JP7431419B2

JP7431419B2 - 骨密度の低下または軟骨損失による疾患を治療するための治療剤を含む徐放性医薬組成物およびその使用

Info

Publication number: JP7431419B2
Application number: JP2021525745A
Authority: JP
Inventors: ホン，キールン; カオ，ハオ－ウェン; リン，イ－ユ; ファン，ジョナサン; ファン，ウェイウェイ
Original assignee: タイワンリポソームカンパニーリミテッド; ティーエルシーバイオファーマシューティカルズ、インク．
Priority date: 2018-11-14
Filing date: 2019-11-13
Publication date: 2024-02-15
Anticipated expiration: 2039-11-13
Also published as: EP3880176A1; EP3880176A4; TW202031247A; TWI729562B; JP2023510658A; WO2020102323A1; CN113056259A

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１１月１４日に出願された、米国特許出願第６２／７６７，２５
４号の利益を主張し、その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる。

技術分野
本発明は、少なくとも１つの捕捉剤を使用して、高い薬物対脂質比(drug to lipid rat
io)および高いカプセル化効率を有する、骨密度の低下または軟骨損失による疾患を治療
するための徐放性医薬組成物に関する。医薬組成物の高い薬物対脂質比、高い薬物カプセ
ル化効率、および徐放性プロファイルは、薬物投与の頻度を減少させ、患者のコンプライ
アンスを増加させ、治療結果を改善する。

骨リモデリングは、破骨細胞および骨芽細胞、ならびに骨細胞、炎症性細胞およびメデ
ィエーターが関与する連続的かつ協調的な相互作用によって決定される生理学的過程であ
る。骨芽細胞活性と破骨細胞活性との間のバランスが骨の恒常性を維持している。破骨細
胞の機能障害は骨吸収を増加させ、様々な骨および関節疾患、例えば、骨粗鬆症、大理石
骨病、関節リウマチ、変形性関節症、骨腫瘍およびページェット病を引き起こす。

破骨細胞で高レベルで発現されるシステインプロテアーゼであるカテプシンＫ（配列番
号：１）は、ヒドロキシアパタイトおよびタンパク質、特にＩ型コラーゲンで構成される
骨マトリックスの分解において重要な役割を果たす。カテプシンＫはヒト関節軟骨のＩＩ
型コラーゲンの切断にも関与している。最近の研究では、カテプシンＫ阻害剤を１日１ま
たは２回経口投与すると、骨量減少および軟骨変性の双方が予防されることが示されてい
る。カテプシンＫ阻害剤の治療濃度を維持し、骨密度の低下および軟骨損失による疾患を
治療するための投与頻度を最小限にすることが非常に望ましい。

薬物送達システムとしてのリポソームは、種々の薬物に対し徐放性製剤を開発するため
に広く使用されている。リポソームへの薬物充填(loading)は受動的に（薬物はリポソー
ム形成の間にカプセル化される）または遠隔／能動的に（リポソーム形成の間に膜貫通ｐ
Ｈ勾配またはイオン勾配を作製し、続いてリポソーム形成の後に勾配から生成される駆動
力によって薬物を充填する）のいずれかで達成され得る（米国特許第５，１９２，５４９
号および同第５，９３９，０９６号）。リポソームへの薬物充填の一般的な方法は文献に
おいて十分に実証されているが、少数の治療剤しか、高いカプセル化効率でリポソームに
充填されなかった。以下に制限されないが、治療剤の物理的および化学的特性、例えば、
親水性／疎水性特性、解離定数、溶解度および分配係数、脂質組成、捕捉剤、反応溶媒、
および粒子径などの、様々な因子がリポソーム薬の薬物対脂質比およびカプセル化効率に
影響を及ぼし得る（ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．２０１４；
１１１（６）：２２８３－２２８８およびＤｒｕｇＭｅｔａｂＤｉｓｐｏｓ．２０
１５；４３（８）：１２３６－４５）。

カテプシンＫ阻害剤の投薬頻度を減少させ、治療結果を改善するために、高い薬物対脂
質比および高い薬物カプセル化効率を有する徐放性製剤に対する満たされない必要性が依
然として存在する。本発明は、この必要性および他の必要性に対処する。

発明の概要
一実施形態では、（ａ）二重層膜を有する少なくとも１つのリポソームであって、前記
二重層膜が少なくとも１つの脂質を含む、リポソーム；（ｂ）捕捉剤；および（ｃ）骨密
度の低下(reduced bone density)または軟骨損失(cartilage loss)による疾患を治療する
ための治療剤を含み、前記脂質に対する前記治療剤のモル比(molar ratio of the therap
eutic agent to the lipid)が約０．１以上である、徐放性医薬組成物が提供される。

本発明の別の実施形態によれば、骨密度の低下または軟骨損失による疾患を治療するた
めの方法であって、本明細書に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与する工
程を有する方法が提供される。

また、骨密度の低下による疾患の治療的および／または予防的処置のための薬剤の製造
における、本明細書に記載の医薬組成物の使用が提供される。

さらに、本明細書に記載の徐放性医薬組成物の治療有効量を含む、骨密度の低下または
軟骨損失による疾患を治療するための薬剤が提供される。

本特許で使用される用語「発明(invention)」、「本発明(the invention)」、「本発明
(this invention)」、および「本発明(the present invention)」は、本特許および以下
の特許請求の範囲の主題のすべてを広く指すことを意図している。これらの用語を含む記
述は、本明細書に記載される主題を限定するものではなく、以下の特許請求の範囲の意味
または範囲を限定するものでもないと理解されるべきである。この特許によってカバーさ
れる本発明の実施形態は、この概要ではなく、以下の特許請求の範囲によって定義される
。この概要は本発明の様々な態様の高レベルの概要であり、以下の詳細な説明のセクショ
ンでさらに説明される概念のいくつかを紹介する。この概要は、請求項に規定される主題
の重要なまたは必須の特徴を特定することを意図するものではなく、請求項に規定される
主題の範囲を決定するために単独で使用されることを意図するものでもない。主題は、明
細書全体、任意のまたはすべての図面、および各請求項の適切な部分を参照することによ
って理解されるべきである。

本発明の本質および利点は明細書および図面の残りの部分を参照することにより一層理
解されよう。

図面の簡単な説明
図１は、遊離Ｌ－００６２３５およびリポソームＬ－００６２３５の関節内注射後のラットにおける血漿Ｌ－００６２３５濃度を示す線グラフである。

発明の詳細な説明
上記および本開示全体を通して使用される、下記用語は、本明細書中で特記しない限り
、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈で明確に示されない限り、複数形を
含む。

本明細書中のすべての数字は「約」によって修飾されたものとして理解され得る。本明
細書中で使用される、「約」という用語は、特定の値の±１０％の範囲を指す。

本明細書中で使用される、「有効量」は、骨量の低下／増加、軟骨下骨または軟骨の喪
失、関節痛または関節腫脹などの、骨吸収(bone resorption)および骨密度の低下(reduce
d bone density)による疾患の症状および徴候を減少させるための、本明細書に記載の医
薬組成物の用量をいう。「有効量」および「治療有効量」という用語は互換的に使用され
る。

本明細書で使用される「治療する(treating)」、「治療される(treated)」、または「
治療(treatment)」という用語は、予防的な(preventative)（例えば、予防的な(prophyla
ctic)）、緩和的な(palliative)、および治癒的な(curative)方法、使用、または結果を
含む。「治療(treatment)」または「治療(treatments)」という用語は、組成物または薬
剤を指すこともできる。本出願全体を通して、治療とは、骨密度を増加させるまたは軟骨
損失を軽減し、これにより骨密度の低下もしくは軟骨損失による疾患の１つ以上の症状も
しくは徴候を軽減するもしくは遅延させる方法、または当技術分野で公知の技術によって
検出される際の骨密度の低下もしくは軟骨損失による疾患の完全な改善を意味する。当該
分野で認識される方法(Art recognized methods)が、骨密度の低下または軟骨損失による
疾患およびその症状を検出するために利用可能である。これらには、いくつか例を挙げる
と、臨床検査、画像化（例えば、骨密度測定、Ｘ線、二重エネルギーＸ線吸収測定、磁気
共鳴画像化、コンピュータ断層撮影、超音波および核画像化）、体液（例えば、血清、尿
または滑液）中のバイオマーカーの測定（例えば、Ｃ反応性タンパク質（配列番号：２）
、抗環状シトルリン化ペプチド、血清アルカリホスファターゼ（配列番号：３）、クレア
チンキナーゼＢＢイソ酵素（配列番号：４または５）、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ、
マトリックスメタロプロテイナーゼ－３（配列番号：６）、Ｉ型コラーゲンのＣ末端テロ
ペプチド（配列番号：７または８）、ＩＩ型コラーゲンのＣ末端テロペプチド（配列番号
：９）、Ｉ型コラーゲンのＮ末端テロペプチド、コラーゲンＩＩＡのＮ末端プロペプチド
および血清ヒアルロン酸の検出）、または生検／組織病理学的評価（例えば、軟骨と軟骨
下骨の染色）を含むが、これらに限定されない。例えば、骨ミネラルデンシトメトリーに
よって測定した場合、骨密度の少なくとも１％の増加がある場合、または処置前の対象ま
たは対照対象と比較して、対象における骨密度の低下または軟骨損失による疾患の１つ以
上の症状の約１％の低下がある場合、開示される方法は治療であると考えられる。したが
って、低下は、約１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１
００％、またはその間の任意の量であり得る。

本明細書中で使用される「骨密度の低下または軟骨損失による疾患(disease due to re
duced bone density or cartilage loss)」という用語は、以下に制限されないが、骨粗
鬆症、大理石骨病、関節リウマチ、変形性関節症、骨腫瘍、骨折、およびページェット病
などの、既知または未知の、様々な病因および原因の骨吸収(bone resorption)または軟
骨の分解(cartilage degradation)による様々なタイプおよびサブタイプの骨および関節
疾患を包含する。

「対象(subject)」という用語は、骨密度の低下もしくは軟骨損失による疾患を有する
かもしくは発症するリスクのある脊椎動物、または骨密度を増加させるおよび／または軟
骨を修復するための治療を必要とすると考えられる脊椎動物を指すことができる。対象に
は、霊長類などの哺乳動物、より好ましくはヒトなどのすべての温血動物が含まれる。非
ヒト霊長類も同様に対象である。対象という用語は、ネコ、イヌなどの飼いならされた動
物、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）および実験動物（例えば、マ
ウス、ウサギ、ラット、アレチネズミ、モルモットなど）を含む。したがって、獣医学的
使用および医学的製剤が、本明細書中に包含される。

リポソーム
本明細書中で使用される用語「リポソーム(liposome)」、「リポソームの(liposomal)
」および関連する用語は、小胞を形成する１つ以上の二重層膜によって外部媒体から隔離
された内部水性空間を特徴とする。特定の実施形態において、リポソームの内部水性空間
は、トリグリセリドなどの、中性脂質、非水相（油相）、水－油エマルジョンまたは非水
相を含む他の混合物を実質的に含まない。リポソームの非限定的な例には、５０～５００
ｎｍ、５０～４５０ｎｍ、５０～４００ｎｍ、５０～３５０ｎｍ、５０～３００ｎｍ、５
０～２５０ｎｍ、５０～２００ｎｍ、１００～５００ｎｍ、１００～４５０ｎｍ、１００
～４００ｎｍ、１００～３５０ｎｍ、１００～３００ｎｍ、１００～２５０ｎｍまたは１
００～２００ｎｍの平均直径範囲を有する小さな単ラメラ小胞（ＳＵＶ）、大きな単ラメ
ラ小胞（ＬＵＶ）、および多ラメラ小胞（ＭＬＶ）が含まれる。

リポソームの二重層膜は、典型的には少なくとも１つの脂質、すなわち、空間的に分離
された疎水性および親水性ドメインを含む合成または天然起源の両親媒性分子によって形
成される。脂質の例としては、リン脂質、ジグリセリド、ジ脂肪族（dialiphatic）糖脂
質等のジ脂肪族鎖脂質(dialiphatic chain lipids)、スフィンゴミエリンおよびスフィン
ゴ糖脂質のような単一脂質、ならびにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定
されない。本開示によるリン脂質の例としては、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ
－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホス
ホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（
ＤＰＰＣ）、１－パルミトイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン
（ＰＳＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジ
ルコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（
ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル１－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）
、水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリ
セロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）（ナトリウム塩）（ＤＭＰＧ）、１
，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）
（ナトリウム塩）（ＤＰＰＧ）、１－パルミトイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ
－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）（ナトリウム塩）（ＰＳＰＧ）、１，２
－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）（ナ
トリウム塩）（ＤＳＰＧ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１
’－ｒａｃ－グリセロール）（ＤＯＰＧ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－
３－ホスホ－Ｌ－セリン（ナトリウム塩）（ＤＭＰＳ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ
－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（ナトリウム塩）（ＤＰＰＳ）、１，２－ジステア
ロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（ナトリウム塩）（ＤＳＰＳ）、１，
２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（ＤＯＰＳ）、１，２－ジ
ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（ナトリウム塩）（ＤＭＰＡ）、１，
２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（ナトリウム塩）（ＤＰＰＡ）
、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（ナトリウム塩）（ＤＳ
ＰＡ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（ナトリウム塩）（
ＤＯＰＡ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（
ＤＰＰＥ）、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール）－１，２－ジパルミ
トイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＥＧ－ＤＰＰＥ）、１－パル
ミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）
、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）
、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール）－１，２－ジステアロイル－ｓ
ｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＥＧ－ＤＳＰＥ）、１，２－ジオレオイ
ル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジパルミトイ
ル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ミオ－イノシトール）（アンモニウム塩）（
ＤＰＰＩ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホイノシトール（アン
モニウム塩）（ＤＳＰＩ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１
’－ミオ－イノシトール）（アンモニウム塩）（ＤＯＰＩ）、カルジオリピン、Ｌ－α－
ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、およびＬ－α－ホスファチジルエタノールアミン（Ｅ
ＰＥ）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、脂質は、１つ
以上の上記脂質の脂質混合物、または１つ以上の上記脂質と１つ以上の上記に列挙されて
いない他の脂質、膜安定化剤もしくは酸化防止剤との混合物である。

いくつかの実施形態では、二重層膜中の脂質のモルパーセントは、約８０、７９、７８
、７７、７６、７５、７４、７３、７２、７１、７０、６９、６８、６７、６６、６５、
６４、６３、６２、６１、６０、５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５
１、５０、４９、４８、４７、４６、４５以下、またはそれらの間の任意の値もしくは値
の範囲（例えば、約４５～８０％、約４５～７５％、約４５～７０％、約４５～６５％、
約５０～８０％、約５０～７５％、約５０～７０％、約５０～６５％）である。

いくつかの実施形態では、脂質二重層の脂質は、第１の脂質と第２の脂質との混合物で
ある。いくつかの実施形態では、第１の脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ＨＳＰ
Ｃ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＰＳＰＣおよびそれらの組み
合わせから実質的に構成される群より選択され、第２の脂質は、ホスファチジルエタノー
ルアミン、ホスファチジルグリセロール、ＰＥＧ－ＤＳＰＥ、ＤＰＰＧ、ＤＯＰＧおよび
それらの組み合わせから実質的に構成される群より選択される。他の実施形態では、二重
層膜中の第１の脂質のモルパーセントは、約７９．９、７９．５、７９．１、７９、７８
、７７、７６、７５、７４、７３、７２、７１、７０、６９、６８、６７、６６、６５、
６４、６３、６２、６１、６０、５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５
１、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８
、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０以下、またはそれらの間の任意の値
もしくは値の範囲（例えば、約３０～７９．９％、約３０～７９．５％、約３０～７９．
１％、約３０～７０％、約３５～６５％または約４０～６０％）であり、二重層膜中の第
２の脂質のモルパーセントは、約０．１または０．５以上２５、２４、２３以下またはそ
の間の任意の値もしくは値の範囲（例えば、約約０．１～２５％、約０．１～２４％、約
０．１～２３％、約０．５～２５％、約０．５～２４％、約０．５～２３％、約０．７～
２５％、約０．７～２４％または約０．７～２３％）である。

リポソームの二重層膜は、約５５モルパーセント未満のステロイド、好ましくはコレス
テロールをさらに含む。特定の実施形態では、二重層膜中のコレステロールのモルパーセ
ントは、約２０～５５％、約２０～５０％、約２０～４５％、約２５～５５％、約２５～
５０％、約２５～４５％、約３０～５５％、約３０～５０％、または約３０～４５％であ
る。

具体的な一実施形態では、二重層膜中の脂質およびコレステロールのモルパーセントは
、約４５～８０％：２０～５５％または５０～７５％：２５～５０％である。他の具体的
な実施形態では、二重層膜中の第１の脂質、第２の脂質およびコレステロールのモルパー
セントは、約３０～７９．９％：０．１％～２５％：２０～５５％、３０～７５％：０．
１～２５％：２０～５０％または３５～７０％：０．５～２５％：２０～４５％であり、
第１の脂質はＨＳＰＣであり、第２の脂質はＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００である。

リモート充填(Remote Loading)
本明細書で使用される「リモート充填(remote loading)」という用語は、多原子イオン
勾配(polyatomic ion-gradient)によって、薬物を外部媒体からリポソームの二重層膜を
横切って内部水性空間に移動させる手順を含む薬物充填方法である。このような勾配は、
少なくとも１つの多原子イオンを捕捉剤としてリポソームの内部水性空間にカプセル化し
、カラム分離、透析または遠心分離などの公知の技術によって、リポソームの外部媒体を
より低い多原子イオン濃度の外部媒体、例えば、純水、スクロース溶液および生理食塩水
に置き換えることによって生成される。多原子イオン勾配は、リポソームの内部水性空間
と外部媒体との間に生成され、治療剤をリポソームの内部水性空間に捕捉する。捕捉剤と
しての具体的な多原子イオンとしては、硫酸塩、亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸水素塩、モ
リブデン酸塩、炭酸塩および硝酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。具体的な捕
捉剤としては、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、モリブデン酸アンモニウム、ス
クロースオクタ硫酸アンモニウム(ammonium sucrose octasulfate)、スクロースオクタ硫
酸トリエチルアンモニウム(triethylammonium sucrose octasulfate)、および硫酸デキス
トラン、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

一実施形態では、スクロースオクタ硫酸トリエチルアンモニウムの濃度は、約１０～約
２００ｍＭ、約５０～約１５０ｍＭまたは約６０～約１００ｍＭである。他の実施形態で
は、硫酸アンモニウムの濃度は、約１００～約６００ｍＭ、約１５０～約５００ｍＭまた
は約２００～約４００ｍＭである。

本発明によれば、捕捉剤をカプセル化するリポソームは、現在知られているかまたは後
に開発される技術のいずれかによって調製することができる。例えば、ＭＬＶリポソーム
は、捕捉剤を含む所定の脂質組成物の水和脂質フィルム、噴霧乾燥粉末または凍結乾燥ケ
ーキによって直接形成することができる；ＳＵＶリポソームおよびＬＵＶリポソームは、
超音波処理、均質化、マイクロ流動化(microfluidization)または押出によってＭＬＶリ
ポソームからサイズ調整する(sized)ことができる。

医薬組成物
本発明は（ａ）二重層膜を有する少なくとも１つのリポソーム；（ｂ）捕捉剤；および
（ｃ）骨密度の低下または軟骨損失による疾患を治療するための治療剤を含み、前記二重
層膜が少なくとも１つの脂質を含み、前記脂質に対する前記治療剤のモル比が約０．１以
上である、徐放性医薬組成物に関する。

一実施形態では、徐放性医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、
希釈剤、活性成分のための媒体、防腐剤、凍結保護剤またはそれらの組み合わせをさらに
含む。具体的な一実施形態では、二重層膜の重量パーセントは約０．１～１５％であり；
捕捉剤の重量パーセントは約０．１～１２％であり；薬学的に許容される賦形剤（スクロ
ース、ヒスチジン、塩化ナトリウムおよび超純水など）、希釈剤、活性成分のための媒体
、防腐剤、凍結保護剤またはそれらの組み合わせの重量パーセントは約７５．０～９９．
９％である。

特定の実施形態において、骨密度の低下または軟骨損失による疾患を治療するための治
療剤は、カテプシンＫ阻害剤である。カテプシンＫ阻害剤の非限定的な例としては、バリ
カチブ(balicatib)（Ｃ_２３Ｈ_３３Ｎ_５Ｏ_２）、オダナカチブ(odanacatib)（Ｃ_２５Ｈ_２
_７Ｆ_４Ｎ_３Ｏ_３Ｓ）、Ｌ－００６２３５（Ｃ_２４Ｈ_３０Ｎ_６Ｏ_２Ｓ）、ＯＮＯ－５３３４
（Ｃ_２１Ｈ_３４Ｎ_４Ｏ_４Ｓ）、ＭＩＶ－７１１およびレラカチブ(relacatib)（Ｃ_２７Ｈ
_３２Ｎ_４Ｏ_６Ｓ）がある。他の実施形態では、骨密度の低下または軟骨損失による疾患を
治療するための治療剤は、非水溶性または疎水性である。医薬組成物の徐放性プロファイ
ルは、骨密度の低下または軟骨損失による疾患を治療するための治療剤の半減期、治療濃
度および作用期間を延長し、したがって、治療効力を持続させ、治療剤の投薬頻度を減少
させる。

一態様では、医薬組成物の徐放性プロファイルは、高い薬物カプセル化効率による。医
薬組成物のカプセル化効率は、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７
５％、８０％、８５％または９０％である。

他の態様では、医薬組成物の徐放性プロファイルは、より高い治療剤対脂質モル比(hig
her therapeutic agent to lipid molar ratio)による。具体的な一実施形態において、
１つ以上の脂質に対する骨密度の低下または軟骨損失による疾患を治療するための治療剤
のモル比(molar ratio of the therapeutic agent for treating a disease due to redu
ced bone density or cartilage loss to the one or more lipids)は、約０．１以上、
または約０．１以上約２０未満、約１５未満、約１０未満、約５未満、約４未満、約３未
満、約２未満もしくは約１．５未満である。

さらなる他の態様では、骨密度の低下または軟骨損失による疾患を治療するための治療
剤の半減期が、骨密度の低下または軟骨損失による疾患を治療するための遊離治療剤(fre
e therapeutic agent for treating a disease due to reduced bone density or cartil
age loss)の半減期と比較して、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも７．５倍
、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、延長される。

本発明はまた、本明細書に記載される医薬組成物の有効量を、それを必要とする対象に
投与することを含み、それにより、対象における骨密度の低下または軟骨損失による疾患
の症状および／または徴候を軽減する、骨密度の低下または軟骨損失による疾患を治療す
る方法を提供する。

医薬組成物は、関節内(intraarticular)、皮下(subcutaneous)、皮下(subdermal)、皮
内(intradermal)、経皮(transdermal)または筋肉内(intramuscular)経路などの、注射に
適するように製剤化される。本医薬組成物はまた、経皮パッチとして投与されるように製
剤化される。

本発明の医薬組成物の投与量は、実施形態に応じて当業者が決定することができる。単
位用量または複数用量形態が包含され、各々は、特定の臨床設定において利点を提供する
。本発明によれば、投与されるべき医薬組成物の実際の量は、治療される対象の年齢、体
重、状態、および任意の既存の医学的状態に従って、ならびに医療専門家の裁量により変
化することができる。

一実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、骨密度の低下または軟骨損失に
よる疾患を治療するための治療剤の有意に延長された放出プロファイル(significant ext
ended-release profile)を示す。例えば、本発明の医薬組成物は、ラットにおけるＬ－０
０６２３５の半減期を５６．６時間に延長し、これは、経口投与によるラットにおけるＬ
－００６２３５の半減期（３．４時間）（ＪＭｅｄＣｈｅｍ２００５１：４８（
２４）：７５２０－３４）と比較して１６．６倍長い。これらの医薬組成物は、１日１回
から２回を、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、週１回、
２週間に１回、１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、４ヶ月に１回、５ヶ月に１
回、または６ヶ月に１回に投与頻度を減少させるように開発される。

本発明の実施形態を以下の実施例によって説明するが、下記実施例はその範囲に限定を
課すものとして決して解釈されるべきではない。それどころか、本明細書の説明を読んだ
後、本発明の概念から逸脱することなく当業者にそれ自体を示唆し得る、様々な他の実施
形態、修飾、およびそれらの同等物の対象となり得ることが明確に理解されるべきである
。以下の実施例に記載される研究の間、特記しない限り、従来の手順に従った。

実施例１リポソームＬ－００６２３５製剤の調製
空のリポソームを、脂質フィルム水和－押出法(lipid film hydration-extrusion meth
od)によって調製した。二重層膜成分である、ＨＳＰＣ、コレステロール、およびＤＳＰ
Ｅ－ＰＥＧ２０００（モルパーセント５９．５／３９．６／０．９）を、有機溶媒、例
えば、クロロホルムおよびジクロロメタン、に溶解した。ロータリーエバポレーター中で
真空下で有機溶媒を除去することによって、薄い脂質フィルムを形成した。乾燥脂質フィ
ルムを３００ｍＭ硫酸アンモニウムを含む水溶液中で６０℃で３０分間水和し、硫酸ア
ンモニウムが水性コアにカプセル化された空のリポソームを形成した。スクロースオクタ
硫酸トリエチルアンモニウムなどの、他の捕捉剤も使用した。液体窒素と６０℃の水との
間の５回の凍結融解サイクルの後、空のリポソームを、続いて、０．２μｍの孔径を有す
るポリカーボネートフィルター膜に通して１０回押し出した。カプセル化されていない捕
捉剤を、９．４％スクロース溶液または０．９％ＮａＣｌ溶液に対する透析法またはダ
イアフィルトレーション法(diafiltration method)によって除去して、空のリポソームの
内側水相と外側水相との間に多原子イオン勾配を作製した。

３．０ｍｇ／ｍＬのＬ－００６２３５（ＤＣＣｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｃｈｉｎａから
市販されている）、空のリポソーム（６．０ｍＭの脂質を含む）、および５０ｍＭのヒス
チジン緩衝液（ｐＨ６．５）を含む反応混合物を、６０℃で１５分間インキュベートし
た。この反応混合物のカプセル化されていないＬ－００６２３５を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ^Ｔ
^ＭＧ－５０ファインゲル（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＵＳＡ）または９．４％ス
クロース溶液に対する透析袋（ＳｐｅｃｔｒｕｍＬａｂｓ）によって分離して、リポソ
ームＬ－００６２３５製剤を得た。リポソームＬ－００６２３５製剤の薬物対脂質モル比
（Ｄ／Ｌ）を計算するために、ＨＰＬＣを用いてリポソームＬ－００６２３５製剤のカプ
セル化Ｌ－００６２３５の濃度を測定し、紫外／可視（ＵＶ／Ｖｉｓ）分光光度計を用い
てリポソームＬ－００６２３５製剤の脂質の濃度を測定した。

カプセル化効率は、Ｌ－００６２３５の濃度を空のリポソームの脂質濃度で割ることに
よって計算された、反応混合物の公称Ｄ／Ｌで、リポソームＬ－００６２３５製剤の薬物
対脂質モル比（Ｄ／Ｌ）を割ることによって計算した。粒度分布は動的光散乱装置（Ｚｅ
ｔａｓｉｚｅｒＮａｎｏ－ＺＳ９０，Ｍａｌｖｅｒｎ，ＵＳＡ）により測定した。

捕捉剤として３００ｍＭ硫酸アンモニウムを使用した場合、リポソームＬ－００６２３
５製剤は、最終Ｄ／Ｌが１．００であり、カプセル化効率が９３．４％であり、リポソー
ムの平均直径は１９３．７ｎｍであった。

実施例２各種リポソームカテプシンＫ阻害剤製剤の調製
本実施例で使用したカテプシンＫ阻害剤としては、Ｌ－００６２３５およびバリカチブ
（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ，ＵＳＡ）であった。空のリポソームを、以下の捕
捉剤を用いて、実施例１に従って調製した：（１）３００ｍＭの硫酸アンモニウムおよび
（２）７５ｍＭのスクロースオクタ硫酸トリエチルアンモニウム。リポソームＬ－００６
２３５製剤の充填手順は、実施例１に基づいた。リポソームバリカチブ製剤は以下のよう
にして調製した：２ｍｇ／ｍＬのバリカチブ、空のリポソームおよび５０ｍＭヒスチジ
ン緩衝液（ｐＨ６．５）を含有する反応混合物を６０℃で１５分間インキュベートした
。カプセル化されていない薬物を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ^ＴＭＧ－５０ファインゲル（ＧＥ
Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＵＳＡ）によって除去して、リポソームバリカチブ製剤を得
た。本実施例におけるリポソーム製剤のＤ／Ｌ比を、実施例１の工程に従って計算した。
表１に、Ｌ－００６２３５およびバリカチブの充填プロファイルを示す。

実施例３リポソームＬ－００６２３５製剤の薬物動態（ＰＫ）研究
７～８週齢の雌Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを用いて、リポソームＬ－００６
２３５製剤のインビボＰＫ評価を行った。ラットを、１２時間の明／１２時間の暗日周期
で操作される保持室に収容し、水および食物を自由に摂取させた。

ラットを２群（各群ｎ＝４）に分けた。第１群のラットには、それぞれ、最終濃度１０
．０ｍｇ／ｍＬで、０．０６ＮＨＣｌを含有する９．４％スクロース溶液にＬ－００６
２３５を溶解することによって調製された、遊離Ｌ－００６２３５２．５ｍｇ／ｋｇを
関節内注射で投与し、第２群のラットには、それぞれ、最終濃度１８．１ｍｇ／ｍＬで実
施例１に従って調製された、リポソームＬ－００６２３５製剤５．０ｍｇ／ｋｇを関節内
注射で投与した。血液サンプルを、注射してから５、１５、３０分、１、２、４、８、２
４、４８、７２、９６および１６８時間後に集めた。血漿サンプルを遠心分離によって得
、液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析(liquid chromatography-tandem mass spe
ctrometry)を用いて分析した。血漿濃度対時間曲線を、ＰＫＳｏｌｖｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ
ＭｅｔｈｏｄｓＰｒｏｇｒａｍｓＢｉｏｍｅｄ．２０１０；９９（３）：３０６－
３１４）の非コンパートメント分析モデル(noncompartmental analysis model)を用いて
分析した。２つのＬ－００６２３５製剤のＰＫパラメータを表２に要約する。

表２の結果から、リポソームＬ－００６２３５製剤の用量正規化(dose normalized)Ｃ
_ｍａｘ（Ｃ_ｍａｘ／Ｄ）が遊離Ｌ－００６２３５製剤の４０．５％であり、リポソームＬ
－００６２３５製剤の半減期（ｔ_１／２）（５６．６時間）が遊離Ｌ－００６２３５製剤
の半減期（４．５時間）よりも大幅に長かったことが示される。リポソームＬ－００６２
３５製剤の曲線下の用量正規化面積(dose-normalized area under the curve)（ＡＵＣ_０
_－ｔ／Ｄ）から、１００％のＬ－００６２３５が注射してから２４時間後に放出されたこ
とを示す、遊離Ｌ－００６２３５製剤のＡＵＣ_０－ｔ／Ｄと比較して、注射してから１６
８時間後にリポソームＬ－００６２３５製剤から８９．７％のＬ－００６２３５が放出さ
れたことを示す。

さらに、図１から、血漿Ｌ－００６２３５が遊離Ｌ－００６２３５注射の２４時間後に
は検出不可能であったのに対して、血漿Ｌ－００６２３５がリポソームＬ－００６２３５
製剤を投与してから１６８時間まで検出されたことが示される。これらの結果は、特許請
求の範囲に規定された医薬組成物がカテプシンＫ阻害剤の放出を持続させたという結論を
支持する。

Claims

（ａ）二重層膜を含む少なくとも１つのリポソームであって、前記二重層膜が少なくとも１つの脂質を含む、リポソーム；
（ｂ）捕捉剤；および
（ｃ）カテプシンＫ阻害剤
を含み、前記脂質に対する前記カテプシンＫ阻害剤のモル比が０．１以上であり、
前記カテプシンＫ阻害剤は、バリカチブ、オダナカチブ、Ｌ－００６２３５、ＯＮＯ－５３３４、ＭＩＶ－７１１、レラカチブおよびそれらの組合せからなる群から実質的に選択され、
前記捕捉剤は、前記カテプシンＫ阻害剤を多原子イオン勾配によりリポソーム内部の水性空間に捕捉するための捕捉剤である、医薬組成物。
前記リポソームの平均粒子径が５０ｎｍ～５００ｎｍである、請求項１に記載の医薬組成物。
前記二重層膜がコレステロールをさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
前記二重層膜中の前記コレステロールのモルパーセントが２０～５５％である、請求項３に記載の医薬組成物。
前記捕捉剤が、スクロースオクタ硫酸トリエチルアンモニウム、硫酸アンモニウムおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記スクロースオクタ硫酸トリエチルアンモニウムの濃度が１０～２００ｍＭである、請求項５に記載の医薬組成物。
前記硫酸アンモニウムの濃度が１００～６００ｍＭである、請求項５に記載の医薬組成物。
前記カテプシンＫ阻害剤が、５０％より高いカプセル化効率で前記リポソーム中にカプセル化される、請求項１に記載の医薬組成物。
骨密度の低下または軟骨損失による疾患を治療するための治療剤であって、
請求項１に記載の医薬組成物の治療有効量をそれを必要とする対象に投与することを含む、治療剤。
前記カテプシンＫ阻害剤の半減期が、遊離カテプシンＫ阻害剤の半減期と比較して、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも７．５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍延長される、請求項９に記載の治療剤。
前記医薬組成物が、少なくとも３日に１回、少なくとも１週間に１回、少なくとも２週間に１回、または少なくとも１ヶ月に１回投与される、請求項９に記載の治療剤。
前記医薬組成物が注射によって投与される、請求項９に記載の治療剤。
前記注射が、関節内(intraarticular)、皮下(subcutaneous)、皮下(subdermal)、皮内(intradermal)または筋肉内(intramuscular)経路を含む、請求項１２に記載の治療剤。