JP7211978B2 - 細胞を培養するための装置及び方法 - Google Patents
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Description
a)細胞を、場合によって、例えば細胞培養培地、架橋又は非架橋ヒドロゲルにおける懸濁液の形態で提供し、本発明による装置を提供すること、b)細胞を、場合によって、例えば細胞培養培地、架橋又は非架橋ヒドロゲルにおける懸濁液の形態で、本発明による装置に少なくとも一つのアクセス開口部を通じて導入すること、c)回転を可能にする回転装置に本発明による装置を導入すること、d)本発明による装置を回転させること、e)少なくとも一つの培養チャンバで細胞を取得すること、及び、f)少なくとも一つの培養チャンバで細胞を培養すること。本発明によれば、ステップc)がステップb)の前に実行されることが企図されてもよい。特に好ましくは、少なくとも一つの培養チャンバで細胞を培養することにより、細胞群、組織群、又は特に細胞密度の高い細胞培養が発生する。
i)少なくとも一つのネガ型レジスト材料、少なくとも一つのシリコン基板、及びキャリアプレートユニットを形成する少なくとも一つの材料を提供すること、
ii)UVリソグラフィにより、シリコン基板上のネガ型レジスト材料から特に第一のキャリアプレートのキャリアプレートユニット用の金型テンプレートを製造すること、
iii)キャリアプレートユニットを形成する材料を金型テンプレートに流し込むこと、
iv)金型テンプレート内でキャリアプレートユニットを形成する材料を硬化させること、並びに、
v)キャリアプレートユニット、特に第一のキャリアプレートを取得すること
を含む。
例示的な臓器ディスクの製造について以下に説明する。本発明によるディスク、即ちキャリアプレートユニットは、ポリジメチルシロキサン(PDMS、ダウコーニングからSylgard 184として入手)から製造される。個々のキャリアプレートは、ソフトリソグラフィによって製造され、フォトレジストSU-8からUVリソグラフィを使用して、シリコン基板(ウェハ)上に必要なチャネル高さの各キャリアプレートの金型テンプレートが最初に作製される。金型テンプレートは、記載のディスクに対して以下の特性を有する。
本実施例では、ディスクを使用して、培養チャンバ内の線維芽細胞を濃縮し、後でこれらを培養する。ディスクを使用するためには、最初にこれらをO2プラズマで活性化して、充填時にチャネルをより湿らせる。50W、60秒、及び0.2Nl/hのO2流量がパラメータとして使用される。
本発明による方法を使用して細胞群を製造するために、回転によって生成される遠心力FCの方向に対して傾斜したチャネル(150)を備えた装置が使用され、その長さに沿って八つの培養チャンバ(140)が配置されている。
図1は、ディスクの形態の、本発明によるキャリアプレートユニット(110)を示す。キャリアプレートユニット(110)は、中心回転軸(120)と、これを囲む中心領域(121)とを有する。アクセス開口部(130)は、中心回転軸(120)に対して近位に配置され、チャネル(150)を介して培養チャンバ(140)に接続されている。
本発明は、以下の実施形態を包含する。
(実施形態1)
細胞を培養するための装置であって、中心回転軸(120)を有するキャリアプレートユニット(110)を備えており、前記キャリアプレートユニット(110)は、前記回転軸(120)に対して近位に配置された少なくとも一つのアクセス開口部(130)と、前記回転軸(120)に対して遠位に配置された少なくとも一つの培養チャンバ(140)と、前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)を前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)に接続する少なくとも一つのチャネル(150)と、を備える、細胞を培養するための装置。
(実施形態2)
前記キャリアプレートユニット(110)は、回転装置のための、少なくとも一つの接続装置、特に少なくとも一つの貫通開口部、又は少なくとも一つの係止装置(125)を備えた中央領域(121)を有する、実施形態1に記載の装置。
(実施形態3)
好ましくは周辺に配置された、回転装置のための少なくとも一つのロック装置を有する、実施形態1又は2に記載の装置。
(実施形態4)
前記少なくとも一つのチャネル(150)は、分岐又は非分岐チャネルである、実施形態1から3のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態5)
前記少なくとも一つのチャネル(150)は、前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)を少なくとも二つの培養チャンバ(140)に接続する、実施形態1から4のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態6)
前記チャネル(150)は、その長さの少なくとも一部にわたって、前記チャネル(150)に直接隣接する少なくとも二つの培養チャンバ(140)を有する、実施形態1から5のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態7)
前記チャネル(150)は、その長さの少なくとも一部にわたって湾曲している、実施形態1から6のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態8)
前記チャネル(150)は、静的湾曲又は角度依存性の湾曲を有する、実施形態7に記載の装置。
(実施形態9)
前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)は、少なくとも二つのアクセス開口部(131,132)を有する充填チャンバ(190)として構成されている、実施形態1から8のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態10)
前記キャリアプレートユニット(110)は、少なくとも一つの第一のキャリアプレート(111)と、その上又はその下に配置された第二のキャリアプレート(112)とを含む、実施形態1から9のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態11)
前記第一のキャリアプレート(111)は、前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)と、前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)と、前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)と前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)とを接続する前記少なくとも一つのチャネル(150)とを有する、実施形態1から10のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態12)
前記第二のキャリアプレート(112)は、少なくとも一つの培地開口部(160)と、少なくとも一つの培地チャンバ(170)と、前記少なくとも一つの培地開口部(160)を前記少なくとも一つの培地チャンバ(170)に接続する少なくとも一つの培地チャネル(180)とを有する、実施形態1から11のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態13)
前記少なくとも一つの培地チャネル(180)は、少なくとも二つの培地開口部(160)を、少なくとも一つ、好ましくは二つの培地チャンバ(170)に接続する、実施形態1から12のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態14)
前記第一のキャリアプレート(111)と前記第二のキャリアプレート(112)との間に、少なくとも一つの分離装置(135)、特に少なくとも一つの膜、が配置されている、実施形態1から13のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態15)
前記第一のキャリアプレート(111)の前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)と、前記第二のキャリアプレート(112)の前記少なくとも一つの培地チャンバとは重複して構成され、流体接続している、実施形態1から14のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態16)
前記キャリアプレートユニット(110)は、更に、液体用、特に細胞培養培地又は調査対象の活性物質用のリザーバを含む、実施形態10から15のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態17)
前記キャリアプレートユニット(110)は円板の形状を有する、実施形態1から16のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態18)
前記キャリアプレートユニット(110)は、マイクロタイタープレートとして構成されている、実施形態1から16のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態19)
前記キャリアプレートユニット(110)は、ガラス又はポリマー材料から構成されている、実施形態1から18のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態20)
前記キャリアプレートユニット(110)は、ポリジメチルシロキサン(PDMS)又はシクロオレフィン共重合体(COC)から構成されている、実施形態1から19のいずれか一項に記載の装置。
(実施形態21)
細胞が実施形態1から20のいずれか一項に記載の装置で培養される、前記細胞を培養するための方法。
(実施形態22)
前記培養が、
a)細胞及び実施形態1から20のいずれか一項に記載の装置を提供すること、
b)前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)を通して細胞を実施形態1から20のいずれか一項に記載の装置に導入すること、
c)前記装置の回転を可能にする回転装置に実施形態1から20のいずれか一項に記載の前記装置を導入すること、
d)実施形態1から20のいずれか一項に記載の前記装置を回転させること、
e)前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)で細胞を取得すること、並びに、
f)前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)で前記細胞を培養すること、
によって行われる、実施形態21に記載の方法。
(実施形態23)
更に、方法ステップ
g)細胞培養培地を、前記少なくとも一つの培地開口部(160)に導入すること、
h)実施形態1から20のいずれか一項に記載の前記装置を、回転させること、及び、
i)前記培養チャンバ(140)内で前記細胞を供給するために前記少なくとも一つの培地チャンバ(170)で細胞培養培地を取得すること、
が実行される、実施形態21又は22に記載の方法。
(実施形態24)
圧力勾配の生成、外部若しくは統合ポンプ、又は前記装置の回転により、細胞培養培地を含む前記培地チャネル(180)及び前記培地チャンバ(170)を通る連続的又は脈動的な貫流が可能になる、実施形態21から23のいずれか一項に記載の方法。
(実施形態25)
前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)内での前記細胞の前記培養によって、細胞群、特に三次元細胞群が生成する、実施形態21から24のいずれか一項に記載の方法。
(実施形態26)
実施形態21から25のいずれか一項に記載の細胞を培養するための方法が実行され、細胞群が取得されることを特徴とする、細胞群を製造するための方法。
(実施形態27)
実施形態21から26のいずれか一項に記載の方法によって製造される細胞培養物、特に細胞群。
(実施形態28)
第一の方法ステップにおいて、前記キャリアプレートユニットを形成する少なくとも一つの材料、特にポリマー材料が提供され、これが、形状と安定性とを付与する方法において、特に、フォトリソグラフィ、ソフトリソグラフィ、選択的レーザー焼結、レーザー切断及びミリング、レーザーアブレーション、フォトポリマーを使用したインクジェット印刷、溶融コーティング(熱可塑性押出)、LOM(積層物体製造)、ステレオリソグラフィ、ホットスタンピング(ホットエンボス、特にマイクロホットスタンピング)、ミリング(CNCミリング、特にマイクロミリング)、プラスチック射出成形(射出成形、特にマイクロ射出成形)及び/又は3D印刷法において、実施形態1から20のいずれか一項に記載の装置において形成されている、実施形態1から20のいずれか一項に記載の装置を製造するための方法。
Claims (23)
- 細胞を培養するための装置であって、中心回転軸(120)を有するキャリアプレートユニット(110)を備えており、前記キャリアプレートユニット(110)は、前記回転軸(120)に対して近位に配置された少なくとも一つのアクセス開口部(130)と、前記回転軸(120)に対して遠位に配置された少なくとも一つの培養チャンバ(140)と、前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)を前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)に接続する少なくとも一つのチャネル(150)と、を備え、前記キャリアプレートユニット(110)は、少なくとも一つの第一のキャリアプレート(111)と、その上又はその下に配置された第二のキャリアプレート(112)とを含み、前記第一のキャリアプレート(111)は、前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)と、前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)と、前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)を前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)に接続する前記少なくとも一つのチャネル(150)とを有し、前記第二のキャリアプレート(112)は、少なくとも一つの培地開口部(160)と、少なくとも一つの培地チャンバ(170)と、前記少なくとも一つの培地開口部(160)を前記少なくとも一つの培地チャンバ(170)に接続する少なくとも一つの培地チャネル(180)とを有する、細胞を培養するための装置。
- 前記キャリアプレートユニット(110)は、回転装置のための、少なくとも一つの接続装置を備えた中央領域(121)を有する、請求項1に記載の装置。
- 回転装置のための少なくとも一つのロック装置を有する、請求項1又は2に記載の装置。
- 前記少なくとも一つのチャネル(150)は、分岐又は非分岐チャネルである、請求項1から3のいずれか一項に記載の装置。
- 前記少なくとも一つのチャネル(150)は、前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)を少なくとも二つの培養チャンバ(140)に接続する、請求項1から4のいずれか一項に記載の装置。
- 前記チャネル(150)は、その長さの少なくとも一部にわたって、前記チャネル(150)に直接隣接する少なくとも二つの培養チャンバ(140)を有する、請求項1から5のいずれか一項に記載の装置。
- 前記チャネル(150)は、その長さの少なくとも一部にわたって湾曲している、請求項1から6のいずれか一項に記載の装置。
- 前記チャネル(150)は、静的湾曲又は角度依存性の湾曲を有する、請求項7に記載の装置。
- 前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)は、少なくとも二つのアクセス開口部(131,132)を有する充填チャンバ(190)として構成されている、請求項1から8のいずれか一項に記載の装置。
- 前記少なくとも一つの培地チャネル(180)は、少なくとも二つの培地開口部(160)を、少なくとも一つの培地チャンバ(170)に接続する、請求項1から9のいずれか一項に記載の装置。
- 前記第一のキャリアプレート(111)と前記第二のキャリアプレート(112)との間に、少なくとも一つの分離装置(135)が配置されている、請求項1から10のいずれか一項に記載の装置。
- 前記第一のキャリアプレート(111)の前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)と、前記第二のキャリアプレート(112)の前記少なくとも一つの培地チャンバとは重複して構成され、流体接続している、請求項1から11のいずれか一項に記載の装置。
- 前記キャリアプレートユニット(110)は、更に、液体用のリザーバを含む、請求項1から12のいずれか一項に記載の装置。
- 前記キャリアプレートユニット(110)は円板の形状を有する、請求項1から13のいずれか一項に記載の装置。
- 前記キャリアプレートユニット(110)は、マイクロタイタープレートとして構成されている、請求項1から13のいずれか一項に記載の装置。
- 前記キャリアプレートユニット(110)は、ガラス又はポリマー材料から構成されている、請求項1から15のいずれか一項に記載の装置。
- 前記キャリアプレートユニット(110)は、ポリジメチルシロキサン(PDMS)又はシクロオレフィン共重合体(COC)から構成されている、請求項1から16のいずれか一項に記載の装置。
- 細胞が請求項1から17のいずれか一項に記載の装置で培養される、前記細胞を培養するための方法。
- 前記培養が、
a)細胞及び請求項1から17のいずれか一項に記載の装置を提供すること、
b)前記少なくとも一つのアクセス開口部(130)を通して細胞を請求項1から17のいずれか一項に記載の装置に導入すること、
c)前記装置の回転を可能にする回転装置に請求項1から17のいずれか一項に記載の前記装置を導入すること、
d)請求項1から17のいずれか一項に記載の前記装置を回転させること、
e)前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)で細胞を取得すること、並びに、
f)前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)で前記細胞を培養すること、
によって行われる、請求項18に記載の方法。 - 更に、方法ステップ
g)細胞培養培地を、前記少なくとも一つの培地開口部(160)に導入すること、
h)請求項1から17のいずれか一項に記載の前記装置を、回転させること、及び、
i)前記培養チャンバ(140)内で前記細胞を供給するために前記少なくとも一つの培地チャンバ(170)で細胞培養培地を取得すること、
が実行される、請求項18又は19に記載の方法。 - 圧力勾配の生成、外部若しくは統合ポンプ、又は前記装置の回転により、細胞培養培地を含む前記培地チャネル(180)及び前記培地チャンバ(170)を通る連続的又は脈動的な貫流が可能になる、請求項18から20のいずれか一項に記載の方法。
- 前記少なくとも一つの培養チャンバ(140)内での前記細胞の前記培養によって、細胞群が生成する、請求項18から21のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項18から22のいずれか一項に記載の細胞を培養するための方法が実行され、細胞群が取得されることを特徴とする、細胞群を製造するための方法。
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