JP7177702B2 - アルツハイマー病および他の神経変性障害のシナプスタンパク質バイオマーカーおよび鑑別診断 - Google Patents
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Description
本出願は、その全体が出典明示により本明細書に組み込まれる、2016年5月6日に提出された米国仮特許出願第62/332,479号の優先権を主張する。
本発明は、アルツハイマー病および他の神経変性障害のためのシナプスタンパク質バイオマーカーならびに診断方法および予後判定方法に関する。本発明はまた、シナプスタンパク質バイオマーカーを検出するための組成物並びにアルツハイマー病および他の神経変性障害の早期診断および/または治療に有用な組成物および方法を提供する。本発明はまた、生体試料から単離された小胞中のバイオマーカー(例えば、エキソソーム)を検出するための方法を提供する。
本発明は、アルツハイマー病および他の神経変性障害のためのバイオマーカーならびに診断方法および予後判定方法を提供する。バイオマーカーレベルは、対象から得られた生体試料中で決定される。いくつかの実施形態では、本発明の生体試料は、血液から得られうる。いくつかの実施形態では、約1-10mLの血液は、対象から採取される。他の実施形態では、約10-50mLの血液は、対象から採取される。血液は、腕、脚、または中心静脈カテーテルを介してアクセス可能な血液を含む、身体の任意の適切な領域から採血できる。いくつかの実施形態では、血液は、治療または活動の後に収集される。例えば、血液は、健康診断の後に収集できる。また、収集のタイミングは、試料中に存在するエキソソームの数および/または組成を増加するように調整することができる。例えば、血液は、血管拡張を誘導する運動または治療の後に収集できる。
試料は、ポジティブセレクション、ネガティブセレクション、またはポジティブセレクションおよびネガティブセレクションの組み合わせを通して、小胞について濃縮されうる。いくつかの実施形態では、小胞は直接捕捉される。他の実施形態では、血液細胞が捕捉され、小胞は残りの生体試料から収集される。いくつかの実施形態では、生体試料中で濃縮された小胞は、エキソソーム、微粒子、微小胞、ナノソーム、細胞外小胞、またはエクトソームである。いくつかの実施形態では、生体試料中で濃縮された小胞は、ニューロン由来のエキソソーム、アストロサイト由来のエキソソーム、オリゴデンドロサイト由来のエキソソーム、またはミクログリア由来のエキソソームである。
本発明は、対象における神経変性障害を診断もしくは予後判定する、神経変性障害のリスクのある対象を特定する、または、神経変性障害を有する対象における治療レジメンを処方もしくは治療の利益を予測するための方法を提供する。
バイオマーカーレベルは、神経変性障害(例えば、アルツハイマー病)を有する、または有するリスクのある対象から得られた生体試料中で検出またはアッセイされる。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、シナプトフィジン、シナプトポジン、シナプトタグミン、ニューログラニン、またはGAP43である。他の既知の神経変性障害バイオマーカーが本発明のバイオマーカーと組合せて使用されてもよい。かかるバイオマーカーの例は、出典明示により内容が本明細書中に組み込まれる米国特許公開公報第2015/0119278に提供されている。
本発明の方法は臨床アッセイにおいて、対象における神経変性障害を診断または予後判定する、神経変性障害のリスクのある対象を特定する、および/または神経変性障害を有する対象における治療レジメンを処方もしくは治療の利益を予測するために使用されてもよい。臨床アッセイ性能は、アッセイの感度、特異度、ROC曲線下面積(AUC)、精度、陽性適中率(PPV)、および陰性適中率(NPV)を決定することによって評価できる。対象における神経変性障害を診断もしくは予後判定する、神経変性障害のリスクのある対象を特定する、または神経変性障害を有する対象における治療レジメンを処方もしくは治療の利益を予測するためのアッセイが本明細書に開示される。
本発明の方法において有用な組成物は、神経変性障害と関連するバイオマーカーを特異的に認識する組成物を含み、ここでバイオマーカーはシナプトフィジン、シナプトポジン、シナプトタグミン、ニューログラニン、およびGAP43である。更に他の実施形態では、組成物は、ペプチド、核酸、抗体、および小分子からなる群から選択される。
本発明は、対象に有効量の組成物を投与することを含む、対象における神経変性障害を治療する方法を提供し、ここで組成物は、対象におけるシナプトフィジン、シナプトポジン、シナプトタグミン、ニューログラニン、およびGAP43のレベルを増加させる、または維持する。更に他の実施形態では、組成物は、シナプトフィジン、シナプトポジン、シナプトタグミン、ニューログラニン、およびGAP43レベルにおける減少を予防する。他の実施形態では、本発明は、対象に有効量の組成物を投与することを含む、対象における神経変性障害を治療する方法を提供し、ここで,組成物は、シナプトフィジン、シナプトポジン、シナプトタグミン、ニューログラニン、およびGAP43のレベルを参照レベルに正規化する。
本発明の別の態様は、対象における神経変性障害を検出またはモニタリングするためのキットを包含する。様々な構成要素を有する種々のキットが、本発明により企図されている。一般的に言うと、キットは対象における1つ以上のバイオマーカーを定量するための手段を含む。別の実施形態では、キットは生体試料を収集するための手段、生体試料中の1つ以上のバイオマーカーを定量する手段、およびキットの内容物の使用のための説明書を含む。或る実施形態では、キットは生体試料中のエキソソームを濃縮または単離するための手段を含む。さらなる態様では、エキソソームを濃縮または単離するための手段は、生体試料からエキソソームを濃縮または単離するために必要な試薬を含む。或る態様では、キットは、バイオマーカーの量を定量するための手段を含む。さらなる態様では、バイオマーカーの量を定量するための手段は、バイオマーカーの量を検出するために必要な試薬を含む。
シナプトフィジン、シナプトポジン、シナプトタグミン、ニューログラニン、およびヒト成長関連タンパク質43(GAP43)タンパク質のレベルを、以下のように神経変性障害を有するヒト対象においてアッセイした。静脈血を、対照対象(AC、n=12;FTC、n=16)、アルツハイマー病を有する対象(AD、n=12)、および前頭側頭型認知症を有する対象(FTD、n=16)から収集した。ADおよびFTDの診断は、標準的な臨床および実験室基準によって確立した。
シナプスタンパク質のニューロン由来のエキソソームのレベルをヒト対象において以下のようにアッセイした。2つの時点で、ADの認知症を有する対象(n=9)およびFTDの認知症を有する対象(n=10)から10ミリリットルの静脈血を収集した:最初は認知的に無傷(AD1、FTD1)および再度は認知症の診断後1~10年後(AD2およびFTD2)。血液試料を処理し、エキソソームを上記実施例1に記載のように単離した。ニューロン由来のエキソソームタンパク質、シナプトタグミン、シナプトポジン、シナプトフィジン、ニューログラニンおよびGAP43を実施例1に記載のようにELISAキットにより定量した。
Claims (15)
- 以下の工程:
(i)小胞を含む対象から得られた生体試料から小胞を単離すること、(ii)生体試料から単離された小胞中の1つ以上のバイオマーカーのレベルを測定すること、および(iii)生体試料中の小胞の1つ以上のバイオマーカーのレベルを対照生体試料から単離された小胞中の1つ以上のバイオマーカーの対照レベルと比較すること、
ここで1つ以上のバイオマーカーの少なくとも1つが、シナプトフィジン、シナプトポジン、シナプトタグミン、およびヒト成長関連タンパク質43(GAP43)からなる群から選択され、ここで、生体試料は全血、血清、または血漿である、
を含む、対象からの試料を解析する方法。 - 小胞が、エキソソーム、微粒子、微小胞、ナノソーム、細胞外小胞、およびエクトソームからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- エキソソームが、ニューロン由来のエキソソーム、アストロサイト由来のエキソソーム、オリゴデンドロサイト由来のエキソソーム、およびミクログリア由来のエキソソームからなる群から選択される、請求項2に記載の方法。
- 1つ以上のバイオマーカーのレベルが、1つ以上のバイオマーカーのタンパク質、mRNA、またはmiRNAレベルである、請求項1に記載の方法。
- 対象が、神経変性障害を有すると診断されたか、または疑われている、請求項1に記載の方法。
- 神経変性障害が、アルツハイマー病(AD)、血管疾患性認知症、前頭側頭型認知症(FTD)、大脳皮質基底核変性症(CBD)、進行性核上性麻痺(PSP)、レビー小体型認知症、神経原線維変化優位型老年期認知症、ピック病(PiD)、嗜銀顆粒病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、他の運動ニューロン疾患、グアムパーキンソン認知症複合、FTDP-17、リティコ-ボディグ病、多発性硬化症、外傷性脳損傷(TBI)、およびパーキンソン病からなる群から選択される、請求項5に記載の方法。
- 生体試料から小胞を単離することが、以下:生体試料中に存在する小胞が薬剤に結合して小胞-薬剤複合体を形成する条件下で、生体試料を薬剤と接触させること;および小胞-薬剤複合体から小胞を単離して小胞を含有する試料を得ること、ここで試料中に存在する小胞の純度が生体試料中に存在する小胞の純度より大きい
を含む、請求項1に記載の方法。 - 1つ以上のバイオマーカーの少なくとも1つが、タウ、リン酸化タウ、Aβ1-42、TDP-43、α-シヌクレイン、SOD-1、FUS、FKBP51、IRS-1、リン酸化IRS-1、カテプシンD(CTSD)、1型リソソーム関連膜タンパク質(LAMP1)、ユビキチン化タンパク質(UBP)、熱ショックタンパク質70(HSP70)、ニューロン特異的エノラーゼ(NSE)、ニューロフィラメント軽鎖(NFL)、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質6(LPR6)、熱ショック因子1(HSF1)、およびリプレッサーエレメント1-サイレンシング転写因子(REST)、CD9、CD63、CD81、およびCD171からなる群から選択される、
生体試料中の1つ以上のバイオマーカーのレベルを測定することをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 対象における神経変性障害を診断もしくは予後判定するためのキットであって、小胞に特異的に結合する1つ以上の薬剤、バイオマーカーに特異的に結合する1つ以上の薬剤、生体試料を収集し、およびまたは保持するための1つ以上の容器、ならびにその使用のための指示を含み、ここで神経変性障害が変更されたバイオマーカーレベルと関連し、かつバイオマーカーはシナプトフィジン、シナプトポジン、シナプトタグミン、およびヒト成長関連タンパク質43(GAP43)からなる群から選択され、ここで生体試料は全血、血清、または血漿からなる群から選択され、神経変性障害が、アルツハイマー病(AD)または前頭側頭型認知症(FTD)である、キット。
- 小胞が、エキソソーム、微粒子、微小胞、ナノソーム、細胞外小胞、およびエクトソームからなる群から選択される、請求項9に記載のキット。
- 薬剤が、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体である、請求項9に記載のキット。
- 薬剤が、モノクローナル抗ヒトNCAM抗体、モノクローナル抗ヒトCD171抗体、モノクローナルCD9抗体、モノクローナルCD63抗体、モノクローナルニューロン特異的エノラーゼ抗体、またはモノクローナルCD81抗体である、請求項9に記載のキット。
- エキソソームが、ニューロン由来のエキソソーム、アストロサイト由来のエキソソーム、オリゴデンドロサイト由来のエキソソーム、およびミクログリア由来のエキソソームからなる群から選択される、請求項10に記載のキット。
- タウ、リン酸化タウ、Aβ1-42、TDP-43、α-シヌクレイン、SOD-1、FUS、FKBP51、IRS-1、リン酸化IRS-1、カテプシンD(CTSD)、1型リソソーム関連膜タンパク質(LAMP1)、ユビキチン化タンパク質(UBP)、熱ショックタンパク質70(HSP70)、ニューロン特異的エノラーゼ(NSE)、ニューロフィラメント軽鎖(NFL)、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質6(LPR6)、熱ショック因子1(HSF1)、およびリプレッサーエレメント1-サイレンシング転写因子(REST)、CD9、CD63、CD81、およびCD171からなる群から選択される1つ以上のバイオマーカーに特異的に結合する1つ以上の薬剤をさらに含む、請求項9に記載のキット。
- 小胞を含む対象から得られた生体試料から小胞を単離すること;および生体試料中の1つ以上のバイオマーカーを検出することを含む方法であって、1つ以上のバイオマーカーの少なくとも1つが、シナプトフィジン、シナプトポジン、シナプトタグミン、およびヒト成長関連タンパク質43(GAP43)からなる群から選択され、ここで、生体試料は全血、血清、または血漿である、方法。
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