperature in the heat treatment. The time may be, for example, 15 seconds to 20 minutes, preferably 3 minutes to 15 minutes. Even when subjected to such heat treatment, milk protein, particularly lactoferrin and sodium caseinate, can exhibit the effect of improving the solubility of polymethoxyflavonoids.
The heat treatment may be carried out in a state where both the milk protein and the polymethoxyflavonoid are present in the aqueous medium. When the polymethoxyflavonoid is heated alone in the aqueous medium, the polymethoxyflavonoid is likely to precipitate, but when the heat treatment is carried out in a state where both of the above are present in the aqueous medium, the formation of the precipitate can be prevented.
本技術において用いられる乳蛋白質として、ラクトフェリン、カゼイン、及びαラクトアルブミンを挙げることができる。前記乳蛋白質として、これらのうちの１つ又は２つ以上の組み合わせが用いられてよい。これらの物質によって、ポリメトキシフラボノイドの溶解性が特に向上される。 Milk proteins used in the present technology include lactoferrin, casein, and alpha-lactalbumin. As the milk protein, one or a combination of two or more of these may be used. These substances particularly improve the solubility of polymethoxyflavonoids.
ラクトフェリンは、例えば乳、涙、唾液、及び血液などの体液中に存在する鉄結合性の糖蛋白質である。ラクトフェリンは、哺乳動物の乳、例えばヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、水牛、ラクダ、ヤク、ウマ、ロバ、ラマ、ウシ又はヒトなどの乳に含まれる。 Lactoferrin is an iron-binding glycoprotein present in body fluids such as milk, tears, saliva, and blood. Lactoferrin is found in the milk of mammals such as sheep, goat, pig, mouse, buffalo, camel, yak, horse, donkey, llama, cow or human milk.
本技術において用いられるラクトフェリンは、市販品であってよく、又は、哺乳動物の乳を処理して得られる脱脂乳又はホエーから常法（例えば、イオンクロマトグラフィー等）によって分離されたラクトフェリンであってもよい。本技術において用いられるラクトフェリンは、非グリコシル化又はグリコシル化されたものでもよい。 The lactoferrin used in the present technology may be a commercially available product, or it may be lactoferrin separated by a conventional method (for example, ion chromatography, etc.) from skim milk or whey obtained by processing mammalian milk. Good too. The lactoferrin used in the present technology may be non-glycosylated or glycosylated.
カゼインは、リン蛋白質の一種であり、乳中の主要蛋白質である。本技術において、カゼインとして市販品が使用されてよく、又は、乳から分離及び／又は精製して得られたカゼインが用いられてもよい。後者に関して、より具体的には、牛乳、脱脂乳、全粉乳、全脂粉乳、又は脱脂粉乳から常法により分離及び／又は精製したウシ由来のカゼインを挙げることができる。カゼインは、例えばα－カゼイン、β－カゼイン、又はγ－カゼインのいずれかであってよく、又は、これらのうちの２以上の組み合わせであってもよい。 Casein is a type of phosphoprotein and is the main protein in milk. In this technique, a commercially available casein may be used, or casein obtained by separating and/or purifying milk may be used. Regarding the latter, more specific examples include bovine-derived casein separated and/or purified from cow's milk, skim milk, whole milk powder, whole fat milk powder, or skim milk powder by a conventional method. Casein may be, for example, α-casein, β-casein, or γ-casein, or a combination of two or more of these.
本技術において、カゼインは、酸カゼイン及びカゼイン塩を包含する。酸カゼインとして、例えば乳酸カゼイン、硫酸カゼイン、及び塩酸カゼインを挙げることができる。カゼイン塩として、例えばカゼインナトリウム、カゼインカリウム、カゼインカルシウム、及びカゼインマグネシウムを挙げることができる。本技術において、これらの２種以上の組み合わせが用いられてもよい。In the present technology, casein includes acid casein and caseinate. Examples of acid casein include casein lactate, casein sulfate, and casein hydrochloride. Examples of caseinate include sodium caseinate, potassium caseinate, calcium caseinate, and magnesium caseinate. In the present technology, a combination of two or more of these may be used.
本技術において用いられるカゼインは、好ましくはカゼイン塩であり、より好ましくはカゼインナトリウムである。カゼイン塩、特にはカゼインナトリウムによって、ポリメトキシフラボノイドの溶解性が特に向上する。The casein used in the present technology is preferably a caseinate, more preferably sodium caseinate. Caseinate, particularly sodium caseinate, particularly improves the solubility of polymethoxyflavonoids.
α－ラクトアルブミンは、比較的安定な小蛋白質であり、哺乳動物の乳中にみられる。本技術において用いられるα－ラクトアルブミンは、市販品であってよく、又は、哺乳動物の乳を処理して得られるホエーから常法によって分離されたα－ラクトアルブミンであってもよい。例えば、α－ラクトアルブミンは、常法（例えば、祐川金次郎著、「最新改稿乳業技術便覧」、酪農技術普及協会、第１２０～１２２ページ、１９７５年）の硫酸アンモニウム沈殿法、塩化鉄法（Journal of Food Science、第５０巻、第１５３１～１５３６ページ、１９８５年］、限外濾過法（特開平５－２６８８７９号公報）、又はイオン交換法（特開平６－６２７５６号公報）により製造することができる。 Alpha-lactalbumin is a relatively stable small protein found in mammalian milk. The α-lactalbumin used in the present technology may be a commercially available product, or it may be α-lactalbumin separated by a conventional method from whey obtained by processing mammalian milk. For example, α-lactalbumin can be produced by the ammonium sulfate precipitation method using conventional methods (for example, Kinjiro Yukawa, "Latest Revised Dairy Technology Handbook", Dairy Technology Promotion Association, pp. 120-122, 1975), the iron chloride method (Journal of Food Science, Vol. 50, pp. 1531-1536, 1985], ultrafiltration method (Japanese Unexamined Patent Publication No. 5-268879), or ion exchange method (Japanese Unexamined Patent Publication No. 6-62756). .
本技術において用いられる乳蛋白質は、特に好ましくはラクトフェリンである。ラクトフェリンは、カゼイン及びαラクトアルブミンよりも、ポリメトキシフラボノイド（特にはノビレチン又はタンゲレチン）の溶解性向上効果をより強力に発揮することができる。
また、ラクトフェリンは、ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上効果だけでなく、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性向上効果も発揮することができる。そのため、ラクトフェリンによって、ポリメトキシフラボノイドの生体における利用効率を高めることもできる。
The milk protein used in this technique is particularly preferably lactoferrin. Lactoferrin can exert a stronger solubility-improving effect on polymethoxyflavonoids (particularly nobiletin or tangeretin) than casein and α-lactalbumin.
Moreover, lactoferrin can exhibit not only the effect of improving the solubility of polymethoxyflavonoids but also the effect of improving the cell membrane permeability of polymethoxyflavonoids. Therefore, lactoferrin can also increase the utilization efficiency of polymethoxyflavonoids in living organisms.
本技術において、水性媒体中の乳蛋白質量は、水性媒体の量に対して好ましくは５０ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは３０ｍｇ／ｍＬ以下、さらにより好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以下、特に好ましくは５ｍｇ／ｍＬ以下であってよい。これにより、乳蛋白質が凝集又は析出することを防ぐことができる。
水性媒体中の乳蛋白質量は０ｍｇ／ｍＬ超であればよく、例えば０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．１ｍｇ／ｍＬ以上、さらにより好ましくは１ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。これにより、ポリメトキシフラボノイドの溶解性を高めることができる。
水性媒体中の乳蛋白質量の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよく、例えば０ｍｇ／ｍＬ超～５０ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、又は０．１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬであってよい。
In the present technology, the amount of milk protein in the aqueous medium is preferably 50 mg/mL or less, more preferably 30 mg/mL or less, even more preferably 10 mg/mL or less, particularly preferably 5 mg/mL, relative to the amount of the aqueous medium. It may be the following. This can prevent milk proteins from aggregating or precipitating.
The amount of milk protein in the aqueous medium may be more than 0 mg/mL, for example, 0.001 mg/mL or more, preferably 0.01 mg/mL or more, more preferably 0.1 mg/mL or more, even more preferably 1 mg/mL. It may be mL or more. Thereby, the solubility of polymethoxyflavonoid can be increased.
The numerical range of the amount of milk protein in the aqueous medium may be defined by a combination of any one of the above upper limits and any one of the above lower limits, for example, more than 0 mg/mL to 50 mg/mL, 0.001 mg/mL. It may be from mL to 30 mg/mL, from 0.01 mg/mL to 10 mg/mL, or from 0.1 mg/mL to 5 mg/mL.
本技術において用いられる乳蛋白質がラクトフェリン、カゼイン、若しくはα－ラクトアルブミン又はこれらのうちの２種若しくは３種の組み合わせである場合において、ラクトフェリン、カゼイン、及びα－ラクトアルブミンは、水性媒体の量に対して、合計で好ましくは５０ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは３０ｍｇ／ｍＬ以下、さらにより好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以下、特に好ましくは５ｍｇ／ｍＬ以下の量で水性媒体中に存在させられる。これにより、これらの乳蛋白質が凝集又は析出することを防ぐことができる。
水性媒体中のラクトフェリン、カゼイン、及びα－ラクトアルブミンの合計量は０ｍｇ／ｍＬ超であればよく、例えば０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．１ｍｇ／ｍＬ以上、さらにより好ましくは１ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。これにより、ポリメトキシフラボノイドの溶解量、特にはノビレチン及び／又はタンゲレチンの溶解量を高めることができる。
水性媒体中のラクトフェリン、カゼイン、及びα－ラクトアルブミンの合計量の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよく、例えば０ｍｇ／ｍＬ超～５０ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬであってよい。
When the milk protein used in the present technology is lactoferrin, casein, or α-lactalbumin, or a combination of two or three of these, the lactoferrin, casein, and α-lactalbumin are added to the amount of the aqueous medium. On the other hand, it is present in the aqueous medium in a total amount of preferably 50 mg/mL or less, more preferably 30 mg/mL or less, even more preferably 10 mg/mL or less, particularly preferably 5 mg/mL or less. This can prevent these milk proteins from aggregating or precipitating.
The total amount of lactoferrin, casein, and α-lactalbumin in the aqueous medium may be more than 0 mg/mL, for example, 0.001 mg/mL or more, preferably 0.01 mg/mL or more, more preferably 0.1 mg/mL. mL or more, even more preferably 1 mg/mL or more. This makes it possible to increase the amount of polymethoxyflavonoid dissolved, particularly the amount of nobiletin and/or tangeretin dissolved.
The numerical range of the total amount of lactoferrin, casein, and α-lactalbumin in the aqueous medium may be defined by a combination of any one of the above upper limits and any one of the above lower limits, for example, more than 0 mg/mL. ~50 mg/mL, 0.001 mg/mL to 30 mg/mL, 0.01 mg/mL to 10 mg/mL, 0.1 mg/mL to 5 mg/mL.
（３）水性媒体
本技術において用いられる水性媒体は、乳蛋白質を溶解させることができるものから選択されてよい。すなわち、本技術において、好ましくは乳蛋白質を溶解可能な水性媒体が用いられる。当該水性媒体は、例えば水又は水溶液であってよい。水溶液に含まれる成分として、例えば糖、アルコール、フレーバー及び着色料を挙げることができる。
(3) Aqueous medium The aqueous medium used in the present technology may be selected from those capable of dissolving milk protein. That is, in the present technology, preferably an aqueous medium that can dissolve milk protein is used. The aqueous medium may be, for example, water or an aqueous solution. Components contained in the aqueous solution include, for example, sugars, alcohols, flavors, and colorants.
当該水性媒体は、乳蛋白質が溶解可能であるように、その組成及び／又は物性が調整されてよい。乳蛋白質が水性媒体中に溶解された状態で存在することが、ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上に寄与する。すなわち、本技術において、好ましくは、前記乳蛋白質は前記水性媒体中に溶解した状態で存在している。 The composition and/or physical properties of the aqueous medium may be adjusted so that milk proteins can be dissolved therein. The presence of milk protein in a dissolved state in an aqueous medium contributes to improving the solubility of polymethoxyflavonoids. That is, in the present technology, preferably the milk protein exists in a dissolved state in the aqueous medium.
例えば、前記乳蛋白質としてラクトフェリンが用いられる場合、当該水性媒体のｐＨは、好ましくは３～８、より好ましくは５～７であってよい。また、前記乳蛋白質としてラクトフェリンが用いられる場合、当該水性媒体の塩濃度は、好ましくは２０ｍＭ～１ｍＭ、より好ましくは５ｍＭ～１ｍＭであってよい。水性媒体をこのように調整することによって、ラクトフェリンの析出を防ぐことができる。 For example, when lactoferrin is used as the milk protein, the pH of the aqueous medium may be preferably 3 to 8, more preferably 5 to 7. Furthermore, when lactoferrin is used as the milk protein, the salt concentration of the aqueous medium may be preferably 20 mM to 1 mM, more preferably 5 mM to 1 mM. By adjusting the aqueous medium in this manner, precipitation of lactoferrin can be prevented.
例えば、前記乳蛋白質としてカゼインが用いられる場合、当該水性媒体のｐＨは、好ましくは５～８、より好ましくは６～７であってよい。また、前記乳蛋白質としてカゼインが用いられる場合、当該水性媒体の塩濃度は、好ましくは５０ｍＭ～３ｍＭ、より好ましくは１０ｍＭ～３ｍＭであってよい。水性媒体をこのように調整することによってカゼインの析出を防ぐことができる。For example, when casein is used as the milk protein, the pH of the aqueous medium may preferably be 5 to 8, more preferably 6 to 7. Furthermore, when casein is used as the milk protein, the salt concentration of the aqueous medium may preferably be 50 mM to 3 mM, more preferably 10 mM to 3 mM. By adjusting the aqueous medium in this manner, precipitation of casein can be prevented.
例えば、前記乳蛋白質としてα－ラクトアルブミンが用いられる場合、当該水性媒体のｐＨは、好ましくは５～８、より好ましくは６～７であってよい。また、前記乳蛋白質としてα－ラクトアルブミンが用いられる場合、当該水性媒体の塩濃度は、好ましくは３０ｍＭ～１ｍＭ、より好ましくは５ｍＭ～１ｍＭであってよい。水性媒体をこのように調整することによってα－ラクトアルブミンの析出を防ぐことができる。 For example, when α-lactalbumin is used as the milk protein, the pH of the aqueous medium may be preferably 5 to 8, more preferably 6 to 7. Further, when α-lactalbumin is used as the milk protein, the salt concentration of the aqueous medium may be preferably 30mM to 1mM, more preferably 5mM to 1mM. By adjusting the aqueous medium in this manner, precipitation of α-lactalbumin can be prevented.
（４）溶解性
本技術において、ポリメトキシフラボノイドの溶解性を判定するために、ポリメトキシフラボノイドの水性媒体への溶解量が測定されてよい。当該溶解量が増加していることによって、ポリメトキシフラボノイドの溶解性が向上していると判定されてよい。
(4) Solubility
In the present technology, in order to determine the solubility of polymethoxyflavonoids, the amount of polymethoxyflavonoids dissolved in an aqueous medium may be measured. It may be determined that the solubility of the polymethoxyflavonoid is improved due to the increase in the dissolved amount.
前記溶解量は、例えば水性媒体中のポリメトキシフラボノイドに起因するＨＰＬＣシグナル強度を測定することによって決定されてよい。当該測定は、以下の実施例において説明した方法により行われてよい。以下の実施例ではノビレチン又はタンゲレチンの溶解量を、これらの標準品を用いてＨＰＬＣにより測定している。他のポリメトキシフラボノイドについても同様に、その標準品を用いることで、ＨＰＬＣにより溶解量を決定することができる。The amount of dissolution may be determined, for example, by measuring the HPLC signal intensity attributable to the polymethoxyflavonoid in the aqueous medium. The measurement may be performed by the method described in the following examples. In the following examples, the amount of dissolution of nobiletin or tangeretin is measured by HPLC using these standards. The amount of dissolution of other polymethoxyflavonoids can be determined by HPLC in the same manner by using the standards.
（５）本技術の方法において行われる工程
本技術の方法において、水性媒体中にポリメトキシフラボノイド及び乳蛋白質が存在させられる。ポリメトキシフラボノイド及び乳蛋白質のうち、ポリメトキシフラボノイドが先に水性媒体へ添加され、次に乳蛋白質が添加されてよく、又は、乳蛋白質が先に水性媒体へ添加され、次にポリメトキシフラボノイドが添加されてもよい。代替的には、ポリメトキシフラボノイド及び乳蛋白質が同時に水性媒体に添加されてもよい。
(5) Steps performed in the method of the present technology In the method of the present technology, polymethoxyflavonoids and milk protein are present in the aqueous medium. Of the polymethoxyflavonoids and milk proteins, the polymethoxyflavonoids may be added to the aqueous medium first and then the milk proteins, or the milk proteins may be added to the aqueous medium first and then the polymethoxyflavonoids are added. May be added. Alternatively, polymethoxyflavonoids and milk protein may be added to the aqueous medium at the same time.
本技術の方法において、乳蛋白質は、固形（例えば粉末）の状態で水性媒体に添加されてよく、又は、乳蛋白質が溶解されている水溶液又は乳蛋白質が分散された水分散液の状態で水性媒体に添加されてもよい。
特に好ましくは、本技術の方法において、乳蛋白質は、溶解した状態で水性媒体中に存在させられる。乳蛋白質が水性媒体中に溶解した状態で存在することが、ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上に貢献する。例えば、本技術の方法において、乳蛋白質の水溶液及びポリメトキシフラボノイドが水に懸濁された懸濁液が用意され、次に、当該水溶液及び当該懸濁液が混合されることによって、水性媒体中にポリメトキシフラボノイド及び乳蛋白質が存在させられる。
In the method of the present technology, the milk protein may be added to the aqueous medium in a solid state (e.g., powder) or in the form of an aqueous solution in which the milk protein is dissolved or an aqueous dispersion in which the milk protein is dispersed. May be added to the medium.
Particularly preferably, in the method of the present technology, the milk protein is present in dissolved form in the aqueous medium. The presence of milk protein in a dissolved state in an aqueous medium contributes to improving the solubility of polymethoxyflavonoids. For example, in the method of the present technology, an aqueous solution of milk protein and a suspension in which polymethoxyflavonoids are suspended in water are prepared, and then the aqueous solution and the suspension are mixed to form an aqueous solution in an aqueous medium. Polymethoxyflavonoids and milk proteins are present in the protein.
本技術の好ましい実施態様に従い、水性媒体中にポリメトキシフラボノイド及び乳蛋白質を存在させた後に、ポリメトキシフラボノイド及び乳蛋白質を含む水性媒体を撹拌又は振とうする撹拌又は振とう工程が行われうる。当該工程により、ポリメトキシフラボノイドの水性媒体への溶解量を高めることができる。当該撹拌又は振とうは、例えば水性媒体が透明になるまで又は目視により固形物が確認できなくなるまで継続されてよい。当該撹拌又は振とうは、例えば２０℃～５０℃で３０分間～１５０分間、好ましくは３０℃～４５℃で４０分間～１２０分間行われてよい。これにより、ポリメトキシフラボノイドを水性媒体に溶解させることができる。 According to a preferred embodiment of the present technology, after the polymethoxyflavonoid and milk protein are present in the aqueous medium, a stirring or shaking step of stirring or shaking the aqueous medium containing the polymethoxyflavonoid and milk protein may be performed. Through this step, the amount of polymethoxyflavonoid dissolved in the aqueous medium can be increased. The stirring or shaking may be continued, for example, until the aqueous medium becomes transparent or until solids are no longer visible. The stirring or shaking may be performed, for example, at 20° C. to 50° C. for 30 minutes to 150 minutes, preferably at 30° C. to 45° C. for 40 minutes to 120 minutes. This allows the polymethoxyflavonoid to be dissolved in the aqueous medium.
本技術の方法において、水性媒体中にポリメトキシフラボノイド及び乳蛋白質を溶解させて得られた溶液が、加熱処理に付されてもよい。当該加熱処理によって、当該溶液を殺菌することができる。本技術の方法において、ポリメトキシフラボノイドの溶解性が向上されているので、当該溶液が加熱処理後に常温に戻ったときにポリメトキシフラボノイドの凝集及び／又は析出を抑制することができる。当該加熱処理は、例えば５０℃～１５０℃、好ましくは７０℃～１３０℃で行われてよい。加熱処理が行われる時間は、加熱処理における温度に応じて当業者により適宜変更されてよい。当該時間は、例えば１５秒間～２０分間、好ましくは３分間～１５分間でありうる。 In the method of the present technology, a solution obtained by dissolving polymethoxyflavonoids and milk protein in an aqueous medium may be subjected to heat treatment. The solution can be sterilized by the heat treatment. In the method of the present technology, since the solubility of polymethoxyflavonoid is improved, aggregation and/or precipitation of polymethoxyflavonoid can be suppressed when the solution returns to room temperature after heat treatment. The heat treatment may be performed at, for example, 50°C to 150°C, preferably 70°C to 130°C. The time period during which the heat treatment is performed may be changed as appropriate by those skilled in the art depending on the temperature in the heat treatment. The time can be, for example, from 15 seconds to 20 minutes, preferably from 3 minutes to 15 minutes.
本技術の方法において、乳蛋白質は、好ましくは水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの質量の０．１倍以上の質量で当該水性媒体中に存在させられてよく、より好ましくは０．３倍以上の質量で当該水性媒体中に存在させられてよい。特に好ましくは、水性媒体中の乳蛋白質の質量は、当該水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの質量以上である。例えば、水性媒体中の乳蛋白質の質量は、当該水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの質量の１．１倍以上、１．３倍以上、１．５倍以上、２倍以上、又は２．５倍以上の質量である。これにより、乳蛋白質による溶解性向上作用がより効果的に発揮される。
また、本技術の方法において、乳蛋白質は、好ましくは水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの質量の１００倍以下、より好ましくは５０倍以下、さらにより好ましくは３０倍以下の質量で、水性媒体中に存在させられる。これにより、過剰量の乳蛋白質が水性媒体中に存在することに伴う乳蛋白質の析出を防ぐことができ、効率的にポリメトキシフラボノイドの溶解性を向上させることができる。
水性媒体中の乳蛋白質の質量とポリメトキシフラボノイドの質量との比率の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよい。水性媒体中の乳蛋白質の質量は、水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの質量の、例えば０．１倍～１００倍、０．３倍～５０倍、又は１．１倍～３０倍であってよい。
以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドとの比率は、乳蛋白質がラクトフェリン、カゼイン、及びα－ラクトアルブミンのうちの１つ又は２つ以上の組み合わせである場合、及び、乳蛋白質がラクトフェリンである場合についても当てはまる。また、以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドの比率は、ポリメトキシフラボノイドがノビレチン及び／又はタンゲレチンである場合についても当てはまる。
例えば、以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドとの比率は、乳蛋白質がラクトフェリンであり且つポリメトキシフラボノイドがノビレチンである場合にも当てはまる。例えば、水性媒体中のラクトフェリンの質量が、当該水性媒体中のノビレチンの質量の０．１倍以上若しくは０．３倍以上であってよく、当該水性媒体中のノビレチンの質量以上であってよく、又は、当該水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの質量の１．１倍以上、１．３倍以上、１．５倍以上、２倍以上、若しくは２．５倍以上の質量であってよい。
In the method of the present technology, the milk protein may be present in the aqueous medium preferably at least 0.1 times the mass of the polymethoxyflavonoid in the aqueous medium, more preferably at least 0.3 times the mass of the polymethoxyflavonoid in the aqueous medium. mass may be present in the aqueous medium. Particularly preferably, the mass of milk protein in the aqueous medium is greater than or equal to the mass of polymethoxyflavonoid in the aqueous medium. For example, the mass of milk protein in the aqueous medium is 1.1 times or more, 1.3 times or more, 1.5 times or more, 2 times or more, or 2.5 times the mass of polymethoxyflavonoid in the aqueous medium. The mass is as follows. Thereby, the solubility improving effect of milk protein is more effectively exerted.
Further, in the method of the present technology, the milk protein is preferably contained in the aqueous medium in a mass that is 100 times or less, more preferably 50 times or less, and even more preferably 30 times or less than the mass of the polymethoxyflavonoid in the aqueous medium. made to exist. Thereby, precipitation of milk protein due to the presence of an excessive amount of milk protein in the aqueous medium can be prevented, and the solubility of polymethoxyflavonoid can be efficiently improved.
The numerical range of the ratio of the mass of milk protein to the mass of polymethoxyflavonoid in the aqueous medium may be defined by a combination of any one of the above upper limits and any one of the above lower limits. The mass of milk protein in the aqueous medium may be, for example, 0.1 to 100 times, 0.3 to 50 times, or 1.1 to 30 times the mass of polymethoxyflavonoid in the aqueous medium. .
The ratio of milk protein and polymethoxyflavonoids described above applies when the milk protein is one or a combination of two or more of lactoferrin, casein, and α-lactalbumin, and when the milk protein is lactoferrin. The same applies to cases. Moreover, the ratio of milk protein and polymethoxyflavonoid described above also applies when the polymethoxyflavonoid is nobiletin and/or tangeretin.
For example, the ratio of milk protein to polymethoxyflavonoid described above applies even when the milk protein is lactoferrin and the polymethoxyflavonoid is nobiletin. For example, the mass of lactoferrin in the aqueous medium may be 0.1 times or more or 0.3 times or more the mass of nobiletin in the aqueous medium, and may be more than the mass of nobiletin in the aqueous medium, Alternatively, the mass may be 1.1 times or more, 1.3 times or more, 1.5 times or more, 2 times or more, or 2.5 times or more the mass of the polymethoxyflavonoid in the aqueous medium.
（６）本技術に従う方法の適用例
本技術に従う方法は、ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上が求められる種々の局面において使用されてよい。例えば、ポリメトキシフラボノイド含有水溶液の製造において、特にはノビレチン及び／又はタンゲレチン含有水溶液の製造において、本技術に従う方法が使用されてよい。当該水溶液は、例えば飲食品添加用材料又は飲食品である。すなわち、ポリメトキシフラボノイドを含有する飲食品添加用材料又は飲食品の製造において、特にはノビレチン及び／又はタンゲレチンを含有する飲食品添加用材料又は飲食品の製造において、本技術に従う方法が使用されてよい。このように、本技術は、本技術に従う溶解性向上方法を行うことを含む、ポリメトキシフラボノイド含有水溶液の製造方法も提供する。
(6) Application examples of the method according to the present technology The method according to the present technology may be used in various situations where improvement in solubility of polymethoxyflavonoids is required. For example, the method according to the present technology may be used in the production of aqueous solutions containing polymethoxyflavonoids, in particular in the production of aqueous solutions containing nobiletin and/or tangeretin. The aqueous solution is, for example, a material for adding food or drink or a food or drink. That is, the method according to the present technology is used in the production of food and drink additive materials or food and drink products containing polymethoxyflavonoids, particularly in the production of food and drink additive materials or food and drink products containing nobiletin and/or tangeretin. good. Thus, the present technology also provides a method for producing a polymethoxyflavonoid-containing aqueous solution, which includes performing the solubility improvement method according to the present technology.
本技術に従う方法によって、ポリメトキシフラボノイドを水性媒体に溶解させることが可能となる。そのため、本技術に従う方法は、例えばポリメトキシフラボノイドが溶解された透明な水溶液、又は、固形のポリメトキシフラボノイドを含まず且つポリメトキシフラボノイドが溶解された水溶液を製造するために使用されてよい。すなわち、本技術は、本技術に従う溶解性向上方法を行うことを含む、前記水溶液のいずれかの製造方法も提供する。The method according to the present technology makes it possible to dissolve polymethoxyflavonoid in an aqueous medium. Therefore, the method according to the present technology may be used to produce, for example, a clear aqueous solution in which polymethoxyflavonoid is dissolved, or an aqueous solution in which polymethoxyflavonoid is dissolved but does not contain solid polymethoxyflavonoid. That is, the present technology also provides a method for producing any of the above aqueous solutions, which includes carrying out the solubility improvement method according to the present technology.
２．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上用組成物
本技術は、乳蛋白質を有効成分として含む、ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上用組成物も提供する。当該組成物に含まれる乳蛋白質は、ポリメトキシフラボノイドの溶解性を向上させるために適している。そのため、当該組成物によって、ポリメトキシフラボノイドの溶解性が向上される。また、当該組成物を用いることで、例えば後述する本技術の水溶液を容易に調製することができる。
2. Composition for improving the solubility of polymethoxyflavonoids The present technology also provides a composition for improving the solubility of polymethoxyflavonoids, which contains milk protein as an active ingredient. The milk protein contained in the composition is suitable for improving the solubility of polymethoxyflavonoids. Therefore, the composition improves the solubility of polymethoxyflavonoids. Further, by using the composition, for example, an aqueous solution of the present technology described below can be easily prepared.
前記ポリメトキシフラボノイド及び前記乳蛋白質は、上記「１．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法」において説明したとおりであり、その説明が前記組成物についても当てはまる。当該溶解性及びその向上についても、上記「１．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法」において説明したとおりであり、その説明が前記組成物についても当てはまる。
また、前記組成物は、水性媒体に添加されるものである。当該水性媒体に添加された場合に、当該水性媒体へのポリメトキシフラボノイドの溶解性が向上される。当該水性媒体についても、上記「１．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法」において行った説明があてはまる。
The polymethoxyflavonoid and the milk protein are as explained in the above "1. Method for improving solubility of polymethoxyflavonoid", and the same explanation also applies to the composition. The solubility and its improvement are also as explained in the above "1. Method for improving solubility of polymethoxyflavonoid", and the same explanation also applies to the composition.
Further, the composition is added to an aqueous medium. When added to the aqueous medium, the solubility of the polymethoxyflavonoid in the aqueous medium is improved. The explanation given in "1. Method for improving solubility of polymethoxyflavonoid" above also applies to the aqueous medium.
前記組成物は、ポリメトキシフラボノイドが溶解されるべき水性媒体中に、当該組成物に含まれる乳蛋白質を当該ポリメトキシフラボノイドの質量の例えば０．１倍以上の質量で存在させるように用いられてよく、好ましくは０．３倍以上の質量で存在させるように用いられてよい。特に好ましくは、前記組成物は、ポリメトキシフラボノイドが溶解されるべき水性媒体中に、当該組成物に含まれる乳蛋白質量がポリメトキシフラボノイドの質量以上となるように用いられてよく、例えば、前記水性媒体中の乳蛋白質量がポリメトキシフラボノイドの質量の１．１倍以上、１．３倍以上、１．５倍以上、２倍以上、又は２．５倍以上となるように、前記組成物は用いられてよい。これにより、乳蛋白質による溶解性向上作用がより効果的に発揮される。
また、本技術の方法において、前記組成物は、好ましくはポリメトキシフラボノイドが溶解される水性媒体中に、当該組成物に含まれる乳蛋白質が当該ポリメトキシフラボノイドの質量の１００倍以下、より好ましくは５０倍以下、さらにより好ましくは３０倍以下の質量で存在するように用いられてよい。これにより、過剰量の乳蛋白質が水性媒体中に存在することに伴う乳蛋白質の析出を防ぐことができ、効率的にポリメトキシフラボノイドの溶解性を向上させることができる。
水性媒体中の乳蛋白質の質量とポリメトキシフラボノイドの質量との比率の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよい。水性媒体中の乳蛋白質の質量は、水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの質量の、例えば０．１倍～１００倍、０．３倍～５０倍、又は１．１倍～３０倍であってよい。
以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドとの比率は、乳蛋白質がラクトフェリン、カゼイン、及びα－ラクトアルブミンのうちの１つ又は２つ以上の組み合わせである場合、及び、乳蛋白質がラクトフェリンである場合についても当てはまる。また、以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドの比率は、ポリメトキシフラボノイドがノビレチン及び／又はタンゲレチンである場合についても当てはまる。
例えば、以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドとの比率は、乳蛋白質がラクトフェリンであり且つポリメトキシフラボノイドがノビレチンである場合にも当てはまる。例えば、水性媒体中のラクトフェリンの質量が、当該水性媒体中のノビレチンの質量の０．１倍以上若しくは０．３倍以上であってよく、当該水性媒体中のノビレチンの質量以上であってよく、又は、当該水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの質量の１．１倍以上、１．３倍以上、１．５倍以上、２倍以上、若しくは２．５倍以上の質量であってよい。
The composition is used in such a way that the milk protein contained in the composition is present in an aqueous medium in which the polymethoxyflavonoid is to be dissolved in a mass that is, for example, 0.1 times or more the mass of the polymethoxyflavonoid. It may be used in such a manner that it is present, preferably in an amount of 0.3 times or more by mass. Particularly preferably, the composition may be used in an aqueous medium in which the polymethoxyflavonoid is to be dissolved, such that the amount of milk protein contained in the composition is greater than or equal to the mass of the polymethoxyflavonoid. The composition is prepared such that the amount of milk protein in the aqueous medium is 1.1 times or more, 1.3 times or more, 1.5 times or more, 2 times or more, or 2.5 times or more the mass of the polymethoxyflavonoid. may be used. Thereby, the solubility improving effect of milk protein is more effectively exerted.
Further, in the method of the present technology, the composition preferably contains milk protein contained in the composition in an aqueous medium in which the polymethoxyflavonoid is dissolved, more preferably 100 times or less of the mass of the polymethoxyflavonoid. It may be used to be present in up to 50 times, even more preferably up to 30 times the weight. Thereby, precipitation of milk protein due to the presence of an excessive amount of milk protein in the aqueous medium can be prevented, and the solubility of polymethoxyflavonoid can be efficiently improved.
The numerical range of the ratio of the mass of milk protein to the mass of polymethoxyflavonoid in the aqueous medium may be defined by a combination of any one of the above upper limits and any one of the above lower limits. The mass of milk protein in the aqueous medium may be, for example, 0.1 to 100 times, 0.3 to 50 times, or 1.1 to 30 times the mass of polymethoxyflavonoid in the aqueous medium. .
The ratio of milk protein and polymethoxyflavonoids described above applies when the milk protein is one or a combination of two or more of lactoferrin, casein, and α-lactalbumin, and when the milk protein is lactoferrin. The same applies to cases. Moreover, the ratio of milk protein and polymethoxyflavonoid described above also applies when the polymethoxyflavonoid is nobiletin and/or tangeretin.
For example, the ratio of milk protein to polymethoxyflavonoid described above applies even when the milk protein is lactoferrin and the polymethoxyflavonoid is nobiletin. For example, the mass of lactoferrin in the aqueous medium may be 0.1 times or more or 0.3 times or more the mass of nobiletin in the aqueous medium, and may be more than the mass of nobiletin in the aqueous medium, Alternatively, the mass may be 1.1 times or more, 1.3 times or more, 1.5 times or more, 2 times or more, or 2.5 times or more the mass of the polymethoxyflavonoid in the aqueous medium.
前記組成物は、例えばポリメトキシフラボノイドが溶解された水溶液を製造する為に用いられてよく、特にはポリメトキシフラボノイドが溶解された透明な水溶液又はポリメトキシフラボノイドの固形物を含まず且つポリメトキシフラボノイドが溶解された水溶液を製造する為に用いられてよい。前記組成物の有する溶解性向上作用によって、これらの溶液を調製することが可能となる。これらの水溶液の製造における前記組成物の使用方法は、上記「１．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法」において説明したとおりであってよい。The composition may be used, for example, to produce an aqueous solution in which a polymethoxyflavonoid is dissolved, and in particular, to produce a clear aqueous solution in which a polymethoxyflavonoid is dissolved, or an aqueous solution in which a polymethoxyflavonoid is dissolved and does not contain solid polymethoxyflavonoid. The solubility enhancing effect of the composition makes it possible to prepare these solutions. The method of using the composition in producing these aqueous solutions may be as described above in "1. Method for improving the solubility of polymethoxyflavonoid".
前記組成物は、乳蛋白質を、当該組成物の質量に対して例えば５０質量％以上の割合で含み、好ましくは６０質量％以上、より好ましくは７０質量％以上、さらにより好ましくは８０質量％以上、特に好ましくは９０質量％以上の割合で含むものであってよい。
本技術の一つの実施態様に従い、前記組成物は、ラクトフェリン、カゼイン、及びαラクトアルブミンのうちの１つ又は２つ以上の組み合わせを、当該組成物の質量に対して例えば５０質量％以上の割合で含み、好ましくは６０質量％以上、より好ましくは７０質量％以上、さらにより好ましくは８０質量％以上、特に好ましくは９０質量％以上の割合で含むものであってよい。特に好ましい実施態様において、前記組成物は、ラクトフェリンを、当該組成物の質量に対して例えば５０質量％以上の割合で含み、好ましくは６０質量％以上、より好ましくは７０質量％以上、さらにより好ましくは８０質量％以上、特に好ましくは９０質量％以上の割合で含むものであってよい。
The composition contains milk protein in a proportion of, for example, 50% by mass or more based on the mass of the composition, preferably 60% by mass or more, more preferably 70% by mass or more, and even more preferably 80% by mass or more. , particularly preferably in a proportion of 90% by mass or more.
According to one embodiment of the present technology, the composition contains one or more combinations of lactoferrin, casein, and alpha-lactalbumin in a proportion of, for example, 50% by mass or more based on the mass of the composition. The content may be preferably 60% by mass or more, more preferably 70% by mass or more, even more preferably 80% by mass or more, particularly preferably 90% by mass or more. In a particularly preferred embodiment, the composition contains lactoferrin in a proportion of, for example, 50% by mass or more based on the mass of the composition, preferably 60% by mass or more, more preferably 70% by mass or more, and even more preferably may be contained in an amount of 80% by mass or more, particularly preferably 90% by mass or more.
前記組成物は、乳蛋白質に加えてポリメトキシフラボノイドを含んでもよい。この場合、当該乳蛋白質の含有質量は、好ましくは当該ポリメトキシフラボノイドの含有質量の０．１倍以上であってよく、好ましくは０．３倍以上であってよい。当該乳蛋白質の含有質量は、当該ポリメトキシフラボノイドの含有質量以上であり、例えばポリメトキシフラボノイドの含有質量の１．１倍以上、１．３倍以上、１．５倍以上、２倍以上、又は２．５倍以上であってよい。また、当該乳蛋白質の含有質量は、好ましくはポリメトキシフラボノイドの含有質量の１００倍以下、より好ましくは５０倍以下、さらにより好ましくは３０倍以下の含有質量であってよい。当該組成物を水性媒体に添加することで、乳蛋白質によるポリメトキシフラボノイド溶解性向上効果により、後述する水溶液を容易に調製することができる。
乳蛋白質の含有質量とポリメトキシフラボノイドの含有質量との比率は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよい。乳蛋白質の含有質量は、ポリメトキシフラボノイドの含有質量の、例えば０．１倍～１００倍、０．３倍～５０倍、又は１．１倍～３０倍であってよい。
The composition may include polymethoxyflavonoids in addition to milk proteins. In this case, the content mass of the milk protein may be preferably 0.1 times or more, preferably 0.3 times or more, the content mass of the polymethoxyflavonoid. The content mass of the milk protein is greater than or equal to the content mass of the polymethoxyflavonoid, for example, 1.1 times or more, 1.3 times or more, 1.5 times or more, 2 times or more, or It may be 2.5 times or more. Further, the content mass of the milk protein may be preferably 100 times or less, more preferably 50 times or less, and even more preferably 30 times or less than the polymethoxyflavonoid content mass. By adding the composition to an aqueous medium, the aqueous solution described below can be easily prepared due to the effect of milk protein on improving the solubility of polymethoxyflavonoid.
The ratio of the content mass of milk protein to the content mass of polymethoxyflavonoids may be defined by a combination of any one of the above upper limits and any one of the above lower limits. The content mass of milk protein may be, for example, 0.1 to 100 times, 0.3 to 50 times, or 1.1 to 30 times the content mass of polymethoxyflavonoid.
３．水溶液
本技術に従う水溶液は、ポリメトキシフラボノイド又はポリメトキシフラボノイドを含有する柑橘類エキス、黒ウコンエキス、ヨモギエキス、若しくはクミスクチンエキスと乳蛋白質とを水性媒体中に含む。当該水溶液は、ポリメトキシフラボノイド、特にはノビレチン及び／又はタンゲレチンを、溶解した状態で含みうる。
前記水溶液に含まれるポリメトキシフラボノイド及びこれらエキス並びに乳蛋白質、並びに、前記水溶液の母体となる水性媒体は、上記「１．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法」において説明したとおりであり、その説明が前記水溶液についても当てはまる。本技術に従う水溶液において、当該水溶液に含まれているポリメトキシフラボノイドの溶解性が向上されている。例えば、本技術に従う水溶液は、透明な水溶液であってよく、又は、ポリメトキシフラボノイドの固形物を含まない水溶液であってもよい。このような水溶液は、例えば飲食品の材料として有用である。
3. Aqueous solution The aqueous solution according to the present technology includes polymethoxyflavonoid or a citrus extract containing polymethoxyflavonoid, black turmeric extract, mugwort extract, or cumis cutin extract and milk protein in an aqueous medium. The aqueous solution may contain polymethoxyflavonoids, in particular nobiletin and/or tangeretin, in dissolved form.
The polymethoxyflavonoids, their extracts, and milk proteins contained in the aqueous solution, as well as the aqueous medium serving as the base of the aqueous solution, are as explained in "1. Method for improving solubility of polymethoxyflavonoid" above, and the explanation is as follows. This also applies to the aqueous solution. In the aqueous solution according to the present technology, the solubility of the polymethoxyflavonoid contained in the aqueous solution is improved. For example, an aqueous solution according to the present technology may be a clear aqueous solution or a solids-free aqueous solution of polymethoxyflavonoids. Such an aqueous solution is useful, for example, as a material for food and drink products.
本技術に従う水溶液は、例えばポリメトキシフラボノイドの生体（特にはヒト）への有用性を生体にもたらすために用いられるものであってよい。当該生体への有用性として、例えば、抗炎症作用、腫瘍の浸潤、拡散、又は転移を防ぐ作用、皮膚炎抑制作用、肝炎抑制作用、軟骨分解抑制作用、筋萎縮抑制作用及びニューロンの長期増強促進作用を挙げることができる。すなわち、本技術に従う水溶液は、これらの作用のいずれか１つ又は２つ以上を生体（特にはヒト）に対して与えるために用いられる水溶液であってよい。例えば、本技術に従う水溶液は、抗炎症用、抗腫瘍用、皮膚炎抑制用、肝炎抑制用、軟骨分解抑制用、又はニューロンの長期増強促進用の水溶液であってよい。
本技術に従う水溶液は、ラクトフェリンを含むので、ラクトフェリンの生体（特にはヒト）への有用性を生体にもたらすために用いられるものであってもよい。ラクトフェリンの生体への有用性として、ヒト又は非ヒト動物の腸内にビフィズス菌等の有用細菌の定着を促進する作用、ビフィズス菌増殖因子としての作用、サイトメガロウイルス又はヒト免疫不全ウイルスに対する抗ウイルス作用免疫賦活作用、細胞増殖作用、抗腫瘍作用、抗リュウマチ作用、薬剤に起因する慢性肝障害に対する肝機能改善作用、抗ストレス作用、鎮痛作用、糖尿病患者などにおける血糖値を調節する作用、及び抗菌作用及びカテコール－Ｏ－メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害活性を挙げることができる。すなわち、本技術に従う水溶液は、これらの作用のいずれか１つ又は２つ以上を生体（特にはヒト）に対して与えるために用いられる水溶液であってよい。例えば、本技術に従う水溶液は、抗菌用又はＣＯＭＴ阻害用の水溶液であってよい。
ＣＯＭＴは、種々の臓器において発現されており、肝臓及び腎臓では高い活性を有する。ＣＯＭＴは、腸、特には腸粘膜においても発現される。神経伝達物質の代謝におけるＣＯＭＴの生理学的役割は、薬学分野において注目されている。
本技術の水溶液は、ポリメトキシフラボノイドの生体への上記有用性及びラクトフェリンの生体への上記有用性の両方を生体にもたらすために用いられるものであってもよい。
The aqueous solution according to the present technology may be used to provide the usefulness of polymethoxyflavonoids to a living body (particularly humans). Examples of the usefulness to the living body include anti-inflammatory effects, effects to prevent tumor invasion, spread, or metastasis, effects to suppress dermatitis, effects to suppress hepatitis, effects to suppress cartilage degradation, effects to suppress muscle atrophy, and effects to promote long-term potentiation of neurons. That is, the aqueous solution according to the present technology may be an aqueous solution used to provide one or more of these effects to a living body (particularly humans). For example, the aqueous solution according to the present technology may be an aqueous solution for anti-inflammatory, anti-tumor, effects to suppress dermatitis, effects to suppress hepatitis, effects to suppress cartilage degradation, or effects to promote long-term potentiation of neurons.
Since the aqueous solution according to the present technology contains lactoferrin, it may be used to provide the usefulness of lactoferrin to a living body (particularly humans). Examples of the usefulness of lactoferrin to a living body include an action of promoting the establishment of useful bacteria such as bifidobacteria in the intestines of humans or non-human animals, an action as a bifidobacteria growth factor, an antiviral action against cytomegalovirus or human immunodeficiency virus, an immunostimulating action, a cell proliferation action, an antitumor action, an antirheumatic action, an action of improving liver function against chronic liver disorders caused by drugs, an antistress action, an analgesic action, an action of regulating blood glucose levels in diabetic patients, and an antibacterial action and a catechol-O-methyltransferase (COMT) inhibitory activity. That is, the aqueous solution according to the present technology may be an aqueous solution used to provide one or more of these actions to a living body (particularly humans). For example, the aqueous solution according to the present technology may be an aqueous solution for antibacterial or COMT inhibition.
COMT is expressed in various organs, with high activity in the liver and kidney. COMT is also expressed in the intestine, particularly in the intestinal mucosa. The physiological role of COMT in the metabolism of neurotransmitters has attracted attention in the pharmaceutical field.
The aqueous solution of the present technology may be used to provide both the above-mentioned benefits of polymethoxyflavonoids and the above-mentioned benefits of lactoferrin to a living body.
本技術の水溶液は、例えば飲食品添加用材料又は飲食品であってよい。本技術の水溶液は、例えば飲料（特には透明飲料）の母体、飲料（特には透明飲料）にポリメトキシフラボノイドを添加するための添加剤、又は飲料（特には透明飲料）自体であってよい。 The aqueous solution of the present technology may be, for example, a food additive material or a food or drink product. The aqueous solution of the present technology may be, for example, a matrix for a beverage (especially a transparent beverage), an additive for adding polymethoxyflavonoids to a beverage (especially a transparent beverage), or the beverage (especially a transparent beverage) itself.
本技術の水溶液中のポリメトキシフラボノイド量（特には上記式に包含される化合物の合計量）は、水性媒体の量に対して好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは５ｍｇ／ｍＬ以下、さらにより好ましくは３ｍｇ／ｍＬ以下、特に好ましくは１ｍｇ／ｍＬ以下であってよい。これにより、ポリメトキシフラボノイドが凝集又は析出することを防ぐことができる。
本技術の水溶液中のポリメトキシフラボノイド量（特には上記式に包含される化合物の合計量）は０ｍｇ／ｍＬ超であればよく、例えば０．０００１ｍｇ／ｍＬ以上、好ましくは０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、さらにより好ましくは０．１ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。これにより、ポリメトキシフラボノイドによる生体への効果がより発揮されやすくなる。
水溶液中のポリメトキシフラボノイド量の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよく、例えば０ｍｇ／ｍＬ超～１０ｍｇ／ｍＬ、０．０００１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬ、又は０．０１ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬであってよい。
The amount of polymethoxyflavonoids (especially the total amount of compounds included in the above formula) in the aqueous solution of the present technology is preferably 10 mg/mL or less, more preferably 5 mg/mL or less, and even more preferably 10 mg/mL or less relative to the amount of the aqueous medium. It may preferably be 3 mg/mL or less, particularly preferably 1 mg/mL or less. This can prevent polymethoxyflavonoids from aggregating or precipitating.
The amount of polymethoxyflavonoids (especially the total amount of compounds included in the above formula) in the aqueous solution of the present technology may be more than 0 mg/mL, for example, 0.0001 mg/mL or more, preferably 0.001 mg/mL or more. , more preferably 0.01 mg/mL or more, even more preferably 0.1 mg/mL or more. This makes it easier for the polymethoxyflavonoid to exert its effects on the living body.
The numerical range of the amount of polymethoxyflavonoids in the aqueous solution may be defined by a combination of any one of the above upper limits and any one of the above lower limits, for example, more than 0 mg/mL to 10 mg/mL, 0.0001 mg/mL. It may be from mL to 5 mg/mL, from 0.001 mg/mL to 3 mg/mL, or from 0.01 mg/mL to 1 mg/mL.
本技術の水溶液中のポリメトキシフラボノイドがノビレチン若しくはタンゲレチン又はこれらの組み合わせである場合において、当該水溶液中のノビレチン及びタンゲレチンの量は、水性媒体の量に対して、合計で好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは５ｍｇ／ｍＬ以下、さらにより好ましくは３ｍｇ／ｍＬ以下、特に好ましくは２ｍｇ／ｍＬ以下の量であってよい。これにより、ノビレチン及び／又はタンゲレチンが凝集又は析出することをより効果的に防ぐことができる。
水性媒体中のノビレチン及びタンゲレチンの合計量は０ｍｇ／ｍＬ超であればよく、例えば０．０００１ｍｇ／ｍＬ以上、好ましくは０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、さらにより好ましくは０．１ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。これにより、ノビレチン及びタンゲレチンによる生体への効果がより発揮されやすくなる。
水性媒体中のノビレチン及びタンゲレチンの合計量の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよく、例えば０ｍｇ／ｍＬ超～１０ｍｇ／ｍＬ、０．０００１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬ、又は０．０１ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬであってよい。
When the polymethoxyflavonoid in the aqueous solution of the present technology is nobiletin, tangeretin, or a combination thereof, the amount of nobiletin and tangeretin in the aqueous solution is preferably 10 mg/mL or less in total, based on the amount of the aqueous medium. The amount may be more preferably 5 mg/mL or less, even more preferably 3 mg/mL or less, particularly preferably 2 mg/mL or less. Thereby, aggregation or precipitation of nobiletin and/or tangeretin can be more effectively prevented.
The total amount of nobiletin and tangeretin in the aqueous medium may be more than 0 mg/mL, for example, 0.0001 mg/mL or more, preferably 0.001 mg/mL or more, more preferably 0.01 mg/mL or more, and even more preferably may be 0.1 mg/mL or more. This makes it easier for nobiletin and tangeretin to exert their effects on the living body.
The numerical range of the total amount of nobiletin and tangeretin in the aqueous medium may be defined by a combination of any one of the above upper limits and any one of the above lower limits, for example, more than 0 mg/mL to 10 mg/mL, 0 It may be from .0001 mg/mL to 5 mg/mL, from 0.001 mg/mL to 3 mg/mL, or from 0.01 mg/mL to 2 mg/mL.
本技術の水溶液中の乳蛋白質量は、水性媒体の量に対して好ましくは５０ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは３０ｍｇ／ｍＬ以下、さらにより好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以下、特に好ましくは５ｍｇ／ｍＬ以下であってよい。これにより、乳蛋白質体が凝集又は析出することを防ぐことができる。
水性媒体中の乳蛋白質量は０ｍｇ／ｍＬ超であればよく、例えば０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．１ｍｇ／ｍＬ以上、さらにより好ましくは１ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。これにより、ポリメトキシフラボノイドの溶解性を高めることができる。
本技術の水溶液中の乳蛋白質量の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよく、例えば０ｍｇ／ｍＬ超～５０ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、又は０．１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬであってよい。
The amount of milk protein in the aqueous solution of the present technology is preferably 50 mg/mL or less, more preferably 30 mg/mL or less, even more preferably 10 mg/mL or less, particularly preferably 5 mg/mL or less relative to the amount of the aqueous medium. It's good. This can prevent milk protein bodies from aggregating or precipitating.
The amount of milk protein in the aqueous medium may be more than 0 mg/mL, for example, 0.001 mg/mL or more, preferably 0.01 mg/mL or more, more preferably 0.1 mg/mL or more, even more preferably 1 mg/mL. It may be mL or more. Thereby, the solubility of polymethoxyflavonoid can be increased.
The numerical range of the amount of milk protein in the aqueous solution of the present technology may be defined by a combination of any one of the above upper limits and any one of the above lower limits, for example, more than 0 mg/mL to 50 mg/mL, 0. 001 mg/mL to 30 mg/mL, 0.01 mg/mL to 10 mg/mL, or 0.1 mg/mL to 5 mg/mL.
本技術の水溶液に含まれる乳蛋白質がラクトフェリン、カゼイン、若しくはα－ラクトアルブミン又はこれらのうちの２種若しくは３種の組み合わせである場合において、ラクトフェリン、カゼイン、及びα－ラクトアルブミンの量は、水性媒体の量に対して、合計で好ましくは５０ｍｇ／ｍＬ以下、より好ましくは３０ｍｇ／ｍＬ以下、さらにより好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以下、特に好ましくは５ｍｇ／ｍＬ以下の量である。これにより、これらの乳蛋白質が凝集又は析出することを防ぐことができる。
水性媒体中のラクトフェリン、カゼイン、及びα－ラクトアルブミンの合計量は０ｍｇ／ｍＬ超であればよく、例えば０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、好ましくは０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、より好ましくは０．１ｍｇ／ｍＬ以上、さらにより好ましくは１ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。これにより、ポリメトキシフラボノイドの溶解量、特にはノビレチン及び／又はタンゲレチンの溶解量を高めることができる。
本技術の水溶液に含まれるラクトフェリン、カゼイン、及びα－ラクトアルブミンの合計量の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよく、例えば０ｍｇ／ｍＬ超～５０ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬ～３０ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬ、又は０．１ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬであってよい。
When the milk protein contained in the aqueous solution of the present technology is lactoferrin, casein, α-lactalbumin, or a combination of two or three of these, the amounts of lactoferrin, casein, and α-lactalbumin are In total, based on the amount of medium, the amount is preferably 50 mg/mL or less, more preferably 30 mg/mL or less, even more preferably 10 mg/mL or less, particularly preferably 5 mg/mL or less. This can prevent these milk proteins from aggregating or precipitating.
The total amount of lactoferrin, casein, and α-lactalbumin in the aqueous medium may be more than 0 mg/mL, for example, 0.001 mg/mL or more, preferably 0.01 mg/mL or more, more preferably 0.1 mg/mL. mL or more, even more preferably 1 mg/mL or more. This makes it possible to increase the amount of polymethoxyflavonoid dissolved, particularly the amount of nobiletin and/or tangeretin dissolved.
The numerical range of the total amount of lactoferrin, casein, and α-lactalbumin contained in the aqueous solution of the present technology may be defined by a combination of any one of the above upper limits and any one of the above lower limits, for example, 0 mg. /mL to >50 mg/mL, 0.001 mg/mL to 30 mg/mL, 0.01 mg/mL to 10 mg/mL, or 0.1 mg/mL to 5 mg/mL.
本技術の水溶液中の乳蛋白質含有量は、好ましくは水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの含有質量の０．１倍以上であってよく、より好ましくは０．３倍以上の質量であってよい。特に好ましくは、当該水性媒体中の乳蛋白質の含有質量は、当該水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの含有質量以上である。例えば、当該水性媒体中の乳蛋白質の含有質量は、当該水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの含有質量の１．１倍以上、１．３倍以上、１．５倍以上、２倍以上、又は２．５倍以上の含有質量である。これにより、乳蛋白質による溶解性向上作用がより効果的に発揮される。
また、本技術の水溶液中の乳蛋白質含有量は、好ましくは水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの含有質量の１００倍以下、より好ましくは５０倍以下、さらにより好ましくは３０倍以下の含有質量であってよい。これにより、過剰量の乳蛋白質が水性媒体中に存在することに伴う乳蛋白質の析出を防ぐことができ、効率的にポリメトキシフラボノイドの溶解性を向上させることができる。
本技術の水溶液中の乳蛋白質含有質量とポリメトキシフラボノイドの含有質量との比率の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよい。乳蛋白質含有質量は、ポリメトキシフラボノイドの含有質量の、例えば０．１倍～１００倍、０．３倍～５０倍、又は１．１倍～３０倍であってよい。
以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドとの比率は、乳蛋白質がラクトフェリン、カゼイン、及びα－ラクトアルブミンのうちの１つ又は２つ以上の組み合わせである場合、及び、乳蛋白質がラクトフェリンである場合についても当てはまる。また、以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドの比率は、ポリメトキシフラボノイドがノビレチン及び／又はタンゲレチンである場合についても当てはまる。
例えば、以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドとの比率は、乳蛋白質がラクトフェリンであり且つポリメトキシフラボノイドがノビレチンである場合にも当てはまる。例えば、水性媒体中のラクトフェリンの質量が、当該水性媒体中のノビレチンの質量の０．１倍以上若しくは０．３倍以上であってよく、当該水性媒体中のノビレチンの質量以上であってよく、又は、当該水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの質量の１．１倍以上、１．３倍以上、１．５倍以上、２倍以上、若しくは２．５倍以上の質量であってよい。
The milk protein content in the aqueous solution of the present technology may be preferably 0.1 times or more, more preferably 0.3 times or more, of the polymethoxyflavonoid content in the aqueous medium. Particularly preferably, the milk protein content in the aqueous medium is equal to or more than the polymethoxyflavonoid content in the aqueous medium. For example, the milk protein content in the aqueous medium is equal to or more than 1.1 times, 1.3 times, 1.5 times, 2 times, or 2.5 times the polymethoxyflavonoid content in the aqueous medium. This allows the solubility improving effect of the milk protein to be more effectively exerted.
Furthermore, the milk protein content in the aqueous solution of the present technology may be preferably 100 times or less, more preferably 50 times or less, and even more preferably 30 times or less of the content by mass of the polymethoxyflavonoid in the aqueous medium. This makes it possible to prevent precipitation of the milk protein due to the presence of an excessive amount of milk protein in the aqueous medium, and efficiently improve the solubility of the polymethoxyflavonoid.
The range of the ratio of the mass of the milk protein to the mass of the polymethoxyflavonoid in the aqueous solution of the present technology may be defined by a combination of any one of the upper limit values and any one of the lower limit values. The mass of the milk protein may be, for example, 0.1 to 100 times, 0.3 to 50 times, or 1.1 to 30 times the mass of the polymethoxyflavonoid.
The above-mentioned ratio of milk protein to polymethoxyflavonoid also applies when the milk protein is one or a combination of two or more of lactoferrin, casein, and α-lactalbumin, and when the milk protein is lactoferrin. The above-mentioned ratio of milk protein to polymethoxyflavonoid also applies when the polymethoxyflavonoid is nobiletin and/or tangeretin.
For example, the above-mentioned ratio of milk protein to polymethoxyflavonoid also applies when the milk protein is lactoferrin and the polymethoxyflavonoid is nobiletin. For example, the mass of lactoferrin in an aqueous medium may be 0.1 times or more, or 0.3 times or more, the mass of nobiletin in the aqueous medium, or the mass of nobiletin in the aqueous medium, or the mass of polymethoxyflavonoid in the aqueous medium may be 1.1 times or more, 1.3 times or more, 1.5 times or more, 2 times or more, or 2.5 times or more, the mass of polymethoxyflavonoid in the aqueous medium.
４．ポリメトキシフラボノイド含有水溶液調製用組成物
本技術に従うポリメトキシフラボノイド含有水溶液調製用組成物は、ポリメトキシフラボノイド又はポリメトキシフラボノイドを含有する柑橘類エキス、黒ウコンエキス、ヨモギエキス、若しくはクミスクチンエキスと乳蛋白質とを含む。当該組成物によって、ポリメトキシフラボノイドが溶解された水溶液を容易に製造することができる。当該水溶液は、「３．水溶液」で述べた水溶液あってよい。
前記組成物に含まれるポリメトキシフラボノイド及びこれらエキス並びに乳蛋白質は、上記「１．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法」において説明したとおりであり、その説明が前記組成物についても当てはまる。
4. Composition for Preparing a Polymethoxyflavonoid-Containing Aqueous Solution The composition for preparing a polymethoxyflavonoid-containing aqueous solution according to the present technology comprises polymethoxyflavonoid or a citrus extract, black turmeric extract, mugwort extract, or kumist cutin extract containing polymethoxyflavonoid, and milk protein. including. With this composition, an aqueous solution in which polymethoxyflavonoids are dissolved can be easily produced. The aqueous solution may be the aqueous solution described in "3. Aqueous solution".
The polymethoxyflavonoids, their extracts, and milk proteins contained in the composition are as explained in the above "1. Method for improving the solubility of polymethoxyflavonoids," and the same explanation also applies to the composition.
前記組成物中の乳蛋白質含有量は、好ましくは前記組成物中のポリメトキシフラボノイドの含有質量の０．１倍以上であってよく、より好ましくは０．３倍以上の質量であってよい。特に好ましくは、前記組成物中の乳蛋白質の含有質量は、前記組成物中のポリメトキシフラボノイドの含有質量以上である。例えば、前記組成物中の乳蛋白質の含有質量は、前記組成物中のポリメトキシフラボノイドの含有質量の１．１倍以上、１．３倍以上、１．５倍以上、２倍以上、又は２．５倍以上の含有質量である。これにより、当該組成物を水性媒体に添加した場合に、乳蛋白質による溶解性向上作用がより効果的に発揮される。
また、前記組成物中の乳蛋白質含有量は、好ましくは前記組成物中のポリメトキシフラボノイドの含有質量の１００倍以下、より好ましくは５０倍以下、さらにより好ましくは３０倍以下の含有質量であってよい。これにより、当該組成物を水性媒体に添加した場合に、過剰量の乳蛋白質が水性媒体中に存在することに伴う乳蛋白質の析出を防ぐことができ、効率的にポリメトキシフラボノイドの溶解性を向上させることができる。
前記組成物中の乳蛋白質の含有質量とポリメトキシフラボノイドの含有質量との比率の数値範囲は、上記上限値のいずれか一つと上記下限値のいずれか一つとの組合せにより規定されてよい。乳蛋白質の含有質量は、ポリメトキシフラボノイドの含有質量の、例えば０．１倍～１００倍、０．３倍～５０倍、又は１．１倍～３０倍であってよい。
以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドとの比率は、乳蛋白質がラクトフェリン、カゼイン、及びα－ラクトアルブミンのうちの１つ又は２つ以上の組み合わせである場合、及び、乳蛋白質がラクトフェリンである場合についても当てはまる。また、以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドの比率は、ポリメトキシフラボノイドがノビレチン及び／又はタンゲレチンである場合についても当てはまる。
例えば、以上で述べた乳蛋白質とポリメトキシフラボノイドとの比率は、乳蛋白質がラクトフェリンであり且つポリメトキシフラボノイドがノビレチンである場合にも当てはまる。例えば、水性媒体中のラクトフェリンの質量が、当該水性媒体中のノビレチンの質量の０．１倍以上若しくは０．３倍以上であってよく、当該水性媒体中のノビレチンの質量以上であってよく、又は、当該水性媒体中のポリメトキシフラボノイドの質量の１．１倍以上、１．３倍以上、１．５倍以上、２倍以上、若しくは２．５倍以上の質量であってよい。
The milk protein content in the composition may be preferably 0.1 times or more, more preferably 0.3 times or more, of the polymethoxyflavonoid content in the composition. Particularly preferably, the milk protein content in the composition is equal to or more than the polymethoxyflavonoid content in the composition. For example, the milk protein content in the composition is 1.1 times or more, 1.3 times or more, 1.5 times or more, 2 times or more, or 2.5 times or more of the polymethoxyflavonoid content in the composition. This allows the solubility improving effect of milk protein to be more effectively exerted when the composition is added to an aqueous medium.
The milk protein content in the composition may be preferably 100 times or less, more preferably 50 times or less, and even more preferably 30 times or less of the mass content of the polymethoxyflavonoid in the composition. This makes it possible to prevent precipitation of the milk protein due to the presence of an excessive amount of milk protein in an aqueous medium when the composition is added to the aqueous medium, and efficiently improves the solubility of the polymethoxyflavonoid.
The range of the ratio of the mass content of the milk protein to the mass content of the polymethoxyflavonoid in the composition may be defined by a combination of any one of the upper limit values and any one of the lower limit values. The mass content of the milk protein may be, for example, 0.1 to 100 times, 0.3 to 50 times, or 1.1 to 30 times the mass content of the polymethoxyflavonoid.
The above-mentioned ratio of milk protein to polymethoxyflavonoid also applies when the milk protein is one or a combination of two or more of lactoferrin, casein, and α-lactalbumin, and when the milk protein is lactoferrin. The above-mentioned ratio of milk protein to polymethoxyflavonoid also applies when the polymethoxyflavonoid is nobiletin and/or tangeretin.
For example, the above-mentioned ratio of milk protein to polymethoxyflavonoid also applies when the milk protein is lactoferrin and the polymethoxyflavonoid is nobiletin. For example, the mass of lactoferrin in an aqueous medium may be 0.1 times or more, or 0.3 times or more, the mass of nobiletin in the aqueous medium, or the mass of nobiletin in the aqueous medium, or the mass of polymethoxyflavonoid in the aqueous medium may be 1.1 times or more, 1.3 times or more, 1.5 times or more, 2 times or more, or 2.5 times or more, the mass of polymethoxyflavonoid in the aqueous medium.
５．ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性を向上させる方法
本技術は、細胞膜に接触する水性媒体中にポリメトキシフラボノイド及び乳蛋白質を存在させて、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性を向上させる方法も提供する。当該方法によって、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性が向上するので、ポリメトキシフラボノイドがより生体に利用されやすくなる。当該細胞膜透過性の向上は、乳蛋白質によりポリメトキシフラボノイドの溶解性が向上されることによってもたらされると考えられる。
5. Method for improving cell membrane permeability of polymethoxyflavonoids The present technology also provides a method for improving cell membrane permeability of polymethoxyflavonoids by making polymethoxyflavonoids and milk protein present in an aqueous medium that contacts cell membranes. By this method, the cell membrane permeability of polymethoxyflavonoids is improved, so that polymethoxyflavonoids are more easily utilized by living organisms. This improvement in cell membrane permeability is thought to be brought about by improving the solubility of polymethoxyflavonoids by milk protein.
本技術において、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性を判定するために、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過量が測定されてよい。当該透過量が増加していることによって、ポリメトキシフラボノイドの溶解性が向上していると判定されてよい。当該透過量は、以下の実施例において述べた方法により測定されてよい。 In the present technology, in order to determine the cell membrane permeability of the polymethoxyflavonoid, the amount of the polymethoxyflavonoid that permeates the cell membrane may be measured. It may be determined that the solubility of the polymethoxyflavonoid is improved due to the increase in the amount of permeation. The amount of permeation may be measured by the method described in the Examples below.
本技術において、細胞膜は、例えばヒトの消化管を構成する細胞の細胞膜であってよい。当該消化管は、例えば口腔、咽頭、食道、胃、小腸、及び大腸のうちのいずれかであってよい。当該消化管を構成する細胞は、特には消化管の内腔表面を形成する細胞であってよく、例えば上皮系細胞である。In the present technology, the cell membrane may be, for example, a cell membrane of a cell constituting the human digestive tract. The digestive tract may be, for example, any one of the oral cavity, pharynx, esophagus, stomach, small intestine, and large intestine. The cell constituting the digestive tract may be, in particular, a cell forming the luminal surface of the digestive tract, for example, an epithelial cell.
前記ポリメトキシフラボノイド、前記乳蛋白質、及び前記水性媒体は、上記「１．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法」において説明したとおりであり、その説明が前記方法についても当てはまる。
また、前記方法において行われる具体的な工程についても、上記１．の「（５）本技術の方法において行われる工程」において説明したとおりであり、その説明が当てはまる。当該具体的な工程によってポリメトキシフラボノイドの溶解性が向上されることで、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性が向上される。
前記乳蛋白質は、好ましくはラクトフェリンである。前記ポリメトキシフラボノイドは、好ましくはノビレチン及び／又はタンゲレチンである。ラクトフェリンは、ノビレチン及び／又はタンゲレチンの細胞膜透過性を向上されるために特に適している。
The polymethoxyflavonoid, the milk protein, and the aqueous medium are as explained in "1. Method for improving solubility of polymethoxyflavonoid" above, and the same explanation applies to the method.
Further, regarding the specific steps performed in the method, 1. This is as explained in "(5) Steps performed in the method of the present technology" in ``(5) Steps performed in the method of the present technology'', and the explanation applies. By improving the solubility of the polymethoxyflavonoid through this specific step, the cell membrane permeability of the polymethoxyflavonoid is improved.
The milk protein is preferably lactoferrin. The polymethoxyflavonoid is preferably nobiletin and/or tangeretin. Lactoferrin is particularly suitable for improving cell membrane permeability of nobiletin and/or tangeretin.
本技術に従う方法は、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性向上が求められる種々の局面において使用されてよい。例えば、ポリメトキシフラボノイド含有水溶液の製造において、特にはノビレチン及び／又はタンゲレチン含有水溶液の製造において、本技術に従う方法が使用されてよい。当該水溶液は、例えば飲食品添加用材料又は飲食品である。すなわち、ポリメトキシフラボノイドを含有する飲食品添加用材料又は飲食品の製造において、特にはノビレチン及び／又はタンゲレチンを含有する飲食品添加用材料又は飲食品の製造において、本技術に従う方法が使用されてよい。このように、本技術は、本技術に従う細胞膜透過性向上方法を行うことを含む、ポリメトキシフラボノイド含有水溶液の製造方法も提供する。当該水溶液は、好ましくは透明な水溶液であってよく、又は、固形のポリメトキシフラボノイドを含まない水溶液であってよい。 The method according to the present technology may be used in various situations where improvement in cell membrane permeability of polymethoxyflavonoids is required. For example, the method according to the present technology may be used in the production of aqueous solutions containing polymethoxyflavonoids, in particular in the production of aqueous solutions containing nobiletin and/or tangeretin. The aqueous solution is, for example, a material for adding food or drink or a food or drink. That is, the method according to the present technology is used in the production of food and drink additive materials or food and drink products containing polymethoxyflavonoids, particularly in the production of food and drink additive materials or food and drink products containing nobiletin and/or tangeretin. good. Thus, the present technology also provides a method for producing a polymethoxyflavonoid-containing aqueous solution, which includes performing the method for improving cell membrane permeability according to the present technology. The aqueous solution may preferably be a clear aqueous solution or may be an aqueous solution free of solid polymethoxyflavonoids.
６．ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性向上用組成物
本技術は、乳蛋白質を有効成分として含む、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性向上用組成物も提供する。当該組成物に含まれる乳蛋白質は、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性を向上させるために適している。そのため、当該組成物によって、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性が向上されて、より多くのポリメトキシフラボノイドが生体に利用可能となる。
6. Composition for Improving Cell Membrane Permeability of Polymethoxyflavonoid The present technology also provides a composition for improving cell membrane permeability of polymethoxyflavonoid, which contains milk protein as an active ingredient. The milk protein contained in the composition is suitable for improving cell membrane permeability of polymethoxyflavonoids. Therefore, the composition improves the cell membrane permeability of polymethoxyflavonoid, making more polymethoxyflavonoid available to living organisms.
前記ポリメトキシフラボノイド及び前記乳蛋白質は、上記「１．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法」において説明したとおりであり、その説明が前記組成物についても当てはまる。
また、前記組成物は、水性媒体に添加されるものである。当該水性媒体に添加された場合に、ポリメトキシフラボノイドの、当該水性媒体が接触する細胞膜への透過性が向上される。当該水性媒体についても、上記「１．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上方法」において行った説明があてはまる。
また、前記組成物の具体的な組成は、上記「２．ポリメトキシフラボノイドの溶解性向上用組成物」において説明した当該溶解性向上用組成物の組成と同じであってよく、当該説明が本組成物の組成についても当てはまる。当該組成によってポリメトキシフラボノイドの溶解性が向上されることで、ポリメトキシフラボノイドの細胞膜透過性が向上される。
The polymethoxyflavonoid and the milk protein are as explained in the above "1. Method for improving solubility of polymethoxyflavonoid", and the same explanation also applies to the composition.
Further, the composition is added to an aqueous medium. When added to the aqueous medium, the permeability of the polymethoxyflavonoid to cell membranes with which the aqueous medium comes in contact is improved. The explanation given in "1. Method for improving solubility of polymethoxyflavonoid" above also applies to the aqueous medium.
Further, the specific composition of the composition may be the same as the composition of the composition for improving solubility described in "2. Composition for improving solubility of polymethoxyflavonoid", and the description is This also applies to the composition of the composition. The composition improves the solubility of the polymethoxyflavonoid, thereby improving the cell membrane permeability of the polymethoxyflavonoid.
以下で実施例を参照して本技術をより詳しく説明するが、本技術はこれら実施例に限定されるものではない。 The present technology will be described in more detail below with reference to Examples, but the present technology is not limited to these Examples.
［試験例１］乳蛋白質によるノビレチンの溶解性向上作用
ノビレチン（東京化成工業社製）を脱イオン水に懸濁させて、ノビレチン濃度が５ｍｇ／ｍＬである懸濁液を作製した。この懸濁液１００μＬを、ラクトフェリン（以下「ＬＦ」ともいう、森永乳業社製）を脱イオン水に溶解させた溶液（ＬＦ濃度：３．１ｍｇ／ｍＬ）４００μＬに加えて、ノビレチン及びＬＦを含有する溶液５００μＬを得た。すなわち、当該溶液中のＬＦ含有量は２．５ｍｇ／ｍＬであり、且つ、ノビレチン含有量は１ｍｇ／ｍＬであった。
[Test Example 1] Solubility improvement effect of nobiletin by milk protein Nobiletin (manufactured by Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd.) was suspended in deionized water to prepare a suspension having a nobiletin concentration of 5 mg/mL. 100 μL of this suspension was added to 400 μL of a solution (LF concentration: 3.1 mg/mL) in which lactoferrin (hereinafter also referred to as “LF”, manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd.) was dissolved in deionized water, and the mixture contained nobiletin and LF. 500 μL of the solution was obtained. That is, the LF content in the solution was 2.5 mg/mL, and the nobiletin content was 1 mg/mL.
ＬＦに代えてαラクトアルブミン（以下「αＬＡ」ともいう、シグマアルドリッチ社製）又はカゼインナトリウム（以下「カゼインＮａ」ともいう、和光純薬社製）を用いたこと以外は同じ手順で、ノビレチン及びαＬＡを含有する溶液５００μＬ及びノビレチン及びカゼインＮａを含有する溶液５００μＬをそれぞれ得た。
また、前記懸濁液１００μＬにいずれの乳蛋白質も含まない脱イオン水４００μＬを加えて、ノビレチンのみを含有する液５００μＬも得た。
Nobiletin and 500 μL of a solution containing αLA and 500 μL of a solution containing nobiletin and casein Na were each obtained.
Further, 400 μL of deionized water not containing any milk protein was added to 100 μL of the suspension to obtain 500 μL of a solution containing only nobiletin.
これら４つの試料を３７℃恒温器の中で９０分間振とうさせた。その後、これら４つの試料は１７８００×ｇで１０分間遠心分離された。遠心分離後、各試料の上澄み２００μＬを５０μＬのアセトニトリルに加え４℃で保存した。沈殿物を除く残りの溶液は、フィルター（メルクミリポア社製、Ｍｉｌｌｅｘ－ＬＨ、０．４５ｍμｍ）で濾過され、各試料の濾液を４℃で保存した。 These four samples were shaken in a 37°C incubator for 90 minutes. These four samples were then centrifuged at 17,800×g for 10 minutes. After centrifugation, 200 μL of the supernatant of each sample was added to 50 μL of acetonitrile and stored at 4°C. The remaining solution after removing the precipitate was filtered with a filter (Millex-LH, 0.45 mμm, manufactured by Merck Millipore), and the filtrate of each sample was stored at 4°C.
各試料の前記上澄み中のノビレチン濃度及び前記濾液中のノビレチン濃度をＨＰＬＣにより測定した。当該測定は以下のとおりに行われた。すなわち、前記上澄み及び前記濾液をそれぞれ、５０％アセトニトリル（Ｖ／Ｖ）及び０．１％酢酸（Ｖ／Ｖ）を含む水溶液で２０倍に希釈し、希釈液のうち１０μＬをＨＰＬＣによる分析に使用した。分析カラムとしてＣａｐｃｅｌｌ ＰａｋＣ１８ ＵＧ１２０ Ｓ５ ４．５ｍｍＸ１５０ｍｍ（ＯＳＡＫＡ ＳＯＤＡ社製）を使用し、流速０．２ｍＬ及びカラム温度４０℃で、５０％（Ｖ／Ｖ）アセトニトリル及び０．１％（Ｖ／Ｖ）酢酸を含む水溶液を通液し分離した。分析機器として、ウォーターズ社製のｅ２６９５システム及びＰｈｏｔｏｄｉｏｄｅ Ａｒｒａｙ検出器２９９８を使用した。ノビレチンのピークは３３４ｎｍにあり、当該ピークのシグナル面積から前記上澄み及び前記濾液のそれぞれに含まれるノビレチン量を見積もった。当該見積もりのために、ノビレチン濃度が４ｍｇ／ｍＬであるエタノール溶液を標準品として用いた。 The nobiletin concentration in the supernatant and the nobiletin concentration in the filtrate of each sample was measured by HPLC. The measurement was performed as follows. That is, the supernatant and the filtrate were each diluted 20 times with an aqueous solution containing 50% acetonitrile (V/V) and 0.1% acetic acid (V/V), and 10 μL of the diluted solution was used for analysis by HPLC. did. Capcell PakC18 UG120 S5 4.5 mm x 150 mm (manufactured by OSAKA SODA) was used as an analytical column, and 50% (V/V) acetonitrile and 0.1% (V/V) acetic acid were used at a flow rate of 0.2 mL and a column temperature of 40°C. was separated by passing an aqueous solution containing . The e2695 system and Photodiode Array detector 2998 manufactured by Waters were used as analytical instruments. The peak of nobiletin was at 334 nm, and the amount of nobiletin contained in each of the supernatant and the filtrate was estimated from the signal area of the peak. For the estimation, an ethanol solution with a nobiletin concentration of 4 mg/mL was used as a standard.
以下の表１及び図１に、ＨＰＬＣのシグナル面積及び当該シグナル面積に基づき見積もられたノビレチン濃度を示す。 Table 1 and FIG. 1 below show the HPLC signal area and the nobiletin concentration estimated based on the signal area.
表１及び図１に示されるとおり、乳蛋白質（ＬＦ、αＬＡ、又はカゼインＮａ）を含む試料から得られた上澄み及び濾液のいずれもが、乳蛋白質を含まない試料から得られた上澄み及び濾液よりも高いノビレチン濃度を有した。そのため、水性媒体が乳蛋白質を含むことによって当該水性媒体へのノビレチンの溶解量を向上させることができることが分かる。 As shown in Table 1 and Figure 1, the supernatants and filtrates obtained from samples containing milk proteins (LF, αLA, or casein Na) all had higher nobiletin concentrations than the supernatants and filtrates obtained from samples not containing milk proteins. Therefore, it can be seen that the amount of nobiletin dissolved in an aqueous medium can be improved by including milk proteins in the aqueous medium.
また、ＬＦを含む試料から得られた上澄み及び濾液のいずれもが、αＬＡ又はカゼインＮａを含む試料から得られた上澄み及び濾液よりも高いノビレチン濃度を有した。そのため、ＬＦによるノビレチンの水性媒体への溶解量向上作用は、αＬＡ又はカゼインＮａによる当該作用よりも高く、特に優れていることが分かる。 In addition, both the supernatant and filtrate obtained from the sample containing LF had a higher nobiletin concentration than the supernatant and filtrate obtained from the sample containing αLA or sodium caseinate. Therefore, it can be seen that the effect of LF in improving the amount of nobiletin dissolved in an aqueous medium is higher than that of αLA or sodium caseinate, and is particularly excellent.
［試験例２］乳蛋白質によるノビレチンの溶解性向上作用
ノビレチン（東京化成工業社製）を脱イオン水に懸濁させて、ノビレチン濃度が１０ｍｇ／ｍＬである懸濁液を作製した。この懸濁液２５μＬを、ラクトフェリン（森永乳業社製）を脱イオン水に溶解させた溶液（ＬＦ濃度：１．０５ｍｇ／ｍＬ）４７５μＬに加えて、ノビレチン及びＬＦを含有する溶液５００μＬを得た。すなわち、当該溶液中のＬＦ含有量は１ｍｇ／ｍＬであり、且つ、ノビレチン含有量は０．５ｍｇ／ｍＬであった。
[Test Example 2] Solubility improvement effect of nobiletin by milk protein Nobiletin (manufactured by Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd.) was suspended in deionized water to prepare a suspension having a nobiletin concentration of 10 mg/mL. 25 μL of this suspension was added to 475 μL of a solution (LF concentration: 1.05 mg/mL) in which lactoferrin (manufactured by Morinaga Milk Industries, Ltd.) was dissolved in deionized water to obtain 500 μL of a solution containing nobiletin and LF. That is, the LF content in the solution was 1 mg/mL, and the nobiletin content was 0.5 mg/mL.
ＬＦに代えてラクトフェリン加熱物、カゼインナトリウム、カゼインナトリウム加熱物、又はγシクロデキストリン（塩水港精糖社製）を用いたこと以外は同じ手順で、ノビレチン及びラクトフェリン加熱物、カゼインナトリウム、カゼインナトリウム加熱物、又はγシクロデキストリンを含有する溶液５００μＬをそれぞれ得た。
前記ラクトフェリン加熱物及び前記カゼインナトリウム加熱物は、ＬＦ又はカゼインＮａの濃度が１０ｍｇ／ｍＬになるように脱イオン水に溶解し、その溶液をオートクレーブ（トミー精工社製ＢＳ－２４５）を使用して１２１℃１０分間熱処理し、そして室温に戻すことで調製された。
また、前記懸濁液２５μＬにいずれの乳蛋白質も含まない脱イオン水４７５μＬを加えて、ノビレチンのみを含有する液５００μＬも得た。
The same procedure was followed except that heated lactoferrin, sodium caseinate, heated sodium caseinate, or γ-cyclodextrin (manufactured by Ensuiko Sugar Refining Co., Ltd.) was used instead of LF, and 500 μL of a solution containing nobiletin and heated lactoferrin, sodium caseinate, heated sodium caseinate, or γ-cyclodextrin was obtained.
The heated lactoferrin and the heated sodium caseinate were prepared by dissolving LF or sodium caseinate in deionized water to a concentration of 10 mg/mL, heat-treating the solution at 121°C for 10 minutes using an autoclave (BS-245, manufactured by Tommy Seiko Co., Ltd.), and then returning the solution to room temperature.
In addition, 475 μL of deionized water not containing any milk protein was added to 25 μL of the suspension to obtain 500 μL of a solution containing only nobiletin.
これら６つの試料を３７℃恒温器の中で１２０分間振とうさせ、そして、４℃で１８時間保存した。その後、これら６つの試料は１７８００×ｇで１０分間遠心分離された。遠心分離後、各試料の上澄み１０μＬを１９０ μＬの５０％アセトニトリル（Ｖ／Ｖ）および０．１％酢酸（Ｖ／Ｖ）を含む水溶液に加え２０倍希釈液を作製した。当該希釈液のうち１０μＬを用いて、ＨＰＬＣによりノビレチン濃度を測定した。当該測定は、試験例１に記載されたものと同じ方法により行われた。 These six samples were shaken in a 37°C incubator for 120 minutes and stored at 4°C for 18 hours. These six samples were then centrifuged at 17,800×g for 10 minutes. After centrifugation, 10 μL of the supernatant of each sample was added to 190 μL of an aqueous solution containing 50% acetonitrile (V/V) and 0.1% acetic acid (V/V) to prepare a 20-fold dilution. Nobiletin concentration was measured by HPLC using 10 μL of the diluted solution. The measurement was performed by the same method as described in Test Example 1.
以下の表２及び図２に、ＨＰＬＣのシグナル面積及び当該シグナル面積に基づき見積もられたノビレチン濃度を示す。Table 2 below and Figure 2 show the HPLC signal area and the estimated nobiletin concentration based on the signal area.
表２及び図２に示されるとおり、乳蛋白質（ＬＦ、ＬＦ加熱物、カゼインＮａ、又はカゼインＮａ加熱物）を含む試料から得られた上澄みのいずれもが、乳蛋白質を含まない試料から得られた上澄みよりも高いノビレチン濃度を有した。そのため、水性媒体が乳蛋白質を含むことによって当該水性媒体へのノビレチンの溶解量を向上させることができることが分かる。 As shown in Table 2 and Figure 2, all of the supernatants obtained from samples containing milk proteins (LF, heated LF, sodium caseinate, or heated sodium caseinate) had a higher nobiletin concentration than the supernatants obtained from samples not containing milk proteins. Therefore, it can be seen that the amount of nobiletin dissolved in an aqueous medium can be improved by including milk proteins in the aqueous medium.
表２及び図２に示される結果より、乳蛋白質の加熱物であっても、水性媒体へのノビレチンの溶解量を向上させることができることが分かる。
また、表２及び図２に示される結果より、ＬＦはＬＦ加熱物よりも、ノビレチンの水性媒体への溶解量向上作用に優れていることが分かる。ＬＦ及びＬＦ加熱物は、γシクロデキストリンよりもノビレチンの水性媒体への溶解量向上作用に優れていることも分かる。
また、表２及び図２に示される結果より、カゼインＮａ加熱物は、カゼインＮａよりもノビレチンの水性媒体への溶解量向上作用に優れていることも分かる。
The results shown in Table 2 and FIG. 2 show that even heated milk protein can improve the amount of nobiletin dissolved in an aqueous medium.
Moreover, from the results shown in Table 2 and FIG. 2, it can be seen that LF is superior to LF heated products in improving the amount of nobiletin dissolved in an aqueous medium. It can also be seen that LF and LF heated products are more effective than γ-cyclodextrin in improving the amount of nobiletin dissolved in an aqueous medium.
Furthermore, from the results shown in Table 2 and FIG. 2, it can be seen that the heated caseinate Na product is superior to caseinate Na in improving the amount of nobiletin dissolved in the aqueous medium.
［試験例３］ラクトフェリンによるノビレチン凝集阻止作用
ノビレチン（東京化成工業社製）を脱イオン水に懸濁させて、ノビレチン濃度が５ｍｇ／ｍＬ懸濁液を作製した。この懸濁液５μＬを、ラクトフェリン（森永乳業社製）を脱イオン水に溶解させた溶液（ＬＦ濃度：２．０７ｍｇ／ｍＬ若しくは０．２０７ ｍｇ／ｍＬ）１４５μＬ又は脱イオン水１４５μＬに加え、１５０μＬの懸濁液を得た。すなわち、合計で３つの試料が得られた。試料中のノビレチン濃度は０．１７ｍｇ／ｍＬであった。
[Test Example 3] Inhibitory effect of lactoferrin on nobiletin aggregation Nobiletin (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) was suspended in deionized water to prepare a suspension with a nobiletin concentration of 5 mg/mL. 5 μL of this suspension was added to 145 μL of a solution (LF concentration: 2.07 mg/mL or 0.207 mg/mL) in which lactoferrin (manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd.) was dissolved in deionized water or 145 μL of deionized water to obtain a suspension of 150 μL. That is, a total of three samples were obtained. The nobiletin concentration in the sample was 0.17 mg/mL.
これら３つの試料に対し、沸騰水中で５分間インキュベートすることにより、熱処理を行った。当該熱処理後、各試料を２つに分け、一方は室温で３０分放置し、他方は室温で１８時間放置した。当該放置後に、１７８００×ｇで１０分間遠心分離を行なった。当該遠心分離により得られた上澄み１０μＬを、１９０μＬの５０％アセトニトリル（Ｖ／Ｖ）および０．１％酢酸（Ｖ／Ｖ）を含む水溶液に加えて、２０倍希釈液を作製した。当該希釈液のうち１０μＬを用いて、ＨＰＬＣによりノビレチン濃度を測定した。当該測定は、試験例１に記載されたものと同じ方法により行われた。These three samples were heat-treated by incubating them in boiling water for 5 minutes. After the heat treatment, each sample was divided into two, one of which was left at room temperature for 30 minutes, and the other was left at room temperature for 18 hours. After the leaving, the samples were centrifuged at 17,800 x g for 10 minutes. 10 μL of the supernatant obtained by the centrifugation was added to an aqueous solution containing 190 μL of 50% acetonitrile (V/V) and 0.1% acetic acid (V/V) to prepare a 20-fold diluted solution. Using 10 μL of the diluted solution, the nobiletin concentration was measured by HPLC. The measurement was performed using the same method as that described in Test Example 1.
以下表３及び図３に、ＨＰＬＣのシグナル面積及び当該シグナル面積に基づき見積もられた上澄み中のノビレチンの濃度（単位：μｇ／ｍＬ）を示す。なお、表３及び図３中の「ＮＯＢ」はノビレチンを意味する。The HPLC signal area and the concentration of nobiletin in the supernatant estimated based on the signal area (unit: μg/mL) are shown in Table 3 and Figure 3 below. Note that "NOB" in Table 3 and Figure 3 means nobiletin.
表３及び図３に示されるとおり、ＬＦを含まない場合において、０．５時間放置後では上澄み中のノビレチン濃度は高かった。これは、ノビレチンは加熱すると単分子になり水への溶解量が多くなるためと考えられる。また、ＬＦを含まない場合において、１８時間放置後では、０．５時間放置後と比較して、上澄み中のノビレチン濃度が大幅に低下した。これは、常温での放置時間が経過するにつれてノビレチンの過飽和状態が形成されてノビレチンが凝集したため又はノビレチン結晶が生成されたためと考えられる。 As shown in Table 3 and FIG. 3, when LF was not included, the nobiletin concentration in the supernatant was high after standing for 0.5 hours. This is thought to be because nobiletin becomes a single molecule when heated, and the amount dissolved in water increases. Furthermore, in the case where LF was not included, the concentration of nobiletin in the supernatant was significantly lower after standing for 18 hours compared to after standing for 0.5 hours. This is considered to be because a supersaturated state of nobiletin was formed and nobiletin aggregated as the standing time at room temperature elapsed, or nobiletin crystals were generated.
一方で、表３及び図３に示されるとおり、ＬＦを含む場合に関して０．５時間後及び１８時間後のノビレチン濃度を比較すると、ＬＦを含まない場合よりもノビレチン濃度の低下の程度が少ない。そのため、ＬＦによって、ノビレチンの凝集又は結晶析出が抑制されたことが分かる。 On the other hand, as shown in Table 3 and FIG. 3, when comparing the nobiletin concentrations after 0.5 hours and 18 hours when LF is included, the degree of decrease in nobiletin concentration is smaller than when LF is not included. Therefore, it can be seen that the aggregation or crystal precipitation of nobiletin was suppressed by LF.
［試験例４］乳蛋白質によるポリメトキシフラボノイド凝集阻止作用
ノビレチン又はタンゲレチン（いずれも東京化成工業社製）を脱イオン水に懸濁させて、これら化合物の濃度が１０ｍｇ／ｍＬである懸濁液を作製した。この懸濁液５０μＬを、ラクトフェリン（森永乳業社製）、カゼインナトリウム（和光純薬製）、又はγシクロデキストリンを脱イオン水に溶解させた溶液（いずれも７．１４ｍｇ／ｍＬ、２．１４ ｍｇ／ｍＬ、０．７１ ｍｇ／ｍＬ、若しくは０．２９ ｍｇ／ｍＬ）７００μＬ又は脱イオン水７００μＬに加えて、７５０μＬの懸濁液を得た。すなわち、ＬＦ、カゼインＮａ、又はγシクロデキストリンの当該溶液中の濃度は、６．７ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、０．６７ｍｇ／ｍＬ、０．２７ｍｇ／ｍＬ、又は０ｍｇ／ｍＬであった。また、当該溶液中のノビレチン又はタンゲレチンの濃度は、０．６７ｍｇ／ｍＬであった。
[Test Example 4] Polymethoxyflavonoid aggregation inhibition effect by milk protein Nobiletin or tangeretin (both manufactured by Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd.) was suspended in deionized water to form a suspension in which the concentration of these compounds was 10 mg/mL. Created. 50 μL of this suspension was mixed with a solution of lactoferrin (manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd.), sodium caseinate (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), or γ-cyclodextrin dissolved in deionized water (both 7.14 mg/mL and 2.14 mg). /mL, 0.71 mg/mL, or 0.29 mg/mL) or 700 μL of deionized water to obtain 750 μL of a suspension. That is, the concentration of LF, Na caseinate, or γ cyclodextrin in the solution was 6.7 mg/mL, 2 mg/mL, 0.67 mg/mL, 0.27 mg/mL, or 0 mg/mL. Further, the concentration of nobiletin or tangeretin in the solution was 0.67 mg/mL.
これらの試料に対し、１２１℃１０分間オートクレーブで熱処理を行った。当該熱処理と、これらの試料を室温で２時間放置した。
ノビレチンを含む試料については、当該放置後に、結晶の析出を促すための核として、０．５ｍｇ／ｍＬのノビレチン懸濁液を２μＬ添加及び撹拌し、その後１時間放置した。タンゲレチンを含む試料については、この操作は行われなった。
その後、これらの試料に対し、１７８００×ｇで１０分間遠心分離を行なった。当該遠心分離後の上澄み１０μＬを、１９０μＬの５０％アセトニトリル（Ｖ／Ｖ）および０．１％酢酸（Ｖ／Ｖ）を含む水溶液に加えて、２０倍希釈液を作製した。当該希釈液のうち１０μＬを用いて、ＨＰＬＣによりノビレチン濃度及びタンゲレチン濃度を測定した。当該測定は、試験例１に記載されたものと同じ方法により行われた。
These samples were heat treated in an autoclave at 121°C for 10 minutes. After the heat treatment, these samples were left at room temperature for 2 hours.
For the sample containing nobiletin, after the sample was left to stand, 2 μL of a 0.5 mg/mL nobiletin suspension was added and stirred as a nucleus for promoting precipitation of crystals, and then left to stand for 1 hour. This procedure was not performed for samples containing tangeretin.
Thereafter, these samples were centrifuged at 17,800×g for 10 minutes. 10 μL of the supernatant after the centrifugation was added to 190 μL of an aqueous solution containing 50% acetonitrile (V/V) and 0.1% acetic acid (V/V) to prepare a 20-fold dilution. Nobiletin concentration and tangeretin concentration were measured by HPLC using 10 μL of the diluted solution. The measurement was performed by the same method as described in Test Example 1.
以下の表４及び図４に、ＨＰＬＣのシグナル面積及び当該シグナル面積に基づき見積もられたノビレチン濃度及びタンゲレチン濃度を示す。Table 4 and Figure 4 below show the HPLC signal area and the estimated nobiletin and tangeretin concentrations based on the signal area.
表４及び図４に示されるとおり、乳蛋白質（ＬＦ又はカゼインＮａ）を含む試料から得られた上澄みのいずれもが、シクロデキストリンを含む試料から得られたものよりも高いノビレチン濃度又はタンゲレチン濃度を有した。そのため、乳蛋白質は、シクロデキストリンよりも優れたポリメトキシフラボノイド溶解性向上作用及びポリメトキシフラボノイド凝集抑制作用を有することが分かる。 As shown in Table 4 and Figure 4, none of the supernatants obtained from samples containing milk proteins (LF or Na caseinate) had higher nobiletin or tangeretin concentrations than those obtained from samples containing cyclodextrin. I had it. Therefore, it can be seen that milk protein has an effect of improving polymethoxyflavonoid solubility and an effect of suppressing polymethoxyflavonoid aggregation which is superior to that of cyclodextrin.
［試験例５］ラクトフェリンによるノビレチンのＣａｃｏ－２細胞膜透過性向上作用
ヒト大腸がん由来上皮細胞であるＣａｃｏ－２細胞から形成された細胞膜を用いて、ラクトフェリンによるノビレチンの当該細胞膜透過性向上作用を評価した。当該Ｃａｃｏ－２細胞はＤＳファーマバイオケミカル社より購入した。当該細胞膜透過性を評価するための試験は、コラーゲンタイプＩインサート２４ウェルプレート（コーニング社製）を用いて実施された。当該細胞膜は、当該細胞を２Ｘ１０５個／上部チャンバーとなるように上部チャンバーに捲き、１０％牛血清及び１０ｍＭグルタミン（シグマアルドリッチ社製）を添加したＤＭＥＭ培地（シグマアルドリッチ社製）で２１日間培養することにより形成された。
[Test Example 5] Effect of lactoferrin on improving the cell membrane permeability of nobiletin on Caco-2 Cell membranes formed from Caco-2 cells, which are epithelial cells derived from human colon cancer, were used to improve the cell membrane permeability of nobiletin with lactoferrin. evaluated. The Caco-2 cells were purchased from DS Pharma Biochemical. The test for evaluating the cell membrane permeability was conducted using a collagen type I insert 24-well plate (manufactured by Corning). To prepare the cell membrane, the cells were rolled up in the upper chamber at 2×10 5 cells/upper chamber and cultured for 21 days in DMEM medium (manufactured by Sigma-Aldrich) supplemented with 10% bovine serum and 10 mM glutamine (manufactured by Sigma-Aldrich). was formed by
当該インサートの上部チャンバーに添加される試料は以下の通りに調製した。すなわち、ＨＢＳＳ溶液（シグマアルドリッチ社製）に１／１００容量の１Ｍ ＭＥＳ（シグマアルドリッチ社製）を添加し、この溶液１ｍＬに対して、１００ｍｇ／ｍＬのラクトフェリンを、１／４０容量（Ｖ／Ｖ）となるように添加した。また、ラクトフェリンを添加しない試料も用意した。また、エタノールに溶解させた１０ｍＭノビレチンを１／２００容量でそれぞれ添加した。この溶液１ｍＬを３７℃で９０分加温後、培養液を除いた上部チャンバーに３００μＬ加えた。下部ウェルの溶液として、ＨＢＳＳに１／１００容量の１Ｍ ＨＥＰＥＳを添加し、且つ、４％（Ｗ／Ｖ）となるようにウシ血清アルブミン（シグマアルドリッチ社製）を添加した溶液８００μＬを使用した。上部及び下部に溶液を添加後３７℃で１時間恒温振とう機で振とうを行った。当該振とう後、下部溶液１０μＬを使用して、試験例１と同様に、下部溶液中のノビレチン量を測定した。 The sample added to the upper chamber of the insert was prepared as follows. That is, 1/100 volume of 1M MES (Sigma-Aldrich) was added to an HBSS solution (Sigma-Aldrich), and 100 mg/mL of lactoferrin was added to 1/40 volume (V/V) of this solution. ). In addition, a sample to which lactoferrin was not added was also prepared. In addition, 10 mM nobiletin dissolved in ethanol was added at 1/200 volume. After heating 1 mL of this solution at 37° C. for 90 minutes, 300 μL was added to the upper chamber from which the culture solution had been removed. As the solution for the lower well, 800 μL of a solution prepared by adding 1/100 volume of 1M HEPES to HBSS and adding bovine serum albumin (manufactured by Sigma-Aldrich) to 4% (W/V) was used. After adding the solution to the upper and lower parts, the solution was shaken at 37°C for 1 hour using a constant temperature shaker. After the shaking, the amount of nobiletin in the lower solution was measured in the same manner as in Test Example 1 using 10 μL of the lower solution.
以下の表５及び図５に、ＨＰＬＣのシグナル面積に基づき見積もられたノビレチン濃度を示す。 Table 5 below and FIG. 5 show the nobiletin concentrations estimated based on the HPLC signal area.
表５及び図５に示されるとおり、上部溶液がラクトフェリンを含む場合は、ラクトフェリンを含まない場合よりも、下部溶液中のノビレチン濃度が高かった。そのため、ラクトフェリンによって、ノビレチンの細胞膜透過性が向上されたことが分かる。従って、ラクトフェリンによって、ノビレチンの生体内における利用可能性を高めることができると考えられる。 As shown in Table 5 and FIG. 5, when the upper solution contained lactoferrin, the concentration of nobiletin in the lower solution was higher than when it did not contain lactoferrin. Therefore, it can be seen that the cell membrane permeability of nobiletin was improved by lactoferrin. Therefore, it is thought that lactoferrin can increase the in vivo availability of nobiletin.
［試験例６］乳蛋白質によるノビレチンのＣａｃｏ－２細胞膜透過性向上作用
インサート内に加えられる溶液を変更して、上記試験例５と同様の方法でＣａｃｏ－２細胞膜透過性を評価した。当該評価は以下の通りに行われた。
インサート内に加えられる溶液は次のように調製した。ＨＢＳＳ溶液（シグマアルドリッチ社製）に１／１００容量の１Ｍ ＭＥＳ（シグマアルドリッチ社製）を添加し、この溶液１ｍＬに対して、ノビレチンを含む溶液を加えた。ノビレチンを含む溶液の調製は、次のように実施した。最終濃度６．７ｍｇ／ｍＬの濃度でラクトフェリン又はカゼインナトリウムを溶解させた溶液に最終濃度０．６７ｍｇ／ｍＬとなるようにノビレチンを添加し、７５０μＬの溶液を得た。コントロールとして、乳蛋白質無添加の溶液も調製した。続いて、これら溶液に対して１２１℃で１０分間オートクレーブを行った。オートクレーブ後、これら溶液を室温で２時間放置し、その後、ノビレチン結晶の析出を促進させるための核として、０．５ｍｇ／ｍＬのノビレチン懸濁液を２μＬ添加し撹拌後１時間放置した。その後、１７８００×ｇで、１０分間遠心分離を行なった。当該遠心分離後に、上澄みをノビレチン含有溶液として、上記Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価において用いた。当該ノビレチン含有溶液２７μＬが、インサートに添加する溶液１ｍＬに添加された。この溶液１ｍＬを３７℃で９０分加温後、培養液を除いた上部チャンバーに３００μＬ加え上記Ｃａｃｏ－２細胞膜透過性評価を実施した。
[Test Example 6] Nobiletin's Caco-2 Cell Membrane Permeability Improving Effect by Milk Protein The Caco-2 cell membrane permeability was evaluated in the same manner as in Test Example 5 above, except that the solution added to the insert was changed. The evaluation was conducted as follows.
The solution added into the insert was prepared as follows. 1/100 volume of 1M MES (manufactured by Sigma-Aldrich) was added to an HBSS solution (manufactured by Sigma-Aldrich), and a solution containing nobiletin was added to 1 mL of this solution. A solution containing nobiletin was prepared as follows. Nobiletin was added to a solution in which lactoferrin or sodium caseinate was dissolved at a final concentration of 6.7 mg/mL to give a final concentration of 0.67 mg/mL to obtain a 750 μL solution. As a control, a solution without added milk protein was also prepared. Subsequently, these solutions were autoclaved at 121° C. for 10 minutes. After autoclaving, these solutions were left to stand at room temperature for 2 hours, and then 2 μL of a 0.5 mg/mL nobiletin suspension was added as nuclei for promoting the precipitation of nobiletin crystals, and after stirring, the solutions were left to stand for 1 hour. Thereafter, centrifugation was performed at 17,800×g for 10 minutes. After the centrifugation, the supernatant was used as a nobiletin-containing solution in the Caco-2 cell membrane permeability evaluation described above. 27 μL of the nobiletin-containing solution was added to 1 mL of the solution added to the insert. After heating 1 mL of this solution at 37° C. for 90 minutes, 300 μL was added to the upper chamber from which the culture medium had been removed, and the Caco-2 cell membrane permeability evaluation described above was performed.
以下の表６及び図６に、当該評価により得られたＨＰＬＣのシグナル面積に基づき見積もられたノビレチン濃度を示す。 Table 6 and FIG. 6 below show the nobiletin concentrations estimated based on the HPLC signal area obtained in the evaluation.
表６及び図６に示されるとおり、上部溶液が乳蛋白質（ラクトフェリン又はカゼインＮａ）を含む場合は、乳蛋白質を含まない場合よりも、下部溶液中のノビレチン濃度が高かった。そのため、乳蛋白質によって、ノビレチンの細胞膜透過性が向上されたことが分かる。従って、乳蛋白質によって、ノビレチンの生体内における利用可能性を高めることができると考えられる。 As shown in Table 6 and FIG. 6, when the upper solution contained milk protein (lactoferrin or Na caseinate), the concentration of nobiletin in the lower solution was higher than when it did not contain milk protein. Therefore, it can be seen that the cell membrane permeability of nobiletin was improved by milk protein. Therefore, it is thought that milk protein can increase the in vivo availability of nobiletin.
また、上部溶液がラクトフェリンを含む場合は、上部溶液がカゼインＮａを含まない場合よりも、下部溶液中のノビレチン濃度が高かった。そのため、ラクトフェリンは、ノビレチンの細胞膜透過性の向上作用に特に優れていることが分かる。従って、ラクトフェリンによって、ノビレチンの生体内における利用可能性を特に高めることができると考えられる。 Furthermore, when the upper solution contained lactoferrin, the concentration of nobiletin in the lower solution was higher than when the upper solution did not contain sodium caseinate. This shows that lactoferrin is particularly effective at improving the cell membrane permeability of nobiletin. It is therefore believed that lactoferrin can particularly increase the availability of nobiletin in the body.
［実施例１］
ビレチン（アークレイ株式会社、ポリメトキシフラボノイド含有量１０質量％以上）及びラクトフェリン（森永乳業株式会社製、純度９６％以上）をそれぞれ３ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬとなるように脱イオン水に溶解し、１０Ｌの溶液を得た。得られた混合液をレトルトパックに分注した。その後、混合液入りレトルトパックをレトルト滅菌器により１２０℃７分間滅菌を行って、可溶性ポリメトキシフラボノイドの多い溶液を得た。
[Example 1]
Biretin (manufactured by ARKRAY Co., Ltd., polymethoxyflavonoid content 10% by mass or more) and lactoferrin (manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd., purity 96% or more) were dissolved in deionized water to a concentration of 3 mg/mL and 5 mg/mL, respectively. 10 L of solution was obtained. The obtained liquid mixture was dispensed into retort packs. Thereafter, the retort pack containing the liquid mixture was sterilized at 120° C. for 7 minutes using a retort sterilizer to obtain a solution containing a large amount of soluble polymethoxyflavonoid.
［実施例２］
ビレチン（アークレイ株式会社、メトキシフラボノイド含有１０％以上）およびラクトフェリン（森永乳業株式会社製、純度９６％以上）をそれぞれ０．１５ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬとなるように脱イオン水に溶解し、得られた水溶液をプレート式殺菌機（森永エンジニアリング社製）を用いて１３１℃で３０秒間加熱保持する条件で滅菌した。冷却後無菌化で容器に充填することで沈殿物の少ない可溶性ポリメトキシフラボノイドの多い溶液を得た。
[Example 2]
Biletin (manufactured by ARKRAY Co., Ltd., methoxyflavonoid content of 10% or more) and lactoferrin (manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd., purity of 96% or more) were dissolved in deionized water to a concentration of 0.15 mg/mL and 0.5 mg/mL, respectively. The resulting aqueous solution was sterilized using a plate sterilizer (manufactured by Morinaga Engineering Co., Ltd.) under conditions of heating and holding at 131° C. for 30 seconds. After cooling, the solution was sterilized and filled into containers to obtain a solution containing a large amount of soluble polymethoxyflavonoids with few precipitates.
［実施例３］
シークヮーサー溶液（アクアメディカル研究所製）５００ｍＬにエタノールを添加し、５０％（Ｖ／Ｖ）濃度とし、室温で１時間撹拌した。その後、ろ紙による吸引濾過を行い沈殿物を除いた。得られた溶液は、減圧濃縮により約３０ｍＬまで濃縮した。この溶液に２Ｌの脱イオン水を添加し懸濁させた。さらに１０ｍｇ／ｍＬのラクトフェリン（森永乳業社製、純度９６％以上）水溶液２００ｍＬを添加し、混合後得られた溶液をレトルトパックに分注した。その後、レトルトパックをレトルト滅菌器により１２０℃７分間滅菌を行って、可溶化されたポリメトキシフラボノイドの多い溶液を得た。
[Example 3]
Ethanol was added to 500 mL of Shikuwasa solution (manufactured by Aqua Medical Research Institute) to a concentration of 50% (V/V), and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. Then, suction filtration was performed using filter paper to remove precipitates. The resulting solution was concentrated to about 30 mL by vacuum concentration. 2 L of deionized water was added to this solution and suspended. Further, 200 mL of a 10 mg/mL lactoferrin (manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd., purity 96% or higher) aqueous solution was added, and the resulting solution was mixed and dispensed into a retort pack. The retort pack was then sterilized in a retort sterilizer at 120°C for 7 minutes to obtain a solution rich in solubilized polymethoxyflavonoids.
［実施例４］
黒ショウガ粉末（黒ウコンジャパン社製）６０ｇを２Ｌの脱イオン水に懸濁させ室温で１時間撹拌した。静置させ不溶物を沈殿させた。沈殿物を取らないように溶液を吸引除去し、再度脱イオン水を２Ｌ加え同じ操作を行った。得られた沈殿物に対して２０％エタノール溶液２Ｌを添加し室温にて１時間撹拌した後、静置し、溶液を吸引除去することで沈殿物を得た。さらに、５０％エタノール２Ｌを得られた沈殿物に加え、室温にて１時間撹拌し、ろ紙による吸引濾過を行うことでポリメトキシフラボノイドを含む溶液を得た。この溶液を減圧濃縮させることで約１００ｍＬの溶液を得た。この溶液に脱イオン水５Ｌを添加し、撹拌後、得られた溶液を室温で静置させた。この溶液の沈殿が入らないように、この溶液の白濁液を別容器に移した。ここに最終濃度１ｍｇ／ｍＬとなるように１００ｍｇ／ｍＬのラクトフェリン（森永乳業社製、純度９６％以上）水溶液を添加し撹拌した。撹拌混合後得られた混合液をレトルトパックに分注した。その後、混合液入りレトルトパックをレトルト滅菌器により１２０℃７分間滅菌を行って、可溶性ポリメトキシフラボノイドの多い溶液を得た。
[Example 4]
60 g of black ginger powder (manufactured by Kurokon Japan Co., Ltd.) was suspended in 2 L of deionized water and stirred at room temperature for 1 hour. The mixture was allowed to stand still to precipitate insoluble matter. The solution was removed by suction without removing the precipitate, 2 L of deionized water was added again, and the same operation was performed. After adding 2 L of 20% ethanol solution to the obtained precipitate and stirring at room temperature for 1 hour, the mixture was allowed to stand and the solution was removed by suction to obtain a precipitate. Furthermore, 2 L of 50% ethanol was added to the obtained precipitate, stirred at room temperature for 1 hour, and suction filtrated with filter paper to obtain a solution containing polymethoxyflavonoids. This solution was concentrated under reduced pressure to obtain about 100 mL of solution. 5 L of deionized water was added to this solution, and after stirring, the resulting solution was allowed to stand at room temperature. The cloudy liquid of this solution was transferred to another container to prevent precipitation from entering the solution. A 100 mg/mL aqueous solution of lactoferrin (manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd., purity 96% or higher) was added thereto to give a final concentration of 1 mg/mL, and the mixture was stirred. After stirring and mixing, the resulting mixture was dispensed into retort packs. Thereafter, the retort pack containing the liquid mixture was sterilized at 120° C. for 7 minutes using a retort sterilizer to obtain a solution containing a large amount of soluble polymethoxyflavonoid.
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