JP7185239B2 - 随時尿中細胞を用いた筋系細胞の誘導方法 - Google Patents
随時尿中細胞を用いた筋系細胞の誘導方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7185239B2 JP7185239B2 JP2020561982A JP2020561982A JP7185239B2 JP 7185239 B2 JP7185239 B2 JP 7185239B2 JP 2020561982 A JP2020561982 A JP 2020561982A JP 2020561982 A JP2020561982 A JP 2020561982A JP 7185239 B2 JP7185239 B2 JP 7185239B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- myotubes
- exon
- cells
- skipping
- inhibitors
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4705—Regulators; Modulating activity stimulating, promoting or activating activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0658—Skeletal muscle cells, e.g. myocytes, myotubes, myoblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0684—Cells of the urinary tract or kidneys
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5061—Muscle cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/25—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from renal cells, from cells of the urinary tract
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
- C12N2740/13041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/13043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
Description
(1)尿中細胞から筋管を作製する方法であって、
尿中細胞にMYOD1遺伝子を導入する導入ステップと、
前記尿中細胞を少なくとも1種のエピジェネティクス制御化合物に曝露する曝露ステップと、
を含む方法。
(2)前記導入ステップ及び前記曝露ステップ後の前記尿中細胞が筋芽細胞及び筋管からなる群より選択される少なくとも1種を含む、(1)に記載の方法。
(3)エピジェネティクス制御化合物が、ヒストンメチル基転移酵素阻害剤、ヒストン脱メチル化酵素阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、SIRT2阻害剤、及びPARP阻害剤からなる群より選択される少なくとも1種を含む、(1)又は(2)に記載の方法。
(4)ヒストンメチル基転移酵素阻害剤が、3-デアザネプラノシンA及び3-デアザネプラノシンA塩酸塩(DZNep)、GSK343、SGC707、フラミジン二塩酸塩、UNC2327、E7438、及びMI-2(メニン-MLL阻害剤)からなる群より選択される少なくとも1種を含む、(3)に記載の方法。
(5)ヒストン脱メチル化酵素阻害剤が、IOX 1及びGSK-J1からなる群より選択される少なくとも1種を含む、(3)に記載の方法。
(6)ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤が、LMK-235、CAY10603、BRD73954、及びVORINOSTATからなる群より選択される少なくとも1種を含む、(3)に記載の方法。
(7)SIRT2阻害剤がSirReal 2を含む、(3)に記載の方法。
(8)PARP阻害剤がEB47を含む、(3)に記載の方法。
(9)MYOD1遺伝子の導入が、誘導性プロモーターの制御下にあるMYOD1遺伝子を含む発現ベクターの導入により行われる、(1)~(8)のいずれかに記載の方法。
(10)発現ベクターが選択マーカー遺伝子をさらに含む、(9)に記載の方法。
(11)尿中細胞が、筋疾患患者又は筋ジストロフィー患者由来のものである、(1)~(10)のいずれかに記載の方法。
(12)尿中細胞から筋管を作製するためのキットであって、
尿中細胞にMYOD1遺伝子を導入するための導入手段と、
少なくとも1種のエピジェネティクス制御化合物と、
を備えるキット。
(13)前記導入手段が、MYOD1遺伝子を尿中細胞へ導入するための発現ベクターである、(12)に記載のキット。
(14)エピジェネティクス制御化合物が、ヒストンメチル基転移酵素阻害剤、ヒストン脱メチル化酵素阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、SIRT2阻害剤、及びPARP阻害剤からなる群より選択される少なくとも1種を含む、(12)又は(13)に記載のキット。
(15)エピジェネティクス制御化合物が、3-デアザネプラノシンA及び3-デアザネプラノシンA塩酸塩(DZNep)、GSK343、SGC707、フラミジン二塩酸塩、UNC2327、E7438、及びMI-2(メニン-MLL阻害剤)、IOX 1及びGSK-J1、LMK-235、CAY10603、BRD73954、及びVORINOSTAT、SirReal 2、並びにEB47からなる群より選択される少なくとも1種を含む、(12)~(14)のいずれかに記載のキット。
(16)筋ジストロフィー患者に対するエクソン・スキップ治療薬の検定方法であって、
(1)~(11)のいずれかに記載の方法により筋ジストロフィー患者の尿中細胞から筋管を作製する作製ステップと、
前記筋管にエクソン・スキップ治療薬を適用する適用ステップと、
前記筋管におけるジストロフィンmRNA及び/又はタンパク質の回復を検出する検出ステップと、を含む方法。
(17)前記検出ステップにおいて、ジストロフィンmRNA及び/又はタンパク質の回復が、RT-PCR、ウエスタンブロット、及び免疫細胞染色からなる群より選択される少なくとも1つの方法により検出される、(16)に記載の方法。
(18)エクソン・スキップ治療薬が、エクソン44スキップ薬、エクソン45スキップ薬、エクソン50スキップ薬、エクソン51スキップ薬及びエクソン53スキップ薬からなる群より選択される少なくとも1種を含む、(16)又は(17)に記載の方法。
(19)骨格筋障害を引き起こす状態の治療薬又は予防薬候補のスクリーニング方法であって、
骨格筋障害を引き起こす状態を有する患者の尿中細胞から(1)~(11)のいずれかに記載の方法により筋管を作製する作製ステップと、
前記筋管に被験物質又は因子を適用する適用ステップと、
前記適用ステップ後の前記筋管における変化をモニターすることにより前記被験物質又は因子を治療薬又は予防薬候補として同定する同定ステップと、
を含む方法。
本発明は、非侵襲的かつ効率的に尿中細胞から尿細胞由来筋管を作製するための方法及びキット、並びにかかる尿細胞由来筋管の用途に関する。
骨格筋障害を引き起こす状態を有する患者の尿中細胞から上述した方法により筋管を作製する作製ステップと、
前記筋管に治療薬を適用する適用ステップと、
前記筋管における骨格筋障害の状態の改善を検出する検出ステップと、
を含む。具体的な実施形態において、本発明は、筋ジストロフィー患者に対するエクソン・スキップ治療薬の検定方法であって、
上述した方法によって筋ジストロフィー患者の尿中細胞から筋管を作製する作製ステップと、
前記筋管にエクソン・スキップ治療薬を適用する適用ステップと、
前記適用ステップ後の前記筋管におけるジストロフィンmRNA及び/又はタンパク質の回復を検出する検出ステップと、
を含む方法に関する。
骨格筋障害を引き起こす状態を有する患者の尿中細胞から上述した方法によって筋管を作製する作製ステップと、
前記筋管に被験物質又は因子を適用する適用ステップと、
前記適用ステップ後の前記筋管における変化をモニターすることにより前記被験物質又は因子を治療薬又は予防薬候補として同定する同定ステップと、
を含む。
滅菌したプラスチックボトル(Corning Incorporated, NY, USA; 430281)に対して対象に排尿させることによって尿を採取した。Zhouらの方法(Zhou, T. et al. Nature protocols vol.7, pp.2080-2089, 2012)を若干変更して、採取した尿の初代細胞培養を採取後数時間以内に行った。
In-Fusion HD Cloning Plus(Clontech; 638909)を用いてMYOD1配列(CCDS 7826.1)をpRetroX-TetOne-Puroベクター(Clontech; 634307)に挿入した。GP2-293細胞(Clontech; 631458)をコラーゲンコートした細胞培養用プレート上で、10%ウシ胎児血清を含むDMEM培地で培養した。GP2-293細胞に、pVZV-Gカプシドベクターと作製したMYOD1挿入後のpRetroX-TetOne-Puroベクターを、Xfect trasfection reagent(Clontech; 631317)を用いてGP2-293細胞に導入した。GP2-293細胞が産生したレトロウイルスベクター(以下「MYOD1ウイルスベクター」という)(図2)を、24時間後と48時間後に培養上清から回収し、-80℃フリーザー内に保存した。図2に示すレトロウイルスベクターは、MYOD1遺伝子がTRE3GSプロモーターの制御下にあるため、ドキシサイクリン(Dox)によりMYOD1遺伝子の発現を誘導可能である。また、選択マーカーとしてピューロマイシン耐性遺伝子を含む。
尿中細胞を培養用ディッシュ又はプレート上に播種し(例えば、3,000~5,000個/cm2)、増殖培地内で培養後(例えば24時間後)にポリブレンなどを用いてMYOD1ウイルスベクターを感染させることにより尿中細胞にMYOD1を導入した。これにより、導入ステップが行われた。感染の一定期間後にピューロマイシンを培地に添加し数日間培養することで、MYOD1陽性尿中細胞を選択した。
MYOD1陽性尿中細胞をコラーゲンコートした培養用ディッシュ又はプレート上に播種し、ドキシサイクリン(例えば1μg/mL)を添加した分化培地(高グルコース含有DMEM with GlutaMAX-I(Thermo Fisher Scientific; 10569-010)、5%ウマ血清、ITS Liquid Media Supplement(Sigma; I3146)、1μg/mL ドキシサイクリンを含む)で培養し、筋管を誘導した。その際、化合物ライブラリー(Sigma; S990043-EPI1)を用いた低分子化合物を分化培地に添加することにより、筋分化を促進し得るかを検討した。低分子化合物は最終濃度を0.1、1又は10μMとして添加した。筋管誘導の評価は免疫細胞染色及びウエスタンブロットで行った。
DMD患者の尿中細胞から誘導された筋管(尿細胞由来筋管)を対象に、エクソン・スキップ治療薬であるアンチセンス・オリゴヌクレオチド(AON)の治療効果を検定可能か検討するために以下の実験を行った。DMD遺伝子にエクソン45欠損を有するDMD患者(1名)から尿を採取し、実施例1~3に記載の手順で尿中細胞から筋管を誘導した。筋分化誘導後7日時点で、エクソン・スキップ治療薬であるAONと6μMエンドポーター(Gene Tools, Philomath, OR, USA)を含む分化培地に変更した。さらに3日後に分化培地のみの培地に変更し、筋分化誘導後14日時点で細胞を回収した。使用したAONの詳細は、Wilton, S. D. et al. Mol Ther 15, 1288-1296 (2007)に従った。これにより、適用ステップが行われた。
エクソン・スキップ効率 =
エクソン・スキップあり/(エクソン・スキップなし+エクソン・スキップあり)
なお、図6のBに示すグラフは、求めたエクソン・スキップ効率を平均値±標準誤差で示し、***はP<0.001、****はP<0.0001を表す。
DMD遺伝子にエクソン45-54欠損を有するDMD患者から尿を採取し、尿細胞由来筋管を誘導した。筋分化誘導後7日時点で配列の異なるアンチセンスオリゴヌクレオチド(AON)と6μMエンドポーター(Gene Tools, Philomath, OR, USA)を含む分化培地に変更した。さらに3日後に分化培地のみの培地に変更し、筋分化誘導後14日時点で、実施例4に記載の方法と同様にジストロフィンタンパク質の発現を免疫細胞染色により半定量化した。使用したAONは、エクソン44スキップ薬であり、コントロールとしてエクソン45スキップ薬、エクソン50スキップ薬及びエクソン51スキップ薬を使用した。これらのAONの詳細は、エクソン44スキップ薬とエクソン45スキップ薬はWilton, S. D. et al. Mol Ther 15, 1288-1296 (2007)、エクソン50スキップ薬はWu, B. et al. PLoS One 6, e19906 (2011)に従い、エクソン51スキップ薬はeteplirsen(AVI-4658)を使用した。
Claims (19)
- 尿中細胞から筋管を作製する方法であって、
尿中細胞にMYOD1遺伝子を導入する導入ステップと、
前記尿中細胞を少なくとも1種のエピジェネティクス制御化合物に曝露する曝露ステップと、
を含む方法。 - 前記導入ステップ及び前記曝露ステップ後の前記尿中細胞が筋芽細胞及び筋管からなる群より選択される少なくとも1種を含む、請求項1に記載の方法。
- エピジェネティクス制御化合物が、ヒストンメチル基転移酵素阻害剤、ヒストン脱メチル化酵素阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、SIRT2阻害剤、及びPARP阻害剤からなる群より選択される少なくとも1種を含む、請求項1又は2に記載の方法。
- ヒストンメチル基転移酵素阻害剤が、3-デアザネプラノシンA及び3-デアザネプラノシンA塩酸塩(DZNep)、GSK343、SGC707、フラミジン二塩酸塩、UNC2327、E7438、及びMI-2(メニン-MLL阻害剤)からなる群より選択される少なくとも1種を含む、請求項3に記載の方法。
- ヒストン脱メチル化酵素阻害剤が、IOX 1及びGSK-J1からなる群より選択される少なくとも1種を含む、請求項3に記載の方法。
- ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤が、LMK-235、CAY10603、BRD73954、及びVORINOSTATからなる群より選択される少なくとも1種を含む、請求項3に記載の方法。
- SIRT2阻害剤がSirReal 2を含む、請求項3に記載の方法。
- PARP阻害剤がEB47を含む、請求項3に記載の方法。
- 前記導入ステップにおいて、MYOD1遺伝子の導入が、誘導性プロモーターの制御下にあるMYOD1遺伝子を含む発現ベクターの導入により行われる、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。
- 発現ベクターが選択マーカー遺伝子をさらに含む、請求項9に記載の方法。
- 前記尿中細胞が、筋疾患患者又は筋ジストロフィー患者由来のものである、請求項1~10のいずれか1項に記載の方法。
- 尿中細胞から筋管を作製するためのキットであって、
尿中細胞にMYOD1遺伝子を導入するための導入手段と、
少なくとも1種のエピジェネティクス制御化合物と、
を備えるキット。 - 前記導入手段が、MYOD1遺伝子を尿中細胞へ導入するための発現ベクターである、請求項12に記載のキット。
- エピジェネティクス制御化合物が、ヒストンメチル基転移酵素阻害剤、ヒストン脱メチル化酵素阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、SIRT2阻害剤、及びPARP阻害剤からなる群より選択される少なくとも1種を含む、請求項12又は13に記載のキット。
- エピジェネティクス制御化合物が、3-デアザネプラノシンA及び3-デアザネプラノシンA塩酸塩(DZNep)、GSK343、SGC707、フラミジン二塩酸塩、UNC2327、E7438、及びMI-2(メニン-MLL阻害剤)、IOX 1及びGSK-J1、LMK-235、CAY10603、BRD73954、及びVORINOSTAT、SirReal 2、並びにEB47からなる群より選択される少なくとも1種を含む、請求項12~14のいずれか1項に記載のキット。
- 筋ジストロフィー患者に対するエクソン・スキップ治療薬の検定方法であって、
請求項1~11のいずれか1項に記載の方法によって、筋ジストロフィー患者の尿中細胞から筋管を作製する作製ステップと、
前記筋管に前記エクソン・スキップ治療薬を適用する適用ステップと、
前記筋管におけるジストロフィンmRNA及び/又はタンパク質の回復を検出する検出ステップと、を含む方法。 - 前記検出ステップにおいて、ジストロフィンmRNA及び/又はタンパク質の回復が、RT-PCR、ウエスタンブロット、及び免疫細胞染色からなる群より選択される少なくとも1つの方法により検出される、請求項16に記載の方法。
- エクソン・スキップ治療薬が、エクソン44スキップ薬、エクソン45スキップ薬、エクソン50スキップ薬、エクソン51スキップ薬及びエクソン53スキップ薬からなる群より選択される少なくとも1種を含む、請求項16又は17に記載の方法。
- 骨格筋障害を引き起こす状態の治療薬又は予防薬候補のスクリーニング方法であって、
請求項1~11のいずれか1項に記載の方法によって、骨格筋障害を引き起こす状態を有する患者の尿中細胞から筋管を作製する作製ステップと、
前記筋管に被験物質又は因子を適用する適用ステップと、
前記適用ステップ後の前記筋管における変化をモニターすることにより前記被験物質又は因子を治療薬又は予防薬候補として同定する同定ステップと、
を含む方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2022183436A JP7390694B2 (ja) | 2018-12-25 | 2022-11-16 | 随時尿中細胞を用いた筋系細胞の誘導方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/JP2018/047447 WO2020136696A1 (ja) | 2018-12-25 | 2018-12-25 | 随時尿中細胞を用いた筋系細胞の誘導方法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022183436A Division JP7390694B2 (ja) | 2018-12-25 | 2022-11-16 | 随時尿中細胞を用いた筋系細胞の誘導方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2020136696A1 JPWO2020136696A1 (ja) | 2021-11-04 |
JP7185239B2 true JP7185239B2 (ja) | 2022-12-07 |
Family
ID=71126964
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020561982A Active JP7185239B2 (ja) | 2018-12-25 | 2018-12-25 | 随時尿中細胞を用いた筋系細胞の誘導方法 |
JP2022183436A Active JP7390694B2 (ja) | 2018-12-25 | 2022-11-16 | 随時尿中細胞を用いた筋系細胞の誘導方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022183436A Active JP7390694B2 (ja) | 2018-12-25 | 2022-11-16 | 随時尿中細胞を用いた筋系細胞の誘導方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220144902A1 (ja) |
JP (2) | JP7185239B2 (ja) |
AU (1) | AU2018454784A1 (ja) |
CA (1) | CA3124779A1 (ja) |
WO (1) | WO2020136696A1 (ja) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012029986A1 (ja) | 2010-09-01 | 2012-03-08 | 日本新薬株式会社 | アンチセンス核酸 |
WO2013100190A1 (ja) | 2011-12-28 | 2013-07-04 | 日本新薬株式会社 | アンチセンス核酸 |
-
2018
- 2018-12-25 JP JP2020561982A patent/JP7185239B2/ja active Active
- 2018-12-25 AU AU2018454784A patent/AU2018454784A1/en active Pending
- 2018-12-25 US US17/418,203 patent/US20220144902A1/en active Pending
- 2018-12-25 WO PCT/JP2018/047447 patent/WO2020136696A1/ja active Application Filing
- 2018-12-25 CA CA3124779A patent/CA3124779A1/en active Pending
-
2022
- 2022-11-16 JP JP2022183436A patent/JP7390694B2/ja active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012029986A1 (ja) | 2010-09-01 | 2012-03-08 | 日本新薬株式会社 | アンチセンス核酸 |
WO2013100190A1 (ja) | 2011-12-28 | 2013-07-04 | 日本新薬株式会社 | アンチセンス核酸 |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
JIWLAWAT, S. et al., Differentiation and sarcomere formation in skeletal myocytes directly prepared from human induced pluripotent stem cells using a sphere-based culture, Differentiation, 2017, Vol. 96, pp. 70-81 |
KIM, E. Y. et al., Direct reprogramming of urine-derived cells with inducible MyoD for modeling human muscle disease, Skeletal Muscle, 2016, Vol. 6, No. 32, pp. 1-16 |
SUNG, M. S. et al., Efficient myogenic differentiation of human adipose-derived stem cells by the transduction of engineered MyoD protein, BBRC, 2013, Vol. 437, pp. 156-161 |
TAKIZAWA, H. et al., Establishment of a non-invasive and efficient in vitro assay system for exon skipping therapy, Molecular Therapy, 2018 May, Vol. 26, No. 5, Supp. Supplement 1, pp. 418, Abstract Number:915, Meeting Info: 21st Annual Meeting of the American Society of Gene and Cell therapy, ASGCT 2018. Chicago, IL, United States. 16 May 2018-19 May 2018, EMBASE[online], JAICI(JAPAN), Retrieved from: STN, Accession No. 0053147104 |
TAKIZAWA, H. et al., Establishment of a non-invasive and efficient in vitro assay system for exon skipping therapy, 日 本筋学会第4 回学術集会プログラム・抄録集, 2018.08.01, p. 176, P-62, 全文 |
TAKIZAWA, H. et al., Establishment of a non-invasive and efficient in vitro assay system for exon skipping therapy, 第 59 回日本神経学会学術大会プログラム・抄録集, 2018.5.23, p. 513, Pe-034-3, 全文 |
竹村英子 他, 筋ジストロフィーの遺伝子治療, 細胞移植治療研究の最前線, 小児内科, 2016, Vol. 48, No. 12, pp. 1910-1914 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2020136696A1 (ja) | 2021-11-04 |
WO2020136696A1 (ja) | 2020-07-02 |
CA3124779A1 (en) | 2020-07-02 |
JP7390694B2 (ja) | 2023-12-04 |
AU2018454784A1 (en) | 2021-08-05 |
US20220144902A1 (en) | 2022-05-12 |
JP2023025065A (ja) | 2023-02-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Wu et al. | MicroRNA-431 accelerates muscle regeneration and ameliorates muscular dystrophy by targeting Pax7 in mice | |
JP2007516714A (ja) | 未分化哺乳類の細胞を骨芽細胞に分化して誘導する方法 | |
Wei et al. | Long noncoding RNA Lnc-SEMT modulates IGF2 expression by sponging miR-125b to promote sheep muscle development and growth | |
Sanson et al. | miR-379 links glucocorticoid treatment with mitochondrial response in Duchenne muscular dystrophy | |
US20200224168A1 (en) | Compositions and methods for enhancing maturation states of healthy and diseased cardiomyocytes | |
Ruetz et al. | In vitro and in vivo CRISPR-Cas9 screens reveal drivers of aging in neural stem cells of the brain | |
JP7185239B2 (ja) | 随時尿中細胞を用いた筋系細胞の誘導方法 | |
KR20130085752A (ko) | 유전자 도입 없이 저분자성 물질을 이용하여 체세포로부터 심근세포를 유도하는 방법 | |
Maury et al. | Pluripotent stem cell-based drug screening reveals cardiac glycosides as modulators of myotonic dystrophy type 1 | |
KR20150069375A (ko) | 줄기세포로부터 연골세포로의 분화 촉진용 조성물 | |
López et al. | Creation and characterization of an immortalized canine myoblast cell line: Myok9 | |
Kerr et al. | Decellularized heart extracellular matrix alleviates activation of hiPSC-derived cardiac fibroblasts | |
Pouikli et al. | Deregulated mito-nuclear communication alters chromatin plasticity and differentiation potential of mesenchymal stem cells upon ageing | |
WO2018225751A1 (ja) | 大腸がん幹細胞の維持増幅方法、及び大腸がんオルガノイドの誘導方法 | |
US10842822B2 (en) | Diagnosis and treatment of parkinson's disease based on identification and amelioration of liver dysfunction | |
JP2012522977A (ja) | 変形性関節症の治療のための方法及び手段 | |
Toriumi et al. | LRRC15 expression indicates high level of stemness regulated by TWIST1 in mesenchymal stem cells | |
Dominici et al. | Inhibition of type I PRMTs reforms muscle stem cell identity enhancing their therapeutic capacity | |
Xu et al. | Bovine enhancer-regulated circSGCB acts as a ceRNA to regulate skeletal muscle development via enhancing KLF3 expression | |
US20200087665A1 (en) | Systems | |
O’Connor et al. | AGO HITS-CLIP in Adipose Tissue Reveals miR-29 as a Post-Transcriptional Regulator of Leptin | |
Dainis et al. | Dissociation of disease phenotype and allele silencing in hypertrophic cardiomyopathy | |
WO2023064577A1 (en) | Methods for modulating the regenerative phenotype in mammalian cells | |
US20100218266A1 (en) | Methods of identifying and using snail1 inhibitory compounds in chondrodysplasia treatment and preparation of pharmaceutical compositions | |
JP2022127433A (ja) | マクロファージを神経細胞に直接分化転換するために用いられる培地及びその使用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A80 Effective date: 20210618 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20211203 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221018 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221116 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7185239 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |