JP7414806B2 - T細胞を活性化状態によって選別するためのシステムおよび方法 - Google Patents
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Description
本出願は、2018年8月29日に出願された米国仮特許出願番号62/724,428の利益を主張し、これは、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本開示は、種々の方法を提供する。種々の方法が、他の方法との使用に適していることを理解されたい。同様に、種々の方法が、本明細書の他の場所で記載されるシステムとの使用に適していることを理解されたい。本開示の特徴が所与の方法に関して記載される場合、その特徴はまた、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、本明細書に記載される他の方法およびシステムに有用であることが明確に企図される。
本開示はまた、システムを提供する。本システムは、本明細書に記載の方法での使用に適することができる。本開示の特徴が所与のシステムに関して記載される場合、その特徴はまた、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、本明細書に記載される他のシステムおよび方法と組み合わせることができることが明示的に企図される。
末梢血を、健康なドナーからヘパリンを含む滅菌注射器内に採取した。CD3+、CD4+、またはCD8+T細胞を全血から抽出し(RosetteSep,StemCell Technologies)、T細胞活性化培地(StemCell Technologies)で培養した。単離の24時間後、CD2/CD3/CD28に対する四量体抗体を培地に添加してT細胞を活性化した。活性化状態(CD69+)およびT細胞サブタイプ(CD4+、CD8+)を、抗体免疫蛍光法で確認した。蛍光強度および寿命の画像を、時間相関単一光子計数電子機器による蛍光寿命画像化に適合された特注の多光子蛍光顕微鏡(Bruker Fluorescence Microscopy,Middleton,WI)を使用して取得した。T細胞を100倍の対物レンズで画像化した(NA=1.3)。調整可能なチタンサファイアレーザーは、NAD(P)H励起のために750nm、FAD励起のために890nmの励起光を提供した。サンプルでのレーザー出力は、NAD(P)H用は3.0~3.5mW、FAD用は5.3~5.7mWであった。440/80nmおよび550/100nmのバンドパスフィルタを使用して、NAD(P)HおよびFAD蛍光発光をそれぞれフィルタ処理した。蛍光発光を、GaAsPPMTによって検出し、256個の時間ビンでの蛍光寿命の減衰を、時間相関単一光子計数電子機器(SPC-150,Becker&Hickl,Berlin,Germany)によって、各ピクセルについて取得した。赤血球からの第2高調波発生を、機器の応答関数として使用して、240psの半値全幅を有した。蛍光寿命減衰を、機器の応答関数からデコンボリューションし、2成分指数関数減衰モデルである、I(t)=α1*exp(-t/τ1)+α2*exp(-t/τ2)+C(式中、I(t)は、レーザーパルス後の時間tの関数としての蛍光強度であり、α1およびα2は、それぞれ短および長寿命成分の画分寄与であり(すなわち、α1+α2=1)、τ1およびτ2は、それぞれ短および長寿命であり、Cは背景光を考慮する)に適合させた。NAD(P)H強度画像を、カスタマイズされた画像処理ルーチンを使用して、CellProfilerのエッジ検出および閾値処理方法を使用して、細胞質、ミトコンドリア、および核にセグメント化した。光学レドックス比の画像(NAD(P)HおよびFADの合計強度で割ったNAD(P)Hの蛍光強度)ならびにNAD(P)HおよびFADの平均蛍光寿命(τm=α1*τ1+α2*τ2)を計算した(Matlab)。光学レドックス比、NAD(P)Hτm、NAD(P)Hτ1、NAD(P)Hτ2、NAD(P)Hα1、FADτm、FADτ1、FADτ2、およびFADα1を含むOMIエンドポイントを、各セグメント化細胞の細胞内の全てのピクセルにわたって平均した。μm2による細胞サイズもまた、細胞内のピクセル数から計算した。
1.T細胞選別装置であって、
細胞選別経路であって、
(i)入口と
(ii)入口の下流の入口に結合された観察ゾーンであって、個々の自家蛍光調査のためにT細胞を提示するように構成される観察ゾーンと、
(iii)選別器入口および少なくとも2つの選別器出口を有する細胞選別器であって、観察ゾーンの下流の選別器入口を介して観察ゾーンに結合され、選別器信号に基づいて、細胞を、選別器入口から少なくとも2つの選別器出口の1つに選択的に誘導するように構成される細胞選別器と、を含む細胞選別経路と、
観察ゾーンに位置付けられるT細胞から自家蛍光データセットを取得するように構成される単一細胞自家蛍光検出器であって、各自家蛍光データセットについて自家蛍光寿命情報を取得するように構成される単一細胞自家蛍光検出器と、
細胞選別器および単一細胞自家蛍光検出器と電子通信するプロセッサと、
非一時的なコンピュータ可読媒体であって、プロセッサによって実行されると、プロセッサに
a)自家蛍光データセットを受け取らせ、
b)活性化値に基づいて、選別器信号を細胞選別器に提供させる命令を、その上に格納し、選別器信号が、活性化値が所定の閾値を超える場合、少なくとも2つの選別器出口の第1の出口に、そして活性化値が所定の閾値以下である場合、少なくとも2つの選別器出口の第2の出口に、T細胞を選択的に誘導するように細胞選別器を誘導し、活性化値が、T細胞について自家蛍光データセットの少なくとも1つの代謝エンドポイントを入力値として使用して計算され、少なくとも1つの代謝エンドポイントが、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD(P)H)最短蛍光寿命振幅成分(α1)を含む、非一時的なコンピュータ可読媒体と、を含む、T細胞選別装置。
2.細胞選別経路が、マイクロ流体経路またはナノ流体経路を含む、記述1のT細胞選別装置。
3.T細胞選別装置が、入口に結合されたフロー調節器をさらに含む、記述1または2のT細胞選別装置。
4.フロー調節器は、単一細胞自家蛍光分光計が、各自家蛍光データセットの自家蛍光寿命情報を取得することを可能にする速度で、観察ゾーンを通って細胞が流れるように構成される、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
5.T細胞選別装置が、光源をさらに含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
6.光源がパルス光源である、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
7.パルス光源が、チタンサファイアレーザーである、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
8.光源が、NAD(P)Hからの蛍光を励起するように調整される波長を有する光を放出する、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
9.単一細胞自家蛍光分光計が、1fs~10nsの半値全幅パルス幅を有するパルス光源を含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
10.単一細胞自家蛍光分光計が、30fs~1nsの半値全幅パルス幅を有するパルス光源を含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
11.単一細胞自家蛍光検出器が、1kHz~20GHzの繰り返し率で自家蛍光データセットを取得するように構成される、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
12.単一細胞自家蛍光検出器が、1MHz~1GHzの繰り返し率で自家蛍光データセットを取得するように構成される、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
13.単一細胞自家蛍光検出器が、20MHz~100MHzの繰り返し率で自家蛍光データセットを取得するように構成される、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
14.単一細胞自家蛍光検出器が、時間相関単一光子計数を介して自家蛍光データセットを取得するように構成される、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
15.単一細胞自家蛍光検出器が、光電子増倍管または光ダイオードである、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
16.単一細胞自家蛍光検出器が、目的の蛍光信号を透過するように構成される検出器側フィルタを含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
17.検出器側フィルタが、NAD(P)H蛍光を透過するように構成される、直前の記述のT細胞選別装置。
18.T細胞選別装置が、細胞サイズを測定し、細胞サイズをプロセッサに通信するように構成される細胞サイズ測定ツールをさらに含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
19.T細胞選別装置が、観察ゾーン内に位置付けられる細胞の画像を取得し、その画像をプロセッサに通信するように構成される細胞イメージャをさらに含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置。
20.T細胞活性化状態を特徴づける方法であって、
a)所望により、未知の活性化状態のT細胞の集団を受け取ることと、
b)T細胞の集団の1つのT細胞についての自家蛍光データセットを取得することであって、自家蛍光データセットは、所望により自家蛍光寿命情報を含む、取得することと、
c)活性化値に基づいて、そのT細胞の活性化状態を特定することと、を含み、活性化値を、自家蛍光データセットの少なくとも一部を使用して計算し、活性化値が、所望により、そのT細胞について自家蛍光データセットの少なくとも1つの代謝エンドポイントを入力値として使用して計算され、少なくとも1つの代謝のエンドポイントが、所望により、NAD(P)Hα1を含む、方法。
21.T細胞を選別する方法であって、
a)未知の活性化状態のT細胞の集団を受け取ることと、
b)T細胞の集団の各T細胞についての自家蛍光データセットを取得することであって、各自家蛍光データセットが、自家蛍光寿命情報を含む、取得することと、
c)活性化値に基づいて、T細胞の集団の第1の部分を、T細胞集団の第2の部分から物理的に単離することと、を含み、T細胞の集団の各T細胞を、活性化値が所定の閾値を超える場合、第1の部分に、そして活性化値が所定の閾値以下である場合、第2の部分に入れ、活性化値が、T細胞の集団の各T細胞について自家蛍光データセットの少なくとも1つの代謝エンドポイントを入力値として使用して計算され、少なくとも1つの代謝エンドポイントが、NAD(P)Hα1を含む、方法。
22.少なくとも1つの代謝エンドポイントが、NAD(P)H蛍光強度、FAD蛍光強度、NAD(P)H/FADまたはFAD/NAD(P)HまたはNAD(P)H/[FAD+NAD(P)H]またはFAD/[FAD+NAD(P)H]として定義される光学レドックス比、NAD(P)H平均蛍光寿命(τm)、NAD(P)H第1蛍光寿命成分(τ1)、NAD(P)H第2蛍光寿命成分(τ2)、フラビンアデニンジヌクレオチド(FAD)τm、FADα1、FADτ1、FADτ2、およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるエンドポイントをさらに含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
23.少なくとも1つの代謝エンドポイントが、光学レドックス比を含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
24.少なくとも1つの代謝エンドポイントが、NAD(P)Hτ1を含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法、
25.少なくとも1つの代謝エンドポイントが、NAD(P)Hτmを含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
26.少なくとも1つの代謝エンドポイントが、NAD(P)Hτ2を含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法、
27.少なくとも1つの代謝エンドポイントが、FADτmを含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
28.少なくとも1つの代謝エンドポイントが、FADα1を含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
29.少なくとも1つの代謝エンドポイントが、FADτ1を含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
30.少なくとも1つの代謝エンドポイントが、FADτ2を含む、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
31.活性化値が、T細胞の集団の各T細胞について細胞サイズを入力値として使用して計算される、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
32.所定の閾値が、既知の活性化状態を有するT細胞の対照集団についての分類、および特徴選択機械学習を介して選択される、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
33.所定の閾値が、ドナー正規化される、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
34.活性化値が所定の閾値を超えるT細胞が、CD3+、CD4+、またはCD8+T細胞である、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
35.T細胞を活性化されたものとして分類する精度が、少なくとも75%である、先行する記述のいずれか1つのT細胞選別装置または方法。
36.T細胞を活性化されたものとして分類する精度が、少なくとも80%である、直前の記述のT細胞選別装置または方法。
37.T細胞を活性化されたものとして分類する精度が、少なくとも90%である、直前の記述のT細胞選別装置または方法。
38.T細胞を活性化されたものとして分類する精度が、少なくとも95%である、直前の記述のT細胞選別装置または方法。
39.活性化T細胞を、それを必要とする対象に投与する方法であって、
a)記述21~直前の記述のいずれか1つの方法と、
b)T細胞の集団の第1の部分を、対象に導入することと、を含む方法。
40.T細胞の集団の第1の部分が、工程b)の前に改変される、記述39の方法。
41.T細胞の集団の第1の部分が、工程b)の前にキメラ抗原受容体を含むように改変される、記述40の方法。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔1〕T細胞選別装置であって、
細胞選別経路であって、
(i)入口と、
(ii)前記入口の下流の前記入口に結合された観察ゾーンであって、個々の自家蛍光調査のためにT細胞を提示するように構成される観察ゾーンと、
(iii)選別器入口および少なくとも2つの選別器出口を有する細胞選別器であって、前記細胞選別器が、前記観察ゾーンの下流の前記選別器入口を介して前記観察ゾーンに結合され、前記細胞選別器が、選別器信号に基づいて、前記選別器入口から前記少なくとも2つの選別器出口の1つに、細胞を選択的に誘導するように構成される、細胞選別器と、を含む細胞選別経路と、
前記観察ゾーンに位置付けられるT細胞からの自家蛍光データセットを取得するように構成される、単一細胞自家蛍光検出器であって、各自家蛍光データセットの自家蛍光寿命情報を取得するように構成される、単一細胞自家蛍光検出器と、
前記細胞選別器および前記単一細胞自家蛍光検出器と電子通信するプロセッサと、
非一時的なコンピュータ可読媒体であって、前記プロセッサによって実行されると、前記プロセッサに
a)前記自家蛍光データセットを受け取らせ、
b)活性化値に基づいて、前記選別器信号を前記細胞選別器に提供させる命令をその上に格納し、前記選別器信号が、前記活性化値が所定の閾値を超える場合、前記少なくとも2つの選別器出口の第1の出口に、そして前記活性化値が前記所定の閾値以下である場合、前記少なくとも2つの選別器出口の第2の出口に、前記T細胞を選択的に誘導するように前記細胞選別器を誘導し、前記活性化値が、前記T細胞の前記自家蛍光データセットについて少なくとも1つの代謝エンドポイントを入力値として使用して計算され、前記少なくとも1つの代謝エンドポイントが、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD(P)H)最短蛍光寿命振幅成分(α 1 )を含む、非一時的なコンピュータ可読媒体と、を含む、T細胞選別装置。
〔2〕前記細胞選別経路が、マイクロ流体経路またはナノ流体経路を含む、前記〔1〕に記載のT細胞選別装置。
〔3〕前記T細胞選別装置が、光源をさらに含む、前記〔1〕に記載のT細胞選別装置。
〔4〕前記T細胞選別装置が、1fs~10nsの半値全幅パルス幅を有するパルス光源をさらに含む、前記〔1〕に記載のT細胞選別装置。
〔5〕前記単一細胞自家蛍光検出器が、1kHz~20GHzの繰り返し率で前記自家蛍光データセットを取得するように構成される、前記〔1〕に記載のT細胞選別装置。
〔6〕前記単一細胞自家蛍光検出器が、時間相関単一光子計数を介して、前記自家蛍光データセットを取得するように構成される、前記〔1〕に記載のT細胞選別装置。
〔7〕前記単一細胞自家蛍光検出器が、光電子増倍管または光ダイオードである、前記〔1〕に記載のT細胞選別装置。
〔8〕前記T細胞選別装置が、細胞サイズを測定し、前記細胞サイズを前記プロセッサに通信するように構成される細胞サイズ測定ツールをさらに含む、前記〔1〕に記載のT細胞選別装置。
〔9〕前記活性化値が、T細胞の集団の各T細胞について前記細胞サイズを入力値として使用して計算される、前記〔8〕に記載のT細胞選別装置。
〔10〕前記少なくとも1つの代謝エンドポイントがさらに、光学レドックス比、NAD(P)H平均蛍光寿命(τ m )、NAD(P)H第1蛍光寿命成分(τ 1 )、NAD(P)H第2蛍光寿命成分(τ 2 )、フラビンアデニンジヌクレオチド(FAD)τ m 、FADα 1 、FADτ 1 、FADτ 2 、およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるエンドポイントを含む、前記〔1〕に記載のT細胞選別装置。
〔11〕T細胞を選別する方法であって、前記方法が、
a)未知の活性化状態を有するT細胞の集団を受け取ることと、
b)前記T細胞の集団の各T細胞についての自家蛍光データセットを取得することであって、各自家蛍光データセットが、自家蛍光寿命情報を含む、取得することと、
c)活性化値に基づいて、前記T細胞の集団の第1の部分を、前記T細胞の集団の第2の部分から物理的に単離することと、を含み、前記T細胞の集団の各T細胞を、前記活性化値が所定の閾値を超える場合、前記第1の部分に、そして前記活性化値が所定の閾値以下である場合、前記第2の部分に入れ、前記活性化値が、前記T細胞の集団の各T細胞について自家蛍光データセットの少なくとも1つの代謝エンドポイントを入力値として使用して計算され、前記少なくとも1つの代謝エンドポイントが、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD(P)H)最短蛍光寿命振幅成分(α 1 )を含む、方法。
〔12〕前記少なくとも1つの代謝エンドポイントが、NAD(P)H蛍光強度、FAD蛍光強度、光学レドックス比、NAD(P)H平均蛍光寿命(τ m )、NAD(P)H第1蛍光寿命成分(τ 1 )、NAD(P)H第2蛍光寿命成分(τ 2 )、フラビンアデニンジヌクレオチド(FAD)τ m 、FADα 1 、FADτ 1 、FADτ 2 、およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるエンドポイントをさらに含む、前記〔11〕に記載の方法。
〔13〕前記活性化値が、前記T細胞の集団の各T細胞について細胞サイズを入力値として使用して計算される、前記〔11〕に記載の方法。
〔14〕前記所定の閾値を、既知の活性化状態を有するT細胞の対照集団についての分類、および特徴選択機械学習を介して選択する、前記〔11〕に記載の方法。
〔15〕前記所定の閾値が、ドナー正規化される、前記〔11〕に記載の方法。
〔16〕前記活性化値が前記所定の閾値を超える前記T細胞が、CD3+、CD4+、またはCD8+T細胞である、前記〔11〕に記載の方法。
〔17〕T細胞を活性化されたものとして分類する精度が、少なくとも75%である、前記〔11〕に記載の方法。
〔18〕活性化T細胞を、それを必要とする対象に投与する方法であって、前記方法が、
a)前記〔11〕に記載の方法と、
b)前記T細胞の集団の第1の部分を、前記対象に導入することと、を含む方法。
〔19〕前記T細胞の集団の前記第1の部分を、工程b)の前に改変する、前記〔18〕に記載の方法。
〔20〕前記T細胞の集団の前記第1の部分を、工程b)の前にキメラ抗原受容体を含むように改変する、前記〔19〕に記載の方法。
Claims (20)
- T細胞選別装置であって、
細胞選別経路であって、
(i)入口と、
(ii)前記入口の下流の前記入口に結合された観察ゾーンであって、個々の自家蛍光調査のためにT細胞を提示するように構成される観察ゾーンと、
(iii)選別器入口および少なくとも2つの選別器出口を有する細胞選別器であって、前記細胞選別器が、前記観察ゾーンの下流の前記選別器入口を介して前記観察ゾーンに結合され、前記細胞選別器が、選別器信号に基づいて、前記選別器入口から前記少なくとも2つの選別器出口の1つに、細胞を選択的に誘導するように構成される、細胞選別器と、を含む細胞選別経路と、
前記観察ゾーンに位置付けられるT細胞からの自家蛍光データセットを取得するように構成される、単一細胞自家蛍光検出器であって、各自家蛍光データセットの自家蛍光寿命情報を取得するように構成される、単一細胞自家蛍光検出器と、
前記細胞選別器および前記単一細胞自家蛍光検出器と電子通信するプロセッサと、
非一時的なコンピュータ可読媒体であって、前記プロセッサによって実行されると、前記プロセッサに
a)前記自家蛍光データセットを受け取らせ、
b)活性化値に基づいて、前記選別器信号を前記細胞選別器に提供させる命令をその上に格納し、前記選別器信号が、前記活性化値が所定の閾値を超える場合、前記少なくとも2つの選別器出口の第1の出口に、そして前記活性化値が前記所定の閾値以下である場合、前記少なくとも2つの選別器出口の第2の出口に、前記T細胞を選択的に誘導するように前記細胞選別器を誘導し、前記活性化値が、前記T細胞の前記自家蛍光データセットについて少なくとも1つの代謝エンドポイントを入力値として使用して計算され、前記少なくとも1つの代謝エンドポイントが、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD(P)H)最短蛍光寿命振幅成分(α1)を含む、非一時的なコンピュータ可読媒体と、を含む、T細胞選別装置。 - 前記細胞選別経路が、マイクロ流体経路またはナノ流体経路を含む、請求項1に記載のT細胞選別装置。
- 前記T細胞選別装置が、光源をさらに含む、請求項1に記載のT細胞選別装置。
- 前記T細胞選別装置が、1fs~10nsの半値全幅パルス幅を有するパルス光源をさらに含む、請求項1に記載のT細胞選別装置。
- 前記単一細胞自家蛍光検出器が、1kHz~20GHzの繰り返し率で前記自家蛍光データセットを取得するように構成される、請求項1に記載のT細胞選別装置。
- 前記単一細胞自家蛍光検出器が、時間相関単一光子計数を介して、前記自家蛍光データセットを取得するように構成される、請求項1に記載のT細胞選別装置。
- 前記単一細胞自家蛍光検出器が、光電子増倍管または光ダイオードである、請求項1に記載のT細胞選別装置。
- 前記T細胞選別装置が、細胞サイズを測定し、前記細胞サイズを前記プロセッサに通信するように構成される細胞サイズ測定ツールをさらに含む、請求項1に記載のT細胞選別装置。
- 前記活性化値が、T細胞の集団の各T細胞について前記細胞サイズを入力値として使用して計算される、請求項8に記載のT細胞選別装置。
- 前記少なくとも1つの代謝エンドポイントがさらに、光学レドックス比、NAD(P)H平均蛍光寿命(τm)、NAD(P)H第1蛍光寿命成分(τ1)、NAD(P)H第2蛍光寿命成分(τ2)、フラビンアデニンジヌクレオチド(FAD)τm、FADα1、FADτ1、FADτ2、およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるエンドポイントを含む、請求項1に記載のT細胞選別装置。
- T細胞を選別する方法であって、前記方法が、
a)未知の活性化状態を有するT細胞の集団を受け取ることと、
b)前記T細胞の集団の各T細胞についての自家蛍光データセットを取得することであって、各自家蛍光データセットが、自家蛍光寿命情報を含む、取得することと、
c)活性化値に基づいて、前記T細胞の集団の第1の部分を、前記T細胞の集団の第2の部分から物理的に単離することと、を含み、前記T細胞の集団の各T細胞を、前記活性化値が所定の閾値を超える場合、前記第1の部分に、そして前記活性化値が所定の閾値以下である場合、前記第2の部分に入れ、前記活性化値が、前記T細胞の集団の各T細胞について自家蛍光データセットの少なくとも1つの代謝エンドポイントを入力値として使用して計算され、前記少なくとも1つの代謝エンドポイントが、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD(P)H)最短蛍光寿命振幅成分(α1)を含む、方法。 - 前記少なくとも1つの代謝エンドポイントが、NAD(P)H蛍光強度、FAD蛍光強度、光学レドックス比、NAD(P)H平均蛍光寿命(τm)、NAD(P)H第1蛍光寿命成分(τ1)、NAD(P)H第2蛍光寿命成分(τ2)、フラビンアデニンジヌクレオチド(FAD)τm、FADα1、FADτ1、FADτ2、およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるエンドポイントをさらに含む、請求項11に記載の方法。
- 前記活性化値が、前記T細胞の集団の各T細胞について細胞サイズを入力値として使用して計算される、請求項11に記載の方法。
- 前記所定の閾値を、既知の活性化状態を有するT細胞の対照集団についての分類、および特徴選択機械学習を介して選択する、請求項11に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、ドナー正規化される、請求項11に記載の方法。
- 前記活性化値が前記所定の閾値を超える前記T細胞が、CD3+、CD4+、またはCD8+T細胞である、請求項11に記載の方法。
- T細胞を活性化されたものとして分類する精度が、少なくとも75%である、請求項11に記載の方法。
- 対象に投与するための活性化T細胞を製造する方法であって、前記方法が、
a)請求項11に記載の方法と、
b)前記T細胞の集団の第1の部分を、前記対象に投与するための活性化T細胞として選別することと、を含む方法。 - 前記T細胞の集団の前記第1の部分を、工程b)の前に改変する、請求項18に記載の方法。
- 前記T細胞の集団の前記第1の部分を、工程b)の前にキメラ抗原受容体を含むように改変する、請求項19に記載の方法。
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