JP7334421B2

JP7334421B2 - Medium discharge device

Info

Publication number: JP7334421B2
Application number: JP2019030154A
Authority: JP
Inventors: 亮末永
Original assignee: Toyo Seikan Group Holdings Ltd
Current assignee: Toyo Seikan Group Holdings Ltd
Priority date: 2019-02-22
Filing date: 2019-02-22
Publication date: 2023-08-29
Anticipated expiration: 2039-02-22
Also published as: JP2020130090A

Description

本発明は、培地排出装置に係り、より詳細には、ポンプを使用することなく細胞培養バッグのポートから培地を排出する培地排出装置に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to a medium discharge device, and more particularly, to a medium discharge device for discharging a medium from a port of a cell culture bag without using a pump.

近年、医薬品の生産や、遺伝子治療、再生医療、免疫療法などの分野において、細胞（組織、微生物、ウイルスなどを含む）を人工的な環境下で効率良く大量に培養・分化誘導することが求められている。 In recent years, in fields such as pharmaceutical production, gene therapy, regenerative medicine, and immunotherapy, there has been a demand for efficient large-scale culture and induction of differentiation of cells (including tissues, microorganisms, viruses, etc.) in an artificial environment. It is

そのような細胞培養においては、コンタミネーションのリスクを回避するため、閉鎖系の細胞培養バッグが使用されることがある。細胞培養バッグは、例えば、周辺部をシールしたプラスチックフィルムで構成されたバッグ本体と、バッグ本体に取り付けられたポートとから構成されている。 In such cell culture, closed system cell culture bags are sometimes used to avoid the risk of contamination. A cell culture bag is composed of, for example, a bag body made of a plastic film with a peripheral portion sealed, and a port attached to the bag body.

細胞の培養には、通常、数日から数週間の期間を要する。細胞培養バッグを使用した細胞培養においては、その期間中、閉鎖系を維持したまま、必要に応じて培地交換が行われる。培地交換では、ポートに接続された液送チューブを介して、細胞培養バッグ内に細胞を残したまま、細胞培養バッグ内の古い培地がポートから排出され、次いで、ポートから細胞培養バッグ内へ新しい培地が注入される。 Cell culture usually takes several days to several weeks. During the cell culture using the cell culture bag, the medium is exchanged as necessary while maintaining the closed system. In medium exchange, the old medium in the cell culture bag is discharged from the port through the liquid delivery tube connected to the port while leaving the cells in the cell culture bag, and then new medium is discharged from the port into the cell culture bag. Medium is injected.

細胞培養バッグの培地を容易に交換することができる細胞培養装置の一例が特許文献１に記載されている。特許文献１に記載の細胞培養装置では、細胞培養バッグ内の培地をペリスタポンプ等の送液ポンプを使用して排出口から吸引している。 Patent Document 1 describes an example of a cell culture apparatus that can easily replace the medium in the cell culture bag. In the cell culture apparatus described in Patent Document 1, the medium in the cell culture bag is sucked from the discharge port using a liquid feed pump such as a peristaltic pump.

特開２０１７－２３１３１号公報JP 2017-23131 A

細胞培養バッグを使用した細胞培養においては、細胞の増殖・分化誘導の効率低下を回避するため、細胞濃度を適正な範囲に維持することが必要である。このため、図５（ａ）に示すような、下面フィルム（底面）２２に複数の凹部（ウエル）４を形成した細胞培養バッグ１を使用した細胞培養においては、各凹部４で適切な大きさのスフェロイド（細胞凝集塊）Ｃが形成されるよう、１凹部につき１スフェロイドを維持して細胞が培養されている。
なお、図５においては、ポート３に接続されたチューブ等の流路、及び、流路を閉塞するピンチ又はバルブ等の閉塞手段の図示を省略している。 In cell culture using a cell culture bag, it is necessary to maintain the cell concentration within an appropriate range in order to avoid a decrease in the efficiency of cell proliferation/differentiation induction. For this reason, in cell culture using a cell culture bag 1 in which a plurality of recesses (wells) 4 are formed in a lower film (bottom surface) 22 as shown in FIG. Cells are cultured while maintaining one spheroid per recess so that spheroids (cell aggregates) C of 1.5 mm are formed.
In FIG. 5, illustration of a flow path such as a tube connected to the port 3 and closing means such as a pinch or a valve that closes the flow path is omitted.

このようにして培養されたスフェロイドＣを細胞培養バッグ１ごと輸送する際には、スフェロイドＣの凹部４間の移動を抑制する必要がある。そのためには、図５（ｂ）に示すように、培地Ｓを細胞培養バッグ１のポート３から排出し、上面フィルム２１を下降させて各凹部４を閉塞状態にすることが望ましい。これにより、各凹部４に一つずつ形成されたスフェロイドＣを他の凹部４のスフェロイドＣから分離したまま、各凹部４のスフェロイドＣを一度に輸送することができる。 When transporting the spheroids C cultured in this manner together with the cell culture bag 1, it is necessary to suppress the movement of the spheroids C between the concave portions 4. For this purpose, as shown in FIG. 5(b), it is desirable to discharge the medium S from the port 3 of the cell culture bag 1 and lower the top film 21 to close the recesses 4. As shown in FIG. As a result, the spheroids C in each recess 4 can be transported at once while the spheroids C formed in each recess 4 are separated from the spheroids C in the other recesses 4 .

ところが、図５（ｂ）に示したように、培地Ｓを排出して各凹部４を閉塞した状態では、各凹部４内の培地Ｓの残存量に対するスフェロイドＣの濃度が高くなる。このため、この閉塞状態で細胞培養バッグ１を長時輸送すると、細胞がダメージを受けてしまう。
そこで、スフェロイドＣが受けるダメージを低減又は回避するためには、細胞培養バッグ１が閉塞状態となっている時間が短いことが望ましく、例えば、２時間以内であることが望ましい。 However, as shown in FIG. 5(b), when the medium S is discharged and each recess 4 is closed, the concentration of spheroids C relative to the amount of medium S remaining in each recess 4 increases. Therefore, if the cell culture bag 1 is transported in this closed state for a long time, the cells will be damaged.
Therefore, in order to reduce or avoid damage to the spheroids C, it is desirable that the time period during which the cell culture bag 1 is in the closed state is short, for example, within 2 hours.

そのためには、閉塞状態での細胞培養バッグ１の輸送時間を短縮するだけでなく、細胞培養バッグ１を閉塞状態にするために培地Ｓを排出する時間も短縮することが望まれる。
しかし、培地Ｓの排出速度を極端に大きくすると、凹部４からスフェロイドＣが流出してしまうことがある。一方、培地Ｓの排出速度を極端に小さくすると、凹部４からのスフェロイドＣの流出は防止できるものの、今度は培地排出に長時間を要することになる。
そこで、通常、細胞培養バッグ１の培地排出には、送液速度及び送液量を高精度でコントロールするために、ペリスタポンプのようなポンプが使用されている。そして、各凹部４を閉塞状態にするために、例えば、容積１０ｍＬの１つの細胞培養バッグから９ｍＬの培地をポンプで排出する場合、凹部４内の細胞スフェロイドＣが培地Ｓと共に流出しないように排出流量を毎分０．２２５ｍｌに抑えると、培地排出の所要時間は４０分となる。 For this purpose, it is desirable not only to shorten the transport time of the cell culture bag 1 in the closed state, but also to shorten the time to discharge the medium S to bring the cell culture bag 1 into the closed state.
However, if the ejection speed of the medium S is extremely increased, the spheroids C may flow out from the concave portion 4 . On the other hand, if the ejection speed of the medium S is extremely reduced, although the outflow of the spheroids C from the concave portion 4 can be prevented, the ejection of the medium takes a long time.
Therefore, usually, a pump such as a peristaltic pump is used for discharging the medium from the cell culture bag 1 in order to control the liquid feeding speed and liquid feeding amount with high accuracy. Then, in order to close each recess 4, for example, when 9 mL of medium is pumped out from one cell culture bag with a volume of 10 mL, the cell spheroids C in the recess 4 are discharged so as not to flow out together with the medium S. Restricting the flow rate to 0.225 ml per minute results in a medium drain time of 40 minutes.

さらに、臨床用途においては、細胞培養バッグの数枚分の細胞が一度に必要となる場合が多い。その場合、複数の細胞培養バッグの培地排出の合計所要時間を短くするためには、複数の培養バッグの培地排出を順次に行うのではなく、同時に並行して行うことが必要となる。
具体的には、上記の条件で、例えば４つの細胞培養バッグの培地排出を１つずつ順次に行った場合には、排出所要時間が、４０分×４＝１６０分（２時間４０分）となり、排出所要時間だけで２時間を大きく超えてしまう。これに対して、４つの培養バッグの培地排出を同時に並行して行えば、排出所要時間を４０分に短縮することができる。 Furthermore, in clinical applications, it is often the case that several cell culture bags of cells are required at one time. In that case, in order to shorten the total time required to discharge the medium from the plurality of cell culture bags, it is necessary to discharge the medium from the plurality of culture bags simultaneously rather than sequentially.
Specifically, under the above conditions, for example, when medium discharge from four cell culture bags is performed one by one, the time required for discharge is 40 minutes x 4 = 160 minutes (2 hours 40 minutes). , the time required for discharge greatly exceeds two hours. On the other hand, if medium discharge from four culture bags is performed in parallel, the time required for discharge can be shortened to 40 minutes.

ところで、臨床用途の細胞の調製にあたっては、汚染リスクを低減するため、細胞培養バッグから培地を排出する操作をアイソレータ等の無菌空間内で行うことが要請される。
しかし、作業者は、アイソレータの厚地のグローブを装着しているため、アイソレータ内で、細胞培養バッグに接続されたチューブをペリスタポンプヘッドに取付けたり、取り外したりする煩雑な操作を行うことは困難であり、かかる煩雑な操作を無理に行おうとすると操作ミスが発生するおそれがある。 By the way, in preparing cells for clinical use, in order to reduce the risk of contamination, it is required to perform the operation of discharging the culture medium from the cell culture bag in a sterile space such as an isolator.
However, since the operator wears thick gloves for the isolator, it is difficult to perform complicated operations such as attaching and detaching the tube connected to the cell culture bag to the peristaltic pump head inside the isolator. If you try to force such a complicated operation, there is a possibility that an operation error will occur.

そのうえ、ペリスタポンプに細胞培養バッグのポートに接続されたチューブを取り付けるためには、ペリスタポンプのポンプヘッドを大きくせざるを得ない。このため、ポンプヘッドを含むペリスタポンプが、かなりの面積を占有してしまう。
一方、アイソレータ内部の空間は限られているため、狭いアイソレータ内にペリスタポンプを幾台も設置することは物理的に困難である。このため、培地排出時間の短縮のために、アイソレータ内で幾台ものペリスタポンプを使用して複数の細胞培養バッグの培地排出を同時に並行して行うことは困難であった。 Moreover, in order to attach the tube connected to the port of the cell culture bag to the peristaltic pump, the pump head of the peristaltic pump must be enlarged. As a result, the peristaltic pump, including the pump head, occupies a considerable area.
On the other hand, since the space inside the isolator is limited, it is physically difficult to install many peristaltic pumps in the narrow isolator. Therefore, in order to shorten the medium discharge time, it has been difficult to concurrently discharge the medium from a plurality of cell culture bags using several peristaltic pumps in the isolator.

また、細胞培養バッグの各凹部を密閉状態とするために、ポンプを使用して培地を吸引して排出する場合、ポンプによる排出停止のタイミングが遅れると、細胞培養バッグ内が過度に陰圧となってしまう。細胞培養バッグは、培養中に酸素や二酸化炭素などのガス交換を可能にするようガス透過性を有するプラスチックフィルムで形成されているため、時間の経過とともに、陰圧となっている細胞培養バッグの内部にプラスチックフィルムを介して空気が流入し、気泡が生じてしまう。
そのうえ、細胞培養バッグ内に充填されている培地の液量にばらつきがあるため、ポンプで吸引して培地を排出する際に、ポンプ停止のタイミングを正確に決めることも困難であった。 In addition, when using a pump to aspirate and discharge the medium in order to seal each concave portion of the cell culture bag, if the timing of stopping the discharge by the pump is delayed, the inside of the cell culture bag will become excessively negative pressure. turn into. Since the cell culture bag is made of plastic film with gas permeability to allow gas exchange such as oxygen and carbon dioxide during culture, the cell culture bag becomes negative pressure over time. Air flows into the interior through the plastic film, creating air bubbles.
Moreover, since the amount of the medium filled in the cell culture bag varies, it was difficult to accurately determine the timing of stopping the pump when the medium is discharged by aspiration with the pump.

本発明は上記の事情に鑑みてなされたものであり、コンパクトな構成で、ポンプを使用することなく細胞培養バッグから培地を排出することができ、培地排の出速度を設定可能な培地排出装置を提供することを目的としている。 The present invention has been made in view of the above circumstances, and has a compact structure, capable of discharging the medium from the cell culture bag without using a pump, and capable of setting the medium discharge speed. is intended to provide

本発明に係る培地排出装置は、ポート付きの細胞培養バッグに充填された培地を前記ポートから排出する培地排出装置であって、前記細胞培養バッグを載置する載置台と、前記載置台に載置された前記細胞培養バッグの前記ポートに一端が接続され、かつ他端が前記ポートよりも低い位置で大気中に開口するように構成された管状部材と、前記細胞培養バッグの前記ポートと前記管状部材の前記他端との高低差を設定する高低差設定手段と、前記載置台に載置された前記細胞培養バッグを上方から押圧するように構成された押圧部材と、前記載置台上に設けたフレームと、前記押圧部材を下方へ付勢する付勢手段とを含み、前記押圧部材が前記細胞培養バッグを上方から押圧するように、前記押圧部材を支持する支持機構と、前記押圧部材と、前記押圧部材の上方に位置する前記フレームとの距離を調整することによって、前記付勢手段による前記押圧部材の前記細胞培養バッグに加えられる押圧力を調整する押圧力調整手段と、前記細胞培養バッグの前記ポートからの培地の排出量を計測する排出量計測手段と、前記排出量計測手段によって計測された前記排出量に基づいて、前記ポートを通過する培地の排出速度を徐々に又は段階的に低下させるように前記高低差設定手段を制御する制御部とを備え、前記細胞培養バッグは、周辺部をシールした上面及び下面フィルムから構成されたバッグ本体を備えるとともに、前記下面フィルムに、前記バッグ本体の外側へ突出した複数の凹部が形成されており、前記制御部は、前記培地の排出時に、前記上面フィルムが前記複数の凹部を閉塞するまで、前記押圧部材が下降して、前記凹部内に細胞が閉じ込められ、前記細胞培養バッグ内が過度な陰圧となることなく、閉塞状態で培地の排出が停止するように、前記高低差設定手段を制御することを特徴としている。 A medium discharging device according to the present invention is a medium discharging device for discharging a medium filled in a cell culture bag with a port from the port, comprising: a mounting table for mounting the cell culture bag; a tubular member having one end connected to the port of the placed cell culture bag and having the other end open to the atmosphere at a position lower than the port; the port of the cell culture bag and the a height difference setting means for setting a height difference from the other end of the tubular member; a pressing member configured to press the cell culture bag mounted on the mounting table from above; a support mechanism for supporting the pressing member so that the pressing member presses the cell culture bag from above ; pressing force adjusting means for adjusting the pressing force applied by the pressing member to the cell culture bag by the pressing member by adjusting the distance between the member and the frame positioned above the pressing member; Discharge amount measuring means for measuring the amount of medium discharged from the port of the cell culture bag; Based on the amount of discharge measured by the discharge amount measuring means, the discharge speed of the medium passing through the port is increased gradually or a control unit for controlling the height difference setting means so as to be lowered step by step ; the cell culture bag includes a bag main body composed of upper and lower films sealing a peripheral portion; , a plurality of concave portions protruding outward from the bag body are formed, and the control portion moves the pressing member downward until the top film closes the plurality of concave portions when the culture medium is discharged, The height difference setting means is controlled such that cells are confined in the concave portion, the inside of the cell culture bag does not become excessively negative pressure, and medium discharge is stopped in the closed state.

本発明の培地排出装置によれば、ポンプで培地を吸引することなく、押圧部材による押圧力によって、細胞培養バッグから培地が排出される。
さらに、細胞培養バッグの上面フィルムが下面フィルムまで下降した時点で、排出が実質的に自動的に停止するため、細胞培養バッグ内が過度に陰圧となることが回避される。 According to the medium discharge device of the present invention, the medium is discharged from the cell culture bag by the pressing force of the pressing member without sucking the medium with a pump.
Furthermore, when the top film of the cell culture bag descends to the bottom film, the discharge is substantially automatically stopped, thereby avoiding excessive negative pressure inside the cell culture bag.

また、本発明の培地排出装置は、ポンプを使用しないため、ポンプの占有面積が不要であり、コンパクトな構成とすることができる。これにより、例えば、アイソレータ内に複数の培地排出装置を設置して、複数の培養バッグの培地排出を同時に並行して行うことが可能となる。その結果、複数の細胞培養バッグの培地排出の合計所要時間の短縮化を図ることができる。
さらに、本発明の培地排出装置では、ポンプを使用しないため、例えば、アイソレータ内でグローブを装着して、細胞培養バッグに接続されたチューブをポンプヘッドに取り付ける煩雑な操作を行う必要がない。これにより、操作ミスの発生防止を図ることができる。 In addition, since the culture medium discharge device of the present invention does not use a pump, it does not require an area occupied by the pump, and can be made compact. As a result, for example, by installing a plurality of medium discharge devices in the isolator, it is possible to simultaneously discharge the medium from a plurality of culture bags. As a result, it is possible to shorten the total time required for medium discharge from a plurality of cell culture bags.
Furthermore, since the medium discharge device of the present invention does not use a pump, for example, it is not necessary to wear gloves in the isolator and perform a complicated operation of attaching the tube connected to the cell culture bag to the pump head. As a result, it is possible to prevent the occurrence of operation errors.

また、本発明の培地排出装置では、排出速度設定手段により、前記載置台に載置された前記細胞培養バッグの前記ポートから排出される培地の排出速度が設定される。これにより、例えば、細胞培養バッグからの細胞の排出を防止しつつ、培地排出時間の短縮を図ることができる。 Further, in the medium discharging device of the present invention, the discharging speed of the medium discharged from the port of the cell culture bag mounted on the mounting table is set by the discharging speed setting means. As a result, for example, it is possible to shorten the medium discharge time while preventing cells from being discharged from the cell culture bag.

排出速度設定手段としては、細胞培養バッグのポートに接続された流路の断面積を変化させる手段、例えば、可変バルブや絞り機構を流路に設けることも考えられるが、好ましくは、排出速度設定手段として、載置台に載置された細胞培養バッグのポートに一端が接続され、かつ他端が前記ポートよりも低い位置で大気中に開口するように構成された管状部材を備えるとよい。管状部材としては、例えば、フレキシブルなチューブや、ノズルを挙げることができる。
管状部材の流路の長さ及び太さを設定することよって、培地の排出速度を設定することができる。 As the discharge speed setting means, means for changing the cross-sectional area of the channel connected to the port of the cell culture bag, for example, provision of a variable valve or a throttle mechanism in the flow channel may be considered, but discharge speed setting is preferable. As a means, it is preferable to provide a tubular member having one end connected to a port of the cell culture bag placed on the mounting table and having the other end open to the atmosphere at a position lower than the port. Examples of tubular members include flexible tubes and nozzles.
By setting the length and thickness of the channel of the tubular member, the discharge speed of the culture medium can be set.

さらに、管状部材の開口とポートとの高低差（落差）によっても培地の排出速度を設定することができる。そのために、より好ましくは、排出速度設定手段は、細胞培養バッグのポートと管状部材の他端との高低差を設定する高低差設定手段を更に備えるとよい。
高低差（落差）を大きくすることによって、培地の排出速度を大きくすることができ、高低差（落差）を小さくすることによって、培地の排出速度を小さくすることができる。 Furthermore, the ejection speed of the culture medium can be set by the height difference (drop) between the opening of the tubular member and the port. Therefore, more preferably, the discharge speed setting means further includes height difference setting means for setting the height difference between the port of the cell culture bag and the other end of the tubular member.
By increasing the height difference (drop), the culture medium discharge speed can be increased, and by decreasing the height difference (height), the culture medium discharge speed can be decreased.

本発明の培地排出装置によれば、コンパクトな構成で、ポンプを使用することなく細胞培養バッグから培地を排出することができ、培地の排出速度を設定することができる。 According to the medium discharge device of the present invention, the medium can be discharged from the cell culture bag with a compact structure without using a pump, and the medium discharge speed can be set.

本発明の実施形態で使用する細胞培養バッグの概略を示す説明図であり、（ａ）は平面図、（ｂ）は側面図、（ｃ）は下面図である。BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS It is explanatory drawing which shows the outline of the cell culture bag used by embodiment of this invention, (a) is a top view, (b) is a side view, (c) is a bottom view. 本発明の第１実施形態に係る細胞培養装置の模式図ある。BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS It is a schematic diagram of the cell culture apparatus which concerns on 1st Embodiment of this invention. 培地排出時の細胞培養バッグ内の残液量の時間変化を示すグラフである。4 is a graph showing the change over time of the amount of liquid remaining in the cell culture bag when the medium is discharged. 本発明の第２実施形態に係る細胞培養装置の模式図ある。It is a schematic diagram of the cell culture apparatus which concerns on 2nd Embodiment of this invention. （ａ）は、培地を充填した細胞培養バッグの断面模式図であり、（ｂ）は、培地を排出して各凹部を閉塞した細胞培養バッグの断面模式図である。(a) is a schematic cross-sectional view of a cell culture bag filled with a medium, and (b) is a schematic cross-sectional view of a cell culture bag in which the medium is discharged and each recess is closed.

［第１実施形態］
以下、図１～図３を参照して、本発明の第１実施形態を説明する。 [First embodiment]
A first embodiment of the present invention will be described below with reference to FIGS. 1 to 3. FIG.

（細胞培養バッグ）
まず、実施形態に係る細胞培養装置の説明に先立って、図１を参照して、本実施形態で使用する細胞培養バッグを簡単に説明する。図１（ａ）～図１（ｃ）に示す細胞培養バッグ１は、重ね合わせて周辺部２０をヒートシールした上面フィルム２１及び下面フィルム２２から構成されたバッグ本体２と、このバッグ本体２に取り付けられたポート３とを備えている。上面フィルム２１及び下面フィルム２２は、ガス透過性を有するプラスチックフィルムで形成されている。 (cell culture bag)
First, prior to explaining the cell culture apparatus according to the embodiment, the cell culture bag used in the present embodiment will be briefly explained with reference to FIG. The cell culture bag 1 shown in FIGS. 1(a) to 1(c) includes a bag body 2 composed of an upper film 21 and a lower film 22 which are overlapped and heat-sealed at the periphery 20, and the bag body 2 with port 3 attached. The upper film 21 and the lower film 22 are made of a gas-permeable plastic film.

下面フィルム２２には、図１（ｂ）及び図１（ｃ）に示すように、各々が細胞培養部となる、バッグ本体２の外側へ突出した複数の凹部４が形成されている。
凹部４の寸法は、特に限定されないが、バッグ本体２内における細胞の移動を抑止して、培養中の細胞が一つの凹部４に留まるようにするために、開口径（直径）Ｄが０．１～１０ｍｍ、深さｄが０．１ｍｍ以上であるのが好ましい。
また、凹部４の形状は、特に限定されないが、凹部４の底部に細胞が集まり易くするため、図１（ｂ）に示すように、球冠状とするのが好ましい。
また、凹部４の配列は、特に限定されないが、下面フィルム２２に占める凹部４の占有面積ができるだけ大きくなるように、図１（ｃ）に示すように、千鳥状とするのが好ましく、必要に応じて格子状に配列してもよい。 As shown in FIGS. 1(b) and 1(c), the bottom film 22 is formed with a plurality of recesses 4 protruding outward from the bag body 2, each serving as a cell culture portion.
The dimensions of the recesses 4 are not particularly limited, but in order to suppress the migration of cells within the bag body 2 so that the cells during culture stay in one recess 4, the opening diameter (diameter) D is set to 0.5. It is preferable that the depth is 1 to 10 mm and the depth d is 0.1 mm or more.
The shape of the concave portion 4 is not particularly limited, but it is preferable that the concave portion 4 has a crown shape, as shown in FIG.
Although the arrangement of the recesses 4 is not particularly limited, it is preferable, as shown in FIG. Alternatively, they may be arranged in a grid pattern.

上面フィルム２１は、図１（ｂ）に示すように、複数の凹部４全体の上方を覆う実質的に平坦な天面部分２１ａと、天面部分２１ａの周囲に形成された立ち上がり部分２１ｂとから構成された台地状に膨出した膨出形状を有する。これにより、二枚のプラスチックフィルムを重ねて周辺部をシールしただけの平パウチ状の容器と比較して、バッグ本体２を培地で満たしても、下面フィルム２２の周辺部が持ち上がる変形が抑制される。 As shown in FIG. 1(b), the top film 21 consists of a substantially flat top surface portion 21a that covers the entire recesses 4 and a raised portion 21b that is formed around the top surface portion 21a. It has a bulging shape that bulges like a configured plateau. As a result, even when the bag body 2 is filled with culture medium, the deformation of the lower film 22, which is lifted up, is suppressed compared to a flat pouch-shaped container in which two plastic films are overlapped and the periphery is sealed. be.

（培地排出装置）
次に、図２を参照して、本発明の実施形態に係る培地排出装置を説明する。同図は、本実施形態に係る培地排出装置の模式図である。
本実施形態の培地排出装置１００は、ポート３付きの細胞培養バッグ１に充填された培地Ｓをポート３から排出する培地排出装置であって、細胞培養バッグ１を載置する載置台５と、載置台５に載置された細胞培養バッグ１を上方から押圧するように構成された押圧部材６と、載置台５に載置された細胞培養バッグ１のポート３から排出される培地の排出速度を設定する排出速度設定手段７とを備えている。 (Medium discharging device)
Next, referring to FIG. 2, a culture medium discharging device according to an embodiment of the present invention will be described. This figure is a schematic diagram of the culture medium discharging device according to the present embodiment.
The medium discharging device 100 of this embodiment is a medium discharging device for discharging the medium S filled in the cell culture bag 1 with the port 3 from the port 3, and comprises a mounting table 5 on which the cell culture bag 1 is mounted, A pressing member 6 configured to press the cell culture bag 1 mounted on the mounting table 5 from above, and a discharging speed of the medium discharged from the port 3 of the cell culture bag 1 mounted on the mounting table 5. and a discharge speed setting means 7 for setting the .

載置台５は、細胞培養バッグ１が水平に載置される載置面５ａを有する。
載置面５ａには、細胞培養バッグ１の下面フィルム２２に形成された複数の凹部４の各々を受け入れる形状として、開口部５ｂが形成されている。これにより、載置面５ａが凹部４に接触することなく、載置面５ａによって下面フィルム２２が支持される。その結果、凹部４の潰れ及び変形が回避されて、凹部４内の細胞の流出が防止され、さらに、下面フィルム２２からのガス透過性も高まる。
なお、載置面５ａにおける複数の凹部４の各々を受け入れる形状は、開口部に限定されず、例えば、凹部であってもよいし、金網状であってもよい。 The mounting table 5 has a mounting surface 5a on which the cell culture bag 1 is horizontally mounted.
Openings 5b are formed in the placement surface 5a so as to receive each of the plurality of recesses 4 formed in the bottom film 22 of the cell culture bag 1 . As a result, the lower film 22 is supported by the mounting surface 5a without the mounting surface 5a contacting the concave portion 4. As shown in FIG. As a result, crushing and deformation of the recesses 4 are avoided, cells in the recesses 4 are prevented from flowing out, and gas permeability through the lower film 22 is increased.
The shape of the mounting surface 5a for receiving each of the plurality of recesses 4 is not limited to an opening, and may be, for example, a recess or a wire mesh shape.

また、載置面５ａは、平坦面であってもよい。細胞培養バッグ１の下面フィルム２２に形成された凹部４が小さくなるほど、小さい凹部４の寸法に合わせた開口部を載置面５ａに形成することが困難となる一方、下面フィルム２２の肉厚が同じであれば凹部４の剛性が高まる。このため、凹部４が小さい場合には、細胞培養バッグ１が押圧されても凹部４が潰れないため、透明な板状の載置台５の上面をそのまま載置面５ａとしてもよい。 Moreover, the mounting surface 5a may be a flat surface. As the recesses 4 formed in the lower surface film 22 of the cell culture bag 1 become smaller, it becomes more difficult to form openings in the placement surface 5a that match the dimensions of the smaller recesses 4, while the thickness of the lower surface film 22 increases. If they are the same, the rigidity of the concave portion 4 is increased. Therefore, when the concave portion 4 is small, even if the cell culture bag 1 is pressed, the concave portion 4 will not be crushed.

押圧部材６は、細胞培養バッグ１の上面フィルム２１のうち天面部分２１ａに合わせた略長方形の平面形状を有する厚さ１０ｍｍの板状部材であり、載置台５の載置面５ａと実質的に平行で平坦な底面６ａを有する。
押圧部材６は、例えば、ポリカーボネートのような合成樹脂で形成してもよいし、ガラスで形成してもよい。また、押圧部材６は、細胞培養の進行状況や細胞の状態などを確認できるように、一部又は全部が透明性を有しているのが好ましい。 The pressing member 6 is a plate-like member having a thickness of 10 mm and having a substantially rectangular planar shape that matches the top surface portion 21 a of the top film 21 of the cell culture bag 1 . has a flat bottom surface 6a parallel to the .
The pressing member 6 may be made of, for example, a synthetic resin such as polycarbonate, or may be made of glass. Moreover, it is preferable that the pressing member 6 is partially or wholly transparent so that the progress of cell culture and the state of cells can be checked.

また、押圧部材６は、底面６ａで、細胞培養バッグ１の上面フィルム２１のうち天面部分２１ａ分を押圧するように支持機構６０によって支持されている。
支持機構６０は、載置台５上に設けたフレーム６１と、押圧部材６の上面の四隅から上方に延びてフレーム６１の蓋部６１ａを上下動可能に貫通しているガイドピン６２と、フレーム６１の蓋部６１ａに対して押圧部材６を下方へ付勢する付勢手段６３とから構成されている。
付勢手段６３は、押圧部材６の上面とフレーム６１の蓋部６１ａとに互いに同極側を対向させて配置した永久磁石６３で構成されている。永久磁石６３同士の間に働く斥力により、押圧部材６は、上面フィルム２１を上方から押圧したまま、上面フィルム２１の高さに従って上下に移動する。 In addition, the pressing member 6 is supported by the support mechanism 60 so as to press the top surface portion 21a of the top surface film 21 of the cell culture bag 1 on the bottom surface 6a.
The support mechanism 60 includes a frame 61 provided on the mounting table 5 , guide pins 62 extending upward from the four corners of the upper surface of the pressing member 6 and penetrating the lid portion 61 a of the frame 61 so as to be able to move vertically, and the frame 61 . and an urging means 63 for urging the pressing member 6 downward against the lid portion 61a.
The urging means 63 is composed of a permanent magnet 63 arranged on the upper surface of the pressing member 6 and the lid portion 61a of the frame 61 with the same pole sides facing each other. Due to the repulsive force acting between the permanent magnets 63 , the pressing member 6 moves up and down according to the height of the top film 21 while pressing the top film 21 from above.

支持機構６０はまた、押圧部材６より細胞培養バッグ１に加えられる押圧力を調整する押圧力調整手段を兼ねている。すなわち、支持機構６０のフレーム６１の蓋部６１ａと押圧部材６との距離を調整することによって、付勢手段６３よる押圧部材６の押圧力を設定することができる。押圧部材６の押圧力によって、培地の排出速度を設定することができる。 The support mechanism 60 also serves as a pressing force adjusting means for adjusting the pressing force applied to the cell culture bag 1 by the pressing member 6 . That is, by adjusting the distance between the cover portion 61a of the frame 61 of the support mechanism 60 and the pressing member 6, the pressing force of the pressing member 6 by the biasing means 63 can be set. Depending on the pressing force of the pressing member 6, the discharge speed of the culture medium can be set.

なお、永久磁石６３どうしの間に働く斥力が永久磁石６３間の距離の二乗に反比例するため、永久磁石６３による押圧力は、押圧部材６が下降する従って低下する。
また、付勢手段６３は、永久磁石に限定されない。また、付勢手段６３を省略し、押圧部材６の自重により、押圧部材６を上面フィルム２１の高さに従って上下に移動させてもよい。 Since the repulsive force acting between the permanent magnets 63 is inversely proportional to the square of the distance between the permanent magnets 63, the pressing force of the permanent magnets 63 decreases as the pressing member 6 descends.
Also, the biasing means 63 is not limited to a permanent magnet. Alternatively, the biasing means 63 may be omitted, and the pressing member 6 may be moved up and down according to the height of the top film 21 by the weight of the pressing member 6 itself.

本実施形態では、排出速度設定手段７は、載置台５に載置された細胞培養バッグ１のポート３に一端７０ａが接続され、かつ他端７０ｂがポート３よりも低い位置で大気中に開口するように構成された管状部材７０と、細胞培養バッグ１のポート３と管状部材７０の他端７０ｂとの高低差（落差）を設定する高低差設定手段（７１，７２）とから構成されている。
管状部材７０としては、例えば、フレキシブルなチューブや、ノズルを挙げることができる。
また、管状部材７０には、クリップのような閉塞手段７ａが取り付けられている。 In this embodiment, the discharging speed setting means 7 has one end 70a connected to the port 3 of the cell culture bag 1 placed on the mounting table 5, and the other end 70b opening to the atmosphere at a position lower than the port 3. and height difference setting means (71, 72) for setting the height difference (drop) between the port 3 of the cell culture bag 1 and the other end 70b of the tubular member 70. there is
Examples of tubular member 70 include a flexible tube and a nozzle.
The tubular member 70 is also fitted with a closure means 7a such as a clip.

培地の排出速度は、管状部材の配管抵抗によっても設定することができる。具体的には、管状部材７０の流路の長さ及び太さを設定することよって、配管抵抗が設定される。例えば、管状部材７０の流路の太さを太くすることによって、排出速度を大きくすることができ、反対に、管状部材７０の流路の太さを細くすることによって、排出速度を小さくすることができる。また、管状部材７０の流路の長さを長くすることによって、排出速度を小さくすることができ、反対に、管状部材７０の流路の長さを短くすることによって、排出速度を大きくすることができる。 The discharge speed of the culture medium can also be set by the piping resistance of the tubular member. Specifically, the piping resistance is set by setting the length and thickness of the channel of the tubular member 70 . For example, the discharge speed can be increased by increasing the thickness of the channel of the tubular member 70, and conversely, the discharge speed can be decreased by decreasing the thickness of the channel of the tubular member 70. can be done. Also, by increasing the length of the passage of the tubular member 70, the discharge speed can be decreased, and conversely, by shortening the length of the passage of the tubular member 70, the discharge speed can be increased. can be done.

高低差設定手段７１，７２は、管状部材７０を支持し、管状部材７０の他端７０ｂの高さを調節可能な支持部材７１と、載置台５を支持し、載置台５の高さを調節可能な昇降装置７２とから構成されている。 The height difference setting means 71 and 72 support the tubular member 70 and support a support member 71 capable of adjusting the height of the other end 70b of the tubular member 70, and the mounting table 5 to adjust the height of the mounting table 5. possible lifting device 72.

図２に示すように、支持部材７１は、ベース７１ａと、ベース７１ａに立設した支柱７１ｂと、支柱７１ｂに昇降可能に取り付けられた腕部材７１ｃと、腕部材７１ｃを支柱７１ｂに沿って昇降させるアクチュエータ（例えば、ステッピングモータ）７１ｄとから構成されている。腕部材７１ｃは、その先端部で管状部材７０の他端７１ｂ付近を保持している。 As shown in FIG. 2, the support member 71 includes a base 71a, a support 71b erected on the base 71a, an arm member 71c attached to the support 71b so as to move up and down, and an arm member 71c which moves up and down along the support 71b. and an actuator (for example, a stepping motor) 71d. The arm member 71c holds the vicinity of the other end 71b of the tubular member 70 at its distal end.

また、図２に示すように、昇降装置７２は、ベース７２ａと、載置台５が載置されたトップ７２ｂと、ベース７２ａとトップ７２ｂとの間で交差したアーム７２ｃと、アーム７２ｃの交差角度を変えるアクチュエータ（例えば、ステッピングモータ）７２ｄとから構成されている。 As shown in FIG. 2, the lifting device 72 includes a base 72a, a top 72b on which the mounting table 5 is placed, an arm 72c intersecting between the base 72a and the top 72b, and an intersection angle of the arm 72c. and an actuator (for example, a stepping motor) 72d that changes the

なお、高低差設定手段として、支持部材７１及び昇降装置７２の一方のみを高さ調整可能としてもよい。また、支持部材７１及び昇降装置７２の構成は、上述したものに限定されない。また、支持部材７１及び昇降装置７２は、アクチュエータを省略して手動で高さを調節できるように構成されてもよい。 As the height difference setting means, only one of the support member 71 and the lifting device 72 may be height adjustable. Also, the configurations of the support member 71 and the lifting device 72 are not limited to those described above. Further, the support member 71 and the lifting device 72 may be configured so that the actuators are omitted and the height can be manually adjusted.

このように、支持部材７１及び昇降装置７２とから構成された高低差設定手段を設けたことにより、管状物材の他端７０ｂの開口とポート３との高低差（落差）ΔＨによって培地Ｓの排出速度を設定することができる。
例えば、支持部材７１によって管状部材７１の他端７１ｂの高さＨ２を低くし、及び／又は、昇降装置７２によって細胞培養バッグ１のポート３の高さＨ１を高くすることによって、高低差（落差）ΔＨを大きくし、培地Ｓの排出速度を大きくすることができる。反対に、支持部材７１によって管状部材７１の他端７１ｂの高さＨ２を高くし、及び／又は、昇降装置７２によって細胞培養バッグ１のポート３の高さＨ１を低くすることによって、高低差（落差）ΔＨを小さくし、培地Ｓの排出速度を小さくすることができる。 By providing the height difference setting means composed of the support member 71 and the lifting device 72 in this way, the height difference (drop) ΔH between the opening of the other end 70b of the tubular material and the port 3 causes the culture medium S to be displaced. Ejection speed can be set.
For example, by lowering the height H2 of the other end 71b of the tubular member 71 with the support member 71 and/or raising the height H1 of the port 3 of the cell culture bag 1 with the lifting device 72, the height difference (drop ) .DELTA.H can be increased to increase the ejection speed of the medium S. On the contrary, the height difference ( The drop) ΔH can be reduced, and the discharge speed of the culture medium S can be reduced.

ここで、図３のグラフに、培地排出時の細胞培養バッグ１内の培地Ｓの残液量の時間変化を示す。グラフ中、高低差（落差）ΔＨ＝１００ｍｍとした場合の時間変化を、測定ドット列Ｉで示し、高低差（落差）ΔＨ＝５０ｍｍとした場合の時間変化を、測定ドット列曲線IIで示す。
図３中の測定ドット列Ｉと測定ドット列IIとの比較から分かるように、高低差（落差）ΔＨ＝１００ｍｍとした場合に、高低差（落差）ΔＨ＝５０ｍｍとした場合よりも急激に、培地が排出されている。このように、高低差を大きくした方が、排出速度を大きくすることができる
したがって、培地の排出速度は、高低差設定手段７１，７２に高低差（落差）を調節することによっても設定することができる。また、管状部材７０を長さや太さの異なるものと交換することなく、高低差設定手段７１，７２だけで排出速度を調整することもできる。 Here, the graph of FIG. 3 shows the change over time of the remaining amount of the medium S in the cell culture bag 1 when the medium is discharged. In the graph, the measured dot line I shows the time change when the height difference (drop) ΔH=100 mm, and the measured dot line curve II shows the time change when the height difference (fall) ΔH=50 mm.
As can be seen from the comparison between the measured dot row I and the measured dot row II in FIG. 3, when the height difference (drop) ΔH=100 mm, the Medium has been drained. In this way, the higher the height difference, the higher the discharge speed. Therefore, the culture medium discharge speed can also be set by adjusting the height difference (head) of the height difference setting means 71 and 72. can be done. Also, the discharge speed can be adjusted only by the height difference setting means 71 and 72 without replacing the tubular member 70 with one having a different length or thickness.

なお、押圧力調整手段を兼ねている支持機構６０の永久磁石６３による押圧力が、押圧部材６が下降するに従って低下するため、曲線Ｉ及び曲線IIのいずれの場合も、残液量が少なくなるにつれて、排出速度が低下している。 Since the pressing force of the permanent magnet 63 of the support mechanism 60, which also serves as a pressing force adjusting means, decreases as the pressing member 6 descends, the amount of residual liquid decreases in both cases of curve I and curve II. Ejection rate decreases with time.

ところで、ポート３を通過する培地Ｓの流速が極端に大きいと、培地Ｓと一緒に細胞Ｃが凹部４から流出してしまうことがある。一方、ポート３を通過する培地Ｓの流速を極端に小さくすると、細胞Ｃの凹部４からの流出は防止できるものの、培地排出に長時間を要することになる。このため、培地の排出にあたっては、細胞Ｃの流出を回避しつつ、排出時間をできるだけ短くできるように排出速度を設定する必要がある。
そこで、本実施形態の培地排出装置では、押圧部材６による押圧力、管状部材７０の配管抵抗、及び高低差設定手段７１，７２による高低差（落差）ΔＨを組み合わせることにより、ポンプを使用することなく、コンパクトな構成で、培地の排出速度を所望の大きさに設定することができることができる。 By the way, if the flow velocity of the medium S passing through the port 3 is extremely high, the cells C may flow out from the recess 4 together with the medium S. On the other hand, if the flow velocity of the medium S passing through the port 3 is made extremely small, although the outflow of the cells C from the concave portion 4 can be prevented, it takes a long time to discharge the medium. For this reason, when discharging the medium, it is necessary to set the discharging speed so as to avoid outflow of the cells C and shorten the discharging time as much as possible.
Therefore, in the medium discharge device of the present embodiment, a pump can be used by combining the pressing force of the pressing member 6, the piping resistance of the tubular member 70, and the height difference (head) ΔH set by the height difference setting means 71 and 72. It is possible to set the ejection speed of the culture medium to a desired size with a compact configuration.

そして、培地の排出に従って押圧部材６が下降し、最終的には、図５（ｂ）に示したように、上面フィルム２１の天面部分２１ａが複数の凹部４の各々を閉塞する。これにより、各凹部４内にそれぞれ細胞Ｃが閉じ込められる。本実施形態では、押圧部材６による押圧力、管状部材７０の配管抵抗、及び高低差設定手段７１，７２による高低差（落差）ΔＨのバランスにより、細胞培養バッグ１内が過度な陰圧となることなく、閉塞状態で培地の排出が停止する。 Then, as the medium is discharged, the pressing member 6 descends, and finally, as shown in FIG. As a result, the cells C are confined within each recess 4 . In this embodiment, the pressure force of the pressing member 6, the piping resistance of the tubular member 70, and the height difference (head) ΔH due to the height difference setting means 71 and 72 are balanced to create an excessive negative pressure inside the cell culture bag 1. Medium stops flowing in the occlusion state.

［第２実施形態］
以下、図４を参照して、本発明の第２実施形態を説明する。同図は、本実施形態に係る培地排出装置の模式図である。
なお、図４では、図１に示した支持機構６０、及び支持部材７１のベース７１ａ及び支柱７１ｂの図示を省略している。また、本実施形態では、第１実施形態と同一の構成要素に同一の符号を付し、その詳細な説明を省略する。 [Second embodiment]
A second embodiment of the present invention will be described below with reference to FIG. This figure is a schematic diagram of the culture medium discharging device according to the present embodiment.
4, illustration of the support mechanism 60 and the base 71a and the support 71b of the support member 71 shown in FIG. 1 is omitted. Moreover, in this embodiment, the same code|symbol is attached|subjected to the same component as 1st Embodiment, and the detailed description is abbreviate|omitted.

図４に示すように、本実施形態の培地排出装置１００ａは、図１に示した第１実施形態の培地排出装置１００に加えて、排出量計測手段９ａ，９ｂ，９ｃと制御部１０とを備えている。
排出量計測手段９ａ，９ｂ，９ｃは、細胞培養バッグ１のポート３からの培地Ｓの排出量を計測するものであり、図４には、排出量計測手段として、重量センサ９ａ、液滴センサ９ｂ及び液面センサ９ｃを示す。
重量センサ９ａは、管状部材７０の他端７０ｂから直下の容器８に排出された培地の重量を検出する。これにより、培地の重量として排出量を計測することができる。
また、液滴センサ９ｂは、管状部材７０の他端７０ｂから滴下される培地の液滴を検出する。これにより、液適量と液滴数との積として排出量を計測することができる。
また、液面センサ９ｃは、容器８に溜まった培地の液面の高さを検出する。これにより、容器の底面積と液面の高さとの積として排出量を計測することができる。
なお、排出量計測手段は、重量センサ９ａ、液滴センサ９ｂ及び液面センサ９ｃのうちの１つ又は２つであってもよいし、これら以外のセンサであってもよい。 As shown in FIG. 4, the culture medium discharge device 100a of the present embodiment includes, in addition to the culture medium discharge device 100 of the first embodiment shown in FIG. I have.
Discharge amount measuring means 9a, 9b, and 9c measure the amount of medium S discharged from port 3 of cell culture bag 1. In FIG. 9b and a liquid level sensor 9c are shown.
The weight sensor 9a detects the weight of the medium discharged from the other end 70b of the tubular member 70 into the container 8 immediately below. Thereby, the discharge amount can be measured as the weight of the culture medium.
Also, the droplet sensor 9b detects a droplet of the culture medium dropped from the other end 70b of the tubular member 70 . As a result, the discharge amount can be measured as the product of the liquid amount and the number of droplets.
Further, the liquid level sensor 9 c detects the height of the liquid level of the culture medium accumulated in the container 8 . As a result, the discharge amount can be measured as the product of the bottom area of the container and the height of the liquid surface.
The discharge amount measuring means may be one or two of the weight sensor 9a, the droplet sensor 9b, and the liquid level sensor 9c, or may be sensors other than these.

制御部１０は、排出量計測手段９ａ，９ｂ，９ｃによる排出量の計測結果に基づいて、高低差設定手段７１，７２を制御する。
ここで、ポート３を通過する流量が一定である場合、培地の排出が進んでバッグ本体２内の培地Ｓの液厚が薄くなるほど、バッグ本体２内の培地Ｓの流速が速くなり、細胞Ｃが流されやすくなる。
そこで、本実施形態では、制御部１０は、培地の排出量が所定値を超えると、ポート３を通過する培地の排出速度を低下させるように、細胞培養バッグ１のポート３と管状部材７０の他端７０ｂとの高低差ΔＨを小さくして、培地の排出速度を段階的に減少させる。これにより、培地の排出にあたって、細胞Ｃの流出を回避しつつ、排出時間を一層の短縮化を図ることができる。 The control unit 10 controls the height difference setting means 71 and 72 based on the measurement results of the discharge amounts by the discharge amount measuring means 9a, 9b and 9c.
Here, when the flow rate passing through the port 3 is constant, the flow rate of the medium S in the bag body 2 increases and the cells C is easily washed away.
Therefore, in the present embodiment, the controller 10 controls the port 3 of the cell culture bag 1 and the tubular member 70 so as to reduce the discharge speed of the medium passing through the port 3 when the medium discharge amount exceeds a predetermined value. By reducing the height difference ΔH with the other end 70b, the discharge speed of the culture medium is decreased stepwise. As a result, when the medium is discharged, it is possible to further shorten the discharge time while avoiding the cells C from flowing out.

具体的には、制御部１０は、高低差設定手段としての支持部材７１のアクチュエータ７１ｄを制御して、管状部材７０の他端７１ｂを支持している腕部材７０ｃを上昇させ、他端７１ｂの高さＨ２を高くするとよい。また、制御部１０は、培地の排出量が所定値を超えると、昇降装置７２のアクチュエータ７２ｄを制御して、昇降装置７２のアーム７２ｃの角度を変えてトップ７２ｂを上昇させ、これにより、載置台５に載置された細胞培養バッグ１を上昇さて、細胞培養バッグ１のポート３の高さＨ１を低くしてもよい。
なお、制御部１０は、制御部１０は、高低差ΔＨを制御するにあたり、支持部材７１のアクチュエータ７１ｄと昇降装置７２のアクチュエータ７２ｄの一方のみを駆動させてもよいし、両方を駆動させてもよい。
また、制御部１０は、高低差を一段又は多段階で段階的に小さくしてもよいし、排出量が増加するのに従って高低差を徐々に連続的に小さくしてもよい。また、排出量に対する排出速度及び高低差の具体的な数値は、管状部材７０の長さ及び太さ、バッグ本体２の形状、細胞Ｃの種類、及び凹部４の形状等によって異なるため、実験的に求めるとよい。 Specifically, the control unit 10 controls the actuator 71d of the support member 71 as the height difference setting means to raise the arm member 70c supporting the other end 71b of the tubular member 70, thereby increasing the height of the other end 71b. It is preferable to increase the height H2. Further, when the culture medium discharge amount exceeds a predetermined value, the control unit 10 controls the actuator 72d of the lifting device 72 to change the angle of the arm 72c of the lifting device 72 to raise the top 72b, thereby lifting the top 72b. The height H1 of the port 3 of the cell culture bag 1 may be lowered by raising the cell culture bag 1 placed on the mounting table 5 .
In controlling the height difference ΔH, the control unit 10 may drive only one of the actuator 71d of the support member 71 and the actuator 72d of the lifting device 72, or may drive both of them. good.
Further, the control unit 10 may reduce the height difference stepwise by one step or multiple steps, or may gradually and continuously reduce the height difference as the discharge amount increases. In addition, the specific numerical values of the discharge rate and height difference with respect to the discharge amount vary depending on the length and thickness of the tubular member 70, the shape of the bag main body 2, the type of the cells C, the shape of the recess 4, etc. It is better to ask

以上、本発明について、好ましい実施形態を示して説明したが、本発明は、前述した実施形態に限定されるものではなく、本発明の範囲で種々の変更実施が可能である。例えば、前述した実施形態では、下面フィルムに複数の凹部が形成された細胞培養バッグから培地を排出する例を説明したが、本発明では、培地排出の対象とする細胞培養バッグはこれに限定されず、本発明は、凹部の形成されていない細胞培養バッグからの培地排出に適用することもできる。 As described above, the present invention has been described by showing preferred embodiments, but the present invention is not limited to the above-described embodiments, and various modifications can be made within the scope of the present invention. For example, in the above-described embodiment, an example of discharging the medium from a cell culture bag having a plurality of recesses formed in the bottom film was described, but in the present invention, the cell culture bag targeted for medium discharge is limited to this. However, the present invention can also be applied to medium discharge from cell culture bags in which recesses are not formed.

本実施形態では、排出速度設定手段７を、管状部材７０と高低差設定手段（７１，７２）とで構成した例を説明したが、排出速度設定手段はこれらに限定されない。例えば、排出速度設定手段として、例えば、可変バルブや絞り機構のような、細胞培養バッグのポートに接続された流路の断面積を変化させる手段を流路に設けてもよい。また、ポートに接続された流路に、メッシュやフィルタのような障害物を挿入することによって、排出速度を制御することもできる。 In the present embodiment, an example in which the discharge speed setting means 7 is composed of the tubular member 70 and the height difference setting means (71, 72) has been described, but the discharge speed setting means is not limited to these. For example, as the discharge speed setting means, the channel may be provided with means for changing the cross-sectional area of the channel connected to the port of the cell culture bag, such as a variable valve or a throttle mechanism. The discharge rate can also be controlled by inserting an obstruction, such as a mesh or filter, into the flow path connected to the port.

本発明の培地排出装置は、アイソレータ内に複数台設置して同時並行で培地排出を行うのに好適であるが、アイソレータ外での使用にも好適である。 The culture medium discharging device of the present invention is suitable for installing a plurality of units in the isolator and discharging the culture medium in parallel, but it is also suitable for use outside the isolator.

１細胞培養バッグ
２バッグ本体
２０周辺部
２１上面フィルム
２１ａ天面部分
２１ｂ立ち上がり部分
２２下面フィルム
３ポート
４凹部
５載置台
５ａ載置面
５ｂ開口部
６押圧部材
６ａ底面
６０支持機構
６１フレーム
６２ガイドピン
６３永久磁石
７排出速度設定手段
７ａ閉塞手段
７０管状部材（チューブ）
７０ａ一端
７０ｂ他端
７１支持部材
７１ａベース
７１ｂ支柱
７１ｃ腕部材
７１ｄアクチュエータ（ステッピングモータ）
７２昇降装置
７２ａベース
７２ｂトップ
７２ｃアーム
７２ｄアクチュエータ（ステッピングモータ）
８容器
９ａ重量センサ
９ｂ液滴センサ
９ｃ液面センサ
１０制御部
１００，１００ａ培地排出装置
Ｃ細胞、スフェロイド
Ｓ培地
Ｈ１ポートの高さ
Ｈ２チューブの他端の高さ
ΔＨ高低差（落差） REFERENCE SIGNS LIST 1 cell culture bag 2 bag body 20 peripheral portion 21 upper film 21a top surface portion 21b rising portion 22 lower surface film 3 port 4 recess 5 mounting table 5a mounting surface 5b opening 6 pressing member 6a bottom surface 60 support mechanism 61 frame 62 guide pin 63 Permanent magnet 7 Ejection speed setting means 7a Blocking means 70 Tubular member (tube)
70a One end 70b Other end 71 Supporting member 71a Base 71b Post 71c Arm member 71d Actuator (stepping motor)
72 lifting device 72a base 72b top 72c arm 72d actuator (stepping motor)
8 Vessel 9a Weight sensor 9b Droplet sensor 9c Liquid level sensor 10 Control unit 100, 100a Medium discharging device C Cells, spheroids S Medium H1 Height of port H2 Height of other end of tube ΔH Height difference (drop)

Claims

A medium discharging device for discharging a medium filled in a cell culture bag with a port from the port,
a mounting table for mounting the cell culture bag;
a tubular member having one end connected to the port of the cell culture bag mounted on the mounting table and having the other end open to the atmosphere at a position lower than the port;
height difference setting means for setting a height difference between the port of the cell culture bag and the other end of the tubular member;
a pressing member configured to press the cell culture bag mounted on the mounting table from above;
A support mechanism that includes a frame provided on the mounting table and biasing means that biases the pressing member downward, and supports the pressing member so that the pressing member presses the cell culture bag from above. and
pressing force adjusting means for adjusting the pressing force of the pressing member applied to the cell culture bag by the biasing means by adjusting the distance between the pressing member and the frame positioned above the pressing member; ,
a discharge amount measuring means for measuring the amount of medium discharged from the port of the cell culture bag;
a control unit that controls the height difference setting means so as to gradually or stepwise reduce the discharge speed of the culture medium passing through the port based on the discharge amount measured by the discharge amount measuring means;
with
The cell culture bag comprises a bag body composed of upper and lower films with a peripheral portion sealed, and a plurality of concave portions protruding outward from the bag body are formed in the lower film,
When the medium is discharged, the pressing member descends until the top film closes the plurality of recesses, cells are confined in the recesses, and the inside of the cell culture bag becomes an excessive shadow. The height difference setting means is controlled so that medium discharge is stopped in the closed state without pressure.
A culture medium discharging device characterized by:

The height difference setting means includes a support member that supports the tubular member and is capable of adjusting the height of the other end of the tubular member, and a support member that supports the mounting table and is capable of adjusting the height of the mounting table. 2. The culture medium discharging device according to claim 1 , characterized in that it is one or both of the lifting devices.