JP7287665B2 - 試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法 - Google Patents
試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7287665B2 JP7287665B2 JP2019116185A JP2019116185A JP7287665B2 JP 7287665 B2 JP7287665 B2 JP 7287665B2 JP 2019116185 A JP2019116185 A JP 2019116185A JP 2019116185 A JP2019116185 A JP 2019116185A JP 7287665 B2 JP7287665 B2 JP 7287665B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- test
- test substance
- feces
- iga
- evaluating
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本発明は、試験物質の抗老化機能の評価方法に関する。
老化研究には、その寿命の短さと寿命曲線の類似性から線虫（最大寿命３週間）やショウジョウバエ（最大寿命２カ月）などの無脊椎動物が良く用いられている。脊椎動物では、げっ歯類（マウス：寿命２年程度）を用いて、寿命や運動機能などで老化を評価した試験が報告されている（非特許文献１）。さらに、より短期間での検証を目的として、早老症モデルマウスなども複数作出されている（非特許文献２）。
もっともヒトに近いモデルとしては、平均寿命４０年のアカゲザルを用い、２０年かけてカロリー制限の健康長寿効果を明らかにした研究もある（非特許文献３）。
もっともヒトに近いモデルとしては、平均寿命４０年のアカゲザルを用い、２０年かけてカロリー制限の健康長寿効果を明らかにした研究もある（非特許文献３）。
線虫やショウジョウバエによる試験は、抗老化物質のスクリーニングには有効であるが、特に食品等の抗老化機能を研究対象とする場合、哺乳類とは消化系や免疫系などが大きく異なるため、哺乳類で改めて効果を確認する必要が生じることが多い。
一方、哺乳類による試験では、一般に長い試験期間と大きなコストが必要である。例えば、アカゲザルによる研究は２０年程度必要であり、マウスによる研究でも評価方法によっては１００週間程度必要とする事例がある。早老症モデルマウスは老化の機序が一般健常個体とは異なるため、適用範囲は限られる。
さらに、実験動物の老化の指標として認知・運動機能などを用いる場合、定量評価が難しい行動観察が主体となり、実験間の比較などに困難が生じることが多い。
一方、哺乳類による試験では、一般に長い試験期間と大きなコストが必要である。例えば、アカゲザルによる研究は２０年程度必要であり、マウスによる研究でも評価方法によっては１００週間程度必要とする事例がある。早老症モデルマウスは老化の機序が一般健常個体とは異なるため、適用範囲は限られる。
さらに、実験動物の老化の指標として認知・運動機能などを用いる場合、定量評価が難しい行動観察が主体となり、実験間の比較などに困難が生じることが多い。
Steckler R et al., Long-Lived αMUPA Mice Show Reduced Sexual Dimorphism in Lifespan, and in Energy and Circadian Homeostasis-Related Parameters. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2016 Apr;71(4):451-60.
Olejnik A et al., The Biological Role of Klotho Protein in the Development of Cardiovascular Diseases. Biomed Res Int. 2018 Dec 24;2018:5171945.
Colman RJ et al., Caloric restriction delays disease onset and mortality in rhesus monkeys. Science. 2009 Jul 10;325(5937):201-4.
現在、食品等の抗老化機能を短期間で評価できる試験系は確立されておらず、ヒトよりも寿命の短いげっ歯類などの実験動物を用いても、年単位の時間を要する。そのため、抗老化食品の開発は、他の健康機能性食品の開発と比較して、開発にかかる負担が大きい。そのため、従来よりも短期間で、食品等の抗老化機能を評価可能な試験系の確立が求められている。
そこで、本発明は、従来の動物試験よりも短い期間で試験物質の抗老化機能を評価可能な、抗老化機能の評価方法を提供することを課題とする。
本発明は、以下の態様を含む。
［１］（ａ）特異的抗原に曝露されない環境で飼育されるマウスであって、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有するＴ細胞受容体を発現する雌マウス（試験雌マウス）に対して、試験物質を投与する工程と、（ｂ）前記試験物質を投与した前記試験雌マウスの糞便を回収し、前記試験雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量を測定する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）で測定された前記試験雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量に基づいて、前記試験物質の抗老化機能を評価する工程と、を含む、試験物質の抗老化機能の評価方法。
［２］前記試験雌マウスの前記試験物質の投与開始時の週齢が、１４～１８週齢である［１］に記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［３］前記試験雌マウスの前記試験物質の投与開始時の週齢が、１６週齢である、［２］に記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［４］前記工程（ｂ）を、前記試験物質を投与した雌マウスが２８週齢以下である期間に１回以上行う、［１］～［３］のいずれか１つに記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［５］前記試験雌マウスの前記試験物質の投与開始前の糞便中のＩｇＡ量が、１０００ｎｇ／糞便ｍｇ以上である、［１］～［４］のいずれか１つに記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［６］前記試験雌マウスが、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有するＭＨＣ Ｃｌａｓｓ ＩＩ拘束性のＴ細受容体を発現するマウスである、［１］～［５］のいずれか１つに記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［７］前記特異的抗原が卵白アルブミンである、［６］に記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［８］前記試験雌マウスが、ＤＯ１１．１０マウス系統のマウスである、［７］に記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［９］（ｂ’）前記試験雌マウスと同じ環境で同じ期間飼育されたマウスであって、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有する前記Ｔ細胞受容体を発現する雌マウスであって、且つ前記試験物質を投与しなかった雌マウス（対照雌マウス）の糞便を回収し、前記対照雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量を測定する工程、をさらに有する、［１］～［８］のいずれか一つに記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［１０］前記工程（ｃ）において、前記工程（ｂ）で測定された前記試験雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量が、前記工程（ｂ’）で測定された前記対照雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量よりも多い場合に、前記試験物質は抗老化機能を有すると評価する、［９］に記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［１］（ａ）特異的抗原に曝露されない環境で飼育されるマウスであって、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有するＴ細胞受容体を発現する雌マウス（試験雌マウス）に対して、試験物質を投与する工程と、（ｂ）前記試験物質を投与した前記試験雌マウスの糞便を回収し、前記試験雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量を測定する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）で測定された前記試験雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量に基づいて、前記試験物質の抗老化機能を評価する工程と、を含む、試験物質の抗老化機能の評価方法。
［２］前記試験雌マウスの前記試験物質の投与開始時の週齢が、１４～１８週齢である［１］に記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［３］前記試験雌マウスの前記試験物質の投与開始時の週齢が、１６週齢である、［２］に記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［４］前記工程（ｂ）を、前記試験物質を投与した雌マウスが２８週齢以下である期間に１回以上行う、［１］～［３］のいずれか１つに記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［５］前記試験雌マウスの前記試験物質の投与開始前の糞便中のＩｇＡ量が、１０００ｎｇ／糞便ｍｇ以上である、［１］～［４］のいずれか１つに記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［６］前記試験雌マウスが、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有するＭＨＣ Ｃｌａｓｓ ＩＩ拘束性のＴ細受容体を発現するマウスである、［１］～［５］のいずれか１つに記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［７］前記特異的抗原が卵白アルブミンである、［６］に記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［８］前記試験雌マウスが、ＤＯ１１．１０マウス系統のマウスである、［７］に記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［９］（ｂ’）前記試験雌マウスと同じ環境で同じ期間飼育されたマウスであって、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有する前記Ｔ細胞受容体を発現する雌マウスであって、且つ前記試験物質を投与しなかった雌マウス（対照雌マウス）の糞便を回収し、前記対照雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量を測定する工程、をさらに有する、［１］～［８］のいずれか一つに記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
［１０］前記工程（ｃ）において、前記工程（ｂ）で測定された前記試験雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量が、前記工程（ｂ’）で測定された前記対照雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量よりも多い場合に、前記試験物質は抗老化機能を有すると評価する、［９］に記載の試験物質の抗老化機能の評価方法。
本発明によれば、従来の動物試験よりも短い期間で試験物質の抗老化機能を評価可能な、抗老化機能の評価方法が提供される。
一態様において、本発明は、試験物質の抗老化機能の評価方法を提供する。かかる評価方法は、（ａ）特異的抗原に曝露されない環境で飼育されるマウスであって、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有するＴ細胞受容体を発現する雌マウスに対して、試験物質を投与する工程と、（ｂ）前記試験物質を投与した雌マウスを、前記特異的抗原に曝露されない環境で飼育して、前記雌マウスの糞便中のＩｇＡ量を測定する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）で測定された糞便中のＩｇＡ量に基づいて、前記試験物質の抗老化機能を評価する工程と、を含む。
「抗老化機能」とは、老化現象の進行を抑制又は遅延させる機能をいう。「老化現象」には、加齢とともに進行する各種容体が含まれる。老化現象としては、例えば、免疫機能の低下、代謝機能の低下、運動機能の低下、各臓器機能の低下、認知機能の低下、感覚機能の低下等が挙げられる。抗老化機能は、加齢とともに進行する各種機能低下のうち、少なくとも１つの機能低下の進行を抑制又は遅延させる機能であればよい。一例として、抗老化機能は、加齢に伴う免疫機能の低下を抑制又は遅延させる機能である。一例として、抗老化機能は、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制又は遅延させる機能である。
試験物質は、特に限定されず、任意の物質を用いることができる。試験物質としては、例えば、各種天然化合物、及び各種合成化合物が挙げられる。より具体的には、例えば、各種食品成分、及び食品、薬品、生薬などが挙げられる。前記食品成分の例としては、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、核酸、炭水化物（単糖、オリゴ糖、多糖など）、ビタミン類、脂質（飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸など）、有機酸、糖アルコール、食物繊維、ファイトケミカル（フラボノイド、テルペノイド、カロテノイド、有機硫黄化合物など）等が挙げられるが、これらに限定されない。食品としては、例えば、野菜、果物類、穀物類、豆類、卵、魚類、貝類、海藻類、肉類、乳製品、植物エキス、キノコ類、酒類、発酵食品、スパイス、ハーブ、香料等が挙げられるが、これらに限定されない。
［工程（ａ）］
工程（ａ）は、特異的抗原に曝露されない環境で飼育されるマウスであって、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有するＴ細胞受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＣＲ）を発現する雌マウス（試験雌マウス）に対して、試験物質を投与する工程である。
工程（ａ）は、特異的抗原に曝露されない環境で飼育されるマウスであって、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有するＴ細胞受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＣＲ）を発現する雌マウス（試験雌マウス）に対して、試験物質を投与する工程である。
本実施形態の評価方法で用いるマウスは、特異的抗原に曝露されない環境で飼育され、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有するＴＣＲを発現する雌マウスである。
「特異的抗原に曝露されない環境」とは、飼育環境および給餌飼料に当該特異的抗原が含まれない状態を意味する。特異的抗原に曝露されない環境は、飼育室内に特異的抗原を持ち込まず、特異的抗原を含まない原材料で調製された飼料を用いることにより達成することができる。
「そのＴ細胞のほとんどが特異的抗原に応答性を有するＴＣＲを発現する」とは、マウスの体内に存在するＴ細胞のうちの大部分が、特異的抗原に応答性を有するＴＣＲを発現しているＴ細胞であることをいう。前記マウスの体内に存在するＴ細胞のうちの大部分とは、例えば、マウス体内に存在するＴ細胞のうちの６０％以上、好ましくは７０％以上をいう。
「特異的抗原に応答性を有するＴＣＲ」とは、特異的抗原の存在下で培養された抗原提示細胞に対して応答性を有するＴ細胞のＴＣＲをいう。特異的抗原の存在下で抗原提示細胞を培養すると、特異的抗原が抗原提示細胞に取り込まれ、特異的抗原の断片ペプチドとＭＨＣ（Ｍａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ）とのペプチド－ＭＨＣ複合体が抗原提示細胞に提示される。特異的抗原に応答性を有するＴ細胞とは、前記抗原提示細胞に提示されたペプチド－ＭＨＣ複合体にＴＣＲを介して結合し、活性化するＴ細胞である。Ｔ細胞の活性化は、例えば、Ｔ細胞からのサイトカイン（インターフェロン、インターロイキン等）の分泌量の上昇、Ｔ細胞の増殖等により確認することができる。したがって、Ｔ細胞が、特異的抗原に応答性を有するＴＣＲを発現しているか否かは、特異的抗原の存在下で抗原提示細胞とＴ細胞とを共培養し、Ｔ細胞の活性化を検出することにより確認することができる。
「特異的抗原に曝露されない環境」とは、飼育環境および給餌飼料に当該特異的抗原が含まれない状態を意味する。特異的抗原に曝露されない環境は、飼育室内に特異的抗原を持ち込まず、特異的抗原を含まない原材料で調製された飼料を用いることにより達成することができる。
「そのＴ細胞のほとんどが特異的抗原に応答性を有するＴＣＲを発現する」とは、マウスの体内に存在するＴ細胞のうちの大部分が、特異的抗原に応答性を有するＴＣＲを発現しているＴ細胞であることをいう。前記マウスの体内に存在するＴ細胞のうちの大部分とは、例えば、マウス体内に存在するＴ細胞のうちの６０％以上、好ましくは７０％以上をいう。
「特異的抗原に応答性を有するＴＣＲ」とは、特異的抗原の存在下で培養された抗原提示細胞に対して応答性を有するＴ細胞のＴＣＲをいう。特異的抗原の存在下で抗原提示細胞を培養すると、特異的抗原が抗原提示細胞に取り込まれ、特異的抗原の断片ペプチドとＭＨＣ（Ｍａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ）とのペプチド－ＭＨＣ複合体が抗原提示細胞に提示される。特異的抗原に応答性を有するＴ細胞とは、前記抗原提示細胞に提示されたペプチド－ＭＨＣ複合体にＴＣＲを介して結合し、活性化するＴ細胞である。Ｔ細胞の活性化は、例えば、Ｔ細胞からのサイトカイン（インターフェロン、インターロイキン等）の分泌量の上昇、Ｔ細胞の増殖等により確認することができる。したがって、Ｔ細胞が、特異的抗原に応答性を有するＴＣＲを発現しているか否かは、特異的抗原の存在下で抗原提示細胞とＴ細胞とを共培養し、Ｔ細胞の活性化を検出することにより確認することができる。
そのＴ細胞のほとんどが特異的抗原に応答性を有するＴＣＲを発現するマウス（以下、「ＴＣＲ発現マウス」という。）は、例えば、特異的抗原に応答するＴ細胞のＴＣＲ遺伝子をマウスに導入することにより、作製することができる。たとえば、特異的抗原に応答性を有するＴ細胞のＴＣＲ遺伝子を導入したマウス（以下、「ＴＣＲトランスジェニックマウス」という。）は、Ｔ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答し、他の抗原に対しては応答しないため、前記特異的抗原以外の抗原に対する免疫応答性が著しく低い。そのため、ＴＣＲトランスジェニックマウスを、前記特異的抗原に曝露されない環境下で飼育することにより、抗原刺激によらずに定常的に産生される抗体の量を安定的に定量することができる。
ＴＣＲトランスジェニックマウスの作製は、公知の方法により行うことができる。例えば、マウスに特異的抗原を免疫し、前記特異的抗原に応答性のＴ細胞を得る。次いで、前記特異的抗原に応答性のＴ細胞からＴＣＲ遺伝子を単離し、マウスの受精卵に導入する。前記受精卵を仮親の子宮に移植・着床させ、仔を誕生させることにより、ＴＣＲトランスジェニックマウスを作製することができる。
一例として、ＴＣＲトランスジェニックマウスとしては、ＤＯ１１．１０マウス系統のマウスが挙げられる。ＤＯ１１．１０マウス系統は、卵白アルブミンに応答性を有するＴ細胞のＴＣＲが導入されたトランスジェニックマウスである。
一例として、ＴＣＲトランスジェニックマウスとしては、ＤＯ１１．１０マウス系統のマウスが挙げられる。ＤＯ１１．１０マウス系統は、卵白アルブミンに応答性を有するＴ細胞のＴＣＲが導入されたトランスジェニックマウスである。
後述の実施例に示すように、ＴＣＲ発現マウス（ＴＣＲトランスジェニックマウス）の雌では、１６～２８週齢程度においても、加齢に伴い、糞便中ＩｇＡ量が有意に減少することが見出された。糞便中ＩｇＡ量は、腸管に分泌されるＩｇＡ量を反映しており、腸管粘膜免疫系の機能の指標となり得る。すなわち、ＴＣＲトランスジェニックマウスの雌では、加齢に伴う腸管粘膜免疫の機能低下と腸管内ＩｇＡ量との相関が高く、加齢に伴う腸管粘膜免疫の機能低下が糞便中ＩｇＡ量に反映すると考えられる。
そのため、ＴＣＲ発現マウス（例、ＴＣＲトランスジェニックマウス）の雌を用いることにより、従来よりも短期間で、試験物質の抗老化機能を評価することが可能となる。
そのため、ＴＣＲ発現マウス（例、ＴＣＲトランスジェニックマウス）の雌を用いることにより、従来よりも短期間で、試験物質の抗老化機能を評価することが可能となる。
特異的抗原は、Ｔ細胞が応答可能な抗原であれば、特に限定されないが、通常のマウス飼育環境下において、マウスが曝露されない抗原であることが好ましい。特異的抗原としては、例えば、卵白アルブミン、卵白リゾチーム等が挙げられるが、これらに限定されない。特異的抗原としては、例えば、マウスの飼育に用いる飼料中に含まれない他種生物由来のタンパク質又はペプチドを特に制限なく用いることができる。一例として、特異的抗原は、卵白アルブミンである。
特異的抗原に応答性を有するＴ細胞は、腸管粘膜免疫系におけるＩｇＡの産生に関与することから、ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ ＩＩ拘束性のＴ細胞であることが好ましく、ＴＣＲは、ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ ＩＩ拘束性のＴＣＲであることが好ましい。「ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ ＩＩ拘束性のＴＣＲ」とは、ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ ＩＩと抗原ペプチドとのペプチド－ＭＨＣ複合体に結合可能なＴＣＲをいう。「ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ ＩＩ拘束性のＴ細胞」とは、ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ ＩＩ拘束性のＴＣＲを有するＴ細胞をいう。
試験雌マウスは、試験物質の投与開始時の週齢が、１４～１８週齢であることが好ましい。１４～１８週齢の試験雌マウスに試験物質の投与を開始することにより、短期間で、試験物質の抗老化機能を評価することができる。一例として、試験物質の投与開始時の試験雌マウスの週齢は、１６週齢である。
試験雌マウスは、選抜時の糞便中のＩｇＡ量が、１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上であることが好ましい。糞便中ＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上である試験雌マウスを用いることにより、より少ない個体数でも安定した評価結果を得ることができる。試験雌マウスの選抜は、例えば、試験物質投与開始日の７日程度前からの試験物質投与開始直前までのいずれかの時期に行うことができる。試験雌マウスの選抜は、例えば、試験物質投与開始日の７日前、６日前、５日前、４日前、３日前、２日前、１日前、又は当日行ってもよい。なお、本明細書において、「試験物質の投与開始前」とは、試験物質投与開始直前までの全期間を包含するものとする。雌マウスの選抜を行う試験物質投与開始前の時期としては、例えば、好ましくは試験物質投与開始日の７日程度前からの試験物質投与開始直前までのいずれかの時期であり、より好ましくは試験物質投与開始日の５日程度前からの試験物質投与開始直前までのいずれかの時期であり、さらに好ましくは試験物質投与開始日の３日程度前からの試験物質投与開始直前までのいずれかの時期である。
糞便中ＩｇＡの測定方法は、公知の方法により、行うことができる。糞便中ＩｇＡの測定方法としては、例えば、糞便を適当な緩衝液（例、ＰＢＳ等）に懸濁し、遠心分離を行って上清を取得し、前記上清中のＩｇＡをＥＬＩＳＡ等により測定する方法が挙げられる。
糞便中ＩｇＡの測定方法は、公知の方法により、行うことができる。糞便中ＩｇＡの測定方法としては、例えば、糞便を適当な緩衝液（例、ＰＢＳ等）に懸濁し、遠心分離を行って上清を取得し、前記上清中のＩｇＡをＥＬＩＳＡ等により測定する方法が挙げられる。
試験物質を投与する試験雌マウスの数は、特に限定されないが、投与開始前の糞便中のＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上である個体を用いる場合には、例えば、４匹以上とすることができる。一例として、試験雌マウスの数は、４～６匹程度とすることができる。
投与開始前の糞便中ＩｇＡ量により個体の選抜を行わない場合には、例えば、１０匹以上とすることができる。一例として、試験雌マウスの数は、１０～１５匹程度とすることができる。
投与開始前の糞便中ＩｇＡ量により個体の選抜を行わない場合には、例えば、１０匹以上とすることができる。一例として、試験雌マウスの数は、１０～１５匹程度とすることができる。
試験物質の投与方法は、特に限定されず、試験物質の種類に応じて、適宜投与方法を選択することができる。試験物質の投与方法は、経口投与であってもよく、非経口投与であってもよい。一例として、試験物質は経口投与される。経口投与の方法としては、例えば、試験物質を飼料又は水に混合して、自由摂取させる方法等が挙げられる。試験物質の投与量、投与間隔及び投与回数は、試験物質の種類に応じて、適宜設定すればよい。
試験物質の投与期間は、例えば、１０週間程度以上とすることができる。投与期間の上限は、特に限定されないが、本実施形態の評価方法では、従来法のように長い投与期間を必要とせず、１２週間程度の投与期間で評価を行うことができる。一例として、試験物質の投与期間は、１０～１６週間程度とすることができる。具体例としては、１２週間が例示される。例えば、試験物質の投与を１６週齢で開始した場合には、２８週齢程度まで試験物質の投与を行ってもよい。
試験物質の投与期間は、例えば、１０週間程度以上とすることができる。投与期間の上限は、特に限定されないが、本実施形態の評価方法では、従来法のように長い投与期間を必要とせず、１２週間程度の投与期間で評価を行うことができる。一例として、試験物質の投与期間は、１０～１６週間程度とすることができる。具体例としては、１２週間が例示される。例えば、試験物質の投与を１６週齢で開始した場合には、２８週齢程度まで試験物質の投与を行ってもよい。
試験雌マウスは、１ケージ３～４匹で、ＳＰＦ（ｓｐｅｃｉｆｉｃ－ｐａｔｈｏｇｅｎ－ｆｒｅｅ ｍｉｃｅ）動物飼育室内で、前記特異的抗原に曝露されない環境で飼育する。
［工程（ｂ）］
工程（ｂ）は、前記試験物質を投与した前記試験雌マウスの糞便を回収し、前記糞便中のＩｇＡ量を測定する工程である。
工程（ｂ）は、前記試験物質を投与した前記試験雌マウスの糞便を回収し、前記糞便中のＩｇＡ量を測定する工程である。
糞便中のＩｇＡ量の測定は、上記工程（ａ）で説明した方法と同様の方法で測定することができる。試験物質の投与開始後、定期的に、試験雌マウスの糞便を回収し、糞便中ＩｇＡ量の測定を行う。糞便の回収間隔は、特に限定されないが、一例として、２～４週間毎が挙げられる。糞便の回収は、定刻に行うことが好ましい。
本工程は、試験物質を投与した試験雌マウスが２８週齢以下である期間に、１回以上行うことができる。本実施形態の評価方法では、２８週齢以下の週齢でも、試験物質の抗老化機能が、糞便中のＩｇＡ量に反映されるため、２８週齢以下である期間に１回以上糞便中ＩｇＡ量の測定を行うことにより、飼育期間を短くすることができる。２８週齢以下の期間に、本工程を行う回数としては、例えば、１～１０回、３～８回、又は４～７回等が挙げられる。
本工程は、前記工程（ａ）における試験物質の投与と並行して行ってもよく、試験物質の投与期間終了後に行ってもよい。一例として、本工程は、工程（ａ）における試験物質の投与と並行して行うことができる。
［工程（ｃ）］
工程（ｃ）は、前記工程（ｂ）で測定された糞便中のＩｇＡ量に基づいて、前記試験物質の抗老化機能を評価する工程である。
工程（ｃ）は、前記工程（ｂ）で測定された糞便中のＩｇＡ量に基づいて、前記試験物質の抗老化機能を評価する工程である。
ＴＣＲ発現マウスの雌では、加齢に伴い、糞便中のＩｇＡ量が低下する。一方、ＴＣＲ発現マウスである試験雌マウスに投与した試験物質が抗老化機能を有する場合、当該試験雌マウスでは、加齢に伴う糞便中ＩｇＡ量の低下が抑制される。したがって、前記工程（ｂ）で測定された糞便中のＩｇＡ量に基づいて、試験物質の抗老化機能を評価することができる。
例えば、前記工程（ｂ）で測定された試験雌マウスの糞便中のＩｇＡ量を、前記試験物質を投与しなかった対照雌マウスの糞便中のＩｇＡ量と比較して、前記工程（ｂ）で測定された試験雌マウスの糞便中のＩｇＡ量が多い場合に、前記試験物質は抗老化機能を有すると評価することができる。
通常、対照雌マウスの糞便中ＩｇＡ量に対する試験雌マウスの糞便中のＩｇＡ量の増加率が大きいほど、試験物質は抗老化機能が高いと評価される。
通常、対照雌マウスの糞便中ＩｇＡ量に対する試験雌マウスの糞便中のＩｇＡ量の増加率が大きいほど、試験物質は抗老化機能が高いと評価される。
一方、前記工程（ｂ）で測定された糞便中のＩｇＡ量が、前記試験物質を投与しなかったマウスの糞便中のＩｇＡ量と比較して、有意差がないか少ない場合には、前記試験物質は抗老化機能を有さないと評価することができる。
［他の工程］
本実施形態の評価方法は、上記工程（ａ）～（ｃ）に加えて、他の工程を有していてもよい。他の工程としては、対照マウスの糞便中のＩｇＡ量を測定する工程（ｂ’）が挙げられる。
本実施形態の評価方法は、上記工程（ａ）～（ｃ）に加えて、他の工程を有していてもよい。他の工程としては、対照マウスの糞便中のＩｇＡ量を測定する工程（ｂ’）が挙げられる。
＜工程（ｂ’）＞
工程（ｂ’）は、前記試験雌マウスと同じ環境で同じ期間飼育されるマウスであって、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有するＴ細胞受容体遺伝子を発現する雌マウスであって、且つ前記試験物質を投与しなかった雌マウス（対照雌マウス）の糞便を回収し、前記対照雌マウスの糞便中のＩｇＡ量を測定する工程である。
工程（ｂ’）は、前記試験雌マウスと同じ環境で同じ期間飼育されるマウスであって、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有するＴ細胞受容体遺伝子を発現する雌マウスであって、且つ前記試験物質を投与しなかった雌マウス（対照雌マウス）の糞便を回収し、前記対照雌マウスの糞便中のＩｇＡ量を測定する工程である。
工程（ｂ’）で用いる対照雌マウスは、前記工程（ａ）における試験雌マウスと同じ遺伝的背景を有するＴＣＲトランスジェニックマウスである。また、対照雌マウスは、試験雌マウスと、同じ環境で同じ期間飼育されたマウスである。対照マウスと試験雌マウスとは、同じ動物飼育室内で同期間飼育された同週齢の同じ遺伝的背景を有するＴＣＲトランスジェニックマウスの雌を２群に分け、一方の群を試験雌マウスとし、他方の群を対照雌マウスとしたものであることが好ましい。
対照雌マウスは、マウス選抜時（１６週齢前後）の糞便中のＩｇＡ量が、１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上であることが好ましい。例えば、同様に飼育されたＴＣＲ発現マウスの雌の糞便中のＩｇＡ量を測定し、糞便中のＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上であるものを選抜して、これを２群に分け、一方の群を試験雌マウスとし、他方の群を対照雌マウスとすることができる。試験雌マウス及び対照雌マウスとして、マウス選抜時の糞便中のＩｇＡ量が、１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上であるものを用いることにより、より少ない個体数でも安定した評価結果を得ることができる。なお、試験雌マウス群と対照雌マウス群との区分けにおいて、両群の糞便中ＩｇＡ量に差が生じないようにすることが好ましい。マウスの選抜は、例えば、試験開始の当日～５日程度前に行うことができる。
対照雌マウスの数は、特に限定されないが、試験雌マウスと同数が好ましい。対照雌マウスは、試験物質を投与しないこと以外は、試験雌マウスと同様に飼育される。
対照雌マウスの糞便の回収は、前記工程（ｂ）における試験雌マウスの糞便の回収と同時期に行い、同様の方法で、糞便中ＩｇＡ量を測定する。
対照雌マウスの糞便の回収は、前記工程（ｂ）における試験雌マウスの糞便の回収と同時期に行い、同様の方法で、糞便中ＩｇＡ量を測定する。
本実施形態の評価方法が工程（ｂ’）を有する場合、工程（ｃ）において、工程（ｂ）で測定された試験雌マウスの糞便中ＩｇＡ量が、工程（ｂ’）で測定された対照試験雌マウスの糞便中ＩｇＡ量よりも多い場合に、試験物質は抗老化機能を有すると評価される。
一方、工程（ｂ）で測定された試験雌マウスの糞便中ＩｇＡ量が、工程（ｂ’）で測定された対照試験雌マウスの糞便中ＩｇＡ量と比較して、有意差がないか少ない場合には、試験物質は抗老化機能を有さないと評価してされる。
また、工程（ｂ）及び工程（ｂ’）において、複数時点で糞便中のＩｇＡ量を測定した場合には、加齢に伴う糞便中ＩｇＡ量の変化に基づいて、試験物質の抗老化機能を評価してもよい。例えば、工程（ｂ）で測定された糞便中ＩｇＡ量の低下速度が、工程（ｂ’）で測定された糞便中ＩｇＡ量の低下速度が緩やかになる場合又は遅くなる場合に、試験物質は抗老化機能を有すると評価してもよい。
本実施形態の評価方法の具体例を以下に示す。
（準備）
雌マウスの選抜：１６週齢の雌マウス（ＴＣＲトランスジェニックマウス、例ＤＯ１１．１０マウス）から定刻に糞便を採取し、糞便中ＩｇＡ量をＥＬＩＳＡで測定し、１０００ｎｇ／糞便ｍｇ以上を示した個体を選抜する。
試験区の群分け：上記で選抜した個体を用い、試験雌マウス群及び対照雌マウス群が、各群４～６匹程度となるように群分けを行う。この時、糞中ＩｇＡ抗体量が各群で差が生じないように留意する。
（準備）
雌マウスの選抜：１６週齢の雌マウス（ＴＣＲトランスジェニックマウス、例ＤＯ１１．１０マウス）から定刻に糞便を採取し、糞便中ＩｇＡ量をＥＬＩＳＡで測定し、１０００ｎｇ／糞便ｍｇ以上を示した個体を選抜する。
試験区の群分け：上記で選抜した個体を用い、試験雌マウス群及び対照雌マウス群が、各群４～６匹程度となるように群分けを行う。この時、糞中ＩｇＡ抗体量が各群で差が生じないように留意する。
（試験）
工程（ａ）：定法通り１ケージあたり３～４匹で飼育する。試験物質を、飼料若しくは水に混ぜて、自由摂取させ、およそ２８週齢に至るまで飼育する。
工程（ｂ）：工程（ａ）のマウスについて、２～４週間毎に定刻に糞便を回収し、ＥＬＩＳＡで糞便中ＩｇＡを測定する。
工程（ｂ’）：試験物質を与えない以外は、工程（ａ）と同様に飼育した対照雌マウスについて、工程（ｂ）と同時に糞便を回収し、ＥＬＩＳＡで糞便中ＩｇＡを測定する。
工程（ｃ）：工程（ｂ）で測定された試験雌マウスの糞便中ＩｇＡ量と、工程（ｂ’）で測定された対照雌マウスの糞便中ＩｇＡ量とを比較して、当該比較結果に基づき、試験物質の抗老化機能を評価する。工程（ｂ）で測定した試験雌マウスの糞便中ＩｇＡ量の減少速度が、工程（ｂ’）で測定された対照雌マウスの糞便中ＩｇＡよりも遅れる、又は緩やかになることがあれば、試験試料は、抗老化機能を有すると評価することができる。
工程（ａ）：定法通り１ケージあたり３～４匹で飼育する。試験物質を、飼料若しくは水に混ぜて、自由摂取させ、およそ２８週齢に至るまで飼育する。
工程（ｂ）：工程（ａ）のマウスについて、２～４週間毎に定刻に糞便を回収し、ＥＬＩＳＡで糞便中ＩｇＡを測定する。
工程（ｂ’）：試験物質を与えない以外は、工程（ａ）と同様に飼育した対照雌マウスについて、工程（ｂ）と同時に糞便を回収し、ＥＬＩＳＡで糞便中ＩｇＡを測定する。
工程（ｃ）：工程（ｂ）で測定された試験雌マウスの糞便中ＩｇＡ量と、工程（ｂ’）で測定された対照雌マウスの糞便中ＩｇＡ量とを比較して、当該比較結果に基づき、試験物質の抗老化機能を評価する。工程（ｂ）で測定した試験雌マウスの糞便中ＩｇＡ量の減少速度が、工程（ｂ’）で測定された対照雌マウスの糞便中ＩｇＡよりも遅れる、又は緩やかになることがあれば、試験試料は、抗老化機能を有すると評価することができる。
本実施形態の評価方法では、Ｔ細胞のほとんどが特異的抗原に応答性を有するＴＣＲを発現するマウスの雌を用いて、糞便中ＩｇＡ量を指標として、試験物質の抗老化機能を評価するため、従来の動物試験よりも短い期間で評価を行うことができる。
そのため、短い期間で効率よく抗老化物質のスクリーニングを行うことが可能となる。
そのため、短い期間で効率よく抗老化物質のスクリーニングを行うことが可能となる。
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
［実験例１］
試験動物として、Ｔ細胞のほとんどが卵白アルブミン（ＯＶＡ）に応答するＴＣＲを発現するマウスである、ＤＯ１１．１０マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の雄（１２匹）及び雌（１２匹）を用いた。Ｄ０１１．１０マウスを、定法通りＳＰＦ環境下で１ケージあたり３～４匹で飼育した。飼料には市販標準飼料（ＮＭＦ；オリエンタル酵母工業）を用い、自由摂取させた。
１６～４２週齢の間、２週間毎に糞便を採取し、ＩｇＡ抽出まで－３０℃で凍結保存し、糞便中のＩｇＡ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。ＥＬＩＳＡ用試料の調製のために、採取した糞便１ｍｇを、１０μＬの抽出バッファー（cOmplete, EDTA-free: Roche Diagnosticsを添加したELISA Diluent:Thermo Fisher scientific）に懸濁し、４℃環境で１０分間、１５０００ｇで遠心分離を行った。遠心後、上清を回収し、測定まで－３０℃で凍結保存し、ＥＬＩＳＡ用試料とした。ＥＬＩＳＡは、Ｍｏｕｓｅ ＩｇＡ ＥＬＩＳＡ構築キット（Bethyl Laboratories, Inc）を用いて行った。
試験動物として、Ｔ細胞のほとんどが卵白アルブミン（ＯＶＡ）に応答するＴＣＲを発現するマウスである、ＤＯ１１．１０マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の雄（１２匹）及び雌（１２匹）を用いた。Ｄ０１１．１０マウスを、定法通りＳＰＦ環境下で１ケージあたり３～４匹で飼育した。飼料には市販標準飼料（ＮＭＦ；オリエンタル酵母工業）を用い、自由摂取させた。
１６～４２週齢の間、２週間毎に糞便を採取し、ＩｇＡ抽出まで－３０℃で凍結保存し、糞便中のＩｇＡ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。ＥＬＩＳＡ用試料の調製のために、採取した糞便１ｍｇを、１０μＬの抽出バッファー（cOmplete, EDTA-free: Roche Diagnosticsを添加したELISA Diluent:Thermo Fisher scientific）に懸濁し、４℃環境で１０分間、１５０００ｇで遠心分離を行った。遠心後、上清を回収し、測定まで－３０℃で凍結保存し、ＥＬＩＳＡ用試料とした。ＥＬＩＳＡは、Ｍｏｕｓｅ ＩｇＡ ＥＬＩＳＡ構築キット（Bethyl Laboratories, Inc）を用いて行った。
結果を図１に示す。図１に示すように、雌では、加齢に伴って糞便中のＩｇＡ量が減少した。一方、雄では、加齢と糞便中ＩｇＡ量との間に相関は認められなかった。
雌では、１６～２８週齢の期間においても、加齢に伴い糞便中ＩｇＡ量の有意な減少が認められた。
雌では、１６～２８週齢の期間においても、加齢に伴い糞便中ＩｇＡ量の有意な減少が認められた。
［実験例２］
ＤＯ１１．１０マウスの雌を、定法通りＳＰＦ環境下で１ケージあたり３～４匹で飼育した。飼料は自由摂取とし、１５週齢までは市販標準飼料を用い、１６週齢から精製飼料（ＡＩＮ－９３Ｍ；オリエンタル酵母工業）を用いた。
精製飼料の投与開始前のマウス、及び精製飼料投与開始から１週間後のマウスから糞便を採取し、実験例１と同様の方法で、糞便中のＩｇＡ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。精製飼料の投与開始前後におけるＩｇＡ低減率を、下記により算出した。下記式中、「投与前ＩｇＡ量」は、精製飼料投与開始前の糞便中ＩｇＡ量を表し、「投与後ＩｇＡ量」は、精製飼料投与開始１週間後の糞便中ＩｇＡ量を表す。
ＩｇＡ低減率＝（投与前ＩｇＡ量－投与後ＩｇＡ量）／投与前ＩｇＡ量×１００（％）
ＤＯ１１．１０マウスの雌を、定法通りＳＰＦ環境下で１ケージあたり３～４匹で飼育した。飼料は自由摂取とし、１５週齢までは市販標準飼料を用い、１６週齢から精製飼料（ＡＩＮ－９３Ｍ；オリエンタル酵母工業）を用いた。
精製飼料の投与開始前のマウス、及び精製飼料投与開始から１週間後のマウスから糞便を採取し、実験例１と同様の方法で、糞便中のＩｇＡ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。精製飼料の投与開始前後におけるＩｇＡ低減率を、下記により算出した。下記式中、「投与前ＩｇＡ量」は、精製飼料投与開始前の糞便中ＩｇＡ量を表し、「投与後ＩｇＡ量」は、精製飼料投与開始１週間後の糞便中ＩｇＡ量を表す。
ＩｇＡ低減率＝（投与前ＩｇＡ量－投与後ＩｇＡ量）／投与前ＩｇＡ量×１００（％）
結果を図２に示す。図２は、精製飼料投与開始前の糞便中のＩｇＡ量が高い個体順に、ＩｇＡ低減率を示したものである。（Ａ）は、投与開始前の糞便中のＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上の個体のＩｇＡ低減量を示す。（Ｂ）は、投与開始前の糞便中のＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞１ｍｇ未満の個体のＩｇＡ低減量を示す。
図２に示すように、精製飼料投与開始前の糞便中ＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上の高値群では、精製飼料の投与により糞便中ＩｇＡ量が低減した。一方、精製飼料投与開始前の糞便中ＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ未満の低値群では、精製飼料の投与による糞便ＩｇＡ量の低下は認められなかった。
図２に示すように、精製飼料投与開始前の糞便中ＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上の高値群では、精製飼料の投与により糞便中ＩｇＡ量が低減した。一方、精製飼料投与開始前の糞便中ＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ未満の低値群では、精製飼料の投与による糞便ＩｇＡ量の低下は認められなかった。
［実験例３］
ＤＯ１１．１０マウスの雌を、定法通りＳＰＦ環境下で１ケージあたり３～４匹で飼育した。飼料には市販標準飼料を用い、自由摂取させた。１６週齢のマウスの糞便を採取し、実験例１と同様の方法で、糞便中のＩｇＡ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。前記測定結果に基づき、マウスを、糞便中のＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上である高値群と、１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ未満である低値群とに分けた。
高値群（ｎ＝６）および低値群（ｎ＝１１）のマウスを、市販標準飼料を用いて飼育し、１６～３２週齢の間、４週間毎に糞便を採取し、実験例１と同様の方法で、糞便中のＩｇＡ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
ＤＯ１１．１０マウスの雌を、定法通りＳＰＦ環境下で１ケージあたり３～４匹で飼育した。飼料には市販標準飼料を用い、自由摂取させた。１６週齢のマウスの糞便を採取し、実験例１と同様の方法で、糞便中のＩｇＡ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。前記測定結果に基づき、マウスを、糞便中のＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上である高値群と、１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ未満である低値群とに分けた。
高値群（ｎ＝６）および低値群（ｎ＝１１）のマウスを、市販標準飼料を用いて飼育し、１６～３２週齢の間、４週間毎に糞便を採取し、実験例１と同様の方法で、糞便中のＩｇＡ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
結果を図３に示す。図３に示すように、６匹を供した高値群では、糞便中ＩｇＡ量は加齢に伴い有意に減少した。一方、１１匹を供した低値群では、糞便中ＩｇＡ量と加齢との相関は認められなかった。高値群では、糞便中ＩｇＡ量は加齢に伴い安定的に減少した。この結果から、糞便中のＩｇＡ量が１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上である雌個体を選抜することにより、６匹程度の少ない個体数で、再現性の高い老化評価試験を行うことができることが確認された。
本発明によれば、従来の動物試験よりも短い期間で食品等の抗老化機能を評価可能な、抗老化機能の評価方法が提供される。本発明の評価方法は、食品等に用いられる抗老化物質のスクリーニングに適用することができる。
Claims (9)
- （ａ）特異的抗原に曝露されない環境で飼育されるマウスであって、そのＴ細胞のほとんどが前記特異的抗原に応答性を有するＴ細胞受容体を発現する雌マウス（試験雌マウス）に対して、試験物質を投与する工程と、
（ｂ）前記試験物質を投与した前記試験雌マウスの糞便を回収し、前記試験雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量を測定する工程と、
（ｃ）前記工程（ｂ）で測定された前記試験雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量に基づいて、前記試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能を評価する工程と、
を含み、
前記試験雌マウスの前記試験物質の投与開始時の週齢が、１４～１８週齢である、
試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法。 - 前記試験雌マウスの前記試験物質の投与開始時の週齢が、１６週齢である、請求項１に記載の試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法。
- 前記工程（ｂ）を、前記試験物質を投与した前記試験雌マウスが２８週齢以下である期間に１回以上行う、請求項１又は２に記載の試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法。
- 前記試験雌マウスの前記試験物質の投与開始前の糞便中のＩｇＡ量が、１０００ｎｇ／糞便１ｍｇ以上である、請求項１～３のいずれか一項に記載の試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法。
- 前記Ｔ細胞受容体が、ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ ＩＩ拘束性のＴ細胞受容体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法。
- 前記特異的抗原が卵白アルブミンである、請求項５に記載の試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法。
- 前記試験雌マウスが、ＤＯ１１．１０マウス系統のマウスである、請求項６に記載の試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法。
- （ｂ’）前記試験雌マウスと同じ環境で同じ期間飼育されるマウスであって、前記特異的抗原に応答性を有する前記Ｔ細胞受容体を発現する雌マウスであって、且つ前記試験物質を投与しなかった雌マウス（対照雌マウス）の糞便を回収し、前記対照雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量を測定する工程、
をさらに有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法。 - 前記工程（ｃ）において、
前記工程（ｂ）で測定された前記試験雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量が、前記工程（ｂ’）で測定された前記対照雌マウスの前記糞便中のＩｇＡ量よりも多い場合に、前記試験物質は、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能を有すると評価する、
請求項８に記載の試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2019116185A JP7287665B2 (ja) | 2019-06-24 | 2019-06-24 | 試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2019116185A JP7287665B2 (ja) | 2019-06-24 | 2019-06-24 | 試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2021001827A JP2021001827A (ja) | 2021-01-07 |
| JP7287665B2 true JP7287665B2 (ja) | 2023-06-06 |
Family
ID=73994995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019116185A Active JP7287665B2 (ja) | 2019-06-24 | 2019-06-24 | 試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP7287665B2 (ja) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007520197A (ja) | 2003-06-24 | 2007-07-26 | ティーエクスセル | 特異的分子の存在および過剰発現によるｔｒ１調節リンパ球の同定法およびその応用方法 |
| WO2018066531A1 (ja) | 2016-10-06 | 2018-04-12 | Ａｏｆ株式会社 | 抗体産生力を上げる培養上清製剤 |
| JP2022132724A (ja) | 2021-03-01 | 2022-09-13 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 免疫グロブリンａ分泌促進剤 |
| JP2022155522A (ja) | 2021-03-30 | 2022-10-13 | 株式会社日清製粉グループ本社 | 免疫機能低下抑制剤及び免疫機能の低下抑制方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6294581B1 (en) * | 1998-05-15 | 2001-09-25 | Takara Shuzo Co., Ltd. | Inhibition of IgA production |
-
2019
- 2019-06-24 JP JP2019116185A patent/JP7287665B2/ja active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007520197A (ja) | 2003-06-24 | 2007-07-26 | ティーエクスセル | 特異的分子の存在および過剰発現によるｔｒ１調節リンパ球の同定法およびその応用方法 |
| WO2018066531A1 (ja) | 2016-10-06 | 2018-04-12 | Ａｏｆ株式会社 | 抗体産生力を上げる培養上清製剤 |
| JP2022132724A (ja) | 2021-03-01 | 2022-09-13 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 免疫グロブリンａ分泌促進剤 |
| JP2022155522A (ja) | 2021-03-30 | 2022-10-13 | 株式会社日清製粉グループ本社 | 免疫機能低下抑制剤及び免疫機能の低下抑制方法 |
Non-Patent Citations (21)
| Title |
|---|
| C. Matsuzaki，Immunomodulating activity of exopolysaccharideproducing Leuconostoc mesenteroides strain NTM048 from green peas，Journal of Applied Microbiology，2013年12月07日，Vol.116，Page.980-989 |
| Hiromi Kimoto-Nira，Influence of long-term consumption of a Lactococcus lactis strain on the intestinal immunity and intestinal flora of the senescence-accelerated mouse，British Journal of Nutrition，2009年07月28日，Vol.102 No.2，Page.181-185 |
| IgAの腸内細菌に対する反応性の低下が 加齢に伴う腸内菌叢の変動に関係 ～科学雑誌『Frontiers in Microbiology』（9月12日）掲載のご報告～，森永乳業株式会社 奈良先端科学技術大学院大学，2017年09月，https://www.naist.jp/pressrelease/files/bio_shinkura20170921.pdf |
| Inta Gribonika，An unadjuvanted model for oral immunization revealing complex regulatory control of gut IgA responses to soluble protein，J Immunol，2017年05月，Vol.198 No.1_Supplement，Page.Abstract Number 62.15 |
| Lifeng Wang，Effect of oral consumption of probiotic Lactobacillus planatarum P-8 on fecal microbiota, SIgA, SCFAs, and TBAs of adults of different ages，Nutrition，2014年07月，Vol.30 No.7-8，Page.776-783,783.e1 |
| Osamu HAYASHI，Influence of astaxanthin ingestion on the mucosal immune responses in adult and aged mice，JPFIN，2007年，Vol.17 No.1，Page.12-22 |
| Reiko Kuroda，Effects of chocolate containing Leuconostoc mesenteroides strain NTM048 on immune function: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial，Immunity & Ageing，2018年11月20日，Vol.15 No.1，Page.29 |
| 八村敏志，老化の分子機構 腸管免疫と老化，医学のあゆみ，2015年05月30日，Vol.253 No.9，Page.729-731 |
| 千田繁，マウス腸管免疫グロブリンの加齢による変化，消化器と免疫，1988年，No.20，Page.194-199 |
| 後藤 真生，食品健康機能 食品の免疫老化抑制活性を評価する動物試験法 マウス糞便中IgA量を指標とする免疫老化の短期評価，2021年11月12日，https://www.naro.go.jp/laboratory/nfri/seikatenji/seika2021/2021-poster-10.pdf |
| 後藤真生，T細胞依存性の異なる腸管粘膜IgAに食品が及ぼす影響の解析，日本農芸化学会大会講演要旨集，2021年03月05日，Vol.2021，Page.ROMBUNNO.2D04-01 |
| 後藤真生，腸管免疫系における食物アレルゲンの認識機構，別冊・医学のあゆみ 食物アレルギーの最前線，1999年，Page.46-50 |
| 戸田雅子，調節性食物繊維による老化した免疫と腸の機能改善効果について，飯島藤十郎記念食品科学振興財団年報，2021年，Vol.36，Page.280-285 |
| 曹 元，Effect of imidazole dipeptides on gut immunity and inflammatory responses ( イミダゾールジペプチドの腸管免疫系および炎症 反応に対する作用に関する研究），博士論文，東京大学農学生命科学研究科応用生命化学専攻，2017年 |
| 松永安由，マウスにおけるLactobacillus gasseri SBT2055による母乳を介した経口免疫寛容の増強作用，日本栄養・食糧学会誌，2019年06月14日，Vol.72 No.3，Page.105-113 |
| 相川恵子，高齢者の免疫機能に関する研究，石川県衛生公害研究所年報，1988年，No.25，Page.380-383 |
| 米田浩二，ELISA法による糞便中の分泌型IgAの測定，医学のあゆみ，1989年02月18日，Vol.148 No.71，Page.493-494 |
| 芝原 恭子，抗原の経口摂取によって誘導されるT細胞応答に関する研究，博士論文，東京大学農学生命科学研究科応用生命化学専攻，2016年 |
| 若木 学、後藤 真生，食品健康機能18 食品の免疫調節機能を評価する動物試験法 －マウス糞便中IgA量を指標とする短期評価－，2021年，https://www.naro.go.jp/laboratory/nfri/seikatenji/seika2022/2022_poster_18.pdf |
| 角保徳，口腔内局所感染防御機構に関する研究 －第4報：加齢による唾液中のsIgAの濃度の変化－，日本唾液腺学会誌，1990年，Vol.31，Page.42-45 |
| 食品の免疫機能解析業務のご紹介，日本クレア株式会社，https://www.clea-japan.com/promotion/japanese/Food_immune_function_analysis |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2021001827A (ja) | 2021-01-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HERITAGE et al. | Comparison of murine nasal-associated lymphoid tissue and Peyer's patches | |
| Jirillo et al. | Anti-inflammatory and anti-allergic properties of donkey’s and goat’s milk | |
| AU2009208390B2 (en) | A method of inducing tolerance to an allergen | |
| Luo et al. | Early and later life environmental enrichment affect specific antibody responses and blood leukocyte subpopulations in pigs | |
| Ulmer-Franco et al. | Hatching egg and newly hatched chick yolk sac total IgY content at 3 broiler breeder flock ages | |
| van der Eijk et al. | Chicken lines divergently selected on feather pecking differ in immune characteristics | |
| Du et al. | An essential role for RXRα in the development of Th2 responses | |
| Kazemi et al. | Animal models for the study of food allergies | |
| Liang et al. | Structural characteristics and mucosal immune response of the interbranchial lymphoid tissue in the gills of flounder (Paralichthys olivaceus) | |
| Dawod et al. | Toll-like receptor 2 impacts the development of oral tolerance in mouse pups via a milk-dependent mechanism | |
| JP7287665B2 (ja) | 試験物質の、加齢に伴う粘膜免疫機能の低下を抑制する機能の評価方法 | |
| Yang et al. | Two allergens from Scylla paramamosain share common epitopes showed different allergenic potential in Balb/c mice | |
| Erhard et al. | The humoral immune response and the productivity of laying hens kept on the ground or in cages | |
| Hrubec et al. | Age related changes in humoral immune response of hybrid striped bass (Morone chrysops× Morone saxatilis) | |
| Yang et al. | Specific overexpression of IL-7 in the intestinal mucosa: the role in intestinal intraepithelial lymphocyte development | |
| Ogrinc Wagner et al. | Strain specific maturation of Dendritic cells and production of IL-1β controls CD40-driven colitis | |
| Gao et al. | Influence of food processing, digestion and the food matrix on allergenicity & cellular measures of allergenicity | |
| Etayo et al. | The thymus and T-cell ontogeny in ballan wrasse (Labrus bergylta) is nutritionally modelled | |
| Cho et al. | Differential immune profiles following experimental Echinostoma hortense infection in BALB/c and C3H/HeN mice | |
| Goddeeris et al. | The porcine and avian intestinal immune system and its nutritional modulation | |
| Nygaard et al. | Suppression of Allergen‐Specific I g E in Offspring After Preconceptional Immunisation: Maternal, Paternal and Genetic Influences | |
| Fantini et al. | Oral allergy syndrome in a child provoked by royal jelly | |
| JP2000508627A (ja) | 潜在ペプチドならびにそれらの同定方法 | |
| Wagner | Pathogenesis and epidemiology of Culicoides hypersensitivity | |
| Poikonen | Turnip rape and oilseed rape allergy in children with atopic dermatitis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220408 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230124 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230315 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230509 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230518 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7287665 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |